Toxoplasma gondii is the causative agent of Toxoplasmosis in human and animals. T. gondii isolates are highly diverse. Hundreds of genotypes have been identified, but only three clonal lineages, namely Type I, II and III are prevalent worldwide. In mouse model, T. gondii strains can be divided into three groups based on their virulence, including the virulent (LD100=1), the intermediately virulent (LD50 = 103-104) and the non virulent (LD50 > 105). The clonal Type I, II and III T. gondii strains belong to these three groups, respectively. Epidemiologic studies suggest the difference of virulence in mice may relate to the severity of toxoplasmosis in human infection. Therefore, it is necessary to understand biological differences in genetically different T. gondii strains and their effect on the host responses. To date, the majority of data published on this aspect has been limited to in vitro assays. Here, we used in vivo assays to investigate host responses upon infection of distinct Toxoplasma strains. Our studies examined host response to infection of the three widespread clonal lineages of T. gondii using a mouse model. The following results were revealed: (i) increased tissue burden in mice is the indicator of virulence of T. gondii. Quantification of parasite burden in the spleen of mice showed significantly more parasites for Type I strain than that of Type II and III strains, with the latter two having comparable parasite burdens. Given that the Type II strains are more virulent than the Type III strains in mice; this result suggests that difference in host response is the result of specific parasite-host interaction, which is not simply due to the difference of parasite tissue load. (ii) gene expression in the host is strongly influenced by parasite genetic background. Transcriptional profiles of mice infected with the above three types of T. gondii strains showed that the overall gene expression patterns are similar between Type I and Type II infected mice and both stimulated stronger and more polarized change comparing to Type III strain. These results emphasize the importance of studying T. gondii pathogenesis in the host with the consideration of parasite genetic diversity. Such research could possibly aid in select appropriate regimes to treat toxoplasmosis caused by diverse T. gondii strains.

Proefschrift Universiteit van Amsterdam. / Met lit. opg. - Met samenvatting in het Nederlands.

Thesis (Ph. D.)--University of Wisconsin--Madison, 1970. / Typescript. Vita. eContent provider-neutral record in process. Description based on print version record. Includes bibliographical references.

Zugl.: Giessen, Univ., Diss., 2009

A toxoplasmose é uma infecção comum nos animais causada pelo Toxoplasma gondii configurando-se como uma importante zoonose. O homem infecta-se, principalmente, através da ingestão de carne contaminada com cistos do protozoário. São encontradas altas taxas de prevalência de toxoplasmose nos rebanhos de ovinos do mundo todo, sendo a ingestão de alimentos e água contaminados com oocistos as mais importantes fontes de infecção da espécie. No ovino, a toxoplasmose pode ser assintomática ou causar distúrbios reprodutivos, notadamente abortos, levando a perdas econômicas consideráveis. Com o objetivo de contribuir com dados sobre a freqüência de anticorpos para o T. gondii em ovinos na região da Grande Porto Alegre-RS, foram estimadas as freqüências de anticorpos para T. gondii da classe IgG em soros de ovinos provenientes de propriedades da região citada, utilizando a técnica de Hemaglutinação Indireta (HAI) e Imunofluorescência Indireta (IFI). A freqüência estimada de anticorpos para T. gondii em uma amostragem de 250 ovinos foi de 13,6% pela técnica de HAI e 15,2% pela técnica de IFI. A amostragem foi estratificada em dois grupos experimentais de acordo com o sexo e a idade dos animais. No grupo I, composto de 127 machos, obteve-se 4,8% de positivos para HAI e 7,6% de positivos para IFI. Enquanto nas 123 fêmeas, detectou-se um percentual de 8,8% de positivas pela técnica de HAI e 7,6% reagiram para IFI. Em relação a faixa etária se encontrou: 11 positivos (4,4%) nos animais com menos de um ano e 23 (9,2%) para aqueles com mais de um ano na reação de HAI, num total de 34 (13,6%) animais; enquanto que para técnica de IFI obteve-se o resultado de 19 (7,6%) ovinos jovens e 19 (7,6%) ovinos adultos em 38 (15,2%) animais analisados. A percentagem de co-positividade entre as técnicas utilizados foi de 55,26% e a co-negatividade foi de 93,865, e a concordância total ficou em 88%, enquanto o índice de Kappa calculado foi de 0,513. / Toxoplasmosis is a serious zoonosis. It is a common infection in animals caused by a parasite called Toxoplasma gondii. Human infection occurs mainly for ingestion of meat contaminated with T. gondii cysts. A high prevalence rate of toxoplasmosis is found in sheep cattle all over the world, being the consumption of food and water contaminated with oocystes the major source of infection of the species. In ovine, toxoplasmosis can be assymptomatique or cause reproduction disorders, especially abortions, which leads to significant economic losses.With the objective of providing data about the frequency of T. gondii antibodies in sheep from the Greater Porto Alegre area, we estimated the frequency of IgG class antibodies to T. gondii in sheep sera. The techniques employed were the Indirect Hemagglutination Technique (HAI) and the Indirect Imunofluorescence Test (IFI). The estimated frequency of antibodies to T. gondii in a sample of 250 sheep sera was 13,6% (HAI), and 15,2% (IFI). The sample was stratified into two experimental groups, according to gender and age. In group one, composed by 127 males, 4,8% were HAI positive, and 7,6% were IFI positive, whereas in the group composed by 123 females, 8,8% were HAI positive, and IFI 7,6%. Concerning age group, there were 11 HAI positives (4,4%) among the animals with less than one year of age, and 23 HAI positive (9,2%) among the animals over one year, totalizing 34 animals. For the IFI technique, the results obtained showed 19 (7,6%) young sheep and 19 (7,6%) adults in 38 animals analyzed. The co-positivity between the techniques was 55,26% and the co-negativity was 93,865. Total agreement was 88% while the Kappa index calculated was 0,513.

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-07-12T18:11:30Z No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_ Patricia Oliveira Santos.pdf: 1373839 bytes, checksum: 29a4da7d68cc1c212a78497b9ae8ec0d (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-12T18:11:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_ Patricia Oliveira Santos.pdf: 1373839 bytes, checksum: 29a4da7d68cc1c212a78497b9ae8ec0d (MD5) / O protozoário Toxoplasma gondii tem os felídeos como seus hospedeiros definitivos e diversos outros animais como hospedeiros intermediários. Em ovinos e humanos, a toxoplasmose é responsável por abortamentos e doença neonatal quando a primoinfecção ocorre durante a gestação. Apesar da resposta imunológica desenvolvida pelos hospedeiros, o protozoário persiste no organismo parasitado, e a ingestão de carne ovina (crua ou mal cozida) contaminada constitui importante fonte de infecção humana. Recentemente, proteínas ligadas a glicosilfosfatidilinositol (GlyC) têm sido apontadas como importantes na ativação da resposta imune inata e constituem grande parte das proteínas de superfície de taquizoítos de T. gondii, além de serem reconhecidas por soros humanos na fase aguda da toxoplasmose. O presente estudo objetivou estudar a cinética da resposta imunológica humoral e celular na fase aguda da infecção pelo T. gondii em ovinos, e após imunização com GlyC, e desenvolver teste sorológico baseado em GlyC. O ELISA para detecção de IgG anti-lisado antigênico (LA) e anti-GlyC apresentou 100% e 30% de sensibilidade, e 96% e 94% de especificidade, respectivamente. Os ovinos infectados produziram IgM anti-LA e GlyC, e IgG anti-GlyC (p < 0.05); e os imunizados, IgM anti-LA e IgG anti-LA e GlyC (p < 0.05). A imunização com GlyC induziu aumento de células CD8+ e redução de células expressando MHC de classe II na circulação 60 dias após a injeção. O ELISA baseado em GlyC apresenta alta especificidade. GlyC é imunogênico para a espécie ovina e deve ser melhor avaliado como ferramenta diagnóstica e profilática na referida espécie. / Salvador

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-10-03T11:40:07Z No. of bitstreams: 1 Beatriz Guerreiro Basilio Costa.pdf: 1448715 bytes, checksum: 9fad325ac3484b88b47961c78ef5db34 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-03T11:40:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Beatriz Guerreiro Basilio Costa.pdf: 1448715 bytes, checksum: 9fad325ac3484b88b47961c78ef5db34 (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A toxoplasmose é uma doença de alta prevalência no mundo, causada pelo Toxoplasma gondii, um parasita intracelular obrigatório. O T. gondii possui mecanismos de modulação do metabolismo do seu hospedeiro que garantem sua sobrevivência e a instalação da infecção crônica. Um dos tipos celulares mais permissivos à infecção e multiplicação do T. gondii são as células dendríticas (DC), paradoxalmente as células apresentadoras de antígeno mais eficazes, com capacidade de deflagrar uma resposta imune protetora eficaz e duradoura. Neste trabalho, estudamos a modulação do metabolismo lipídico de células dendríticas humanas na infecção por T. gondii. Mostramos que o parasita induziu a maturação da célula e um padrão misto de resposta inflamatória, com altas concentrações das citocinas pró-inflamatórias IL-6 e TNF- e da citocina antiinflamatória IL-10. Após 3 horas de infecção, verificamos que T. gondii induziu a expressão gênica de ciclooxigenase-2 (COX-2). De forma importante, observamos por qRT-PCR que a infecção com T. gondii regulou positivamente a expressão do gene do receptor nuclear (RN) regulado por lipídios PPAR, mas não do LXR. Já a expressão do mRNA das moléculas envolvidas no transporte e estoque de lipídios, FABP4 e ADRP, alvos do PPAR, e ABCA1, alvo do LXR, foram aumentadas pela infecção de 3 horas com o parasita. Utilizando duas técnicas distintas (BODIPY e coloração com ósmio) avaliamos a biogênese de corpúsculos lipídicos (CL) após infecção com o T. gondii e constatamos que essas organelas não foram induzidas após 3 horas de infecção. Entretanto, após 24 horas, 90% das DC apresentaram CL e o número de CL por DC foi estatisticamente maior. Observamos a presença de CL em DC não infectadas pelo parasita, mostrando que a indução da biogênese de CL é um fenômeno parácrino, não dependente da infecção celular. Avaliamos também a importância do PPAR na infecção por T. gondii, através do tratamento das DC com seu agonista ou antagonista. Após 3 horas, apenas os genes ADRP, FABP4 e ABCA1, alvos dos receptores nucleares, foram modulados. Por último, investigamos a influência do T. gondii na expressão das moléculas apresentadoras de antígenos lipídicos. Por citometria de fluxo, constatamos que não há alteração na expressão de membrana dessas moléculas. Contudo, por qRT-PCR, observamos que o T. gondii regula negativamente a expressão dos genes cd1d e cd1e. Em conclusão, mostramos que T. gondii foi capaz de regular positivamente o metabolismo lipídico das DC e negativamente as moléculas apresentadoras de lipídios CD1, sem a participação essencial de PPAR nesses processos. / Toxoplasmosis is a worldwide high prevalence disease caused by Toxoplasma gondii, an obligate intracellular parasite. T. gondii developed mechanisms for modulating the metabolism of its host, ensuring their survival and the chronic infection. Dendritic cells (DC) are one of the most permissive cell types to T. gondii infection and replication and are, paradoxically, considered the most effective antigen presenting cells, triggering an effective and long-lasting protective immune response. In this work, we studied the modulation of lipid metabolism in human dendritic cells infected with T. gondii. We showed that the parasite induced cell maturation, and a mixed pattern of inflammatory response with high levels of proinflammatory cytokines IL-6 and TNF-, and anti-inflammatory cytokine IL-10. After 3h of infection, we found that T. gondii induced increased gene expression of cyclooxygenase-2 (COX-2). Importantly, we observed by qRT-PCR that T. gondii infection upregulated the nuclear receptor (RN) PPAR gene expression, while the levels of LXR were unchanged. Furthermore, the mRNA expression of molecules involved in the transport and storage of lipids, FABP4 and ADRP, PPARtargets, and ABCA1, LXR target, were also increased at 3h of infection with the parasite. In parallel, using two different techniques, (BODIPY and osmium staining), we evaluated the biogenesis of lipid droplets (LD) after infection with T. gondii, and observed that these organelles were not induced after 3 hours of infection. However, after 24 hours, 90% of DC showed LD and the number of LD per DC was statistically enhanced. We observed the presence of LD in DC not infected with the parasite, showing that induction of biogenesis of LD is a paracrine phenomenon not dependent on cell infection. We also evaluated the role of PPAR in T. gondii infection by treating DC with its agonist or antagonist. After 3 hours of infection only the nuclear receptor target genes ADRP, FABP4 and ABCA1 were modulated. Finally, we investigated the influence of T. gondii in the expression of lipid antigens presenting molecules. By flow cytometry, we observed no variation in expression of these molecules in cell membrane. However, by qRT-PCR, we found that the T. gondii downregulated gene expression of cd1d and cd1e. In conclusion, we showed that T. gondii was able to upregulate the DC lipid metabolism, and downregulate CD1 lipid presentation. Apparently, the RN PPAR has no essential role in this process.

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Determina la presencia de anticuerpos contra Toxoplasma gondii en algunos animales silvestres en cautiverio de los ordenes Carnivora, Primates, Perissodactyla, Cetartiodactyla y Rodentia, así como identificar los factores de riesgo que intervienen en su presentación; estableciendo el rol que cumplen felinos domésticos (Felis silvestris f. catus) y roedores del género Rattus sp. libres en el centro en cautiverio en la transmisión del parásito. El trabajo se desarrolló en el zoológico del Patronato del Parque de las Leyendas, distrito de San Miguel, Lima Metropolitana. Se muestrearon 332 animales silvestres pertenecientes al orden Carnivora (75), Primates (71), Perissodactyla (32), Cetartiodactyla (134) y Rodentia (20); así como de 41 felinos domésticos libres que deambulan en el centro y 124 roedores del genero Rattus capturados mediante el uso de trampas de captura viva tipo Tomahawk. Muestras sanguíneas fueron colectadas de animales silvestres a través de la punción de la vena braquial, yugular, o femoral, usando vacutainers; en el caso de los felinos domésticos libres se obtuvo por medio de la punción de la vena cefálica y en roedores del género Rattus se obtuvo sangre mediante punción intracardiaca previa anestesia inhalatoria con cloroformo y posteriormente fueron sacrificados mediante sobredosis de entobarbital. La sangre obtenida fue colectada en crioviales y transportada al Laboratorio Parasitología de la Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos (FMV-UNMSM) para su almacenamiento y posterior análisis serológico. Paralelamente, se colectaron muestras de cerebro, corazón, hígado y diafragma de los roedores (Rattus), las mismas que fueron fijadas en formalina tamponada al 10% y procesadas para la obtención de cortes histológicos teñidos con Hematoxilina-Eosina (HE) y sometidos a análisis inmunohistoquímico a fin de identificar estructuras con inmunopositividad a T. gondii. Para el diagnóstico serológico se utilizó la técnica de Hemaglutinación Indirecta, preparando diluciones de 1:64 a 1:2048, considerando en felinos, roedores y animales silvestres, como positivo títulos mayores o iguales 1/64. Se determinó anticuerpos (IgG, IgM) mediante el uso del 2-Mercaptoetanol para determinar una infección aguda o crónica. Para la evaluación de los factores de riesgo fueron consideradas las variables Orden (Carnivora, Primates, Perissodactyla y Rodentia), sexo (hembra y macho), tiempo en la institución (<5 años, 6 a 10 años, > 10 años) y exhibición de recinto (abierto y cerrado). Asimismo se obtuvo información concerniente en Rattus sp. (parámetros morfométricos, edad estimada y sexo) y Felis silvestris f. catus (edad, sexo). Con la información obtenida se creó una base de datos donde fueron adicionados los resultados serológicos con el objeto de interrelacionarlos y validarlos estadística y epidemiológicamente. El análisis de los factores de riesgo fue evaluado mediante análisis de regresión logística múltiple ajustado a Stepwise. Se consideró como asociación significativa el nivel de p<0.05. Se detectó una alta frecuencia (77.1 ± 4.4%) de anticuerpos contra T. gondii en animales silvestres en cautiverio, con reactividad serológica principal de IgG 73.4% (casos crónicos) y fuerte respuesta serológica (1/2048) en el 53.9% de los animales. Los factores de riesgo asociados a la transmisión de T. gondii en animales silvestres en cautiverio fueron las variables Orden Carnivora, Primates, Cetartiodactyla y Rodentia (OR: 2.6; 3.6; 4.9; 8.7); animales con >10 años de tiempo en la institución (OR: 4.18) y exhibición de recinto abierto (3.99) (p<0.05). Roedores (Rattus sp.) y gatos libres que deambulan en el centro en cautiverio exhibieron una baja (11.3 ± 6) y moderada (58.5 ± 15.2) frecuencia de anticuerpos anti-T. gondii respectivamente. Fueron detectados quistes tisulares en musculatura cardiaca y esquelética (diafragma) en roedores (Rattus sp.) 4% (5/124); sin embargo, no se pudo demostrar la presencia de T. gondii, mediante inmunohistoquímica. / Tesis

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:34:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_6368_.pdf: 1202039 bytes, checksum: 042df281a737a29a468446c7898226f3 (MD5) Previous issue date: 2013-03-19 / Este estudo tem como objetivo analisar a prevalência e incidência anual da infecção assintomática causada pelo protozoário Toxoplasma gondii. Avaliou-se 311 amostras provenientes de 79 indivíduos residentes em área rural do município de Santa Teresa, no estado do Espírito Santo. Os dados demográficos, socioeconômicos e de fatores associados à infecção foram coletados utilizando questionários, que foram atualizados trimestralmente. A seleção dos indivíduos foi realizada a partir de uma coorte pré-existente, referente ao estudo de casos assintomáticos de malária na região montanhosa do estado. Após seleção dos participantes, o plasma foi coletado trimestralmente para realização da sorologia anti-T. gondii pela técnica de ELISA e complementado a investigação, o teste de avidez de IgG dos indivíduos positivos foi executado para avaliação da taxa de soroconversão nessa coorte. A prevalência de infecção pelo Toxoplasma gondii na comunidade foi de 67,1% e a incidência foi de 6,2 por 100 pessoas-ano de observação. Não foi encontrada uma associação estatisticamente significativa entre os indivíduos que tiveram contato com gatos e nem entre o consumo de carne de porco ou carneiro, mesmo crua ou mal cozida, e a toxoplasmose. Segundo a análise multivariada, o único fator de risco que está relacionado com a infecção parece ser o aumento da idade dos indivíduos (OR = 1,086). Confirmando dados da literatura, a análise estatística mostrou que a cada ano que passa, os indivíduos estão 8,6% mais propensos a adquirir toxoplasmose. PALAVRAS CHAVES: Toxoplasma gondii; Toxoplasmose; População Rural; Epidemiologia; Fatores de Risco; Brasil.

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:34:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_7605_Kamila da Cunha Covre -Dissertação Pós Defesa.pdf: 1964154 bytes, checksum: 95d680872a3b35ce05f6830024049e7f (MD5) Previous issue date: 2014-04-11 / A toxoplasmose, causada pelo protozoário Toxoplasma gondii, apresenta grande soroprevalência em humanos e animais em todo mundo. O perfil sorológico da infecção em animais domésticos, como cães e gatos, é um indicativo da contaminação ambiental pelo parasito e do risco potencial para o homem. Neste trabalho, avaliou-se a frequência de resultados positivos para T. gondii em exames sorológicos realizados em cães e gatos na Região Metropolitana de Vitória, no estado do Espírito Santo. Foram analisadas amostras de soro de 378 cães e 79 gatos provenientes de Centros de Controle de Zoonoses (CCZ) e de abrigos temporários, além de dados epidemiológicos sobre município, origem, sexo, raça e idade de cada animal. Imunoglobulinas da classe IgG anti-T. gondii foram avaliadas por Ensaio Imunoenzimático (ELISA) e Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). A frequência de anticorpos em cães foi de 39,4% (149/378) pelo ELISA e de 38,1% (142/373) pela RIFI, e em gatos foi de 15,2% (12/79) pelo ELISA e de 7,6% (6/79) pela RIFI. Os fatores associados à infecção canina foram a origem errante e a idade igual ou superior a um ano. Sorologia positiva por ELISA foi relacionada ao sexo dos felinos, com fêmeas apresentando maior chance de infecção. A avaliação dos resultados dos cães mostrou uma excelente concordância entre as técnicas (k = 0,82), sem diferenças estatisticamente significativas (p = 0,377). Entre os felinos, apesar de ter havido concordância entre os testes (k = 0,63), eles foram significantemente diferentes de acordo com as análises estatísticas (p = 0,041). Os resultados demonstram alta contaminação do ambiente pelo parasito, sugerindo grande risco de infecção humana e de outros animais. Este é o primeiro estudo de determinação da frequência de anticorpos anti-T. gondii em cães e gatos no Espírito Santo. Palavras-chave: Toxoplasma gondii. Estudos Soroepidemiológicos. Cães. Gatos. ELISA. Técnica Indireta de Fluorescência para Anticorpo. Brasil.