A ação química, obtida pelo emprego de substâncias auxiliares de instrumentação, aliada à ação mecânica, promove a limpeza do sistema de canais radiculares. Determinadas propriedades das substâncias químicas, como a ação antimicrobiana, têm contribuído para a eliminação de microrganismos encontrados em dentes com necrose pulpar e infecção. O objetivo do estudo foi avaliar a ação antimicrobiana do hipoclorito de cálcio [Ca(OCl)2] em diferentes concentrações (0,5%, 1%, 2,5% e 5%) frente ao Enterococcus faecalis e compará-la com a ação do hipoclorito de sódio (NaOCl) pelos métodos de Difusão em Ágar e de Contato em Meio Líquido. A ampicilina 10 μg e água destilada foram utilizadas como controle positivo e negativo, respectivamente, no método de difusão em Ágar. No contato em meio líquido o microrganismo entrou em contato com a substância teste em períodos pré-determinados (15 segundos, 30 segundos, 1 minuto, 5 minutos e 10 minutos). O efeito da presença de dentina humana, albumina sérica bovina e endotoxina de Escherichia coli O55:B5 sobre as propriedades antimicrobianas das soluções foi avaliado. Os componentes teciduais e microbianos permaneceram em contato com a solução por 2 minutos, 30 minutos ou 6 horas. Os halos de inibição do crescimento microbiano verificados no Ágar foram mensurados. A presença ou ausência de turvação no meio líquido, indicando crescimento microbiano, foi determinada para cada tempo experimental, no método de contato em meio líquido. O número de unidades formadoras de colônia (UFC) por mililitro foi quantificado, após a exposição do microrganismo às substâncias químicas auxiliares, na presença dos componentes teciduais. Os resultados foram tabulados e realizou-se análise estatística. Observou-se que os maiores halos de inibição foram produzidos pelo Ca(OCl)2 5% (17,38 mm ±3,71), sendo inferior ao produzido pela ampicilina (30,35 mm ±1,64). Soluções de NaOCl e Ca(OCl)2, na mesma concentração, não apresentaram diferenças significativas entre si. Os diâmetros dos halos de inibição produzidos por NaOCl ou Ca(OCl)2 foram proporcionais ao aumento da concentração. O tempo de inibição para o crescimento do E. faecalis, em meio líquido, é menor em concentrações mais elevadas de Ca(OCl)2 e NaOCl. As soluções de NaOCl 2,5%, NaOCl 5% e Ca(OCl)2 2,5% e Ca(OCl)2 5.0% foram iguais entre si. A dentina e a endotoxina de E. coli não interferiram na ação antimicrobiana das soluções de hipoclorito testadas. A soluções de NaOCl 0,5%, 1% e 2,5% e de Ca(OCl)2 0,5% quando expostas à albumina, por 2 minutos, apresentaram seu efeito antimicrobiano reduzido. Concluiu-se que soluções de hipoclorito de cálcio apresentaram ação antimicrobiana frente ao E. faecalis, em concentrações similares às do hipoclorito de sódio empregadas em Endodontia. O efeito antimicrobiano demonstrado pelas soluções é proporcional a sua concentração, podendo ser modulado pela albumina, em curtos períodos de exposição. / The chemical action produced by the auxiliary substances can promotes the cleaning of the root canal system. Certain properties of chemical substances, such as their antimicrobial activity, have contributed to the elimination of microorganisms in infected pulp tissues. The aim of this study was to evaluate, in vitro, the antimicrobial activity of calcium hypochlorite [Ca(OCl)2] in different concentrations (0.5%, 1%, 2.5% and 5%) over Enterococcus faecalis and compare it to sodium hypochlorite (NaOCl) through the ágar diffusion method and the broth dilution method. Ampicillin 10 μg and distilled water were used as positive and negative control, respectively in the ágar diffusion method. In the broth dilution method, E. faecalis cells were exposed to the auxiliary chemical substances for (15 sec, 30 sec, 1 min, 5 min or 10 min). The effect of human dentin powder, 18% bovine serum albumin and Escherichia coli O55:B5 endotoxin over the antimicrobial properties of the solutions was evaluated, after 2 minutes, 30 minutes or 6 hours. The inhibition zones were measured. The presence of broth turbidity was recorded, for each time period, after 24 hours, in the Broth dilution method. The colony forming units (CFU) per milliliter were counted after the exposure of the E. faecalis to the tested tissue or bacterial components. Statistical analysis was carried out. The Ca(OCl)2 5% had the largest inhibition zones (17.38 mm ±3.71), however they were shorter than ampicillin zones (30.35 mm ±1.64). There was no statistical difference between NaOCl and Ca(OCl)2 solutions with the same concentration. It was observed that the highest the NaOCl or Ca(OCl)2 concentration, the largest the inhibition zone. In the broth dilution method, the time required for E. faecalis growth inhibition was shorter in highly concentrated solutions than in low concentrated solutions. There was no statistical difference among 2.5% NaOCl, 5% NaOCl, 2.5% Ca(OCl)2 and 5% Ca(OCl)2. The human dentin powder and E. coli endotoxin were not able to modulate the antimicrobial effect of the tested irrigants. In a 2 minute-period, the antimicrobial effect of 0.5% NaOCl, 1% NaOCl, 2.5% NaOCl and 0.5% Ca(OCl)2 was inhibited by bovine serum albumin. It was possible to conclude that calcium hypochlorite solutions were able to inhibit E. feacalis growth, in vitro, when diluted to concentrations that were usually employed in Endodontics. The antimicrobial effect of the solutions was proportional to their concentration and can be modulated by bovine serum albumin, in short periods of exposition.

O peptídeo antimicrobiano P34, produzido por Bacillus sp. P34 é uma substância que vem sendo explorada por apresentar potencial antibacteriano e antiviral. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial antibiofilme deste composto frente aos biofilmes formados por Staphylococcus aureus e Enterococcus faecalis provenientes de alimentos. Foram realizadas avaliações frente a células planctônicas e sésseis, bem como, sobre os biofilmes formados por estas bactérias. Os resultados obtidos demonstram que a substância antimicrobiana possui capacidade em reduzir o percentual de células microbianas aderidas à superfície, não sendo verificada completa inibição do biofilme. Observou-se um percentual de inibição metabólica das células dos biofilmes dos isolados de S. aureus, porém, as células de E. faecalis apresentaram-se metabolicamente estimuladas. A associação do peptídeo antimicrobiano P34 com a bacteriocina nisina não apresentou efeito sinérgico sobre células de S. aureus F4-1, no entanto, ao ser avaliado individualmente, foi observado efeito bacteriostático sobre este isolado. Na avaliação do efeito deste composto sobre o biofilme polimicrobiano formado por Salmonella Enteritidis ATCC 13076, Candida tropicalis 72-A e S. aureus F4-1 em aço inoxidável tipo AISI 304, observou-se diferença na disposição celular e na arquitetura do biofilme, com diminuição da aderência de células leveduriformes. Na avaliação dos diferentes meios de cultura empregados, a presença de glicose mostra-se como um fator que promoveu um incremento na formação de biofilme de Staphylococcus sp. Os resultados obtidos indicam que a substância apresenta potencial antibiofilme para a espécie S. aureus, e fornecem informações para posteriores estudos sobre os biofilmes polimicrobianos. / The antimicrobial peptide P34, produced by Bacillus sp. P34 is a substance that has been explored by having antibacterial and antiviral potential. The objective of this study was to evaluate the antibiofilm potential of this compound compared to biofilms formed by Staphylococcus aureus and Enterococcus faecalis from food. Evaluations were carried out against planktonic and sessile cells, as well as on biofilms formed by these bacteria. The obtained results evidence that the antimicrobial substance has ability to reduce the percentage of adhered microbial cells to the surface, not being verified complete inhibition of the biofilm. Was observed a metabolic inhibition percentage of cells isolated in the biofilm of S. aureus, however, E. faecalis cells performed metabolically stimulated. The combination of antimicrobial peptide P34 with the nisin bacteriocin showed no synergistic effect on cells of S. aureus F4-1, however, when evaluated individually, bacteriostatic effect was observed on this isolated. In the evaluation of this compound effect on the polymicrobial biofilm formed by Salmonella Enteritidis ATCC 13076, Candida tropicalis 72-A and S. aureus F4-1 on stainless steel AISI 304, difference was observed in the cell layout and biofilm architecture, with reduced adhesion of yeast cells. The evaluation of different culture media used, the presence of glucose is presented as a factor that promoted an increment in the formation of Staphylococcus sp biofilms. The obtained results indicate that the substance presents antibiofilm potential for the S. aureus species, and provide information for further studies about polymicrobial biofilms.

Introdução: O Acinetobacter spp. é um cocobacilo gram-negativo de grande importância nas infecções hospitalares, especialmente em pacientes internados em unidades de terapia intensiva (UTI); podendo levar a um aumento na morbidade e mortalidade desses pacientes. Há evidências sustentando associação entre infecção por Acinetobacter baumannii e aumento das taxas de mortalidade bruta e atribuível. Contudo, o papel desse agente como causa direta de mortalidade ainda não está suficientemente caracterizado. Dentre os fatores relacionados com o aumento da mortalidade estão: gravidade do paciente, infecção relacionada à A. baumannii multirresistente, tratamento com antimicrobiano inadequado, tempo de hospitalização com alta permanência, choque séptico e imunossupressão. Objetivos: Estimar a mortalidade bruta e atribuível às infecções hospitalares causadas pelo Acinetobacter baumannii resistente a antimicrobianos carbapenêmicos (CRAB) por meio de revisão sistemática e metanálise de estudos observacionais. Métodos: Foi desenvolvida uma revisão sistemática e metanálise de estudos observacionais publicados nas bases de dados: MEDLINE/Pubmed, CENTRAL/Cochrane Library, EMBASE/Elsevier, SCOPUS/Elsevier, Web of Science/Thomson Reuters e LILACS/BVS, para estimar a mortalidade bruta e atribuível à infecção hospitalar causada pela bactéria A. baumannii resistente a antimicrobianos carbapenêmicos em pacientes adultos e pediátricos internados em unidades de tratamento intensivo e nãointensivo. Os estudos incluídos caracterizaram fatores preditores de mortalidade associada à infecção por CRAB, comparando com pacientes infectados por A. baumannii sensível a carbapenêmicos (CSAB). Primeiramente, foi estimado um modelo de efeitos aleatórios para a medida agregada de mortalidade atribuível não ajustado a fim de avaliar a contribuição direta das infecções na morte. Na sequência, foram avaliados descritivamente os principais aspectos metodológicos necessários aos estudos observacionais, para a análise dos fatores de risco relacionados a mortalidade atribuível em pacientes infectados por CRAB, por meio de instrumento elaborado conforme recomendações internacionais - ORION, TREND, STROBE e CONSORT. Resultados: Com base nos 29 estudos incluídos na metanálise, observou-se um risco atribuível aumentado na mortalidade bruta em pacientes com infecção por CRAB comparativamente aos pacientes com infecção por CSAB (RA = 0,19 (IC95% = 0,14-0,24) com elevada heterogeneidade (I2 = 66,4%, p-valor < 0,001). Como fontes de heterogeneidade investigou-se o tempo de internação, sítio de infecção, gravidade da doença e uso de terapia inapropriada. Entre os estudos que avaliaram exclusivamente pacientes com bacteremia, o risco de mortalidade atribuível foi maior (RA = 0,27; IC95% = 0,19-0,34). Utilizando-se metarregressão foi observada relação linear positiva entre o risco atribuível de mortalidade e a diferença da média padronizada do escore de APACHE II. Para a investigação da presença de risco de viés e confundimento avaliou-se descritivamente os principais aspectos metodológicos necessários aos estudos observacionais que identificam os fatores de risco associados com a mortalidade atribuível em pacientes com infecções por CRAB. Observou-se nesta revisão que os estudos estão sujeitos a confundimento, incluindo a forma inadequada do ajuste para fatores de confusão de variáveis importantes (ex.: seleção de grupo controle, exposição prévia aos antimicrobianos, mensuração do tempo em risco e a gravidade), além da grande heterogeneidade entre os estudos, devido aos desenhos, unidades de análise e abordagens na medida de exposição e desfecho, tornando difícil a comparação e a sumarização das informações. Conclusões: Os dados dessa revisão sistemática fornecem evidências que a mortalidade atribuível relacionada à presença de infecção por CRAB é maior que em pacientes com infecção por CSAB. Contudo, a investigação da mortalidade atribuível apresenta muitas limitações e ainda não é conclusiva em razão da adequação do desenho do estudo aos seus objetivos; definições de medidas de exposição e desfecho; métricas utilizadas na aferição dos resultados; seleção de grupo controle e fatores de confusão. A consciência de todos esses elementos para a interpretação epidemiológica é vital na análise da mortalidade bruta e atribuível. / Introduction: Acinetobacter spp. is a gram-negative coccobacillus of great importance in hospital infections, especially in patients in intensive care units (ICUs); may lead to an increase in morbidity and mortality of these patients. There is evidence supporting association between infection by Acinetobacter baumannii and the increase in crude and attributable mortality rates. However, the role of this agent as a direct cause of death is not sufficiently characterized yet. Among the factors related to the increase of mortality are: severity of the patient, infection related to A. baumannii multidrug-resistant, inappropriate antimicrobial treatment, hospital stay with high permanence, septic shock and immunosuppression. Objectives: To estimate the crude and attributable mortality to hospital-acquired infections caused by carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii through systematic review and meta-analysis of observational studies. Methods: A systematic review and metaanalysis of observational studies published in the databases has been developed: MEDLINE/PubMed, CENTRAL/Cochrane Library, EMBASE/Elsevier, SCOPUS/Elsevier, Web of Science/Thomson Reuters and LILACS/BVS to estimate the crude and attributable mortality to hospital infection caused by the bacterium carbapenem-resistant A. baumannii (CRAB) in adult and pediatric patients in intensive and non-intensive care units. The studies included characterized predictors of mortality associated to infection with CRAB, compared to patients infected with carbapenem-susceptible A. baumannii (CSAB). First, a random effects model was estimated for the aggregate measure of non-adjusted attributable mortality in order to assess the direct contribution of infections in death. Following were descriptively assessed the main methodological aspects necessary to observational studies for the evaluation of risk factors related to attributable mortality in patients infected with carbapenem-resistant A. baumannii through instrument designed according to international recommendations - ORION, TREND, STROBE and CONSORT. Results: Through the 29 studies included in the meta-analysis, there was an increased attributable risk in the crude mortality in patients with infections by CRAB compared to patients with infections by CSAB (RA = 0.19 (95% CI = 0.14 to 0.24) with high heterogeneity (I2 = 66.4%, p <0.001). As sources of heterogeneity, it was investigated the length of stay, the site of infection, disease severity and use of inappropriate therapy. Among the studies that evaluated only patients with bacteremia, the risk of attributable mortality was higher (RA = 0.27; 95% CI = 0.19 to 0.34). Using meta-regression was observed a positive linear relationship between the attributable mortality risk and the standardized mean difference of APACHE II score. For investigating the presence of bias and confounding risk was evaluated descriptively the main methodological aspects necessary to observational studies evaluating the risk factors associated with attributable mortality in patients with infections caused by carbapenem-resistant A. baumannii. It was observed in this review that these studies are subject to pitfalls, including the inappropriate mode for adjustment for confounding factors of important variables (eg.: control group selection, previous exposure to antimicrobials, measurement of time in risk and gravity); besides the great heterogeneity between studies due the drawings, units of analysis and approaches to the extent of exposure and outcome, making it difficult comparison and summarization of information. Conclusions: The data of this systematic review provide evidence that attributable mortality related to the presence of infection by CRAB is higher than in patients with infection by CSAB. However, the investigation of attributable mortality has many limitations and is not conclusive yet because of the design adequacy of the study to their goals, definitions of exposure and outcome measures, metrics used in measuring results, control group selection and confounding factors. The awareness of all these elements is vital in analyzing the crude and attributable mortality.

Made available in DSpace on 2014-08-26T17:15:11Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 128.pdf: 690669 bytes, checksum: d4f5a93fd2485c766dd776899fb473dd (MD5) Previous issue date: 2006 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / Staphylococcus aureus resistentes a meticilina (MRSA) é um dos principais agentes de infecção humana e constitui um grave problema de saúde pública em todo mundo. A expressão de resistência heterogênea desses microorganismos é um fator limitante dos métodos de caracterização fenotipa

Staphylococcus aureus é reconhecidamente causador de infecções humanas e um dos principais patógenos alimentares. O regulador gene acessório (Agr) é um sistema central que controla a expressão de diversos fatores de virulência. O polimorfismo do locus agr divide S.aureus em grupos genéticos distintos associados a determinados perfis patogênicos. O objetivo deste estudo foi comparar fenotipicamente e genotipicamente isolados clínicos e alimentares de S.aureus. Um total de 63 S.aureus (34 isolados de cateter venoso central (CVC) e 29 de carne de frango) foram selecionados para o estudo. O gene sea foi encontrado em 44,1% (15/34), seb em 5,9% (2/34) e sec em 8,8% (3/34) dos isolados de CVC. Em isolados de frango, apenas o gene sea foi detectado e foi observado em 31% (9/29). Somente 6% (2/34) dos isolados de CVC formaram biofilme. Já, em isolados de frango, 93% (27/29) foram formadores de biofilme (P<0,01). Nos isolados de CVC, os genes icaA, atlA e sasG envolvidos com a formação de biofilme estiveram presentes em 100% (34/34), 97% (33/34) e 100% (34/34), das amostras respectivamente, enquanto que, em isolados de carne de frango os mesmos genes foram detectados em 93% (27/29), 52% (15/29) e 100% (29/29), respectivamente. Cepas resistentes à penicilina foram detectas em 86,2% dos isolados de carne de frangos e em 88,2%, dos isolados de CVC. Isolados de CVC foram resistentes a oxacilina e multirresistentes em 17,6% (6/34). Com relação ao polimorfismo do locus agr, os S.aureus isolados de CVC foram dividos em 3 grupos, onde 44% (15/34) tiveram o polimorfismo I, 38% (13/34) o II e 18% (6/34) o III. Os S.aureus isolados de carne de frangos, também foram divididos em 3 grupos, onde 86% (25/29) dos isolados tiveram o polimorfismo I, 10% (3/29) o II e 4%o III (1/29) (P<0,05). Entre os isolados de CVC, 88,2% (30/34) produziram a δ-hemolisina, ou seja, expressavam o sistema Agr, já entre os isolados de frangos, apenas 3,3% eram δ-hemoliticos (P<0,05). Conclui-se que os isolados diferiram quanto à capacidade de formação de biofilme, polimorfismo Agr e produção da δ-hemolisina. No entanto, resultados similares foram observados quanto à detecção dos genes das enterotoxinas e os envolvidos com formação de biofilme. A análise molecular mostrou uma elevada similaridade entre os grupos o que pode indicar uma mesma origem destes isolados. / Staphylococcus aureus is recognized as cause of human infections and a one of the important foodborne pathogens. The accessory gene regulator (Agr) is a central system that controls the expression of several virulence factors. The polymorphism of the agr locus divided S. aureus into distinct genetic group associated with determinats of pathogenic profiles. The aim of this study was to the phenotypic and genotypic patterns of S.aureus isolated from clinical and food samples. A total of 63 S. aureus (34 from central venous catheter (CVC) and 29 from poultry meat) were selected for the study. The sea gene was found in 44.1% (15/34), seb in 5.9% (2/34) and sec in 8.8% (3/34) of CVC isolates. In poultry meat isolates, only sea gene was detected and it was observed in 31% (9/29). Only 6% (2/34) of CVC isolates formed biofilm. Further, 93% (27/29) of poultry meat isolates were biofilm formers (P<0.01). In CVC isolates, the icaA, atlA and sasG genes involved in biofilm formation were present in 100% (34/34), 97% (33/34) and 100% (34/34) of the isolates respectively, while in poultry meat isolates the same genes were detected in 93% (27/29), 52% (15/29) and 100% (29/29), respectively.Strains penicillin resistant was detected in 86.2% of poultry meat and 88.2 % CVC isolates. CVC isolates were also oxacillin resistant and multiresistants in 17.6% (6/34). In regard to the polymorphism of agr locus, the CVC isolates were divided into 3 groups, where 44% (15/34) belong to polymorphism I, 38% (13/34) to II and 18% (6/34) to III. The S. aureus strains isolated from poutry meat were also divided into 3 groups, where 86% (25/29) showed the polymorphism I, 10% (3/29) the II and 4% (1/29) the III (P<0.05). Among the CVC isolates 88.2% (30/34) produced δ-hemolysin, i.e., expressed the Agr system, in addition among the poultry meat isolates, only 3.3% were δ-hemolytic (P<0.05). In conclusion, S.aures isolated from CVC and poultry meat showed differences in their ability to form biofilm, Agr polymorphism and production of δ-hemolysin. In conclusion, S.aures isolated from CVC and poultry meat showed differences in their ability to form biofilm, Agr polymorphism and production of δ-hemolysin. However, similar results were observed in relation to enterotoxin genes and those involved in biofilm formation.The molecular analysis show high genotypic similarity to S.aures isolated from CVC and poultry meat, suggesting a common origin of these isolates, possible the human microbiota.

Enterococcus faecalis estão entre as principais causas de infecções hospitalares em todo o mundo e é uma das mais importantes na área clínica devido à presença de inúmeros fatores de virulência que reforçam sua patogenicidade. Estudos mostram que concentrações subinibitórias de antimicrobianos podem alterar a resposta transcricional e fenotípica de bactérias, porém pouco se sabe sobre como a vancomicina pode afetar a expressão gênica nos microrganismos portadores de seus genes de resistência (genes van). Portanto, este trabalho objetivou avaliar presença e expressão de genes vanC em E. faecalis vancomicina-susceptíveis e avaliar o comportamento de isolados Enterococos Vancomicina-Resistentes (EVR) na ausência e presença de concentrações subinibitórias de vancomicina por PCR quantitativa. Identificamos a presença e a expressão de genes vanC em E. faecalis vancomicina-susceptíveis, sendo estes genes específicos para as espécies Enterococcus gallinarum e Enterococcus casseliflavus, sugere-se que o E. faecalis possa tê-los adquirido por transferência horizontal. Verificamos que a presença de vancomicina in vitro é capaz de interferir na modulação de genes de virulência em isolados EVR, porém não interfere na formação de biofilme destes isolados. Embora os dados aqui apresentados refiram-se a testes in vitro, podemos inferir que os genes vanC estão sendo transferidos para outras espécies e que a vancomicina pode estar contribuindo para o aumento na expressão de fatores de virulência in vivo, levando ao agravamento de quadros clínicos. / Enterococcus faecalis are among the leading causes of nosocomial infections worldwide and is one of the most important in the clinical area due to the presence of numerous virulence factors that enhance the pathogenicity. Studies show that sub-inhibitory concentrations of antibiotics can alter the transcriptional and phenotypic response of bacteria, but little is known about the effect of vancomycin in gene expression in microorganism bearers of their resistance genes (genes van). Therefore, this study aimed to evaluate the presence and expression of vanC genes in E. faecalis vancomycin susceptible and evaluate the behavior of vancomycin resistant enterococci (VRE) strains in the absence and presence of sub-inhibitory concentrations of vancomycin for Quantitative-PCR. We have identified the presence and expression of vanC genes in E. faecalis which are specific to Enterococcus gallinarum and Enterococcus casseliflavus species, it is suggested that the E. faecalis may have acquired these genes by horizontal gene transfer. We found that the presence of vancomycin in vitro is able of interfering with modulation of expression of virulence genes in VRE strains but does not interfere in the biofilm formation of these isolates. Although the data presented here were obtained from in vitro tests, we can infer that the vanC genes are being transferred to other species and that vancomycin may be contributing to the increase in the expression of virulence factors in vivo, leading to worseres clinical outcomes.

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:26:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-05-13. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:45:46Z : No. of bitstreams: 1 000846304.pdf: 3321509 bytes, checksum: c673b1568c327961a322434f621d5c56 (MD5) / Acinetobacter baumannii é frequentemente encontrado em infecções hospitalares, ocasionando pneumonia associada à ventilação, bacteremia, infecções de trato urinário e meningite secundária. Nos últimos anos, o uso extensivo de antimicrobianos em hospitais contribuiu para o aumento e emergência de cepas resistentes, incluindo os carbapenêmicos, os principais recomendados no tratamento. Assim, os aminoglicosídeos ganham importância como opção terapêutica. A resistência a estes antimicrobianos é decorrente, principalmente, da produção de enzimas modificadoras de aminoglicosídeos (AMEs) e de enzimas 16S rRNA Metilases. No Brasil, informações sobre o perfil de suscetibilidade e genes que codificam estas enzimas são escassas. Assim, é fundamental a identificação de mecanismos de resistência e reservatórios potenciais, bem como realizar comparação de isolados para controlar a disseminação de A. baumannii no ambiente hospitalar. O presente estudo teve como objetivos avaliar e comparar o perfil de suscetibilidade aos antimicrobianos, genes de enzimas modificadoras de aminoglicosídeos (AMEs), genes de enzimas 16S rRNA Metilases e similaridade genética entre isolados de A. baumannii com importância clínica no Hospital de Base (HB) de São José do Rio Preto, SP. Além disso, estes resultados foram comparados com um estudo anterior realizado no mesmo hospital. Foram avaliados 32 isolados coletados no período entre dezembro de 2013 a maio de 2014. A identificação da espécie foi realizada por metodologias automatizadas e confirmada por Duplex-PCR. Os testes de suscetibilidade aos antimicrobianos foram resultantes de teste automatizado de microdiluição e disco-difusão, para aminoglicosídeos Amicacina (AK), Gentamicina (CN), Tobramicina (TOB) e Canamicina (CAN), de acordo com o CLSI, 2014 e FDA, 2013. Primers específicos e PCRmultiplex foram usados para a detecção dos genes... / Acinetobacter baumannii is found in nosocomial infections, causing ventilator-associated pneumonia, bacteremia, urinary tract infections and secondary meningitis. In recent years, the extensive use of antibiotics in hospitals has contributed to the rise and emergence of A. baumannii strains resistant to a wide range of antimicrobials, including carbapenems, main antibiotics recommended on treatment. In this context, aminoglycosides gain importance as therapeutic options. Resistance to aminoglycosides is mainly due to the Aminoglycoside Modifying Enzymes (AMEs) and 16S rRNA Methylases production. In Brazil, high infection rates to carbapenem-resistant A. baumannii are observated, however information about aminoglycoside susceptibility profile and occurance of this genes are scarce. Thus, it is essential to identify resistance mechanisms and potential reservoirs, as well as perform comparison of isolates to control the spread of A. baumannii in the hospital environment. This study aimed to evaluate and compare the antimicrobial susceptibility profile, genes of aminoglycoside modifying enzymes and 16S rRNA Methylases and genetic similarity among A. baumannii isolates with clinical importance at Hospital de Base (HB) in São José do Rio Preto, SP. Additionally, the results were compared to another previous study achieved in the same hospital. 32 isolates collected between December 2013 and May 2014 were evaluated. Specie identification was performed using automated methodology and confirmed by Duplex- PCR. The susceptibility tests were the result of automated and disc-diffusion tests - for aminoglycosides Amikacin (AK), Gentamicin (CN), Tobramycin (TOB) and Kanamycin (K) - according to CLSI, 2014 and FDA, 2013. Specific primers and Multiplex-PCR were used in AMEs' and 16S rRNA Methylases' genes detection and primers REP1-REP2 were used in molecular typing by REP-PCR. All the isolates of this study...

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:22:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-23. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:29:04Z : No. of bitstreams: 1 000851515.pdf: 761120 bytes, checksum: 102e5964647d8ea3227709946562ac69 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Neste trabalho foi investigado a participação de MMP's na intoxicação aguda por chumbo, bem como se a doxiciclina reverte a hipertensão induzida pelo chumbo e a alteração dos níveis plasmáticos de CGRP- (peptídeo relacionado ao gene da calcitonina), adrenomedulina ou endotelina após hipertensão induzida pelo chumbo. Utilizamos 40 ratos machos Wistar adultos jovens (pesando 200g). Grupo Pb (n=12) foi intoxicado com acetato de chumbo (1ª dose 8 μg /100g do rato, e subsequentes doses 0.1μg/100g intra-peritoneal para cobrir a perda diária, durante sete dias) e tratados com doxiciclina 30mg/kg/dia do rato (Pb+Doxy = 12) via oral uma vez ao dia. Grupo controle (n=8) recebeu acetato de sódio para oferecer quantidade equimolar de moléculas de acetato do grupo Pb. Grupo controle também foi tratado com doxiciclina (Grupo Doxy, n=8). Todos os tratamentos foram realizados por sete dias. A concentração em chumbo em sangue total foi determinada em forno de grafite por espectrometria de absorção atômica. Concentrações plasmáticas de adrenomedulina, CGRP, endotelina e MMP-2 foram avaliadas usando kits comerciais de imunoensaio enzimático (ELISA). O comitê de ética institucional (protocolo nº 458/2013) aprovou todos os experimentos. Houve aumento na pressão sistólica (grupo Pb 167 ± mmHg vs. 142 ± 2 ou 143 ± 3 mmHg no grupo controle) (P<0.05), entretanto, doxiciclina mostrou diminuir valores (137 ± 3 mmHg no grupo Pb+Doxy). A concentração de chumbo no sangue foi significativamente aumentada em ambos os grupos intoxicados (Pb e Pb + Doxy) que apresentou 10μg/dL (± 1,0) vs. 2,0 μg/dL (± 1,0) em grupos não intoxicados (grupos Controle ou Doxy). Doxiciclina reverteu a redução de 45% nos níveis de adrenomedulina induzido pelo chumbo (grupo Pb apresentou 0.43 (± 0,2) vs. 1.0 pg/mL (± 0,2) em grupo Pb+Doxy). Não observamos mudança nos níveis plasmáticos de CGRP, endotelina e MMP-2. Sugerimos que a hipertensão... / In this work was investigated the participation of MMP's in acute lead intoxication, as well as if doxycycline reverses the lead-induced hypertension,and whether there arechanges in CGRP (calcitonin gene related peptide),adrenomedullin or endothelinplasma levels afterlead-induced hypertension.40 Wistar young adult male rats(weighting 200g) were used. Pb group (n=12) was intoxicated with lead acetate (1st dose 8μg/100g of body weight, and subsequent doses 0.10 μg/100g, intra-peritoneal to cover daily loss, during seven days) and treated with doxycycline (30mg/kg of body weight) (Pb+Doxy group, = 12) or saline (Pb group, = 12) by gavage, once a day. Control groups (n=8) received sodium acetate in order to offer the same amount of acetate molecules asPb group. Control group was also treated with doxycycline (Doxy group, n=8). All treatments were performed for seven days. Lead concentrations in whole blood were determined by graphite furnace atomic absorption spectrometry. Plasma adrenomedullin, CGRP, endothelin and MMP-2 concentrations were evaluated using commercials enzyme immunoassays (ELISA) kits. All experiments were approved by the Institution ethics committee (protocol nº 458/2013). There was an increase (P<0.05) in the systolic blood pressure of Pb group (167 mmHg vs. 142 ± 2 ou 143± 3 mmHg in Control group), however, doxycycline showed a decrease in these values (137± mmHg in Pb+Doxy group). The lead concentrations in blood were significantly increased in both intoxicated groups (Pb and Pb+Doxy groups) which presented 10μg/dL±1,0 μg/dLvs. 2μg/dL±1,0 μg/dL, in non-intoxicated groups (Saline or Doxy groups). Doxycycline reversed the reduction of 45% in the levels ofadrenomedullin induced by lead (Pb group presented 0.43 pg/mL vs. 1.0 pg/mL in Pb+Doxy group). We did not observe changes in the plasmatic levels of CGRP, endothelin and MMP-2.We suggest that hypertension induced by lead exposure (8 μg/100g ...

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-09-19Bitstream added on 2015-04-09T12:48:12Z : No. of bitstreams: 1 000809190_20160919.pdf: 563233 bytes, checksum: 7e88ada7742983c9e70b9e7afa9e4627 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-09-19T11:17:03Z: 000809190_20160919.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-19T11:17:39Z : No. of bitstreams: 1 000809190.pdf: 1213447 bytes, checksum: 4f2181a0a93fd547e190acd7930623fe (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Peptídeos antimicrobianos (PAMs) são componentes do sistema imune inato, que estão presentes na maioria dos organismos vivos cujo interesse é crescente devido à sua potente atividade antimicrobiana contra uma vasta gama de microrganismos, juntamente com a sua baixa toxicidade, em geral, para as células de mamíferos. Esse trabalho teve a finalidade de desenvolver um peptídeo antimicrobiano curto com as mesmas características estruturais do peptídeo Polybia-MP1 (IDWKKLLDAALQIL-NH2) extraído da vespa Polybia paulista que conferem ação antimicrobiana e seletividade, tais como: o posicionamento relativo dos resíduos de aminoácidos carregados, um resíduo ácido na posição N-terminal, a hidrofilicidade e a ampla face polar. Foi idealizado e sintetizado um peptídeo denominado L1A (IDGLKAIWKKVADLLKNT-NH2) e dois análogos com modificações na região do Nterminal; um acetilado (Ac-L1A) e outro com o ácido orto-aminobenzóico (Abz), uma sonda fluorescente extrínseca, ligado covalentemente ao N-terminal, esse peptídeo teve o triptofano substituído por um resíduo de valina (Abz-L1A-W8V). Analisou-se a fluorescência estática e dinâmica do triptofano e do Abz, que apresentaram significante deslocamento quando os peptídeos são adsorvidos em vesículas lipídicas; a supressão da fluorescência por acrilamida mostrou que os fluoróforos em vesículas aniônicas estão menos expostos ao solvente do que em vesículas zwitterionicas. A atividade lítica em vesículas a partir das curvas de doseresposta também reforça que os três peptídeos são mais eficientes em vesículas aniônicas, além disso, que os análogos foram mais eficientes. Estas observações foram compatíveis com o maior teor helicoidal (observado em dinâmica molecular e dicroísmo circular) seus fluoróforos se enterram mais profundamente em vesícula aniônica. Dados de MD e CD demonstraram uma relação entre a estabilidade da hélice e a ausência de carga ... / Antimicrobial peptides (AMPs) are components of the innate immune system, which are present in the majority of the living organisms and whose interest is growing due to their potent antimicrobial activity against a broad range of microorganisms, coupled with their usually low toxicity to mammalian cells. In an effort to develop short antimicrobial peptides with the same structural characteristics that imparted selectivity to Polybia-MP1 (IDWKKLLDAALQIL-NH2): the relative positioning of acid and basic residues, an acid residue at the N-terminus, hydrophilicity and the broad polar face. MP1 is a potent antimicrobial, antitumoral and non-hemolytic peptide. We generated a peptide named L1A (IDGLKAIWKKVADLLKNT-NH2) and two analogs with N-terminus modifications; one acetylated (Ac-L1A) and other was extrinsic fluorescent labeled with ortho-aminobenzoic acid (Abz) in which the tryptophan was substituted by valine (Abz-L1A-W8V). We analyzed static and time-resolved fluorescence of tryptophan and ortho-aminobenzoic acid were used and showed significant blue shift when peptides are adsorbed in lipid vesicles and the fluorescence quenching by acrylamide showed that fluorophores in anionic vesicles, are less exposed to the solvent than in neutral vesicles. The lytic activity in vesicles showed from dose-response curves that the three peptides were more efficient in anionic vesicles moreover that the analogs were more efficient. These observations were compatible with the higher helical content (observed in Molecular Dynamics and Circular Dichroism) and deeper burying of the fluorophores in anionic vesicle. MD and CD data demonstrated a relationship between the stability of the helix and the absence of load on the N-terminal. L1A and Ac-L1A presented potent antimicrobial selective against Gram negative bacteria without being hemolyitic while Abz -L1A -W8V was mildly hemolytic

Made available in DSpace on 2015-05-14T16:53:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-08Bitstream added on 2015-05-14T16:59:30Z : No. of bitstreams: 1 000824410.pdf: 976765 bytes, checksum: 5590643000ccb76d948b31c347eb1bba (MD5) / Devido à importância do bioma cerrado, inclusive para a manutenção de outros biomas interligados, nas últimas décadas pesquisadores das mais variadas áreas vêm propondo alternativas de uso das espécies do cerrado como forma de preservar a fauna e flora local. Uma das formas para auxiliar na preservação dessas espécies esta o estudo sobre constituintes fitoquímicos e propriedades medicinais de plantas desse bioma usadas na medicina tradicional. O objetivo desse estudo é a confirmação do potencial terapêutico bem como da toxicidade dessas plantas usadas na medicina tradicional local, bem como estudar o potencial medicinal de plantas ainda não investigadas. A espécie Dipteryx alata Vogel (baru) é uma das espécies nativas do cerrado que apresenta grande potencial nutricional e farmacológico a ser investigado, pois segundo a medicina tradicional ela é utilizada no combate à bronquite, diarreia, disenteria, dor, dor de garganta, gripe, picada de cobra, tosse e como cicatrizante, entretanto, apenas a atividade contra picada de cobra foi cientificamente comprovada. Desta forma, na tentativa de aliar o valor nutricional da polpa dos frutos do baru a um possível efeito terapêutico, foram realizados estudos sobre os fitoconstituintes presentes nesta parte da planta, a fim de guiar estudos sobre as possíveis propriedades biológicas valorizando o fruto como um alimento nutracêutico, em áreas de ocorrência da planta que apresentam elevados índices de doenças negligenciadas. Os resultados dos estudos fitoquímicos mostraram a presença de alcaloides, taninos, flavonoides, glicosídeos cardiotônicos e saponinas em consideráveis concentrações e antraquinonas em baixa concentração. A presença desses fitoconstituintes forneceu suporte para a realização de ensaios para a determinação do potencial antiparasitário. A atividade antimicrobiana também foi avaliada devido ao uso medicinal da planta para infecções do trato ... / Due to the importance of the cerrado biome, including the maintenance of other interconnected biomes in recent decade’s researchers from different fields have proposed alternative use of the cerrado species as a way to preserve the local fauna and flora. One way to help the preservation of species is the study of the medicinal properties of plants of this biome used in traditional medicine. The objective of these studies is to confirm the therapeutic potential and the toxicity of these plants used in traditional local medicine as well as studying the medicinal potential of plants yet to be investigated. The specie Dipteryx alata Vogel (baru) is a native species of the cerrado with great nutritional and pharmacological potential to be investigated, because according to traditional medicine it is used to combat bronchitis, diarrhea, dysentery, pain, sore throat, flu, snakebite, cough and as cicatrizant, however, only the activity against snakebite has been scientifically proven. Therefore, trying to combine the nutritional value of baru fruits pulp to the potential therapeutic effect, studies on the determination of phytochemicals present were performed to guide studies on possible biological properties valuing the fruit as a nutraceutical food in areas of occurrence of the plant that show high negligible diseases indices. The results of the phytochemical studies showed the presence of alkaloids, tannins, flavonoids, saponins and cardiotonic glycosides in considerable amounts and anthraquinones at low concentration. The presence of these phytochemicals has given support for conducting tests to determine the antiparasitic potential. Antimicrobial activity was also evaluated due to the medicinal use of the plant for the urinary tract infections. In addition, the cytotoxicity of the pulp was also evaluated on LLC- MK 2 cells to support the safe use of the fruit. Antimicrobial assays were performed using the bacterial strains Proteus sp., E. ...