Orientador: Hérida Regina Nunes Salgado / Banca: Magali Benjamim de Araújo / Banca: Selma Gutierrez Antonio / Banca: Marlus Chorilli / Banca: Jean Leandro dos Santos / Resumo: O surgimento de micro-organismos resistentes a um grande número de antimicrobianos clinicamente aprovados vem sendo cada vez mais frequente, o que limita as opções para o tratamento das infecções bacterianas. Como estratégia, fármacos com elevadas atividades antimicrobianas encontram-se em evidência. Destaca-se uma classe de antimicrobianos, a das cefalosporinas, tendo como quarta geração a cefepima (CEF), um produto semi-sintético que apresenta atividade contra várias bactérias Gram-positivas (ex. Staphylococcus aureus sensível à oxacilina) e Gram-negativas (ex. Pseudomonas aeruginosa) aeróbias. Seu mecanismo de ação é similar ao dos outros β-lactâmicos, ou seja, inibe a síntese da parede celular bacteriana, ligando-se a uma ou mais proteínas de ligação das penicilinas (penicillin-binding proteins - PBPs). Nesse contexto, pesquisas inovadoras envolvendo métodos analíticos são de fundamental importância e altamente relevantes para otimizar sua análise na indústria e garantir a qualidade do produto já comercializado. Análises qualitativas foram utilizadas e desenvolvidas durante o trabalho, a fim de promover a identificação do fármaco. Nesta pesquisa também foram desenvolvidos e validados métodos para quantificação de CEF em pó liofilizado para solução injetável. Dentre eles, o ensaio microbiológico pelo método turbidimétrico foi validado utilizando a cepa Staphylococcus aureus ATCC 6538, sendo linear na faixa de 36,0 a 81,0 μg/mL, onde apresentou potência de 102,46% e exatidã... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The emergence of resistant microorganisms to a large number of clinically approved antimicrobials has been increasingly used, which limits the options for the treatment of bacterial infections. As a strategy, drugs with high antimicrobial activities are in evidence. Stands out a class of antimicrobial, the cephalosporins, having as fourth generation cefepime (CEF), a semi- synthetic product which has activity against various Gram-positive bacteria (e.g. oxacillin resistant Staphylococcus aureus) and Gram-negative (e.g. Pseudomonas aeruginosa) aerobic. Its mechanism of action is similar to other β-lactams, that mean, inhibits bacterial cell wall synthesis by binding to one or more penicillin-binding proteins - PBPs. In this context, innovative research involving analytical methods present fundamental importance and it is highly relevant to optimize its analysis in routine pharmaceutical industry and ensure quality of product already marketed. Qualitative analyzes were developed and used during work in order to promote the identification of the drug. In this research were also developed and validated methods for the quantification of CEF in lyophilised powder for solution for injection. Among them, microbiological test by turbidimetric method was validated using Staphylococcus aureus ATCC 6538 strain, being linear in the range from 36.0 to 81.0 μg.mL-1, which has potency of 102.46% and 99.92% accuracy... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Luciane Dias de Oliveira / Banca: Silvana Soléo Ferreira dos Santos / Banca: Graziella Nuernberg Back-Brito / Banca: Luana Marotta Reis de Vasconcellos / Banca: Jônatas Rafael de Oliveira / Resumo: A resistência microbiana aos antibióticos disponíveis é preocupação constante, devido à dificuldade no tratamento de infecções causadas por cepas resistentes, em decorrência do uso indiscriminado de antimicrobianos. Assim, a busca por terapias antimicrobianas alternativas tem sido crescente e necessária, sendo a fitoterapia umas das opções de escolha. O objetivo do presente estudo foi analisar a atividade antibacteriana de extratos glicólicos de Achyrocline satureioides (macela), Cynara scolymus (alcachofra), Hamamelis virginiana (hamamelis) e Persea americana (abacateiro), pelos períodos de 5 min e 24 h de exposição sobre bactérias anaeróbias Fusobacterium nucleatum subsp. nucleatum, Parvimonas micra, Porphyromonas endodontalis e Porphyromonas gingivalis, em culturas planctônica e biofilmes. As bactérias armazenadas a -80ºC foram ativadas em caldo Brucella enriquecido (hemina 1%, menadiona 1% e sangue de carneiro desfibrinado 5%) e incubadas em câmara de anaerobiose por 48 h a 37ºC por sete dias. A partir de culturas puras, o teste de microdiluição em caldo foi conduzido em microplacas por meio de suspensões bacterianas padronizadas em solução fisiológica estéril (NaCl 0,9%) e diluições dos extratos em caldo, sendo as placas incubadas por 48 h a 37ºC em anaerobiose. Alíquotas de cada poço foram semeadas em ágar Brucella enriquecido. Após incubação, a Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM) foram determinadas. As concentrações efetivas de ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Microbial resistance to antibiotics available is constant concern, due to the difficulty in treating infections caused by resistant strains as a result of the indiscriminate use of antimicrobials. Thus, the search for antimicrobial alternative therapies has been growing and necessary, being one option the herbal medicine. The objective of the present study was to analyze the antibacterial activity to Achyrocline satureioides glycolic extracts (macela), Cynara scolymus (artichoke), Hamamelis virginiana (Witch-Hazel) and Persea americana (avocado), for periods of 5 min and 24 h from exhibition on anaerobic bacteria Fusobacterium nucleatum subsp. nucleatum, Parvimonas micra, Porphyromonas gingivalis and Porphyromonas endodontalis in planktonic communities and biofilms. Bacteria stored at -80°C have been activated in Brucella broth enriched (hemin 1%, menadione 1% and defibrinated sheep blood 5%) and incubated in anaerobiose chamber for 48 h at 37° C for seven days. From pure cultures, the microdiluição test in broth was conducted in microplates through standardized bacterial suspensions in sterile saline solution (NaCl 0.9%) and dilution of the extracts in broth, being incubated plates for 48 h at 37° C in anaerobiosis. Aliquots of each well were sown in Brucella agar enriched. After incubation, the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) were determined. Effective concentrations of each extract were applied on the biofilms of each spe... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Kátia Cristina Kuppper / Coorientador: Eduardo da Silva Martins / Banca: Flavia Rodrigues Alves Patricio / Banca: Margarete Camargo / Resumo: A cultura da laranja no Brasil é afetada por várias doenças, como a gomose, causada por Phytophtora nicotianae Breda de Haan (synonymous whit P. parasítica Dast.), cujo controle é comumente realizado com aplicações de fungicidas e medidas de exclusão. Porém, devido aos custos financeiros e problemas ambientais ocasionados pelo uso intenso destas aplicações, faz-se necessário a busca por métodos alternativos de controle. Este trabalho teve por objetivo avaliar 50 isolados de Trichoderma spp. como antagonista de P. nicotianae, sendo que os isolados foram avaliados, através da produção de compostos antimicrobianos por meio destes microrganismos, além da realização de um bioensaio com plântulas de alfafa. No cultivo pareado observou-se que todos os isolados inibiram o crescimento micelial do fitopatógeno. Na produção de compostos antimicrobianos, 41 isolados produziram compostos voláteis utilizando dextrose como fonte de carbono. No entanto, em estudos posteriores, foi verificado que a utilização de sacarose ou maltose como fontes de carbono, aumentou a produção destes compostos. Sete isolados de Trichoderma produziram compostos termoestáveis e 14 produziram compostos antimicrobianos livres de células do antagônico. No bioensaio com plântulas de alfafa foi observado que quatro isolados de Trichoderma inibiram a formação de esporângios e de micélios do fitopatógeno. Diante dos resultados obtidos, concluiu-se que as avaliações in vitro com relação à produção de compostos antimicrobianos pelos isolados de Trichoderma e o bioensaio com plântulas de alfafa mostraram capacidade para selecionar isolados com potencial para o controle de P. nicotianae. Os isolados TB12, TB14, TB28 e TB 30 foram os que proporcionaram maior controle da doença / Abstract: - Orange crops in the Brazil are affected by various diseases such as gummosis caused by Phytophtora nicotianae Breda de Haan (synonymous whit P. parasítica Dast.), which is controlled by chemical fungicides. However, the high costs and environmental problems caused by the intensive use of these fungicides have led to the search for alternative methods of control. The objective of this study was to evaluate the antagonistic activity of 50 Trichoderma spp. isolates against P. nicotianae by the production of antimicrobial compounds and an alfalfa seedling bioassay. The paired culture showed that all isolates tested inhibited the mycelial growth of the pathogen. In the production of antimicrobial compounds, 41 isolates produced volatile compounds using dextrose as carbon source; however, further assays showed that the use of sucrose or maltose as carbon source increases the production of these compounds. Seven isolates of Trichoderma spp. produced thermostable compounds and 14 isolates produced cell-free culture antimicrobial compounds of the antagonist. In the alfalfa seedling bioassay, four isolates of Trichoderma spp. inhibited the formation of sporangia and mycelia growth. The evaluation in vitro concerning to the antimicrobial compound production by the Trichoderma spp. isolates and the alfalfa seedling bioassay both were able to select biocontrol agents to control of P. nicotianae. The Trichoderma spp. isolates, TB12, TB14, TB28, and TB30 presented the best disease control / Mestre

Orientador: Henrique Ferreira / Resumo: A citricultura constitui uma importante atividade econômica no país, com o Brasil sendo o maior produtor de laranja doce no mundo. A produção é ameaçada pelo cancro cítrico asiático, uma doença severa que traz grande prejuízo e leva a necessidade do controle de seu agente causador, a bactéria Gram-negativa Xanthomonas citri subsp. citri (Xac). Atualmente não há nenhuma medida curativa para os pomares e a opção é o manejo integrado para evitar o avanço da doença. O único controle químico utilizado no presente é a aplicação de compostos a base de cobre, os quais trazem riscos de contaminação ao solo e de mananciais de água. Desta forma, estratégias alternativas de controle são essenciais para manter a citricultura brasileira competitiva no mercado. Compostos derivados do metabolismo vegetal tais como os flavonoides, ácido fenólicos e terpenóides são classes de substâncias com um grande potencial antimicrobiano. Nesse contexto, foi avaliada a ação anti-Xac de compostos híbridos de chalcona, ésteres do ácido vanílico e os monoterpenóides Timol e Carvacrol. No caso dos híbridos de pirazinamida-chalconas, não houve atividade antimicrobiana constatada contra Xac. Para os vanilatos, os compostos de cadeia lateral de 5 até 8 carbonos apresentaram ação anti-Xac, com atividade bacteriostática. Timol e Carvacrol mostraram atividade anti-Xac, uma vez que foram bactericidas a 200 μg.mL-1. Estes terpenóides foram avaliados quanto ao seu modo de ação e apresentaram atividade na permeabilizaç... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Citriculture has great importance to Brazil`s economy, with the country occupying the post of the largest sweet orange producer in the world. This production is threatened by Asiatic citrus canker, a crop disease which causes great losses in production and fruit quality. Because of these problems, there is a need to manage its causal agent – the Gram-negative bacteria Xanthomonas citri subps. citri (Xac). Nowadays there are no curative measure to surpass the disease in the orchards and the only option is the integrated management to avoid its spread. The only chemical control used in this strategy is based on copper, which is associated with soil and water springs contamination. For that reason, new alternative control strategies become essential to maintain the Brazilian citriculture competitive in the market. Compounds derived from plants metabolism such as flavonoids, phenolic acids and terpenoids are interesting substances with antimicrobial proprieties. In this context, we evaluated the anti-Xac action of hybrid chalcone compounds, vanillic acid esters and monoterpenoids (Thymol and Carvacrol). The pyrazinamide-chalcone hybrids showed no antimicrobial activity against Xac. In the case of the vanillic acid esters, synthetic compounds with a side chain structure composed of 5 to 8 carbons presented an bacteriostatic anti-Xac activity. Compounds Thymol and Carvacrol also showed anti-Xac action, once this compounds were bactericidal at 200 μg.mL-1. These terpenoids were eval... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Fabiana Pilarski / Banca: Jonas Augusto Rizzato Paschoal / Banca: Luiz Augusto do Amaral / Resumo: Os surtos de bacterioses na piscicultura são imprevisíveis, por essa razão é necessário dispor de opções terapêuticas eficazes para reduzir a morbidade e mortalidade. Para que a terapia seja eficaz, a escolha do antimicrobiano deve se basear nas informações farmacocinéticas do fármaco no hospedeiro, nas condições de produção e na sensibilidade do patógeno. No Brasil, atualmente só dois antimicrobianos são legalizados para uso na aquicultura, a oxitetraciclina (OTC) e o florfenicol (FFC), os quais muitas vezes são ineficazes. Destes, somente o FFC é autorizado para tratar bacterioses em tilápia-do-Nilo, a espécie mais produzida no país. Este cenário nos levou a investigar a atividade antimicrobiana do tianfenicol (TAF) contra as principais bactérias patogênicas de peixes cultivados no Brasil. Foi determinada a concentração inibitória mínima (CIM) e a concentração bactericida mínima (CBM) do TAF para 49 cepas isoladas de surtos de bacteriose ocorridos no período 2011 a 2017 em três estados. Adicionalmente, avaliou-se a atividade antimicrobiana do TAF (G1: 10 mg/kg), do FFC (G2: 10 mg/kg) e da combinação do TAF com o FFC (G3: TAF+FFC: 5 + 2,5 mg/kg e G4: 2,5 + 1,25 mg/kg) no tratamento de aeromonose em tilápia-do-Nilo experimentalmente infectadas com Aeromonas hydrophila. Como resultado do estudo in vitro, mais da metade das cepas testadas foram sensíveis ao TAF, sendo que os gêneros Aeromonas, Lactococcus e Vibrio foram os mais sensíveis. No estudo in vivo, o TAF foi eficaz no ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Outbreaks of bacterial diseases in fish farm are unpredictable; therefore, it is necessary to have effective therapeutic options to reduce the morbidity and mortality. For effective therapy, the anticipated pharmacokinetics and antibacterial activity of the antimicrobial in the target fish species under the given conditions must be considered before decide which antimicrobial to use. In Brazil, only two antimicrobials are approved for use in aquaculture, oxytetracycline (OTC) and florfenicol (FFC), which are often innefective. Moreover, only FFC is approved for use to treat bacterial diseases in Nile tilapia, the main specie in Brazil. This scenario led us to investigate the antibacterial activity o thiamphenicol (TAP) against the main bacteria infecting fishes in Brazil. Minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) of TAP were determined for 49 strains isolated from diseases outbreaks registered during 2011 - 2017 in three States. Additionally the antibacterial activity of TAP (10 mg kg-1), FFC (10 mg kg-1) and TAF combined with FFC (G3: TAF+FFC: 5 + 2.5 mg kg-1 e G4: 2.5 + 1.25 mg kg-1) against Aeromonas hydrophila in Nile tilapia aeromoniosi models were evaluated. More than half of the tested strains were in vitro sensitive to TAP, being TAP highly potent against Aeromonas, Lactococcus, and Vibrio. The in vivo therapy with TAP alone and combined with FFC was effective to treat aeromoniosis in Nile tilapia. Groups G1, G2, G3, G4 and co... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: José Moacir Marin / Banca: Maria Cristina Monteiro de Souza Gugelmin / Banca: Maria de Fátima Martins / Banca: Janete Aparecida Desidério / Banca: Everlon Cid Rigobelo / Resumo: Animais de estimação e humanos têm contato muito próximo, o que favorece o intercâmbio de micro-organismos de suas microbiotas, como, por exemplo, de Escherichia coli (E. coli), que é prevalente como simbionte na microbiota de humanos e animais. Paradoxalmente, também é reconhecida como micro-organismo com alto impacto clínico, devido à elevada ocorrência de cepas resistentes às múltiplas drogas. O alto consumo de antimicrobianos, observado tanto na medicina humana, quanto na veterinária, representa forte pressão de seleção também em bactérias da microbiota. Desta forma, o presente estudo investiga a prevalência da resistência antimicrobiana e analisa a filogenia de cepas de E. coli isoladas de abdômen/dorso, boca, genitália externa e reto de gatos saudáveis, relacionando-as com sua população de origem. A proximidade da residência do tutor do gato em relação a locais onde o uso de agentes antimicrobianos é rotineiro foi usada como critério para a formação de três populações, constituídas da seguinte forma: por animais cujos tutores residem próximos a hospitais ou postos de saúde humana (CSH); próximos às clínicas veterinárias (CSV) e sem proximidade com esses locais (SMP). Foram coletadas 325 amostras a partir de 65 gatos, das quais foram obtidas 231 cepas de E. coli, provenientes de todos os sítios corporais pesquisados. O reto originou a maioria dos isolados susceptíveis. A população CSH exibiu maiores frequências de resistência à ampicilina, cefazolina e cefalotina, assim como a maioria dos fenótipos de resistência às múltiplas drogas (MDR), a população CSV foi mais resistente ao cotrimoxazol. Maior similaridade de resistência foi observada entre cepas isoladas do reto e genitália externa e, entre as isoladas do abdômen/dorso e boca. Fenótipo ESBL (Extended Spectrum Betalactamases - Beta lactamases de espectro ampliado) ocorreu em duas cepas (0,88%). Classificação filogenética... / Abstract: Pets and humans have close contact, allowing the exchange of micro-organisms of their microbiota as Escherichia coli (E. coli), which is prevalent as a simbionte of the human and animal microbiota. Paradoxally, it is also recognized as a high clinic impact, due to a high ocurrence of multiple drugs resintant strains. The high usage of antimicrobials agents, observed in the human medicine, as well as in the veterinary medicine, represents a high selection pressure in microbiota bacteria. This way, the present study investigates the prevalence of the antimicrobian resistance and analizes the phylogenyic origin of E. coli isolated from abdomen/back, mouth, outer genitalia and rectum of healthy cats, relating these data with the original population. The proximity of the cat tutor 's residence in relation to places where the use of antimicrobial agents is routine was used as a criterion for the formation of three groups such as follows:constituted by animals that live close to hospitals and Health Human Care (CSH); close to veterinary clinics (CSV) and without proximity to these places (SMP). 325 samples were collected from 65 cats, which were obtained 231 cepas of E. coli originated from all the researched body sites. The rectum originated most of the susceptible isolated. The CSH population showed greater resistance frequency to ampicillin, cefazoline and cephalotin as well as most of multiple resistance drugs (MDR) phenotype, the CSV population was more resistant to the cotrimoxazol. A greater resistance similarity was observed in isolated cepas of the rectum and outer genitalia, and between the abdomen/back and mouth isolates. The phenotype ESBL (Extended Spectrum Betalactamase) ocurred in two strains (0,88%). The phylogenetic classification, performed by Triplex PCR, in 191 strains, showed the presence of all the researched phylogenetic groups (A, B1, B2, and D), the majority originated from group A (49,7%) in all the populations ... / Doutor

Orientador: Mary Rosa Rodrigues de Marchi / Banca: Maria Lucia Ribeiro / Banca: Manoel Lima de Menezes / Banca: Eny Maria Vieira / Banca: Valdemar Luiz Tornisielo / Resumo: Antimicrobianos veterinários são muito utilizados na criação de frangos de corte para prevenção de doenças e promoção de crescimento. Estima-se que para alguns deles, até 90% da dose administrada seja eliminada em sua forma não metabolizada ou como metabólitos ativos. Portanto, elevadas quantidades destas substâncias são lançadas no meio ambiente, cujos impactos causados por sua dispersão podem alcançar grandes proporções, contaminando águas superficiais e subterrâneas, ar, solos, plantas, ameaçando organismos terrestres e aquáticos e a disseminação de bactérias resistentes. Entretanto, dados relativos sobre a ocorrência e comportamentos de antimicrobianos veterinários no meio ambiente são muito escassos no Brasil. Portanto, os objetivos deste trabalho foram: (i) avaliar a adsorção de nove antimicrobianos veterinários (amoxicilina, lincomicina, tilosina, trimetropina, sulfadiazina, oxitetraciclina, ciprofloxacina, enrofloxacina e norfloxacina) em solo e turfa do Estado de São Paulo e em cama de frango associada ao solo; (ii) propor modelos de adsorção que melhor se ajustam a este fenômeno; (iii) realizar previsão do potencial de contaminação de águas superficiais e subterrâneas. A determinação dos compostos foi realizada utilizando a cromatografia líquida de alta eficiência com detectores de ultravioleta e fluorescência, apresentando resolução cromatográfica e limites de quantificação adequados. Para os antimicrobianos determinados individualmente no solo, o modelo de adsorção linear foi mais satisfatório com coeficientes de correlação situados entre 0,844 e 0,983. Embora os modelos de adsorção aplicados não tenham sido adequados ao processo de adsorção dos antimicrobianos em mistura, tanto no solo quanto na cama de frango associada ao solo, foi possível indicar que estes fatores provocam diminuição da adsorção para a maioria dos antimicrobianos estudados em todos os níveis de... / Abstract: Veterinary antimicrobials are widely used in the poultry production for disease prevention and growth promotion. It is estimated that for some of them, up to 90 % of the administered dose is eliminated in its unmetabolized form or as active metabolites. Therefore, large amounts of these substances are released into the environment, whose impacts caused by its dispersion can reach large proportions, contaminating surface and groundwater, air, soil, plants, threatening aquatic and terrestrial organisms and spreading of resistant bacteria. However, data about the occurrence and behavior of veterinary antimicrobials in the environment are very limited in Brazil. Therefore, the objectives of this work were: (i) to evaluate the adsorption nine veterinary antimicrobials (amoxicillin, lincomycin, tylosin, trimethoprim, sulfadiazine, oxytetracycline, ciprofloxacin, enrofloxacin, and norfloxacin) in soil and peat of the State of São Paulo using different treatments and in poultry litter associated to soil; (ii) to propose adsorption models that best represents this process; (iii) to estimate the potential for contamination of surface and groundwater using the normalized adsorption coefficients (Koc) obtained in this study. The determination of the compounds was performed using high performance liquid chromatography with ultraviolet and fluorescence detectors, with good chromatographic resolution and suitable quantification limits. For antimicrobials analyzed individually in soil, the adsorption linear model was satisfactory with correlation coefficients ranging between 0,844 and 0,983. Although the adsorption models applied were not appropriate for the mixture antimicrobials adsorption for the soil and soil associated to poultry litter, these factors caused a decrease of adsorption for most antimicrobials studied in all concentration levels evaluated, except for amoxicillin that showed opposite effect. The calcination of soil and peat was... / Doutor

Os produtos naturais bioativos são fontes em potencial para o tratamento de diversas doenças associadas a altos índices de mortalidade na população mundial como, por exemplo, os cânceres e doenças infecciosas. Alguns fenilpropanoides, em especial o eugenol, o qual está presente nos óleos essenciais de diversas espécies vegetais, demonstram atividades relevantes como antimicrobianos e antiparasitários. Além disso, há diversos relatos científicos que demonstram o potencial antiproliferativo do eugenol frente a linhagens distintas de células tumorais. Da mesma forma, diversas substâncias que contêm o grupo funcional sulfonamida foram citadas como bioativa, em vista de apresentarem efeitos biológicos importantes, como antibacteriano, antifúngico, antiparasitário e antitumoral. Buscando a obtenção de novos produtos bioativos e em vista das ações biológicas relacionadas ao uso do eugenol e de sulfonamidas, empregou-se nesse trabalho a estratégia de hibridação molecular para o planejamento de substâncias inéditas que contemplassem resíduos estruturais do eugenol ou diidroeugenol e uma subunidade sulfonamídica. As oito substâncias finais propostas foram obtidas com sucesso a partir da condensação do cloreto de p-acetamidobenzenossulfonila com derivados orto e meta-aminofenóis, originados por sua vez de derivados nitrados do eugenol ou de seu análogo, diidroeugenol. Os produtos tiveram suas identidades confirmadas por meio de espectroscopia no infravermelho, de ressonância magnética nuclear e de massas. Na sequência, foram avaliados como antimicrobianos contra bactérias Gram-positivas (Staphylococcus aureus, Bacillus cereus e Enterococcus faecalis) e Gram-negativas (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa e Salmonella typhimurium) e contra espécies patogênicas ou oportunistas de Candida (C. albicans, C. tropicalis, C. krusei, C. glabrata e C. parapsilosis). Avaliou-se, ainda, a atividade anti-Trypanosoma cruzi em formas epimastigotas do parasito e também a atividade antiproliferativa contra linhagens celulares derivadas de cânceres humanos (A549, HepG2, HT144 e MCF7). Três derivados sulfonamídicos (7a, 7b e 7c) apresentaram atividade antibacteriana com valores de CI50 na faixa de 299,40 a 297,62 μM, frente Bacillus cereus e Staphylococcus aureus. Seis derivados sulfonamídicos (6a, 6c, 7a, 7b, 7c e 7d) exibiram atividade antifúngica com valores de CI50 entre 664,89 a 748,50 μM, frente C. albicans, C. krusei, C. glabrata e C. parapsilosis. Na avaliação da atividade tripanocida, todos os oito derivados sulfonamídicos mostraram-se ativos com valores de CI50 na faixa de 217,26 a 420,21 μM. Já na avaliação da atividade antiproliferativa, apenas três derivados (6b, 6d e 7a) exibiram atividade promissora frente a linhagem de adenocarcinoma de mama (MCF7) com valores de CI50 entre 116,60 a 164,90 μM. Mesmo que os valores de CI50 encontrados nestes ensaios biológicos sejam maiores que aqueles obtidos para os fármacos referência, é importante destacar que, em alguns, casos as substâncias híbridas propostas resultaram em produtos menos tóxicos e com maior atividade que seus precursores fenilpropanoides. Por conseguinte, representam moléculas inéditas passíveis de alteração estrutural para otimização de atividade. / Bioactive natural products are potential sources for the treatment of various diseases associated with high mortality rates in the world population, such as cancers and infectious diseases. Some phenylpropanoids, especially eugenol, which are present in the essential oils of several plant species, demonstrate relevant activities as antimicrobials and antiparasitics. In addition, there are several scientific reports that demonstrate the antiproliferative potential of eugenol against distinct lines of tumor cells. Likewise, several substances containing the sulfonamide functional group have been cited as responsible for important biological effects such as antibacterial, antifungal, antiparasitic and anticancer. In order to obtain new bioactive products and in view of the biological actions related to the use of eugenol and sulfonamides, it was proposed herein the use of molecular hybridization strategy in the design of new substances that contained structural motifs of eugenol or dihydroeugenol and a sulfonamide subunit. The eight final proposed substances were successfully obtained from the condensation of p-acetamidobenzenesulfonyl chloride with ortho and meta-aminophenols derivatives, which came from nitrated derivatives of eugenol or dihydroeugenol. The products checked by infrared spectroscopy, nuclear magnetic resonance and mass spectroscopy. They were evaluated as antimicrobials against Gram-positive (Staphylococcus aureus, Bacillus cereus and Enterococcus faecalis) and Gram-negative bacteria (Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa and Salmonella typhimurium) and against pathogenic or opportunistic species of Candida (C. albicans, C. tropicalis, C. krusei, C. glabrata and C. parapsilosis). Anti-Trypanosoma cruzi activity in epimastigote forms of the parasite and antiproliferative activity against cell lines derived from human cancers (A549, HepG2, HT144 and MCF7) were also evaluated. Three sulfonamides derivatives (7a, 7b and 7c) presented antibacterial activity with IC50 values ranging from 299.40 to 297.62 μM, against Bacillus cereus and Staphylococcus aureus. Six sulfonamides derivatives (6a, 6c, 7a, 7b, 7c and 7d) exhibited antifungal activity with IC50 values between 664.89 and 748.50 μM, against C. albicans, C. krusei, C. glabrata and C. parapsilosis. In the evaluation of trypanocidal activity, all eight sulfonamides derivatives were active with IC50 values in the range of 217.26 to 420.21 μM. In the evaluation of antiproliferative activity, only three derivatives (6b, 6d and 7a) exhibited promising activity against the breast adenocarcinoma line (MCF7) with IC50 values between 116.60 and 164.90 μM. Even though the IC50 values found in these biological assays are higher than those obtained for the reference drugs, it is important to note that in some cases the proposed hybrid substances have resulted in less toxic and more active products than their phenylpropanoid precursors. Therefore, they represent new molecules that can be altered structurally for optimization of activity. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Orientador: Elerson Gaetti Jardim Júnior / Banca: Ana Maria Pires Soubhia / Banca: Hélio Massaioshi Tanimoto / Resumo: As doenças infecciosas representam uma das principais causas de perda precoce dos dentes, podendo levar a seqüelas graves. Os microrganismos normalmente envolvidos nessas patologias quase sempre pertencem a microbiota autóctone da cavidade bucal e, quase invariavelmente, são de baixa virulência. Assim, o objetivo desse estudo foi avaliar a susceptibilidade a antimicrobianos de bactérias anaeróbias obrigatórias e anaeróbias facultativas isoladas de processos infecciosos da cavidade bucal, procurando verificar a existência de padrões de susceptibilidade à fármacos nas diferentes espécies e gêneros microbianos. As amostras microbianas foram obtidas de 4 casos de osteomielite crônica da mandíbula, 3 lesões periapicais refratárias ao tratamento endodôntico, 30 infecções endodônticas, 7 casos de periodontite agressiva localizada e 2 casos de periodontite agressiva generalizada. O isolamento dos microbiano foi realizado em meios de cultura seletivos e a identificação dos isolados foi realizada de acordo com suas características morfológicas e bioquímico-fisiológicas. Os isolados, uma vez identificados, foram mantidos em nitrogênio líquido (- 196 oC). Nos testes de susceptibilidade, empregou-se o método de diluição em ágar e o meio de cultura empregado foi o ágar infuso de cérebro coração acrescido de extrato de levedura. Os resultados evidenciaram resistência natural dos anaeróbios facultativos ao metronidazol e níveis moderados de resistência às penicilinas, enquanto a cefoxitina, a associação de amoxicilina/ácido clavulânico e imipenem foram quase que universalmente eficazes. A lincomicina e a clindamicina também se mostraram eficazes, particularmente sobre os anaeróbios obrigatórios. O principal mecanismo de resistência aos b-lactâmicos foi a produção de compostos capazes de degradar essas drogas. / Abstract: Infections diseases represent one of the major causes of early tooth loss, and they can lead to sequels. The microorganisms involved oftenly in these pathologies belong to oral microflora and almost all of them are of virulence potential. Thus, the objective of this study was to evaluate the susceptibility to antimicrobials of obligate and facultative anaerobes recovered from infections in head and neck area, trying to verify the existence of susceptibility patterns to those drugs the different species and microbial goods. Microbials samples were obtained of 4 cases of chronic osteomyelitis, 3 refractary periapical lesions, 30 endodontics infections, 7 cases of localized aggressive periodontitis, 2 cases of generalized aggressive periodontitis. The isolation microbial was accomplished in selective culture means and the identification of the isolated ones was accomplished in agreement with its morphologic and biochemical-physiologic characteristics. The isolates, after identification, were maintained in liquid nitrogen (- 196°C). The susceptibility tests, were carried out throught na agar dilution method and the culture medium employed was brain heart infusion agar supplemented with yeast extract. The results evidenced natural resistance of facultative anaerobes to metronidazole and moderate levels of resistance to penicillin, while cefoxitin, amoxycillin/clavulanic acid and imipenem were almost universally effective, particularly on obligate anaerobes. The main mechanisms of resistance to b-lactams was the production of compounds capable to destroy these drugs. / Mestre

Resumo: A clorexidina é um dos antimicrobianos mais efetivos e amplamente empregados na medicina e odontologia. Apesar de sua excelente atividade, seu uso é limitado em cerca de 7 dias devido ao desenvolvimento de importantes efeitos adversos, como o aparecimento de manchas sobre o esmalte, língua e restaurações dentárias; alteração no paladar devido à interação com as papilas gustativas, e um gosto fortemente amargo, o qual é muito difícil de ser mascarado em preparações farmacêuticas. Este trabalho apresenta um estudo de um novo sal hidrofóbico de clorexidina, o tetrapalmitato, que diferentemente dos outros sais existentes, apresenta-se como um íon tetracátion, e é praticamente insolúvel em soluções aquosas. Assim, sua atividade biológica frente Streptococcus mutans, a principal bactéria envolvida na cárie dental, foi testada in vitro, assim como a propriedade de formação de manchas nos dentes e alteração no reconhecimento de alguns gostos básicos. Finalmente, através de estudo cinético salivar, verificou-se a possibilidade de preparar-se uma formulação apropriada para um enxaguatório bucal. Os resultados apontam para um importante benefício sobre as características indesejáveis da clorexidina. Assim, o sal tetrapalmitato foi capaz de diminuir o efeito de aparecimento de manchas, e diminuir o sabor amargo e a interação da clorexidina com as papilas gustativas. No entanto, a formação do sal tetracátion diminuiu a propriedade de substantividade da clorexidina, a qual pode ser compensada pela elaboração de uma suspensão aquosa com uma dosagem mais elevada do sal. Espera-se com estes resultados obter uma formulação para higiene bucal que mantenha a excelente atividade cariostática da clorexidina, permitindo a ampliação do seu período de uso assim como a adesão dos pacientes ao tratamento. / Abstract: Chlorhexidine is one of the most effective and widely employed antimicrobial in medicine and dentistry. In spite of its excellent activity, the use of chlorhexidine is limited to about 7 days, because of the development of important side effects, like staining on enamel, tongue and dental restorations, alteration on taste perception due to its interaction with taste buds and strong bitter taste, which is very hard to be masked in pharmaceutical preparations. This work presents a study of a new hydrophobic tetrapalmitate salt of chlorhexidine, that unlike other existing salts, it comes as a tetracation ion and is almost insoluble in aqueous solution. Thus, its biological activity against Streptococcus mutans, the main bacteria involved in dental caries, was tested in vitro, as well as its staining property and alteration on taste. Finally, by the salivary kinetic study, the possibility of doing an appropriate formulation for mouth rinse was verified. The results led to an important benefit on the undesired characteristics of chlorhexidine. So, the tetrapalmitate salt was able to diminish the staining effect, as well as its bitter taste and interactions with taste buds. However, the tetracation salt formation has diminished the chlorhexidine substantivity property, which could be compensated by the elaboration of an aqueous suspension with high dosage of the salt. It is hoped with these results to obtain an antiseptic formulation for oral care that keeps the excellent cariostatic activity of chlorhexidine, facilitating the extension of the period of use as well as the patient compliance. / Orientador: Chung Man Chin / Coorientador: Vera Lucia Borges Isaac / Banca: Chung Man Chin / Banca: Horácio Faig Leite / Banca: Veni Maria Andres Felli / Banca: Natália Soares Janzanti / Banca: Marcos Antonio Correa / Doutor