A análise do DNA pode ser considerada um dos principais progressos técnicos para investigação criminal desde a descoberta das impressões digitais. Seu surgimento trouxe novos paradigmas para os critérios utilizados na formulação da culpabilidade no campo do Direito Penal, bem como no estabelecimento da certeza jurídica nas relações de filiação, campo do Direito Civil. Foi incorporada à rotina forense pelas polícias de países do primeiro mundo e começa a ser introduzida no contexto pericial em alguns Estados do Brasil. No entanto, o uso destas técnicas de identificação genética origina uma série de exigências de qualidade e excelência aos laboratórios que as realizam. Portanto, definição de normas, estabelecimento de padrões e criação de sistemas de credenciamento e certificação tornaram-se absolutamente necessários. Levando-se em consideração a crescente influência exercida pelo DNA no contexto forense, este trabalho teve como objetivo conhecer a realidade brasileira diante desta tecnologia e a importância da atuação do cirurgião-dentista na equipe forense. Para isso, tentou-se contato com o serviço oficial de identificação central da capital de cada um dos vinte e seis estados brasileiros além do Distrito Federal. Participaram da pesquisa 17 (dezessete) Estados (Minas Gerais, Goiás, Rio Grande do Sul, Pará, Pernambuco, Alagoas, Paraná, São Paulo, Paraíba, Bahia, Rio de Janeiro, Roraima, Amapá, Maranhão, Rio Grande do Norte, Ceará e Tocantins). A coleta de dados foi realizada através de um questionário. A partir deste foi possível estabelecer que a maioria dos serviços (88%) faz uso da técnica de identificação genética. Dentre estes, apenas o Rio Grande do Norte não adota protocolos de coleta e armazenamento das amostras biológicas. O sangue é a amostra biológica de eleição, porém em casos de ossadas ou quando o cadáver encontra-se carbonizado e/ou avançado estado de decomposição, os dentes são utilizados como fonte de DNA. Geralmente as amostras biológicas coletadas são provenientes de crimes sexuais. Apesar de marcas de mordida serem evidências freqüentemente encontradas em crimes desta natureza, a coleta de saliva (suabe) é realizada apenas em 43% dos Estados. Dentre as diversas categorias de profissionais que compõem a equipe de DNA forense, os farmacêuticos se destacam (43%). Possuem certificado de creditação apenas 50% dos laboratórios (São Paulo, Rio de Janeiro, Paraná, Rio Grande do Sul, Bahia, Roraima e Amapá). O presente trabalho permitiu compreender a maneira pela qual esses serviços estão se estruturando e desenvolvendo essa tecnologia. Através dos resultados obtidos neste estudo foi possível verificar a influência crescente exercida pela técnica de DNA nos processos de identificação, a importância da atuação de uma equipe multiprofissional - uma vez que a contribuição de cada área e a metodologia empregada no processo serão influenciadas pela condição do material biológico apresentado para o exame - e ressaltar a importância dos conhecimentos específicos do odontolegista, principalmente pelo fato dos elementos dentários e da saliva constituírem potenciais fontes de DNA. / The analysis of DNA can be considered major technical advances for criminal investigation since the discovery of fingerprints. Its emergence has brought new paradigms for the criteria used in the formulation of culpability in the field of criminal law, as well as the establishment of legal certainty in relations of affiliation, field of civil law. It was incorporated in routine forensic police from the countries of first world and beginning to be introduced in the context expert in some Brazilian states. However, the use of these techniques of genetic identification, gives quality requirements and excellence laboratories that perform them. Therefore, setting standards, setting principle and creating systems of accreditation and certification have become absolutely necessary. Taking into account the growing influence of the DNA in the forensic context, this study aimed to know the Brazilian reality on this technology and the importance of the role of surgeon-dentist in the forensic team. For this reason, attempts were made to contact the department\'s official identification center of the capital of each of the twenty-six Brazilian states than the Federal District. Participated in the survey 17 (seventeen) States (Minas Gerais, Goiás, Rio Grande do Sul, Para, Pernambuco, Alagoas, Paraná, São Paulo, Paraíba, Bahia, Rio de Janeiro, Roraima, Amapá, Maranhão, Rio Grande do Norte, Ceara and Tocantins). Data collection was conducted through a questionnaire. From this could be established that the majority of services (88%) made use of the technique of genetic identification. Among these, only the Rio Grande do Norte do not adopt protocols for collection and storage of biological samples. The blood is the biological sample of choice, but in cases of carcass or when the corpse is carbonized and / or advanced state of decomposition, the teeth are used as a source of DNA. Usually the samples are collected from sexual crimes. Despite the bite marks are frequently found evidence in such crimes, the collection of saliva (swab) is performed only in 43% of the states. Among the various categories of professionals who make up the team of forensic DNA, pharmacists are stressed (43%). They certificate of accreditation of laboratories only 50% (São Paulo, Rio de Janeiro, Paraná, Rio Grande do Sul, Bahia, Roraima and Amapá). This work could understand the way in which these services are structuring and developing this technology. Through the results of this study was to check the growing influence exercised by the technique of DNA in cases of identification, the importance of the many occupational, since the contribution of each area and the methodology employed in the process will be influenced by the condition of biological material submitted for review and emphasize the importance of specific knowledge of forensic dentist, mainly because of dental elements, in cases of advanced decomposition and charring, and the saliva, bite marks on this, are potential sources of DNA.

A hanseníase é uma doença infectocontagiosa crônica que ainda se constitui um problema de saúde pública no Brasil. No início do século XX, pessoas diagnosticadas com hanseníase foram isoladas compulsoriamente em hospitais-colônias construídos especialmente para esta finalidade. A política de segregação também se estendia aos filhos dos pacientes que eram separados dos pais e enviados para preventórios ou encaminhados para adoção, formal ou informalmente. Assim, famílias inteiras foram separadas. Em vários destes casos, as pessoas não tem a menor ideia de sua origem e buscam alguma informação sobre sua história. Alguns possuem alguma informação sobre supostos familiares, mas sem comprovação se são mesmo parentes. O Projeto Reencontro é um protocolo de cooperação entre o INAGEMP e o MORHAN, criado para auxiliar o Projeto "Filhos Separados‟ do MORHAN. O objetivo principal foi realizar a identificação, a partir da análise de vínculo biológico através de testes de DNA, de filhos separados dos pais internados compulsoriamente em hospitais-colônia brasileiros, que não conseguem provar seu parentesco através de documentos. Foram realizadas coletas de dados e de DNA de 441 indivíduos, em 14 cidades de 11 estados brasileiros. A maioria dos participantes era do sexo feminino (62,6%) e nascida entre os anos de 1960 a 1979 (53,7%), com idade, no momento da coleta, entre 23 a 106 anos. Noventa e quatro participantes nasceram durante a internação dos pais, e 18 hospitais-colônias foram citados como local destes nascimentos. A separação entre os familiares ocorreu logo ao nascimento em 63,4% dos casos. O destino das crianças separadas se mostrou bastante diverso, sendo a adoção informal o mais frequente (54,8%). A maioria dos participantes (62,6%) apresenta alguma inconsistência no documento de identificação oficial, sendo a falta do nome de um ou dos dois genitores a mais comum. A parentalidade e a irmandade foram os vínculos mais comuns a serem investigados, destacando-se a investigação entre mães/filhos (28,9%) e irmandade completa (36,5%). Os resultados dos testes de vínculo biológico confirmaram a maioria (88,4%) dos supostos parentescos entre os participantes do Projeto Reencontro com probabilidades acima de 98%. Isto mostra que, de certa forma, alguma ligação entre eles ainda permaneceu mesmo após a separação, bem como uma história oral sobre os seus laços familiares. / Leprosy is a chronic infectious disease that still constitutes a public health problem in Brazil. In the early twentieth century, people diagnosed with leprosy were isolated compulsorily in hospitals-colonies built especially for this purpose. The segregation policy was also extended to the children of patients who were separated from their parents and sent to “preventórios” – specialized orphanage – or forwarded for adoption, formally or informally. Thus, many families were separated. In several of these cases, people have no idea of its origin and seek some information about their history. Some have any information about alleged family but without proof if they are even relatives. The Reencontro Project is a cooperation protocol between INAGEMP and MORHAN, created to support the 'Separated Children' Project of MORHAN. The main objective was to identify, from the biological linkage analysis through DNA tests, children separated from the parents hospitalized compulsorily in Brazilian hospital-colonies, who can not prove their kinship through documents. Data and DNA data were collected from 441 individuals in 14 cities in 11 Brazilian states. Most participants were female (62.6%) and born between the years 1960 to 1979 (53.7%), with age, at the time of collection, between 23 and 106 years. Ninety-four participants were born during the hospitalization of parents, and 18 hospitals colonies were cited as the location of these births. The separation of relatives occurred at birth in 63.4% of cases. The destination of separated children was diverse, and informal adoption was the most frequent (54.8%). The most of participants (62.6%) showed some inconsistency in the official ID, and the lack of the name of one or both parents were the most common. Parenthood and brotherhood were the most common links to be investigated, especially the research among mothers / children (28.9%) and complete sibship (36.5%). The results of the biological tests confirmed the majority (88.4%) of the alleged kinship between the participants of the Reencontro Project with probabilities over 98%. This shows how some kind of bonds remained even after separation, as well as an oral history about their family links.

SOARES, A.T.C. Perfil antropológico das ossadas analisadas no Centro de Medicina Legal (CEMEL) da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto USP. 2007. 169 p. Dissertação (Mestrado) Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Ribeirão Preto, 2007. A Antropologia Forense é uma área do conhecimento que aplica os métodos da antropologia física e arqueologia para coleta e análise de evidências legais, buscando estabelecer a identidade de um ser. O Centro de Medicina Legal (CEMEL) da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo (FMRP-USP) possui um Laboratório de Antropologia Forense, criado em 2005 durante o desenvolvimento de um projeto em parceria com a University of Sheffield (UK) e financiado pelo British Foreign and Commonwealth Office Global Opportunities Fund. Durante esse projeto, um protocolo para análise de ossadas foi implementado dentro de uma estrutura científica atualizada para aplicação em contextos de importância social. Após dois anos de funcionamento, constatou-se que muitas das ossadas encaminhadas ao CEMEL estavam incompletas, tornando a realização de um perfil biológico difícil e postergando a sua identificação devido à ausência de informações e literatura nacional recente sobre Antropologia Forense. Assim, 42 ossadas humanas examinadas no CEMEL desde sua inauguração em 1999 foram analisadas e revisadas. Os resultados mostraram que a maioria dos casos era de indivíduos do sexo masculino, de ancestralidade caucasiana, com idade entre 32,71 e 46,29 anos, estatura entre 1,64 e 1,73m, destros, sem achados patológicos, com elementos odontológicos informativos, mas sem roupas ou outros pertences. Observou-se que 61,90% das ossadas possuíam menos de 50% dos ossos, com média de 79,64±52,40 ossos por caso. Os ossos mais encaminhados foram occipital, parietal esquerdo, temporal esquerdo, parietal direito, temporal direito, fêmur direito e vértebras torácicas de um a 12. Os ossos menos encaminhados foram hióide, piramidal esquerdo, falange distal superior um direita, falanges distais superiores dois a cinco direitas e falanges médias superiores dois a cinco esquerdas. Os dentes mais encaminhados foram o 2º molar superior direito e o 1º molar superior direito, enquanto que os dentes menos encaminhados foram o incisivo central superior direito, os incisivos centrais inferiores direito e esquerdo. Roupas e outros pertences estavam presentes em 20 casos, totalizando 66 itens. Trinta e um casos têm potencial para identificação somente através de técnicas de Antropologia Forense. Para os demais 11 casos provavelmente será necessário utilizar DNA para identificação. Diante dos resultados observados, discute-se a necessidade de melhorias na capacitação técnica e infra-estrutura, assim como a forma de coleta e o transporte, de forma a aumentar o número de elementos ósseos coletados e, conseqüentemente, de informações úteis para identificação. Dois crânios apresentaram evidência de craniotomia realizada durante necropsia e um apresentou resíduos de vela, o que sugere que podem ter sido retirados indevidamente do local de sepultamento, ou até mesmo vendidos, além da sua utilização em rituais religiosos. Conclui-se que campanhas de conscientização e melhorias na fiscalização dos cemitérios podem reduzir os casos de roubos e comércio de elementos ósseos. / SOARES, A.T.C. Anthropological profile of the skeletons analyzed at the Medico Legal Centre (CEMEL) of the Faculty of Medicine of Ribeirão Preto USP. 2007. 169 p. Dissertation (Masters Degree) Faculty of Medicine of Ribeirão Preto, Ribeirão Preto, 2007. Forensic Anthropology is an area of knowledge that applies the methods of physical anthropology and archeology to the collection and analysis of legal evidence, including the search for individual identity. The Medico Legal Centre (CEMEL) of the Faculty of Medicine of Ribeirão Preto of University of São Paulo (FMRP-USP) has a Laboratory of Forensic Anthropology, created in 2005 during a development project in partnership with the University of Sheffield (UK) and financed by the British Foreign and Commonwealth Office Global Opportunities Fund. During this project, a protocol for skeletal analysis was implemented within an upgraded scientific infrastructure for application in a socially important context. After two years of work, it was noticed that many skeletons forwarded to CEMEL were incomplete, making completion of a biological profile difficult and postponing identification due to the lack of information and recent national literature about Forensic Anthropology. Therefore, 42 human skeletons examined at CEMEL since its inauguration in 1999 were analyzed and reviewed. The results showed most cases to be of male individuals, of Caucasian ethnic origin, aged between 32.71 and 46.29 y.o., of height between 1.64 and 1.73 m, right handed, without any pathological findings, with informative odontological findings, but with no clothes or other belongings. It was observed that 61.90% of the skeletons were less than 50% complete, with a mean of 79.64±52.40 bones per case. The most frequently found bones were the occipital, left parietal, left temporal, right parietal, right temporal, right femur and one to 12 thoracic vertebrae. The least frequent bones were the hyoid, left triquetral, 1st right superior distal phalanx, two to five right superior distal phalanges and two to five left superior intermediate phalanges. The most frequently found teeth were the right superior 2nd molar and right superior 1st molar, while the least frequent teeth were the right superior central incisor, and right and left inferior central incisors. Clothes or other belongings were present in 20 cases, totaling 66 items. Thirty one cases have potential to be identified only via forensic anthropological analysis. For the remaining 11 cases it will be probably necessary to use DNA for identification. In view of these observations the necessity for improvements in technical qualifications and infrastructure are discussed, as well as recovery and transport, in order to maximize the number of skeletal elements recovered andas a consequenceof information useful in identification. Two skulls presented evidence of a craniotomy conducted during autopsy and one of candle residue, suggesting that it may have been taken improperly from the place of burial, or even sold, for its use in religious rituals. It is concluded that public awareness campaigns and better inspection of cemeteries may reduce cases of robbery and trade in skeletal remains.

A identificação humana é algo que vem sendo estudado desde o século XIV e a cada dia vem se aperfeiçoando mais. Desta forma este estudo tem como proposta um método de identificação auxiliar aos já existentes, obtido por meio das rugas palatinas, que são estruturas localizadas na mucosa do palato duro, envolvendo papila incisiva, rafe mediana e rugas palatinas. Este estudo objetivou criar uma metodologia mais simples no uso deste método de identificação, por meio do uso de imagens digitalizadas e programas específicos para tal fim. A amostra foi constituída por 100 modelos e os respectivos prontuários. Inicialmente foram delimitadas as rugas palatinas, a papila incisiva e a rafe mediana com lapiseira 0,1 mm de espessura e grafite tipo HB, nos modelos dos sujeitos da pesquisa. Participaram da pesquisa três avaliadores, para que o estudo fosse cego: o avaliador 1 foi responsável pela seleção dos modelos iniciais; o avaliador 2 fez as cópias em scanner (para criar banco de dados); e o avaliador 3 re-numerou os modelos para que fossem sobrepostos pelo avaliador 2 e na seqüência fosse analisada a coincidência de pontos, para a possível identificação. Os modelos foram digitalizados e analisados por meio do programa Photoshop 7.0.1. Os resultados, encontrados por meio de análise de concordância de pontos não coincidentes, permitiram um percentual de 100 % de acerto na identificação, sendo então possível a identificação de todos os indivíduos por meio da metodologia proposta. A amostra apresentou 85% de pessoas do fenótipo cor da pele branco, 10 % negro, 5 % amarelo, a faixa etária envolveu indivíduos entre 8 e 30 anos de idade. Os resultados encontrados suportam as seguintes conclusões: que é possível realizar a identificação humana por meio das rugas palatinas, desde que haja um banco de dados prévio; as imagens podem ser arquivadas em CD-ROM, portanto, diminuindo o espaço utilizado para armazenamento dos dados pessoais de cada indivíduo; é um método de identificação seguro, por permitir análise relacionando 5 critérios, o que excluiu as chances de erros, pois nenhum modelo foi coincidente em nenhum ponto com outro, que não com o próprio. / The identification human being is something that comes being studied since century XIV and to each day it comes if perfecting more. In such a way this study a method of identification auxiliary to already the existing ones has as proposal, gotten by means of palatal rugae, that are structures located in the mucosa of the hard palate, involving papila incisive, rafe medium and palatal rugae. Having as objective to create a simpler methodology in the use of this method of identification, through the use of digitalized images and specific programs for such end. The sample was constituted by 100 models and respective handbooks. Initially they had been delimited palatal rugae, papila incisive and rafe medium with pencil 0.1 mm of thickness and graphite type HB, in the models of the citizens of the research. Three appraisers had participated of the research, so that the study he was blind: appraiser 1 was responsible for the election of the initial models; appraiser 2 made the copies in scanner (to reate data base); e appraiser 3 re-numbered the models so that they were overlapped by appraiser 2 and in the sequence the coincidence of points was analyzed, for the possible identification. The models had been digitalized and analyzed by means of the program Photoshop 7.0.1. The results, found by means of analysis of agreement of not coincident points, had allowed to a percentage of 100% of rightness in the identification, being possible the identification of all the individuals by means of the methodology proposal. The sample presented 85% of people of color of the white skin, 10% black, 5% yellow, the aged band involved individuals between 8 and 30 years of age. The joined results support the following conclusions: that she is possible to carry through the identification human being by means of palatal rugae, since that has a previous data base; the images can be filed in CD-ROM, therefore, decreased the space used for storage of the personal datas of each individual; it is a safe method of identification, for allowing to analysis relating 5 criteria, what it excluded the possibilities of errors, therefore no model was coincident in no point with another one, that not with the proper one.

A hanseníase é uma doença infectocontagiosa crônica que ainda se constitui um problema de saúde pública no Brasil. No início do século XX, pessoas diagnosticadas com hanseníase foram isoladas compulsoriamente em hospitais-colônias construídos especialmente para esta finalidade. A política de segregação também se estendia aos filhos dos pacientes que eram separados dos pais e enviados para preventórios ou encaminhados para adoção, formal ou informalmente. Assim, famílias inteiras foram separadas. Em vários destes casos, as pessoas não tem a menor ideia de sua origem e buscam alguma informação sobre sua história. Alguns possuem alguma informação sobre supostos familiares, mas sem comprovação se são mesmo parentes. O Projeto Reencontro é um protocolo de cooperação entre o INAGEMP e o MORHAN, criado para auxiliar o Projeto "Filhos Separados‟ do MORHAN. O objetivo principal foi realizar a identificação, a partir da análise de vínculo biológico através de testes de DNA, de filhos separados dos pais internados compulsoriamente em hospitais-colônia brasileiros, que não conseguem provar seu parentesco através de documentos. Foram realizadas coletas de dados e de DNA de 441 indivíduos, em 14 cidades de 11 estados brasileiros. A maioria dos participantes era do sexo feminino (62,6%) e nascida entre os anos de 1960 a 1979 (53,7%), com idade, no momento da coleta, entre 23 a 106 anos. Noventa e quatro participantes nasceram durante a internação dos pais, e 18 hospitais-colônias foram citados como local destes nascimentos. A separação entre os familiares ocorreu logo ao nascimento em 63,4% dos casos. O destino das crianças separadas se mostrou bastante diverso, sendo a adoção informal o mais frequente (54,8%). A maioria dos participantes (62,6%) apresenta alguma inconsistência no documento de identificação oficial, sendo a falta do nome de um ou dos dois genitores a mais comum. A parentalidade e a irmandade foram os vínculos mais comuns a serem investigados, destacando-se a investigação entre mães/filhos (28,9%) e irmandade completa (36,5%). Os resultados dos testes de vínculo biológico confirmaram a maioria (88,4%) dos supostos parentescos entre os participantes do Projeto Reencontro com probabilidades acima de 98%. Isto mostra que, de certa forma, alguma ligação entre eles ainda permaneceu mesmo após a separação, bem como uma história oral sobre os seus laços familiares. / Leprosy is a chronic infectious disease that still constitutes a public health problem in Brazil. In the early twentieth century, people diagnosed with leprosy were isolated compulsorily in hospitals-colonies built especially for this purpose. The segregation policy was also extended to the children of patients who were separated from their parents and sent to “preventórios” – specialized orphanage – or forwarded for adoption, formally or informally. Thus, many families were separated. In several of these cases, people have no idea of its origin and seek some information about their history. Some have any information about alleged family but without proof if they are even relatives. The Reencontro Project is a cooperation protocol between INAGEMP and MORHAN, created to support the 'Separated Children' Project of MORHAN. The main objective was to identify, from the biological linkage analysis through DNA tests, children separated from the parents hospitalized compulsorily in Brazilian hospital-colonies, who can not prove their kinship through documents. Data and DNA data were collected from 441 individuals in 14 cities in 11 Brazilian states. Most participants were female (62.6%) and born between the years 1960 to 1979 (53.7%), with age, at the time of collection, between 23 and 106 years. Ninety-four participants were born during the hospitalization of parents, and 18 hospitals colonies were cited as the location of these births. The separation of relatives occurred at birth in 63.4% of cases. The destination of separated children was diverse, and informal adoption was the most frequent (54.8%). The most of participants (62.6%) showed some inconsistency in the official ID, and the lack of the name of one or both parents were the most common. Parenthood and brotherhood were the most common links to be investigated, especially the research among mothers / children (28.9%) and complete sibship (36.5%). The results of the biological tests confirmed the majority (88.4%) of the alleged kinship between the participants of the Reencontro Project with probabilities over 98%. This shows how some kind of bonds remained even after separation, as well as an oral history about their family links.

A análise do mtDNA vem sendo empregada, recentemente, em Ciência Forense, para identificação de indivíduos e resolução de casos criminais. Também vem sendo utilizada em estudos de genética de populações contribuindo com processos relacionados com o grau de miscigenação dos povos e com a ocupação dos diferentes continentes por populações humanas. O DNA mitocondrial está presente em inúmeras cópias por célula, é de origem materna e não sofre processos de recombinação, o que faz com que essa molécula seja uma poderosa ferramenta nesta área. A análise por mtDNA só é recomendada quando não existe mais fonte de DNA nuclear, ou quando este se encontra altamente degradado, como em amostras forenses. Um dos problemas encontrados é a interferência de artefatos durante as etapas pré e pós sequenciamento, na qual pode se obter uma seqüência de má qualidade. O presente estudo comparou e otimizou dez métodos de purificação de DNA mitocondrial, para amostras de restos mortais e in vivo, nas etapas pré e pós sequenciamento. A metodologia empregada consistiu em extrair o DNA da amostra biológica, amplificar por PCR, seqüenciar as referidas regiões do mtDNA das amostras selecionadas e analisar após eletroforese capilar. A enzima colagenase foi testada com o objetivo de avaliar sua eficiência na etapa de extração do DNA. Interligado a esta etapa, outro objetivo foi avaliar o grau de polimorfismo das regiões HVS-I e HVS-II do mtDNA em amostras da população do estado do Rio de Janeiro como forma de entender o fluxo gênico associado à formação da nossa população. Como conclusão, os melhores métodos de purificação utilizados foram o Centricon, seguido da purificação dos produtos amplificados pela resina da Amershan e dos produtos da reação de sequenciamento pela resina Sephadex. Houve baixa eficiência da enzima colagenase, indicando a presença de possíveis inibidores. Em relação ao banco de dados, foram encontrados 95 polimorfismos distintos na região HVS-I e 52 na região HVS-II. O polimorfismo mais freqüente na região HVS-I foi 16223 (74,5%), enquanto que na região HVS-II foi o 263 (60%). Foram encontrados 92 diferentes haplótipos na região HVS-I e 42 na região HVS-II. Podemos dizer que a população do Estado do Rio de Janeiro, via herança materna, é constituída, em maior parte, pelos africanos (50%), seguidos dos ameríndios (30%) com uma pequena participação dos europeus (21%), demonstrando a grande miscigenação do nosso estado. / Analysis of mtDNA has been employed, recently, in Forensic Science, for identification of peoples and solves criminal cases. So has been used in genetic populations studies and had contributed for understand of process related with degree of mixture people and with occupation of different continents by populations humans. Mitochondrial DNA is present in many copies by cell. It is maternal inheritance and not suffer recombination. So, this cell is powerful tool in this area. Analysis of mitochondrial DNA is recommend when not exist more nuclear DNA or it be degraded as in forensic samples. One of problems find are the artifact encountered during the phases before and after sequencing where can obtained the bad quality sequence. The present study compared and optimized methods of mitochondrial DNA purification to samples human remains and in vivo in phases before and after sequencing. The methodology of analysis by mitochondrial DNA consist in extract it of biological sample, amplify the regions HVS-I and HVS-II of control region, sequence the products amplified and analysis after electroforesis capilar. The colagenase was tested with objective of value its efficiency in phase DNA extraction. In relation that fase, other objective was value the degree polymorphisms in regions HVS-I and HVS-II of mtDNA in samples of population of Rio de Janeiro to contribute for understand of flow genetics associated to formation of our population. As conclusion, the best methods of purification used was Centricon, follow by purification of amplifications products by Amershan and purification od products sequencing by Sephadex. It had fall efficiency of colagenase indicate the presence of probable inhibitors. In relation of data base, was encountered 95 polymorfisms distincts in region HVS-I and 52 in region HVS-II. The polimorfism more often in region HVS-I was 16223 (74,5%), while in region HVS-II was 263 (60%). It was encountered 92 differents haplotypes in region HVS-I and 42 in region HVS-II. It had lower rates of heteroplasmy. We can said that the population of Rio de Janeiro state, by maternal inheritance, was determined, in more portion, by Africans (50%), follow by Amerindians (30%) with small portion of Europeans (21%), showing the bigger miscegenation of our state.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Novas metodologias de análise molecular voltadas para estudos populacionais, clínicos, evolutivos, da biodiversidade e identificação forense foram desenvolvidas com base em marcadores microssátelites ou STR Short Tandem Repeats. Os marcadores STR, que estão amplamente espalhados nos genomas e se caracterizam por apresentar alto grau de polimorfismo, podem ser analisados a partir da amplificação por PCR (Reação em Cadeia da polimerase). A análise foi facilitada a partir do desenvolvimento de sistemas de amplificação simultânea de múltiplos STR (multiplex STR) e com a detecção automatizada dos produtos de amplificação marcados por fluorescência. Recentemente, o uso de marcadores STR do cromossomo X (X-STR) tornou-se significativo na prática forense. Devido ao seu modo de transmissão, os X-STR são úteis em situações particulares de investigação de relações de parentesco, apresentando vantagens sobre o uso de STR autossômicos. Este estudo teve como principal objetivo o desenvolvimento e validação de sistema multiplex, denominado LDD (X-STR) Decaplex, capaz de amplificar dez loci X-STR (DXS7133, DXS7424, DXS8378, DXS6807, DXS7132, DXS10074, DXS7423, DXS8377, GATA172D05 e DXS10101) para aplicação em genética populacional, identificação e análises forenses. Utilizando o LDD (X-STR) Decaplex 170 indivíduos autodenominados afrodescendentes, não aparentados geneticamente, foram genotipados. As freqüências alélicas e genotípicas não apresentaram desvio do equilíbrio de Hardy-Weinberg e estão em concordância com aquelas observadas em outros estudos. Os haplótipos observados foram únicos em indivíduos de amostra masculina. A análise de desequilíbrio de ligação não revelou associação entre os marcadores X-STR. A diversidade genética foi elevada, variando entre 0,6218 para o locus DXS7133 a 0,9327 para o locus DXS8377. Os parâmetros de Probabilidade de Vinculação (PV), Índice de Vinculação (IV), Poder de Exclusão (PE), Poder de Discriminação e Razão de Verossimilhança foram também elevados, demonstraram que os dez X-STRs são altamente polimórficos e discriminativos na população estudada. A concentração mínima de DNA para a amplificação dos loci do LDD (X-STR) Decaplex é de 0,5 ng e verificamos que amplificação por PCR pode ser afetada quando são adicionados mais de 5 ng de DNA nas reações. Os percentuais de bandas stutter foram elevados para os loci DXS7132 e DXS8377. No teste de reprodutibilidade observamos consistência entre as tipagem de diferentes amostras biológicas, incluindo as de restos mortais. No teste de mistura a proporção limite em que observamos a coexistência de duas espécies biológicas foi de 2,5:1ng (feminino-masculino). Os resultados evidenciaram que os loci do LDD (X-STR) Decaplex são altamente informativos, consistindo, em conjunto, uma ferramenta importante em estudos de identificação humana e de relações de parentesco. / New molecular analysis technologies used to evolving clinic and population studies of biodiversity and forensic identification have been developed based on microsatellite markers or STR Short Tandem Repeats. These STR markers, which are widely spread on genomes and characterized by their high degree of polymorphism, can be analyzed by PCR (Polymerase Chain Reaction) amplification technology. This analysis was facilitated from the development of simultaneous amplification system of multiples STR (multiplex STR) and automatic detection of amplification products by fluorescence. Lately, the use of STR markers of chromosome X (X-STR) has become significant in forensic practice. Due to their transmission ways, X-STR are useful at especial kinship investigation, showing advantages in relation to the use of STR autosomal. This study main focus was the development and validation of the multiplex system called LDD (X-STR) Decaplex, which was able to amplify ten X-STR loci (DXS7133, DXS7424, DXS8378, DXS6807, DXS7132, DXS10074, DXS7423, DXS8377, GATA172D05 and DXS10101) in order to be used in population genetics application, identification and forensic analysis. By using LDD (X-STR) Decaplex 170, individuals, who were self-appointed Africandescendants and genetically unrelated, were genotyped. Allele and genotype frequencies have not shown Hardy-Weinberg equilibrium deviation and are in agreement with the ones observed in other studies. The observed haplotypes were unique in male individual samples. The linkage disequilibrium analysis has not shown any association among the X-STR markers. The genetic diversity was high, ranging from 0.6218 (DXS7133 locus) to 0.9327 (DXS8377 locus). The parameters of Probability of Relatedness (PR), Avuncular Index (AI), Power of Exclusion (PE), Power of Discrimination and Likelihood Ratios were also high, showing that these ten X-STRs are highly polymorphous and discriminating on the studied population. The minimum DNA concentration for the amplification of the LDD (X-STR) Decaplex loci is 0.5 ng and it was also verified that the PCR amplification can be affected when more than 5 ng of DNA are added to the reactions. The "stutter" bands percentages were high to DXS7132 and DXS8377 loci. At the reproducing test, consistency among typing of different biological samples was observed, including the ones from remains. At the mixing test, the limit proportion in which two biological species coexisted was 2.5:1 ng (female-male). The results point out that LDD (X-STR) Decaplex loci are able to provide many important piece of information which, as a whole, are a very important tool at human identification and of kinship studies.

Submitted by DANILO FAUSTINO BRAGANHOLI null (danilobraganholi@hotmail.com) on 2016-02-26T18:28:02Z No. of bitstreams: 1 TESE DOUTORADO DANILO FINAL.pdf: 5854320 bytes, checksum: 574fd8d3f97ad7193fe8490f98829058 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-02-29T13:48:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 braganholi_df_dr_araiq.pdf: 5854320 bytes, checksum: 574fd8d3f97ad7193fe8490f98829058 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-29T13:48:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 braganholi_df_dr_araiq.pdf: 5854320 bytes, checksum: 574fd8d3f97ad7193fe8490f98829058 (MD5) Previous issue date: 2016-02-17 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Os marcadores STR são os mais utilizados na rotina de identificação humana e genética forense, entretanto, os marcadores INDELs vem chamando a atenção dos pesquisadores desta área, pois sua análise pode ser uma ferramenta interessante por serem analisados com um fragmento menor que os STR e apresentarem baixa taxa de mutação, podendo ser utilizados na identificação de indivíduos e na avaliação de ancestralidade. Neste trabalho, caracterizamos as populações brasileiras dos estados de São Paulo e Espírito Santo pela análise de marcadores INDEL através de dois sistemas: 38 HID-INDELs, verificando a eficiência forense nas duas populações e comparando os dados com os de STRs rotineiramente utilizados na população de São Paulo; e 46 AIM-INDELs, avaliando as proporções de ancestralidade nas duas populações, e comparando os dados com os de marcadores uniparentais na população do Espírito Santo. Ambos os métodos foram eficientes para suas respectivas finalidades, sendo que o sistema 38 HID-INDELs apresentou alto poder de discriminação, para Espírito Santo (PD = 0,9999999999999990) e para São Paulo (PD = 0,999999999999994); e o sistema 46 AIM-INDELs confirmou a miscigenação das populações estudadas, e neste caso, com maior ancestralidade genética de europeus, em comparação a africanos e nativo-americanos. Além disso, inserimos o marcador amelogenina no sistema multiplex 38 HID-INDELs como uma ferramenta complementar para identificação de sexo de amostras degradadas. / The STR markers are the most used in routine of human identification and forensic genetics, however, INDEL markers has attracted the attention of those researchers in this area, because their analysis can be an interesting tool to be analyzed with a smaller fragment that STR and to present low mutation rate, may be used to identify individuals and evaluating ancestry. In this work, we characterized the Brazilian populations of the states of São Paulo and Espírito Santo by INDEL markers analysis through two systems: 38 HID-INDELs, checking the forensic efficiency in this two populations and comparing the data with STRs routinely used in São Paulo population; and 46 AIM-INDELs, assessing the proportions of ancestry in this two populations, and comparing the data with uniparental markers in Espírito Santo population. Both methods were effective for their respective purposes, the 38 HID- INDELs system showed high discrimination power to Espírito Santo (PD = 0.9999999999999990) and to São Paulo (PD = 0.999999999999994); and the 46 AIM- INDELs system confirmed the mixing of the populations studied, and in this case , with greater genetic ancestry of europeans, compared to africans and native americans. In addition, we insert the amelogenin marker in the 38 HID-INDELs multiplex system as a complementary tool to identificate the sex of degraded samples.

Este trabalho teve como objetivo avaliar, por meio de comparação com fotografias ante-mortem, a acuracidade da reconstrução facial forense manual e computadorizada de brasileiros adultos utilizando-se o método de Manchester. Foram reconstruídos os rostos a partir de 08 crânios, 04 femininos e 04 masculinos que foram exumados no Cemitério Municipal Necrópole do Campo Santo-Guarulhos/São Paulo. Esse estudo se justificou para possibilitar a utilização do método de Manchester considerando-se as profundidades de tecidos moles estabelecidas para brasileiros. Oito réplicas de gesso para a reconstrução manual, e oito modelos virtuais em 3D, obtidos por meio de tomografia para a computadorizada foram levados para o Centro de Anatomia e Identificação Humana da Universidade de Dundee/Escócia/Reino Unido. Utilizou-se argila para a manual e a tecnologia Sensable por meio do programa de computador FreeForm Modelling Plus, e do dispositivo tátil Phantom Haptic Desktop para a computadorizada. Avaliou-se a acuracidade das 16 reconstruções resultantes por meio de dois métodos: fotografias das reconstruções produzidas foram mostradas para 100 voluntários, que foram convidados a escolher o sujeito da fotografia em vivo quando incluído com outros cinco sujeitos aleatoriamente selecionados; e por meio de teste de semelhança, que comparou a fotografia da reconstrução com a do sujeito alvo lado a lado, o que foi feito também com dois sujeitos controle. Embora em ambos os testes os sujeitos alvo tiveram o melhor desempenho no número de acertos e no grau de semelhança, as reconstruções manuais obtiveram um melhor desempenho e o maior nível de acerto foi de 90% em um caso no teste de reconhecimento, enquanto na computadorizada foi de 81%. Este estudo demonstrou que o método de manchester em brasileiros, assim como o FreeForm Modelling Plus são ferramentas úteis e adequadas para o uso em reconstrução facial com níveis de sucesso muito significativos. / The aim of this study was to evaluate, by comparison with antemortem photographs, the accuracy of manual and computerized forensic facial reconstruction of adult Brazilians using the Manchester method. The faces were reconstructed from 08 skulls, 04 female and 04 male that were exhumed at the Municipal Cemitery Necropolis of Campo Santo-Guarulhos/Sao Paulo. This study is justified to allow the use of the Manchester method considering the soft tissue depths from Brazilian people. Eight plaster replicas made for manual reconstructions and eight 3D virtual models, obtained by tomography for computerized were taken to the Centre for Anatomy and Human Identification at the University of Dundee/Scotland/UK. Clay was used for the manual and the SensAble technology through the FreeForm Modeling Plus software and the tactil device Phantom Haptic Desktop for the computerized. The accuracy of 16 reconstructions resulting was evaluated by two methods: images of the reconstructions were produced and shown to 100 volunteers who were asked to choose the subject of photography in vivo when included with other five subjects randomly selected; and by the resemblance test, comparing the photograph of the reconstruction with the subject\'s target side by side, which was also done with two control subjects. Although in both tests the 08 subjects achieved the best results in the number of correct answers and in the degree of resemblance, the manual reconstruction achieved a better performance and the higher level of accuracy in one case was 90% in recognition test, while the computerized was 81%. This study showed that the Manchester method in Brazilians, as well as the FreeForm Modeling Plus are usefull and adequate tools for use in facial reconstruction with very significant levels of success.

No estudo das marcas de mordidas, os materiais biológicos relacionados à Odontologia, como o dente e saliva, são analisados por meio de evidências físicas (análise métrica e/ou emparelhamento físico) e evidências biológicas (análise de DNA). A partir de ambos os métodos pode-se estabelecer a identidade de um indivíduo, podendo assim, nas investigações forenses, apontar, ou mesmo identificar, um suspeito em uma cena de crime. O presente trabalho aplicou quatro métodos de análise física nas marcas de mordida produzidas em queijos e chocolates, bem como obter a recuperação de DNA, extraídos da saliva destes alimentos mordidos e de garrafas de água consumidas. Para tal, 20 participantes (10 do sexo masculino e 10 do sexo feminino) morderam cinco pedaços de queijo, cinco pedaços de chocolate e beberam em cinco garrafas de água, totalizando 15 amostras para cada um. As amostras produzidas foram armazenadas e analisadas em diferentes intervalos de temperatura (ambiente e geladeira) e tempo (imediato, três dias e sete dias). Na análise física, os métodos aplicados foram: análise métrica utilizando um paquímetro digital (Digital Caliper, Cixi Xinzheng Trade Co., Ltd., Zhejiang, China); análise métrica utilizando o software ImageJ (National Institutes of Health, Bethesda, Maryland); sobreposição manual; e a sobreposição digital por meio do software Adobe Photoshop (Adobe Systems, Inc., Mountain View,California, USA). Na análise biológica foram realizadas as seguintes etapas do exame de DNA: coleta da saliva pela técnica de duplo swab, extração do DNA utilizando Kit QIAamp (Qiagen, Hilden, Germany), quantificação do DNA recuperado através do equipamento espectofotômetro Nanodrop (Thermo Scientific™, Wilmington, DE, USA), amplificação dos marcadores utilizando o Kit de identificação humana AmpFLSTR Identifiler PCR Amplification (Applied Biosystems®, Carlsbad, CA, EUA) e a eletroforese em gel de agarose. De acordo com os resultados encontrados, não houve diferença significativa entre os dois métodos de análise métrica. Na análise de emparelhamento físico, o método manual obteve o maior número de identificados, com 58% para ambos os sexos, enquanto o método Adobe Photoshop apenas 32% das amostras foram identificadas para o sexo feminino e 44% no sexo masculino. O valor do índice de concordância intraobservador foi classificado como substancial para os métodos manuais em ambos os sexos e para o método Adobe Photoshop para o sexo masculino; e como moderado para o método Adobe Photoshop para o sexo feminino. Nas evidências biológicas, as amostras de DNA coletadas a partir da saliva depositada em queijos e chocolates mordidos e garrafas de água bebidas tiveram valores de concentração variando entre 28,52 ± 14,00 a 8,99 ± 2,20 ng/μl, e estas foram suficientes para amplificação. Com isso, conclui-se que amostras de águas, queijos e chocolates nas condições estudadas, que simularam alimentos mordidos e bebidas consumidas encontrados em cenas de crime ou armazenadas em geladeiras a espera da análise pericial, podem ser utilizadas nas investigações de identificação em marcas de mordida tanto para métodos de evidências físicas quanto para métodos de evidências biológicas. / In the study of bite marks, the biological materials related to dentistry, such as teeth and saliva, are analyzed by means of physical evidence (metric analysis and / or physical pairing) and biological evidence (DNA analysis). From both methods can establish the identity of an individual, thus allowing, in forensic investigations, point, or even identify a suspect in a crime scene. This study aimed to apply four methods of physical analysis in bite marks produced in cheeses and chocolates, as well as obtain recovery the DNA extracted from the saliva of bitten food and bottled water consumed. The sample was comprised of 20 volunteers, 10 males and 10 females. Each volunteer was instructed to bite five pieces of cheese, five pieces of chocolate and drink five bottles of water, producing 15 samples of each from the 20 participants. The produced samples were stored and analyzed in different temperature ranges - temperature (25°C) and refrigerator (4-8°C), and time (immediately, three days, seven days). The methods used were: metric analysis by using a digital caliper, digital metric analysis using ImageJ software (National Institutes of Health, Bethesda, Maryland); manual overlay of the plaster model of the dental arches versus plaster model of chewed food, and overlapping images using Adobe Photoshop software (Adobe Systems, Inc., Mountain View,California, USA). In biological testing, saliva collecting was done using the double swab technique, DNA extraction according to the extraction protocol of the QIAamp kit (Qiagen®, Hilden, Germany), quantification of recovered DNA using equipment Nanodrop spectrophotometer (Thermo Scientific™, Wilmington, DE, USA); amplification of the markers was performed by human identification kit Identifiler PCR Amplification AmpFLSTR (Applied Biosystems®, Carlsbad, CA, EUA) and agarose gel electrophoresis. According to the results, there was no significant difference between the two methods of metric analysis. In the physical pairing analysis, the manual method had the highest number of identified subjects with 58% for both sexes while with the Adobe Photoshop method only 32% of the samples were identified for females and 44 % males. The index value for intraobserver agreement was rated substantial for manual methods in both sexes and for Adobe Photoshop method for males; and as moderate for Adobe Photoshop method for females.In biological evidence, samples of DNA from saliva deposited in cheese and bitten chocolate, beverage and water bottles had concentration values ranging from 28,52 ± 14,00 a 8,99 ± 2,20 ng/μl, and these were sufficient for amplification. Thus, it was concluded that samples of water, cheeses and chocolates under the conditions studied, simulating bitten foods and beverages found at crime scenes or stored in refrigerators waiting for the forensic analysis can be used for investigations in identifying bite marks using both physical methods evidence as to biological method evidence.