Orientador: Rubén Pablo Schocken Iturrino / Banca: Luiz Augusto do Amaral / Banca: Janete Apparecida Desidério / Banca: Caroline Peters Pigatto de Nardi / Banca: Alessandra Aparecida Medeiros / Resumo: A produção de aves no Brasil tem aumentado consideravelmente, impulsionada principalmente pelo consumo da carne de frango, o que gera uma preocupação com a transmissão de patógenos ao ser humano. Porém, a higienização e cuidados adequados durante toda cadeia produtiva pode-se evitar contaminações dos alimentos. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a presença de bactérias patogênicas em granjas, esteiras condutoras de cortes de frango em frigoríficos antes e após a higiene pré-operacional e operacional, e em cortes de frangos congelados adquiridos em supermercados, além de comparar geneticamente os isolados obtidos nos diferentes pontos da cadeia produtiva por sequências repetitivas utilizando a técnica Rep-PCR. Os mesmos isolados também foram submetidos ao teste de sensibilidade a antimicrobianos. Para tanto, foram realizadas contagem de Enterobactérias e de Clostridium spp., identificação por PCR de Salmonella spp., Clostridium perfringens e Escherichia coli diarreiogênicas (E. coli enteropatogênica - EPEC, E. coli shigatoxigênica - STEC, E. coli enteroagregativa - EAEC, E. coli enterotoxigênica - ETEC), e isolamento bacteriano. Para quantificação de Enterobactérias e de Clostridium spp., foram colhidos 311 suabes de esteiras de frigoríficos, dos quais procedeu-se, também, o cultivo bacteriano para posterior identificação das amostras por PCR espécie-específico. Em granjas comerciais, foram colhidas 164 amostras de suabes com conteúdo cloacal de frangos saudáveis e 20 amostras de cortes de frangos congelados em supermercados. Nas granjas, foram identificadas 107 amostras contendo EPEC, já nas esteiras condutoras de cortes nos frigoríficos, foram verificadas 23 amostras positivas para E. coli EPEC e uma para C. perfringens. Em cortes de frangos congelados de supermercados, foram encontradas quatro amostras contendo EPEC, duas contendo STEC e quatro... / Abstract: Brazilian poultry production has been increasing significantly, mainly by the consumption of chicken meat, which leads to concern about the transmission of pathogens to human. However, proper hygiene and management in the production chain of poultry meat may avoid food bacteria contamination. Thus, this study aimed to evaluate the presence of pathogenic bacteria in poultry farms, sanitary conveyors of Brazilian slaughterhouses, before and after the pre-operational and operational hygiene, and in frozen cuts of chicken commercialized in supermarkets, beyond of comparing isolates obtained in different points of the production chain by repetitive sequences using Rep-PCR. The same isolates were also submitted to antimicrobial sensitivity test. For this, it was performed Enterobacteriaceae and Clostridium spp. counts, identification of Salmonella spp., Clostridium perfringens and diarrheagenic Escherichia coli (Enteropathogenic E. coli - EPEC, Shigatoxigenic E. coli - STEC, Enteroaggregative E. coli - EAEC, Enterotoxigenic E. coli - ETEC) through PCR and bacterial isolation. For quantification of Enterobacteriaceae and Clostridium spp. and PCR identification of pathogens, 311 samples were collected from sanitary conveyors using sterile swabs. From poultry farms, 164 samples of cloacal content swabs were collected from healthy chickens, and 20 samples of frozen chicken cuts were taken from supermarkets. In commercial poultry farms, 107 positives samples for EPEC were identified. Similarly, it was found 23 positive samples for EPEC and one for C. perfringens in sanitary conveyor at chicken slaughterhouses. In cuts of chicken from supermarkets, it was found four positive samples for EPEC, two for STEC and four for C. perfringens. No samples were diagnosed with the presence of Salmonella spp.. The genetic profile analysis of 27 EPEC strains showed that there was a genetic relationship among ... / Doutor

Orientador: Luciane Dias de Oliveira / Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Marcos Roberto Furlan / Resumo: Visando o potencial terapêutico do extrato glicólico de B. pendula em tratamentos de infecções bacterianas e fúngicas e de doenças inflamatórias, foram avaliadas suas atividades antimicrobiana, antiinflamatória, citotóxica e genotóxica. A atividade antimicrobiana do extrato foi analisada em Candida albicans, C. dubliniensis, C. glabrata, C. guilliermondii, C. krusei, C. tropicalis, Staphylococcus aureus, Streptococcus mutans, Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa com a determinação das Concentrações Inibitória Mínima e Microbicida Mínima (CIM e CMM) em culturas planctônicas e posteriormente testado sobre biofilmes monotípicos. A atividade citotóxica foi avaliada em cultura de macrófagos de camundongo (RAW 264.7) e fibroblastos gengivais humanos (FMM-1) após exposição de 5 min e 24 h ao extrato, com o teste MTT e teste imunoenzimático (ELISA) que quantificou a produção das citocinas IL-1β e TNF-α produzidas por RAW 264.7. A genotoxicidade do extrato foi avaliada pelo teste de micronúcleos. A atividade antiinflamatória foi avaliada nos sobrenadantes coletados de culturas de RAW 264.7 estimuladas com LPS de E. coli e expostas aos extratos (5 min e 24 h) pela quantificação de citocinas IL-1β, TNF-α e IL-10 por ELISA e óxido nítrico (ON) pelo método de Griess. A análise estatística foi realizada por ANOVA e teste de Tukey, com significância de 5%. O extrato teve ação antimicrobiana em todos biofilmes, com redução acima de 39,5% em 5 min e acima de 78% em 24 h. A viabilidade celular foi satisfatória em concentrações abaixo de 50 mg/mL em 5 min tanto para FMM-1, quanto para RAW 264.7, contudo em 24 h concentrações acima de 3,13 e 12,5 mg/mL foram citotóxicas para RAW 264.7 e FMM-1, respectivamente. Não houve indícios de ação genotóxica do extrato. A atividade anti-inflamatória foi evidenciada pela redução significativa na produção de TNF-a e ON nos grupos tratados . Conclui-se que o... / Abstract: In order to verify the therapeutic potential of glicolic extract of B. pendula on the threatment of bacterial and fungical infection and on inflammatory diseases, its antimicrobial, anti-inflammatory actions, cytotoxic and genotoxic effects were evaluated. The antimicrobial activity of the extracts was tested on Candida albicans, C. dubliniensis, C. glabrata, C. guilliermondii, C. krusei, C. tropicalis, Staphylococcus aureus, Streptococcus mutans, Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa with determination of Minimum Inhibitory and Minimum Microbicide Concentrations (MIC and MMC) in planktonic growth, following of test in monotypic biofilms. The cytotoxic activity was evaluated in mouse macrophages (RAW 264.7) and human gingival fibroblast (FMM-1) after exposure of 5 min and 24 h to extract, through the MTT test and by Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) to quantify the production of the cytokines IL-1β and TNF-α by RAW 264.7. The genotoxicity of the extracts was evaluated by micronucleus test. The anti-inflammatory activity was evaluated in RAW 264.7 stimulated with LPS from E. coli, after the period of exposure to the extract (5 min and 24 h) the supernatant was removed to quantify pro-inflammatory (IL-1β and TNF-α.) and antiinflammatory (IL-10) cytokines by ELISA and nitric oxide (NO) by Griess method. Statistical analysis was performed by ANOVA and Tukey's test, with significance level of 5%. The extract has shown antimicrobial activity with reduction above of 39.5% of biofilm in 5 min and more than 78% in 24 h. The cell viability was satisfactory at concentrations below 50 mg/mL in 5 min to RAW 264.7 and FMM-1, however in 24 h concentrations above 3.13 and 12.5 mg/mL were cytotoxic to RAW 264.7 and FMM-1, respectively. There was no evidence of genotoxic action of the extract. The anti-inflammatory activity was evidenced by the significant reduction in the production o... / Mestre

Orientador: Tarcisio José de Arruda Paes Junior / Coorientador: Fernando Cristovan / Banca: Lafayette Nogueira Júnior / Banca: João Paulo Barros Machado / Resumo: O objetivo deste trabalho foi sintetizar e caracterizar nanopartículas de sílica recobertas por prata, e avaliar a influência quando incorporadas à resina acrílica quimicamente ativada, ao reembasador macio, e a um glaze, em suas características microbiológicas, microestruturais e mecânicas. Foi confeccionada, pelo método de hidrólise e condensação controlada (método de Stober), uma solução contendo nanopartículas de sílica revestidas por nanopartículas de prata em duas proporções, 10 milimols e 30 milimols, onde as mesmas foram caracterizadas. As nanopartículas de sílica incorporadas com a prata foram analisadas por energia dispersiva de raios-X integrado (EDS), microscopia eletrônica de varredura (MEV), e espalhamento de luz dinâmico (DLS). Para análise microbiológica foram confeccionadas 10 amostras cilíndricas (2mmx10mm), em resina acrílica quimicamente ativada onde as partículas foram incorporadas em duas concentrações: 2.5% e 5% com as duas molaridades diferentes 10 mM e 30 mM. Em outra situação foram confeccionadas 10 amostras cilíndricas (2mmx10mm) de reembasador macio, com concentrações de 2,5% e 5% com as duas molaridades diferentes 10 mM e 30 mM, no terceiro caso as partículas foram acrescentadas a um glaze nas duas concentrações e molaridades e aplicada sob uma amostra de reembasador macio. Uma suspensão de Candida albicans e Estreptococos mutans foi utilizada para análise de concentração inibitória mínima. Amostras retangulares em resina acrílica (n=6) de 30x10x3... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this work was to synthesize and characterize silver - coated silica nanoparticles, and to evaluate the influence when incorporated into chemically activated acrylic resin, soft reliner, and glaze, in their microbiological, microstructural and mechanical characteristics. A solution containing silica nanoparticles coated by silver nanoparticles in two proportions, 10 millimols and 30 millimols, where they were characterized, was prepared by the hydrolysis and controlled condensation method (Stober method). Silica nanoparticles incorporated with silver were analyzed by integrated X-ray dispersive energy (EDS), scanning electron microscopy (SEM), and dynamic light scattering (DLS).For the microbiological analysis, 10 cylindrical samples (2mmx10mm) were made in chemically activated acrylic resin where the particles were incorporated in two concentrations: 2.5% and 5% with two different molarities of 10 mM and 30 mM. In another situation, 10 cylindrical samples (2mmx10mm) of soft reliner were made, with concentrations of 2.5% and 5% with the two different molarities 10 mM and 30 mM, in the third case the particles were added to a glaze in the two concentrations and molarities and applied under a sample of soft reliner. A suspension of Candida albicans and Streptococcus mutans was used for analysis of minimal inhibitory concentration. The samples were made in acrylic resin (n = 6) of 30x10x3mm and were made to perform the three-point flexural strength test of EMIC (Model ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Fernando Rogério Pavan / Banca: Katiany Rizzieri Caleffi Ferraciolli / Banca: Tais Maria Bauab / Resumo: Tuberculose (TB) é a doença infecciosa que mais mata pessoas no mundo e é causada principalmente pelo bacilo Mycobacterium tuberculosis. Em 2016, 10,4 milhões de pessoas desenvolveram a doença e 1,8 milhão morreu em sua decorrência. Atualmente o principal agravante deste cenário é a resistência do bacilo aos antimicrobianos disponíveis para o tratamento. Entre os principais mecanismos responsáveis pela resistência aos antimicrobianos, as mutações em genes que codificam dos alvos dos fármacos se destacam. Fluoroquinolonas e aminoglicosídeos são duas classes de antimicrobianos de 2ª linha utilizados no tratamento de TB e atuam na proteína DNA girase e no ribossomo bacteriano impedindo o processo de transcrição e síntese proteica respectivamente. Mutações nos genes gyrA e rrs que codificam estes alvos podem ser responsáveis por tal resistência. Para que medidas de saúde pública possam ser tomadas para otimizar o tratamento, é preciso conhecer a que os isolados clínicos são resistentes e qual o mecanismo envolvido neste processo. Para isso, uma biblioteca com 100 isolados clínicos coletados entre 2007 e 2009 no hospital de referência Clemente Ferreira da cidade de São Paulo foi avaliada em relação a resistência a fluoroquinolonas e aminoglicosídeos. A primeira etapa foi a determinação da concentração inibitória mínima (CIM) de três antibióticos da classe das fluoroquinolonas (ofloxacino, moxifloxacino e gatifloxacino) e três da classe dos aminoglicosídeos (amicacina, canamicina e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Tuberculosis (TB) is a most deadly infectious disease of people in the world and is mainly caused by the Mycobacterium tuberculosis bacillus. In 2016, 10.4 million people developed disease and 1.8 million died. Currently, the main aggravating factor of this scenario is the resistance of the bacillus to the antimicrobials available for treatment. Among the main mechanisms for resistance to antimicrobials, the mutations in genes that code the targets of the drugs stand out. Fluoroquinolones and aminoglycosides are two classes of antimicrobials of 2nd line for TB treatment and they act on protein DNA gyrase and on the bacterial ribosome impeding the process of transcription and protein synthesis respectively. Mutations in the gyrA and rrs genes encoding these targets may be explain the resistance. Public health guidelines are taken to optimize treatment and for this it is necessary to know what clinical isolates resistant and what mechanism are is involved in the process. For this, a library with 100 clinical isolates collected between 2007 and 2009 at a Clemente Ferreira reference hospital in the city of São Paulo was evaluated for resistance to fluoroquinolones and aminoglycosides. A first stage was the determination of the minimum inhibitory concentration (MIC) of three fluoroquinolone antibiotics (ofloxacin, moxifloxacin and gatifloxacin) and three of the class of aminoglycosides (amikacin, kanamycin and streptomycin) against 100 clinical isolates using a microdilution assay in 96-well plates. According to the MIC, clinical isolates resistant to at least one antimicrobial were selected for the study of the possible mechanism of resistance. Mutations in the gyrA and rrs genes were scree ned using the GenoType MTBDRsl kit because it may explain the resistance... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Eduardo Maffud Cilli / Banca: Márcia Aparecida Silva Graminha / Banca: Eduardo Festozo Vicente / Resumo: Doenças fúngicas e parasitárias representam grandes riscos para a saúde pública. A importância global das doenças fúngicas vem aumentando, dado o número crescente de pacientes vulneráveis para essas infecções, incluindo pacientes com AIDS, transplantados, imunocomprometidos, com câncer, recém-nascidos e idosos. As principais doenças são ocasionadas por Aspergillus, Candida, Cryptococcus e Pneumocystis, no entanto os tratamentos usados são pouco eficientes devido à resistência dos patógenos aos medicamentos e da alta toxicidade e efeitos colaterais dos fármacos utilizados. Além das doenças fúngicas, as parasitárias também são problemas de saúde pública, principalmente em países pobres e em desenvolvimento. Neste caso, os tratamentos também precisam ser melhorados. Diante dessa problemática há a necessidade de se buscar novas terapias, entre as alternativas estão os peptídeos antimicrobianos. O peptídeo RP1 da classe de quimiocinas apresenta atividade contra bactérias, vírus, alguns tipos de câncer e ação antiparasitária. Além disso, o composto organometálico ferroceno (Fe(C5H5)2) também mostrou atividade antiparasitária. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da conjugação do peptídeo RP1 com o ferroceno em termos de estrutura, atividade biológica e toxicidade. Os peptídeos foram sintetizados usando a técnica de síntese de peptídeo em fase sólida (SPFS). A estrutura foi avaliada por espectroscopia de CD. A atividade dos peptídeos foi avaliada por estudos de permeabilizaç... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Fungal and parasitic diseases are major health problems globally. Around the world, 800 million people are affected with a type of fungal disease; the main ones are caused by Aspergillus, Candida, Cryptococcus and Pneumocystis. Standard treatments can be inefficient due to the resistance, high toxicity and side effects in patients. In addition, parasites are causing a large number of deaths, especially in poor and developing countries, as example malaria causes around 660 million people per year. Alternatives to standard treatments are urgently needed. Among them, antimicrobial peptides are the most widespread. The RP1 peptide of the chemokine class showed activity against bacteria, viruses and antiparasitic action. In addition, the organometallic compound ferrocene (Fe(C5H5)2) also exhibited antiparasitic activity. The objective of this study was to evaluate the effect of the conjugation of the peptide with ferrocene in terms of structure, biological activity and toxicity. The peptides were synthesized using the solid phase peptide synthesis technique (SPPS). The structure was evaluated by circular dichroism (CD) spectroscopy, peptide activity was evaluated by vesicle permeabilization studies, antimicrobial assays and cytotoxicity was evaluated. CD assays in PBS showed that the peptides presented a typical spectrum for disordered structures. In the presence of micelles, both peptides presented high incidence of α-helical structure. CD assays were also performed with unilamel... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Luciane Dias de Oliveira / Banca: Luis Felipe das Chagas e Silva de Carvalho / Banca: Jônatas Rafael de Oliveira / Resumo: As plantas medicinais e os fitoterápicos têm sido utilizados como coadjuvantes e alternativos no combate a diversas doenças com crescente frequência, no entanto, na Odontologia seu uso ainda é bastante limitado. Com isso, o objetivo deste estudo é avaliar a ação antimicrobiana dos extratos aquoso e glicólico de própolis verde sobre micro-organismos anaeróbios de interesse odontológico, bem como sua citotoxicidade, a fim de introduzir e incentivar o uso efetivo e sistemático desse fitoterápico em produtos como dentifrícios e enxaguatórios bucais no combate a cáries e doenças periodontais. Os extratos comerciais aquoso e glicólico de própolis foram obtidos das empresas Apis Flora e Mapric, respectivamente. Para avaliação da atividade antimicrobiana foram utilizadas cepas-padrão (ATCC) de Fusobacterium nucleatum, Parvimonas micra, Porphyromonas endodontalis Porphyromonas gingivalis e Prevotella intermedia em cultura planctônica, verificando a concentração inibitória mínima e concentração microbicida mínima (CIM e CMM), segundo Clinical and Laboratory Standards Institute. Para biofilmes monotípicos, suspensões padronizadas (107 céls/mL) foram adicionadas em poços de microplacas e após 48 h em anaerobiose foram tratados com 3 concentrações do extrato de própolis (n=12) por 5 min. Foi incluído um controle positivo (solução fisiológica) e um controle negativo (clorexidina). O biofilme foi mensurado pelos testes MTT e Cristal Violeta. Para análise de citotoxicidade, queratinócitos hu... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Medicinal plants and herbal medicines have been used as adjuvants and alternatives in fighting various diseases with increasing frequency. However, in dentistry its use is still quite limited. Therefore, the objective of this study is to evaluate the antimicrobial action of the aqueous and glycolic extracts of green propolis on anaerobic microorganisms of dental interest, in order to introduce and encourage the effective and systematic use of this herbal medicine in products such as dentifrices and mouthwashes in the fight against tooth decay and periodontal diseases. Aqueous and glycolic commercial extracts of propolis were obtained from Apis Flora and Mapric companies, respectively.To evaluate the antimicrobial activity, standard strains (ATCC) of Fusobacterium nucleatum, Parvimonas micra, Porphyromonas endodontalis, Porphyromonas gingivalis, and Prevotella intermedia in planktonic culture was used, verifying the minimum inhibitory concentration and minimum microbicide concentration (MIC and CMM), according to Clinical and Laboratory Standards Institute. For monotypic biofilms, standardized suspensions (107 cells / mL) was added to microplate wells and after 48 h in anaerobiosis was treated with 3 concentrations of propolis extracts (n = 12) for 5 min. A positive control (saline solution) and a negative control (chlorhexidine) was included. The biofilm was measured by the MTT and Violet Crystal tests. For cytotoxicity analysis, human keratinocytes (HaCaT) were cultured and ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Luciana Francisco Fleuri / Resumo: A fermentação em estado sólido (FES) é um bioprocesso especialmente adequado para obtenção de produtos de alto valor biotecnológico, tais como enzimas resultantes do metabolismo de micro-organismos. É particularmente interessante para fungos filamentosos, que são adaptados ao sistema, crescendo em substratos sólidos com baixo ou nenhum teor de água livre. A FES oferece diversas vantagens em relação à fermentação submersa, com destaque para a sustentabilidade e economia do processo pelo baixo consumo de água e a aproveitamento de resíduos agroindustriais, que podem ser utilizados como substratos e são amplamente disponíveis. Mundialmente, a demanda industrial por enzimas está em ascensão: movimentou USD 4,4 bilhões em 2015 e possui crescimento estimado em 7,8% (USD 2 bilhões) para 2015-2020. As enzimas obtidas por FES apresentam elevada versatilidade, relacionada às diferentes capacidades hidrolíticas e propriedades bioquímicas, cujas enzimas proteolíticas produzidas por esse sistema podem ser aplicadas na produção de fragmentos proteicos com atividades biológicas distintas capazes de beneficiar a saúde humana e animal, denominados peptídeos bioativos. Já foram obtidos peptídeos bioativos com ações antimicrobiana, antioxidante, antihipertensiva, imunomodulatória, opióide e antineoplásica. É reportado que estes compostos podem ser mais seletivos quando comparados a outras pequenas moléculas empregadas como fármacos. O leite é uma das principais fontes de obtenção de peptídeos r... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Introdução: O Acinetobacter spp. é um cocobacilo gram-negativo de grande importância nas infecções hospitalares, especialmente em pacientes internados em unidades de terapia intensiva (UTI); podendo levar a um aumento na morbidade e mortalidade desses pacientes. Há evidências sustentando associação entre infecção por Acinetobacter baumannii e aumento das taxas de mortalidade bruta e atribuível. Contudo, o papel desse agente como causa direta de mortalidade ainda não está suficientemente caracterizado. Dentre os fatores relacionados com o aumento da mortalidade estão: gravidade do paciente, infecção relacionada à A. baumannii multirresistente, tratamento com antimicrobiano inadequado, tempo de hospitalização com alta permanência, choque séptico e imunossupressão. Objetivos: Estimar a mortalidade bruta e atribuível às infecções hospitalares causadas pelo Acinetobacter baumannii resistente a antimicrobianos carbapenêmicos (CRAB) por meio de revisão sistemática e metanálise de estudos observacionais. Métodos: Foi desenvolvida uma revisão sistemática e metanálise de estudos observacionais publicados nas bases de dados: MEDLINE/Pubmed, CENTRAL/Cochrane Library, EMBASE/Elsevier, SCOPUS/Elsevier, Web of Science/Thomson Reuters e LILACS/BVS, para estimar a mortalidade bruta e atribuível à infecção hospitalar causada pela bactéria A. baumannii resistente a antimicrobianos carbapenêmicos em pacientes adultos e pediátricos internados em unidades de tratamento intensivo e nãointensivo. Os estudos incluídos caracterizaram fatores preditores de mortalidade associada à infecção por CRAB, comparando com pacientes infectados por A. baumannii sensível a carbapenêmicos (CSAB). Primeiramente, foi estimado um modelo de efeitos aleatórios para a medida agregada de mortalidade atribuível não ajustado a fim de avaliar a contribuição direta das infecções na morte. Na sequência, foram avaliados descritivamente os principais aspectos metodológicos necessários aos estudos observacionais, para a análise dos fatores de risco relacionados a mortalidade atribuível em pacientes infectados por CRAB, por meio de instrumento elaborado conforme recomendações internacionais - ORION, TREND, STROBE e CONSORT. Resultados: Com base nos 29 estudos incluídos na metanálise, observou-se um risco atribuível aumentado na mortalidade bruta em pacientes com infecção por CRAB comparativamente aos pacientes com infecção por CSAB (RA = 0,19 (IC95% = 0,14-0,24) com elevada heterogeneidade (I2 = 66,4%, p-valor < 0,001). Como fontes de heterogeneidade investigou-se o tempo de internação, sítio de infecção, gravidade da doença e uso de terapia inapropriada. Entre os estudos que avaliaram exclusivamente pacientes com bacteremia, o risco de mortalidade atribuível foi maior (RA = 0,27; IC95% = 0,19-0,34). Utilizando-se metarregressão foi observada relação linear positiva entre o risco atribuível de mortalidade e a diferença da média padronizada do escore de APACHE II. Para a investigação da presença de risco de viés e confundimento avaliou-se descritivamente os principais aspectos metodológicos necessários aos estudos observacionais que identificam os fatores de risco associados com a mortalidade atribuível em pacientes com infecções por CRAB. Observou-se nesta revisão que os estudos estão sujeitos a confundimento, incluindo a forma inadequada do ajuste para fatores de confusão de variáveis importantes (ex.: seleção de grupo controle, exposição prévia aos antimicrobianos, mensuração do tempo em risco e a gravidade), além da grande heterogeneidade entre os estudos, devido aos desenhos, unidades de análise e abordagens na medida de exposição e desfecho, tornando difícil a comparação e a sumarização das informações. Conclusões: Os dados dessa revisão sistemática fornecem evidências que a mortalidade atribuível relacionada à presença de infecção por CRAB é maior que em pacientes com infecção por CSAB. Contudo, a investigação da mortalidade atribuível apresenta muitas limitações e ainda não é conclusiva em razão da adequação do desenho do estudo aos seus objetivos; definições de medidas de exposição e desfecho; métricas utilizadas na aferição dos resultados; seleção de grupo controle e fatores de confusão. A consciência de todos esses elementos para a interpretação epidemiológica é vital na análise da mortalidade bruta e atribuível. / Introduction: Acinetobacter spp. is a gram-negative coccobacillus of great importance in hospital infections, especially in patients in intensive care units (ICUs); may lead to an increase in morbidity and mortality of these patients. There is evidence supporting association between infection by Acinetobacter baumannii and the increase in crude and attributable mortality rates. However, the role of this agent as a direct cause of death is not sufficiently characterized yet. Among the factors related to the increase of mortality are: severity of the patient, infection related to A. baumannii multidrug-resistant, inappropriate antimicrobial treatment, hospital stay with high permanence, septic shock and immunosuppression. Objectives: To estimate the crude and attributable mortality to hospital-acquired infections caused by carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii through systematic review and meta-analysis of observational studies. Methods: A systematic review and metaanalysis of observational studies published in the databases has been developed: MEDLINE/PubMed, CENTRAL/Cochrane Library, EMBASE/Elsevier, SCOPUS/Elsevier, Web of Science/Thomson Reuters and LILACS/BVS to estimate the crude and attributable mortality to hospital infection caused by the bacterium carbapenem-resistant A. baumannii (CRAB) in adult and pediatric patients in intensive and non-intensive care units. The studies included characterized predictors of mortality associated to infection with CRAB, compared to patients infected with carbapenem-susceptible A. baumannii (CSAB). First, a random effects model was estimated for the aggregate measure of non-adjusted attributable mortality in order to assess the direct contribution of infections in death. Following were descriptively assessed the main methodological aspects necessary to observational studies for the evaluation of risk factors related to attributable mortality in patients infected with carbapenem-resistant A. baumannii through instrument designed according to international recommendations - ORION, TREND, STROBE and CONSORT. Results: Through the 29 studies included in the meta-analysis, there was an increased attributable risk in the crude mortality in patients with infections by CRAB compared to patients with infections by CSAB (RA = 0.19 (95% CI = 0.14 to 0.24) with high heterogeneity (I2 = 66.4%, p <0.001). As sources of heterogeneity, it was investigated the length of stay, the site of infection, disease severity and use of inappropriate therapy. Among the studies that evaluated only patients with bacteremia, the risk of attributable mortality was higher (RA = 0.27; 95% CI = 0.19 to 0.34). Using meta-regression was observed a positive linear relationship between the attributable mortality risk and the standardized mean difference of APACHE II score. For investigating the presence of bias and confounding risk was evaluated descriptively the main methodological aspects necessary to observational studies evaluating the risk factors associated with attributable mortality in patients with infections caused by carbapenem-resistant A. baumannii. It was observed in this review that these studies are subject to pitfalls, including the inappropriate mode for adjustment for confounding factors of important variables (eg.: control group selection, previous exposure to antimicrobials, measurement of time in risk and gravity); besides the great heterogeneity between studies due the drawings, units of analysis and approaches to the extent of exposure and outcome, making it difficult comparison and summarization of information. Conclusions: The data of this systematic review provide evidence that attributable mortality related to the presence of infection by CRAB is higher than in patients with infection by CSAB. However, the investigation of attributable mortality has many limitations and is not conclusive yet because of the design adequacy of the study to their goals, definitions of exposure and outcome measures, metrics used in measuring results, control group selection and confounding factors. The awareness of all these elements is vital in analyzing the crude and attributable mortality.

Made available in DSpace on 2011-03-23T21:19:37Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Item created via OAI harvest from source: http://www.bdtd.ufpa.br/tde_oai/oai2.php on 2011-03-23T21:19:37Z (GMT). Item's OAI Record identifier: oai:bdtd.ufpa.br:272 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The study of medicinal plants it makes possible the discovery of new bioactive components in the search for promising drugs. The increase of infections and the appearance of the microbial resistance strengthen this research. The Objective of this study it was evaluate the antimicrobial activity of the extracts of six medicinal plants of the Amazonia: Psidium guajava (guava), Bryophyllum calycinum Salisb (pirarucu), Eleutherine plicata Herb (marupazinho), Uncaria guianensis (Cats claw), Arrabideae chica (pariri) e Mansoa alliacea (Lam.) A.H. Gentry (cipó d'alho) against ATCC strains of fungi and bacteria.The collection and the identification of the plant were performed in EMBRAPA/CPATU and the phytochemical analysis in the Laboratory of FACFAR/UFPA and CESUPA in agreement with the methodologies established in these laboratories. The crude ethanolic extract of leaves and the underground parts of marupazinho were submitted to the antimicrobial activity evaluation though the ágar disc diffusion method and determination of minimum inhibitory concentration (MIC) though microdilution in plate and ágar disc diffusion methods. The extracts were used in concentrations of 500, 250, 125, 62,5 and 31,25 mg/mL using as solvent Dimethyl Sulfoxide (DMSO). The Guava extract was effective against S. aureus, P. aeruginosa and C. albicans (MIC 125mg\mL), pirarucu was effective against S aureus (MIC= 500 mg/mL) and P. aeruginosa (MIC= 250 mg/mL), marupazinho against S.aureus (MIC= 500mg/mL) and C. albicans (MIC= 250mg/mL), Cats claw against S. aureus (MIC= 62,5mg/mL) and pariri was effective against S. aureus (MIC= 62,5 mg/mL), E. coli (MIC=250 mg/mL) and C. albicans (MIC 500 mg/mL). The fractions of U. guianensis extracts was obtained though fractioned dissolution methods and show that only the methanolic fraction presented antimicrobial activity. The results show that Amazonia medicinal plants presents antimicrobial activity and. This promissory extracts open the possibility of finding new clinically effective antimicrobial compounds. / O estudo de plantas medicinais possibilita a descoberta de novos compostos bioativos na procura de drogas promissoras. O aumento de infecções e o aparecimento da resistência microbiana reforçam essa pesquisa. O objetivo do trabalho foi avaliar a atividade antimicrobiana de extratos de seis espécies de plantas medicinais que ocorrem na Amazônia: Psidium guajava (goiabeira), Bryophyllum calycinum Salisb (pirarucu), Eleutherine plicata Herb (marupazinho), Uncaria guianensis (unha-de-gato), Arrabideae chica (pariri) e Mansoa alliacea (Lam.) A.H. Gentry (cipó d'alho) frente a cepas ATCC de bactérias e fungos. A coleta e a identificação das plantas foram realizadas na EMBRAPA/CPATU e a análise fitoquímica no Laboratório de Fitoquímica da FACFAR/UFPA e CESUPA obedecendo às metodologias estabelecidas nestes laboratórios. Os extratos etanólicos seco das folhas frescas das plantas e bulbo do marupazinho foram submetidos à avaliação da atividade antimicrobiana pelo método de disco difusão em ágar e determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) através do método de microdiluição em placas e disco difusão em ágar. Os extratos foram utilizados em concentrações de 500, 250, 125, 62,5 e 31,25 mg/mL utilizando como solvente o Dimetil-Sulfóxido (DMSO). O extrato de goiabeira teve atividade frente a S. aureus, P. aeruginosa e C. albicans (CIM125mg\mL), o de pirarucu frente a S. aureus (CIM= 500 mg/mL) e P. aeruginosa (CIM= 250 mg/mL), o de marupazinho para S. aureus (CIM= 500mg/mL) e C. albicans (CIM= 250mg/mL), o de unha-de-gato contra S. aureus (CIM= 62,5 mg/mL) e o de pariri inibiu S. aureus (62,5 mg/mL), E. coli (250 mg/mL) e C. albicans (500 mg/mL). O fracionamento do EEB de U. guianensis através da técnica de dissolução fracionada demonstrou que a fração metanólica teve ação antimicrobiana. Os resultados comprovaram que estas plantas possuem atividade antimicrobiana. Estes extratos abrem uma possibilidade de descobertas de novos compostos antimicrobianos clinicamente efetivos.

Os fungos endofíticos tornam-se valiosa fonte para descoberta de novas moléculas de interesse terapêutico e biotecnológico. O objetivo deste trabalho consistiu em avaliar o potencial bioativo do produto da fermentação do fungo endofítico Gibberella moniliformis 99(3) e identificar as moléculas responsáveis por essa bioatividade. Inicialmente, o endófito isolado das folhas de Laguncularia racemosa foi submetido ao processo de fermentação em caldo Czapeck por 20 dias/ 28ºC em condições estáticas. Após, o caldo fermentado foi particionado com diferentes solventes, gerando os extratos acetato de etila (JAc: 238 mg) e n-butanólico (JBu: 27,2 mg). Estes foram biomonitorados pelo ensaio de difusão em ágar frente diferentes patógenos (S. aureus ATCC 6538, E. coli ATCC 25922 e C. albicans ATCC 10231) e, diante do potencial antimicrobiano observado, foi determinada também a concentração inibitória mínima (CIM) e microbicida mínima (CMM). É pertinente destacar os resultados para JAc (CIM: 125-250 µg/mL) e para JBu (CIM: 25-50 µg/mL; CMM: 100-200 µg/mL) contra C. albicans ATCC 10231. Procedeu-se estudo de fracionamento bioguiado com o extrato JAc, obtendo 27 frações. Estas foram reagrupadas em quatro (J1, J2, J3 e J4), às quais foram biomonitoradas quanto ao potencial antimicrobiano, sendo o maior destaque evidenciado pela fração J3. No estudo cromatográfico, J3 revelou-se positivo com reagente de Dragendorff e luz UV 254 nm. Os estudos espectroscópicos com esta fração (H¹ RMN, C¹³ RMN, COSY, HSQC, HMBC, EM e IV), permitiram a caracterização de um alcaloide piridínico denominado Ácido 5-butilpiridina-2-carboxílico, também conhecido como Ácido fusárico. Investigou-se o potencial biológico deste composto por meio de seis ensaios biológicos in vitro. No estudo de viabilidade celular, pelo ensaio do MTS frente quatro linhagens humanas tumorais (A549, Hep G2, HT 144 e MCF 7), observou-se seletividade moderada para duas linhagens (MCF 7 e HT 144) e baixa seletividade para a linhagem normal (CCD-1059Sk). A redução da viabilidade celular de 60 % (MCF 7) e 50 % (HT 144), ocorreu por efeito antiproliferativo (IC50: 60 µg/mL), conforme constatado no ensaio por exclusão com o azul de tripano. Nos estudos antimicrobianos, o alcaloide piridínico evidenciou forte potencial antifúngico frente C. albicans ATCC 10231 (CIM: 25-50 µg/mL; CFM: 200-400 µg/mL). Neste sentido, o conjunto dos dados permitiu sugerir tratamento tópico seguro para o paciente com candidíase, uma vez que a CIM esteve bem abaixo de uma possível concentração tóxica para os fibroblastos de pele (CCD-1059Sk). Ainda, diante do perfil antifúngico observado contra linhagens provenientes de ambiente hospitalar, este composto poderia ser indicado como higienizador em fontes secundárias de contaminação (CIM contra C. albicans isoladas de lençol e jaleco: 50-100 µg/mL). Também foi constatado forte potencial bacteriostático contra E. coli (CIM: 50-100 µg/mL) e moderado contra S. aureus (CIM: 200-400 µg/mL). Por meio das imagens de MEV foi possível observar que a bactéria S. aureus sofreu evidentes alterações morfológicas quando tratada com 200 e 400 µg/mL de Ácido fusárico. Ao investigar o efeito sinérgico da associação do composto com antimicrobianos de uso comercial, verificou-se frente a E. coli efeito parcialmente sinérgico (ICIF = 0,625), com potencialização em oito vezes da atividade antimicrobiana da estreptomicina. Frente S. aureus foi verificado efeito aditivo na associação do alcaloide e amoxicilina (ICIF = 1). Em estudo da ação antituberculose, observou-se CIM90 > 25 µg/mL. Conclui-se que o fungo endofítico G. moniliformis é promissor na produção de compostos de interesse e os estudos realizados no presente trabalho abrem novas perspectivas de conhecimento para o Ácido fusárico que até então não haviam sido explorados na literatura. / The endophytic fungi become valuable sources for discovering new molecules with therapeutic and biotechnological interest. The present study aimed to evaluate the bioactive potential of the products obtained in the fermentation of Gibberella moniliformis 99(3) endophytic fungus and to identify the molecules responsible for this bioactivity. Initially, the endophyte isolated from leaves of Laguncularia racemosa (Brazilian mangrove) was submitted to the fermentation in Czapek broth for 20 days / 28°C, under static conditions. Then, the fermented broth was partitioned with different solvents resulting in the ethyl acetate (JAc: 238 mg) and n-BuOH (JBu: 27.2 mg) extracts. These extracts were biologically monitored by agar diffusion assay against different pathogens (S. aureus ATCC® 6538™, E. coli ATCC® 25922™ and C. albicans ATCC® 10231™). Since an antimicrobial potential was observed, the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimal microbicidal concentration (MMC) were also determined. It is pertinent to highlight the results of JAc (CIM: 125-250 µg/mL) and to JBu (CIM: 50-100 µg/mL; CMM: 100-200 µg/mL) against C. albicans ATCC 10231. A bioguided fractionation study was realized with JAc extract obtaining 27 fractions, which were grouped into four fractions (J1, J2, J3 e J4). The antimicrobial potential was biomonitored, with more emphasis to J3. In chromatographic study, the J3 fraction was positive to Dragendorff reagent and UV 254 nm. In the spectroscopic studies with J3 (H¹ NMR, C¹³ NMR, COSY, HSQC, HMBC, MS and IR) was possible the characterization of a pyridine alkaloid called 5-butylpyridine-2-carboxylic acid also known as fusaric acid. The bioactive potential of this compound was investigated applying six biological assays in vitro. The cell viability study was realized by colorimetric assay MTS, using four human tumor lines (A549, Hep G2, HT 144 and MCF 7), was observed a moderate selectivity for the lines MCF 7 and HT 144 and low selectivity was assessed on normal fibroblast strains (CCD-1059Sk). The reduction of cellular viability of 60 % (MCF 7) and 50 % (HT 144) occurs by antiproliferative effect (IC50: 60 µg/mL), according to test by exclusion with trypan blue. In antimicrobials studies, the pyridine alkaloid showed strong antifungic potential against C. albicans ATCC 10231 (MIC: 25-50 µg/mL; MFC: 200-400 µg/mL). In this sense, a safe and topical treatment for patients with candidiasis could be suggested based on data set, once the MIC was well below toxic concentration for a possible skin fibroblasts (CCD-1059Sk ). Besides that, this compound could be suitable for use as a sanitizer on secondary sources of hospital infection due to the fungistatic profile observed in C. albicans isolated from lab coat and sheet (MIC : 50-100 µg/mL). It was also observed strong bacteriostatic potential against E. coli (MIC: 50-100 µg/mL) and moderate against S. aureus (MIC: 200-400 µg/mL). With the SEM images was noted that S. aureus suffered obvious morphological changes when treated with 200 and 400 µg/mL of fusaric acid. Investigating the synergistic potential of the combination between fusaric acid and commercially used antimicrobials, it was observed partially synergistic effect (ICIF = 0,625) for E. coli, with eight times potentiation of the streptomycin antimicrobial activity. It was checked for S. aureus an additive effect in the combination of alkaloid and amoxicillin (ICIF = 1). Studying antimycobacterial activity, the compound was tested against Mycobacterium tuberculosis, with MIC90 > 25 µg/mL. The present work consistently demonstrated that the fungus endophyte G. moniliformis is promising in the production of compounds of interest and the data presented in this study open up new avenues of knowledge for fusaric acid which until then had not been explored in the literature.