Orientador: Antonio Zuliani / Resumo: A progressão da doença na criança infectada pelo HIV associou-se à elevação do nível sérico de IgE total em alguns estudos. O mecanismo responsável por esta elevação ainda não foi claramente elucidado. O desbalanço na produção e liberação de citocinas de perfil Th1 e Th2, que ocorre após a infecção pelo HIV, tem sido proposto como um possível mecanismo para a elevação da IgE. Foram avaliadas neste estudo, 29 crianças de ambos os sexos, infectadas pelo HIV, acompanhadas no Ambulatório de Imunologia Pediátrica da Faculdade de Medicina de Botucatu-UNESP, com idade variando de 3 a 182 meses, com o objetivo de analisar os níveis séricos de IgE nessas crianças e sua correlação com presença de categorias clínicas e imunológicas mais graves, carga viral elevada e aumento da prevalência de alergia. A classificação clínica destes pacientes mostrou duas crianças (6,9%) na categoria N, sete (24,14%) na A, 12 (41,38%) na B e oito (27,58%) na C. Já a classificação imunológica mostrou três crianças (10,3%) na categoria 1, 16(55,2%) na 2 e 10 (34,5%) na 3. Após a aplicação do questionário alergológico, 11 crianças (37,93%) apresentaram história positiva de sintomas alérgicos, e quatro destes pacientes (13,79%) apresentaram teste cutâneo de hipersensibilidade imediata positivo a um ou mais dos aeroalérgenos testados. Os resultados mostraram níveis elevados de IgE em 17 crianças (58,62%), e estes foram numericamente maiores nos pacientes pertencentes à categoria clínica mais grave (C) em relação àqueles das outras categorias clínicas, mas sem diferença estatisticamente significante. Não foi encontrada diferença entre a freqüência de crianças com IgE elevada pertencentes às categorias clínicas e imunológicas mais graves e aquelas mais leves... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The progression of the disease in the infected child by HIV toke part in the elevation of the serum level of total IgE in some studies. The mechanism responsible for this elevation was still not clearly elucidated. The oscillation in the production and liquidation of Th1 and Th2 cytokines, that occur after the infection by HIV, have been proposed as a possible mechanism to the IgE elevation. In this study was evaluated 29 children of both sex, infected by HIV, accompanied in the Clinic of Pediatric Immunology of Botucatu Medical School - UNESP, with ages from 3 to 182 months, with the objective of analyze the serum levels of IgE in these children and the co-relation with the presence of the categories clinic and immunological more severe, high load viral and increase of the allergic diseases prevalence. The clinic classification of these patients showed two children (6,9%) in N category, seven (24,14%) in B and eight (27,58%) in C. While the immunologic classification showed three children (10,3%) in the category 1, sixteen (55,2%) in the 2 and ten (34,5%) in the 3. After the application of the allergologic questionnaire, eleven children (37,93%) presented positive history of allergic symptoms, and four of these patients (13,79%) presented positive immediate cutaneous hypersensitive test to one or more of the inhalant allergens tested. The outcomes showed high levels of IgE in 17 children (58,62%), and these were numerically greater in the patients in the more severe clinic category (C) in relation to those of the others clinic categories, but without significant statically difference. The difference between the frequency of children with high IgE in the clinic and immunologic categories more severe and that more soft was not founded. The load viral values were significantly lower in the group... (Complete abstract, click electronic access below) / Mestre

Resumo: Não disponível / Abstract: Uncaria tomentosa (Willd.) DC (Rubiaceae) is a large woody vine that is native to the Amazon and Central American rainforests and is widely used in traditional medicine for its immunomodulatory and anti-inflammatory activities. The present work used in vivo immunotoxic and in vitro immunomodulatory experiments to investigate the effects of a pentacyclic oxindole alkaloid extract from U. tomentosa bark on lymphocyte phenotype, Th1/Th2 cytokine production, cellular proliferation and cytotoxicity. For the in vivo immunotoxicity testing, BALB/c male mice were treated once a day with 125, 500 or 1250 mg/kg of U. tomentosa extract for 28 days. For the in vitro protocol, lymphocytes were cultured with 10 to 500 μL/mL of the extract for 48 h. The extract increased the cellularity of splenic white pulp and the thymic medulla and increased the number of T helper lymphocytes and B lymphocytes. Also, a large stimulatory effect on lymphocyte viability was observed. However, mitogen-induced T lymphocyte proliferation was significantly inhibited at higher concentrations of U. tomentosa extract. Furthermore, an immunological polarization toward a Th2 cytokine profile was observed. These results suggest that the U. tomentosa aqueous-ethanol extract was not immunotoxic to mice and was able to modulate distinct patterns of the immune system in a dose-dependent manner / Orientador: Rosa Marlene Viero / Coorientador: Alexandrina Sartori / Banca: Carla Adriene da Silva Franchi / Banca: Ana Lúcia Tozzi-Spinardi Barbisan / Banca: Isis Machado Hueza / Banca: Efigênia Queiroz de Santana / Doutor

Orientador: Luciane Dias de Oliveira / Co-orientadora : Mariella Vieira Pereira Leão / Banca: Ana Paula Candido Santos / Banca: Michelle Cardoso de Sousa / Banca: Graziella Nuernberg Back Brito / Banca: Estela Kaminagakura Tango / Resumo: Muitos produtos probióticos são compostos pela associação de lactobacilos no intuito de potencializar seu efeito benéfico. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a imunomodulação e atividade anti-Candida causada por diferentes combinações de suspensões probióticas em macrófagos e em Galleria mellonella. Lactobacillus rhamnosus (LR), L. acidophilus (LA), e L. paracasei (LP) foram suspendidos para obtenção das suspensões LR, LA, LP, LR+LA, LR+LP, LA+LP e LR+LA+LP. Foram utilizadas suspensões de Candida albicans (CA) ATCC 18804, C. krusei (CK) ATCC 6258 e C. glabrata (CG) ATCC 9030. Macrófagos de camundongo (RAW 264.7) foram ativados por cada suspensão de lactobacilos e desafiados por cada uma das cepas fúngicas. Foram investigadas taxa de fagocitose, produção de citocinas e óxido nítrico e a viabilidade celular. A melhor suspensão probiótica para cada cepa fúngica seria usada nos testes in vivo, com G. mellonella, no entanto, devido à baixa virulência das espécies não-albicans, os testes in vivo prosseguiram com CA e LR. Duas cepas clínicas de CA foram acrescentadas: 21 e 60. Suspensões de LR foram injetadas na hemolinfa das larvas 24 h antes do desafio com as cepas fúngicas. Foram determinadas curva de sobrevivência, contagem de UFC/mL das cepas de C. albicans e de hemócitos. Os resultados foram analisados estatisticamente de acordo com a distribuição normal (ANOVA e Tukey ou Kruskal-Wallis e Dunn) e a curva de sobrevivência pelo teste de Log-rank (Mantel-Cox), p<0,05. As ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Many probiotic products are composed by association of lactobacilli in order to potentiate their beneficial effect. Therefore, the objective of this study was evaluating the immunomodulation and anti-Candida activity caused by different combinations of probiotic suspensions in macrophages and in Galleria mellonella. Lactobacillus rhamnosus (LR), L. acidophilus (LA) and L. paracasei (LP) were suspended to obtain the suspensions LR, LA, LP, LR + LA, LR + LP, LA + LP and LR + LA + LP. Suspensions of Candida albicans (CA) ATCC 18804, C. krusei (CK) ATCC 6258 and C. glabrata (CG) ATCC 9030 were used. Mouse macrophages (RAW 264.7) were activated by each suspension of lactobacilli and then challenged by each fungal strain. Phagocytosis, cytokine and nitric oxide production and cell viability were investigated. The best lacobacilli suspension for each fungal strain would be used in the in vivo assays with G. mellonella, however, because of low virulence of the non-albicans species, in vivo tests were performed with CA and LR. Two clinical strains of CA were added: 21 and 60. LR suspensions were injected into the haemolymph of the larvae 24 h before challenging with fungal strains. Survival curve, CA strains CFU/mL counting and hemocytes were determined. The results were statistically analyzed according to their normal distribution (ANOVA and Tukey or Kruskal-Wallis and Dunn) and the survival curve by Log-rank test (MantelCox), p <0.05. The best suspensions for CA, CK and CG were LR (which obtained the best results in the cytokine profile), LP and LA (which obtained the best results on phagocytosis), respectively. In G. mellonella, LR suspension increased percentage survival and hemocyte counting and decreased CFU/mL counting in all groups, with statistically significant differences in the results. Thus, it can be concluded that the suspensions of lactobacilli have ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

GVB é um patógeno agrícola composto por RNA de fita simples de senso positivo, com extremidades 3’ poliadeniladas e tem seu diagnóstico feito por testes biológicos, imunológicos e moleculares. Juntamente com outros vírus, causa a síndrome do “complexo rugoso”, que impede a pega da enxertia, destruindo o floema e matando a planta precocemente. A produção de anticorpos contra uma proteína do capsídeo e o desenvolvimento de teste imunológico são os objetivos deste trabalho. A clonagem da região codificante da proteína do capsídeo do Grapevine Virus B foi obtida por PCR, utilizando primers específicos para região codificante e com sítios de restrição para endonucleases BamHI e NdeI, obtendo-se um amplicon de 594 pb. Este fragmento foi clonado no vetor de expressão pET19b e transformado em Escherichia coli BL21 Codon Plus (DE3) RP (Stratagene). Para a expressão da proteína rGVB1a (24 kDa com cauda de histidina), estabeleceu-se uma indução de 1 mM de IPTG (isopropyl-beta-Dthiogalactopyranoside), mantida sob agitação a 250C por 18 horas. A expressão foi analisada por SDS-PAGE 13% e a presença da rGVB1a foi confirmada por Western blot, usando anticorpo monoclonal anti-histidina. A rGVB1a expressada foi purificada por cromatografia de afinidade a cauda de histidina em resina sepharose-Ni2+. A proteína purificada foi utilizada para imunizar um coelho e sete lotes de três camundongos para obtenção de soro policlonal e monoclonal contra a proteína recombinante. A fusão de células de linfócitos B com mielomas SP2/0 foi realizada, obtendo-se um hibridoma produtor de anticorpo IgG2a que em testes de ELISA e Western blot reconhecem a proteína recombinante. Adicionalmente, testes de Western blot utilizando extrato total de plantas sintomáticas e assintomáticas foram realizados para verificar se estes soros reconheciam a proteína nativa. / GVB is an agricultural pathogen composed by a single-stranded positive sense RNA with poliadenilated 3’ end and its diagnosis is based on biological, immunological and molecular tests. Together with another virus, it causes the rugose wood complex disease which prevents grafting, destroying the phloem and killing the plant early. The objectives of this work are the production of antibodies against the coat protein and the development of an immunological test. Cloning of a coat protein coding gene from Grapevine Virus B was performed by PCR, using specific primers for the coding region with restriction sites for BamHl and Ndel endonucleases, obtaining an amplicon of 594 bp. This fragment was cloned into the pET19b expression vector and transformed with Escherichia coli BL21 Codon Plus (DE3) RP (Stratagene). For expression of rGVB1a protein (24 kDa with histidine tail) a protocol with 1 mM IPTG (isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside), and shaking for 18 hours at 25ºC was established. The expression was analyzed by SDS-PAGE 13% and the presence of rGVB1a was confirmed by Western-blot, using an anti-histidine monoclonal antibody.rGVB1a expressed was purified by histidine tail Ni2+ Sepharose affinity chromatography. Purified protein was used to immunize a rabbit and seven lots of mice to obtain policlonal serum and monoclonal antibody against the recombinant protein. Cell fusions of lymphocyte B and SP2/0 were performed and a hybridoma producer of IgG2a antibody was obtained. This hybridoma recognized the recombinant protein in ELISA and Western blot tests. Additionally, Western blot using the extract of symptomatic and assymptomatic plants were developed to investigate if these serum recognize the native protein.

ARAUJO, Glacio Souza. Utilização de microalgas na biotecnologia, com ênfase para biodiesel e análise de imunoparâmetros em camarões marinhos. 2011. 111f.Tese(Doutorado em Engenharia de Pesca)- Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2011. / Submitted by Maria Naires Souza (marianaires@ufc.br) on 2011-11-11T20:25:08Z No. of bitstreams: 1 2011-tese-gsaraújo.pdf: 839367 bytes, checksum: 094d6eae2d611c78b5a8741676a2a70c (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Nascimento(vieiraaline@yahoo.com.br) on 2011-11-16T15:03:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011-tese-gsaraújo.pdf: 839367 bytes, checksum: 094d6eae2d611c78b5a8741676a2a70c (MD5) / Made available in DSpace on 2011-11-16T15:03:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011-tese-gsaraújo.pdf: 839367 bytes, checksum: 094d6eae2d611c78b5a8741676a2a70c (MD5) Previous issue date: 2011-08-05 / Microalgae are unicellular organisms capable of using solar energy and carbon dioxide with high photosynthesis efficiency to produce biomass, and are easy to cultivate. Due to these characteristics, they have been the object of research, especially in the fields of aquaculture and biotechnology. This thesis, consisting of four chapters, had as its first objective to evaluate the efficiency of different extraction methods of biomass oil from cultures of microalga Chlorella vulgaris. Four of these methods were ultrasound-assisted (cold) and one by heating. After determining the best method for lipid extraction, we evaluated the influence of salinity of the culture medium in biomass recovery and oil yield for ten microalgae cultivated in Guillard f/2 medium. Next, the influence of different amounts of sodium nitrate was evaluated in the culture medium for biomass recovery and oil yield for four microalgae. Lastly, biomass recovery and oil yield was determined for C. vulgaris cultivated outdoors, and the main fatty acids present in the oil for biodiesel production were identified. Also, the performance and certain immunoparameters of marine shrimp Litopenaeus vannamei were evaluated following inclusion of biomass obtained from outdoor microalgae culture in the diet, before and after the oil extraction process. Lipid extraction using the Bligh and Dyer method showed the highest yield (52.49±3.37%) among the ultrasound-assisted methods. Of the ten microalgae cultivated under different salinities, six saw their oil yields increase when salinity was reduced from 35 to 25; the highest increase (eight-fold) was observed in Tetraselmis sp., whereas oil yield increased in three species when salinity was raised from 25 to 35, with a threefold increase for C. vulgaris. The higher amounts of sodium nitrate in cultivation media resulted in increased biomass recovery from microalgae Nannochloropsis oculata and C. vulgaris, whereas the reduction in the quantity of this nutrient resulted in higher oil yields for all microalgae, especially for the species described above. Finally, it was observed that certain growth performance parameters of marine shrimp were vastly superior in the experiment using inclusion of natural C. vulgaris biomass in replacement of defatted biomass, although 0.5% inclusion of the latter also showed satisfactory results. With regard to immunoparameters, inclusion of natural or defatted biomass of C. vulgaris in the diet of shrimps, regardless of amount used, increased the concentration of total proteins and reduced phenoloxidase activity in animal serum. / As microalgas são organismos unicelulares capazes de usar a energia solar e o dióxido de carbono com elevada eficiência fotossintética para produção de biomassa, além de serem facilmente cultivadas. Devido a essas características são objetos de pesquisa principalmente na aquicultura e biotecnologia. Esta tese, composta de quatro capítulos, teve como primeiro objetivo avaliar a eficiência de cinco métodos de extração de óleo da biomassa obtida de culturas da microalga Chlorella vulgaris, sendo quatro destas extrações assistidas por ultrasom (a frio) e um método por aquecimento. Após a determinação do melhor método de extração de lipídios, foi avaliada a influência da salinidade do meio de cultivo na recuperação da biomassa e rendimento de óleo de dez microalgas cultivadas em meio Guillard f/2. Em seguida, foi avaliada a influência de diferentes quantidades de nitrato de sódio no meio de cultivo na recuperação da biomassa e no rendimento de óleo de quatro microalgas. Por último, foram determinados a recuperação da biomassa e rendimento de óleo de C. vulgaris cultivada em ambiente externo, bem como identificados os principais ácidos graxos presentes no óleo para a produção de biodiesel. Além disso, foram avaliados o desempenho zootécnico e alguns imunoparâmetros do camarão marinho Litopenaeus vannamei após inclusão da biomassa obtida dessa cultura externa da microalga em sua dieta, antes e após o processo de extração de óleo. A extração de lipídios pelo método de Bligh e Dyer apresentou o maior rendimento (52,49±3,37%) dentre os métodos assistidos por ultrasom. Das dez microalgas cultivadas em salinidades diferentes, seis tiveram seus rendimentos de óleo aumentados quando a salinidade foi reduzida de 35 para 25, com um incremento máximo de oito vezes em Tetraselmis sp., enquanto o rendimento de óleo aumentou em três espécies quando a salinidade foi elevada de 25 para 35, com um incremento de três vezes em C. vulgaris. O aumento das quantidades de nitrato de sódio nos meios de cultivo resultou na elevação da recuperação de biomassa das microalgas Nannochloropsis oculata e C. vulgaris, enquanto a redução das quantidades desse nutriente resultou no aumento dos rendimentos de óleo de todas as microalgas, principalmente para as espécies descritas acima. Finalmente, foi constatado que alguns parâmetros zootécnicos de crescimento dos camarões marinhos foram bem melhores no experimento que utilizou inclusão da biomassa natural de C. vulgaris no lugar da biomassa delipidada, embora a inclusão de 0,5% da última também tenha apresentado resultados satisfatórios. Com relação aos imunoparâmetros, a inclusão da biomassa natural ou delipidada de C. vulgaris na dieta dos camarões, independente da quantidade utilizada, aumentou a concentração de proteínas totais e reduziu a atividade da fenoloxidase no soro dos animais.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-09-04T17:28:37Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2871487 bytes, checksum: 93ead2c58375b69782a5d7277b06e620 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-04T17:28:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2871487 bytes, checksum: 93ead2c58375b69782a5d7277b06e620 (MD5) Previous issue date: 2017-06-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Leishmania infantum chagasi é um protozoário intracelular responsável por causar uma doença fatal em humanos, a leishmaniose visceral. Identificar moléculas que estejam envolvidas no processo de infecção da célula do hospedeiro pelo parasito é importante para a concepção de estratégias para o controle da doença. Dentre estas moléculas estão as Proteínas Ligantes de Heparina (PLH’s), cuja característica principal é a capacidade de se ligar a carboidratos presentes em glicoproteínas ou glicolipídios. Há evidências de que PLH’s presentes na superfície de Leishmania participam dos processos de adesão e penetração dos parasitos nos tecidos e células, tanto dos hospedeiros vertebrados quanto dos invertebrados. Portanto, compreender as interações entre a PLH de L. chagasi (PLHLc) e o açúcar ao qual ela se liga, a heparina, bem como demonstrar propriedades da proteína, é importante para desenvolver mecanismos que interrompam a progressão da infecção. Este trabalho foi dividido em dois manuscritos onde foi proposto para o primeiro identificar e realizar análises estruturais in silico e análises funcionais da PLHLc. A proteína foi sequenciada e identificada como sendo a proteína LPG3 de L. infantum chagasi, que foi então sintetizada, clonada e a composição da sua estrutura foi determinada. Cromatografia de gel filtração, eletroforese em gel não desnaturante e ensaio de cross- linking sugerem que a rPLHLc/LPG3 está organizada como um tetrâmero. Calorimetria de titulação isotérmica confirma a capacidade da proteína em se ligar a heparina com afinidade micromolar. A inibição da atividade ATPásica pela presença da heparina, juntamente com as análises in silico, sugerem que o sítio de ligação a heparina sobrepõe ao sitio de ligação ao ATP. No segundo trabalho a proteína recombinante produzida foi avaliada para o imunodiagnóstico da Leishmaniose Visceral Canina apresentando sensibilidade de 79-87% e especificidade de 63-83%, indicando o potencial da rPLHLc/LPG3 recombinante no diagnóstico imunológico da LVC. / Leishmania infantum chagasi is an intracellular protozoan parasite responsible for causing a fatal disease in humans, visceral leishmaniasis. Identification of molecules from the parasites involved in the host cell infection process is important for designing strategies to control this disease. Among these molecules is Heparin Binding Protein (HBP), whose main characteristic is the ability to bind to carbohydrates present in glycoproteins or glycolipids. Evidence suggests that HBP's present on Leishmania surface participate in the adhesion of parasites to tissues of both vertebrate and invertebrate hosts as well as in cell invasion. Therefore, understanding the interactions between L. chagasi HBP (HBPLc) and the sugar to which it binds, heparin, as well as demonstrating protein properties, is important to develop mechanisms that interrupt the infection progression. This work was divided into two manuscripts where it was proposed to first identify and perform in silico structural and functional PLHLc analyzes. The protein was sequenced and identified as the L. infantum chagasi LPG3 protein, which was then synthesized, cloned and the composition of its structure determined. Gel filtration chromatography, non-denaturing gel electrophoresis and cross-linking assay suggest that rPLHLc/LPG3 is organized as a tetramer. Isothermal titration calorimetry confirms the ability of the protein to bind heparin with micromolar affinity. Inhibition of ATPase activity by the presence of heparin, together with in silico analyzes, suggests that the heparin binding site overlaps the ATP binding site. In the second study, the recombinant protein was evaluated for the Canine Visceral Leishmaniasis immunodiagnosis presenting a sensitivity of 79-87% and specificity of 63-83%, indicating the potential of recombinant rPLHLc/LPG3 in the immunological LVC diagnosis.

Made available in DSpace on 2015-10-16T12:52:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 renata_barros_ini_mest_2013.pdf: 649069 bytes, checksum: ccf984958e0979b9f8cb5d6df59ab3fd (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015-06-10 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A toxoplasmose é uma zoonose causada pelo protozoário Toxoplasma gondii que acomete várias espécies de vertebrados, inclusive o ser humano. Os gatos, assim como os outros felinos, têm papel de suma importância na epidemiologia da infecção, pois são os hospedeiros definitivos do T. gondii. Esse trabalho teve como objetivo determinar a frequência de anticorpos anti-T.gondii associados a fatores de risco e co-infecções em 213 gatos com esporotricose oriundos da região metropolitana do Rio de Janeiro e assistidos no LAPCLIN-DERMZOO, no período de novembro de 2007 a fevereiro de 2011. Esses animais foram acompanhados mensalmente devido ao tratamento para esporotricose, até os seus desfechos clínicos. Foram realizadas sorologias seriadas para toxoplasmose por meio da hemaglutinação indireta (HAI) e pela reação da imunofluorescência indireta (RIFI) e diagnóstico para o feline imunnodeficiency virus (FIV) e o feline leukemia vírus (FeLV) através de um imunoensaio rápido. Dos 213 gatos, 14 (6,6%) apresentaram anticorpos anti-T. gondii na RIFI (IgG) e na HAI. Houve um caso único de soroconversão, no quarto acompanhamento Houve variação de pelo menos dois títulos na IgG-RIFI nos acompanhamentos de dois animais. Apenas um animal (7,1%) apresentou co-infecção de toxoplasmose com o FIV e três animais (21,4%) com o FeLV. Não foi detectada associação entre as variáveis e co-infecções estudadas e a presença de anticorpos anti-T. gondii, porém 78,6% dos gatos com infecção toxoplásmica apresentaram falência terapêutica no tratamento para esporotricose, sendo quatro deles (27,3%) FIV ou FeLV positivos. A frequência da infecção toxoplásmica nos gatos estudados foi baixa, houve uma maior frequência de animais soropositivos para T. gondii entre aqueles que tinham livre acesso a rua, conviviam com outros gatos e possuíam mais de três anos de idade e foi observada 100% de concordância no teste diagnóstico para T. gondii entre a RIFI e a HAI / Toxoplasmosis is a zoonotic disease caused by the Toxoplasma gondii protozoan that affects several species of vertebrates, incl uding human s . Cats, as well as other felines, a re important in the epidemiology of the infection because they are the definite hosts of T . gondii . This study aim ed to determine the frequency of anti - T . gondii antibodies associated with risk factors and coinfections in 213 cats infected with sporotrichosis in the metropolitan Rio de Janeiro and assisted in the LAPCLIN - DERMZOO , in the period of november 2007 to february 2011. These animals were monthly evaluate d due to sporotrichosis treatment until their sporotrichosis treatment outcomes. Serologic series for toxoplasmosis were performed through indirect he magglutination assay (IHA) and indirect fluorescence antibody test (I F A T) , and feline immunodeficiency vi rus (FIV) and feline leukemi a vi rus ( FeLV) diagnose s were made by fast immunoassay. Am ong the 213 studied cats, 14 (6. 6%) showed anti - T. gondii antibodies in the I F A T and in the IHA. There was only one occurrence of seroconversion in the fourth clinical evaluation . There was a variation of at least two titles in the I F A T - IgG in the clinical follow up of two animals. Just one animal (7. 1%) showed coinfection of toxoplasmosis with FIV a nd three animals (21. 4%) with FeLV. The association between variables a nd studied coinfections with the presence of T. gondii antibodies has not been detected, nonetheless 78.6% of the infected cats showed therapeutical failure in the sporotrichosis treatment , and four of them (27. 3%) were FIV or FeLV positive. The frequency of toxoplasmosis infection in the cats was low ; cats that had free access to the street , coexisted with other cats and were older than three years showed a higher rate of T. gondii positivity and a 100% concordance in the diagnostic test for T. gondii between IFAT and IHA was also observed.

Made available in DSpace on 2016-05-02T13:06:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 haroldo_junior_ioc_dout_2015.pdf: 2633312 bytes, checksum: 02a75ad07873abdb519b939eb64b351c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O vírus da Hepatite A (HAV) é o principal agente etiológico das hepatites virais agudas e estima-se que ocasione 1,5 milhão de novas infecções no mundo anualmente. Apesar da eficácia apresentada pelas vacinas comerciais, a replicação do HAV em cultura de células é lenta e apresenta baixo rendimento, o que torna a sua produção difícil e dispendiosa. Nesse contexto, o uso de proteínas recombinantes do HAV pode representar uma alternativa ao modelo de vacina existente. O presente trabalho teve como objetivo expressar e avaliar a imunogenicidade das partículas virais destituídas de ácido nucleico (VLPs) e da proteína VP1 do HAV. As VLPs foram geradas a partir do sistema baculovírus/células de inseto através da infecção de células de inseto com baculovírus recombinantes contendo as regiões P1-2A e P3 do genoma do HAV. A poliproteína P1-2A foi expressa, clivada e se organizou em estruturas que continham epitopos conformacionais de neutralização. Partículas com características similares ao HAV foram identificadas por microscopia eletrônica, sugerindo que as proteínas expressas se montaram em VLPs. Em paralelo, a VP1 foi expressa nos sistemas baculovírus/células de inseto e Escherichia coli Níveis mais elevados de expressão foram obtidos em E. coli, o que consequentemente aumentou a taxa de recuperação da proteína purificada. A VP1 derivada de E. coli foi utilizada nos ensaios de antigenicidade e mostrou reatividade frente aos soros de pacientes infectados pelo HAV, o que demonstra seu potencial como um marcador para diagnóstico. Para os estudos de imunogenicidade, a VP1 derivada de E. coli foi combinada a dois adjuvantes, o hidróxido de alumínio (A1(OH)3) e o adjuvante a base de saponina. A formulação VP1+A1(OH)3 induziu polarização da resposta Th2, enquanto que a formulação VP1r+saponina gerou um balanço maior entre as respostas Th1 e Th2. O adjuvante saponina permitiu a administração de uma dose menor da VP1 sem afetar a intensidade da resposta. Resultados preliminares sugerem que os anticorpos anti-VP1 induzidos pela formulação com saponina apresentaram reatividade cruzada com o HAV. Além disso, testes iniciais indicam que os camundongos imunizados com a VP1 em associação com ambos os adjuvantes apresentaram resposta anamnéstica contra o HAV. Os resultados aqui apresentados sugerem que a VP1 e as VLPs podem ser úteis para o desenvolvimento de uma nova vacina contra a Hepatite A / The hepatitis A virus (HAV) is the primary etiological agent of acute viral hepatitis and it is estimated to cause 1.5 million of new infections each year worldwide. Despite the effectiveness of commercial vaccines, the replication of HAV in cell culture is slow and has low yield, which makes it difficult and expensive to manufacture. In this context, the use of recombinant HAV proteins could represent an alternative model to the existing vaccines. This study aimed to express and evaluate the immunogenicity of virus-like-particles (VLPs) and VP1 protein of HAV. The VLPs were generated using the baculovirus/insect cell expression system by the infection of insect cells with recombinant baculovirus containing HAV P1-2A and P3 regions. The P1-2A polyprotein was successfully expressed, cleaved and organized into structures that contained neutralizing conformational epitopes. HAV-like particles were identified by electron microscopy, suggesting that the expressed proteins were assembled into VLPs. In parallel, VP1 was expressed in both baculovirus/insect cell and Escherichia coli expression systems. Higher protein levels were obtained in E. coli, which consequently increased the recovery rate after protein purification. The E. coli-derived VP1 was then used in antigenicity assays and showed reactivity against sera from patients infected with HAV, demonstrating its potential as a diagnostic marker. For immunogenicity studies, the E. coliderived VP1 was combined with two adjuvants, aluminum hydroxide (Al(OH)3) and the saponin-based adjuvant. The VP1+Al(OH)3 induced Th2 polarization, while VP1+saponin generated a Th1 and Th2 balanced immune response. Saponin-based adjuvant formulations allowed the administration of lower dose of VP1 without affecting the intensity of the response. Preliminary results suggest that the anti-VP1 antibodies induced by saponin-based adjuvant showed cross-reactivity with HAV. Furthermore, initial tests indicate that immunization of mice with VP1 in association with both adjuvants generated anamnestic response against HAV. The results presented here suggest that VP1 and VLPs might be useful to develop a new vaccine against hepatitis A. / 2016-07-10

Made available in DSpace on 2016-05-16T12:51:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 marcos_almeida_ini_mest_2014.pdf: 14714832 bytes, checksum: be975491bb39d63940e3b535442ff649 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A histoplasmose é uma micose cosmopolita causada pelo fungo dimórfico Histoplasma capsulatum, cujo habitat é o solo rico em excretas de aves e morcegos. Esta infecção ocorre a partir da inalação de propágulos de H. capsulatum e apresenta um amplo espectro clínico, variando de formas leves a disseminadas, a depender do inóculo infectante, do status imunológico do hospedeiro e da virulência da cepa. O diagnóstico da histoplasmose é baseado em aspectos clínicos, epidemiológicos, radiológicos e laboratoriais, embora alguns sintomas possam ser confundidos com outras doenças, tais como a tuberculose e outras micoses. O teste de referência para a confirmação do diagnóstico é o isolamento e identificação de H. capsulatum em cultivo. Entretanto, na ausência dos mesmos, a sorologia tem sido utilizada para o diagnóstico presuntivo da histoplasmose através da detecção de anticorpos. O principal complexo antigênico utilizado para a detecção de anticorpos anti-H. capsulatum é a histoplasmina, constituída principalmente pelos antígenos C, H e M. Estes últimos, em sua forma nativa, são glicoproteínas contendo epítopos protéicos específicos e glicosídicos inespecíficos. Deglicosilações químicas pelo metaperiodato de sódio (NaIO4) provaram aumentar a sensibilidade e especificidade em métodos imunoenzimáticos, tais como Western blot e ELISA, reduzindo a reatividade cruzada com outros fungos O principal objetivo do presente estudo foi validar o método imunoenzimático (Western blot) para a detecção de anticorpos no diagnóstico da histoplasmose. Desta forma, foi realizado um estudo casocontrole, utilizando 118 amostras de soro de pacientes com histoplasmose e 118 amostras de soro de indivíduos com história clínico-epidemiológica compatível com micose sistêmica, saudáveis ou acometidos por outra micose ou tuberculose, residentes no estado do Rio de Janeiro. As amostras foram coletadas no período de 2000 a 2013 e encaminhadas ao Laboratório de Micologia do Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Os parâmetros de validação diagnóstica foram calculados considerando a categorização dos resultados obtidos em uma tabela 2 X 2 e analisados pelo SPSS 17.0. O Western blot demonstrou uma sensibilidade de 94,9%, especificidade de 94,1%, acurácia de 94,5% e uma precisão quase perfeita. As fitas demonstraram-se viáveis para utilização por até cinco anos após a sensibilização com o antígeno HMIN-PT. Estes resultados comprovam a validade do ensaio imunoenzimático (Western blot) para detecção de anticorpos anti-H. capsulatum utilizando HMIN-PT como uma ferramenta de boa acurácia no diagnóstico da histoplasmose e reprodutível. Desta forma, contribuindo para o melhoramento do diagnóstico desta micose, uma vez que esta técnica permitirá a obtenção de resultados em menos de 24 horas, o que supõe um grande avanço a despeito das técnicas existentes na atualidade e poderá vir a ser implantada e disponibilizada para outros centros do Sistema Único de Saúde. / Histoplasmosis is a worldwide systemic mycosis caused by the dimorphic fungus Histoplasma capsulatum. The fungus lives in soil that contains large amounts of birds or bats droppings. This infection occurs through inhalation of spores of H. capsulatum and has a wide clinical spectrum, ranging from mild to disseminated forms that depend on the infecting inoculum, the immune status of the host and the virulence of the strain. The diagnosis of histoplasmosis is based on clinical, epidemiological, radiological and laboratory aspects; however, some symptoms may be confused with other diseases, such as tuberculosis and other mycoses. The reference test for the confirmation of the diagnosis of histoplasmosis is the isolation and identification of H. capsulatum in culture. However, in the absence of it, serology has been used for the presumptive diagnosis of histoplasmosis through antibody detection. The principal antigenic complex used to detect antibodies anti-H. capsulatum is the histoplasmin, consisting mainly of antigens C, H and M. These antigens, in their native forms, are glycoproteins containing specie-specific protein epitopes and non-specific glycosides. Chemical deglycosylations by sodium metaperiodate (NaIO4) have shown to increase the sensitivity and specificity of immunoenzymatic methods, such as Western blot and ELISA, reducing cross-reactivity with other fungi. The aim of this study was to validate the immunoassay method (Western blot) to detect antibodies in the diagnosis of histoplasmosis Therefore, a case-control study was conducted using 118 serum samples from patients with histoplasmosis, and 118 serum samples from individuals with clinical and epidemiological history compatible with systemic mycosis, either healthy or suffering from other mycosis or tuberculosis. These patients were residents in the state of Rio de Janeiro and the samples, collected from 2000 to 2013, were sent to the Mycology Laboratory of the Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Diagnostic validation parameters were calculated based on the categorization of results obtained in a 2 x 2 table and analyzed using SPSS Statistics 17.0. The Western blot was shown sensitivity of 94.9%, specificity of 94.1%, accuracy of 94.5% and also almost perfect precision. Besides, the strips have been proved to be viable for use or at least five years after the sensitization with antigen HMIN-PT. These results prove the validity of the enzyme immunoassay (Western blot) for the detection of antibodies anti-H. capsulatum, using HMIN-PT as a good accuracy tool in the diagnosis of histoplasmosis and reproducible, contributing to improve the diagnosis of this mycosis, since this technique allows obtaining results in less than 24 hours which implies a breakthrough despite existing at present and will eventually be deployed and made available to other centers belonging to the Public Health System

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-04-28Bitstream added on 2014-06-13T20:15:34Z : No. of bitstreams: 1 vieira_ep_me_botfm.pdf: 369040 bytes, checksum: 5915a57d72f07e1e5440fa8514d1edc8 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A rotura prematura de membranas pré-termo (RPM-PT), é uma das principais causas de prematuridade, ocorrendo em 30% a 40% dos nascimentos prematuros. Sua etiologia está relacionada à ascensão bacteriana do trato genital inferior para a decídua e membranas corioamnióticas. Quantificar a expressão de IL-18 pelas membranas corioamnióticas de gestantes com RPM-PT e avaliar a relação dessa expressão com a presença de corioamnionite histológica. Foram incluídas no estudo 30 gestantes com RPM-PT em trabalho de parto e 20 gestantes com RPM-PT fora do trabalho de parto. Como grupo controle, foram avaliadas 30 gestantes normais, fora de trabalho de parto, que tiveram indicação de cesárea para resolução da gestação de termo. No momento da resolução da gestação, após a dequitação, foram retirados fragmentos das membranas corioamnióticas e acondicionados em RNA later para posterior quantificação do RNAm de interleucina (IL)-18 pela técnica de PCR em tempo real. Outros fragmentos das membranas foram submetidos à análise histopatológica para avaliação da presença de corioamnionite. No período do estudo, a incidência de RPM-PT foi de 6,2%. A presença de corioamnionite foi de 44% no grupo RPM-PT. A concentração relativa de RNAm de IL-18 não foi estatisticamente diferente nos grupos estudados. Não houve relação entre concentração relativa de RNAm de IL-18 e presença de corioamnionite. Conclusão: A RPM-PT não é capaz de induzir aumento na concentração relativa de RNAm de IL-18 e não existe relação entre expressão relativa dessa citocina e corioamnionite. / Preterm premature rupture of the membranes (PPROM) is one of the major causes of prematurity, accounting for 30-40% of all preterm births. Its etiology is related to the ascending pathway of bacteria from the lower genital tract to the decidua and chorioamniotic membranes. To quantify the expression of the inflammatory cytokine interleukin-18 in the chorioamniotic membranes of pregnant women with PPROM and evaluate the correlation of this expression with the presence of the chorioamnionitis present in the membranes. Thirty PPROM women in labor and 20 PPROM without labor women were studied. As a control group 30 normal pregnant that underwent selective cesarean section without labor were studied. After delivery, samples of the chorioamniotic membranes were collected for histopathological analyses and others fragments were conditioned in RNA later for posterior quantification of cytokine mRNA expression by real time PCR. In the study period, the incidence of PPROM was 6.2% and in 44% of these samples the presence of chorioamnionitis was observed. mRNA expression of IL-18 was not statistically different in the groups studied. No difference occurred in the presence of chorioamnionitis in the membranes and the concentration of IL-18 mRNA. Conclusion: The concentration of IL-18 mRNA in the chorioamniotic membranes was not statistically different in the groups studied and this cytokine in PPROM is not related with the presence of the chorioamnionitis in the membranes.