Objetivo: Avaliar se a administração sistêmica de cilostazol reduz a hiperplasia neointimal nas artérias ilíacas de suínos submetidas a angioplastia com cateter balão. Métodos: O trabalho foi desenvolvido na Unidade de Experimentação Animal do Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Vinte suínos foram submetidos a angioplastia com cateter balão 6 x 40 mm na artéria ilíaca comum direita, guiada por ultrassonografia com Doppler. Os animais foram randomizados em dois grupos: grupo 1 (n = 10), no qual foi administrado cilostazol 50 mg em duas doses diárias, e grupo 2 (n = 10), considerado controle. Após 30 dias, os animais foram sacrificados, e as artérias ilíacas preparadas para análise histológica. Os cortes histológicos foram digitalizados e analisados por morfometria digital. A análise estatística foi realizada com o teste t de Student e o de Mann-Whitney. Resultados: Comparando as artérias ilíacas submetidas a angioplastia com as não submetidas a angioplastia, houve hiperplasia neointimal significativa (0,228 versus 0,119 mm2; p = 0,0001). Nas artérias submetidas a angioplastia, não houve diferença entre o grupo 1 (cilostazol) e o grupo 2 (controle) na área do lúmen (2,277 versus 2,575 mm2; p = 0,08), área da íntima (0,219 versus 0,237 mm2; p = 0,64), área da média (2,262 versus 2,393 mm2; p = 0,53) e no percentual de obstrução neointimal (8,857 versus 9,257 %; p = 0,82). Conclusão: O uso de cilostazol 50 mg em duas doses diárias não reduziu a hiperplasia neointimal em artérias ilíacas de suínos submetidas a angioplastia com cateter balão. / Objective: To evaluate whether systemic administration of cilostazol reduces neointimal hyperplasia in the iliac arteries of pigs after balloon angioplasty. Methods: This study was conducted in the Experimental Animal Unit of Hospital de Clínicas de Porto Alegre, Brazil. Twenty pigs underwent angioplasty of the right common iliac artery under Doppler ultrasound guidance using 6x40-mm balloon catheters. The animals were randomized to one of two groups: group 1 (n = 10) received 50 mg cilostazol in two doses a day; and group 2 (n = 10) was the control group. After 30 days, the animals were killed and their iliac arteries were prepared for histological analysis. Histological images were digitalized and analyzed using digital morphometry. The Student t and the Mann-Whitney tests were used for statistical analyses. Results: Iliac arteries that underwent angioplasty had significantly more neointimal hyperplasia than those with no angioplasty (0.228 versus 0.119 mm2; p = 0.0001) Group 1 (cilostazol) and 2 (control) had no significant differences in lumen (2.277 versus 2.575 mm2; p = 0.08), intima (0.219 versus 0.237 mm2; p = 0.64) or media (2.262 versus 2.393 mm2; p = 0.53) area, or in percentage of neointimal obstruction (8.857 versus 9.257 %; p = 0.82). Conclusion: The use of 50 mg cilostazol in two doses a day did not reduce neointimal hyperplasia in iliac arteries of pigs that underwent balloon angioplasty.

Submitted by Caroline Falcao (caroline.rfalcao@ufpe.br) on 2017-04-04T19:33:58Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2012-Dissertação-JulianaVasconcelos.pdf: 1176748 bytes, checksum: bb96bcabc13f8fef386568e90cfdc033 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-04T19:33:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) 2012-Dissertação-JulianaVasconcelos.pdf: 1176748 bytes, checksum: bb96bcabc13f8fef386568e90cfdc033 (MD5) Previous issue date: 2012 / Câncer é um conjunto de alterações celulares, que leva a uma divisão celular sem controle, podendo invadir tecidos adjacentes através da circulação sanguínea e do sistema linfático. O Câncer de Próstata (CP) é o segundo tumor mais comum entre a população masculina, e é considerado o câncer da terceira idade. A carcinogênese é um mecanismo complexo no qual ocorre mudanças na expressão de proteínas e glicoconjugados. Glicosilação é mediada por glicosiltransferases, enzimas que tem função de inserir resíduos de carboidratos específicos, e é um dos mais importantes processos biológicos pós-tradução de modificações na estrutura final e função de lipídios e proteínas. As fucosiltransferases (FUT) participam da transferência de resíduos de L-fucose, um sacarídeo associado ao câncer e a processos inflamatórios, da GDP-L-fucose. Neste estudo objetivou-se avaliar a expressão dos genes FUT3 e FUT6 através da Imunohistoquímica em Adenocarcinoma Prostático e Hiperplasia Prostática Benigna correlacionando com o padrão de expressão de L-fucose empregando a histoquímica com as lectinas UEA-I (Ulex europaeus) e LTA (Lotus tetragonolobus). As enzimas FUT3 e FUT6 apresentaram-se com uma alta expressão tanto no Adenocarcinoma Prostático como na Hiperplasia Benigna Prostática, principalmente a FUT 6. Os resultados da histoquímica com lectinas mostraram uma baixa distribuição/accessibilidade de L-fucose. Sugere-se que, as enzimas FUT3 e FUT6 possam representar potenciais biomarcadores para avaliar alterações benignas e malignas prostáticas refletindo uma variação no perfil de L-fucose nestes tumores que podem estar associados às suas características biológicas. / Cancer is a set of cellular changes, leading to uncontrolled cell division that may invade surrounding tissues via bloodstream and lymphatic system. Prostate Cancer (PC) is the second most common tumor in men and is considered the cancer of the elderly. Carcinogenesis is a complex mechanism in which changes occur in the expression of proteins and glycoconjugates where glycosylation plays key roles since modulates the carbohydrate moieties in glycoconjugates being one of the most important biological processes of posttranslational modifications in the final structure and function of lipids and proteins. Fucosyltransferases (FUTs) are enzymes that catalyze the transfer of the L-fucose residues, a saccharide which has been linked to cancer and inflammation features, from GDP-Fuc. This study the objective to evaluate the expression of genes FUT 3 and FUT 6 by immunohistochemistry in Prostatic Adenocarcinoma and Benign Prostatic Hyperplasia and to correlates with the expression pattern of L-fucose using lectin histochemistry with UEA-I (Ulex europaeus) and LTA (Lotus tetragonolobus). FUT3 and FUT6 showed a high expression in both prostatic tissues, especially FUT6. The results of lectin histochemistry showed a low distribution/accessibility of L-fucose residues. It is suggested that FUT3 and FUT6 may represent potential biomarkers to evaluate benign and malignant alterations in prostate reflecting a variation in the profile of L-fucose residues in these tumors which can be associated to their biological features.

The intimal hyperplasia remains as a challenge to vascular interventions because it causes vessel lumen reduction with weaken blood flow to the tissues, leading to cardiovascular complications such as myocardial infarction, stroke and limb amputations. Moringa oleifera has shown efficiency to reduce serum cholesterol by 52% and 86% of atherosclerotic plaque in the carotid arteries of rabbits with hypercholesterolemic regimen, showing thus considerable potential to prevent cardiovascular diseases and myointimal hyperplasia. The Moringa oleifera has a powerful antioxidant activity, effects: anti-inflammatory, hipolipidemic, hypocholesterolemic, anti-hypertensive, anti-tumor and anti-diabetes responses, resulting from its polyphenol components. These effects may converge for inhibiting myointimal hyperplasia. The sample consisted of rabbits with atherosclerosis induced by egg yolk and endothelial denudation of the right external iliac artery by balloon. The Group “Cz” was treated with cilostazol 50 mg/day. Group “Mo” treated with 200 mg/kg body weight daily of Moringa and Group “SF” was treated with 10 ml/day, all orally treated for five weeks. Primary variable was the mean difference of myointimal hyperplasia. The secondary variables were the average vessel wall thickness in each group, the means of total cholesterol, triglycerides, HDL, LDL, VLDL and immunohistochemistry: the average area of C4d and monoclonal HHF35. The sample was estimated in 30 rabbits divided in three groups of ten animals. As results, the average difference of myointimal hyperplasia assessed by ANOVA analysis of variance (one way) resulted in a statistically significant difference between groups (p<0.0001), with higher average reduction of myointimal wall thickness in the group “Cz”, what shows a better response to treatment with cilostazol. The evaluation of the initial and final average of total cholesterol by analysis of variance; ANOVA (two way) between the groups showed statistically significant results (p=0.0043), also presenting greater reduction by treatment with cilostazol. HDL initial and final means in each group evaluated by analysis of variance; ANOVA (two-way) between the groups, showed a statistically significant difference (p=0.0044), reflecting higher average or increased HDL by treatment with Moringa. As conclusion, the average difference of myointimal hyperplasia in the iliac artery of rabbits with arteriosclerosis, treated with Moringa oleifera compared to cilostazol, presented a greater reduction in cilostazol treatment group. / A hiperplasia da íntima permanece um desafio às intervenções vasculares por provocar redução da luz dos vasos com diminuição do fluxo sanguíneo aos tecidos, levando a complicações cardiovasculares como infarto do miocárdio, acidente vascular cerebral e amputação de membros. A Moringa oleifera tem mostrado reduzir o colesterol sérico em 52% e a placa aterosclerótica em 86% nas carótidas de coelhos em dieta hipercolesterolêmica, mostrando assim, potencial considerável para prevenir doenças cardiovasculares e a hiperplasia miointimal. A Moringa oleifera apresenta potente ação antioxidante, efeitos: anti-inflamatório, hipolipemiante, hipocolesterolemiante, anti-hipertensivo, antitumoral e antidiabético, resultantes de seus componentes polifenóicos. Esses efeitos podem convergir para a inibição da hiperplasia miointimal. A amostra foi constituída de coelhos com aterosclerose induzida pela gema de ovo e desnudação endotelial da artéria ilíaca externa direita por balão. O Grupo (Cz) foi tratado com Cilostazol 50 mg/dia, o Grupo (Mo) tratado com 200 mg/kg de peso corporal de moringa ao dia e o Grupo (SF) tratado com 10 mL/dia, todos tratados por via oral durante cinco semanas. A variável primária foi a diferença de média de hiperplasia miointimal. As variáveis secundárias foram a média de espessura da parede em cada grupo, as médias de Colesterol total, Triglicerídeos, HDL, LDL, VLDL e na imuno-histoquímica: a média de área de C4d e de HHF35 monoclonal. A amostra foi estimada em 30 coelhos, divididos em três grupos de dez animais. Nos resultados, a diferença de média de hiperplasia miointimal avaliada por análise de variância ANOVA (one way) resultou em diferença estatísticamente significante entre os grupos (p<0,0001), com maior redução de média de espessura de parede miointimal no grupo (Cz), mostrando melhor resposta ao tratamento com o cilostazol. A avaliação da média inicial e final do colesterol total pela análise de variância; ANOVA (two way) entre os grupos, apresentou resultados estatísticamente significativos (p=0,0043), mostrando também, maior redução pelo tratamento com o cilostazol. A média inicial e final do HDL em cada grupo, avaliados pela análise de variância; ANOVA (two-way), entre os grupos, apresentou diferença estatisticamente significantes (p=0,0044), evidenciando maior média ou aumento de HDL pelo tratamento com a Moringa oleifera. Em conclusão, a diferença de média de hiperplasia miointimal na artéria ilíaca de coelhos com aterosclerose, tratados com Moringa oleifera, comparado com cilostazol, apresentou maior redução no grupo tratado com cilostazol.

Context: miointimal thickening is a early vascular changes, above the sign ateromatosa. Such thickening corresponds to an early stage of atherosclerosis, which can be viewed through the B mode ultrasound; having this thickening prognostic value well demonstrated as a predictor of future vascular events. The grayscale ultrasound was used until recently as a non-invasive method pattern to identify and discriminate the composition of atherosclerotic plaque. An innovative approach of analysis of radio signals emitted by B-mode ultrasound, made possible the development of an ultrasound technique called color ultrasound tissue characterization (CATUS), this is promising in atherosclerotic vulnerable plaque detection and evaluation of his natural history; soon, prospective studies using the analysis provided by this instrument can corroborate the distinction of boards susceptible to rupture and, consequently assist in prevention of cardiovascular events. Objective: To determine the difference of ultrasound tissue characterization (CATUS) compared to B-mode ultrasonography in myointimal hyperplasia. Hypothesis: There is difference in ultrasound tissue characterization compared to B-mode ultrasonography in myointimal hyperplasia. Type of study: experimental, cross-sectional comparative study. Sample: The sample was probabilistic, for convenience, in aortas of 10 albino rabbits of the genus Oryctolagus cuniculus, belonging to New Zeland. Variable: The difference of ultrasound tissue characterization (CATUS) compared to B-mode ultrasound in myointimal hyperplasia. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Contexto: O espessamento miointimal é uma alteração vascular precoce, que precede a placa ateromatosa. Tal espessamento corresponde a um estágio inicial da aterosclerose, que pode ser visualizado por meio da ultrassonografia modo B; tendo este espessamento valor prognóstico bem demostrado como preditor de eventos vasculares futuros. O ultrassom em escala de cinza foi utilizado, até recentemente, como método não invasivo padrão para identificar e discriminar a composição da placa aterosclerótica. Uma abordagem inovadora da análise dos sinais de radiofrequência emitidos pelo ultrassom modo B, tornou possível o desenvolvimento de uma técnica ultrassonográfica em cores denominada caracterização tecidual ultrassonográfica (CATUS), esta é promissora na detecção de placas ateroscleróticas vulneráveis e na avaliação da sua história natural; logo, estudos prospectivos utilizando as análises fornecidas por esse instrumento podem corroborar na distinção de placas susceptíveis à ruptura e, como consequência auxiliar na prevenção de eventos cardiovasculares. Objetivo: Determinar a diferença da caracterização tecidual ultrassonográfica (CATUS) comparada à ultrassonografia modo B na hiperplasia miointimal. Hipótese: Existe diferença na caracterização tecidual ultrassonográfica comparada à ultrassonografia modo B na hiperplasia miointimal. Tipo de estudo: Estudo experimental, transversal e comparativo. Amostra: A amostra foi probabilística, por conveniência, em 10 aortas de coelhos albinos do gênero Oryctolagus cuniculus, pertencendo à raça Nova Zelândia. Variável: A diferença da caracterização tecidual ultrassonográfica (CATUS) comparada ao ultrassom modo B na hiperplasia miointimal.

Orientadores: Maricilda Palandi de Mello, Anna Wedell / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T13:24:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Soardi_FernandaCaroline_D.pdf: 4267789 bytes, checksum: 80c77e1664dcc041014d42a92bdd435e (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: A causa mais freqüente de hiperplasia congênita da adrenal (HCA) é a deficiência da enzima CYP21A2 responsável por cerca de 90% dos casos, seguida da deficiência de CYP11B1, a qual é responsável por 5-8%. A deficiência de CYP21A2 apresenta diferentes sintomas clínicos, que podem variar de uma forma leve não clássica (NC) a uma forma grave clássica, dividida em virilizante simples (VS) e perdedora de sal (PS). Enquanto a deficiência de CYP11B1 é classificada nas formas clássica e não-clássica, dependendo da gravidade do fenótipo. As diferentes formas destas deficiências estão associadas a mutações distintas ou a combinação de mutações nos genes, sendo estas mutações provenientes dos genes homólogos ou não. O primeiro objetivo desta tese foi identificar novas mutações em alelos de 31 pacientes. As variantes protéicas novas p.G56R, p.L107R e p.L142P e, as raras p.H62L, p.H62L+p.P453S e p.R408C do gene CYP21A2 foram expressas para comparar as atividades da enzima CYP21A2 nas suas formas normal e mutantes. Foi objetivo, também, estudar através da técnica de mini-genes as possíveis alterações no processo de splicing para as variantes IVS2+5G>A, IVS2-2A>G, IVS4- 15A>C+IVS4-8C>T+p.D183E do gene CYP21A2 e para a variante g.1753G>A do gene CYP11B1. O estudo da atividade enzimática do gene CYP21A2, realizado pela técnica de mutagênese sítio-dirigida, demonstrou que as mutações p.L107R, p.L142P e p.R408C reduziram a atividade enzimática para valores praticamente nulos, classificando-as como responsáveis pela forma PS. A alteração p.G56R apresentou uma quantidade mínima de conversão de progesterona em desoxicorticosterona, quantidade suficiente para evitar a perda de sal, sendo considerada clássica associada à forma VS. A mutação p.H62L foi encontrada no mesmo alelo que a mutação p.P34L, em uma das pacientes da casuística desse trabalho, ambas inseridas num gene quimérico portador da deleção de 30 Kb. A mutação p.H62L também foi encontrada em associação com a mutação p.P453S, em dois pacientes de origem Escandinava. No estudo funcional a mutação p.H62L reduziu parcialmente a atividade enzimática. Os resultados cinéticos classificaram essa mutação como relacionada à forma NC da deficiência de CYP21A2. Em combinação com a mutação p.P453S, observou-se um sinergismo, uma vez que reduziu a atividade da enzima para a faixa limítrofe entre NC e VS. A investigação no processo de splicing utilizando a técnica de minigenes para as alterações no gene CYP21A2 indicou que a variação IVS2+5G>A causa a perda do exon 2 na formação do mRNA, sendo relacionada à forma PS. Da mesma forma, a variação IVS2- 2A>G foi classificada como associada à forma PS, pois inseriu no mRNA 19 bases provenientes do intron 2 na junção exon2-exon3, o que modificou o frame de leitura do mRNA criando um códon de parada prematura. Por outro lado, ficou demonstrado que as variações IVS4- 15A>C+IVS4-8C>T+p.D183E não interferem no processamento normal do mRNA do gene CYP21A2. No caso da alteração g.1753G>A no gene CYP11B1, que foi classificada como responsável pela forma clássica da deficiência de CYP11B1, o estudo de mini-gene indicou a perda dos últimos 45 nucleotídeos do exon 4, criando um códon de parada prematura. A elucidação do papel funcional e estrutural das mutações nos genes estudados permitiu o correto estabelecimento da correlação genótipo-fenótipo na maioria dos pacientes com HCA estudados / Abstract: Deficiency of CYP21A2 enzyme is responsible for more than 90% of congenital adrenal hyperplasia (CAH) followed by the deficiency of CYP11B1, which is responsible for 5-8% of the cases. The deficiency of CYP21A2 is normally classified in clinical forms that vary from a mild non-classical (NC) to a severe classical form, which can manifest as salt wasting (SW) or as simple virilizing (SV). Depending on the severity of phenotype, deficiency of CYP11B1 can be classified in classical or non-classical forms. In both deficiencies the clinical forms are associated with different mutations or combination of mutations, which may or may not be originated from the homologous genes. The aim of this study was to identify novel or rare mutations in alleles of 31 patients with CYP21A2 deficiency. Using site-direct mutagenesis strategies, nucleotide variants were introduced into the cDNA and the novel p.G56R, p.L107R and p.L142P and rare p.H62L, p.H62L+p.P453S and p.R408C protein variants of CYP21A2 were expressed to compare the enzymatic activity between the wild-type and mutant proteins. Furthermore, splicing activities were investigated for IVS2+5G>A, IVS2-2A>G, IVS4-15A>C+IVS4-8C>T+p.D183E sequence CTP21A2 variations and for g.1753G>A on CYP11B1 gene by minigene constructions. The analysis of enzymatic conversion of both CYP21A2 substrates, 17-hydroxyprogesterone and progesterone, into 11-desoxycortisol and corticosterone, respectively, showed low levels of residual activities for p.L107R, p.L142P and p.R408C, which were classified as SW mutations. Whereas, the result of enzyme activity for p.G56R indicated that it might be a SV-related mutation due a residual activity of 1.4% toward progesterone as substrate. The p.H62L was associated to p.P34L mutation in a chimeric gene present in a 30-kb deletion allele in Brazilian patients. In Scandinavian patients, the p.H62L mutation was found associated to the p.P453S which is known as a NC mutation. The p.H62L itself showed an activity within the range of NC mutations. The apparent kinetic constant confirmed this classification. A synergistic effect was observed for the allele bearing the p.H62L+p.P453S combination as it had caused a significant reduction in the enzymatic activity bringing it to the borderline level between SV and NC mutations. On the minigene analyses for CYP21A2, the IVS2+5G>A variation showed skipping of exon 2, therefore this alteration was classified as SW mutation. Likely, IVS2-2A>G was considered as a SW mutation due to the insertion of 19 nucleotides from intron 2 into the resulting mRNA, which changed the reading frame and created a premature stop codon. Conversely, the group of variations IVS4-15A>C+IVS4-8C>T+p.D183E did not affect the normal splicing of CYP21A2 mRNA. In the CYP11B1 minigene analysis, the g.1753G>A nucleotide variation was classified as responsible for the classical form of deficiency. An alternative splicing due to disruption of the normal donor site was used and the skipping of the last 45 nucleotides of exon 4 was observed. This alteration modified the mRNA reading frame and created a premature stop codon. The elucidation of functional and structural characters of the steroidogenic gene mutations led to the establishment of a correct genotype-phenotype in most patients studied. / Doutorado / Genetica Animal e Evolução / Doutor em Genetica e Biologia Molecular

Made available in DSpace on 2015-09-25T12:19:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Luzia Araujo Batista 1.pdf: 1980021 bytes, checksum: 691c60f69d98b66aacc860abb678dbb6 (MD5) Previous issue date: 2012-07-24 / Considering that the imbalance between apoptosis and cell proliferation may play an important role in the pathogenesis of drug-induced gingival overgrowth (DIGO), the present study aimed to evaluate the immunohistochemical expression of Ki-67 and Bcl-2 proteins and their relationship with histomorphologic features in DIGOs and inflammatory gingival hyperplasias (IGHs), compared with specimens of healthy gingiva (HG). The study was descriptive-analytical, cross-sectional, observational, qualitative and quantitative. The sample consisted of 20 cases of DIGO, 20 cases of IGH and 20 cases of HG, which underwent histomorphologic and immunohistochemical analysis. In histomorphologic analysis, the following aspects were evaluated: presence of elongated epithelial rete pegs, degree of collagenization, degree of vascularization, intensity and distribution of the inflammatory infiltrate. In immunohistochemical study, the labeling indexes (LIs) for anti-Ki-67 and anti-Bcl-2 antibodies were determined, both in epithelial and connective tissue of specimens. The histomorphologics results revealed presence of elongated epithelial rete pegs toward the connective tissue only in DIGOs, as well as statistically significant association of this group with intense degree of collagenization (p = 0.010). For all groups it was found a higher proportion of cases with intense vascularization, and moderate to intense inflammatory infiltrate with focal distribution (p > 0.05). With respect to immunohistochemical analysis, there were no statistically significant differences between groups regarding the Ki-67 LIs in the epithelial lining (p > 0.05). In the connective tissue, DIGOs, IGHs and HGs showed low Ki-67 LIs (p > 0.05). Regarding the Bcl-2 LIs in the epithelium, the highest mean was found in the group of DIGO (p = 0.061). In turn, in connective tissue, DIGOs showed higher number of immunopositive for Bcl-2 (45.0%) in comparison with IGHs and HGs, but no differences regarding LIs (p > 0.05). There were no statistically significant differences in Ki-67 and Bcl-2 LIs in relation to the histomorphologic characteristics of DIGOs, IGHs and HGs (p > 0.05). Furthermore, in all groups, there were no statistically significant correlations between Ki-67 and Bcl-2 LIs. Therefore, the findings of this study suggest that neither increased fibroblast proliferation nor reduced fibroblast apoptosis is involved in the pathogenesis of DIGOs. On the other hand, the morphology of elongated epithelial rete pegs observed in these lesions may be due to inhibition of apoptosis of keratinocytes rather than an increase in the proliferation of these cell types. / Considerando-se que o desequilíbrio entre a apoptose e a proliferação celular pode exercer um papel importante na patogênese do crescimento gengival induzido por drogas (CGID), o presente estudo se propôs a avaliar a expressão imuno-histoquímica das proteínas Ki-67 e Bcl-2 e a sua relação com as características histomorfológicas em CGIDs e hiperplasias gengivais inflamatórias (HGIs), em comparação com espécimes de gengiva saudável (GS). O estudo foi descritivo-analítico, transversal, observacional, qualitativo e quantitativo. A amostra foi constituída por 20 casos de CGID, 20 casos de HGI e 20 casos de GS, os quais foram submetidos à análise histomorfológica e imuno-histoquímica. Na análise histomorfológica, foram avaliados os seguintes aspectos: presença de cristas epiteliais alongadas, grau de colagenização, grau de vascularização, intensidade e distribuição do infiltrado inflamatório. No estudo imuno-histoquímico, foram determinados os índices de positividade (IPs) para os anticorpos anti-Ki-67 e anti-Bcl-2, tanto no revestimento epitelial quanto no tecido conjuntivo dos espécimes teciduais. Os resultados histomorfológicos revelaram a presença de cristas epiteliais alongadas em direção ao tecido conjuntivo apenas nos CGIDs, bem como associação estatisticamente significativa deste grupo com o grau de colagenização intenso (p = 0,010). Para todos os grupos, constatou-se uma maior proporção de casos com intensa vascularização, apresentando infiltrado inflamatório de moderado a intenso e com distribuição focal (p > 0,05). Quanto à análise imunohistoquímica, não foram constatadas diferenças estatisticamente significativas entre os grupos em relação aos IPs para o Ki-67 no revestimento epitelial (p > 0,05). No tecido conjuntivo, CGIDs, HGIs e GSs apresentaram baixos IPs para o Ki-67 (p > 0,05). No tocante aos IPs para o Bcl-2 no epitélio, a maior média foi encontrada no grupo de CGID (p = 0,061). Por sua vez, no tecido conjuntivo, CGIDs revelaram maior número de casos imunopositivos para o Bcl-2 (45,0%), mas sem diferenças entre os IPs em relação às HGIs e GSs (p > 0,05). Não foram constatadas diferenças estatisticamente significativas nos IPs para o Ki-67 e para o Bcl-2 em relação às características histomorfológicas dos CGIDs, HGIs e GSs (p > 0,05). Além disso, não foram observadas correlações estatisticamente significativas entre os IPs para o Ki-67 e para o Bcl-2, em nenhum dos três grupos. Portanto, os achados do presente estudo sugerem que o aumento da proliferação e a diminuição da apoptose dos fibroblastos não estão envolvidos na patogênese dos CGIDs. Por outro lado, o padrão morfológico das cristas epiteliais alongadas, observadas nessas lesões, poderiam ser decorrentes da inibição da apoptose dos ceratinócitos e não do aumento na proliferação destes tipos celulares.

Orientadores: Hernandes Faustino de Carvalho, Paulo Roberto Eleutério de Souza / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-25T14:18:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AlmeidaNeto_Adauto_D.pdf: 4167026 bytes, checksum: ca3afd135b583810d6996e33016f9e69 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A próstata é alvo de afecções severas que comprometem a função urinária, a qualidade de vida e que consistem em risco de vida aos indivíduos do sexo masculino, particularmente com o avançar da idade. Interações dinâmicas entre o epitélio prostático e o estroma, regulam vários aspectos do desenvolvimento, da função e das patologias prostáticas. O gene WFDC1 é expresso pelas células musculares lisas do estroma prostático normal e tem função na regulação do comportamento do epitélio, na organização da matriz extracelular e na regulação da angiogênese. Dois transcritos principais são oriundos de splicing alternativo do transcrito primário: um com todos os éxons (WFDC1) e outro sem o éxon 3 (Delta 3). Neste trabalho, investigamos as relações quantitativas entre estas duas variantes, com emprego de qRT-PCR (Taqman) e sondas para as junções dos éxons 2-3 e 2-4, em amostras de hiperplasia prostática benigna (BPH) e de câncer de próstata (PCA) provenientes de bancos de tecidos. A expressão do gene marcador MYH11 foi utilizada como estimativa do conteúdo de células musculares lisas nas amostras. Os resultados demonstraram que as amostras puderam ser dividas em dois grupos com expressão diferencial da MYH11(um com baixa expressão e outro com alta miosina, sendo o primeiro correspondente ao quartil inferior da distribuição dos valores de expressão). Foi demonstrada correlação entre a expressão de WFDC1 e MYH11 em BPH, mas não em PCA, enquanto não houve correlação entre Delta 3 e WFDC1 e nem com MYH11. O conteúdo de Delta 3 variou em cinco ordens de magnitude em comparação ao de WFDC1. A razão entre as duas variantes apresentou variação exponencial, distribuições discretas e intercaladas das amostras de BPH e de PCA, que se distribuíram em populações que preservaram as relações 10:1; 1:1 e 1:3. Poucas amostras estiveram livres de cada uma destas variantes. Em conclusão, a expressão do gene WFDC1 e de sua variante WFDC1 correlaciona-se com a diferenciação das células musculares lisas, mas não está condicionada a ela, enquanto a expressão de Delta 3 é completamente independente deste parâmetro e tem correlação positiva com o progressão do PCA, quando o sistema de classificação de Gleason (Gleason 1 + Gleason 2) foi considerado. Adicionalmente, fatores independentes da idade, incidência de BPH ou PCA, são mais influentes na determinação da quantidade total e da proporção entre as duas variantes / Abstract: The prostate gland is intimately related with reproductive and urinary functions, commonly disturbed by a series of diseases. Besides reducing the quality of life, they consist in serious life risk particularly to the aging men. Dynamic interactions between the epithelium and stroma in the gland regulate various aspects of development, function and pathologies. The WFDC1 gene is expressed by smooth muscle cells in the prostate stroma and its product ps20 was shown to control epithelial cell behavior, extracellular matrix organization and angiogenesis. It is supposed to function as a serine protease inhibitor, as other members of its family do. Two transcripts are produced as a result of alternative splicing. The first (WFDC1) retains all exons and the second (Delta 3) lacks the exon 3. In this work, we investigated the quantitative relationship among these two splicing variants, using qRT-PCR (Taqman) probing the junctions between exons 2-3 and 2-4, in benign prostatic hyperplasia (BPH) and prostate cancer (PCA) samples from tissue banks. The expression of the MYH11 gene was used to estimate the content of smooth muscle cells in the samples. The results demonstrate that the samples could be divided in two groups with low or high expression of MYH11, the first corresponding to the lower quartile of expression values). WFDC1 and MYH11 expression were correlated in the BPH samples. Delta 3 expression was independent of both WFDC1 and from WFDC1. The ratio between the variants WFDC1 and Delta 3 varied exponentially in five orders of magnitude. The the ratio between the two variants also varied exponentially, with BPH and PCA samples arranged in discrete and intercalated subgroups. The distribution of populations with different expression levels preserved the ratios 10:1, 1:1 and 1:3. Either variant was absent in only a few samples. In conclusion, the expression of WFDC1 and it WFDC1 variant correlates with but is not conditioned to the differentiation of smooth muscle cells, while Delta 3 is completely independent and is positively correlated with PCA grade (as assessed by the summed Gleason score). Unknown factors independent of age, BPH or PCA incidence are likely influencing Delta 3 expression / Doutorado / Biologia Celular / Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Endometrial carcinoma, which is preceded by non-malignant hyperplasia, is the fifth most common cancer in women worldwide. Various genetic alterations appear to be early events in the pathogenesis of endometrial cancer. The PTEN/MMAC1/TEP1 gene is most commonly mutated in endometrioid adenocarcinoma. This gene, on chromosome 10q23, codes for a tumour suppressor protein which displays lipid and dual-specific protein phosphatase activity. It has been implicated in several signal transduction pathways and seems to be involved in the negative regulation of the PI3K-, the MAPK- and the FAK pathways. Studies have shown that caucasian Americans have a 4-fold higher frequency of PTEN mutations than African Americans. An association of PTEN mutation status with clinical outcome has been found, where patients with PTEN mutation-positive endometrial carcinoma had a better prognosis than those without PTEN mutations. It has been hypothesized that the molecular pathogenesis of endometrial carcinoma within Caucasians and Black African groups may be different. The present study aimed to investigate the PTEN gene in caucasians and Black South African women with endometrial hyperplasia and carcinoma. The correlation between the frequency and type of mutations and the pathological features of the cancers (stage and grade) were also assessed. Paraffin¬embedded tissue samples from patients with endometrial hyperplasia [n=10] and cancer [n=47] were analysed for PTEN mutations using exon-by-exon PCR-SSCP. Thirty-two mutations were detected of which 24 were pathogenic (23 in the adenocarcinomas, one in the hyperplasias). These included 10 frameshift, 7 nonsense, 4 missense and 3 splice site mutations. Pathogenic mutations were located throughout the gene with the highest frequency observed in exon 5 (39.1%; 9/23), followed by exons 1 and 8 (both 17.4%; 4/23). This data does not differ significantly from published findings (P>0.05; x2-test). Pathogenic mutations were present in 54% (20/37) of the endometrioid adenocarcinomas and 10% (1/10) of the hyperplasias. No mutations were detected in the serous papillary cancers and poorly differentiated carcinomas. Fifty-five % (6/11) of tumours from Caucasians and 52% (13/25) of the tumours from Black South Africans had genetic alterations. When comparing the African and caucasian groups there were no significant differences with regards to PTEN mutation frequency (P>0.05; x2-test). Mutations occurred in early and advanced stage endometrial carcinomas, although the majority of the samples were stage 1 endometrioid adenocarcinomas. In the present study no association between the frequency of PTEN mutations and the grade and stage of the endometrial cancer were found (P>0.05; x2-test). To validate these observations, however, a larger sample size representative of all the grades and stages of endometrial carcinoma needs to be analyzed. / Dissertation (MSc (Human Genetics))--University of Pretoria, 2006. / Genetics / unrestricted

Cardiomyocyte perinatal development is characterized by the transition from a hyperplastic to a hypertrophic growth. We hypothesize that genetic factors and processes in the cardiac perinatal transitional program can be identified by a systematic analysis of different stages in heart development. Microarray expression patterning of mRNAs and microRNAs uncovered a perinatal cardiogenomic switch between 5 and 7 days post-birth. Gene ontology analysis revealed cellular and metabolic processes as highly representative Biological Processes. Moreover, approximately 40% of known mice transcription factors are significantly (p<0.05) fluctuating between embryonic day 19 and 10 days post-birth. As the heart matures, cardiomyocytes progressively exit cell cycle with day 5 as a pivotal point. Hypertrophy entails cardiomyocyte binucleation which may be promoted by Protein Regulator of Cytokinesis (Prc1) and its interactors. Temporal cardiac transcription expression analysis provides insight into underlining effectors within the cardiac perinatal transitional program as well as cardiac pathology.

Orientadores: Wagner Eduardo Matheus, Ubirajara Ferreira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T09:15:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alonso_JoaoCarlosCardoso_M.pdf: 3539592 bytes, checksum: 0be37d55627566f90e50845617162ed4 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Introdução: Os andrógenos, além de desempenhar um papel importante no desenvolvimento e no crescimento da próstata, também são responsáveis pelo surgimento e progressão de lesões prostáticas. Portanto, as ações desses hormônios podem ser antagonizadas impedindo a conversão irreversível de testosterona em dihidrotestosterona, por meio da inibição da 5?-redutase. Neste contexto, os objetivos deste estudo foram caracterizar os efeitos clínicos e morfofuncionais da dutasterida, um inibidor de 5?-redutase, em receptores de hormônios esteroides no tecido da próstata humana normal, bem como para verificar a viabilidade desses receptores como potenciais marcadores para o manejo clínico dos pacientes em uso de dutasterida. Métodos: estudo prospectivo, duplo-cego e randomizado que avaliou 49 homens com idades entre 45 e 70 anos, sem alterações no exame de toque retal e com dosagens de PSA entre 2,5 e 4,0 ng/ml. Estes pacientes foram submetidos a biópsia de próstata guiada pelo ultrassom transretal, e após ter sido descartada neoplasia de próstata, foram divididos em dois grupos recebendo dutasterida (n=25) ou placebo (n=24). Os pacientes foram avaliados clinicamente a cada trimestre e, ao final de 12 meses, submetidos a novos testes laboratoriais e análise histopatológica por nova biópsia da próstata. Resultados: Os resultados não mostraram variações significativas nos níveis de estrógeno, testosterona séricos e índice de massa corporal em ambos os grupos, bem como de ER? (receptor estrogênico ?). No entanto, a imunorreatividade para AR (receptor androgênico) e ER? (receptor estrogênico ?) foram significativamente maiores no grupo dutasterida em relação ao grupo placebo, acompanhado por uma redução significativa do volume da próstata e dos níveis de PSA séricos no grupo dutasterida. Além disso, ambos os índices de proliferação e apoptose também foram significativamente maiores no grupo dutasterida, porém a razão proliferação/apoptose foi significativamente menor neste grupo, indicando assim predominância de apoptose. Conclusão: O tratamento com dutasterida mostrou distintas reatividades no tecido prostático normal, apontando a importância da ativação de ER? no mecanismo apoptótico, propiciando efeito protetor no tecido prostático normal, indicando ser este receptor um importante mediador para o seguimento clínico de pacientes em uso de dutasterida / Abstract: Introduction: The androgens, besides playing an important role in prostate development and growth, are also responsible for the development and progression of prostatic lesions. Therefore, preventing the irreversible conversion of testosterone into dihydrotestosterone by inhibiting 5?-redutase can antagonize the actions of these hormones. In this context, the aims of this study were to characterize the clinical and morphofunctional effects of 5?-redutase inhibitor, dutasteride, on steroid hormone receptors in the human normal prostate tissue, as well as to verify the viability of these receptors as potential markers to clinical management of patients on dutasteride use. Methods: Prospective, randomized and double-blind study, evaluating 49 men with ages between 45 and 70 years, no alterations in digital rectal examination and PSA levels between 2.5 and 4.0 ng/ml. These patients underwent prostate biopsy guided by transretal ultrasound (TRUS) with prostate neoplasia ruled out and it has divided into two groups receiving dutasteride (n=25) or placebo (n=24). Patients were clinically assessed every three months and at the end of 12 months undergoing new laboratory tests, prostate rebiopsy, histopathological and clinical analysis. Results: The results did not show significanty variations in serum estrogen and testosterone levels and body mass index in both dutasteride and placebo groups, as well as their ER? (? estrogen receptor). However, AR (androgen receptor) and ER? (? estrogen receptor) immunoreactivity were significantly higher in the dutasteride group in relation to placebo group, followed by a significant reduction in prostate volume performed by TRUS and total serum PSA levels in the dutasteride group when compared to placebo group. Furthermore, both proliferative and apoptotic indices were significantly higher in the dutasteride group in relation to placebo group. However, the proliferation/apoptotic ratio was significantly lower in the dutasteride group, indicating predominance of apoptotic process. Conclusion: The dutasteride treatment led to distinct reactivities in the normal prostate tissue, indicating different signals to the dynamics of the prostate and pointed out the importance of ER? pathways in the activation of apoptosis. Taken together, these data demonstrated that dutasteride treatment exerted protective effect in the normal prostate via ER?, indicating this receptor as important mediator to clinical management of patients on dutasteride use / Mestrado / Fisiopatologia Cirúrgica / Mestre em Ciências