Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The granulocyte-macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) is a cytokine that regulates the proliferation and differentiation of hematopoietic progenitor cells and activates mature granulocytes and macrophages. Clinically is used in enhancing hematopoietic recovery after cancer chemotherapy and bone marrow transplantation. A reversed-phase liquid chromatography (RP-LC) method was validated for the determination of the non-glycosylated recombinant rhGM-CSF (Molgramostim) in biopharmaceutical formulations. The RP-LC method was carried out on a Jupiter C4 column (250 mm x 4.6 mm i.d.), maintained at 45 ºC. The mobile phase A consisted of 0.1% TFA and the mobile phase B consisted of 0.1% TFA in acetonitrile, run at a gradient from: 0.01 34 min, 37% 50% of B; 34 35 min linear back to 37% of B and 35 40 min, 37% of B. The flow rate was 1 mL/min, and using photodiode array (PDA) detection at 214 nm. The chromatographic separation was obtained with the retention time of 29.2 min, and was linear over the concentration range of 2-300 μg/mL (r2 = 0.9992). The procedure was validated evaluating parameters such as the specificity, linearity, precision, accuracy, robustness, limit of detection and limit of quantitation. The specificity was proven through degradation studies, showing that also there was no interference of the excipients. Moreover, the in vitro cytotoxicity test of the degraded products showed significant differences (p<0.05). The proposed method was applied for the analysis of molgramostim and their related proteins, and the results were correlated to the bioassay, showing mean differences of the potency 1.02% higher for the RP-LC method, contributing to establish alternatives to characterize and monitoring its instability, improving the quality control and assuring the therapeutic efficacy. / O fator estimulador da colônia de granulócitos e macrófagos (GM-CSF) é uma citocina que regula a proliferação e diferenciação de células progenitoras hematopoiéticas e ativa granulócitos e macrófagos maduros. É clinicamente indicado após quimioterapia para o câncer e após transplante de medula óssea. No presente trabalho foi validado método por cromatografia líquida em fase reversa (CL-FR) para a avaliação da molgramostima, forma recombinante não-glicosilada do GM-CSF, em formulação biofarmacêutica. Utilizou-se coluna Júpiter C4 (250 mm x 4,6 mm d.i.), mantida a 45 °C. A fase móvel A foi composta de ácido trifluoracético 0,1% e a fase móvel B de ácido trifluoracético 0,1% em acetonitrila, eluídas no gradiente: 0,01 34 min, 37 50% de B; 34 35 min, 50 37% de B, mantendo-se nesta proporção até 40 min. Utilizou-se vazão de 1 mL/min, usando detector de arranjo de diodos (DAD) a 214 nm. A separação cromatográfica foi obtida no tempo de 29,2 min, sendo linear na faixa de concentração de 2 300 μg/mL (r2 = 0,9992). O procedimento foi validado, avaliando-se os parâmetros de especificidade, linearidade, precisão, exatidão, robustez, limite de detecção e quantificação. A especificidade foi comprovada através de estudos de degradação, demonstrando também que não houve interferência dos excipientes. Além disso, realizou-se o teste de citotoxicidade in vitro dos produtos degradados que apresentaram diferença significativa (p<0,05). O método foi aplicado para avaliação de potência de molgramostima e de proteínas relacionadas, e os resultados foram correlacionados com o bioensaio, observando-se diferenças médias de potência 1,02% superiores por CL-FR. Contribuiu-se assim para o estabelecimento de alternativas que aprimoram o controle da qualidade, garantindo a segurança e eficácia terapêutica.

Introdução: Várias são as propostas descritas para tratar farmacologicamente a lesão traumática da medula espinal. A metilprednisolona já foi padronizada para uso clínico. O fator estimulador de colônia de granulócitos (G-CSF) tem sido promissor em estudos experimentais e clínicos. Não há pesquisas quanto ao efeito da associação dos dois fármacos. Objetivo: Avaliar o efeito do tratamento com o fator estimulador de colônia de granulócitos associado a metilprednisolona na lesão medular aguda experimental em ratos. Material e métodos: Foram avaliados 40 ratos Wistar submetidos a lesão medular moderada com o NYU-Impactor. Os animais foram divididos em quatro grupos de 10 ratos. O Grupo Controle não recebeu tratamento; o Grupo G-CSF, foi tratado com G-CSF no momento da lesão e diariamente ao longo dos cinco dias subsequentes; o Grupo Metilprednisolona, com metilprednisolona durante 24 horas; e o Grupo G-CSF/Metilprednisolona, com metilprednisolona durante 24 horas e G-CSF no momento da lesão e ao longo de cinco dias. Os animais foram mantidos vivos durante 42 dias; a avaliação funcional foi realizada com a aplicação da escala funcional de Basso, Beattie e Bresnahan (BBB) nos dias 2, 7, 14, 21, 28, 35 e 42 subsequentes à lesão. A avaliação dos potenciais evocados motores foi realizada no dia 42 e a avaliação histológica da lesão da região da medula espinal lesada, realizada logo após a eutanásia ocorrida no dia 42. Resultados e conclusões: A associação de metilprednisolona e G-CSF no tratamento do traumatismo medular contuso experimental em ratos promoveu melhora neurológica avaliada pela escala BBB superior à melhora promovida pela metilprednisolona e G-CSF quando utilizadas isoladamente. A associação teve também efeito sinérgico que resultou em melhora nos parâmetros histológicos no local da lesão. Não houve diferença entre os grupos quanto à avaliação neurofisiológica / Introduction: There are several proposals to pharmacologically treat traumatic spinal cord injury. Methylprednisolone has already been standardized for clinical use. Granulocyte colony stimulating factor (G-CSF) has been promising in experimental and clinical studies. There is no research on the effect of the association of the two drugs. Objective: to evaluate the effect of combined treatment of the granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) associated with methylprednisolone in experimental acute spinal cord injury in rats. Material and methods: Forty male Wistar rats were submitted to a moderate spinal cord injury with the NYU-Impactor. The animals were divided into four groups of ten rats each. The Control Group was not treated; the G-CSF Group was treated with G-CSF at the time of injury and daily over the next five days; the Methylprednisolone Group was treated with methylprednisolone for 24 hours; the G-CSF/methylprednisolone Group, was treated with methylprednisolone for 24 hours and G-CSF at the time of injury and daily over the next five days. The animals were kept alive for 42 days; Functional evaluation was performed using the Basso, Beattie and Bresnahan (BBB) score on days 2, 7, 14, 21, 28, 35 and 42 following the spinal cord injury. Evaluation of motor evoked potentials was held and histological examination of the lesion of the spinal cord was done immediately after euthanasia on day 42. Results and conclusions: The combination of methylprednisolone and G-CSF in the treatment of experimental spinal cord injury in rats promoted neurological improvement as assessed by BBB scale with greater improvement than with methylprednisolone or G-CSF when used alone. The combination of treatment had also a synergistic effect resulting in improvement in histological parameters at the injury site. There was no difference between groups regarding neurophysiological evaluation

Orientadores: Alessandro dos Santos Farias, Leonilda Maria Barbosa dos Santos / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T01:58:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pradella_Fernando_M.pdf: 4468527 bytes, checksum: 63d6760bd0ea06c5fcab94d1421da291 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The abstract is available with the full electronic document / Mestrado / Imunologia / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientador: Simone dos Santos Aguiar / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-27T08:24:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Eid_KatiaAparecidadeBrito_D.pdf: 1187431 bytes, checksum: e62e4911ad1d92b3213551ba2a1b41a7 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Introdução: As células progenitoras periféricas hematopoiéticas (CPHP) é uma das alternativas de enxerto para a realização de transplante autólogo em crianças, adolescente e adulto jovem portadores de tumores sólidos e linfomas. Na mobilização, a dose clássica de G-CSF é 10µg/kg/peso do paciente SC em dose única. Acredita-se que doses maiores de G-CSF aplicadas duas vezes ao dia aumentariam o número de CD34+ coletadas com o menor número de leucaféreses. A tecnologia atual permite que seja realizado leucaférese em crianças com baixo peso (<10 kg). Objetivo: o mote do estudo foi avaliar se o G-CSF na dose de 15µg/kg peso do paciente ao dia e fracionado em duas doses, 10µg/kg e 5µg/kg, diminuiria o número de leucaférese realizada para atingir o mínimo de 3x106/kg/peso do paciente de CD34+ quando comparada com G-CSF na dose convencional, 10µg/kg/peso do paciente em dose única. Métodos: Os pacientes foram divididos em dois grupos. Grupo 10 formado por pacientes que receberam G-CSF 10µg/kg/peso SC ao dia em dose única às 6h e grupo 15 formado por pacientes que receberam G-CSF 15µg/kg/peso SC ao dia dividido em duas vezes, 10µg/kg SC às 6h e 5µg/kg SC às 18h. As leucaféreses foram realizadas em um separador celular automático de fluxo contínuo com anticoagulante ACD-A, foram processados 4 volemias em cada leucaférese. Pacientes com < 20 kg receberam priming de concentrado de hemácias filtradas e irradiadas (CHFI) durante as leucaféreses. A realização do transplante autólogo ocorreu com o número mínimo de 3x106/kg/peso de CD34+. Resultados: Sessenta e cincos pacientes portadores de tumores sólidos e linfomas foram avaliados, 39 pacientes receberam 10µg/kg/peso SC ao dia em dose única às 6h de G-CSF e 26 pacientes receberam 10µg/kg SC às 6h e 5µg/kg SC às 18h de G-CSF. Foram realizadas 146 leucaféreses, 110 (75,3%) no grupo 10 e 36 (24,7%) leucaféreses no grupo 15. No grupo 10 foi obtido uma mediana de 3 (1-7) leucaféreses e coletado uma média de 8,89x106/kg (± 9,59) de CD34+, o grupo 15 realizou uma mediana de 1 (1-3) leucaféreses e coletado uma média de 5,29x106/kg (± 4,95) de CD34+. Uma diferença estatística importante foi o número de leucaféreses (p<0,0001). Nenhum paciente apresentou intercorrências durante as leucaféreses. Os pacientes que receberam CHFI (<20 kg) não apresentaram hipovolemia nas leucaféreses realizadas. Conclusão: Para coletar o mínimo de 3x106/kg/peso de CD34+, a aplicação de G-CSF 15µg/kg/peso fracionada diminuiu significativamente o número de leucaférese realizada / Abstract: Introduction: The peripheral hematopoietic progenitor cells are a graft choice for performing autologous transplantation. In the mobilization, the classical dose of G-CSF is 10?g/kg of the patient in a single dose. There is a theory that higher doses of G-CSF applied twice daily could increase the number of collected CD34+ cells with a smallest number of leukapheresis. Objective: The aim of this study is to evaluate if a fractionated-dose of G-CSF at 15?g/kg of patient may reduce the number of leukapheresis for achieving the minimum target of 3 x 106/kg of CD34+ cells as compared to conventional dose of G-CSF. Methods: Patients were divided into two groups. Group 10: patients who received a single dose daily of G-CSF 10?g/kg and Group 15: patients who received twice dose daily of G-CSF 15?g/kg. The leukapheresis were processed in an automated cell separator. The autologous transplantation happened when the minimum number of 3x106/kg CD34+ was reached. Results: Group 10 enrolled 39 patients who received 10?g/kg of G-CSF and group 15 had 26 patients who received 15?g/kg fractionated of G-CSF. There were a total of 146 aphaeresis; 110 (75.3%) in group 10 and 36 (24.7%) group 15. Group 10 collected a median of 3 (1-7) leukapheresis and a mean of 8.89 x106/kg (± 9.59) CD34+, whereas group 15 had a median of 1 (1-3) leukapheresis and collected a mean of 5.29 x106/kg (± 4.95). The relevant difference statistic was the number of aphaeresis (p<0.0001). Conclusion: To collect a minimum target of 3x106/kg of CD34 +, the application of fractionated-dose of 15?g/kg G-CSF decreased significantly the number of leukapheresis performed / Doutorado / Saude da Criança e do Adolescente / Doutora em Ciências

O concentrado de granulócitos é um importante componente para o tratamento de pacientes oncológicos. A doação deste componente é mais complexa do que outras doações de sangue ou hemocomponentes, porque necessita de maiores esforços e assumção de riscos por parte do doador e, também, o uso de equipamento automatizado de aférese. O presente estudo tem o objetivo de aumentar o conhecimento sobre a população de doadores de granulócitos e avaliar a diferença entre suas motivações para realizarem as doações e seu capital social geral comparando com doadores de plaquetas e doadores altruistas de sangue total. Com esses resultados os hemocentros que realizam a coleta de granulócitos não só poderão ter informações mais objetivas que tornem mais eficaz o recrutamento deste tipo de doador e, consequentemente, aumentar a disponibilidade deste componente como também, identificando um perfil semelhante dos doadores de granulócitos na população geral de doadores o banco de sangue poderá fidelizar estes indivíduos e promover doações de sangue mais seguras. O perfil dos doadores de granulócitos foi avaliado a partir de um estudo caso-controle, sendo o grupo casos formado por estes doadores (n=64) e, os controles por doadores de plaquetas (n-64) e de sangue total (n=68), na razão de um caso para dois controles. Doadores de granulócitos são principalmente do sexo masculino e com idade mais avançada do que os controles. Com referência às motivações para doarem, doadores de granulócitos não se diferem substancialmente dos doadores de plaquetas, mas em relação aos doadores de primeira vez de sangue total há diferenças consideráveis principalmente no que diz respeito ao interesse nos resultados dos testes sorológicos. Doadores de sangue total são quase duas vezes mais motivados a doarem pelo recebimento dos resultados comparados aos doadores de granulócitos, bem como também se motivam mais a doarem para tirar o dia de folga do trabalho o que indica um gesto de menor altruísmo destes daodores. O perfil sócio determinante entre os grupos de doadores também se difere, doadores de granulócitos são pessoas efetivamente mais engajadas socialmente comparados aos controles e têm de uma rede comunitária mais coesa e confiável, concordando cerca de duas vezes mais do que doadores de plaquetas que têm vizinhos conhecidos que os ajudaria financeiramente (OR=2,49) ou concordando quatro vezes mais que doadores de sangue total que têm vizinhos conhecidos que estariam sempre prontos a ajudar outros vizinhos (OR=4,02). Concluimos que os resultados indicam que há a necessidade dos bancos de sangue utilizarem novas estratégias de recrutamento para aumentar a conversão de doadores, passando a utilizar, além do recrutamento interno, comunicações mais efetivas que, consigam atingir a população foco com maior eficiência, em locais onde a probabilidade de encontrar doadores mais engajados socialmente é aumentada, como clubes, centros comunitários ou associações / The concentrate of granulocytes is an important component for oncologic patient\'s treatment. Donation of this component is more complex than other blood components donations, because it claims more efforts and risks assumptions by the donor, and also the use of automated apheresis equipment. The present study is aimed to increase knowledge about the granulocyte donors´ population and evaluate differences among their motivations to accomplish donations and their general social capital, comparing with platelets apheresis donors and altruistic whole blood donors. These results may help blood centers, which carry granulocyte collection, not just to achieve much more objective information about these donors, but also to identify similar granulocyte donors´ profile within the general population. Blood banks may be able to achieve fidelity among these individuals and to promote safer blood donations. Granulocyte donors´ profile was evaluated in a case-control study. Cases were formed by granulocytes donors (n=64) and controls by platelet apheresis donors (n-64) and first time whole blood donors (n=68), in a ratio of one case per two controls. Granulocyte donors are mainly male and older than controls. Regarding the motivation to donate, granulocyte donors are not essentially different from platelets donors, but regarding first time whole blood donors, there are considerable differences, especially in respect to test seeking. Moreover, whole blood donors are almost twice more motivated to donate to take a day off at work, which shows a minor altruistic gesture. The determinant social profile among donors´ groups is also different. Granulocyte donors are effectively more social engaged people when compared to controls, and have a much more coherent and trustful community net, assenting about twice more than platelets donors, which have acquainted neighbors that would be ever ready to help other neighbors (OR=4.02). In conclusion, these findings indicate that is necessary to blood centers to use new recruitment strategies to increase donor´s retention. More effective communications procedures, besides internal recruitment, that achieves the target with more efficiency in locals where the probability to find donors more social engaged is increased, as clubs, community centers or associations must be warranted

Objetivos: Avaliar os resultados das coletas de células hematopoéticas CD34+, por aférese, em crianças portadoras de neuroblastoma tratadas no Serviço de Oncologia e Hematologia do Instituto da Criança do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo; estudar os fatores (idade, peso, estimulação com quimioterapia, dose do G-CSF, uso terapêutico de 131I-MIBG e tempo entre exposição à quimioterapia prévia) que influenciaram na mobilização e no rendimento da coleta de células CD34+ no sangue periférico e associar a quantidade de células CD34+ obtidas com a evolução clínica do paciente. Métodos: Trata-se de um estudo retrospectivo de pacientes com neuroblastoma submetidos à coleta de células-tronco hematopoéticas entre janeiro de1989 e junho 2012. Resultados: Avaliados 45 prontuários de crianças com idade mediana de 3,1 anos (0-12 anos), 26 (57%) apresentavam metástase em medula óssea ao diagnóstico. O tempo entre diagnóstico e o início da mobilização foi em média 19,7 ± 12 meses (mediana de 15,8 meses). Dos pacientes estudados, 11/45 (24,4%) receberam 131I-MIBG terapêutico antes da mobilização. Somente cinco pacientes (11,1%) receberam quimioterapia associada ao G-CSF para mobilização; as demais 40 crianças (88,9%) receberam exclusivamente G-CSF na dose média 26,5 ± 5,3 ug/kg/dia (mediana 28 ug/kg/dia). Não houve correlação entre o número máximo de células CD34+ no sangue periférico com a idade (p=0,9), com o peso (p=0,63), com a dose do G-CSF (p=0,46) ou com o intervalo entre o diagnóstico e o início da mobilização (p=0,09). A mediana da quantificação de células CD34+/uL no sangue periférico foi de 36,6 células, média de 45,2 ± 42,6 (mínimo 1,7 e máximo 236,3). Pacientes que haviam recebido 131I-MIBG previamente à mobilização apresentaram menor número de células CD34+/uL no sangue periférico (p=0,04). Em 26 pacientes (57,8%) foi possível coletar mais de 2,0x106 células CD34+/Kg na primeira coleta e em 19 pacientes (42,2%) foram necessárias mais de uma coleta, sendo que, oito pacientes (17,8%) apresentaram falha de mobilização. Os pacientes que apresentaram menor quantidade de células CD34+/uL no sangue periférico (<= 12) não conseguiram número maior ou igual a 2,0x106 células CD34+/Kg em 81,8% das coletas. O número mediano de células infundidas foi de 2,66 x106 células CD34+/Kg (média 3,38 ±1,6; mínimo 1,8; máximo 8,74 x106 CD34+/Kg). Os pacientes apresentaram contagem de leucócitos maior que 1000/mm3 e de plaquetas maior 50000/mm3 por dois dias consecutivos em média, no dia 13 ± 10 e no dia 46 ± 33, respectivamente, após infusão. Conclusões: A coleta de células-tronco hematopoéticas por aférese foi factível em todos os pacientes do estudo. Não houve influência significativa da idade, do peso, da dose do G-CSF e do tempo entre diagnóstico e inicio da mobilização, no número máximo de células. O uso prévio à coleta de 131I-MIBG terapêutico parece influenciar negativamente no pico de células CD34+ no sangue periférico (p=0,04). A contagem de células CD34+ no sangue periférico é importante fator preditivo do resultado das coletas de células progenitoras hematopoéticas CD34+ por aférese / Objectives: To evaluate the results of peripheral hematopoietic CD34+ stem cells harvesting in children with neuroblastoma treated at Serviço de Oncologia e Hematologia do Instituto da Criança do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo; regarding age, weight, stimulation with chemotherapy, G-CSF dose, time between diagnosis and the mobilization beginning and therapeutic 131I-MIBG use and the influence in mobilization and peripheral harvesting of autologous hematopoietic stem cells and to associate the amount of CD34+ cells obtained with the patient\'s clinical evolution. Methods: Between January 1989 and June 2012, children with neuroblastoma underwent to mobilization and peripheral hematopoietic stem cell harvesting and were retrospectively analyzed. Results: The charts of 45 children were reviewed. Median age was 3.1 years (0-12years), and 26 (57%) had metastases in bone marrow at diagnosis. Average time between diagnosis and mobilization was 19.7 ± 12 months (median, 15.8 months). 11/45 (24.4%) received therapeutic 131I-MIBG prior to mobilization. The average G-CSF dose was 26.5 ± 5.3mg/kg/day (mean 28mg/kg/day). There was no correlation between the absolute number of peripheral CD34+ cells and age (p=0.9), weight (p=0.63), G-CSF dose (p=0.46) or the range between diagnosis and early mobilization (p=0.09). The median quantification of CD34+ cells/uL in peripheral blood was 36.6, average 45.2 ±42.6 (minimum 1.7 and maximum 236.3 CD34+ cells/uL). Patients who had received therapeutic 131I-MIBG prior to mobilization, showed fewer absolute amount of CD34+/uL cells in peripheral blood (p=0.04). In 26 patients (57.8%) it was possible to harvest more than 2.0 x106 CD34+ cells/kg at first apheresis and in 19 patients (42.2%) more than one collection were necessary, and eight patients (17.8 %) failure to mobilize. Patients presenting less than 12 CD34+ cells/uL in peripheral blood on the harvesting day failed to reach more then 2.0x106 cells CD34+/kg in 81.8% of the apheresis procedures. It was infused a median number of 2.66 x106 CD34+ cells/kg (mean 1.6 ± 3.38; min 1.8; max 8.74 x106 CD34+ cells/kg). After the stem cells infusion, patients had white blood cells count greater than 1000/mm3 and platelet greater than 50,000/mm3 for two consecutive days on average after 13 ±10 and 46 ± 33 days, respectively. Conclusions: The hematopoietic stem cells harvesting was feasible in all patients included in this report. The G-CSF dose, age, weight and the period between harvesting and diagnosis showed no influence in mobilization and harvesting of autologous hematopoietic stem cells, however the absolute number of peripheral blood CD34+ cells/uL is an important predictive factor for the harvesting outcome. Additionally our findings support for the first time the notion that the use of therapeutic 131I-MIBG could have a negative impact in mobilization of peripheral blood stem cells in children with neuroblastoma

Objetivos: Avaliar os resultados das coletas de células hematopoéticas CD34+, por aférese, em crianças portadoras de neuroblastoma tratadas no Serviço de Oncologia e Hematologia do Instituto da Criança do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo; estudar os fatores (idade, peso, estimulação com quimioterapia, dose do G-CSF, uso terapêutico de 131I-MIBG e tempo entre exposição à quimioterapia prévia) que influenciaram na mobilização e no rendimento da coleta de células CD34+ no sangue periférico e associar a quantidade de células CD34+ obtidas com a evolução clínica do paciente. Métodos: Trata-se de um estudo retrospectivo de pacientes com neuroblastoma submetidos à coleta de células-tronco hematopoéticas entre janeiro de1989 e junho 2012. Resultados: Avaliados 45 prontuários de crianças com idade mediana de 3,1 anos (0-12 anos), 26 (57%) apresentavam metástase em medula óssea ao diagnóstico. O tempo entre diagnóstico e o início da mobilização foi em média 19,7 ± 12 meses (mediana de 15,8 meses). Dos pacientes estudados, 11/45 (24,4%) receberam 131I-MIBG terapêutico antes da mobilização. Somente cinco pacientes (11,1%) receberam quimioterapia associada ao G-CSF para mobilização; as demais 40 crianças (88,9%) receberam exclusivamente G-CSF na dose média 26,5 ± 5,3 ug/kg/dia (mediana 28 ug/kg/dia). Não houve correlação entre o número máximo de células CD34+ no sangue periférico com a idade (p=0,9), com o peso (p=0,63), com a dose do G-CSF (p=0,46) ou com o intervalo entre o diagnóstico e o início da mobilização (p=0,09). A mediana da quantificação de células CD34+/uL no sangue periférico foi de 36,6 células, média de 45,2 ± 42,6 (mínimo 1,7 e máximo 236,3). Pacientes que haviam recebido 131I-MIBG previamente à mobilização apresentaram menor número de células CD34+/uL no sangue periférico (p=0,04). Em 26 pacientes (57,8%) foi possível coletar mais de 2,0x106 células CD34+/Kg na primeira coleta e em 19 pacientes (42,2%) foram necessárias mais de uma coleta, sendo que, oito pacientes (17,8%) apresentaram falha de mobilização. Os pacientes que apresentaram menor quantidade de células CD34+/uL no sangue periférico (<= 12) não conseguiram número maior ou igual a 2,0x106 células CD34+/Kg em 81,8% das coletas. O número mediano de células infundidas foi de 2,66 x106 células CD34+/Kg (média 3,38 ±1,6; mínimo 1,8; máximo 8,74 x106 CD34+/Kg). Os pacientes apresentaram contagem de leucócitos maior que 1000/mm3 e de plaquetas maior 50000/mm3 por dois dias consecutivos em média, no dia 13 ± 10 e no dia 46 ± 33, respectivamente, após infusão. Conclusões: A coleta de células-tronco hematopoéticas por aférese foi factível em todos os pacientes do estudo. Não houve influência significativa da idade, do peso, da dose do G-CSF e do tempo entre diagnóstico e inicio da mobilização, no número máximo de células. O uso prévio à coleta de 131I-MIBG terapêutico parece influenciar negativamente no pico de células CD34+ no sangue periférico (p=0,04). A contagem de células CD34+ no sangue periférico é importante fator preditivo do resultado das coletas de células progenitoras hematopoéticas CD34+ por aférese / Objectives: To evaluate the results of peripheral hematopoietic CD34+ stem cells harvesting in children with neuroblastoma treated at Serviço de Oncologia e Hematologia do Instituto da Criança do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo; regarding age, weight, stimulation with chemotherapy, G-CSF dose, time between diagnosis and the mobilization beginning and therapeutic 131I-MIBG use and the influence in mobilization and peripheral harvesting of autologous hematopoietic stem cells and to associate the amount of CD34+ cells obtained with the patient\'s clinical evolution. Methods: Between January 1989 and June 2012, children with neuroblastoma underwent to mobilization and peripheral hematopoietic stem cell harvesting and were retrospectively analyzed. Results: The charts of 45 children were reviewed. Median age was 3.1 years (0-12years), and 26 (57%) had metastases in bone marrow at diagnosis. Average time between diagnosis and mobilization was 19.7 ± 12 months (median, 15.8 months). 11/45 (24.4%) received therapeutic 131I-MIBG prior to mobilization. The average G-CSF dose was 26.5 ± 5.3mg/kg/day (mean 28mg/kg/day). There was no correlation between the absolute number of peripheral CD34+ cells and age (p=0.9), weight (p=0.63), G-CSF dose (p=0.46) or the range between diagnosis and early mobilization (p=0.09). The median quantification of CD34+ cells/uL in peripheral blood was 36.6, average 45.2 ±42.6 (minimum 1.7 and maximum 236.3 CD34+ cells/uL). Patients who had received therapeutic 131I-MIBG prior to mobilization, showed fewer absolute amount of CD34+/uL cells in peripheral blood (p=0.04). In 26 patients (57.8%) it was possible to harvest more than 2.0 x106 CD34+ cells/kg at first apheresis and in 19 patients (42.2%) more than one collection were necessary, and eight patients (17.8 %) failure to mobilize. Patients presenting less than 12 CD34+ cells/uL in peripheral blood on the harvesting day failed to reach more then 2.0x106 cells CD34+/kg in 81.8% of the apheresis procedures. It was infused a median number of 2.66 x106 CD34+ cells/kg (mean 1.6 ± 3.38; min 1.8; max 8.74 x106 CD34+ cells/kg). After the stem cells infusion, patients had white blood cells count greater than 1000/mm3 and platelet greater than 50,000/mm3 for two consecutive days on average after 13 ±10 and 46 ± 33 days, respectively. Conclusions: The hematopoietic stem cells harvesting was feasible in all patients included in this report. The G-CSF dose, age, weight and the period between harvesting and diagnosis showed no influence in mobilization and harvesting of autologous hematopoietic stem cells, however the absolute number of peripheral blood CD34+ cells/uL is an important predictive factor for the harvesting outcome. Additionally our findings support for the first time the notion that the use of therapeutic 131I-MIBG could have a negative impact in mobilization of peripheral blood stem cells in children with neuroblastoma

O concentrado de granulócitos é um importante componente para o tratamento de pacientes oncológicos. A doação deste componente é mais complexa do que outras doações de sangue ou hemocomponentes, porque necessita de maiores esforços e assumção de riscos por parte do doador e, também, o uso de equipamento automatizado de aférese. O presente estudo tem o objetivo de aumentar o conhecimento sobre a população de doadores de granulócitos e avaliar a diferença entre suas motivações para realizarem as doações e seu capital social geral comparando com doadores de plaquetas e doadores altruistas de sangue total. Com esses resultados os hemocentros que realizam a coleta de granulócitos não só poderão ter informações mais objetivas que tornem mais eficaz o recrutamento deste tipo de doador e, consequentemente, aumentar a disponibilidade deste componente como também, identificando um perfil semelhante dos doadores de granulócitos na população geral de doadores o banco de sangue poderá fidelizar estes indivíduos e promover doações de sangue mais seguras. O perfil dos doadores de granulócitos foi avaliado a partir de um estudo caso-controle, sendo o grupo casos formado por estes doadores (n=64) e, os controles por doadores de plaquetas (n-64) e de sangue total (n=68), na razão de um caso para dois controles. Doadores de granulócitos são principalmente do sexo masculino e com idade mais avançada do que os controles. Com referência às motivações para doarem, doadores de granulócitos não se diferem substancialmente dos doadores de plaquetas, mas em relação aos doadores de primeira vez de sangue total há diferenças consideráveis principalmente no que diz respeito ao interesse nos resultados dos testes sorológicos. Doadores de sangue total são quase duas vezes mais motivados a doarem pelo recebimento dos resultados comparados aos doadores de granulócitos, bem como também se motivam mais a doarem para tirar o dia de folga do trabalho o que indica um gesto de menor altruísmo destes daodores. O perfil sócio determinante entre os grupos de doadores também se difere, doadores de granulócitos são pessoas efetivamente mais engajadas socialmente comparados aos controles e têm de uma rede comunitária mais coesa e confiável, concordando cerca de duas vezes mais do que doadores de plaquetas que têm vizinhos conhecidos que os ajudaria financeiramente (OR=2,49) ou concordando quatro vezes mais que doadores de sangue total que têm vizinhos conhecidos que estariam sempre prontos a ajudar outros vizinhos (OR=4,02). Concluimos que os resultados indicam que há a necessidade dos bancos de sangue utilizarem novas estratégias de recrutamento para aumentar a conversão de doadores, passando a utilizar, além do recrutamento interno, comunicações mais efetivas que, consigam atingir a população foco com maior eficiência, em locais onde a probabilidade de encontrar doadores mais engajados socialmente é aumentada, como clubes, centros comunitários ou associações / The concentrate of granulocytes is an important component for oncologic patient\'s treatment. Donation of this component is more complex than other blood components donations, because it claims more efforts and risks assumptions by the donor, and also the use of automated apheresis equipment. The present study is aimed to increase knowledge about the granulocyte donors´ population and evaluate differences among their motivations to accomplish donations and their general social capital, comparing with platelets apheresis donors and altruistic whole blood donors. These results may help blood centers, which carry granulocyte collection, not just to achieve much more objective information about these donors, but also to identify similar granulocyte donors´ profile within the general population. Blood banks may be able to achieve fidelity among these individuals and to promote safer blood donations. Granulocyte donors´ profile was evaluated in a case-control study. Cases were formed by granulocytes donors (n=64) and controls by platelet apheresis donors (n-64) and first time whole blood donors (n=68), in a ratio of one case per two controls. Granulocyte donors are mainly male and older than controls. Regarding the motivation to donate, granulocyte donors are not essentially different from platelets donors, but regarding first time whole blood donors, there are considerable differences, especially in respect to test seeking. Moreover, whole blood donors are almost twice more motivated to donate to take a day off at work, which shows a minor altruistic gesture. The determinant social profile among donors´ groups is also different. Granulocyte donors are effectively more social engaged people when compared to controls, and have a much more coherent and trustful community net, assenting about twice more than platelets donors, which have acquainted neighbors that would be ever ready to help other neighbors (OR=4.02). In conclusion, these findings indicate that is necessary to blood centers to use new recruitment strategies to increase donor´s retention. More effective communications procedures, besides internal recruitment, that achieves the target with more efficiency in locals where the probability to find donors more social engaged is increased, as clubs, community centers or associations must be warranted

Orientador: Alexandre Leite Rodrigues de Oliveira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-21T17:19:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Simoes_GustavoFerreira_D.pdf: 65115196 bytes, checksum: 18f51cababf3e248cceb806b8faef631 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Atualmente, muito se sabe sobre o acometimento muscular na DMD, mas poucos estudos estão voltados para os efeitos no Sistema Nervoso Central (SNC), mais especificamente no microambiente do motoneurônio medular. Sabe-se que durante a evolução da doença, o terminal axonal, na junção neuromuscular, entra em um ciclo de denervação (retração) e reinervação (brotamento). A possibilidade de modulação do MHC I se apresenta como uma nova estratégia de influenciar positivamente o processo de plasticidade sináptica após lesões do Sistema Nervoso Periférico (SNP) e SNC. Tal modulação pode ser realizada através da utilização ou desenvolvimento de drogas específicas. O fator estimulador de colônias glanulocitárias (G-CSF) é uma glicoproteína que foi descrita há mais de vinte anos, possui aprovação do ANVISA (Agência Nacional de Vigilância Sanitária) e é comumente utilizada para tratar neutropenia, ou para transplantes de medula óssea. O GCSF possui um efeito neuroprotetor aparentemente multimodal, incluindo-se a atividade anti-apoptóptica em neurônios, regeneração da vascularização, efeito antiinflamatório e estimulação de neurogênese endógena, sendo capaz de atuar efetivamente no processo de regeneração do sistema nervoso. No presente trabalho, foram utilizados camundongos MDX. Os camundongos foram distribuídos em 4 grupos (axotomia + G-CSF; Axotomia; Controle + G-CSF e Controle), com n=10. Incluiu-se para imunoistoquímica o grupo placebo, onde os animais receberam uma dose diária de 200?m, via subcutânea, de glicose a 25%. Nossos resultados indicam que redução de sinapses nos motoneurônios alfamedulares e aumento da astrogliose circunjacente aos neurônios alfa-medulares, seja decorrente da desconexão parcial entre o orgão alvo e o corpo neuronal durante o período de ciclos de degeneração/regeneração muscular que ocorrem a partir das primeiras semanas de vida nos camundongos MDX. Estes ciclos podem repercutir retrogradamente nos corpos celulares dos motoneurônios alfa-medulares, provocando uma série de alterações denominadas cromatólise. A axotomia do nervo isquiático resulta num aumento significativo da expressão de MHC I nas duas linhagens estudadas. Contudo, nos animais MDX, este aumento é menor, comparativamente à linhagem C57BL/10. Quando tratados com G-CSF a expressão de MCH I ficou maior em relação aos grupos não tratados e, isso pode indicar um papel ativo da droga no potencial regenerativo após a lesão. Também podemos sugerir que, apesar dos animais MDX apresentarem uma menor função motora em relação aos animais controle, os resultados indicam que o tratamento com G-CSF é capaz de reduzir os efeitos inflamatórios e atuar positivamente no processo de regeneração nervosa periférica após esmagamento do nervo isquiático / Abstract: Currently, much is known about the muscular involvement in DMD, but few studies have focused on the effects on the central nervous system (CNS), specifically in the microenvironment of spinal motor neurons. It is known that during the course of the disease, the axon terminal at the neuromuscular junction, enters a cycle of denervation (retraction) and reinnervation (sprouting). The possibility of modulation of MHC I presents itself as a new strategy to positively influence the process of synaptic plasticity after injury Peripheral Nervous System (PNS) and CNS. Such modulation may be accomplished through the use or development of special drugs. The granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) is a glycoprotein which was first described more than twenty years, has approval from ANVISA (Agência Nacional de Vigilância Sanitária) and is commonly used to treat neutropenia, or bone marrow transplants. The G-CSF has a multimodal neuroprotective effect l, including the anti-apoptotic activity in neurons, regeneration of vascularization, anti-inflammatory effect and stimulation of endogenous neurogenesis, being able to act effectively in the process of regeneration of the nervous system. In this study, we used MDX mice. The mice were divided into 4 groups (axotomy + G-CSF; axotomy, Control + G-CSF and Control), with n = 10. Included immunohistochemistry to the placebo group, where the animals received a daily dose of 200?m, subcutaneously, glucose 25%. Our results indicate that reduction of synapses in the alpha motoneurosn and increased astrogliosis , either due to partial disconnection between the target organ and the neuronal body during the cycles of degeneration /regeneration muscle that occur from first weeks of life in MDX mice. These cycles can pass retrogradely in alpha motoneurons cell bodies, causing a series of changes called chromatolysis. The sciatic nerve axotomy results in a significant increase of MHC I expression in both strains studied. However, in MDX strain, this increase is smaller, compared to C57BL/10. After treatment with G-CSF the expression of MCH I got bigger compared to untreated groups, and this may indicate an active role in the regenerative potential of the drug after injury. Also we suggest that while the animals present MDX a smaller motor function compared to control animals, the results indicate that treatment with G-CSF is capable of reducing the inflammatory effects and act positively on peripheral nerve regeneration process after nerve crush sciatic. Also our results indicate that treatment with G-CSF is able to reduce the inflammatory effects and act positively on peripheral nerve regeneration process after nerve crush sciatic / Doutorado / Anatomia / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador : Alexandre Leite Rodrigues de Oliveira / Tese (Doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-22T00:27:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Freria_CamilaMarques_D.pdf: 9799936 bytes, checksum: 9a9057c6ab5ca87ea1bc6767c4f71490 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Lesões nervosas periféricas e centrais levam à inflamação local e retrógrada, resultando em alterações axonais, perdas neuronais e sinápticas significativas. Juntamente a tais alterações, as células gliais tornam-se reativas, influenciando na remodelação do SNC após lesão. Os mecanismos que desencadeiam tais mudanças não são completamente compreendidos, mas é evidente que as moléculas classicamente relacionadas com o sistema imune estão envolvidas em tais eventos diretamente ou através da modulação da reatividade glial. Assim, nossa hipótese é que o controle da sinalização inflamatória após a lesão central ou periférica possa afetar indiretamente nos mecanismos endógenos de reparação no SNC, resultando em maior preservação das conexões neurais e melhor recuperação funcional. Para isso, realizamos lesões periféricas e centrais expondo os animais a diferentes microambientes de lesão a fim de investigar o papel das células gliais na sobrevivência, capacidade regenerativa axonal e estabilidade sináptica de motoneurônios medulares. Os resultados mostraram que, após lesão, a modulação da sinalização inflamatória através da administração de citocinas ou deleção de moléculas expressas na superfície das células gliais podem influenciar direta ou indiretamente na estabilidade dos circuitos neuronais, na regeneração axonal e sobrevivência neuronal. Desse modo, conclui-se que o controle da inflamação e da reatividade glial são, provavelmente, críticos para a plasticidade no Sistema Nervoso viabilizando, assim, novas estratégicas de tratamentos / Abstract: Central or peripheral lesions result in local and retrograde inflammation, leading to axonal degeneration, synaptic and/or neuronal loss. Additionally, after injury, reactive glial cells are recruited to the lesion site, influencing the plasticity of the nervous system. The mechanisms which trigger such changes are not completely understood, but evidences have shown that molecules classically related to the immune system are involved in such events directly or indirectly by glial modulation. Based on this, our hypotheses is that the control of inflammatory signaling after central or peripheral injury may indirectly affect the endogenous repair mechanisms, resulting in a greater synaptic preservation and better functional recovery. In this sense, animals were submitted to both central and peripheral lesions in order to investigate the effects of glial cells on neuron survival, axonal regeneration and synaptic plasticity. The results showed that, after lesion, the modulation of inflammatory signaling by cytokines or knocking down molecules on glial surface, directly or indirectly influence the stability of neural circuits, neuronal survival and axonal regeneration. Thus, we believe that this is important findings that may be critical to the development of new therapeutic strategies following nervous system injury / Doutorado / Clinica Medica / Doutora em Ciências