Made available in DSpace on 2015-08-20T17:10:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-04-24. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-20T17:25:49Z : No. of bitstreams: 1 000840326_20160424.pdf: 113924 bytes, checksum: 3a1cad039c8f76f08b11170e5da617e3 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-04-25T15:55:53Z: 000840326_20160424.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-04-25T15:56:50Z : No. of bitstreams: 1 000840326.pdf: 1991836 bytes, checksum: 2bc4d69a08c0e41971f42ad21c0a2dcc (MD5) / A cefalotina (CET) é um antimicrobiano β-lactâmico semi-sintético, bactericida e representa o protótipo das cefalosporinas, pertencente à classe da primeira geração. As cefalosporinas apresentam um espectro de atividade mais amplo do que as penicilinas e são amplamente prescritas. Poucos métodos analíticos são descritos na literatura para a análise de CET, e ao nosso conhecimento, nenhum método rápido e indicativo de estabilidade por cromatografia líquida para este composto foi publicado anteriormente. Foi desenvolvido um método indicativo de estabilidade por cromatografia líquida em fase reversa para determinação quantitativa de CET, na presença de impurezas e produtos de degradação gerados a partir dos estudos de degradação forçada em amostras de pó liofilizado para injeção. O método desenvolvido é também aplicável para a determinação de substâncias relacionadas em matéria-prima e em formas farmacêuticas. A separação cromatográfica foi obtida com a coluna Agilent Eclipse XDB-Phenyl, de 250 mm x 4,6 mm, 5 μm, em fase móvel composta por uma mistura das soluções A (tampão fosfato de amônio, pH 4,5) e B (acetonitrila), no modo de eluição gradiente. A vazão utilizada foi de 1,0 mL/min e o comprimento de onda 238 nm. O fármaco foi submetido a condições de estresse por hidrólise, oxidação, fotólise, umidade e degradação térmica. Obteve-se degradação considerável nas condições de hidrólise alcalina, ácida e estresse oxidativo. No método desenvolvido por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), a resolução entre CET e os seus potenciais produtos de degradação foi maior que 2,4; além disso, a pureza de pico de CET em todas as condições foi maior que 99%, demonstrando o poder indicativo de estabilidade do método. A impureza B (desacetilcefalotina) que é um metabólito menos ativo da CET foi identificada e apresentou formação significativa, especialmente na condição... / Cephalothin (CET) is a semi-synthetic β-lactam antimicrobial compound, bactericidal, and it represents the prototype of cephalosporins, which belongs to the first-generation class. Cephalosporins present a larger spectrum of activity than penicillins and they are widely prescribed. Few analytical methods are described in the literature for the analysis of CET and to our knowledge rapid stability-indicating liquid chromatography (LC) methods for this compound have not been published elsewhere. A stability-indicating gradient reversed phase liquid chromatography (RP-LC) method has been developed for the quantitative determination of CET, in the presence of its impurities and degradation products generated from forced degradation studies, in samples of lyophilized powder for injection. The developed method is also applicable for the related substances determination in bulk drugs and pharmaceutical forms. The chromatographic separation was achieved on an Agilent Eclipse XDB-Phenyl, 250 mm x 4.6 mm, 5 μm column with mobile phase containing a gradient mixture of solutions A (aqueous ammonium phosphate buffer, pH 4.5) and B (acetonitrile) as mobile phase. The flow rate was 1.0 mL/min and the detection wavelength was 238 nm. The drug substance was subjected to stress conditions of hydrolysis, oxidation, photolysis, humidity and thermal degradation. Considerable degradation was found to occur in base, acid and oxidative stress conditions. In the developed high performance liquid chromatography (HPLC) method, the resolution between CET and its potential degradation products was found to be greater than 2.4, further, the peak purity of CET in all conditions were more than 99% proving the stability-indicating power of method. The less active metabolite of CET, desacetylcephalothin (impurity B), was identified and is showed significant formation especially in alkaline condition. This method is able to detect the degradation products of CET at a ...

O estudo resultou em dois artigos principais relacionados ao aborto suíno de origem viral e outros dois relatos de caso de aborto suíno de origem bacteriana. O primeiro artigo retrata a análise de 117 casos de aborto durante 1,5 anos. A causa de aborto foi identificada em 25,5% dos casos. Infecção por parvovírus suíno foi observada em 16,2% dos fetos. Aborto bacteriano foi diagnosticado em 5,1% dos casos (6/117), seguido por infecção de PCV2 (3,4%) e associações (2,5%). No segundo artigo, casos de aborto e natimortalidade suína por co-infecção entre circovírus suíno tipo 2 (PCV2) e parvovírus suíno (PPV) foram descritos, onde sete de 121 (5,78%) fetos suínos abortados apresentavam lesões compatíveis com origem viral e foram positivos pelas técnicas de imunoistoquímica e PCR para PCV2. Além disso, três (2,47%) desses sete casos também foram confirmados como co-infectados com PPV através da PCR. Dilatação ventricular, áreas pálidas no miocárdio e edema de mesocólon foram as alterações macroscópicas observadas. Lesões microscópicas incluíram miocardite não supurativa, necrose e fibrose cardíacas, focos de mineralização e corpúsculos de inclusão em cardiomiócitos e pneumonia intersticial mononuclear. O terceiro artigo retrata lesões de pele observadas em um feto suíno abortado devido à infecção por Erysipelothrix rhusiopathiae, enfatizando seus aspectos macroscópicos, histopatológicos e microbiológicos. No quarto artigo é descrito um caso de aborto suíno por Escherichia coli O157: H7 em que dois fetos analisados apresentavam lesões macroscópicas caracterizadas por líquido e fibrina na cavidade torácica e abdominal e petéquias no pericárdio. Microscopicamente foram observadas broncopneumonia supurativa e pleurite supurativa foram observadas. O teste de imunoistoquímica foi positivo para E. coli O157: H7. / This study resulted in two main articles on viral swine abortion and two articles describing bacterial swine abortion. The first article 117 cases of swine abortion were analyzed during 1.5 year period. The cause of swine abortion was identified in 25.5% of cases. Parvovirus infection was observed in 16.2% of fetuses. Bacterial infection accounted for 5.1% (6/117) followed by PCV2 infection 3.4% (4/117) and associations 2.5% (3/117). In the second article swine abortion and stillbirth cases by co-infection between porcine circovirus type 2 (PCV2) and porcine parvovirus was describe in which 7/121 (5.78%) swine fetuses had lesions consistent with viral cause and showed both positive anti-PCV2 immunostaining as well as PCV2-PCR. In samples from 3 (2.47 per cent) of these 7 fetuses, co-infection with PPV was confirmed by Nested-PCR. Ventricular dilatation, myocardial pale areas, and mesocolic edema were the gross lesions observed. Microscopic lesions included non-suppurative myocarditis, myocardial necrosis and fibrosis, mineralization foci and intranuclear inclusion bodies in cardiomyocytes, and interstitial mononuclear pneumonia. In the third article describes skin lesions in an aborted swine fetus due to Erysipelothrix rhusiopathiae with special emphasis on macroscopic, histopathology and microbiology aspects. In the forth article a case about swine abortion due to Escherichia coli O157:H7 is described, in which two fetuses analyzed showed macroscopic lesions characterized by fluid with fibrin exudation in the corporal cavities and petechial hemorrhages in the pericardium. Microscopically, these lesions were characterized by focally-extensive suppurative pleuritis and fibrin-purulent interstitial bronchopneumonia in which were abundant gram-negative rods with morphology consistent with Escherichia coli. The immunohistochemistry test was positive for E. coli O157:H7.

Óleos essenciais são produtos naturais produzidos no metabolismo secundário de certos vegetais, com propriedades, entre outras, de defesa contra agentes nocivos. No sul do Brasil, destacam-se duas espécies da família Asteraceae, Heterothalamus alienus e Heterothalamus psiadioides, cujas substâncias bioativas ainda são pouco estudadas quanto as suas propriedades. O objetivo do estudo foi avaliar a ação antimicrobiana desses óleos essenciais e a atividade antibiofilme do óleo essencial de H. psiadioides. Os óleos foram obtidos a partir da hidrodestilação das folhas e caracterizados por cromatografia em fase gasosa acoplada a espectrometria de massas. O espectro de ação foi avaliado contra bactérias e fungos. A concentração inibitória mínima (CIM) foi determinada para cocos Gram-positivos resistentes a agentes antimicrobianos, como Enterococcus faecalis resistente a vancomicina (ERV), e a ação antibiofilme foi avaliada tanto pela interferência dos componentes dos óleos sobre a aderência microbiana quanto por sua ação sobre biofilme estabelecido. Os óleos essenciais de Heterothalamus sp. são constituídos por compostos terpênicos, sendo o β-pineno o componente majoritário. Ambos foram eficazes contra as bactérias Gram-positivas e fungos avaliados, porém não inibiram as bactérias Gram-negativas. A CIM variou entre 4 – 16%, sendo que isolados ERV foram também inibidos. A ação do óleo essencial de H. psiadioides diminuiu a aderência microbiana e, em menor escala, causou disrupção do biofilme pré-formado; no entanto, não foi verificada completa inibição do biofilme. Os resultados fornecem informações importantes sobre de ação antimicrobiana desses óleos essenciais e indicam o uso potencial dessas espécies como medicinais. / Essential oils are natural substances produced on secondary metabolism of some plants, with properties, among others, of defense against harmful agents. In southern Brazil, Heterothalamus alienus and Heterothalamus psiadioides (Asteraceae) are recognized by bioactive substances that are still little studied by their properties. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of essential oils from Heterothalamus sp. and the antibiofilm action of H. psiadioides essential oils. The oils were obtained from the hydrodistillation of the leaves and characterized by gas chromatography coupled mass spectrometry. The spectrum of action was determinate against bacteria and fungi. The minimal inhibitory concentration (MIC) was evaluated for Gram-positive cocci with antimicrobial resistance, as vancomycin-resistent Enterococcus faecalis (VRE) and the antibiofim action was assessed both by interference of the components of the oils on microbial adherence and by its action on established biofilm. The essential oils consist in terpene compounds, and the β-pinene was the major component. The essential oils were effective against Gram-positive bacteria and fungi, but did not inhibit Gram-negative bacteria. The MIC range 4 to 16% and the VRE isolates were also inhibit. The action of essential oils reduced microbial adherence and disrupted de pre-formed biofilm. However, the biofilm was not completely inhibited. These findings provide important information about the antimicrobial activity of these essential oils and indicated the potential use of this species as medicinal.

Por sua ubiquidade na matéria fecal, a Escherichia coli é amplamente utilizada como um indicador sanitário, entretanto, a E.coli pode apresentar a capacidade de persistir e se multiplicar em ambientes distintos, fora de seu hábitat primário. A determinação filogenética é ferramenta auxiliar na melhor caracterização destas cepas cosmopolitas. Membros da microbiota comensal, como a E. coli, sofrem pressão seletiva pela exposição a antimicrobianos, resultando no aumento da resistência nestas populações. Pela importância da utilização da E. coli como um indicador sanitário, somada a disseminação de cepas resistentes desta espécie nos diversos ambientes, este estudo visou realizar a determinação filogenética de isolados de E.coli multirresistentes provenientes de amostras ambientais, animais e humanas. A susceptibilidade foi avaliada frente a 15 antimicrobianos, em 157 isolados de E. coli (32 de humanos, 44 de suínos, 34 de aves e 47 do ambiente). A resistência foi maior a ampicilina e tetraciclina (96%), ao sulfametoxazol – trimetoprim (70%) e ao clorafenicol (67,5%), entre todos os isolados. Os isolados de origem animal e humana foram os mais associados a um perfil de multirresistência mais amplo e a produção de ESBL. Na determinação filogenética, baseada no método de Clermont et. al. (2000), os filogrupos B1 (49%) e A (34%) foram os mais prevalentes, tendo D (11%) e B2 (6%) menor representatividade. Os filogrupos A e B1 também foram os mais relacionados a multirresistência. Os resultados indicaram que os isolados deste estudo são associados a microbiota comensal de humanos e animais e que estas populações sofreram exposição a antimicrobianos de amplo espectro. Tal fato pode implicar em alterações destas comunidades microbianas, possibilitando a disseminação de microrganismos potencialmente virulentos em hábitats secundários. / Due to its ubiquity in fecal matter, Escherichia coli is widely used as a microbiological indicator of fecal contamination. However, E. coli may develop the capacity to persist and multiply in distinct environments, outside of its primary habitat. Phylogenetic identification is an auxiliary tool in the characterization of these cosmopolitan strains. Members of the commensal microbiota, like E. coli suffer selective pressure from exposition to antimicrobials, resulting in resistance increases in these populations. Due to the importance of E. coli as a bioindicator of fecal contamination and to the dissemination of resistant strains of this species in the environment, this work aimed to identify phylogenetic groups in multiresistant isolates of E. coli, from environmental, animal and human samples. The susceptibility was assessed against 15 antimicrobials, in 157 isolates of E. coli (32 from humans, 44 from swines, 34 from birds and 47 from the environment). The resistance was higher to ampicillin and tetracycline (96%), sulfamethoxazole - trimethoprim (70%) and chloramphenicol (67.5%). Isolates of animal and human origin were associated to a wider multiresistance profile and higher ESBLs production. In the phylogenetic identification, based on the method proposed by Clermont et al. (2000), phylogroups B1 (49%) and A (34%) were the majority, while D (11%) and B2 (6%) had less representation. Phylogroups A and B1 had also more significant relation to multiresistance. Results indicated that the isolates in this study were associated to the commensal microbiota of humans and animals and that these populations were exposed to broad-spectrum antimicrobials. This can cause changes in these microbial communities, which may result in the dissemination of potentially virulent organisms in secondary habitats.

A segurança dos alimentos é uma questão importante para a indústria e os consumidores de alimentos. Neste contexto, a indústria de alimentos tem um desafio tecnológico devido ao aumento da preocupação sobre a utilização de conservantes químicos e ao aumento da demanda por alimentos mais naturais e minimamente processados. Este trabalho teve como objetivos a incorporação de extrato de alho em nano estruturas de fosfatidilcolina e avaliação da sua atividade antimicrobiana contra Listeria monocytogenes; avaliou-se, a produção de nanolipossomas com a combinação de nisina e extrato de alho, e avaliar a sua atividade antimicrobiana contra bactérias Gram-negativas e Gram-positivas. Como resultado, foram obtidos nanolipossomas contendo extrato de alho com 174,6 nm de diâmetro hidrodinâmico, polidispersividade de 0,26; potencial zeta de -16,2 mV e eficiência de encapsulação de 47,46%. Estes nanolipossomas reduziram em 4 ciclos logarítmicos a contagem de células viáveis em quatro das cinco cepas de Listeria spp testesdos, depois de 10 horas de incubação a 37°C em leite integral. No segundo momento, foram desenvolvidos nanolipossomas contendo a mistura nisina/extrato de alho, os quais apresentaram um diâmetro hidrodinâmico de 179 nm, potencial zeta de -27,7 mV e uma eficiência de encapsulação de 82% e 90%, para nisina e extrato de alho respectivamente. Estes nanolipossomas reduziram em 5-6 ciclos logarítmicos a contagem de células viáveis de bactérias gram-positivas em 3-4 ciclos logarítmicos a contagem de bactérias gram-negativas, comparados com o controle, quando incubadas em leite integral a 37°C. Os produtos livres e encapsulados (extrato de alho e nisina/extrato de alho) apresentaram idênticos resultados de atividade antimicrobiana. Sendo assim, é possível afirmar que o processo de encapsulção manteve as propriedades antimicrobianas dos compostos analisados. Os resultados deste estudo indicam que nanolipossomas que contêm a combinação de nisina e extrato de alho têm um alto potencial como antimicrobiano para uso em alimentos. / Food safety is an important issue for the industry and food consumers. In this context, food industry has a technological challenge due to increase of the concern about the use of chemical preservatives and the rising demand for more natural and minimally processed foods. This study aimed to the incorparation of garlic extract into nano estrutures of phosphatidilcholine and evaluation of its antimicrobial activity against Listeria monocytogenes; also, to produce nano liposomes with the combination of nisin and garlic extract and the evaluation of its antimicrobial activity against gram-negative and gram-positive bacteria. As results, were obtained nano liposomes containing garlic extract with 174.6 ± 17.3 nm of hidrodinamic diameter, polidispersivity index of 0.26, zeta potencial of -16,2 mV and with an entrapment efficiency of 47.46%. These nano liposomes decreased in 4 log cycles in viable cell counts in four of the five strains of Listeria spp. tested, later of 10 hours of incubation at 37°C in whole milk. In a second moment, were development nano liposomes containing the combination of nisin/garlic extract, which had a hidrodinamic diameter of 179 nm, zeta potencial of -27.7 mV and an entrapment efficiency of 82% and 90% for nisin and garlic extract, respectively. These nanoliposomes decreased in 5-6 log cycles the viable gram-positive bacteria counts and 3-4 log cycles the viable gram-negative bacteria counts, comparated with the control, when incubated in whole milk at 37°C. The free and encapsulated products (garlic extrac and nisin/garlic extract) showed identical results of antimicrobial activity. Therefore, it can say that the encapsulation process kept the antimicrobial properties of the compounds analyzed. The results of this study indicate that nanoliposomes containing the combination of nisin and garlic extract has a hight potencial as antimicrobial for food use.

O filo Actinobacteria é um importante grupo de bactérias Gram positivas amplamente distribuídas nos ambientes aquáticos e terrestres, são grandes produtores de compostos biologicamente ativos e, portanto, de grande interesse biotecnológico. O gênero Streptomyces destaca-se como maior produtor destes compostos, sendo responsável por cerca de 70% dos antibióticos que hoje utilizamos. A identificação dos organismos deste gênero ainda é um desafio. Durante muitos anos a identificação foi realizada somente com base em características morfológicas e fisiológicas. Atualmente, com o avanço das técnicas moleculares, há um grande número de espécies relatadas em bancos de dados genômicos. Este trabalho tem por objetivo identificar isolados de actinobactérias presentes no Laboratório de Microbiologia Ambiental ICBS/UFRGS com auxílio das técnicas de BOX-PCR, amplamente utilizado em estudos de diversidade dentro deste filo, e URP-PCR. E, além disso, realizar purificação parcial de um composto antimicrobiano efetivo contra bactérias produzido pelo isolado Streptomyces 8S. Os primers URP e BOX1AR produziram distintos padrões de amplificação nos isolados estudados, porém não foi possível investigar as relações de similaridade entre eles. Ainda o sequenciamento da região 16S rDNA não foi eficiente para identificar as espécies. Para a purificação do composto antimicrobiano foi realizada extração líquido-líquido com o solvente acetato de etila, posteriormente cromatografia de gel-filtração (Sephadex G-75) e troca iônica (SP-Sepharose e DEAE-celulose). A atividade antimicrobiana do composto foi recuperada após cada etapa. O composto manteve-se ativo após os ensaios de estabilidade frente à adição de EDTA, enzimas proteolíticas e altas temperaturas. Isto sugere que o composto antimicrobiano não é de origem protéica. Este trabalho sugere novos estudos a partir dos resultados preliminares obtidos, como a amplificação de todo o fragmento 16S rDNA dos isolados de actinobactérias e a investigação do composto antimicrobiano através de cromatografias de alta resolução. / The Actinobacteria phylum is an important group of Gram positive bacteria widely distributed in terrestrial and aquatic environments. They are major producers of biologically active compounds and therefore of great biotechnological interest. The genus Streptomyces stands out as the largest producer of these compounds, accounting for about 70% of the antibiotics that we use today. The identification of these organisms is still a challenge. For many years the identification was carried out only based on morphological and physiology characteristics. Today, with the advance of molecular techniques, there are a large number of species reported in genomics database. This work aims to identify isolates of actinobacterias present in the Laboratório de Microbiologia Ambiental ICBS / UFRGS with the help of BOX-PCR techniques, widely used in diversity studies within this phylum, and URP-PCR. And besides that, performing partial purification of an antimicrobial compound effective against bacteria produced by Streptomyces 8S isolated. The URP and BOX1AR primers produced different amplification patterns in the isolates, but it was not possible to investigate the relationship of similarity between them. Also the sequencing of 16S rDNA was not efficient to identify the species. To purify the antimicrobial compound was carried out liquid-liquid extraction with the solvent ethyl acetate, subsequently chromatography: gel-filtration (Sephadex G-75) and ion exchange (SP-Sepharose and DEAE-cellulose). The antimicrobial in question did not adhere to the SP-Sepharose column, showing that it has negative charge. The antimicrobial activity of the compound was recovered after each step. The compound remained active after the stability tests like the addition of EDTA, proteolytic enzymes and high temperatures. This suggests that the antimicrobial compound is not a protein. This work suggests further studies based on the obtained preliminary results such as the amplification of the entire 16S rDNA of actinobacterias isolated fragment and the investigation of the antimicrobial compound using high resolution chromatography.

Orientador: Susanne Rath / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-10T13:13:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paschoal_JonasAugustoRizzato_D.pdf: 2545620 bytes, checksum: 047e1d72fd2de11da7411d954b23d23f (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Os antimicrobianos são largamente empregados na medicina veterinária, e resíduos destes podem permanecer nos alimentos de origem animal, acima de valores considerados seguros, quando não são respeitadas as boas práticas veterinárias. Este trabalho teve por objetivos: (i) desenvolver e validar métodos analíticos para a determinação de multi-resíduos de quinolonas (enrofloxacina, ciprofloxacina, danofloxacina, sarafloxacina, ácido oxolínico e flumequina) em carne de peixe, usando a cromatografia líquida de alta eficiência associada a detecção por fluorescência (HPLC-FL) e cromatografia líquida associada a espectrometria de massas em tandem por interface de ionização por electrospray e (LC-ESI-MS/MS Q-ToF); (ii) desenvolver e validar métodos analíticos para a determinação de oxitetraciclina (OTC) em ração e carne de tilápias por HPLC-DAD e HPLC-FL, respectivamente e (iii) realizar um ensaio com tilápias (Oreochromis niloticus) para avaliar a depleção da OTC na carne desses peixes. De modo geral, a extração das quinolonas e da OTC da carne de peixes foi conduzida por extração sólido líquido seguida da limpeza do extrato em cartuchos de extração em fase sólida. A separação cromatográfica dos antimicrobianos foi realizada em coluna de fase reversa octadecil híbrida. Os métodos foram validados mediante avaliação dos seguintes parâmetros: faixa linear, linearidade, sensibilidade, seletividade, limites de detecção e quantificação, precisão intra e inter-ensaios e exatidão. Para o método LC-MS/MS foi também avaliado o efeito matriz. Todos os métodos foram considerados adequados aos objetivos propostos neste trabalho. Para avaliar a depleção de OTC na carne de tilápias, os peixes (peso médio de 93 a 115 g) receberam o fármaco via ração na dose de 80 mg OTC/kg peso vivo/dia, por cinco dias consecutivos. A temperatura da água durante o ensaio variou de 16,5 a 24,5 °C. A curva de depleção se ajustou a um modelo exponencial de primeira ordem. O tempo de meia vida de eliminação foi de 2,5 dias e o período de carência estimado foi de 5 dias / Abstract: Antimicrobials are widely employed in veterinary medicine, and their residues could remain in food of animal origin above values considered safe if good veterinary practices are not followed. The aim of this work is to address (i) the development and validation of analytical methods using high performance liquid chromatography with fluorescence detection (HPLC-FL) and liquid chromatography electrospray ionization tandem mass spectrometry (LC-ESI-MS/MS Q-Tof) for the determination of multi residues of quinolones (enrofloxacin, ciprofloxacin, danofloxacin, sarafloxacin, oxolinic acid and flumequine) in fish; (ii) the development and validation of analytical methods for the determination of oxytetracycline (OTC) in fish feed and tilapia fish fillets using HPLC-DAD and HPLC-FL, respectively, and (iii) the study of tilapias (Oreochromis niloticus) in order to evaluate the depletion of OTC from the fish fillet. In general, the extraction of the quinolones and OTC from the fish matrix was conducted by solid-liquid extraction followed by clean-up on solid phase extraction cartridges. The antimicrobials chromatographic separation was performed on a reverse phase octadecyl hybrid column. The methods were validated through the following parameters: linear range, linearity, sensitivity, selectivity, detection limit, quantitation limit, intra- and inter-assay precision and accuracy. For the LC-MS/MS method, the matrix effect was also evaluated. All methods were adequate to the proposed objectives. In order to evaluate the depletion of OTC in the tilapia fillets, the fish (weight range 93 ¿ 115 g) were given medicated feed in a concentration of 80 mg OTC/kg body weight/day for five consecutive days. The water temperature was between 16.5 to 24.5 °C during the treatment. The depletion curve was fitted to an exponential first order model. The elimination half-life was 2.5 days and the withdrawal period was estimated as five days / Doutorado / Quimica Analitica / Doutor em Ciências

Por sua ubiquidade na matéria fecal, a Escherichia coli é amplamente utilizada como um indicador sanitário, entretanto, a E.coli pode apresentar a capacidade de persistir e se multiplicar em ambientes distintos, fora de seu hábitat primário. A determinação filogenética é ferramenta auxiliar na melhor caracterização destas cepas cosmopolitas. Membros da microbiota comensal, como a E. coli, sofrem pressão seletiva pela exposição a antimicrobianos, resultando no aumento da resistência nestas populações. Pela importância da utilização da E. coli como um indicador sanitário, somada a disseminação de cepas resistentes desta espécie nos diversos ambientes, este estudo visou realizar a determinação filogenética de isolados de E.coli multirresistentes provenientes de amostras ambientais, animais e humanas. A susceptibilidade foi avaliada frente a 15 antimicrobianos, em 157 isolados de E. coli (32 de humanos, 44 de suínos, 34 de aves e 47 do ambiente). A resistência foi maior a ampicilina e tetraciclina (96%), ao sulfametoxazol – trimetoprim (70%) e ao clorafenicol (67,5%), entre todos os isolados. Os isolados de origem animal e humana foram os mais associados a um perfil de multirresistência mais amplo e a produção de ESBL. Na determinação filogenética, baseada no método de Clermont et. al. (2000), os filogrupos B1 (49%) e A (34%) foram os mais prevalentes, tendo D (11%) e B2 (6%) menor representatividade. Os filogrupos A e B1 também foram os mais relacionados a multirresistência. Os resultados indicaram que os isolados deste estudo são associados a microbiota comensal de humanos e animais e que estas populações sofreram exposição a antimicrobianos de amplo espectro. Tal fato pode implicar em alterações destas comunidades microbianas, possibilitando a disseminação de microrganismos potencialmente virulentos em hábitats secundários. / Due to its ubiquity in fecal matter, Escherichia coli is widely used as a microbiological indicator of fecal contamination. However, E. coli may develop the capacity to persist and multiply in distinct environments, outside of its primary habitat. Phylogenetic identification is an auxiliary tool in the characterization of these cosmopolitan strains. Members of the commensal microbiota, like E. coli suffer selective pressure from exposition to antimicrobials, resulting in resistance increases in these populations. Due to the importance of E. coli as a bioindicator of fecal contamination and to the dissemination of resistant strains of this species in the environment, this work aimed to identify phylogenetic groups in multiresistant isolates of E. coli, from environmental, animal and human samples. The susceptibility was assessed against 15 antimicrobials, in 157 isolates of E. coli (32 from humans, 44 from swines, 34 from birds and 47 from the environment). The resistance was higher to ampicillin and tetracycline (96%), sulfamethoxazole - trimethoprim (70%) and chloramphenicol (67.5%). Isolates of animal and human origin were associated to a wider multiresistance profile and higher ESBLs production. In the phylogenetic identification, based on the method proposed by Clermont et al. (2000), phylogroups B1 (49%) and A (34%) were the majority, while D (11%) and B2 (6%) had less representation. Phylogroups A and B1 had also more significant relation to multiresistance. Results indicated that the isolates in this study were associated to the commensal microbiota of humans and animals and that these populations were exposed to broad-spectrum antimicrobials. This can cause changes in these microbial communities, which may result in the dissemination of potentially virulent organisms in secondary habitats.

O estudo resultou em dois artigos principais relacionados ao aborto suíno de origem viral e outros dois relatos de caso de aborto suíno de origem bacteriana. O primeiro artigo retrata a análise de 117 casos de aborto durante 1,5 anos. A causa de aborto foi identificada em 25,5% dos casos. Infecção por parvovírus suíno foi observada em 16,2% dos fetos. Aborto bacteriano foi diagnosticado em 5,1% dos casos (6/117), seguido por infecção de PCV2 (3,4%) e associações (2,5%). No segundo artigo, casos de aborto e natimortalidade suína por co-infecção entre circovírus suíno tipo 2 (PCV2) e parvovírus suíno (PPV) foram descritos, onde sete de 121 (5,78%) fetos suínos abortados apresentavam lesões compatíveis com origem viral e foram positivos pelas técnicas de imunoistoquímica e PCR para PCV2. Além disso, três (2,47%) desses sete casos também foram confirmados como co-infectados com PPV através da PCR. Dilatação ventricular, áreas pálidas no miocárdio e edema de mesocólon foram as alterações macroscópicas observadas. Lesões microscópicas incluíram miocardite não supurativa, necrose e fibrose cardíacas, focos de mineralização e corpúsculos de inclusão em cardiomiócitos e pneumonia intersticial mononuclear. O terceiro artigo retrata lesões de pele observadas em um feto suíno abortado devido à infecção por Erysipelothrix rhusiopathiae, enfatizando seus aspectos macroscópicos, histopatológicos e microbiológicos. No quarto artigo é descrito um caso de aborto suíno por Escherichia coli O157: H7 em que dois fetos analisados apresentavam lesões macroscópicas caracterizadas por líquido e fibrina na cavidade torácica e abdominal e petéquias no pericárdio. Microscopicamente foram observadas broncopneumonia supurativa e pleurite supurativa foram observadas. O teste de imunoistoquímica foi positivo para E. coli O157: H7. / This study resulted in two main articles on viral swine abortion and two articles describing bacterial swine abortion. The first article 117 cases of swine abortion were analyzed during 1.5 year period. The cause of swine abortion was identified in 25.5% of cases. Parvovirus infection was observed in 16.2% of fetuses. Bacterial infection accounted for 5.1% (6/117) followed by PCV2 infection 3.4% (4/117) and associations 2.5% (3/117). In the second article swine abortion and stillbirth cases by co-infection between porcine circovirus type 2 (PCV2) and porcine parvovirus was describe in which 7/121 (5.78%) swine fetuses had lesions consistent with viral cause and showed both positive anti-PCV2 immunostaining as well as PCV2-PCR. In samples from 3 (2.47 per cent) of these 7 fetuses, co-infection with PPV was confirmed by Nested-PCR. Ventricular dilatation, myocardial pale areas, and mesocolic edema were the gross lesions observed. Microscopic lesions included non-suppurative myocarditis, myocardial necrosis and fibrosis, mineralization foci and intranuclear inclusion bodies in cardiomyocytes, and interstitial mononuclear pneumonia. In the third article describes skin lesions in an aborted swine fetus due to Erysipelothrix rhusiopathiae with special emphasis on macroscopic, histopathology and microbiology aspects. In the forth article a case about swine abortion due to Escherichia coli O157:H7 is described, in which two fetuses analyzed showed macroscopic lesions characterized by fluid with fibrin exudation in the corporal cavities and petechial hemorrhages in the pericardium. Microscopically, these lesions were characterized by focally-extensive suppurative pleuritis and fibrin-purulent interstitial bronchopneumonia in which were abundant gram-negative rods with morphology consistent with Escherichia coli. The immunohistochemistry test was positive for E. coli O157:H7.

Óleos essenciais são produtos naturais produzidos no metabolismo secundário de certos vegetais, com propriedades, entre outras, de defesa contra agentes nocivos. No sul do Brasil, destacam-se duas espécies da família Asteraceae, Heterothalamus alienus e Heterothalamus psiadioides, cujas substâncias bioativas ainda são pouco estudadas quanto as suas propriedades. O objetivo do estudo foi avaliar a ação antimicrobiana desses óleos essenciais e a atividade antibiofilme do óleo essencial de H. psiadioides. Os óleos foram obtidos a partir da hidrodestilação das folhas e caracterizados por cromatografia em fase gasosa acoplada a espectrometria de massas. O espectro de ação foi avaliado contra bactérias e fungos. A concentração inibitória mínima (CIM) foi determinada para cocos Gram-positivos resistentes a agentes antimicrobianos, como Enterococcus faecalis resistente a vancomicina (ERV), e a ação antibiofilme foi avaliada tanto pela interferência dos componentes dos óleos sobre a aderência microbiana quanto por sua ação sobre biofilme estabelecido. Os óleos essenciais de Heterothalamus sp. são constituídos por compostos terpênicos, sendo o β-pineno o componente majoritário. Ambos foram eficazes contra as bactérias Gram-positivas e fungos avaliados, porém não inibiram as bactérias Gram-negativas. A CIM variou entre 4 – 16%, sendo que isolados ERV foram também inibidos. A ação do óleo essencial de H. psiadioides diminuiu a aderência microbiana e, em menor escala, causou disrupção do biofilme pré-formado; no entanto, não foi verificada completa inibição do biofilme. Os resultados fornecem informações importantes sobre de ação antimicrobiana desses óleos essenciais e indicam o uso potencial dessas espécies como medicinais. / Essential oils are natural substances produced on secondary metabolism of some plants, with properties, among others, of defense against harmful agents. In southern Brazil, Heterothalamus alienus and Heterothalamus psiadioides (Asteraceae) are recognized by bioactive substances that are still little studied by their properties. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of essential oils from Heterothalamus sp. and the antibiofilm action of H. psiadioides essential oils. The oils were obtained from the hydrodistillation of the leaves and characterized by gas chromatography coupled mass spectrometry. The spectrum of action was determinate against bacteria and fungi. The minimal inhibitory concentration (MIC) was evaluated for Gram-positive cocci with antimicrobial resistance, as vancomycin-resistent Enterococcus faecalis (VRE) and the antibiofim action was assessed both by interference of the components of the oils on microbial adherence and by its action on established biofilm. The essential oils consist in terpene compounds, and the β-pinene was the major component. The essential oils were effective against Gram-positive bacteria and fungi, but did not inhibit Gram-negative bacteria. The MIC range 4 to 16% and the VRE isolates were also inhibit. The action of essential oils reduced microbial adherence and disrupted de pre-formed biofilm. However, the biofilm was not completely inhibited. These findings provide important information about the antimicrobial activity of these essential oils and indicated the potential use of this species as medicinal.