Marketing practices like Money-Back Guarantees (MBGs) and warranties are quite controversial in the health care market. Despite their professed intention to improve consumer welfare, MBGs are often decried for taking advantage of consumers who might not have the correct information. This concern is valid especially given the salient features of health care markets: a) customization, b) expert service, and c) difficulty in measuring service quality. For instance, in the context of in-vitro fertilization (IVF)-a medical procedure to assist infertile couples in having children-many health care and policy experts argue that MBGs offered by fertility clinics are nothing but marketing gimmicks and that these clinics either sort and treat only the more fertile patients or overtreat patients with more aggressive and risky treatment protocols. This concern, however, is in stark contrast with the signaling literature in marketing and economics. The central idea of the signaling theory is that the cost of offering MBGs can be so high that low-quality clinics are not able to afford mimicking the high-quality clinics' offering of MBGs. Essentially then, only high-quality clinics would be able to afford MBGs. Given these contrasting viewpoints, my dissertation aims to advance our understanding of the strategic MBG decisions in the health care market. Utilizing data from the U.S. IVF market, I investigate the relationship between MBGs and clinic capability, which contains two aspects: a) service quality, i.e., the effectiveness in transforming input to treatment outcome (or quality output), and b) service productivity, i.e., the efficiency in transforming input to production possibility (or quantity output). Considering the nature of the IVF market, my findings have natural extension to other health care and expert service markets. In chapter 2 (essay one), I empirically examine the underlying mechanism of MBGs-whether MBGs in the IVF market can act as credible signals of quality or simply marketing gimmicks-by investigating the relationship between MBG offers and treatment outcomes at the clinic level. The analysis is conducted on a large and unique longitudinal dataset that includes a) clinic-level treatment and outcome statistics for almost all IVF clinics in the U.S., b) fertility clinic characteristics and MBG decisions, c) information on state-level insurance mandates, and d) demographic characteristics. Using an instrument variable approach to account for the endogeneity of MBG decisions made by fertility clinics, I find that compared to clinics not offering MBGs, clinics offering MBGs secure better treatment outcomes (i.e., higher live birth rate) and use less aggressive treatment (i.e., transferring fewer embryos) without sorting higher fertility patients or imposing higher long-term risk (i.e., multiple birth rate). These results taken together suggest that MBGs can work as signals of quality despite the incentives for clinics to engage in opportunistic behaviors.In chapter 3 (essay two), I empirically examine the relationship between MBG decisions and clinic productivity. To quantify the unobserved productivity, I first incorporate the quantity-quality tradeoff into the production function and then estimate it using a non-parametric structural model approach recently developed in the economics literature. Empirically, to handle the endogeneity challenge caused by unobserved productivity, I use input change decision (i.e., hiring and investment) as a proxy for productivity. Then, I use an instrument variable approach to deal with the attenuation bias caused by measurement error in quality output. The results show that a) the quantity-quality tradeoff exists in the IVF market, b) expert labor plays a more important role than capital in determining the production quantity, and c) clinics with higher productivity are more likely to be offering MBGs, being non-profit, with longer experience, providing service to single woman, with higher competition, and in states with IVF insurance mandates. Compared to non-MBG clinics, MBG clinics have higher capability because they are not only more effective in transforming resource to successful outcome, but also more efficient in transforming capital and labor to production capacity. Shedding light on the public policy debate over MBG practice in the IVF industry, my study indicates that traditional marketing strategies deserve nuanced analysis in the health care and expert service markets.

A maturação in vitro do oócito é um dos fatores limitantes na produção in vitro de embriões. In vivo, esta maturação é um processo altamente orquestrado no qual a meiose é retomada pela onda de gonadotrofina que antecede a ovulação e que induz à queda dos níveis de AMPc no oócito. No entanto, os oócitos aspirados ao serem retirados dos folículos ovarianos retomam espontaneamente a maturação comprometendo a competência de seu desenvolvimento. O AMPc é sintetizado pela adenilato ciclase (AC) e degradado pelas fosfodiesterases (PDE), existindo algumas relacionadas à degradação do AMPc e outras do GMPc. Sendo assim, a proposição deste trabalho foi averiguar a contribuição de diferentes isoformas de fosfodiesterases na retomada da meiose e nos níveis de GMPc, AMPc e ainda, determinar quando há manutenção de AMPc em níveis elevados observando sua influência na competência oocitária e ativação da MAPK. Para isso, os complexos cumulus-oócito (CCOs) foram maturados in vitro na ausência, presença ou associação de inibidores de PDEs-AMPc e GMPc específicas e FSHr. As amostras foram avaliadas em relação a: 1) taxa de maturação; 2) níveis intracelulares de AMPc e GMPc nos CCOs; 3) taxa de desenvolvimento de blastocistos ; 4) ativação da MAPK em oócitos e células do cumulus. Os resultados obtidos no primeiro experimento indiaram que o inibidor da PDE3 foi o mais eficaz (p<0,05) em atrasar a retomada da meiose, às nove horas de maturação, porém, isolado ou em associação com o inibidor da PDE8, não foi capaz de alterar (p>0,05) os níveis de AMPc. No experimento dois, o inibidor da PDE5 isolado não influenciou a retomada da meiose (p>0,05), porém, quando associado aos inibidores da PDE3 e 8 houve atraso na retomada (p<0,05) e ainda alteraram os níveis de GMPc e AMPc (p<0,05) nas primeiras horas de maturação. O experimento três mostrou a influencia do FSHr durante a MIV, o qual estimulou a retomada da meiose, mas em associação com inibidores da PDE5 e 8 atrasa a retomada (p<0,05). Além disso, o FSHr provoca aumento do nível de AMPc e sua associação com inibidores de PDE5 e PDE8 ocasionou elevação adicional (p<0,05). As condições de cultivo estudadas no experimento quatro mostraram que a maturação induzida (pré-MIV de duas horas com agentes para elevar AMPc seguindo de 22 horas de MIV com FSH associado a inibidores de PDEs) atrasaram a retomada da meiose às nove horas de maturação, mas não afetaram progressão da meiose às 24, 28 e 30 horas. Os tratamentos, porém, não melhoraram a competência oocitária após a fertilização in vitro e ocasionaram pequenas variações na ativação da MAPK em oócitos e células do cumulus. / In vitro maturation of oocytes is a limiting factor in the in vitro production of bovine embryos. In vivo, this maturation is a highly orchestrated process in which meiosis resumption by the gonadotropin surge that precedes ovulation induces the decrease in cAMP levels in the oocyte. However, when oocytes are removed from follicles, they spontaneously resume maturation compromising the competence for its development. cAMP is synthesized by adenylyl cyclase (AC) and degraded by phosphodiesterases (PDE), and there are some PDEs related to degradation of cAMP and/or cGMP. Thus, the purpose of this work was to investigate the contribution of different isoforms of phosphodiesterases in the resumption of meiosis and levels of cAMP and, also, to determine differences in signaling pathways when maintaining high levels of cAMP and its influence on oocyte competence. For this purpose, cumulus-oocyte complexes (COC) were matured in vitro in the presence, absence or combination of inhibitors of cAMP- and cGMP-specific PDEs and FSH. Samples be were evaluated in relation to: 1) maturation rate, 2) intracellular levels of cAMP and cGMP in COCs, 3) rate of blastocyst development and 4) activation of MAPK in oocytes and cumulus cells. The results of the first experiment showed that the PDE3 inhibitor is more effective (p <0.05) in delaying meiosis resumption, at nine hours of maturation, but was not capable of altering cAMP levels (p> 0.05) either alone or in combination with the PDE8 inhibitor. In experiment two, the PDE5 inhibitor alone did not affect the meiosis resumption (p> 0.05), however, when associated with PDE3 and PDE8 inhibitors it delayed their resumption (p <0.05) and also altered cGMP and cAMP levels of (p <0.05) in the early hours of maturation. The third experiments showed the influence of FSHr during IVM, which stimulated the resumption of meiosis, but in combination with PDE5 and PDE8 inhibitors meiosis was delayed (p <0.05). Furthermore, FSHr causes increased levels of cAMP and its association with PDE5 and PDE8 inhibitors caused an additional increase (p <0.05). Culture conditions studied in experiment four showed that induced maturation (pre-IVM for two hours with agents to elevate cAMP followed by 22 hours IVM with FSH associated with PDE inhibitors) delayed the resumption of meiotic maturation at nine hours, but has no effect on meiosis progression at 24, 28 and 30 hours. The treatments, however, did not improve oocyte competence after in vitro fertilization and caused minor variations in the activation of MAPK in oocytes and cumulus cells.

A produção in vitro de embriões (PIVE) bovinos é uma ferramenta importante na reprodução animal, com aplicações acadêmicas e comerciais, e com grande relevância econômica. Apesar da sua aplicabilidade, a eficiência da PIVE ainda pode ser aumentada. Efeitos espermáticos podem ser evidenciados no desenvolvimento embrionário durante a PIVE apresentando grandes variações nas taxas de produção. Devido ao aspecto multifatorial da fertilidade, as avaliações espermáticas apresentam resultados inconstantes, mesmo com o uso de métodos mais precisos de análise como a citometria de fluxo, combinada às sondas fluorescentes, que permitem avaliar maior número de espermatozoides e de atributos simultaneamente. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de atributos espermáticos (motilidade antes e após gradiente de Percoll®, integridade de membranas plasmática e acrossomal, alto potencial de membrana mitocondrial e resistência da cromatina) de maneira individual, (diferença para apenas para um atributo espermático) e de maneira combinada em perfis espermáticos (diferença para todos os atributos espermáticos simultaneamente). O efeito foi avaliado por meio das taxas de clivagem, blastocisto e eficiência de desenvolvimento embrionário (taxa de blastocisto/taxa de clivagem). Os resultados demonstraram que os atributos motilidade prévia ao Percoll®, a integridade da membrana acrossomal e o potencial de membrana mitocondrial, individuais, apresentam efeito negativo sobre as taxas de desenvolvimento embrionário e de blastocisto. A motilidade após o gradiente de Percoll®, a integridade da membrana plasmática e a resistência da cromatina, bem como a combinação de todos os atributos espermáticos analisados, sob mesmas condições, não apresentaram efeito sobre a PIVE. Deste modo, conclui-se que controversamente alguns atributos espermáticos podem apresentar efeitos negativos sobre as taxas da PIVE e que a função e interação de atributos espermáticos com o processo in vitro devem ser mais bem compreendidas, a fim de permitir o aprimoramento deste processo podendo aumentar as taxas de produção, maximizando a eficiência da PIVE. / In vitro production (IVP) of bovine embryos is an important technology of animal reproduction. This technology is applied on research and livestock, with economic highlights, however IVP efficiency could be higher, and can be influenced by male effects. Until now, sperm evaluations had failed to determine these male effects, even using advanced technologies such as large mix of fluorescent probes by flow cytometry analysis, which evaluates a large number of sperm cells and traits simultaneously. Then, the aim of this study was to determine the effect of sperm traits (motility before and after Percoll® selection, plasma membrane and acrosome integrity, high mitochondrial membrane potential, and chromatin structure) on IVP rates. Effect of each trait was enriched to evaluate the individual trait effect (differences between groups of bulls exclusively for the enriched trait, while others traits was homogenous). Combined effect of traits was also evaluated (differences between groups of bulls, and groups of batches from same bulls, for all traits simultaneously, generating a sperm profile). Enriched and combined effects were evaluated on cleavage, blastocyst and embryo development (blastocyst/cleavage) rates. Results showed that motility before Percoll® selection, acrosome integrity, and high mitochondrial membrane enriched effects had negative impact on blastocyst and embryo development rates. Motility after Percoll® selection, plasma membrane integrity, chromatin structure, and combined effects were not significant on IVP rates. We can conclude that controversially, some sperm traits could have a negative effect on IVP outcomes, thereafter sperm traits physiology and interactions with in vitro systems must be better understood to enhance in vitro fertilization conditions, increasing IVP yields.

Thesis advisor: Diane Scott-Jones / The purpose of this study was to explore young adults' views on building their future families; methods of having children including adoption, in vitro fertilization (IVF), donor insemination, egg donation, and surrogacy; disclosure of these methods to children; and the importance of children's contact with extended family. The sample consisted of 82 Boston College students, 41 males and 41 females, with a mean age of 20.67 years. Participants completed a questionnaire and an open-ended interview. The majority of the participants expected to have a life-long partner, raise at least one child, and help their children build relationships with extended relatives. Males and females did not differ on most questions; however females reported thinking about their future families more often than did males (p = .01), and females expected to start their families earlier than did males (p = .02). Participants were more open to adoption than to assisted reproduction technology (ART). IVF was the most preferred among the methods of ART (p < .001). Participants reported they would be most likely to disclose information to their child had they used adoption or ART and were the genetic parent. Some participants emphasized the importance of disclose to a child had they used ART and were not the genetic parents; approximately one-fourth of participants affirmed that a child has a right to know. Participants reported it would be easier to answer their children's questions about adoption or ART than to initiate a discussion on these topics with their children (p < .001). The majority of participants reported that it was important to help their children build connections with extended family and they planned to accomplish this through visiting and preserving family traditions. The findings provide insight into young adults' expectations for creating their families. / Thesis (BA) — Boston College, 2003. / Submitted to: Boston College. College of Arts and Sciences. / Discipline: Psychology. / Discipline: College Honors Program.

Este trabalho foi conduzido com a finalidade de se verificar a influência da receptora e do embrião sobre o índice de prenhez (IP) e proporção de sexo. Um total de 431 embriões produzidos in vitro foram transferidos não cirurgicamente para o corno uterino de receptoras mestiças, previamente sincronizadas, de acordo com o desenvolvimento embrionário e grau de qualidade do embriâo. O primeiro exame de diagnóstico de prenhez (DP) foi realizado aos 26-28 dias da transferência e o segundo, aos 50-52 dias, quando foram também realizadas as avaliações das receptoras e a determinação do sexo dos fetos através da ultra-sonografia. O índice de prenhez foi de 38,0% (164/431) para o primeiro DP e 92,1% (151/164) das receptoras permaneceram prenhes aos 50-52 dias, evidenciando 7,9% (13/164) de perdas embrionárias e/ou fetais entre os exames. Maiores índices de prenhez (P<0,05) foram obtidos para embriões classificados como de grau 1 (86,5%) e desenvolvimento embrionário ao estágio de blastocisto expandido (Bx; 40,1%). A avaliação das receptoras revelou maior ocorrência de corpos lúteos (CL) no ovário direito (65,1% vs. 34,9%), contudo, sem influenciar no IP, com 92,8% e 88,5% de prenhez, respectivamente, para CL no ovário direito e esquerdo. O tipo de CL (grau 1, 2 ou 3) afetou o IP, com o Cl de grau 1 (53,8%) produzindo mais animais prenhes (P<0,05) do que os demais. A presença de folículo em um ou ambos ovários, não influenciou (P>0,05) o IP, a despeito de sua ocorrência no lado direito (90,6%) ou esquerdo (92,0%). Mais (P<0,05) fetos macho (66,67%) do que fêmea (33,33%) foram obtidos a partir de embriões transferidos ao estágio de blastocisto inicial. Contudo, considerando os estágios de mórula, blastocisto inicial, blastocisto e blastocisto expandido, não houve diferença significativa (P>0,05) entre a proporção de fetos diagnosticados como sendo macho ou fêmea. Os diâmetros dos corpos lúteos, respectivamente, de 1,83, 1,88, 1,81 e 1,85cm, para receptoras com pelagem clara, malhada, marrom e preta, não influenciaram (P>0,05) os índices de prenhez, o mesmo acontecendo com relação ao tamanho do folículo, o qual variou de 0,50 a 1,6 cm de diâmetro. Baseado nos resultados obtidos, podemos concluir que tanto a receptora quanto o embrião influenciaram os índices de prenhez, sendo que o estágio do embrião também afetou a proporção de sexo dos fetos. / This study was carried out to verify the influence of the recipient and embryo on pregnancy rate (PR) and proportion of sex. A total of 431 in vitro- produced embryos were non-surgically transferred to the uterine horns from crossbred recipients previously synchronized, according to the embryo development stage and quality grade. The first exam for pregnancy was performed between 26th-28th day of embryo transfer following a second exam between 50th-52th day, when recipient evaluation and fetal sex determination were performed by ultrasonography. The pregnancy rate was 38,0% (164/431) for the first exam and 92,1% (151/164) of the recipients were kept pregnants on day 50-52, leading a 7,9% (12/164) of embryonic and/or fetal loss between the exams. Higher pregnancy rate (P<0,05) were obtained for embryo graded as 1 (86,5%) and embryo development at expanded blastocyst stage (EB;40,1%). The recipients evaluation showed more corpora lutea (CL) in the right ovary (65,1% vs.34,9%); however, it did not influence PR, with 92,8% and 88,5% of pregnancies, respectively, to CL in the right or left ovary. The type of CL affected the PR, with CL graded as 1 (53,8%) producing more pregnancies (P<0,05) than the others. The presence of a follicle in one or both ovaries did not influence (P>0,05) the PR, in despite of its presence in the right side (90,6%) or in the left side (92,0%). More (P< 0,05) male fetus (66,67%) than female ones (33,33%) were obtained from transferred embryos to the early blastocyst stage. However, considering the early blastocyst, blastocyst and expanded blastocyst stages, no difference (P>0,05) between the proportion of sex fetus was found. The CL diameters, respectively, from 1,83, 1,88, 1,81 and 1,85 cm for light-hair, threshed, brown and black recipients, did not affect (P>0,05) the PR, and the same happend in relation to the size of the follicle, which varied from 0,50 to 1,6 cm in diameter. These results suggest that the recipient and the embryo can influence the pregnancy rate and embryo development stage also affect the proportion of sex.

A maturação in vitro de oócitos (MIV) é uma importante tecnologia reprodutiva a qual gera oócitos maduros capazes de suportar o desenvolvimento embrionário pré-implantacional e sua completa evolução à termo. Muitos fatores levam ao processo de maturação do oócito, e o AMH (hormônio anti-Mülleriano) tem demonstrado possuir um importante efeito nesta etapa. Neste trabalho nós demonstramos a influência da suplementação de AMH na maturação de complexos cumulus-oócito (COCs). Nossos resultados demonstram que não houve efeito na produção de embriões para COCS grau I. Entretanto, pudemos encontrar diferenças significativas entre os COCs graus II e III maturados na presença de 150ng/ml de AMH. Aqui também demonstramos que não houve diferença significativa na expressão relativa de mRNA para os genes AMHRII e FSHR no oócito, e na expressão relativa de mRNA para os genes AMH, AMHRII e FSHR nas células da granulosa. Nossos resultados corroboram com as importantes funções do AMH na produção de embriões, sugerem que a suplementação do meio de maturação de oócitos com AMH pode ajudar a melhorar a produção de blastocistos. / The in vitro oocyte maturation (MIV) is an important reproductive technology that generates mature oocytes able to support the preimplantation embryonic development and their fully evolution to term. Many factors lead to oocyte maturation process, and the AMH (AntiMüllerian hormone) have demonstrated important effects in the oocyte development. Here, we report the influence of AMH supplementation in the cumulus-oocyte complex (COCs) maturation. We found that AMH had no effect on embryo production of COCs grade I. On the other hand, significant differences between the COCs grade II and COCs grade III matured in AMH 150ng/ml were verified. We have also demonstrated that there were no significant difference in mRNA expression of the genes AMHRII and FSHR in the oocyte, and in mRNA of the genes AMH, AMHRII and FSHR in the granulosa cells. Taken together, the results corroborate the important roles for AMH on embryo production, and suggest that AMH supplementation could achieve successful outcome in the production of blastocysts.

Com o aumento do número de casais com infertilidade e com o surgimento de novas constelações familiares, como no caso de relações homoafetivas, é crescente a demanda por técnicas de reprodução assistida. Diante disso, faz-se extremamente necessária a ampliação do conhecimento acerca da potencial associação entre os transtornos psiquiátricos e a infertilidade, bem como do possível aumento de prevalência de transtornos dessa natureza nesta população. Embora muitos estudos sugiram um aumento de sintomas depressivos e de ansiedade em pessoas que sofrem com a infertilidade, poucos avaliam o impacto emocional relacionado a esse problema de forma mais objetiva. Dessa forma, este estudo se propõe a descrever a população de mulheres que procuram tratamento com técnicas de reprodução assistida, averiguando a presença prévia de patologias psiquiátricas e o uso de psicotrópicos, bem como identificando a presença de transtornos ansiosos e depressivos, ao longo do tratamento, por meio de entrevista psiquiátrica estruturada – Mini International Neuropsychiatric Interview (MINI) – e aplicação de escalas validadas. Do total de 90 pacientes entrevistadas, 40% tiveram um ou mais diagnósticos psiquiátricos detectados. Transtornos do humor estavam presentes em 21% das pacientes (10% depressão maior, 7,7% distimia e 3,3% transtorno do humor bipolar). O diagnóstico mais comum foi agorafobia (13,6%). Transtornos de ansiedade também foram altamente prevalentes, chegando a atingir 30% das pacientes. Notou-se, ainda, que mulheres com transtornos psiquiátricos reportaram mais história psiquiátrica prévia e tiveram maiores taxas de uso de medicamentos psicoativos (P<0,005). No momento do estudo, 13,3% estavam usando medicamentos psiquiátricos, 44%, antidepressivos inibidores seletivos da recaptação de serotonina, e 31%, benzodiazepínicos. Tais dados indicam que mulheres com infertilidade em busca por reprodução assistida estão em alto risco de síndromes depressivas e ansiosas. Elas têm altas taxas de história psiquiátrica prévia, bem como índices altos de uso de medicamentos psicotrópicos, muito embora essas questões habitualmente não sejam abordadas em clínicas de tratamento para infertilidade. / As the number of couples suffering from infertility rises and new family constelations emerge, such as homoafective relationships, there is an on growing demand for assisted reproductive techniques. Greater knowledge regarding the potential role of psychiatric aspects in the development of infertility and determination of the prevalence of psychiatric disorders in this population are extremely needed. Many studies suggest a higher prevalence of depressive symptons and anxiety, but only a handful evaluate the emocional impact of infertility more objectively. This study aims to describe the population of infertile women that seek assisted reproduction technology treatment, looking for the presence of prior psychiatric disorders and for the use of psychotropic medication, and mainly evaluating depressive and anxiety disorder during treatment through structured psychiatric interview and application validaded scales. All consecutive infertile women visiting the assisted reproductive technique clinic seeking to iniciate treatment that agreed to participate were included. Patients were submitted to an structured interview, the Mini- International Neuropsychiatric Interview (M.I.N.I.). The fertility history was colleted from subjects´ medical reports after all subjects had participated in the study and demografic data were collected by researchers during the interview along with the psychiatric examination. Of a total of 90 patients, 40% had one or more a psychiatric disorder. Mood disorders were detected in 21% of the patients (10% major depression, 7,7% dystimia, 3,3% bipolar disorder). The most commom diagnosis was agoraphobia (13,6%). Anxiety disorders as a group was also highly prevalent, reaching 30% of the patients. Women with psychiatric disorders were more likely to have reported psychiatric history and to be on psychiatric medication (P<0.005). A total of 13,3% were on current use of psychiatric medication, 44% taking SSRIS and 31% taken benzodiazepines. Women suffering from infertility seeking ART treatment are at high risk for depression syndromes and anxiety disorders. They also had high prevalence of previous psychiatric history and high prevalence of psychiatric medication use, nonetheless these issues are frequently not addressed in fertility clinics.

A integridade da cromatina espermática é fundamental para a transmissão das informações genéticas paternas, sendo que alterações de DNA podem levar a falhas no processo reprodutivo. Danos na cromatina espermática podem ocorrer por diversos motivos, sendo que os mais importantes são a apoptose, a deficiência de protamina e os danos causados pelas espécies reativas de oxigênio (EROs). Os danos de DNA espermático não impedem que o espermatozóide fecunde o oócito, entretanto podem causar perda embrionária por apoptose. A importância da integridade da cromatina espermática no desenvolvimento embrionário já foi descrita em humanos, sendo que pode ser atribuída como uma das causas de infertilidade masculina, quando está alterada. Contudo, as informações sobre a influência da integridade do DNA espermático no processo de fecundação e do desenvolvimento embrionário na espécie bovina são muito escassas. Devido à falta de informação sobre a relação da fragmentação de DNA e conseqüente alteração nos índices de desenvolvimento embrionário nessa espécie, este trabalho teve como objetivo avaliar o índice de fragmentação de DNA espermático em uma população de touros e verificar a influência dos possíveis danos de DNA espermático na produção in vitro (PIV) de embriões. Para isto, o sêmen congelado de 221 touros foi avaliado pelo ensaio de estrutura de cromatina espermática (SCSA). Após o ensaio, os animais foram divididos em seis grupos experimentais de acordo com o índice de fragmentação de DNA apresentado, sendo sete animais de cada grupo, escolhidos aleatoriamente para as avaliações espermáticas: motilidade, fragmentação de DNA espermático pelos ensaios SCSA e Cometa Alcalino e estresse oxidativo pelo ensaio de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). Posteriormente foi realizada a PIV de embriões, sendo avaliados os índices de clivagem e de blastocisto e realizado o ensaio de TUNEL para a avaliação da apoptose dos blastocistos produzidos. Em relação à motilidade espermática, o grupo 1 apresentou menor motilidade em relação ao grupo 4 (p<0,05). Não foi verificada diferença significativa da motilidade entre os outros grupos experimentais. O ensaio SCSA revelou que o grupo 1 apresentou menor susceptibilidade à fragmentação de DNA espermático quando comparado com o grupo 5 (p< 0,05). O grupo 2 apresentou susceptibilidade à fragmentação de DNA espermático inferior, quando comparado aos grupos 3, 4, 5 e 6 (p<0,05). Em relação ao ensaio Cometa Alcalino, a avaliação do estresse oxidativo e a PIV de embriões, não houve diferença significativa entre os grupos experimentais. Além disso, foi observada correlação negativa entre a intensidade média do Cometa e o índice de blastocisto produzido in vitro. O índice de blastocisto também apresentou correlação negativa com a intensidade média da cabeça do Cometa e ao ensaio TBARS. O ensaio TBARS apresentou correlação negativa com o índice de clivagem dos embriões PIV. Por outro lado, o ensaio TBARS apresentou correlação positiva com os ensaios SCSA e TUNEL. Considerando as condições experimentais, a fragmentação de DNA espermático não influenciou a PIV de embriões bovinos. / Sperm chromatin integrity is essential for the transmission of paternal genetic information. Changes in sperm DNA can lead to failures in the reproductive process. Loss of chromatin integrity may occur for several reasons, and the most important are apoptosis, protamine deficiency and damages caused by reactive oxygen species (ROS). The sperm DNA damage does not prevent the sperm to fertilize the oocyte, however it can cause embryonic loss by apoptosis. The importance of sperm chromatin integrity in embryonic development has been described in humans, and can be considered a cause of male infertility when it is disrupted. However, information on the influence of sperm DNA integrity in the process of fertilization and embryonic development in cattle are very scarce. Due to the lack of information on the relationship between DNA fragmentation and its consequence on embryonic development rates in this species, this study aimed to evaluate the sperm DNA fragmentation rate in a population of bulls and the influence of possible sperm DNA damage on in vitro production (IVP). For this, frozen semen from 221 bulls was evaluated by sperm chromatin structure assay (SCSA). After that, animals were divided into six groups, according to the DNA fragmentation rate observed. Then seven animals from each group were randomly chosen for sperm evaluation: motility, sperm DNA fragmentation by the SCSA and Alkaline Comet assay and oxidative stress by tiobarbituric acid reactive substances (TBARS). After sperm evaluations embryo IVP was performed. Cleavage and blastocyst rates were assessed and the obtained blastocysts were submitted to TUNEL assay for apoptosis evaluation. Regarding sperm motility, group 1 had lower motility compared to group 4 (p <0.05). There was no significant difference in motility between the other experimental groups. The SCSA revealed that group 1 showed lower susceptibility to sperm DNA fragmentation when compared to group 5 (p <0.05). Group 2 was less susceptible to sperm DNA fragmentation, when compared to groups 3, 4, 5 and 6 (p <0.05). For the alkaline comet assay, the assessment of oxidative stress and embryo IVP, no significant difference was shown between en experimental groups. Moreover, there was a negative correlation between the comet mean intensity and the blastocyst rate. The blastocyst rate also negatively correlated to the comet head mean intensity and TBARS. The TBARS was negatively correlated to cleavage rate. In addition, TBARS correlated positively to TUNEL assay and SCSA. Considering the experimental conditions, the sperm DNA fragmentation did not influence the IVP of bovine embryos.

Este trabalho foi conduzido com a finalidade de se verificar a influência da receptora e do embrião sobre o índice de prenhez (IP) e proporção de sexo. Um total de 431 embriões produzidos in vitro foram transferidos não cirurgicamente para o corno uterino de receptoras mestiças, previamente sincronizadas, de acordo com o desenvolvimento embrionário e grau de qualidade do embriâo. O primeiro exame de diagnóstico de prenhez (DP) foi realizado aos 26-28 dias da transferência e o segundo, aos 50-52 dias, quando foram também realizadas as avaliações das receptoras e a determinação do sexo dos fetos através da ultra-sonografia. O índice de prenhez foi de 38,0% (164/431) para o primeiro DP e 92,1% (151/164) das receptoras permaneceram prenhes aos 50-52 dias, evidenciando 7,9% (13/164) de perdas embrionárias e/ou fetais entre os exames. Maiores índices de prenhez (P<0,05) foram obtidos para embriões classificados como de grau 1 (86,5%) e desenvolvimento embrionário ao estágio de blastocisto expandido (Bx; 40,1%). A avaliação das receptoras revelou maior ocorrência de corpos lúteos (CL) no ovário direito (65,1% vs. 34,9%), contudo, sem influenciar no IP, com 92,8% e 88,5% de prenhez, respectivamente, para CL no ovário direito e esquerdo. O tipo de CL (grau 1, 2 ou 3) afetou o IP, com o Cl de grau 1 (53,8%) produzindo mais animais prenhes (P<0,05) do que os demais. A presença de folículo em um ou ambos ovários, não influenciou (P>0,05) o IP, a despeito de sua ocorrência no lado direito (90,6%) ou esquerdo (92,0%). Mais (P<0,05) fetos macho (66,67%) do que fêmea (33,33%) foram obtidos a partir de embriões transferidos ao estágio de blastocisto inicial. Contudo, considerando os estágios de mórula, blastocisto inicial, blastocisto e blastocisto expandido, não houve diferença significativa (P>0,05) entre a proporção de fetos diagnosticados como sendo macho ou fêmea. Os diâmetros dos corpos lúteos, respectivamente, de 1,83, 1,88, 1,81 e 1,85cm, para receptoras com pelagem clara, malhada, marrom e preta, não influenciaram (P>0,05) os índices de prenhez, o mesmo acontecendo com relação ao tamanho do folículo, o qual variou de 0,50 a 1,6 cm de diâmetro. Baseado nos resultados obtidos, podemos concluir que tanto a receptora quanto o embrião influenciaram os índices de prenhez, sendo que o estágio do embrião também afetou a proporção de sexo dos fetos. / This study was carried out to verify the influence of the recipient and embryo on pregnancy rate (PR) and proportion of sex. A total of 431 in vitro- produced embryos were non-surgically transferred to the uterine horns from crossbred recipients previously synchronized, according to the embryo development stage and quality grade. The first exam for pregnancy was performed between 26th-28th day of embryo transfer following a second exam between 50th-52th day, when recipient evaluation and fetal sex determination were performed by ultrasonography. The pregnancy rate was 38,0% (164/431) for the first exam and 92,1% (151/164) of the recipients were kept pregnants on day 50-52, leading a 7,9% (12/164) of embryonic and/or fetal loss between the exams. Higher pregnancy rate (P<0,05) were obtained for embryo graded as 1 (86,5%) and embryo development at expanded blastocyst stage (EB;40,1%). The recipients evaluation showed more corpora lutea (CL) in the right ovary (65,1% vs.34,9%); however, it did not influence PR, with 92,8% and 88,5% of pregnancies, respectively, to CL in the right or left ovary. The type of CL affected the PR, with CL graded as 1 (53,8%) producing more pregnancies (P<0,05) than the others. The presence of a follicle in one or both ovaries did not influence (P>0,05) the PR, in despite of its presence in the right side (90,6%) or in the left side (92,0%). More (P< 0,05) male fetus (66,67%) than female ones (33,33%) were obtained from transferred embryos to the early blastocyst stage. However, considering the early blastocyst, blastocyst and expanded blastocyst stages, no difference (P>0,05) between the proportion of sex fetus was found. The CL diameters, respectively, from 1,83, 1,88, 1,81 and 1,85 cm for light-hair, threshed, brown and black recipients, did not affect (P>0,05) the PR, and the same happend in relation to the size of the follicle, which varied from 0,50 to 1,6 cm in diameter. These results suggest that the recipient and the embryo can influence the pregnancy rate and embryo development stage also affect the proportion of sex.

A produção in vitro de embriões (PIVE) bovinos é uma ferramenta importante na reprodução animal, com aplicações acadêmicas e comerciais, e com grande relevância econômica. Apesar da sua aplicabilidade, a eficiência da PIVE ainda pode ser aumentada. Efeitos espermáticos podem ser evidenciados no desenvolvimento embrionário durante a PIVE apresentando grandes variações nas taxas de produção. Devido ao aspecto multifatorial da fertilidade, as avaliações espermáticas apresentam resultados inconstantes, mesmo com o uso de métodos mais precisos de análise como a citometria de fluxo, combinada às sondas fluorescentes, que permitem avaliar maior número de espermatozoides e de atributos simultaneamente. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito de atributos espermáticos (motilidade antes e após gradiente de Percoll&reg;, integridade de membranas plasmática e acrossomal, alto potencial de membrana mitocondrial e resistência da cromatina) de maneira individual, (diferença para apenas para um atributo espermático) e de maneira combinada em perfis espermáticos (diferença para todos os atributos espermáticos simultaneamente). O efeito foi avaliado por meio das taxas de clivagem, blastocisto e eficiência de desenvolvimento embrionário (taxa de blastocisto/taxa de clivagem). Os resultados demonstraram que os atributos motilidade prévia ao Percoll&reg;, a integridade da membrana acrossomal e o potencial de membrana mitocondrial, individuais, apresentam efeito negativo sobre as taxas de desenvolvimento embrionário e de blastocisto. A motilidade após o gradiente de Percoll&reg;, a integridade da membrana plasmática e a resistência da cromatina, bem como a combinação de todos os atributos espermáticos analisados, sob mesmas condições, não apresentaram efeito sobre a PIVE. Deste modo, conclui-se que controversamente alguns atributos espermáticos podem apresentar efeitos negativos sobre as taxas da PIVE e que a função e interação de atributos espermáticos com o processo in vitro devem ser mais bem compreendidas, a fim de permitir o aprimoramento deste processo podendo aumentar as taxas de produção, maximizando a eficiência da PIVE. / In vitro production (IVP) of bovine embryos is an important technology of animal reproduction. This technology is applied on research and livestock, with economic highlights, however IVP efficiency could be higher, and can be influenced by male effects. Until now, sperm evaluations had failed to determine these male effects, even using advanced technologies such as large mix of fluorescent probes by flow cytometry analysis, which evaluates a large number of sperm cells and traits simultaneously. Then, the aim of this study was to determine the effect of sperm traits (motility before and after Percoll&reg; selection, plasma membrane and acrosome integrity, high mitochondrial membrane potential, and chromatin structure) on IVP rates. Effect of each trait was enriched to evaluate the individual trait effect (differences between groups of bulls exclusively for the enriched trait, while others traits was homogenous). Combined effect of traits was also evaluated (differences between groups of bulls, and groups of batches from same bulls, for all traits simultaneously, generating a sperm profile). Enriched and combined effects were evaluated on cleavage, blastocyst and embryo development (blastocyst/cleavage) rates. Results showed that motility before Percoll&reg; selection, acrosome integrity, and high mitochondrial membrane enriched effects had negative impact on blastocyst and embryo development rates. Motility after Percoll&reg; selection, plasma membrane integrity, chromatin structure, and combined effects were not significant on IVP rates. We can conclude that controversially, some sperm traits could have a negative effect on IVP outcomes, thereafter sperm traits physiology and interactions with in vitro systems must be better understood to enhance in vitro fertilization conditions, increasing IVP yields.