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Nanopartículas de ácido hialurônico produzidas por nanoprecipitação e reticulação química = processos e caracterização / Hyaluronic acid nanoparticles produced by nanoprecipitation and chemical crosslinking : processes and characterizationBicudo, Rafaela Costa Souza 17 August 2018 (has links)
Orientador: Maria Helena Andrade Santana / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química / Made available in DSpace on 2018-08-17T20:18:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2011 / Resumo: O ácido hialurônico (AH) é um mucopolissacarídeo natural, hidrofílico, composto de unidades alternadas de N-acetil-D-glicosamina e ácido D-glucurônico, unidas por ligações ?- 1,3 e ?-1,4. Ele possui diversas aplicações médicas, farmacêuticas e cosméticas, nas quais ele é usado na sua forma nativa ou reticulado, formando hidrogéis de alta viscosidade ou nanopartículas para encapsulação e/ou liberação modificada de bioativos. A produção de partículas de AH é geralmente feita por emulsificação água/óleo, envolvendo tensoativos e reticulação química. Todavia, as partículas produzidas possuem alta polidispersidade e necessitam da posterior remoção do óleo. Portanto, processos livres de óleo e de tensoativos são vantajosos, embora ainda pouco estudados. Neste trabalho, nanopartículas de AH foram produzidas por nanoprecipitação e reticulação química com dihidrazida adípica (ADH) e cloridrato de carbodiimida (EDCl), em processos descontínuo e contínuo, na ausência de óleo e tensoativos. O processo descontínuo foi conduzido em tanque agitado, em escoamento turbulento no seio da solução. Já o processo contínuo foi realizado em um sistema de microcanais de fluxo cruzado, no qual uma solução aquosa de AH, com ADH e EDCl, fluiu no canal principal e a solução orgânica nos dois canais laterais, simultaneamente. Nesse caso, a nanoprecipitação ocorreu em escoamento laminar no interior do microcanal principal, na interface formada entre o solvente orgânico e a água. Em ambos os casos foi estudada a influência dos solventes etanol, álcool isopropílico e acetona nos processos e nas propriedades finais das partículas. Nanopartículas estáveis de AH foram produzidas com os três solventes orgânicos utilizados e em ambos os processos. Todavia, no processo descontínuo, o tamanho das partículas dependeu da tensão superficial do sistema, enquanto no contínuo o tamanho foi dependente da afinidade água-solvente orgânico. Além disso, no processo descontínuo, foi demonstrado que a quantidade usada de solvente orgânico e a ordem e o momento de sua adição influenciam no tamanho final das nanopartículas, que a adição de ADH e EDCl no início do processo não modificou o tamanho das partículas e que o pH influencia na formação dos núcleos de precipitação e na velocidade da reação de reticulação. Já no processo contínuo, além de se analisar a influência do tipo de solvente orgânico, analisou-se a vazão da solução orgânica e a concentração de AH. Ambos os processos são simples, reprodutíveis e produzem, em uma única etapa, nanopartículas de AH livres de óleo e de tensoativos, ampliando suas aplicações médicas, farmacêuticas e cosméticas / Abstract: Hyaluronic acid (HA) is a natural, hydrophilic mucopolisaccharide composed of alternating units of D-glucuronic acid and N-acetylglucosamine joined by ?-1,3 and ?-1,4 linkages. It has several medical, pharmaceutical and cosmetics applications, in which it is used in its native form or reticulated, forming hydrogels of high viscosity or nanoparticles for encapsulation and controlled delivery of bioactives. The production of HA nanoparticles is usually made by emulsification water/oil, involving surfactants and crosslinking reaction. However, the particles produced have high polydispersity and require the subsequent oil removal. Therefore, processes free of oil and surfactants are advantageous, although still poorly studied. In this study, HA nanoparticles were produced by nanoprecipitation and chemical crosslinking with adipic dihydrazide (ADH) and chloride carbodiimide (EDCl), in discontinuous and continuous processes, in the absence of oil and surfactants. The discontinuous process was conducted in a stirred tank, in a turbulent flow within the solution. The continuous process was conducted in a cross-flow microchannel, in which a HA aqueous solution with ADH and EDCl flowed into the main channel and the organic solution flowed simultaneously in the two side channels. Nanoprecipitation occurred in laminar flow inside the microchannels, formed at the interface between the organic solvent and water. In both cases it was studied the influence of the solvents ethanol, isopropyl alcohol and acetone on the processes and on the final properties of the particles. Stable HA nanoparticles were produced with the three organic solvents used and in both processes. However, in the discontinuous process, the particle size depended on the surface tension of the system, while in the continuous process it was dependent on the affinity water-organic solvent. Besides, in the discontinuous process, it was demonstrated that the quantity of organic solvent used and the order and time of addition influenced on HA nanoparticles final size, that the addition of ADH and EDCl at the beginning of the process did not modify the final particles size, and that the pH influenced on coil globules formation and on the velocity of the crosslinking reaction. In the continuous process, besides analyzing the influence of the organic solvent used, it was analyzed the influence of the organic solvent flow and of HA concentration. Both processes are simple, reproducible and produce, in a single step, HA nanoparticles free of oil and surfactants, extending their medical, pharmaceutical and cosmetic applications / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química
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Avaliação de nova técnica não cirúrgica para tratamento de deficiência de papila em área estética: estudo clínico randomizado controlado / New evaluation technique non-surgical for papilla deficiency treatment in cosmetic area: randomized controlled trialMônica Garcia Ribeiro 08 April 2016 (has links)
A ausência ou perda da papila interdental cria deficiência estética, problemas fonéticos, impactação alimentar e gera muita expectativa ao paciente. Até o momento, o tratamento da ausência ou perda da papila interdental tem sido mal sucedido e não há estudos que indiquem que a regeneração da papila é um resultado previsível. O objetivo deste estudo foi avaliar a efetividade da injeção de gel de ácido hialurônico de origem não animal na redução ou eliminação da deficiência de papila entre dentes naturais comparativamente ao tratamento por meio de enxerto de tecido conjuntivo subepitelial. Foram avaliados neste estudo 20 sítios de 6 pacientes de ambos os sexos, com idade variável de 29 a 62 anos, apresentando deficiência de papila entre dentes naturais, na região anterior superior, em pelo menos dois dentes. Os 20 sítios tratados foram aleatoriamente divididos em dois grupos, de acordo com o tratamento para correção da deficiência de papila por meio de enxerto de tecido conjuntivo subepitelial (grupo controle) ou por meio de injeção de gel de ácido hialurônico (grupo teste). Um examinador único, calibrado, avaliou a distância da ponta da papila ao ponto de contato com auxílio de sonda periodontal milimetrada antes e aos 1, 3 e 6 meses após o tratamento. Além disso, foram investigados, nos sítios tratados, as medidas de profundidade de sondagem, nível de inserção, índice de sangramento do sulco, índice de placa, distância do ponto de contato à crista óssea alveolar, distância da ponta da papila à crista óssea alveolar e largura da papila. Os resultados demonstraram que aos 6 meses de pósoperatório o percentual de mudança na altura da papila foi maior no grupo teste (14,94% ± 21,35%) do que no grupo controle (-1,39% ± 31,46%), entretanto sem diferenças significantes entre os grupos (p> 0.05). Não houve variação estatisticamente significante na largura da papila antes e aos 4 meses após o tratamento nos grupos teste (p= 0.09) e controle (p= 0.16), assim como não houve variação significativa na distância entre a ponta da papila e a crista óssea alveolar. Houve melhora significativa do Índice de Estética Rosa (IER) observado aos 6 meses de acompanhamento em comparação com a condição inicial no grupo teste (p= 0.0078; Wilcoxon), enquanto que não houve mudança significativa no IER observado no grupo controle aos 6 meses de acompanhamento (p= 0.35). Os resultados obtidos permitiram concluir que o tratamento da deficiência de papila por meio de injeção de gel de ácido hialurônico promove melhora da deficiência de papila, similar aos resultados obtidos com o tratamento por meio de enxerto de tecido conjuntivo subepitelial, porém com melhora estética significativa relacionada especialmente às características de cor e textura do tecido relativamente aos tecidos moles adjacentes. / The absence or loss of interdental papilla creates an esthetic deficiency, phonetic problems and food impaction and generates a lot of expectation for the patient. Until now, the treatment for absence or loss of interdental papilla is unsuccessful e and there are no researches that show that the papilla regeneration is a predictable outcome. The aim of this study was to evaluate the effectivity of a non-animal originated hyaluronic acid injection in the reduction or elimination of papilla deficiency between natural teeth in comparison to a sub epithelial connective tissue graft treatment. The analysis was made on 20 sites in 6 patients, both genders, 29 - 62 years, showing deficiency in the papilla between natural teeth in the upper anterior region in at least two teeth. The 20 sites treated were randomly divided into two groups, according to the treatment by subepithelial connective tissue graft (control group) or by hyaluronic acid injection (test group). A single calibrated examiner evaluated the distance between the tip of the papilla to the contact point using a graduated periodontal probe before the treatment and 1, 3 and 6 months after it. Besides, it were investigated probing pocket depth, clinical attachment level, gingival bleeding index, plaque index, distance from papilla to alveolar crest, distance from contact point to alveolar crest and width of the papilla. The results showed that 6 months after the procedure, the percentage of change in the papilla level was higher in the test group (14,94% ± 21,35%) than in the control group (-1,39% ± 31,46%), though not statistically significant (p>0.05). There was no significant difference variation in the width of the papilla before and 4 months after the treatment in test group (p=0.09) and control group (p=0.16), and there was no significant difference variation in the distance between the tip of the papilla and the alveolar bone crest. There was significant improvement of the Pink Esthetic Score (PES) after 6 months in comparison to the initial condition in test group (p=0.0078; Wilcoxon), while there was no significant difference in the PES in control group 6 months after treatment (p=0.35). The results allow to conclude that the treatment for of the papilla deficiency using hyaluronic acid injection promotes improvement, similar to the results of the sub epithelial connective tissue graft treatment, but with significant esthetic improvement related specially to the color and texture characteristics of the adjacent soft tissues.
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Avaliação do metabolismo de glicosaminoglicanos em pacientes portadores de cistite intersticial / Evaluation of the metabolism of glycosaminoglycans in patients with interstitial cystitisMarcos Lucon 12 December 2012 (has links)
Introdução: a cistite intersticial é doença crônica do trato urinário inferior cujos sintomas são: aumento da freqüência urinária, nictúria, dor pélvica ou perineal que piora com a repleção vesical e melhora com a micção. A etiopatogenia não é totalmente conhecida, mas há indícios de que os glicosaminoglicanos e proteoglicanos que revestem o urotélio vesical possam participar da sua gênese. A perda destes componentes protetores facilitaria o contato de íons e solutos presentes na urina com as porções mais profundas do urotélio desencadeando e perpetuando um processo inflamatório local. Para tentar entender seu metabolismo, investigamos o comportamento dos glicosaminoglicanos na urina e no tecido (biópsia do urotélio vesical) de pacientes portadoras de cistite intersticial e de incontinência urinária de esforço genuína. Casuística e métodos: o perfil e expressão gênica de glicosaminoglicanos no tecido, e o perfil dos glicosaminoglicanos da urina de 11 pacientes com cistite intersticial foram comparados aos de 11 pacientes com incontinência urinária de esforço. A análise estatística foi feita através de teste T e Anova, considerando significativos valores p<0,05. Resultados: verificamos que pacientes com cistite intersticial excretam menor concentração de glicosaminoglicanos na urina do que as portadoras de incontinência urinária de esforço (0,45 ± 0,11 x 0,62 ± 0,13 g/mg creatinina, p<0,05), porém sem redução do conteúdo de glicosaminoglicanos no urotélio. Na imunofluorescência o urotélio de pacientes com cistite intersticial mostrou maior marcação de TGF-beta, decorim (um proteoglicano de condroitim/dermatam sulfato), fibronectina e de ácido hialurônico. Foi identificada menor expressão gênica (PCR em tempo real) das sintases e uma hialuronidase do ácido hialurônico no urotélio das cistites intersticiais. Conclusão: a combinação desses resultados sugere que os glicosaminoglicanos podem estar relacionados ao processo contínuo de inflamação e remodelamento do urotélio disfuncional presente na cistite intersticial. O estudo da expressão gênica pode representar uma altenativa para o entendimento da doença. / Introduction: interstitial cystitis is a chronic disease of the lower urinary tract whose symptoms are: increased urinary frequency, nocturia, perineal or pelvic pain that worses with bladder filling and improves with urination. The pathogenesis is not fully known, but there is evidence that proteoglycans and glycosaminoglycans lining the bladder urothelium can participate in its genesis. The loss of these protective compounds facilitate the contact of ions and solutes in the urine with deeper portions of bladder wall triggering and perpetuating a local inflammatory process. We investigated GAG behavior in urine and tissue (biopsy of bladder urothelium) of patients with IC/PBS and genuine stress urinary incontinence (SUI) in an attempt to better understand its metabolism. Patients and Methods: gene expression and glycosaminoglycans profile in tissue, and glycosaminoglycans profile in urine of 11 patients with interstitial cystitis were compared to 11 patients with pure urinary stress incontinence. Statistical analysis were performed using t Student test and Anova, considering significant when p<0,05. Results: patients with interstitial cystitis excreted lower concentration of glycosaminoglycans in urine when compared to those with pure urinary stress incontinence (respectively 0.45 + 0.11 x 0.62 + 0.13 mg/mg creatinine, p< 0.05). However, there was no reduction of the content of glycosaminoglycans in the urothelium of both patients. The immunofluorescence study showed that patients with interstitial cystitis had a stronger staining of TGF-beta, decorin (a proteoglycan of chondroitin/dermatan sulfate), fibronectin and hyaluronic acid. We were able to indentify by real-time PCR lower gene expression of hyaluronic acid synthases and hyaluronidase in the urothelium of patients with interstitial cystitis. Conclusion: the results suggest that glycosaminoglycans may be related to the ongoing process of inflammation and remodeling of the dysfunctional urothelium that is present in the interstitial cystitis. The study of the gene expression may represent an alternative to understand the disease
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Efeitos do tratamento ácido no inóculo sobre a produção e massa molar do ácido hialurônico / Effects of the acid stress in the inoculum on the production and molecular weight of hyaluronic acidVieira, Marina 19 August 2018 (has links)
Orientador: Maria Helena Andrade Santana / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química / Made available in DSpace on 2018-08-19T18:19:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2011 / Resumo: O ácido hialurônico (AH) é um polissacarídeo composto de 2000-25000 unidades dissacarídicas de ácido glucurônico e N-acetilglicosamina formado por ligações ?-1,3 e ?-1,4 alternadamente. Devido suas propriedades físico-químicas como: poder lubrificante, ser hidrofílico e biocompatível, o AH tem sido amplamente aplicado na área médica. Muitos estudos comprovam que a produção de AH por processo fermentativo microbiano possibilita sua otimização por meio do conhecimento dos requerimentos nutricionais das células e controle das condições de cultivo como pH e temperatura. O pH ótimo de crescimento bacteriano e de produção do AH é 7,0, embora pHs fora da neutralidade (quando se é aplicado um tratamento ácido) induzam mudanças metabólicas com reflexos na produção de AH. Os efeitos do pH ainda são pouco reportados na literatura, principalmente quanto ao tratamento na região ácida. Neste trabalho, em sua primeira etapa, estudou-se os efeitos do tratamento do inóculo em pHs 4,5, 5,0 e 5,5 e com tempos de 15, 30 e 60 minutos. Foi utilizado um ácido orgânico (acético) e um inorgânico (clorídrico). As fermentações foram conduzidas sem aeração forçada, em frascos, com pH 7,0. A melhor produção do AH (0,74 g/L) foi obtida com o tratamento utilizando ácido clorídrico, comparado ao tratamento com ácido acético (0,49 g/L), e com o inóculo sem tratamento ácido (0,31 g/L), usado como controle. Na segunda etapa deste trabalho foi estudado o efeito do tratamento ácido no inóculo utilizando reator de tanque agitado com aeração forçada, nas melhores condições determinadas na primeira etapa, onde foi observada uma maior produção de AH (2,5 g/L) quando utilizadas as condições: tratamento ácido no inoculo, pH 7,0 e 2vvm de aeração durante a fermentação. Na terceira etapa do trabalho foi realizado um estudo utilizando cardiolipina no meio de cultivo (in vivo), sendo observado que a cardiolipina desempenha um papel importante quando se quer alcançar uma alta massa molar para o AH / Abstract: Hyaluronic acid (HA) is a polysaccharide composed of 2000-25000 disaccaridic units of glucuronic acid and N-acetylglucosamine ?-bonds formed by 1-3 and 1-4 ?-turn. Due its physicochemical properties such as lubricity, hydrophilic and biocompatible, HA has been widely applied in the medical field. Many Studies show that production of HA by fermentation microbial allows optimization through cells nutritional requirements knowledge and control conditions cultivation as pH and temperature. The optimum pH for growth and production HA is 7.0, while the pH was neutral ("stress") which induces metabolic changes with repercussions on the production of HA. The effects of pH are poorly reported in the literature, especially regarding acid treatment in the region. In this paper, in first stage, were studied the effects of treatment in the inoculum pH 4.5, 5.0 and 5.5 and with times of 15, 30 and 60 minutes. We used the organic acid (Acetic) and inorganic (hydrochloric acid). The fermentations were conducted without forced aeration in flasks with pH 7.0. The best production of the AH (0.74 g / L) was obtained with treatment using hydrochloric acid, compared to treatment with acetic acid (0.49 g / L), and the inoculum untreated acid (0.31 g / L), used as control. In the second stage was studied the effect of the acid stress in the inoculum using stirred tank reactor with forced aeration in the best conditions determined in the first stage. It was observed an increased production of AH (2.5 g / L) when were used the conditions: the acid shock inoculum, pH 7.0 and 2vvm aeration during fermentation. And the third stage of the work was carried out in a study using cardiolipin added in the culture medium (in vivo). It was observed that cardiolipin plays an important role when we want to achieve a high molecular weight for AH / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química
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Estudo da produção de ácidohialurônico por cultivo de "Streptococus zooepidemicus" em espuma de poliuretano = Study of the production of hyaluronic acid by "Streptococcus zooepidemicus" cultivation in polyurethane foam / Study of the production of hyaluronic acid by "Streptococcus zooepidemicus" cultivation in polyurethane foamFerrari, Felipe Augusto 21 August 2018 (has links)
Orientadores: Maria Helena Andrade Santana, Reinaldo Gaspar Bastos / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química / Made available in DSpace on 2018-08-21T21:01:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2012 / Resumo: Neste trabalho estudou-se a produção de ácido hialurônico por cultivo em estado sólido de Streptococcus zooepidemicus em colunas de leito fixo utilizando espuma de poliuretano (EPU) como suporte inerte. Em um primeiro momento, ensaios preliminares foram desenvolvidos visando um melhor conhecimento do sistema. Constatou-se que este não apresentava robustez suficiente para a otimização e escalonamento do processo. Tendo em vista tais aspectos, foi desenvolvido um novo sistema de leito fixo, o CAS-SSF (central aeration system to solid state cultivation), que direciona o fluxo de ar diretamente no interior do leito, aumentando a eficiência na distribuição de oxigênio. Um delineamento composto central rotacional (DCCR) foi desenvolvido para a concentração inicial de glicose (CIG) e aeração (Aer) objetivando a otimização para essas duas variáveis. Entretanto não foi possível estabelecer um modelo estatístico que se ajustasse satisfatoriamente aos dados experimentais, impossibilitando a análise da superfície de resposta para as variáveis em questão. Contudo, avaliando-se a CIG, pode-se observar que, dentre as condições estudadas, a concentração inicial de 15g.L-1 apresentou maior rendimento de AH por massa de substrato, sendo este de 0,24 g de AH por g de glicose consumida. Se avaliado o comportamento do sistema ao longo de 12 ensaios sequências, fazendo o reuso do suporte nos cultivos, pode-se observar que a EPU manteve constante as propriedades do leito quanto ao tamanho médio dos poros e área superficial. Os valores obtidos ao longo dos ensaios não apresentaram diferença significativa ao nível de 5%, obtendo-se uma produção média de 1,24 mg de AH por grama de EPU / Abstract: In this work we studied the production of hyaluronic acid by solid state cultivation of Streptococcus zooepidemicus in packed bed columns using polyurethane foam (PUF) as inert support. At first, preliminary experiment were conducted to better understanding of the system. It was verified that the system, initially employed did not have enough reliability of results for optimization and scheduling process. In view of these aspects were carried out modifications and developed a new system of packed bed, the CAS-SSC (Central Aeration System to Solid State Cultivation), to directly flow air into the bed, increasing the efficiency of oxygen distribution. A central composite rotational design (CCRD) was developed for the initial glucose concentration (IGC) and aeration (Aer) aiming the optimization for these two variables. However it was not possible to establish a statistical model that satisfactorily fits the experimental data, precluding the analysis of response surface for the variables in question. However, evaluating the IGC, among the conditions studied, the initial concentration of 15g.L-1 showed the highest AH yield per mass of substrate, 0.24 g of HA per g of glucose consumed. When we observe the system behavior over a sequence of 12 tests, reusing the support over the cultivations, the EPU kept constant the bed properties average pore size and surface area. The values obtained during the tests showed no significant difference at 5% level, giving an average production of 1.24 mg of HA per gram of EPU / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química
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Análise clínica e estrutural de processos de osteocondrite dissecante da articulação tíbio-társica de equinos / Clinical and structural analysis of osteochondritis dissecans in the tibiotarsal joints of horsesMachado, Thaís Sodré de Lima 15 April 2010 (has links)
A osteocondrite dissecante (OCD) é uma doença que surge nos equinos durante a fase de desenvolvimento sendo caracterizada pela presença de fragmento osteocondral intra-articular. Pouco se sabe sobre a condição da articulação doente em animais mais velhos, principalmente nos casos assintomáticos, que são operados muitas vezes com a finalidade de comercialização posterior ou para impedir a progressão da doença. A finalidade deste estudo, portanto, foi analisar as articulações tíbio-társicas de equinos com idade superior a um ano apresentando OCD na crista intermédia da tíbia, e comparar animais saudáveis (grupo controle) com animais acometidos de OCD nas formas sintomática e assintomática, empregando análise física; contagem de células totais, dosagem de proteína total, análise de glicosaminoglicanos (GAGs) e da proteína oligomérica da matriz cartilagínea (COMP) no líquido sinovial; análise dos GAGs urinários e análise histológica da membrana sinovial e fragmento osteocondral. Os eqüinos utilizados foram divididos em três grupos. No Grupo I foram utilizados eqüinos clinicamente sadios, livres de doença na articulação tíbiotársica. Os Grupos II e III foram constituídos por animais portadores de OCD nas formas sintomática e assintomática respectivamente, atendidos e operados no Serviço de Cirurgia de Grandes Animais do Hospital Veterinário FMVZ-USP. A presença de sinais clínicos esteve mais relacionada com a presença de múltiplos fragmentos do que com a de fragmento osteocondral único, independente de seu tamanho. O sinal clínico mais observado nos animais do Grupo III foi a efusão articular. As principais alterações encontradas no líquido sinovial foram: o aumento na concentração de condroitim sulfato (CS) no Grupo II (P<0,01) e no Grupo III (P<0,001) em relação ao Grupo I; o aumento na concentração de ácido hialurônico associado à diminuição da viscosidade nos animais do Grupo III; e a redução na presença de fragmentos de alto peso molecular associado ao aumento de fragmentos de baixo peso molecular de COMP nos animais dos Grupos II e III. A análise dos GAGs urinários evidenciou aumento na proporção de CS nos animais dos Grupos II e III em relação ao Grupo I. Na análise histológica dos fragmentos osteocondrais foram observadas alterações na integridade da cartilagem articular, associada a proliferação de condrócitos e a redução na presença de proteoglicanos tanto no Grupo II como no Grupo III. As amostras de membrana sinovial do Grupo I apresentaram presença discreta de vilos e sinoviócitos. No Grupo II houve aumento moderado nas vilosidades sinoviais, e na maior parte das amostras avaliadas no Grupo III, além da presença moderada a severa de vilosidades sinoviais, foi observada proliferação intensa de sinoviócitos. Os resultados obtidos no presente estudo demonstram que a OCD na articulação tíbio-társica de equinos com idade superior a um ano representa processo ativo, com degradação da MEC da cartilagem articular, independente da presença de sinais clínicos, e que o tratamento cirúrgico é indicado, mesmo em animais assintomáticos, buscando interromper o processo de degradação cartilagínea e prevenir o desenvolvimento de doença articular degenerativa, particularmente em equinos que irão iniciar treinamento atlético esportivo. / Osteochondritis dissecans (OCD) is an orthopedic disease that appears in foals during growth phase and is characterized by the presence (occurrence???) of an osteochondral fragment in the articular space. There are few studies in the literature concerning the follow up of the disease in adult horses, mainly those without clinical signs, which are submitted to surgical treatment to commercial proposes or to prevent the progression of the disease. The objective of the present study was to analyze tibiotarsal joints of horses older than one year with OCD in the intermediate ridge of distal tibia and compare healthy animals (control group) with OCD horses, either with or without clinical signs. Synovial fluid was analyzed to total cell count, total protein concentration, and cartilage oligomeric matrix protein (COMP) fragmentation. The synovial fluid and urine glycosaminoglycans (GAGs) were evaluated. The synovial membrane and osteochondral fragment were analyzed by istological assessment. Horses were divided in three groups: healthy horses without joint disease (Group I), horses with OCD without clinical sings (Group II) and horses with OCD and clinical signs (Group III). Horses of Groups II and III were admitted to the Large Animal Surgery Session of the Veterinary Hospital FMVZ USP. The presence of clinical signs was more related with multiple articular fragments than with one fragment, irrespective of the size. The most common clinical sign observed in Group III was joint effusion. The main changes in synovial fluid were: increase in chondroitin sulfate (CS) in Groups II (P<0,01) and III (P<0,001) when compared with Group I; increase in hyaluronic acid (HA) concentration associated with decrease in the viscosity in Group III; and the decrease of COMP fragments of higher molecular weight associated with increase of fragments of low molecular weight in Group II and III. The proportion of urinary CS was increased in Group II and III when compared with Group I. Alterations in the articular cartilage integrity associated with chondrocytes proliferation and loss of proteoglycan were observed in the histological analysis of the osteochondral fragments. In Group I the presence of synovial vilos and synoviocytes in the synovial membrane samples was discreet. In Group II samples there were a moderate increase in the presence of synovial vilos and synoviocytes. In almost samples analyzed in Group III the presence of synovial vilos was moderate to severe and synoviocytes proliferation was intense. Our results indicate that OCD in tibiotarsal joint of horses older than one year represents an active process, with degradation of the extra cellular matrix of the articular cartilage, regardless the presence of clinical signs, indicating surgical treatment, even in assymptomatic horses, avoiding the progression of cartilage degradation process and preventing the development of degenerative joint disease, mainly in horses that are going to begin athletic training.
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Identificação do perfil de expressão dos splicings alternativos dos genes das hialuronidases em adenocarcinoma de próstata / Study of genetic polymorphism in children: searching for susceptibility genes and haplotypesSá, Vanessa Karen de 02 October 2008 (has links)
Ácido Hialurônico (HA) é um componente da matriz extracelular, responsável pela hidratação e manutenção do equilíbrio osmótico tecidual. Concentrações de HA estão elevadas em vários tipos de cânceres, incluindo próstata. Hialuronidases (HAases), são uma família de enzimas relacionadas com a propagação de infecções bacterianas, toxinas de venenos e progressão tumoral. A quebra do HA em pequenos fragmentos (3-25 dissacarídeos) promovidos pela ação das HAases tipo Hyal1, Hyal2 e Hyal3, está relacionada à promoção do câncer através da indução da angiogênese e estímulo a proliferação através de ativação da via tirosina quinase. Algumas isoformas de HAases, descritas como produto de splicing alternativo, possuem atividade enzimática diversificada. A heterogeneidade de expressão das HAases foi identificada em alguns tipos de câncer e pode ser correlacionada com o comportamento diferenciado dos tumores. Para este trabalho estudamos amostras de 55 pacientes submetidos a prostatectomia radical por carcinoma de próstata (CP) . A média de idade foi 66 anos e o tempo médio de seguimento 73,7 meses. Os pacientes foram divididos em dois grupos para análise dos resultados: 1- Escore de Gleason (EG) >=7 (30) e EG <=6 (25). 2- Comportamento tumoral (recidiva-19, e não recidiva-36), considerando o nível sérico de Antígeno Específico da Próstata (PSA) 0,2 ng/mL. O grupo controle foi representado por 11 pacientes com hiperplasia prostática benigna, submetidos à ressecção retropúbica. As HYAL foram identificadas por PCR, com uso de primers específicos para as variantes 1, 2, 3, 4 e 5 e wt da HYAL1, wt da HYAL2, e wt e variantes 1, 2 e 3 da HYAL3. As HYAL mais freqüentemente expressas pelo CP foram HYAL2-wt (65,4%), HYAL1-v1 (63,3%) e HYAL3-wt (47,2%). Em tecidos prostáticos benignos, a HYAL3-v1 foi expressa em 90,9% dos casos, estando presente em 36% dos tumores com EG baixo, e não expressa em tumores com EG alto (p=<0,001). Nos tumores sem recidiva HYAL1-v3 foi expressa em 30,5% dos casos versus 5,2% em casos que recorreram (p=0,041). HYAL3 v2, foi expressa por 33,3% dos tumores que não recorreram e não expressa em tumores que recorreram (p=0,002). Concluímos que a expressão de HYAL1-v3, HYAL3-v1 e HYAL3-v2 está relacionada a tumores mais diferenciados e com menores taxas de recidiva, podendo ser utilizadas como marcadores na prática clínica identificando candidatos a terapias mais conservadoras. / Hyaluronic acid (HA) is a component of the extracellular matrix that hydrates and maintains the osmotic balance of tissues. HA concentration is elevated in several cancers including prostate. Hyaluronidases (HAases) are a family of enzymes related to the spread of bacterial infections, toxins of venoms and probably cancer progression. Small fragments of HA are generated by HAase Hyal1, Hyal2 and Hyal3, stimulating endothelial proliferation and activating mitogen-activated protein kinase pathway. Several isoforms of HAases have been described as a product of alternative splicing, and are responsible for differences in the enzyme activity. The heterogeneity of HAses expression has been identified in tumors and could be related to the differences in their biological behavior. Fifty-five patients submitted to radical prostatectomy for prostate cancer (PC) were the subject of this study. The mean age was 66 years old and the mean follow-up was 73,7 months. Patients were divided into two groups for the analyses: 1- High Gleason score (GE) >=7 (30) and low Gleason score <=6 (25). 2- Tumor behavior; recurrence - 19 and nonrecurrence - 36. Biochemical recurrence was considered when PSA was higher than 0.2 ng/mL. The control was represented by 11 patients submitted to retropubic prostate resection for benign prostatic hyperplasia. The alternative splicing forms of HYAL were identified by PCR, and the primer sequences identified variants 1, 2, 3, 4, 5 e wt of HYAL1, wt of HYAL2, wt and variants 1, 2 and 3 of HYAL3. The HYAL more frequently expressed by PC was HYAL2-wt (65.4%), HYAL1-v1 (63.3%) and HYAL3-wt (47.2%). In benign prostate tissue the main expressed HAase was HYAL3-v1 in 90.9%, being present in 36% of low Gleason score tumors and not expressed by tumors with high Gleason score (p=<0.001). For tumors that not recurred there was expression of HYAL1-v3 in 30.5% of the cases vs. 5.2% in cases that recurred (p=0.041). The same difference was noted regarding the expression of HYAL3-v2, that was expressed by 33.3% of tumors that not recurred and not expressed by tumors that recurred (p=0.002). We conclude that there is a profile of HAase related to low Gleason score and non-recurrent PC that is characterized by expression of HYAL1-v3, HYAL3-v1 and HYAL3-v2 that could be used in clinical practice to choose a better treatment.
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Concentração do ácido hialurônico e dos pequenos proteoglicanos ricos em leucina no endométrio de pacientes com síndrome dos ovários policísticos em comparação a de mulheres eumenorreicas / Concentration of hyaluronic acid and small leucine-rich proteoglycans in the endometrium of patients with polycystic ovary syndrome in comparison with eumenorrheic womenSimões, Ricardo dos Santos 29 October 2015 (has links)
INTRODUÇÃO: A matriz extracelular no endométrio fornece vasta gama de sinais envolvidos em diferentes processos celulares, tais como morte celular e proliferação. Neste sentido, os glicosaminoglicanos e os proteoglicanos, juntamente com os fatores de crescimento, modulam várias etapas da angiogênese, proliferação celular e remodelação do estroma, o que pode ser importante para o fluxo menstrual regular e a redução dos processos proliferativos. Além disso, são importantes para a adequada interação maternofetal. OBJETIVO: Avaliar a concentração de ácido hialurônico, das enzimas de biossíntese do ácido hialurônico - hialurônico sintases (HAS1, HAS2 e HAS3) e dos pequenos proteoglicanos ricos em leucina (decorim, biglicam, lumicam e fibromodulina) no endométrio de pacientes com síndrome dos ovários policísticos (SOP) e de mulheres eumenorreicas. MÉTODOS: Foram analisadas 20 amostras de endométrio, 10 provenientes de pacientes com SOP e 10 de mulheres com ciclos menstruais regulares na fase proliferativa do ciclo, com idade variando entre 20 e 35 anos, atendidas na Divisão de Clínica Ginecológica do Hospital das Clínicas da FMUSP (HC-FMUSP). A determinação do perfil e da concentração do ácido hialurônico foi efetuada por método bioquímico de ensaio fluorimétrico (ELISA-like). A sua localização no tecido endometrial, assim como as dosagens das enzimas sintases (HAS1, HAS2 e HAS3) e dos pequenos proteoglicanos ricos em leucina (decorim, biglicam, lumicam e fibromodulina e), foi feita por imunoistoquímica e \"western blotting\". Para a análise dos resultados foi utilizado o teste t de student (p<=0,05). Os cálculos foram realizados com auxílio do programa SPSS versão13 (SPSS, Chicago, IL). RESUTADOS: Houve maior concentração de ácido hialurônico no endométrio de mulheres eumenorreicas na fase proliferativa do ciclo menstrual do que no das com síndrome dos ovários policísticos. Com relação às sintases do ácido hialurônico, observou-se maior reatividade de HAS1 e HAS2 e menor reatividade de HAS3 no endométrio de mulheres com SOP em relação às mulheres com ciclos menstruais regulares na fase proliferativa. Quanto aos pequenos proteoglicanos ricos em leucina notou-se maior imunorreatividade de decorim e lumicam no endométrio de pacientes com SOP. CONCLUSÕES: As pacientes com SOP apresentam menor concentração de ácido hialurônico e maior reatividade ao decorim e lumicam em relação às mulheres com ciclos regulares na fase proliferativa. Esses dados sugerem que nas pacientes com SOP, o endométrio seria menos receptivo e teria mecanismos para evitar a proliferação excessiva / INTRODUCTION: Endometrium extracellular matrix provides wide range of signals at different cellular levels like cell death and proliferation. In this regard, glycosaminoglycans and proteoglycans, along with growth factors, modulate various stages of angiogenesis, cell proliferation and remodeling of the stroma, which can be important for regulating menses and reducing the proliferative processes. Additionally, it is important for proper fetal-maternal interactions. OBJECTIVE: Evaluate hyaluronic acid concentration, the enzymes of hyaluronic acid synthases (HAS1, HAS2 and HAS3) and small leucine-rich proteoglycans (decorin, lumican, fibromodulim and biglycan) in the endometrium of patients with polycystic ovary syndrome (PCOS) and eumenorrheic women. METHODS: A total of 20 endometrial samples from 10 patients with PCOS and 10 women with regular menstrual cycles in the proliferative phase, with ages ranging between 20 and 35 years, attended at Gynecology Division of Clinical Hospital of the FMUSP (HC-USP). Profile determination and the concentration of hyaluronic acid were performed by biochemical method of fluorimetric assay (ELISA-like). Its location in the endometrial tissue as well as the dosage of enzymes synthases (HAS1, HAS2 and HAS3) and small leucine-rich proteoglycans (decorin, lumican, fibromodulim and biglycan) was done by immunohistochemistry and western blotting. To analyze the results Student t test was used (p < 0.05). The calculations were performed with software SPSS version 13. RESULTS: A higher concentration of hyaluronic acid in eumenorrheic women endometrium in proliferative phase when compared with polycystic ovary syndrome. Regarding hyaluronic acid synthases, there was a higher HAS1 and HAS2 reactivity and lower HAS3 reactivity in the PCOS endometrium compared to women with regular menstrual cycles in the proliferative phase. Decorin and lumican showed higher immunoreactivity in PCOS endometrium. CONCLUSIONS: PCOS patients have a lower concentration of hyaluronic acid and greater reactivity to decorin and lumican than eumenorrheic women in proliferative phase. These data suggest that in patients with PCOS, the endometrium would be less receptive and have mechanisms to prevent excessive proliferation
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Concentração do ácido hialurônico e dos pequenos proteoglicanos ricos em leucina no endométrio de pacientes com síndrome dos ovários policísticos em comparação a de mulheres eumenorreicas / Concentration of hyaluronic acid and small leucine-rich proteoglycans in the endometrium of patients with polycystic ovary syndrome in comparison with eumenorrheic womenRicardo dos Santos Simões 29 October 2015 (has links)
INTRODUÇÃO: A matriz extracelular no endométrio fornece vasta gama de sinais envolvidos em diferentes processos celulares, tais como morte celular e proliferação. Neste sentido, os glicosaminoglicanos e os proteoglicanos, juntamente com os fatores de crescimento, modulam várias etapas da angiogênese, proliferação celular e remodelação do estroma, o que pode ser importante para o fluxo menstrual regular e a redução dos processos proliferativos. Além disso, são importantes para a adequada interação maternofetal. OBJETIVO: Avaliar a concentração de ácido hialurônico, das enzimas de biossíntese do ácido hialurônico - hialurônico sintases (HAS1, HAS2 e HAS3) e dos pequenos proteoglicanos ricos em leucina (decorim, biglicam, lumicam e fibromodulina) no endométrio de pacientes com síndrome dos ovários policísticos (SOP) e de mulheres eumenorreicas. MÉTODOS: Foram analisadas 20 amostras de endométrio, 10 provenientes de pacientes com SOP e 10 de mulheres com ciclos menstruais regulares na fase proliferativa do ciclo, com idade variando entre 20 e 35 anos, atendidas na Divisão de Clínica Ginecológica do Hospital das Clínicas da FMUSP (HC-FMUSP). A determinação do perfil e da concentração do ácido hialurônico foi efetuada por método bioquímico de ensaio fluorimétrico (ELISA-like). A sua localização no tecido endometrial, assim como as dosagens das enzimas sintases (HAS1, HAS2 e HAS3) e dos pequenos proteoglicanos ricos em leucina (decorim, biglicam, lumicam e fibromodulina e), foi feita por imunoistoquímica e \"western blotting\". Para a análise dos resultados foi utilizado o teste t de student (p<=0,05). Os cálculos foram realizados com auxílio do programa SPSS versão13 (SPSS, Chicago, IL). RESUTADOS: Houve maior concentração de ácido hialurônico no endométrio de mulheres eumenorreicas na fase proliferativa do ciclo menstrual do que no das com síndrome dos ovários policísticos. Com relação às sintases do ácido hialurônico, observou-se maior reatividade de HAS1 e HAS2 e menor reatividade de HAS3 no endométrio de mulheres com SOP em relação às mulheres com ciclos menstruais regulares na fase proliferativa. Quanto aos pequenos proteoglicanos ricos em leucina notou-se maior imunorreatividade de decorim e lumicam no endométrio de pacientes com SOP. CONCLUSÕES: As pacientes com SOP apresentam menor concentração de ácido hialurônico e maior reatividade ao decorim e lumicam em relação às mulheres com ciclos regulares na fase proliferativa. Esses dados sugerem que nas pacientes com SOP, o endométrio seria menos receptivo e teria mecanismos para evitar a proliferação excessiva / INTRODUCTION: Endometrium extracellular matrix provides wide range of signals at different cellular levels like cell death and proliferation. In this regard, glycosaminoglycans and proteoglycans, along with growth factors, modulate various stages of angiogenesis, cell proliferation and remodeling of the stroma, which can be important for regulating menses and reducing the proliferative processes. Additionally, it is important for proper fetal-maternal interactions. OBJECTIVE: Evaluate hyaluronic acid concentration, the enzymes of hyaluronic acid synthases (HAS1, HAS2 and HAS3) and small leucine-rich proteoglycans (decorin, lumican, fibromodulim and biglycan) in the endometrium of patients with polycystic ovary syndrome (PCOS) and eumenorrheic women. METHODS: A total of 20 endometrial samples from 10 patients with PCOS and 10 women with regular menstrual cycles in the proliferative phase, with ages ranging between 20 and 35 years, attended at Gynecology Division of Clinical Hospital of the FMUSP (HC-USP). Profile determination and the concentration of hyaluronic acid were performed by biochemical method of fluorimetric assay (ELISA-like). Its location in the endometrial tissue as well as the dosage of enzymes synthases (HAS1, HAS2 and HAS3) and small leucine-rich proteoglycans (decorin, lumican, fibromodulim and biglycan) was done by immunohistochemistry and western blotting. To analyze the results Student t test was used (p < 0.05). The calculations were performed with software SPSS version 13. RESULTS: A higher concentration of hyaluronic acid in eumenorrheic women endometrium in proliferative phase when compared with polycystic ovary syndrome. Regarding hyaluronic acid synthases, there was a higher HAS1 and HAS2 reactivity and lower HAS3 reactivity in the PCOS endometrium compared to women with regular menstrual cycles in the proliferative phase. Decorin and lumican showed higher immunoreactivity in PCOS endometrium. CONCLUSIONS: PCOS patients have a lower concentration of hyaluronic acid and greater reactivity to decorin and lumican than eumenorrheic women in proliferative phase. These data suggest that in patients with PCOS, the endometrium would be less receptive and have mechanisms to prevent excessive proliferation
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Comparação dos efeitos da aplicação intra-articular de ácido hialurônico de diferentes pesos moleculares em modelo de sinovite aguda induzida por LPS em equinos / Comparison of the effects of intra-articular application of different molecular weights of hyaluronic acid in a model of PS-induced acute equine synovitisNeuenschwander, Henrique Macedo 23 August 2016 (has links)
Diversos experimentos em humanos e equinos discutem a eficácia do uso intra-articular do ácido hialurônico (AH). Pouco se sabe a respeito de seu potencial pró ou anti-inflamatório, bem como sobre a eficácia das moléculas de AH de diferentes pesos moleculares. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos anti-inflamatórios, anabólicos e antioxidantes da aplicação intra-articular de AH em sinovite aguda induzida por lipopolissacarídeo (LPS) em equinos. Foram utilizadas 24 articulações metacarpofalangeanas hígidas de 12 equinos jovens, avaliadas por exame físico, radiográfico e ultrassonográfico. As articulações foram divididas aleatoriamente em três grupos de oito, sendo o grupo controle tratado com triancinolona (TA) (10 mg), o grupo AH de baixo peso molecular (AH-BPM), e o grupo AH de alto peso molecular (AH-APM). Inicialmente, foram aplicados 0,25 ng de LPS por via intra-articular (momento 0). Após uma hora (momento 1), coletou-se líquido sinovial (LS) para contagem celular e imediatamente após realizado o tratamento com TA, AH-BPM ou AH-APM. Posteriormente, LS foi coletado nos momentos 8, 24 e 48 horas para contagem celular, avaliação do burst oxidativo, quantificação de prostaglandina E2 (PGE2), condroitim sulfato (CS), AH e mensuração do peso molecular do AH. Exame físico dos animais, incluindo mensuração da circunferência articular e avaliação de claudicação por meio do equipamento Lameness Locator® foi realizado em todos os momentos. As frequências cardíaca e respiratória dos animais aumentaram em todos os grupos às 8 horas (P<0,05), sendo menor no grupo TA. Em relação à circunferência articular o grupo AH-BPM apresentou maior aumento às 24 e 48 horas em relação aos outros grupos (p<0,05). O grau de claudicação do grupo AHAPM foi maior que o do grupo TA às 8 e 24 horas, mas similar ao grupo AH-BPM. O grupo TA apresentou maior quantidade de células nucleadas no LS do que o grupo AH-BPM as 24 e 28 horas e do que o grupo AH-APM às 48 horas. A concentração de PGE2 foi menor no grupo TA em relação ao grupo AH-APM às 8 horas, e a ambos os grupos que receberam AH às 48 horas (p<0,05). O grupo AH-APM mostrou maior concentração de AH às 8 horas do que os outros grupos, contudo às 48 horas o grupo TA mostrou maior concentração de AH do que os outros grupos (p<0,05). Também às 48 horas o grupo TA foi o que apresentou a menor porcentagem de AH de alto peso molecular (p<0,05). A maior concentração de CS no LS às 24 e 48 horas ocorreu no grupo TA, também observou-se o grupo TA foi o único em que a concentração de CS aumentou as 8 horas em relação aos valores basais. O grupo AH-APM foi o que apresentou menor concentração de CS às 8 horas (p<0,05). O grupo tratado com AHBPM apresentou maior intensidade de fluorescência nos momentos 24 e 48 horas (p<0,05). Apesar da triancinolona possuir efeito superior ao ácido hialurônico no controle da inflamação, ela possui efeito catabólico sobre a cartilagem articular, demonstrado pelo aumento da concentração de CS, além de quebra da molécula de AH no líquido sinovial. O AH-APM é mais indicado para terapia intra-articular em equinos uma vez que demonstrou menor efeito catabólico e oxidativo do que o AH-BPM / Several experiments have compared the efficacy of intra-articular usage of yaluronic acid (HA) within horses. Little is known about the effectiveness of different subtypes of HA in terms of its pro- and anti-inflammatory potential. The goal of this study was to investigate the anti-inflammatory, anabolic and antioxidant effects of intra-articular application of HA in acute synovitis induced by lipopolysaccharide (LPS) in horses. 24 metacarpophalangeal joints of 12 young horses without musculoskeletal alterations were subjected to lameness examination (Lameness Locator®), radiography and ultrasound. These joints were divided into three groups: a positive control group treated with triamcinolone acetonide (TA) (10mg) and 2 experimental groups treated with either hyaluronic acid of low molecular weight (HALMW) or hyaluronic acid of high molecular weight (HA- HWM). Initially, all joints were injected with 0.25ng of LPS. After an hour, synovial fluid (SF) was collected for cell counting. TA, HA- HWM or HA- LMW treatments were then applied to the joints. After treatment applications, SF was collected at 3 different time points (8, 24 and 48 hours) for cell counts, oxidative burst evaluation, prostaglandin E2 (PGE2) quantification, chondroitin sulfate (CS), HA and molecular weight measurements. Physical examinations, circumference measurements and lameness evaluations were carried out at each time point. The heart and respiratory rate of the animals increased in all groups at 8 hours (p <0.05), that increase was lower in the TA group. Regarding the circumference of the joint the HA-LMW group showed a greater increase at 24 and 48 hours compared to the other groups (p <0.05). The lameness of the HA-HMW group was higher than the TA group at 8 and 24 hours, but similar to the HALMW group. The TA group had a higher nucleated cells count in the SF compared to the HALMW group at 24 hours and 28 hours, and higher than the HA-HMW group at 48 hours. The PGE2 concentration was lower in the TA group in relation to the HA-HMW group at 8 hours, and lower than both groups that received HA at 48 hours (p <0.05). The HA-HMW group showed higher HA concentration at 8 hours than the other groups at 48 hours. However, the TA group showed higher HA concentration than the other groups (p <0.05). Also, at 48 hours the TA group was the one with the lowest percentage of high molecular weight HA (p <0.05). The highest concentration of CS in SF at 24 and 48 hours occurred in the TA group, and it was also observed in the TA group was the only one in which the concentration of CS increased at eight hours compared to baseline. The HA-HMW group showed the lowest concentration of CS at 8 hours (p <0.05). The group treated with HA-LMW showed higher fluorescence intensity at 24 and 48 hours (p <0.05). Although triamcinolone have an superior effect of hyaluronic acid in controlling inflammation, it has catabolic effects on cartilage, shown by increased concentration of CS, and breakage of the HA molecule in synovial fluid. The HA-HMW is recommended for intra-articular therapy in equine joints since it showed less oxidative and catabolic effects
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