A toxoplasmose é uma infecção comum nos animais causada pelo Toxoplasma gondii configurando-se como uma importante zoonose. O homem infecta-se, principalmente, através da ingestão de carne contaminada com cistos do protozoário. São encontradas altas taxas de prevalência de toxoplasmose nos rebanhos de ovinos do mundo todo, sendo a ingestão de alimentos e água contaminados com oocistos as mais importantes fontes de infecção da espécie. No ovino, a toxoplasmose pode ser assintomática ou causar distúrbios reprodutivos, notadamente abortos, levando a perdas econômicas consideráveis. Com o objetivo de contribuir com dados sobre a freqüência de anticorpos para o T. gondii em ovinos na região da Grande Porto Alegre-RS, foram estimadas as freqüências de anticorpos para T. gondii da classe IgG em soros de ovinos provenientes de propriedades da região citada, utilizando a técnica de Hemaglutinação Indireta (HAI) e Imunofluorescência Indireta (IFI). A freqüência estimada de anticorpos para T. gondii em uma amostragem de 250 ovinos foi de 13,6% pela técnica de HAI e 15,2% pela técnica de IFI. A amostragem foi estratificada em dois grupos experimentais de acordo com o sexo e a idade dos animais. No grupo I, composto de 127 machos, obteve-se 4,8% de positivos para HAI e 7,6% de positivos para IFI. Enquanto nas 123 fêmeas, detectou-se um percentual de 8,8% de positivas pela técnica de HAI e 7,6% reagiram para IFI. Em relação a faixa etária se encontrou: 11 positivos (4,4%) nos animais com menos de um ano e 23 (9,2%) para aqueles com mais de um ano na reação de HAI, num total de 34 (13,6%) animais; enquanto que para técnica de IFI obteve-se o resultado de 19 (7,6%) ovinos jovens e 19 (7,6%) ovinos adultos em 38 (15,2%) animais analisados. A percentagem de co-positividade entre as técnicas utilizados foi de 55,26% e a co-negatividade foi de 93,865, e a concordância total ficou em 88%, enquanto o índice de Kappa calculado foi de 0,513. / Toxoplasmosis is a serious zoonosis. It is a common infection in animals caused by a parasite called Toxoplasma gondii. Human infection occurs mainly for ingestion of meat contaminated with T. gondii cysts. A high prevalence rate of toxoplasmosis is found in sheep cattle all over the world, being the consumption of food and water contaminated with oocystes the major source of infection of the species. In ovine, toxoplasmosis can be assymptomatique or cause reproduction disorders, especially abortions, which leads to significant economic losses.With the objective of providing data about the frequency of T. gondii antibodies in sheep from the Greater Porto Alegre area, we estimated the frequency of IgG class antibodies to T. gondii in sheep sera. The techniques employed were the Indirect Hemagglutination Technique (HAI) and the Indirect Imunofluorescence Test (IFI). The estimated frequency of antibodies to T. gondii in a sample of 250 sheep sera was 13,6% (HAI), and 15,2% (IFI). The sample was stratified into two experimental groups, according to gender and age. In group one, composed by 127 males, 4,8% were HAI positive, and 7,6% were IFI positive, whereas in the group composed by 123 females, 8,8% were HAI positive, and IFI 7,6%. Concerning age group, there were 11 HAI positives (4,4%) among the animals with less than one year of age, and 23 HAI positive (9,2%) among the animals over one year, totalizing 34 animals. For the IFI technique, the results obtained showed 19 (7,6%) young sheep and 19 (7,6%) adults in 38 animals analyzed. The co-positivity between the techniques was 55,26% and the co-negativity was 93,865. Total agreement was 88% while the Kappa index calculated was 0,513.

Orientador: Alvimar José da Costa / Banca: Paulo Henrique Franceschini / Banca: Anderson Barbosa Moura / Resumo: Seis caprinos machos em idade reprodutiva foram selecionados e distribuídos em três grupos: GI dois caprinos mantidos como controle (placebo), GII dois caprinos inoculados com 1 x 106 taquizoítos de T. gondii (cepa RH) e GIII dois caprinos inoculados com 2 x 105 oocistos de T. gondii (cepa P). Periodicamente foram aferidos parâmetros clínicos, hematológicos e sorológicos, assim como avaliações parasitêmicas, além de exames andrológicos. A presença do parasito no sêmen e, também, nos tecidos do sistema reprodutor foi pesquisada por meio das técnicas de bioprova, PCR e imunohistoquímica. Surtos parasitêmicos foram detectados em todos os animais inoculados com taquizoítos ou com oocistos. A recíproca dos títulos sorológicos (RIFI) alcançou valores máximos de 4096 nos dois grupos de animais que receberam o Toxoplasma gondii. Pela técnica da bioprova foi possível revelar precocemente a presença do coccídio nas amostras seminais dos animais inoculados como taquizoítos (5°, 7°, 28°, 49°, 63° e 70° DPI) e um pouco mais tardiamente nas amostras seminais daqueles inoculados com oocistos (56° e 70° DPI). Pela PCR foi possível identificar, no sêmen, material genético de T. gondii, em cinco e em duas datas experimentais pós-inoculanção dos animais pertencentes aos grupos GII e GIII, respectivamente. Por esta mesma técnica foi possível, ainda, isolar material genético deste protozoário também em amostras teciduais (pool de próstata, testículo, vesícula seminal e epidídimo) dos caprinos 11 e 36 inoculados com taquizoítos e oocistos, respectivamente. Pela imunohistoquímica foi diagnosticado o T. gondii no epidídimo de todos os caprinos que receberam o protozoário. O isolamento de T. gondii, no sistema reprodutor de caprinos (sêmen e tecidos), sugere a possibilidade da transmissão sexual constituir uma importante via na disseminação desta zoonose tão difundida na caprinocultura mundial. / Abstract: Six goat males in reproductive age had been selected and distributed in three groups: GI - two goat noninoculated (control), GII - two goat inoculated with 1 x 106 tachyzoites of T. gondii (RH strain) and GIII - two goat inoculated with 2 x 105 oocysts of T. gondii (P strain). Periodically had been measured clinical parameters, hematologics and sorologics evaluations, as well as parasitemics, beyond andrologics examinations. The presence of the parasite in the semen, and also in tissues of the reproductive system was searched by means of the techniques of bioassay, PCR and immunehistochemistry (only for tissues). Parasitemia was detected in the two animals inoculated with tachyzoites and in the inoculated others two with oocysts. The reciprocal one of the sorologicys titles (RIFI) reached maximal level of 4096 in the two groups of animals inoculated with the Toxoplasma gondii. Using biossay technique was possible precociously to disclose to the presence of the coccidy in the seminal samples of animals inoculated with tachyzoites (5°, 7°, 28°, 4 9°, 63° e 70° DPI) and a little more delayed in the seminal samples of it inoculated with oocysts (56° e 70° DPI). For the PCR it was possible to identify to the genetic material of the T. gondii, in the semen in five and two experimental dates after-inoculanção of the pertaining animals to groups GII and GIII respectively. For this same technique was possible still to isolate material genetic of this protozoario also in tissues samples (pool of prostate, testícule, vesicula seminal and epididim) of goat 11 and 36 inoculated with tachyzoites and oocysts, respectively. By the immunehistochemistry was diagnosised T. gondii in epididim of all goats ones that had received the protozoario. The isolation of T. gondii, in the reproductive system of goat (semen and tissues), suggests the possibility of the sexual transmission to constitute... (Complete abstract, click electronic access below) / Mestre

Resumo: A doença de Chagas e toxoplasmose são problemas de saúde pública no Brasil e entender com detalhes a biologia dos agentes causais, T. cruzi e T. gondii respectivamente, pode ser um ponto crucial para gerar informações relevantes voltadas para o desenvolvimento de tratamento efetivo no combate a estas doenças. No entanto, a busca de novos alvos para quimioterapia de algumas doenças parasitárias esbarra, por exemplo, na ausência de ferramentas que possibilitem o estudo da função de genes essenciais para a sobrevivência do organismo. Dentro desta problemática, o objetivo central deste estudo é a identificação de proteínas envolvidas no transporte nucleocitoplasmático de RNAs, mais especificamente a exportação de mRNAs, com a utilização de ferramentas de genética reversa para análise de proteínas essenciais envolvidas nestas vias em T. cruzi e T. gondii. Além disso, T. gondii tem sido o modelo de estudo escolhido por diversos grupos, uma vez que dispõe de várias ferramentas de genética reversa consideradas inviáveis ou laboriosas em outros parasitas (como Plasmodium ou Trypanosoma). A escolha do tema foi baseada em dois fatos principais: a) dentro do contexto de eventos moleculares essenciais, o transporte de RNA mensageiro (mRNA) ao local de tradução é uma etapa essencial e crucial na seleção de genes a serem expressos em uma célula eucariótica; b) escassez de publicações envolvendo diversos grupos de parasitas, demonstrando ser um tema da pesquisa básica em parasitologia que necessita ser explorado. Os dados gerados neste estudo permitiram identificar que a maioria das proteínas relacionadas com a exportação de mRNAs não são tão conservadas ao longo da filogenia de eucariotos, principalmente em relação aos protozoários que divergiram na base da árvore filogenética. A exceção encontrada foi Sub2/UAP56, uma proteína relacionada com exportação de mRNAs em fungos e humanos, respectivamente, que se encontra altamente conservada ao longo da filogenia de eucariotos. Em T. cruzi foi observado que TcSub2 é uma proteína nuclear, relacionada com alguns sítios de transcrição por RNA Polimerase II e essencial, não sendo possível obter o nocaute duplo do respectivo gene. Em T. brucei e T. gondii foi observado que a diminuição gradual das proteínas em questão, TbSub2 e TgUAP56 respectivamente, resulta em acúmulo de mRNAs poliadenilados nos núcleos afetando a exportação dos mRNAs e resultando em morte celular. A partir da observação da participação de proteínas ortólogas de Sub2 na exportação de mRNAs em parasitas, a outra parte deste estudo foi identificar proteínas associadas a TcSub2 para iniciar o entendimento sobre esta via bem como verificar a presença de proteínas específicas e provavelmente essenciais de parasitas para futuros estudos funcionais.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-08-25Bitstream added on 2014-06-13T20:35:35Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_kr_me_botfmvz.pdf: 157744 bytes, checksum: f115a70ad010444fe6ca9960d82e76d8 (MD5) / A toxoplasmose é uma das mais freqüentes zoonoses parasitárias, de distribuição mundial, cujo agente etiológico é o Toxoplasma gondii. A infecção em suínos tem sido descrita em diversos países, demonstrando seu caráter cosmopolita e a susceptibilidade desta espécie. O T.gondii pode ser transmitido sob várias formas, e com relação à espécie suína, a ingestão de carne crua ou mal cozida e seus derivados são importantes vias de transmissão para o homem. Estudou-se a prevalência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii em 550 amostras de soros de suínos de criações de fundo de quintal na microrregião de Registro - SP, utilizando como prova sorológica o método de aglutinação direta (MAD). Este mostrou-se uma ferramenta diagnóstica de fácil realização, baixo custo, não necessitando de equipamentos especiais para a leitura e interpretação dos resultados. Das 550 amostras de soro, 111(20,18%) reagiram positivamente com os títulos 64 (15,32%), 256 (27,93%), 1024 (39,64%), 4096 (10,81%), 16384 (4,50%) e 65536 (1,80%). Concluí-se que os resultados obtidos indicam alta prevalência desta enfermidade nas condições e região de origem dos animais. À medida que foram obtidos títulos altos de anticorpos contra o agente, pode-se concluir também que há risco potencial de transmissão da toxoplasmose para o homem, sugerindo que muitos desses animais poderiam apresentar bradizoítos em sua musculatura. / Toxoplasmosis is one of the most frequent parasitic zoonosis with worldwide distribution whose etiological agent is Toxoplasma gondii. The infection in swine has been described in many countries, showing the cosmopolitan character and susceptibility of this specie. T.gondii can be transmitted by many ways. The ingestion of swine raw or badly cocked meat and derivatives are important pathways of transmission to man. The anti-T.gondii antibodies prevalence was studied in 550 serum samples of swine under rustic condition (animals with no breed, popular named as backyard breeding) in Registro-SP, using the modified agglutination test (MAT). Such method is verified as an easy-appliance tool, with low costs and non necessity of special equipment in order to achieve interpretation of results. In 550 samples of serum, 111 (20.18%) were positive with titles of 64 (15.32%), 256 (27.93%), 1024 (39.64:%), 4096 (10.81%), 16384 (4.50%), 65536 (1.80%). These results achieved indicate a high prevalence of the disease on the region studied and under the specific conditions described. The high rate obtained as result also leads to the conclusion that there is potential risk of toxoplasmosis transmission to man due to the possibility of the animals to have bradyzoits in their musculature.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-05-28Bitstream added on 2014-06-13T20:38:48Z : No. of bitstreams: 1 costa_vm_me_botfmvz.pdf: 404473 bytes, checksum: 0e9d9447d55f3ca2e11ba7a40a45a785 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A toxoplasmose é similar em humanos e em ratos, sendo estes, o modelo experimental, mais utilizado para o estudo da doença. Há poucos relatos da transmissão desta enfermidade pelo leite materno, e desta forma o objetivo do presente estudo foi pesquisar a presença de Toxoplasma gondii no leite de ratas experimentalmente infectadas e a transmissão galactogênica. Utilizaram-se ratas Wistar (Rattus norvegicus), divididas em três grupos: G1, G2 e G3, contendo seis fêmeas cada um. Foram inoculadas via oral com 104 bradizoítos da cepa BTU4, genótipo I, isolada de cão com cinomose. As ratas do G1 e G2 foram infectadas 60 dias antes do acasalamento e as do G3 logo após o parto. Os animais do G2 foram submetidos à imunossupressão pós-parição. Para a detecção do parasito no leite utilizou-se a reação em cadeia pela polimerase (PCR) e para verificar a transmissão para os filhotes pesquisou-se nestes anticorpos anti-T. gondii pela imunofluorescência indireta (RIFI) e método de aglutinação direta (MAD), e a bioprova pela inoculação de camundongos com pool de tecidos (cerebral, pulmonar, hepático, cardíaco, muscular esquelético, língua e diafragma) de cada ninhada, bem como pela PCR nestes tecidos individualmente. A PCR foi positiva em três amostras de leite, duas provenientes da rata 1 do G1, e uma da rata 3 do G3. Os filhotes de todas as ratas do G1 soroconverteram, mas foram negativos na bioprova. Filhotes das ratas 1 e 3 do G3 soroconverteram, e a bioprova foi positiva. Amostras de fígado, musculatura esquelética e pulmão de filhotes do G1 foram positivas na PCR. Desta forma conclui-se que ocorreu a transmissão do T. gondii pelo leite, sugerindo-se novos estudos em lactentes, considerando-se a magnitude da doença em crianças e recém-nascidos. / Toxoplasmosis is similar in humans and rats, and the latter constitute the most used experimental model to study this disease. Few reports on toxoplasmosis transmission through maternal milk are available in literature; thus, the aim of the present study was to investigate whether Toxoplasma gondii is present in and transmitted through the milk of experimentally infected rats. Wistar (Rattus norvegicus) female rats were divided into three groups: G1, G2 and G3, with six animals each. They were orally inoculated with 104 bradyzoites of BTU4 strain, genotype I, isolated from a dog with distemper. G1 and G2 rats were infected 60 days before mating and those of G3, soon after the parturition. G2 animals were subjected immunosuppression just after parturition. Polymerase chain reaction (PCR) was used to detect the parasite in the milk. To verify the parasite transmission to the offspring, these anti-T. gondii antibodies were investigated through indirect immunofluorescence assay (IFA) and direct agglutination test (DAT). Bioassay consisted of inoculating mice with a pool of tissues (brain, lungs, liver, heart, skeletal muscle, tongue and diaphragm) from each litter, as well as PCR in these tissues individually. PCR was positive in three milk samples, two from rat 1 (G1) and one from rat 3 (G3). The pups of all G1 rats seroconverted but were negative in the bioassay. The pups of rats 1 and 3 (G3) seroconverted and their bioassay was positive. Liver, skeletal muscle and lung samples were PCR-positive in G1 pups. Thus, we can conclude that T. gondii was transmitted through milk, suggesting the need of new studies in breast-feeding mothers as this disease is highly severe in children and newborns.

A toxoplasmose é uma infecção comum nos animais causada pelo Toxoplasma gondii configurando-se como uma importante zoonose. O homem infecta-se, principalmente, através da ingestão de carne contaminada com cistos do protozoário. São encontradas altas taxas de prevalência de toxoplasmose nos rebanhos de ovinos do mundo todo, sendo a ingestão de alimentos e água contaminados com oocistos as mais importantes fontes de infecção da espécie. No ovino, a toxoplasmose pode ser assintomática ou causar distúrbios reprodutivos, notadamente abortos, levando a perdas econômicas consideráveis. Com o objetivo de contribuir com dados sobre a freqüência de anticorpos para o T. gondii em ovinos na região da Grande Porto Alegre-RS, foram estimadas as freqüências de anticorpos para T. gondii da classe IgG em soros de ovinos provenientes de propriedades da região citada, utilizando a técnica de Hemaglutinação Indireta (HAI) e Imunofluorescência Indireta (IFI). A freqüência estimada de anticorpos para T. gondii em uma amostragem de 250 ovinos foi de 13,6% pela técnica de HAI e 15,2% pela técnica de IFI. A amostragem foi estratificada em dois grupos experimentais de acordo com o sexo e a idade dos animais. No grupo I, composto de 127 machos, obteve-se 4,8% de positivos para HAI e 7,6% de positivos para IFI. Enquanto nas 123 fêmeas, detectou-se um percentual de 8,8% de positivas pela técnica de HAI e 7,6% reagiram para IFI. Em relação a faixa etária se encontrou: 11 positivos (4,4%) nos animais com menos de um ano e 23 (9,2%) para aqueles com mais de um ano na reação de HAI, num total de 34 (13,6%) animais; enquanto que para técnica de IFI obteve-se o resultado de 19 (7,6%) ovinos jovens e 19 (7,6%) ovinos adultos em 38 (15,2%) animais analisados. A percentagem de co-positividade entre as técnicas utilizados foi de 55,26% e a co-negatividade foi de 93,865, e a concordância total ficou em 88%, enquanto o índice de Kappa calculado foi de 0,513. / Toxoplasmosis is a serious zoonosis. It is a common infection in animals caused by a parasite called Toxoplasma gondii. Human infection occurs mainly for ingestion of meat contaminated with T. gondii cysts. A high prevalence rate of toxoplasmosis is found in sheep cattle all over the world, being the consumption of food and water contaminated with oocystes the major source of infection of the species. In ovine, toxoplasmosis can be assymptomatique or cause reproduction disorders, especially abortions, which leads to significant economic losses.With the objective of providing data about the frequency of T. gondii antibodies in sheep from the Greater Porto Alegre area, we estimated the frequency of IgG class antibodies to T. gondii in sheep sera. The techniques employed were the Indirect Hemagglutination Technique (HAI) and the Indirect Imunofluorescence Test (IFI). The estimated frequency of antibodies to T. gondii in a sample of 250 sheep sera was 13,6% (HAI), and 15,2% (IFI). The sample was stratified into two experimental groups, according to gender and age. In group one, composed by 127 males, 4,8% were HAI positive, and 7,6% were IFI positive, whereas in the group composed by 123 females, 8,8% were HAI positive, and IFI 7,6%. Concerning age group, there were 11 HAI positives (4,4%) among the animals with less than one year of age, and 23 HAI positive (9,2%) among the animals over one year, totalizing 34 animals. For the IFI technique, the results obtained showed 19 (7,6%) young sheep and 19 (7,6%) adults in 38 animals analyzed. The co-positivity between the techniques was 55,26% and the co-negativity was 93,865. Total agreement was 88% while the Kappa index calculated was 0,513.

Mais de 2 bilhões de pessoas em todo o mundo encontram-se infectadas com Toxoplasma gondii. Na região endêmica de Erechim, RS, cerca de 90% da população é soropositiva e cerca de 18% destes indivíduos apresentam lesões oculares com manifestações clínicas. A estrutura genética das populações do T. gondii tem sido bastante investigada, a despeito da infecção ter se espalhado pelo mundo, do grande número de hospedeiros intermediários e da capacidade do parasita de se reproduzir sexualmente. Linhagens de T. gondii com atípica ou nova combinação de alelos têm sido isoladas de animais não domésticos ou em outros continentes, como América do Sul e África, e de pacientes com apresentações clínicas incomuns. Em modelos murinos, as linhagens com o genótipo tipo I são altamente virulentas, em contraste às cepas tipo II e tipo III que são menos virulentas. Este trabalho propõe a caracterização fenotípica da resposta imune do hospedeiro frente a infecção por diferentes cepas de T. gondii, bem como o isolamento e a caracterização genotípica das linhagens de T. gondii que infectam indivíduos de Erechim no Rio Grande do Sul. Para a caracterização fenotípica utilizamos duas cepas de T. gondii já bem estabelecidas, a cepa RH (tipo I) e a ME49 (tipo II), e uma cepa isolada a partir de gatos domésticos do Brasil, chamada TgCatBr71. Sendo assim, através da fenotipagem das células dendríticas de camundongos C57Bl/6 infectados com as cepas citadas, foi possível observar que essas cepas induzem expressão das moléculas de superfície CD40, CD80, CD86 e MHC classe II em DCs CD11c+, porém sem significativa diferença entre as cepas. Com relação as células CD4+ e células CD8+, observamos o aumento das células CD8+ no decorrer da infecção pelas cepas RH e ME49, indicando a importância deste tipo celular na resposta protetora contra T. gondii. Avaliamos também a produção de citocinas IL-12, IFN-g e IL-10 em células esplênicas de camundongos infectados pelas três cepas no decorrer da infecção e detectamos que camundongos infectados pela cepa tipo II (ME49) apresentam síntese maior dessas citocinas do que camundongos infectados pela cepa tipo I (RH) e pela cepa TgCatBr71. Assim, concluímos que esta cepa TgCatBr71 se assemelha bastante a cepa do tipo I (RH), tanto em relação a evolução da doença no camundongos como nos padrões da resposta imune do hospedeiro. E que apesar dessas duas cepas diferirem da cepa tipo II (ME49), resultando em graus diferentes de patologia em camundongos C57Bl/6, todas a três cepas parecem produzir semelhante resposta imune protetora do hospedeiro. / More than 2 billion people are infected with Toxoplasma gondii around the world. In the endemic region of Erechim, RS, Brazil, about 90% of the population is soropositive and about 18% of these individuals have ocular lesions with clinical manifestations. The genetic structure of strains of T. gondii has been investigated, despite the infection has spread throughout the world, the large number of intermediate hosts and the ability to reproduce sexually. Strains of T. gondii with atypical or new combination of alleles have been isolated from wild animals and other continents, such as South America and Africa, and also from patients with unusual clinical presentations. In murine models, the type I genetic lineage are highly virulent, in contrast to strains type II and type III.Our work proposes the phenotypic characterization of the host immune response against the infection by different strains of T. gondii, and the isolation and genetic strains characterization of T. gondii that infect individuals of Erechim in RS, Brazil. In the phenotypic characterization were used two strains of T. gondii already well established, the strain RH (type I) and ME49 (type II), and a strain isolated from domestic cats from Brazil, called TgCatBr71 (type BrI). Thus, by phenotyping dendritic cells of C57BL/ 6 mice infected with the strains mentioned, we observed that these strains upregulated the expression of surface molecules such as CD40, CD80, CD86 and MHC class II in DC CD11c+ although with no significant difference between the strains. With respect to the CD4+ and CD8+ cells, the observed increase in CD8+ T cells during the infection by strains RH and ME49, indicating the importance of this cell type in the protective response against T. gondii. We also evaluated the production of cytokines IL-12, IFN-g and IL-10 from spleen cells and found that mice infected by the strain type II (ME49) have increased synthesis of these cytokines than mice infected by the strain type I (RH) and the strain type BrI (TgCatBr71). Thus, we concluded that type BrI (TgCatBr71) strain is similar to type I (RH) strain, both for the evolution of the disease and also concerning the immunological parameters evaluated. Besides, despite these two strains differ from the strain type II (ME49), resulting in different degrees of pathology in mice C57BL / 6, all three strains seem to produce similar protective immune response of the host.

T. gondii é um protozoário amplamente disseminado pelo mundo que pode causar doença em animais e humanos. A evolução e a gravidade da doença dependem de características genéticas do parasita e do hospedeiro. A prevalência varia geograficamente, em Erechim, RS, 88% da população é soropositiva e 18% destes apresentam toxoplasmose ocular (TO). A resposta imune humoral contra T. gondii é persistente em todas as fases da infecção. O objetivo deste retrospectivo estudo foi correlacionar a imunidade humoral e a resposta contra peptídeos cepa-específicos com a gravidade da TO em pacientes de Erechim. 327 amostras de soro foram testadas (ELISA) para a pesquisa dos isótipos específicos e contra peptídeos cepa-específicos de regiões polimórficas (GRA6 e GRA7) do parasita. Nossos resultados sugerem que IgG2 e IgG3 estão associados à infecção adquirida recente, porém não há associação entre os isótipos e a evolução clínica da TO. Entretanto, embora seis diferentes sorotipos infectem estes pacientes, a gravidade da TO está associada a um novo padrão sorotípico (Atípico D). / T. gondii is a widespread protozoan parasite that is associated with a large spectrum of diseases in both humans and animals. The progression and severity of disease is quite variable and presumably due to some combination of host and parasite genetics. Prevalence varies with geography. In Erechim, Brazil, it is 88% prevalent and is related with a high incidence (18%) of ocular toxoplasmosis (OT). Humoral immune response against the parasite is effective. The aim of this retrospective study was to correlate the humoral immunity and response against the strain-specific peptides with the severity of the TO in Erechim`s patients. 327 sera were evaluated by ELISA to isotypes, IgG avidity and serotyped using strain-specific polymorphic peptides (GRA6 and GRA7). Our results suggest that IgG2 and IgG3 were associated with recent acquired infection. However, there is no association between isotypes and clinical evolution of OT, and also 6 different serotype-strains were detected in this population, but only one of these (Atypical D) was strongly associated with severe OT.

Orientador: Claudio Lucio Rossi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-25T17:20:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Suzuki_LisandraAkemi_M.pdf: 14558191 bytes, checksum: c85c5e0b4751c7cbf7f83293db450f8a (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: O diagnóstico da toxoplasmose aguda adquirida é, freqüentemente, baseado na detecção de anticorpos específicos IgM anú-T.gondii e/ou elevação significativa dos títulos de anticorpos IgG. Entretanto, a elevada ocorrência de altos títulos de IgG anti-T. gondii em pessoas sadias e a persistência, em alguns casos, dos anticorpos IgM por muito tempo após infecção com o parasita pode dificultar a interpretação dos resultados dos testes sorológicos quando se suspeita de toxoplasmose aguda. Em nosso primeiro estudo, são apresentados os resultados da detecção de anticorpos específicos da classe IgA e da determinação da avidez dos anticorpos IgG em amostras seqüenciais de soros de um paciente apresentando níveis significativos de anticorpos IgM anú-T.gondii durante sete anos após o início dos sintomas clínicos da toxoplasmose. Os anticorpos IgA foram quantificados por uma técnica de ELISA de captura (ETI-TOXOK-A). O paciente ainda apresentou um resultado positivo (>10 UA/ml) em uma amostra de soro coletada dois anos após o inicio das manifestações clínicas. A avidez dos anticorpos IgG foi determinada com o sistema Falcon assay screening test (F.A.S.T.®) - ELISA, utilizando somente uma diluição da amostra de soro. índices de avidez compatíveis com uma infecção aguda foram encontrados nas amostras de soros obtidas durante os cinco primeiros meses após o início dos sintomas clínicos. O objetivo do segundo estudo foi avaliar vários marcadores sorológicos para o diagnóstico da toxoplasmose aguda adquirida, tais como a detecção de anticorpos IgA e IgE anti-T. gondii, o teste de aglutinação diferencial (AC/HS) e os testes baseados na determinação da avidez dos anticorpos IgG. Foram testadas, num total de 64 amostras de soros, 31 amostras de soros de pacientes com infecção adquirida recentemente e 33 amostras de soros de pacientes com infecção crônica. Os anticorpos IgA foram quantificados por meio de dois "kits" de ELISA de captura (Platelia® Toxo-IgA e ETI-TOXOK A) e um "kit" de ELISA automatizado (IMx Toxo-IgA). Níveis de anticorpos IgA compatíveis com infecção recente foram detectados em todas as amostras de soros dos pacientes com toxoplasmose aguda, com os três "kits". Por outro lado, a análise das amostras de soros dos 33 pacientes com toxoplasmose crônica mostrou que níveis significativos de anticorpos IgA podem ser detectados com alta freqüência durante a fase crônica da infecção, com os três "kits". Anticorpos IgE anti-T. gondii foram detectados, pela técnica de imunocaptura-aglutinação (ISAGA), em 26 (84%) dos 31 pacientes com toxoplasmose aguda e em duas amostras de soros de pacientes com toxoplasmose crônica coletadas mais de um ano após o início das manifestações clínicas. Vinte e nove (94%) dos 31 pacientes com infecção aguda e 15 (45%) dos 33 pacientes com infecção crônica apresentaram, no teste AC/HS, um padrão compatível com toxoplasmose aguda. A avidez dos anticorpos IgG anti-T. gondii foi determinada por dois métodos diferentes. Um dos métodos, utilizando o "kit" comercial Platelia Toxo-IgG, foi baseado na titulação de cada amostra de soro e cálculo dos títulos, com e sem o tratamento com uréia, em relação a um valor de "cut-off" definido. No outro método, utilizando o sistema F.A.S.T.- ELISA, foi feita apenas uma única diluição da amostra de soro, e foram comparadas as absorbâncias das reações na presença e ausência de uréia. Todas as 31 amostras de soros de pacientes com infecção aguda apresentaram índices compatíveis com toxoplasmose aguda pelo método de titulação, ao passo que, com o método de diluição única, 4 destas amostras apresentaram resultados duvidosos, mostrando que o método de titulação das amostras foi mais sensível para o diagnóstico de infecção recente. Resultados semelhantes foram obtidos no grupo de 33 pacientes com toxoplasmose crônica pelos dois métodos; apenas uma amostra de soro apresentou um índice de avidez não compatível com a fase crônica, pelo método de titulação. Os resultados obtidos no presente estudo mostraram que os marcadores sorológicos, atualmente utilizados para o diagnóstico da toxoplasmose aguda adquirida, possuem limitações significativas. Nossos dados sugerem que a determinação da avidez dos anticorpos IgG anti-Z gondii, principalmente pelo método de titulação das amostras de soros, pode ser bastante útil para um diagnóstico mais confiável do estágio em que se encontra a infecção, nos pacientes que apresentam níveis significativos de anticorpos IgM. / Abstract: The diagnosis of acute acquired toxoplasmosis has been frequently based on the detection of specific IgM antibodies and on the demonstration of a significant increase in specific IgG antibodies titers. However, the prevalence of high Toxoplasma IgG antibody titers among normal subjects and the sustained persistence, in some persons, of specific IgM antibodies have complicated the interpretation of serological tests when acute toxoplasmosis is suspected. In our first study, we report the detection of specific IgA antibodies and the determination of the avidity of Toxoplasma-specific IgG in sequential serum samples from a patient exhibiting significant levels of specific IgM antibodies for seven years after the onset of the clinical symptoms of toxoplasmosis. Anti-T.gondii IgA was quantified by an antibody capture ELISA (ETI-TOXOK-A). The patient still had a positive IgA result (> 10 AU/ml) in a serum sample taken two years after the beginning of the clinical manifestations. The IgG avidity was determined by a single serum dilution method, using the Falcon assay screening test (F.A.S.T.®) - ELISA system. Avidity indices compatible with an acute infection were found only in serum samples taken during the first five months after the onset of the clinical symptoms. The purpose of the second study was to assess the usefulness of newer serological markers, such as the detection of specific IgA and IgE antibodies, the differential agglutination (AC/HS) test using formalin and acetone-fixed tachyzoites of T. gondii and the determination of the avidity of Toxoplasma-specific IgG, in the diagnosis of acute acquired toxoplasmosis. Sixty-four serum samples, 31 from patients with a recently acquired Toxoplasma infection and 33 from patients with chronic toxoplasmosis, were tested. Anti-Z gondii IgA was measured by two antibody capture ELISA tests (ETI-TOXOK-A and Platelia® Toxo IgA) and an automated direct ELISA (IMx® Toxo IgA). The three kits detected antibody levels compatible with a recent infection in serum samples of all patients with acute toxoplasmosis. On the other hand, the analysis of serum samples from 33 patients with chronic toxoplasmosis revealed that significant levels of IgA may be detected with a high frequency by the three kits during the chronic phase of infection. IgE antibodies detected by ISAGA were present in 26 (84%) of 31 patients with acute toxoplasmosis and in serum samples from two subjects with chronic infection taken more than one year after the beginning of the clinical symptoms of infection. Twenty-nine (94%) of 31 patients with a recent Toxoplasma infection and 15 (45%) of 33 subjects with chronic toxoplasmosis had an AC/HS pattern compatible with acute toxoplasmosis. The avidity of Toxoplasma IgG was evaluated by two methods. One method was based on titration of each serum sample and calculation of the titers, in the absence and presence of urea, in relation to a defined cut-off value. In the other method, a single serum dilution was used and the absorbances of the reactions in the presence and absence of urea were compared. The titration method was more sensitive for diagnosing a recent primary Toxoplasma infection: All 31 serum samples from patients with acute toxoplasmosis had avidity indices compatible with acute toxoplasmosis by the titration method whereas with the single dilution method serum samples from four patients had equivocal results. In the 33 patients with chronic toxoplasmosis, similar results were obtained with the two avidity methods; only one serum sample had a non compatible avidity value with the titration method. The results obtained in the present study show that the current serological markers used for diagnosing acute acquired toxoplasmosis have significant limitations. Our data suggest that the determination of the avidity of Toxoplasma-specific IgG, mainly by the titration method, in patients with detectable IgM antibodies could permit a more efficient diagnosis of the stage of infection by T gondii. / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Katia Denise Saraiva Bresciani / Resumo: O objetivo foi verificar a soroprevalência de anticorpos IgG contra T. gondii e identificar pela primeira vez os fatores associados ao risco de infecção em gestantes com acompanhamento pré-natal em Araçatuba. Em parceria com a Secretaria Municipal de Saúde de Araçatuba/SP, foram analisados 428 questionários no período de maio de 2018 a março de 2019, em quatro Unidades Básicas de Saúde (UBS) deste município. O questionário epidemiológico foi aplicado por enfermeiras de cada unidade e continha perguntas relacionadas aos fatores associados ao risco de infecção. Em 236/428 (54,91%) foram detectados anticorpos da classe IgG e a análise multivariada verificou que a soroprevalência foi associada a gestantes maior de 36 anos, casadas, ensino médio incompleto e gestação anterior. Aquelas que relataram gestação anterior têm 1,99 vezes mais chance de ser sororeagente para toxoplasmose neste município. Pela primeira vez, foi caracterizado o perfil epidemiológico de gestantes atendidas com toxoplasmose em Unidades Básicas de Saúde deste município do Estado de São Paulo. / Abstract: The objective was to verify the seroprevalence of IgG antibodies against T. gondii and to identify for the first time the factors associated with the risk of infection in pregnant women with prenatal care in Araçatuba. In partnership with the Municipal Health Secretariat of Araçatuba / SP, 428 questionnaires were analyzed from May 2018 to March 2019, in four Basic Health Units (BHU) of this municipality. The epidemiological questionnaire was administered by nurses from each unit and contained questions related to factors associated with risk of infection. In 236/428 (54.91%) IgG class antibodies were detected and the multivariate analysis found that seroprevalence was associated with pregnant women older than 36 years, married, incomplete high school and previous pregnancy. Those who reported previous pregnancy are 1.99 times more likely to be seropositive for toxoplasmosis in this municipality. For the first time, the epidemiological profile of pregnant women treated with toxoplasmosis in Basic Health Units of this municipality of the State of São Paulo was characterized. / Mestre