Made available in DSpace on 2016-08-10T10:55:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JAIRO FIGUEIREDO JUNIOR.pdf: 1092705 bytes, checksum: e53e9da5866dc4681e74d326402f8e37 (MD5) Previous issue date: 2007-02-26 / Toxoplasma gondii is an obligatory intracellular parasite, capable of infecting a large variety of intermediate hosts including humans. In the domiciliary environment, the infected final hosts (cats) spread the oocists by their excrements, which quickly reach maturity in the ground and become infectants. Therefore, toxoplasmosis is acquired by humans through the ingestion of oocists found in the domiciliary environment or by eating insufficiently cooked meat, infected with cysts. The antitoxoplasma antibodies presence can be determined by several serologic reactions, using different serologic markers to distinguish recent infection from toxoplasma-illness. In this work, we carried out serologic assays, defined a curve by the digital recognition of color using the Toxo IgG Digital Microscopical Immunofluorescence. The curve was related with the results in UI/ml read by the quantitative determination of IgG antibodies for the Toxoplasma gondii of Toxo in the G VIDAS® system. The existing correlation between sera in UI/ml and their values found through the digitalized green intensity curve was evidenced. In the analysis between the predetermined sera in UI/ml and its read values, did not show differences that could affect the laboratorial diagnosis. The analysis of the behavior of the curves defined by this works, shows that the approach adopted by this work is promising. for the development of a novel method for Immunofluorescence analysis with significant gains in precision and price reduction. The rational use of technologies, even so the rationality is not neutral, implies the election of technologies to be financed and the identification of the conditions or sub-groups where they will have to be used, in the direction to become the system of more efficient health for the objective to protect and to recoup the health of the population. Correlation to the unemployment level social impact in companies affected by the technological modernization progress. The expectation is that it has, through public politics in set with private initiative, action for creation of courses that prepare the workers for the use of these new technologies. / O Toxoplasma gondii é um parasito intracelular obrigatório, capaz de infectar uma grande variedade de hospedeiros intermediários, incluindo o homem. No ambiente domiciliar, os hospedeiros definitivos infectados (gatos) eliminam os oocistos pelas fezes, os quais, rapidamente, atingem maturidade no solo e se tornam infectantes. Portanto, a toxoplasmose é adquirida pelo homem por meio da ingestão de oocistos encontrados no meio ambiente domiciliar ou de carnes infectadas com cistos e insuficientemente cozidas. A ocorrência de anticorpos antitoxoplasma tem sido determinada por diversas reações sorológicas, utilizando-se diferentes marcadores sorológicos que possibilitam distinguir infecção recente de toxoplasma-doença. Neste projeto de pesquisa, realizaram-se ensaios sorológicos em que a curva obtida pelo reconhecimento digital de cor, pela técnica de Imunofluorescência Microscópica Digital para Toxo IgG, foi relacionada com os resultados em UI/mL obtidos pela determinação quantitativa de anticorpos IgG para o Toxoplasma gondii do sistema VIDAS® Toxo G. Ficou evidenciada a correlação existente entre os soros em UI/mL predeterminados e seus valores encontrados através da equação da curva digitalizada da intensidade de verde. Na comparação entre os soros em UI/mL predeterminados e seus valores encontrados, não foram observadas diferenças que pudessem alterar o diagnóstico clínico-laboratorial. A utilização do conhecimento sobre o comportamento das curvas resultantes das interações das leituras visual e digital demonstra que a proposta deste trabalho é promissora para o desenvolvimento de uma nova forma de análise de imunoflourescência, com significativos ganhos de precisão e redução de preços. A racionalidade não é neutra, portanto o uso racional de tecnologias implica a seleção daquelas que devem ser financiadas e a identificação das condições ou subgrupos em que deverão ser utilizadas com o fim de tornar o sistema de saúde mais eficiente para proteger e recuperar a saúde da população. Com relação ao possível desemprego em empresas envolvidas no processo de modernização tecnológica, o que se espera é que, por meio de políticas públicas em conjunto com a iniciativa privada, sejam desenvolvidas ações no sentido de preparar os trabalhadores para o uso dessas novas tecnologias.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:55:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PAULO LUIZ CARVALHO FRANCESCANTONIO.pdf: 1917098 bytes, checksum: 4ed2ad7744c8c5690f722bdbc60c57b7 (MD5) Previous issue date: 2005-05-12 / The indirect immunofluorescence test is widely used in the clinical pathology laboratory. Among the tests in this group we have FAN, which means research of antibodies against components of the nucleus, nucleolus, cytoplasm and mitotic spindle. This test, used in the selection of auto antibodies, imposes some difficulties for its application such as: it requires two highly specialized technicians to read of the slides, what prevents automation of the process; low standardization; lack of documentation; decay of the fluorescence while reading of the slide; lack of standardization of the optic system; great variability of substrata and the dependence on the experience of the observer. These factors limit the use of the test to a small group of laboratories worldwide. This work aims at minimizing those difficulties by creating the basic knowledge on the behavior of the resultant curves of the interactions between visual and digital readings. The images visual read are digitally captured and the intensity of its fluorescent green is evaluated. We analyze the curves produced for five patterns of FAN: homogeneous nuclear pattern, speckled centromeric nuclear pattern, mixed fine speckled nuclear standard and mitotic spindle NuMa 1, mitotic spindle pattern NuMa 2 and nucleolar homogeneous pattern. The behavior of the resultant curves of the interaction of digital and visual readings shows that the digital readings within a single title in the same patterns can be differentiated in 96,7% of the cases. In a second within patterns analysis, homologous dilutions, with several titles in the same pattern were distinguished in 99,2% of cases. The inter patterns analysis, which assesses whether the calibration curve obtained using homogeneous nucleolar pattern can be used for the others patterns, we obtained 98,8% of concordance. The creation of a new technology through knowledge of the behaviors of the resultant curves of the visual and digital readings of FAN testes can cause what we call “technological unemployment”, this phenomenon can be aggravated if society is in a decreasing economic cycle. In Brazil there is a group of public policies theat guide the application of a fund to support worker qualification minimizing the impact caused by the introduction of a new technology. / O teste de imunofluorescência indireta é amplamente utilizado no laboratório de patologia clinica. Entre os ensaios efetuados, temos o FAN, que significa pesquisa de anticorpos contra componentes do núcleo, nucléolo, citoplasma e aparelho mitótico. Este ensaio, utilizado na triagem de auto anticorpos, apresenta algumas dificuldades para sua realização tais como: dois técnicos altamente especializados para a leitura das lâminas, o que impossibilita automação; baixo nível de padronização; pouca documentação queda da fluorescência durante a leitura da lâmina; falta de padronização do sistema óptico, a grande variabilidade dos substratos e a dependência da experiência do observador. Isto limita o uso do ensaio a um grupo menor de laboratórios em todo mundo. Este trabalho visa minimizar essas dificuldades criando o conhecimento básico do comportamento das curvas resultantes das interações de leituras visuais e digitais. As imagens lidas visualmente são capturadas digitalmente e têm a intensidade de seu verde fluorescente avaliadas. Analisamos as curvas produzidas por cinco padrões de FAN: padrão nuclear homogêneo, padrão nuclear pontilhado centromérico, padrão misto nuclear pontilhado fino e aparelho mitótico NuMa 1, padrão aparelho mitótico tipo fuso mitótico NuMa 2 e padrão nucleolar homogêneo. O comportamento das curvas resultantes da interação das leituras digitais e visuais mostra que os valores digitais das diluições dentro de um mesmo título em um mesmo padrão, podem ser diferenciados em 96,7% dos casos. Na segunda análise intrapadrão, as diluições homólogas, entre os diversos títulos dentro de um mesmo padrão, têm seus valores digitais diferenciados em 99,2% dos casos. A análise interpadrões, que avalia se a curva de calibração produzida utilizando o padrão nuclear homogêneo pode ser utilizada nos demais padrões, demonstrou um nível de concordância de 98,8% nos ensaios examinados. A criação de uma nova tecnologia derivada do conhecimento do comportamento das curvas resultantes das leituras visuais e digitais podem gerar o que denominamos desemprego tecnológico, essa situação pode ser agravada se a sociedade se encontra em um ciclo econômico decrescente. No Brasil existe um grupo de políticas publicas que orientam a aplicação do Fundo de amparo ao trabalhador na qualificação de sua mão de obra minimizando o impacto causado pela introdução de uma nova tecnologia.

Submitted by admin tede (tede@pucgoias.edu.br) on 2017-04-27T14:19:15Z No. of bitstreams: 1 GLAUCIELEN GOMES DA SILVA.pdf: 1992448 bytes, checksum: 7764de752332d80cd64fa3e7a9e1b7a1 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-27T14:19:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GLAUCIELEN GOMES DA SILVA.pdf: 1992448 bytes, checksum: 7764de752332d80cd64fa3e7a9e1b7a1 (MD5) Previous issue date: 2017-03-08 / The search for autoantibodies in HEp-2 cells represents a relevant tool for diagnostic assistance in the investigation of autoimmune diseases, especially rheumatic diseases. This methodology, over the last years, underwent by intense process of improvement and standardization with the accomplishment of the Brazilian Consensus. The objective of this study was to evaluate the implantation of recommendations in the clinical laboratories that perform the methodology, 16 years after the accomplishment of the I Brazilian Consensus on ANA in HEp-2 cells. A research was conducted for the laboratories between February and October 2016. The laboratories were invited to answer questions that dealt with the guidelines of the Consensus, addressing technical aspects, quality control, reading of the slides, issuance of reports and educational programs. The study counted on the participation of 53 laboratories that jointly realize an estimate of 300,000 ANA by month. It has been identified that several medical specialties request the examination, and different professionals are responsible for the technical procedure and reading of the fluorescence slides. Consensus recommendations are being followed by all laboratories, in absolute by 58.5% of the laboratories. Regarding the technical procedure, 83.1% of the participants are screening at a 1:80 dilution and the title depletion, recommended by consensus, is being adopted by all participants. It was evidenced that 39.6% of the participants use more than one brand of kit and that 22.6% performs titration of the conjugate to each new kit and different lamp powers are used in laboratories with a predominance of 100 Watts. Regarding the reading of the slides, 94.3% stated that they observed the four cell compartments, 92.5% said to classify the chromosome metaphase plate negative or positive and 32.1% of the participants did not affirm to observe the cells in all phases of the cycle. In the issue of reports, 13.2% of the laboratories admitted to reporting only the name of the standard followed by the title, not presenting the descriptive report and 24.5% of the participants do not use education and quality control programs. Most laboratories were able to identify representative images of sets of patterns. The results presented here demonstrate consistent advances from the implementation of the ANA Consensus in Brazil, but also evidence the need for actions to implement continuing education programs. / A pesquisa de autoanticorpos em células HEp-2 tem auxiliado no diagnóstico na investigação de doenças autoimunes especialmente as reumáticas. Tal metodologia, ao longo dos últimos anos, passou por um intenso processo de aperfeiçoamento e padronização com a realização do Consenso Brasileiro. O presente trabalho teve como objetivo avaliar, 16 anos após a realização do I Consenso Brasileiro de FAN em Células HEp-2, a implantação das recomendações nos laboratórios clínicos que realizam a metodologia. Foi realizada uma pesquisa direcionada aos laboratórios entre fevereiro e outubro de 2016. Os laboratórios foram convidados a responder um questionário sobre as diretrizes do Consenso, abordando aspectos técnicos, controle de qualidade, leitura das lâminas, emissão de laudos e programas educativos. O estudo contou com a participação de 53 laboratórios que, em conjunto, realizam uma estimativa de 300.000 FAN/mês. Foi identificada uma heterogeneidade em especialidades médicas solicitantes do teste e profissionais responsáveis pelo procedimento técnico e leitura das lâminas de fluorescência. As recomendações do Consenso estão sendo seguidas em sua totalidade por 58,5% dos laboratórios. Em relação ao procedimento técnico, 83,1% dos participantes fazem triagem com diluição 1:80 e o esgotamento de título, recomendado pelo Consenso, está sendo adotado por todos os participantes. Evidenciou-se que 39,6% dos participantes utilizam mais de uma marca de kit e que 22,6% realiza a titulação do conjugado a cada nova kit, e diferentes potências de lâmpadas são utilizadas nos laboratórios com predomínio das de 100 Watts. Em relação à leitura das lâminas, 94,3% afirmam observar os quatro compartimentos celulares, 92,5% afirmam classificar a placa metafásica cromossômica em negativa ou positiva e 32,1% dos participantes não afirmaram observar as células em todas as fases do ciclo celular. Na emissão de laudos, 13,2% dos laboratórios admitiram relatar somente o nome do padrão seguido pelo título, não apresentando o laudo descritivo e 24,5% dos participantes não utilizam programas de educação e controle de qualidade. A maioria dos laboratórios foi capaz de identificar imagens representativas de grupos de padrões. Os resultados aqui apresentados demonstram consistentes avanços a partir da implantação do Consenso de FAN no Brasil, porém, evidenciam também a necessidade de ações para implementação dos programas de educação continuada.

Este estudo avaliou a ocorrência e as características da hemicelulose em gramíneas e sua correlação com a recalcitrância da biomassa lignocelulósica frente à digestão enzimática. As amostras de gramíneas incluíram seis híbridos de cana-de-açúcar com teores variados de lignina e hemicelulose, além de uma variedade de sorgo forrageiro. Os entrenós de cana-de-açúcar madura foram fracionados em três regiões distintas: medula, interface medula-córtex e córtex. O sorgo foi fracionado em: medula e córtex. As medulas apresentaram alto teor de glucanas (40-55%) e baixo teor de ligninas (14-22%). O teor de xilanas aumentou da medula (14-20%) para o córtex (20-23%). A composição da hemicelulose também foi avaliada. Xilose (9- 23%), glicose (1-12%) e arabinose (1-4%) foram os monômeros mais abundantes ao fim das análises. As medulas apresentaram xilanas mais arabinosiladas e alta deposição de glucanas não celulósicas. O teor de (1 ? 3),(1 ? 4)-ß-D-glucanas foi elevado nas medulas (1,4-15%) e diminuiu no sentido do córtex (0,1 - 1%). As arabinoxilanas de cana-de-açúcar foram submetidas à um estudo estrutural, confirmando que as cadeias de xilanas são substituídas. A lignina foi avaliada por pirólise acoplada com espectrometria de massas, revelando uma estrutura HGS em cana-de-açúcar e uma razão S/G sem um padrão progressivo entre as frações do entrenó. As amostras de cana-de-açúcar também foram avaliadas quanto à distribuição de hemiceluloses entre os diferentes tecidos e células através de microscopia de imunofluorescência. Uma análise preliminar revelou que anticorpos específicos para xilana e (1 ? 3),(1 ? 4)-ß-D-glucana se ligaram aos extratos hemicelulósicos. Cortes das amostras foram tratados com os anticorpos CRCC-M140 e LM11 (para xilanas menos e mais substituídas) e outro contra (1 ? 3),(1 ? 4)-ß-Dglucanas. Epítopos de xilanas menos substituídas estiveram presentes principalmente em feixes vasculares e não foram detectados em parênquima de medulas. Epítopos de arabinoxilana foram encontrados em todas as frações e tipos celulares. A imunofluorescência de (1-->3),(1-->4)-ß-D-glucanas mostrou que estes estão depositados principalmente em células do parênquima de medulas; em feixes vasculares estes foram detectados apenas em células do floema e protoxilema. O índice de cristalinidade foi estimado para as amostras. Altos índices de cristalinidade foram encontrados para amostras do córtex (0,44-0,56). As amostras (sem prétratamentos) foram digeridas com enzimas celulolíticas comerciais. As medulas foram hidrolisadas mais facilmente (32-85% de conversão de glucanas após 72h), enquanto amostras do córtex foram mais recalcitrantes (2-9%). As interfaces apresentaram conversões intermediárias (7-46%). A hidrólise da xilana ocorreu em menor escala para todas frações, possivelmente devido ao alto grau de substituição das xilanas. A digestibilidade das glucanas foi diretamente proporcional ao grau de substituição das xilanas (R2=0,86) e ao teor de (1-->3),(1-->4)-ß-D-glucanas nas amostras (R2 = 0,92). Entre as amostras de gramíneas, aqueles que apresentam menor recalcitrância reuniram características que incluem baixo teor de lignina, alto teor de (1-->3),(1-->4)- ß-D-glucanas e alto grau de substituição das xilanas. Essas características poderiam ser utilizadas como indicadores nos processos de geração e seleção de plantas para a produção de biomassas lignocelulósicas de elevada digestibilidade. / This work assessed the occurrence and features of hemicellulose in grasses as related to lignocellulosic biomass recalcitrance to enzymatic hydrolysis. The grasses materials included six sugarcane hybrids with varying lignin and hemicellulose content, besides a variety of forage sorghum. The mature sugarcane internodes were dissected into three different regions: pith, pith-rind interface and rind. The sorghum was dissected into pith and rind. Pith samples presented high glucan content (40- 55%) and low lignin content (14-22%). The xylan content increased from pith region (14-20%) to rind (20-23%). Hemicellulose composition was also assessed. Xylose (9- 23%), glucose (1-12%) and arabinose (1-4%) were the most abundant monomers at the end of the analyzes. Pith samples had the most arabinosilated xylans and high content of non-cellulosic glucans. The (1-->3),(1-->4)-ß-D-glucan content was high in piths (1,4-15%) and decreased towards rind (0,1-1%). The sugarcane arabinoxylans were submitted to a study of their structure, which confirmed the xylan backbone was substituted. Lignin was assessed by pyrolysis coupled with mass spectrometer, which showed an HGS polymer in sugarcane and a S/G ratio without a progressive pattern between internode fractions. The sugarcane samples were also evaluated as related to hemicellulose distribution between different tissues and cells by immunofluorescence microscopy. A preliminary analysis showed that antibodies specific to xylan and mixed-linkage glucan bound to hemicellulose extracts. Plant sections were treated with the antibodies CRCC-M140 and LM11 (for less and more substituted xylans) and another one against mixed-linkage glucans. Less decorated xylan epitopes were mainly present in vascular bundles and were not detected in pith parenchyma. Arabinoxylan epitopes were found in all fractions and cell types. The mixed-linkage glucan immunofluorescence showed they were mainly deposited in parenchyma cells from piths; they were only detected in phloem and protoxylem cells in vascular bundles. The crystallinity index was estimated for all samples. High crystallinity indexes were found in rind samples (0,44-0,56). The non-pretreated materials were digested with commercial cellulolytic enzymes. Piths were easily hydrolyzed (32-85% of glucan conversion after 72h), while rind samples were more recalcitrant (2-9%). Interface samples showed intermediary conversions (7-46%). Xylan hydrolysis occurred in a less extent for all fractions, possibly due to a high substitution level on xylans. The glucan digestibility was proportionally related to the substitution level of xylan (R2=0,86) and the mixed-linkage glucan content (R2 = 0,92). Among the grasses samples, those with lower recalcitrance had features such as low lignin content, high mixed-linkage glucan content and high substitution level of xylans. These features could serve as indicators in the process of generation and selection of plants for lignocellulosic biomass production with high digestibility degree.

O presente estudo foi realizado para esclarecer o surgimento de vesículas subepidérmicas em enxertos de pele comumente descritos como áreas enxertadas. Devido à discrepância existente entre a literatura, que afirma surgirem vesículas nessas áreas, e a nossa experiência clínica, onde não observamos tal fato, decidimos investigar o problema. Para isso, estudamos a transição dermoepidérmica (TDE), em 23 pacientes submetidos à enxertia de pele, para verificar se há ou não alteração dessa estrutura que pudesse justificar a formação de vesículas. Nos 23 pacientes estudados foram feitas duas biópsias: a primeira, imediatamente antes da excisão do enxerto, na área doadora - pele sã, considerada como amostra padrão normal da TDE - Amostra Padrão AD. Após 10 dias, realizou-se uma segunda biópsia, com o mesmo vazador, próxima à área da primeira biópsia - Amostra Teste - ENX. Cada amostra foi dividida em 2 partes iguais (46 amostras) e estudadas por microscopia de luz e por imunofluorescência direta (imunomapeamento), pesquisando-se a possível alteração da zona da membrana basal (ZMB) na TDE através dos antígenos penfigóide bolhoso, laminina, colágeno IV e colágeno VII. Na microscopia de luz estudou-se, em cada biópsia, a relação entre a medida linear do relevo da trasição dermoepidérmica e a medida linear do relevo da superfície da camada granulosa, logo abaixo da camada córnea, equivalente a medida linear da superfície da pele. Nas 46 amostras as análises por microscopia de luz e de imunomapeamento para os quatro antígenos evidenciou-se a manutenção do mesmo padrão morfológico. Não houve diferença no imunomapeamento. Observou-se relações lineares das medidas com médias de 1,17 para a amostra AD e 1,44 para a amostra ENX, diferença que foi estatisticamente significativa, porém conservando a manutenção do padrão da TDE em relação à pele normal. Foi observada a manutenção do padrão do relevo da TDE no enxerto, em relação à pele sã, doadora. / SUMMARY: The present study has been done to elucidate the onset of subepidermal blisters in skin grafts, usually mistaken as grafted sites. Due to the discrepancy between literature - assigning this onset of blisters in grafts and our experience opposite we have decided to carry out this study. To do so we have studied the dermal-epidermal junction in 23 burned patients who underwent skin grafting so that we could verify whether or not there could be any alteration in the dermal-epidermal junction structure that may explain this fact. Among the 23 studied patients, two biopsies were carried out: the first one just before harvesting the skin graft from donor site healthy skin. The so called sample was regarded as an ordinary standard one of the dermal-epidermal junction STANDARD SAMPLE - DS. After graft take, by ten days, a second biopsy was performed with the same punch, close to the first biopsy TEST SAMPLE GS. Both samples were split into two equal parts (46 samples) and studied using light microscopy and direct immunofluorescence (immune mapping), searching for possible alterations in basement membrane zone in the dermal-epidermal junction through bullous pemphigoid, laminin and types IV and VII collagen antigens. On light microscopy, relation between the linear measure of dermal-epidermal junction projection and that of stratum granulosum surface, just underneath the stratum corneum, corresponding to skin surface, was studied in each biopsy. The four analyses of the antigens by light microscopy and direct immunofluorescence in the 46 samples clearly showed the keeping of the same pattern, either for STANDARD SAMPLE DS or TEST SAMPLE GS. There were no differences on the immune mapping. Regarding the relation of the linear measures it was noted a mean of 1.17 for STANDARD SAMPLE DS and a mean of 1.44 for TEST SAMPLE GS. Such difference was statistically significant. Nevertheless, it maintained the keeping of the same pattern of dermal-epidermal junction when compared to healthy skin.

Com o propósito de colaborar na elucidação da fisiopatologia do pênfigo foliáceo endêmico (PFE), realizou-se titulação de anticorpos séricos e quantificação das células de Langerhans (CL) e células dendríticas dérmicas (CD) na pele de pacientes com PFE. Sangue e biopsia de pele de lesão ativa foram colhidos de 22 pacientes com PFE e, em 13 deles realizou-se também biopsia de pele normal não adjacente à lesão, em área não exposta ao sol. Dos 22 pacientes, 13 apresentavam a forma clínica localizada e 9, generalizada; 11 estavam em tratamento. O grupo controle constituiu-se de pele normal obtida da região torácica anterior de 8 cadáveres e de 12 mulheres submetidas à cirurgia plástica (mastoplastia). A imunofluorescência indireta (IFI) foi realizada com pele humana normal da região abdominal como substrato e anti-IgG humana. A identificação das CL e CD foi feita pela técnica imunohistoquímica da avidina-biotina-peroxidase com o anticorpo anti-CD1a e quantificação por análise morfométrica. Houve correlação entre a titulação de anticorpos séricos por IFI e a forma clínica do PFE, sendo esse maior na forma generalizada. O número de CL na lesão (60,18 CL/ mm2; 5,00 CL/ mm de membrana basal (MB); 3,55 CL/mm de camada córnea) e na pele normal do PFE (28,45 CL/ mm2; 2,50 CL/ mm de MB; 2,87 CL/mm de camada córnea) foi semelhante ao número de CL na pele dos grupos controles de cirurgia plástica (72,35 CL/ mm2; 4,53 CL/ mm de MB; 4,42 CL/mm de camada córnea) e de cadáveres (47,15 CL/ mm2; 2,53 CL/ mm de MB; 2,42 CL/mm de camada córnea). O número de CD dérmicas na pele lesada de PFE (0,98 CD/ mm de MB) foi semelhante ao do grupo controle de plástica de mama (0,48 CD/ mm de MB), porém maior do que o do grupo cadáver (0,13 CD/ mm de MB). A razão entre o número de CL e CD dérmicas foi menor na pele lesada do paciente com PFE comparada à dos grupos controles, confirmando maior número de CD na derme. Num mesmo paciente, as CL e CD da derme encontravam-se em maior número na lesão de PFE (61,50 CL/ mm2; 5,49 CL/ mm de MB; 6,64 CL/mm de camada córnea, 0,86 CD dérmicas/ mm de MB) quando comparadas à pele normal (28,45 CL/ mm2; 2,50 CL/ mm de MB; 2,87 CL/mm de camada córnea; 0,04 CD dérmicas/ mm de MB). Houve correlação direta entre o número de CD dérmicas na lesão de PFE e a titulação de anticorpos séricos por IFI (r=0,4779, p<0,05), indicativo de que as CD dérmicas poderiam estar participando da patogênese do PFE. Poder-se-ia supor que as CD estariam transitando pela derme em direção ao linfonodo regional, exercendo função estimuladora de linfócitos T na indução da resposta imune e produção de auto-anticorpos. / In order to contribute to the elucidation of pathophysiology of Endemic Pemphigus Foliaceus (EPF) titration of serum antibodies and quantification of Langerhans Cells (LC) and dermal dendritic cells (DC) in skin of patients with EPF were made. Blood and skin biopsies (lesional skin) of 22 EPF patients were collected and, in 13 of them, biopsies of normal sun-protected skin of non perilesional area were collected too. 13 patients had localized lesions and 9, generalized; 11 were in treatment. Control groups consisted of thoracic normal skin from 8 cadavers and 12 women submitted to breast plastic surgery. For indirect immunofluorescence (IFI), abdominal normal skin as substrate and anti-IgG were used. LC and dermal DC identification was done by immunohistochemistry with anti-CD1a antibody and quantification by morfometric analysis. It was found association between titration of serum antibodies by IFI and clinical form of EPF, with greater titration in the generalized one. LC number in lesion (60.18 LC/ mm2, 5.00 LC/ mm basement membrane (BM), 3.55 LC/mm stratum corneum) and normal skin of EPF patients (28.45 LC/ mm2, 2.50 LC/ mm BM, 2.87 LC/mm stratum corneum) was similar to LC number in skin of plastic surgery (72.35 LC/ mm2, 4.53 LC/ mm BM, 4.42 LC/mm stratum corneum) and cadaver controls (47.15 LC/ mm2, 2.53 LC/ mm BM, 2.42 LC/mm stratum corneum). Dermal DC number in lesional skin of EPF patients (0.98 DC/ mm BM) was similar to the DC number of plastic surgery controls (0.48 DC/ mm BM), but greater than DC number in cadaver controls (0.13 DC/ mm BM). The ratio LC number/ dermal DC number was smaller in lesional EPF skin than in controls, confirming the greatest DC number in dermis. In the same patient, LC and dermal DC were in greater amounts in EPF lesional skin (61.50 LC/ mm2, 5.49 LC/ mm BM, 6.64 LC/mm stratum corneum, 0.86 dermal DC/ mm BM) than in normal skin (28.45 LC/ mm2, 2.50 LC/ mm BM, 2.87 LC/mm stratum corneum, 0.04 dermal DC/ mm BM). It was found direct association between dermal DC number in lesional skin of EPF patients and titration of antibodies by IFI (r=0.4779, p<0.05), confirming that dermal DC could play an important role in EPF pathogenesis. It could be proposed that DC would be in transit through the dermis towards the regional lymph node, stimulating T lymphocytes to produce autoantibodies.

Intimina é o principal fator de virulência envolvido na lesão attaching/effacing em E. coli enteropatogênica (EPEC) e E. coli enterohemorrágica (EHEC), que são responsáveis pela diarreia infantil e colite hemorrágica/síndrome hemolítico-urêmica, respectivamente. Nos países em desenvolvimento, o diagnóstico desses patógenos ou é demorado e caro, ou não é realizado em laboratórios de rotina. No entanto, a detecção é essencial para definição do tratamento da infecção. O objetivo do presente trabalho foi definir o vetor de expressão mais apropriado e avaliar a sensibilidade e especificidade do scFv-intimina obtido. O gene scFv-intimina anteriormente obtido foi clonado nos vetores de expressão pAE e pSMT3, transformados em uma E. coli BL21 (DE3). A expressão foi induzida com 1 mM de IPTG. Em ambos os vetores, a proteína expressa foi direcionada para o citoplasma bacteriano, dessa forma a construção pAE-scFv-intimina foi utilizada na obtenção do anticorpo recombinante. Após cromatografia de afinidade ao níquel o scFv-intimina foi empregado no ensaio de imunofluorescência indireta para definir um teste de ensaio rápido e confiável, analisando-se 199 isolados de E. coli e isolados de outras Enterobactérias, dos quais 132 resultaram em isolados eae-positivos e 67 isolados eae-negativos. O teste de imunofluorescência mostrou a detecção de 132 isolados eae-positivos (100% de sensibilidade) e a não detecção de 67 isolados eae-negativos (100% especificidade). Assim, o ensaio de imunofluorescência é um método eficaz e rápido, e o scFv-intimina é uma excelente ferramenta para o imunodiagnóstico de EPEC e EHEC. / Intimin is the main virulence factor involved in the attaching/effacing lesion of enteropathogenic E. coli (EPEC) and enterohemorrhagic E. coli (EHEC), which are responsible for infantile diarrhea and hemorrhagic colitis/hemolytic uremic syndrome, respectively. In developing countries, their diagnosis is either time-consuming and expensive or is not done in the routine laboratory. Nevertheless, their detection is essential in defining the infection treatment. The aim of the study was to define the most suitable expression vector and evaluate the sensitivity and specificity of the scFv-intimin obtained. The scFv-intimin gene previously obtained was cloned into pAE and pSMT3 expression vectors and transformed into an E. coli BL21 (DE3) strain. Expression was induced with 1 mM IPTG. In both vectors, recombinant protein was expressed as inclusion bodies, so pAE was chosen as the expression vector for nickel affinity chromatography. Once purified, scFv-intimin was employed in an indirect immunofluorescence assay to define a rapid and reliable assay testing 199 E. coli strains and other Enterobacteriaceae isolates, of which 132 isolates were eae-positive and 67 isolates were eae-negative. The immunofluorescence assay showed the detection of 132 eae-positive isolates (100% sensitive) and no detection in the 67 eae-negative isolates (100% specific). Thus, immunofluorescence is an effective and rapid method and scFv-intimin an excellent tool for the immunodiagnosis of EPEC and EHEC.

Este estudo avaliou a ocorrência e as características da hemicelulose em gramíneas e sua correlação com a recalcitrância da biomassa lignocelulósica frente à digestão enzimática. As amostras de gramíneas incluíram seis híbridos de cana-de-açúcar com teores variados de lignina e hemicelulose, além de uma variedade de sorgo forrageiro. Os entrenós de cana-de-açúcar madura foram fracionados em três regiões distintas: medula, interface medula-córtex e córtex. O sorgo foi fracionado em: medula e córtex. As medulas apresentaram alto teor de glucanas (40-55%) e baixo teor de ligninas (14-22%). O teor de xilanas aumentou da medula (14-20%) para o córtex (20-23%). A composição da hemicelulose também foi avaliada. Xilose (9- 23%), glicose (1-12%) e arabinose (1-4%) foram os monômeros mais abundantes ao fim das análises. As medulas apresentaram xilanas mais arabinosiladas e alta deposição de glucanas não celulósicas. O teor de (1 ? 3),(1 ? 4)-ß-D-glucanas foi elevado nas medulas (1,4-15%) e diminuiu no sentido do córtex (0,1 - 1%). As arabinoxilanas de cana-de-açúcar foram submetidas à um estudo estrutural, confirmando que as cadeias de xilanas são substituídas. A lignina foi avaliada por pirólise acoplada com espectrometria de massas, revelando uma estrutura HGS em cana-de-açúcar e uma razão S/G sem um padrão progressivo entre as frações do entrenó. As amostras de cana-de-açúcar também foram avaliadas quanto à distribuição de hemiceluloses entre os diferentes tecidos e células através de microscopia de imunofluorescência. Uma análise preliminar revelou que anticorpos específicos para xilana e (1 ? 3),(1 ? 4)-ß-D-glucana se ligaram aos extratos hemicelulósicos. Cortes das amostras foram tratados com os anticorpos CRCC-M140 e LM11 (para xilanas menos e mais substituídas) e outro contra (1 ? 3),(1 ? 4)-ß-Dglucanas. Epítopos de xilanas menos substituídas estiveram presentes principalmente em feixes vasculares e não foram detectados em parênquima de medulas. Epítopos de arabinoxilana foram encontrados em todas as frações e tipos celulares. A imunofluorescência de (1-->3),(1-->4)-ß-D-glucanas mostrou que estes estão depositados principalmente em células do parênquima de medulas; em feixes vasculares estes foram detectados apenas em células do floema e protoxilema. O índice de cristalinidade foi estimado para as amostras. Altos índices de cristalinidade foram encontrados para amostras do córtex (0,44-0,56). As amostras (sem prétratamentos) foram digeridas com enzimas celulolíticas comerciais. As medulas foram hidrolisadas mais facilmente (32-85% de conversão de glucanas após 72h), enquanto amostras do córtex foram mais recalcitrantes (2-9%). As interfaces apresentaram conversões intermediárias (7-46%). A hidrólise da xilana ocorreu em menor escala para todas frações, possivelmente devido ao alto grau de substituição das xilanas. A digestibilidade das glucanas foi diretamente proporcional ao grau de substituição das xilanas (R2=0,86) e ao teor de (1-->3),(1-->4)-ß-D-glucanas nas amostras (R2 = 0,92). Entre as amostras de gramíneas, aqueles que apresentam menor recalcitrância reuniram características que incluem baixo teor de lignina, alto teor de (1-->3),(1-->4)- ß-D-glucanas e alto grau de substituição das xilanas. Essas características poderiam ser utilizadas como indicadores nos processos de geração e seleção de plantas para a produção de biomassas lignocelulósicas de elevada digestibilidade. / This work assessed the occurrence and features of hemicellulose in grasses as related to lignocellulosic biomass recalcitrance to enzymatic hydrolysis. The grasses materials included six sugarcane hybrids with varying lignin and hemicellulose content, besides a variety of forage sorghum. The mature sugarcane internodes were dissected into three different regions: pith, pith-rind interface and rind. The sorghum was dissected into pith and rind. Pith samples presented high glucan content (40- 55%) and low lignin content (14-22%). The xylan content increased from pith region (14-20%) to rind (20-23%). Hemicellulose composition was also assessed. Xylose (9- 23%), glucose (1-12%) and arabinose (1-4%) were the most abundant monomers at the end of the analyzes. Pith samples had the most arabinosilated xylans and high content of non-cellulosic glucans. The (1-->3),(1-->4)-ß-D-glucan content was high in piths (1,4-15%) and decreased towards rind (0,1-1%). The sugarcane arabinoxylans were submitted to a study of their structure, which confirmed the xylan backbone was substituted. Lignin was assessed by pyrolysis coupled with mass spectrometer, which showed an HGS polymer in sugarcane and a S/G ratio without a progressive pattern between internode fractions. The sugarcane samples were also evaluated as related to hemicellulose distribution between different tissues and cells by immunofluorescence microscopy. A preliminary analysis showed that antibodies specific to xylan and mixed-linkage glucan bound to hemicellulose extracts. Plant sections were treated with the antibodies CRCC-M140 and LM11 (for less and more substituted xylans) and another one against mixed-linkage glucans. Less decorated xylan epitopes were mainly present in vascular bundles and were not detected in pith parenchyma. Arabinoxylan epitopes were found in all fractions and cell types. The mixed-linkage glucan immunofluorescence showed they were mainly deposited in parenchyma cells from piths; they were only detected in phloem and protoxylem cells in vascular bundles. The crystallinity index was estimated for all samples. High crystallinity indexes were found in rind samples (0,44-0,56). The non-pretreated materials were digested with commercial cellulolytic enzymes. Piths were easily hydrolyzed (32-85% of glucan conversion after 72h), while rind samples were more recalcitrant (2-9%). Interface samples showed intermediary conversions (7-46%). Xylan hydrolysis occurred in a less extent for all fractions, possibly due to a high substitution level on xylans. The glucan digestibility was proportionally related to the substitution level of xylan (R2=0,86) and the mixed-linkage glucan content (R2 = 0,92). Among the grasses samples, those with lower recalcitrance had features such as low lignin content, high mixed-linkage glucan content and high substitution level of xylans. These features could serve as indicators in the process of generation and selection of plants for lignocellulosic biomass production with high digestibility degree.

O pênfigo foliáceo inclui-se em um grupo de dermatoses autoimunes vésico-bolhosas da pele e mucosas reconhecido em alguns mamíferos, incluíndo os cães. Muitos autores acreditam que o pênfigo foliáceo (PF) é a dermatopatia autoimune mais frequentemente observada em caninos. Muitas podem ser as enfermidades caninas que devem ser incluídas no diagnóstico diferencial do pênfigo foliáceo, principalmente, a piodermite superficial (PS). A Proteína C Reativa (PCr) é conhecida como a principal proteína de fase aguda em cães. Nesses espécimes, a elevação da PCr tem sido observada em ampla variedade de condições mórbidas. A determinação da PCr tem sido proposta como um marcador inflamatório de algumas doenças autoimunes. O objetivo deste estudo foi determinar se a Proteína C Reativa pode ser utilizada como um marcador biológico precoce para diferenciar o pênfigo foliáceo da piodermite superficial em cães. Esta pesquisa constituiu um estudo clínico observacional prospectivo longitudinal, realizada em cães acometidos pelo PF ou PS. Foram incluídos 59 cães divididos em três Grupos I (Controle) com 31 animais, II (PF) e III (PS), cada um constituído por 14 cães. Submeteram-se, respectivamente, fragmentos cutâneos e soros de caninos, acometidos por PF ou PS, a exames histopatologicos e imunofluorescência direta (IFD) e à determinação de PCr e, também, a imunofluorescência indireta (IFI), utilizando-se para essa última coxins palmo-plantares a título de substrato. O grau de acometimento dos pacientes penfigosos (Grupo II) foi avaliado pelo PEFESI, durante período de até 90 dias, em diferentes momentos em que se realizou a IFI e a avaliação da PCr. Comparando-se os valores de IFD com aqueles da histopatologia obtiveram-se valores geral de concordância de 75% (9/12) e Índice Kappa de 0,77 (p<0,001) e, também, concordância dita substancial entre os dois métodos. Já, na IFI o valor de concordância foi de 100% (14/14), o de Kappa de 1,0 (p<0,001), com concordância considerada perfeita entre a IFI e a histopatologia. O Grupo II apresentou maior valor de mediana de PCr (37,4&micro;g/mL) quando comparado aos Grupos I, com 2,9 &micro;g/mL (p<0,0001) e III, com 3,8 &micro;g/mL (p=0,008). Não houve diferença entre os Grupos I e III (p=0,178). Considerando-se como ponto de corte um valor de PCr > 10,6&micro;g/mL, a chance de um animal estar acometido pelo PF é 5,5 vezes maior àquela de um cão não afetado, o que equivale a uma probabilidade pós-teste de 84,6%, conferindo um acréscimo de 34,6% na capacidade de diagnóstico do PF. Conclui-se que determinação de PCr é de inequívoca valia para o estabelecimento de diferenciação diagnóstica entre a casuística da contumaz piodermite superficial com quadros do pênfigo foliáceo canino / Pemphigus is included in a group of skin and mucous autoimmune vesicobullous dermatoses recognized in some mammals, including dogs. Many authors believe that pemphigus foliaceus (PF) is the autoimmune skin disease most often observed in dogs. Many must be the canine diseases considered in the pemphigus foliaceus differential diagnosis, especially the superficial pyoderma (SP). The C-Reactive Protein (CRP) is known as a major acute phase protein in dogs. The CRP increase has been observed in a wide variety of morbid conditions in dogs. The determination of CRP has been proposed as an inflammatory marker of some autoimmune diseases. This study aimed to determine whether C-Reactive Protein can be used as an early biomarker to differentiate pemphigus foliaceus of superficial pyoderma in dogs. An observational prospective longitudinal clinical study was undertaken including dogs affected by PF or PS. Fifth nine dogs were divided into three groups: Group I (Control) with 31 animals and II (PF) and III (SP), consisting of 14 dogs each. Dogs affected by PF or SP had skin fragments submitted to histopathological examination and direct immunofluorescent reaction (DIF). The blood sera were used to determine the CRP concentration, and also to perform the indirect imunofluorescent reaction (IIF) using canine footpad as substrate. The pemphigus patients (Group II) clinical involvement degree was evaluated by PEFESI, over a period of 90 days, moments in which IFI and evaluation of CRP took place. Comparing the DIF values with the histopathology there was an agreement of 75% (9/12) with a Kappa index of 0.77 (p <0.001) which means a degree of substantial arrangement between the two methods. Considering IIF, the agreement value was 100% (14/14) with Kappa index of 1.0 (p<0.001), showing perfect arrangement between the IIF and the histopathology. Group II showed higher CRP median (37.4 mg / mL) compared to Groups I, with 2.9 mg / mL (p <0.0001) and III with 3.8 mg / mL (p = 0.008 ). There was no statistic difference between groups I and III (p = 0.178). Considering CRP> 10,6&micro;g / mL as a cutoff value, the chance of an animal having PF is 5.5 times higher than not to be, which is equivalent to a post-test probability of 84,6%, giving a 34.6% increase in the PF diagnostic capability. It concludes that determination of CRP is unequivocal asset for the establishment of diagnostic differentiation between the common superficial pyoderma to canine pemphigus foliaceus

Anticorpos recombinantes vêm sendo utilizados como ferramenta diagnóstica por serem produzidos com baixo custo e em larga escala. Partiu-se de um gene sintético que codifica um fragmento de anticorpo (scFv) específico contra a toxina termoestável, com otimização de códons para expressão em Escherichia coli. Esse gene foi amplificado no vetor de clonagem e subclonado em vetor de expressão pET28a. Células E. coli BL21(DE3) foram transformadas com o plasmídeo recombinante e induzidas em meio de expressão. O fragmento de anticorpo obtido estava contido na fração insolúvel, portanto foi submetido a purificado por cromatografia de afinidade ao níquel na presença de ureia, seguido de renaturação. A molécula se apresentou funcional e sem reatividade com inespecífica por ensaios de imunofluorescência e ELISA. Além disso, mostrou-se estável quando armazenada a 4ºC, sendo assim uma ferramenta promissora para ser utilizada no diagnóstico de ETEC para detecção da toxina ST. / Recombinant antibodies have been used as diagnostic tools since they can be produced at low cost and on a large scale. A synthetic gene encoding an antibody fragment (scFv) specific for the heat-stable toxin (ST) with optimized codon for Escherichia coli expression was employed. This gene was amplified in the cloning vector and subcloned into pET28a expression vector. E. coli BL21(DE3) cells were transformed with the recombinant plasmid and induced. Large amounts of antibody fragment were found in the insoluble fraction. Thus it is submitted to nickel-affinity chromatography in urea presence, followed by refolding step. By immunofluorescence assay and ELISA, the obtained antibody showed to be functional with no cross-reaction to the negative controls. Furthermore, it was stable when stored at 4 °C, therefore a promising tool for ETEC diagnosis detecting the ST toxin.