Twelve working horses were utilized in a completely randomized design to examine the efficacy of curcumin as an anti-parasitic, anti-inflammatory, and anti-microbial. Horses were randomly assigned to either the control (CON) containing no curcumin or to the curcumin (CUR) treatment which was dosed at 15 g of 500 mg/g of 95% curcumin per day (n = 6/treatment). Fecal samples were collected on day 0 before initiation of treatments and then daily for 30 days. Feces from working horses were evaluated for shedding of Streptococcus bovis/ equinus complex, Clostridium difficile, and Clostridium perfringens. Inflammation was observed through erythrocyte sedimentation rate (ESR) via jugular venipuncture every 3-4 days. Horses were fed treatments at 1100 daily and samples were collected prior to administration of treatments. Dosing curcumin at the recommended rate of 15 g per horse had no effect (P ≥ 0.58) on total fecal egg count, strongyles, or ascarids. There was a day effect (P ≤ 0.05) with parasite shedding mimicking the parasites life cycle. Treatment had no effect on ESR (P ≤ 0.42); however, a day effect (P ≤ 0.001) was observed with the CUR horses with ESR decreasing (P = 0.0006) on d 14 and d 21 compared to d 0. There was no treatment (P = 0.34) or day effect (P = 0.53) on concentration of Clostridium perfringens. Similarly, there was no treatment effect for Clostridium difficile (P = 0.51) or SBEC (P = 0.69). Day had an effect (P = 0.0001) on Clostridium difficile, for both CON and CUR horses with all horses having higher concentrations on d 0 and d 1 compared to all other days. Concentrations of SBEC were affected by day (P = 0.05) with concentrations increasing on different days for both CON and CUR horses. Data would suggest that curcumin has a potential benefit as an anti-inflammatory for working horses starting at d 14 when being dosed at 15 g of 500 mg/g of 95% curcumin. This dosage for 30 days however had no additional benefits as an anti-parasitic and anti-microbial. Curcumin has a potentially negative effect on the GIT by increasing opportunistic bacteria and more research is needed to further evaluate the anti-microbial and anti-parasitic effects of curcumin in horses.

AN ABSTRACT OF THE THESIS OF AIDAN CHRISTIE SMITH, for the MASTER OF ARTS degree in PSYCHOLOGY, presented on OCTOBER 27th, 2017, at Southern Illinois University Carbondale. TITLE: EFFECTS OF NICOTINAMIDE ON MICROGLIAL RESPONSE IN JUVENILE RATS AFTER CONTROLLED CORTICAL IMPACT MAJOR PROFESSOR: Dr. Michael J. Hylin Traumatic brain injury (TBI) is a leading cause of death, cognitive and behavioral disability in children in industrialized nations. Preclinical trials of nicotinamide (NAM) treatment provide neuroprotection and reduced inflammatory responses in adult models of TBI. The primary goal of this study was to address the neuroprotective effects of NAM in the developing brain, specifically, the microglial response that occurs following injury. Animals received a bilateral craniotomy with a single cortical contusion injury over the parietal lobe and were treated with either 500mg/kg of nicotinamide or 0.9% saline via intraperitoneal injection. Animals received three injections, 15 minutes, 24 hours, and 48 hours after injury, and were sacrificed at 4 time points, 3 hours, 72 hours, 1 week, or 1 month following injury. Brains were then used for histological assessment for microglial activity. The results show that NAM attenuates the activation of microglia after CCI. Over the course of time, saline treated animals had a marked increase in microglia at 72 hours and remained elevated after 1 week. In NAM treated animals however, there was no significant increase in the number of microglia at any time point. It is suggested here that NAM has a great effect on the inflammatory response. Further studies are needed to examine NAM’s effects on behavior and functional recovery.

Existem evidências mostrando que diferentes tipos de contração realizadas no exercício de força, podem causar alterações distintas na hemostasia e inflamação. O exercício estimula a coagulação através do aumento do fator VIII (FVIII) e de fator von Willebrand (FvW). A atividade fibrinolítica é regulada, principalmente, pelo ativador de plasminogênio tecidual (t-PA) e pelo inibidor do ativador de plasminogênio tipo 1 (PAI-1), o aumento da atividade fibrinolítica como consequência da atividade física é atribuída ao aumento da liberação de t-PA pelo endotélio vascular e à diminuição na atividade do PAI-1. O exercício excêntrico causa maiores danos à fibra muscular e uma maior resposta inflamatória de proteína C reativa (PCR). A PCR quando aumentada desregula o balanço entre coagulação e fibrinólise devido ao aumento de PAI-1 o que aumenta o risco para formação de trombos. Participaram do estudo 11 sujeitos jovens, sedentários, com idade média de 25,4±2,8 anos, estatura 176,2±4,4 cm, massa corporal 77,1±8,7 kg, massa de gordura 32,3±5,2 kg e VO2máx 41,4±6,5 ml/kg/min-1. Na primeira semana os sujeitos realizavam três visitas ao laboratório, na primeira visita realizavam coletas de sangue pré e pós protocolo, uma contração voluntária máxima (CVM) em um protocolo de dano isocinético, na segunda e terceira visita os sujeitos realizavam apenas a coleta de sangue e a CVM. Na segunda semana após sete dias de descanso os sujeitos repetiam todos os testes da semana anterior mudando apenas o tipo de contração. Os protocolos de dano concêntrico eram decididos por sorteio no dia do teste. O protocolo excêntrico apresentou maior déficit de torque 24h (62,4±30,6 5,3 ± 29,9 Nm) e 48h pós a realização (64,3±33,6; 2,5±31,1Nm). Também existiu um aumento de PCR no excêntrico 48h pós (0,140±0,04; 0,06±0,04 mg/L) e um aumento da inibição de fibrinólise por aumento de PAI-1 48h pós quando comparados ao concêntrico (13,5±7,5; 7,3±6,7 ug/L). Além disso, foi encontrada uma correlação positiva entre PCR e PAI-1 no protocolo excêntrico 48h pós r= 0,69; p< 0,05. Concluímos com este estudo que o exercício excêntrico causa maior perda de força, maior resposta inflamatória e essa resposta inflamatória aumenta a inibição do processo fibrinolítico. / There is evidence that different types of contraction performed in the exercise of strength, can cause different changes in hemostasis and inflammation. Exercise stimulates coagulation by increasing factor VIII (FVIII) and von Willebrand factor (vWF). The fibrinolytic activity is regulated primarily by tissue plasminogen activator (t-PA) and plasminogen activator inhibitor type 1 (PAI-1), increased fibrinolytic activity as a consequence of physical activity is attributed to increased release of t-PA by vascular endothelium and a decrease in the activity of PAI-1. The eccentric exercise causes greater damage to muscle fibers and a greater inflammatory response of c-reactive protein (CRP). PCR deregulates increased when the balance between clotting and fibrinolysis because of increased PAI-1 increases the risk for thrombus formation. The study included 11 young subjects who were sedentary, with a mean age of 25.4±2.8 years, height 176.2±4.4 cm, body mass 77.1±8.7 kg, fat mass 32.3±5.2 kg and VO2max 41.4±6.5 ml / kg / min-1. In the first week the subjects performed three visits to the laboratory, the first visit performed blood sampling before and after protocol, a maximum voluntary contraction (MVC) in a protocol of isokinetic damage in the second and third visit, the subjects performed only the blood collection and CVM. In the second week after seven days of rest subjects repeated all the tests the week before just changing the type of contraction. The damage concentric protocols were decided by lottery on test day. The protocol had higher eccentric torque deficit 24 (62.4 ± 5.3 30.6 ± 29.9 Nm) and 48 hours after the completion (64.3±33.6, 31.1±2.5 Nm). There was also an increase in PCR cam 48h post (0.140±0.04, 0.06±0.04 mg/L) and inhibiting an increase in fibrinolysis by increasing PAI-1 after 48 hours when compared to the concentric (13, 5±7.5, 7.3 ± 6.7 ug/L). Furthermore, we found a positive correlation between CRP and PAI-1 in the protocol 48h after eccentric r = 0.69, p<0.05. We conclude from this study that eccentric exercise causes greater loss of strength, a greater inflammatory response and the inflammatory response increases the inhibition of fibrinolysis.

abstract: Approximately 2.8 million Americans seek medical care for traumatic brain injury (TBI) each year. Of this population, the majority are sufferers of diffuse TBI, or concussion. It is unknown how many more individuals decline to seek medical care following mild TBI. This likely sizeable population of un- or self-treated individuals combined with a lack of definitive biomarkers or objective post-injury diagnostics creates a unique need for practical therapies among diffuse TBI sufferers. Practical therapies stand to decrease the burden of TBI among those who would otherwise not seek treatment or do not meet clinical diagnostic criteria upon examination. For this unique treatment niche, practical therapies for TBI are defined as having one or more of the following qualities: common availability, easy administration, excellent safety profile, and cost-effectiveness. This dissertation identifies and critically examines the efficacy of four classes of practical treatments in improving rodent outcome from experimental diffuse traumatic brain injury. Over-the-counter (OTC) analgesics, omega-3 fatty acids, specialized pro-resolving mediators (SPMs), and remote ischemic conditioning (RIC) were administered before or following midline fluid percussion injury. Behavioral, histological, and molecular analyses were used to assess treatment effects on functional outcome and secondary injury progression. Acute administration of common OTC analgesics had little effect on post-injury outcome in mice. Dietary supplementation with omega-3 fatty acid docosahexaenoic acid (DHA) prior to or following diffuse TBI significantly reduced injury-induced sensory sensitivity and markers of neuroinflammation with no effect on spatial learning. Intraperitoneal administration of omega-3 fatty acid-derived SPM resolvin E1 significantly increased post-injury sleep and suppressed microglial activation. Aspirin-triggered (AT) resolvin D1 administration improved both motor and cognitive outcome following diffuse TBI. RIC treatment in mice demonstrated little effect on functional outcome from diffuse TBI. Untargeted proteomic analysis of plasma samples from RIC-treated mice was used to identify candidate molecular correlates of RIC. Identification of these candidates represents a vital first step in elucidating the neuroprotective mechanisms underlying RIC. The overall findings suggest that omega-3 fatty acid supplementation, SPM administration, and RIC may serve as effective practical therapies to reduce the somatic, cognitive, and neurological burden of diffuse TBI felt by millions of Americans. / Dissertation/Thesis / Doctoral Dissertation Neuroscience 2017

Le stress est impliqué dans le développement et l'exacerbation de diverses pathologies notamment au niveau intestinal. Les effets du stress dépendent de l'expression de neuromédiateurs spécifiques (CRF) et de leurs récepteurs. Notre étude porte sur la régulation et la fonction du CRF2 au niveau des entérocytes et des cellules tumorales coliques humaines. In vivo, nous avons montré que le stress et l'inflammation conduisent à l'augmentation de l'expression du CRF2 dans les colonocytes chez le rat. Dans les tumeurs, l'expression du CRF2 augmente avec le grade tumoral. In vitro, dans les cellules HT-29, l'activation du CRF2 induit une altération des jonctions adhérentes et des adhérences focales par la voie Src/ERK/FAK. Ces mécanismes sont responsables de la régulation de la perméabilité épithéliale et de l'augmentation de la migration des cellules tumorales. Ces travaux contribuent à la compréhension des mécanismes impliquant le stress dans le développement des pathologies intestinales. / Stress is involved in the initiation and the exacerbation of several diseases especially in the intestine. Stress effects depends on the expression of specific neuromediators (CRF) and there receptors. Our study is about regulation and function of the CRF2, a stress receptor expressed in human enterocytes and colorectal cancer cells. In vivo, we showed that stress and inflammation are responsible for the increased expression of the CRF2 in colon epithelial cells of rats. In tumors, the CRF2 expression is increased with the tumor. In vitro, in HT-29 cells, the CRF2 activation leads to the alteration of adherens junctions and focal adhesions by a Src/ERK/FAK pathway. These mechanisms are responsible for the regulation of epithelial cell permeability and the increased migration of tumor cells. This work contributes to the understanding of the pathways involved in the regulation of intestinal diseases by stress.

Orientador: Luciane Dias de Oliveira / Coorientadora: Graziella Nuernberg Back Brito / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Jonatas Rafael de Oliveira / Resumo: As plantas medicinais e seus extratos têm sido utilizados na medicina tradicional para fins terapêuticos e como uma atrativa fonte de pesquisa em diversas vertentes ciêntíficas, dentre elas, a atividade anti-inflamatória. O objetivo deste estudo foi analisar a citotoxicidade e ação anti-inflamatória in vitro dos extratos glicólicos das plantas medicinais Morus nigra (amora), Ziziphus joazeiro (juá) e Vitis vinifera (uva) em macrófagos de camundongo RAW 264.7. A citotoxicidade dos extratos foi analisada pelo teste de viabilidade celular MTT em dois períodos de tratamento, 5 min e 24 h. A ação anti-inflamatória dos extratos foi avaliada em macrófagos RAW 264.7 estimulados pelo lipopolissacarídeo (LPS) por meio da quantificação das citocinas pró-inflamatórias fator de necrose tumoral (TNF-α) e interleucina-6 (IL-6) pelo teste imunoenzimático (ELISA), e da quantificação do óxido nítrico pela reação de Griess. Os valores obtidos foram submetidos à análise estatística ANOVA ou Kruskal-Wallis com comparação múltipla de Tukey ou Dunn, com nível de significância de 5%. Concentrações não citotóxicas foram observadas após exposição por 5 min e 24 h, respectivamente, para os extratos de M. nigra (≤ 50 mg/mL e ≤ 1,56 mg/mL), Z. joazeiro (≤ 6,25 mg/mL e ≤ 3,12 mg/mL) e V. vinifera (≤ 25 mg/mL e ≤ 3,12 mg/mL). Em relação à resposta anti-inflamatória, 0,78 e 1,56 mg/mL do extrato de M. nigra e 3,12 mg/mL de V. vinifera apresentaram inibição significativa na produção da citocina TNF-α, e o ex... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Medicinal plants and theirs extracts have been used in traditional medicine for therapeutic purposes and as a source of research in several scientific aspects, e.g. the anti-inflammatory activity. This study aimed to analyze the in vitro cytotoxicity and anti-inflammatory action of the glycolic extracts of the medicinal plants Morus nigra (black mulberry), Ziziphus joazeiro (juá) and Vitis vinifera (grape) in mouse macrophages cells RAW 264.7. The cytotoxicity of the extracts was analyzed by MTT cell viability assay in two periods, 5 min and 24 h. The anti-inflammatory action of the extracts was evaluated in lipopolysaccharide (LPS) stimulated RAW 264.7 cells by quantifying the pro-inflammatory cytokines tumor necrosis factor (TNF-α) and interleukin-6 (IL-6) by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and nitric oxide by Griess reagent. The values obtained were submitted to statistical tests ANOVA or Kruskal-Wallis with post-test Tukey or Dunn multiple comparisons with the significance level of 5%. After exposure for 5 min and 24 h, respectively, non-cytotoxic concentrations were observed for M. nigra (≤ 50 mg/mL and ≤ 1.56 mg/mL), Z. joazeiro (≤ 6.25 mg/mL and ≤ 3.12 mg/mL) and V. vinifera (≤ 25 mg/mL and ≤ 3.12 mg/mL) extracts. Concerning the anti-inflammatory response, 0.78 and 1.56 mg/mL of M. nigra extract and 3.12 mg/mL of V. vinifera extract showed significant inhibition of TNF-α cytokine production. Z. joazeiro extract suppressed significantly the TNF-α cytokine (3.1... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Existem evidências mostrando que diferentes tipos de contração realizadas no exercício de força, podem causar alterações distintas na hemostasia e inflamação. O exercício estimula a coagulação através do aumento do fator VIII (FVIII) e de fator von Willebrand (FvW). A atividade fibrinolítica é regulada, principalmente, pelo ativador de plasminogênio tecidual (t-PA) e pelo inibidor do ativador de plasminogênio tipo 1 (PAI-1), o aumento da atividade fibrinolítica como consequência da atividade física é atribuída ao aumento da liberação de t-PA pelo endotélio vascular e à diminuição na atividade do PAI-1. O exercício excêntrico causa maiores danos à fibra muscular e uma maior resposta inflamatória de proteína C reativa (PCR). A PCR quando aumentada desregula o balanço entre coagulação e fibrinólise devido ao aumento de PAI-1 o que aumenta o risco para formação de trombos. Participaram do estudo 11 sujeitos jovens, sedentários, com idade média de 25,4±2,8 anos, estatura 176,2±4,4 cm, massa corporal 77,1±8,7 kg, massa de gordura 32,3±5,2 kg e VO2máx 41,4±6,5 ml/kg/min-1. Na primeira semana os sujeitos realizavam três visitas ao laboratório, na primeira visita realizavam coletas de sangue pré e pós protocolo, uma contração voluntária máxima (CVM) em um protocolo de dano isocinético, na segunda e terceira visita os sujeitos realizavam apenas a coleta de sangue e a CVM. Na segunda semana após sete dias de descanso os sujeitos repetiam todos os testes da semana anterior mudando apenas o tipo de contração. Os protocolos de dano concêntrico eram decididos por sorteio no dia do teste. O protocolo excêntrico apresentou maior déficit de torque 24h (62,4±30,6 5,3 ± 29,9 Nm) e 48h pós a realização (64,3±33,6; 2,5±31,1Nm). Também existiu um aumento de PCR no excêntrico 48h pós (0,140±0,04; 0,06±0,04 mg/L) e um aumento da inibição de fibrinólise por aumento de PAI-1 48h pós quando comparados ao concêntrico (13,5±7,5; 7,3±6,7 ug/L). Além disso, foi encontrada uma correlação positiva entre PCR e PAI-1 no protocolo excêntrico 48h pós r= 0,69; p< 0,05. Concluímos com este estudo que o exercício excêntrico causa maior perda de força, maior resposta inflamatória e essa resposta inflamatória aumenta a inibição do processo fibrinolítico. / There is evidence that different types of contraction performed in the exercise of strength, can cause different changes in hemostasis and inflammation. Exercise stimulates coagulation by increasing factor VIII (FVIII) and von Willebrand factor (vWF). The fibrinolytic activity is regulated primarily by tissue plasminogen activator (t-PA) and plasminogen activator inhibitor type 1 (PAI-1), increased fibrinolytic activity as a consequence of physical activity is attributed to increased release of t-PA by vascular endothelium and a decrease in the activity of PAI-1. The eccentric exercise causes greater damage to muscle fibers and a greater inflammatory response of c-reactive protein (CRP). PCR deregulates increased when the balance between clotting and fibrinolysis because of increased PAI-1 increases the risk for thrombus formation. The study included 11 young subjects who were sedentary, with a mean age of 25.4±2.8 years, height 176.2±4.4 cm, body mass 77.1±8.7 kg, fat mass 32.3±5.2 kg and VO2max 41.4±6.5 ml / kg / min-1. In the first week the subjects performed three visits to the laboratory, the first visit performed blood sampling before and after protocol, a maximum voluntary contraction (MVC) in a protocol of isokinetic damage in the second and third visit, the subjects performed only the blood collection and CVM. In the second week after seven days of rest subjects repeated all the tests the week before just changing the type of contraction. The damage concentric protocols were decided by lottery on test day. The protocol had higher eccentric torque deficit 24 (62.4 ± 5.3 30.6 ± 29.9 Nm) and 48 hours after the completion (64.3±33.6, 31.1±2.5 Nm). There was also an increase in PCR cam 48h post (0.140±0.04, 0.06±0.04 mg/L) and inhibiting an increase in fibrinolysis by increasing PAI-1 after 48 hours when compared to the concentric (13, 5±7.5, 7.3 ± 6.7 ug/L). Furthermore, we found a positive correlation between CRP and PAI-1 in the protocol 48h after eccentric r = 0.69, p<0.05. We conclude from this study that eccentric exercise causes greater loss of strength, a greater inflammatory response and the inflammatory response increases the inhibition of fibrinolysis.

A polpa dental é formada de tecido conjuntivo frouxo sendo constituída por diversas células, dentre as quais os fibroblastos são as mais numerosas. Ao serem submetidas a agressões diversas, estas células respondem com a liberação de substâncias, tais como citocinas e quimiocinas, que participam de maneira ativa no processo inflamatório. Assim sendo, este trabalho teve como proposição: 1. avaliar a capacidade de fibroblastos de polpa dental humana em cultura em produzirem as quimiocinas MIP-l\'alfa\' /CCL3 e SDF-1/CXCL12; 2. avaliar a produção destas quimiocinas pelos fibroblastos quando estimulados por Enterococcus faecalis morto por calor com relação à quantidade de bactérias por célula e 3. avaliar a liberação destas quimiocinas com relação ao tempo de estímulo. Para o estabelecimento das culturas, foi coletada a polpa de terceiro molar hígido de um paciente saudável. O tecido foi extraído, armazenado e picotado em meio de cultura para fibroblastos (DMEM), os quais foram utilizados a partir da quarta passagem. Após adesão das células a placas de 24 poços, o meio de cultura contendo Enterococcus .faecalis morto por calor numa concentração correspondente a 1, 10 e 100 bactérias por fibroblasto foi adicionado aos poços. Após 1, 6 e 24 horas, o sobrenadante das células foi coletado para a análise por ELISA. A análise estatística foi realizada aplicando-se o teste Kruskal-Wallis com nível de significância de 5%. A produção de MIP-l\'alfa\' /CCL3 e SDF-l/CXCL12 pelas células pôde ser detectada por ELISA. Os fibroblastos pulpares se mostraram capazes de produzir SDF-1 constitutivamente sendo que o estímulo bacteriano levou a uma diminuição estatisticamente significativa desta produção. A produção de MIP-l\'alfa\' também foi detectada tanto de maneira constitutiva como em resposta ao desafio microbiano. Enquanto a concentração intermediária de bactéria por fibroblasto (10:1) mostrou uma produção semelhante ao grupo controle, as concentrações de 1 e 100 bactérias por fibroblasto induziram aumento maior na primeira hora de estímulo. Essas diferenças, entretanto, não foram estatisticamente significativas. A capacidade dos fibroblastos secretarem quimiocinas, como MIP-l\'alfa\' e SDF-1, reforça a importância dessas células dentro do contexto de imunidade e inflamação pulpar, principalmente por serem as células mais numerosas deste microambiente. / Dental pulp is a connective tissue structure constituted by many different cell types. Among them, the fibroblasts are the most frequent ones. When challenged by different aggressive agents, these cells are able to release some substances like cytokines and chemokines, which are essential to trigger the inflammatory process. The aims of this study were: 1. to evaluate the ability of fibroblasts to produce the chemokines MIP-l\'alfa\'/CCL3) and SDF-1/CXCL12; 2. to evaluate the expression of these chemokines by fibroblasts when challenged by heat killed Enterococcus. faecalis in gradual concentrations and 3. to evaluate the production of these chemokines in a time course manner. The dental pulp from non-carious third molar was collected from a healthy patient. Explants were made and stocked in culture medium (DMEM) for fibroblasts growth. The cells were used since passage four. In a 24-well plate and after reaching confluence, culture medium alone or containing heat killed E. faecalis at proportion 1:1, 10:1 and 100:1 bacteria:fibroblast, were added to the fibroblasts. After 1, 6 and 24 hours, the supernatants were collected for analysis. The protein detection of MIP-l\'alfa\'/CCL3 and SDF-1/CXCL12 was performed by ELISA. For statistical analysis, data were assessed by Kruskal-Wallis followed by Miller post-test. Significance levels of 5% were adopted. Production of both chemokines was detected by ELISA. Pulp fibroblasts were able to produce SDF-1 constitutively. This production decreased with the increase in the number of heat killed E. faecalis increased (p < 0.05). Production of MIP-l\'alfa\' was detected in unchallenged and challenged cells. The median bacterial concentration (10:1) presented a profile production similar to that of unstimulated cells. Bacterial concentrations of 1 and 100 microrganisms/cell showed a highly enhanced production of MIP-l\'alfa\' at the first hour of stimulum; however, these data were not statistically significant (p > 0.05). Fibroblasts ability to produce chemokines, like MIP-l\'alfa\' and SDF-1, confirms their importance at immune and inflammatory events in dental pulp, specially being fibroblasts the most abundant cells at this microenvironment .

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / O ciclo vicioso de doenÃas entÃricas na infÃncia à um problema de saÃde pÃblica com consequÃncias graves e seus efeitos no desenvolvimento infantil nÃo estÃo totalmente elucidados. Orià e colaboradores, em 2005, demonstraram que crianÃas portadoras do gene APOE 4 com alta morbidade de diarreia apresentavam um melhor desempenho em testes cognitivos. O objetivo desse trabalho foi avaliar o papel protetor do gene APOE 4 em camundongos C57BL6J submetidos à desnutriÃÃo induzida por uma raÃÃo pobre em proteÃna (2%) e pela infecÃÃo intestinal induzida pelo Criptosporidium parvum. Utilizamos camundongos C57BL6J machos com peso mÃdio de 14 g, submetidos a um perÃodo de 14 dias de desnutriÃÃo e a 7 dias de infeÃÃo por C. parvum meio por meio da gavagem de 107 oocistos. Os animais foram separados segundo o genÃtipo: wildtype, APOE nocaute (ApoE Ko), APOE 3/3 (com gene APOE 3 humano) e APOE 4/4 (com gene APOE 4 humano). Os animais controles receberam PBS via gavagem. O peso dos animais foi monitorado diariamente. Os camundongos foram sacrificados em cÃmara de CO2 seguido de deslocamento cervical apÃs 14 dias do inÃcio do protocolo. Durante o perÃodo de pÃs-infecÃÃo foram coletadas as fezes dos animais infectados em dias alternados, para a realizaÃÃo do PCR quantitativo em tempo real (qPCR) para a anÃlise da quantidade de C. parvum liberada nas fezes. Amostras de Ãleo foram congeladas em nitrogÃnio lÃquido e armazenadas em freezer a -80ÂC para as anÃlises moleculares. Outras amostras foram fixadas em paraformaldeÃdo tamponado (4%) para processamento histolÃgico. Foram avaliados os parÃmetros morfomÃtricos de altura de vilo e profundidade de cripta nos segmentos ileais. Para a detecÃÃo de citocinas prÃinflamatÃrias de interesse (IL-1&#946;, IFN- &#947;, TNF-&#945; e IL-17), utilizou-se o ensaio multiplex (Luminex xMAP). Ainda por qPCR avaliou-se o transportador catiÃnico de aminoÃcidos (CAT-1), arginase 1, iNOS e TLR9. No peso encontramos uma maior adaptaÃÃo a perda de peso nos animais APOE 4 no 2o e 3o dias de desnutriÃÃo em comparaÃÃo a todos os grupos (p<0,05). No perÃodo de pÃs-infecÃÃo verificou-se diferenÃa significante no 2o dia (p<0,05) em comparaÃÃo a todos os grupos. Nas anÃlises morfomÃtricas, encontramos uma reduÃÃo na altura de vilos e profundidade de criptas nos animais APOE nocautes, jà nos animais APOE 4/4 ocorreu uma proteÃÃo contra esses danos em comparaÃÃo a todos os grupos (p<0,05). Os dados da anÃlise de liberaÃÃo de oocistos nas fezes evidenciaram um aumento do estado prÃ-inflamatÃrio e antiparasitÃrio nos animais APOE Ko e APOE 4/4, verificado por meio de uma reduÃÃo na quantidade de C. parvum liberado nas fezes de maneira significativa. Houve um aumento dos nÃveis intestinais das citocinas prÃ-inflamatÃrias IL-1&#946; (p<0,05) nos animais APOE Ko desnutridos e infectados em comparaÃÃo com APOE3/3 e APOE4/4, e altos nÃveis de IFN-&#947; (p<0,05) em comparaÃÃo com os controles selvagens e o grupo APOE Ko desnutrido controle. Os animais desnutridos controles APOE Ko tiveram aumento dos nÃveis intestinais de IL-17 (p<0,05) quando comparados aos animais APOE Ko desnutridos infectados. Dados de qPCR evidenciam que a presenÃa do genÃtipo APOE4 em camundongos aumenta os transcritos primÃrios de CAT-1 e arginase - 1 no Ãleo em relaÃÃo aos selvagens, APOE Ko e APOE3 (p<0,05) e que os animais nocautes aumentaram a expressÃo de iNOS em relaÃÃo aos outros grupos (p<0,05). Os animais APOE 4 desnutridos e infectados apresentaram uma expressÃo significativamente aumentada nos nÃveis de mRNA para TLR9 no Ãleo comparado com os APOE Ko igualmente desafiados (p<0,05). A partir dos nossos achados, podemos concluir que o animais com genÃtipo APOE 4 possuem uma aÃÃo prÃ-inflamatÃria controlada, o que favorece o combate ao C. parvum, visto que reduz a quantidade de DNA do parasita liberado nas fezes e melhora a taxa de crescimento de animais submetidos pela desnutriÃÃo/infecÃÃo, sugerindo que hospedeiros com genÃtipo APOE 4 possuem uma maior proteÃÃo contra as alteraÃÃes intestinais induzidas pela combinaÃÃo de C. parvum e desnutriÃÃo. / The vicious cycle of enteric infections and malnutrition during childhood is a major public health problem with devastating consequences and its effects are not fully elucidated. Oria and colleagues in 2005 showed that children with heavy diarrhea burdens when carrying the APOE 4 gene had a better cognitive performance. The aim of this study was to evaluate the protective role of APOE 4 gene in C57BL6J mice challenged by malnutrition induced by a 2% protein diet and intestinal infection caused by Cryptosporidium parvum. We used male C57BL6J mice weighing in average 14g, challenged by malnutrition for a period of 14 days compound with 7 days of C. parvum infection through a single dose of 107 oocysts given by gavage. Study animals were separated according to their genotype, as following: wild-type, APOE knock-out, APOE 3/3 (carriers of the human APOE 3 gene) and APOE 4/4 (carriers of human APOE 4 gene). Control animals received PBS by gavage. Body weight of the animals was monitored daily. Mice were sacrificed in CO2 chamber with posterior cervical dislocation after 14 days from the beginning of the protocol. During the post-infection period, stools samples were collected from the infected mice every other day for real time quantitative PCR (qPCR) assays in order to quantify C. parvum oocysts released in the stools. Ileal samples were immediately frozen in liquid nitrogen and then stored in a freezer at -80ÂC for molecular analyses. Other samples were fixed in buffered paraformaldehyde (4%) for histological processing. Morphometric parameters were evaluated for villus height and crypt depth in the ileal segments. For detection of a proinflammatory cytokine panel (IL- 1&#946;, IFN-&#947;, TNF-&#945;, and IL-17), we used the multiplex assay (Luminex xMAP). In addition by qPCR, the cationic amino acid transporter (CAT-1), arginase 1, iNOS, and TLR9 were assessed. Regarding weight, we found a greater adaptation to weight loss in APOE 4 animals in the 2nd and 3rd days of malnutrition (p<0.05) and in the postinfection time there was a significant difference on the 2nd day (p<0.05) compared to all groups. In the morphometric analyses, we found villus blunting and crypt disorganization in APOE knockout mice. We found APOE 4 protection against these alterations compared to all groups (p<0.05). The C. parvum oocyst shedding data indicate an increase in the pro-inflammatory state and anti-parasitic effects seen in the APOE Ko and APOE 4/4 mice, as confirmed by a significant reduction of the C. parvum released in the stools. In addition, we found increased levels of the intestinal pro-inflammatory cytokine (IL-1&#946;) (p<0.05) in the APOE Ko when compared with APOE3/3 and APOE4/4, higher levels of IFN-&#947; (p<0.05) when compared with wild-type and undernourished APOE Ko controls. The APOE Ko undernourished mice have increased intestinal levels of IL-17 compared with APOE Ko undernourished infected mice. qPCR data demonstrate that the presence of the APOE4 genotype in mice increased the primary transcripts of CAT-1 and arginase 1 in comparison to wild types, APOE Ko, and APOE 3/3 (p<0.05). Furtermore, APOE knockout mice had higher iNOS expression in comparison to all groups (p<0.05). The APOE 4 mice showed significant increase in the expression of TLR9 mRNA in the ileum when compared to APOE Ko mice (p<0.05). Altogether we concluded that the APOE 4 carriers have a balanced pro-inflammatory response, benefiting the C. parvum control, as seen by reduction of the parasite DNA released in the stools, and by improvements in the growth rates in the mice challenged malnutrition/infection, suggesting that the hosts carrying the APOE4 genotype have a better protection against the intestinal alterations induced by the compound challenge of C. parvum infection and malnutrition.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A doenÃa de Parkinson (DP) à uma desordem neurodegenerativa caracterizada pela destruiÃÃo dos neurÃnios nigroestriatais dopaminÃrgicos. O tratamento atual à apenas sintomÃtico e, atà o presente momento, nÃo existem drogas capazes de inibir a degeneraÃÃo neuronal. Assim à grande a procura por agentes neuroprotetores que possam impedir ou retardar a progressÃo desta doenÃa. A Camellia sinensis à uma espÃcie da famÃlia Theaceae, popularmente conhecida como chÃ-verde (CV). VÃrios estudos tÃm demonstrado os efeitos benÃficos desta planta e de seus princÃpios bioativos contra doenÃas neurodegenerativas. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito neuroprotetor do extrato padronizado do chÃ-verde e de suas catequinas, epicatequina (EC) e epigalocatequina 3-galato (EGCG), no modelo de DP induzida por 6-OHDA em ratos, bem como estudar o efeito do CV em modelos de inflamaÃÃo e nocicepÃÃo. Os animais (ratos Wistar machos, 180-250 g) foram tratados por via oral com CV (25 ou 50 mg/kg), catequinas (EC ou EGCG, na dose de 10 mg/kg), a associaÃÃo de CV (25 mg/kg) + L-DOPA (25 mg/kg) e com L-DOPA sozinha (nas doses de 25 ou 50 mg/kg) durante 14 dias consecutivos; os tratamentos foram iniciados 1h antes da lesÃo estriatal unilateral por 6-OHDA (24 Âg/2ÂL). Nos testes comportamentais, os resultados mostraram que houve um aumento significativo do nÃmero de rotaÃÃes induzidas por apomorfina, diminuiÃÃo da atividade locomotora no teste do campo aberto, aumento do tempo de imobilidade no teste no nado forÃado, aumento do tempo de encontro da plataforma no teste do labirinto aquÃtico e aumento do nÃmero de quedas no teste do rota rod nos animais lesionados com 6-OHDA, em comparaÃÃo com os animais falso-operados. Essas modificaÃÃes foram, em parte ou totalmente, revertidas apÃs os tratamentos com CV, CV + L-DOPA, EC, EGCG e L-DOPA sozinha. A 6-OHDA provocou morte neuronal, evidenciada pela reduÃÃo dos nÃveis de dopamina e metabolitos (DOPAC e HVA) no estriado direito lesionado quando comparado com o estriado esquerdo nÃo-lesionado (contralateral). Essa depleÃÃo foi significativamente atenuada nos animais lesionados e tratados com CV, L-DOPA, EC, EGCG e associaÃÃo CV 25 + L-DOPA 25; estas mesmas drogas diminuÃram os nÃveis de TBARS (indicador de peroxidaÃÃo lipÃdica) e nitrito/nitrato (indicador de estresse oxidativo) no estriado de ratos submetidos a lesÃo estriatal por 6-OHDA. Experimentos in vitro demonstraram que o CV (0,1-100 Âg/Âl) apresentou um forte efeito antioxidante, ao reduzir a produÃÃo de substÃncias oxidantes em neutrÃfilos humanos estimulados por PMA. Na coloraÃÃo de Nissl, observou-se que nos animais lesionados e tratados com CV, EGCG e CV + L-DOPA houve uma preservaÃÃo dos neurÃnios hipocampais. Os tratamentos com CV e CV+L-DOPA aumentaram a imunorreatividade para TH e diminuÃram a imunomarcaÃÃo para COX-2 no estriado, bem como o CV e EGCG atenuaram a marcaÃÃo para iNOS no hipocampo dos animais tratados, em relaÃÃo ao grupo controle. Observou-se que o CV potencializou os efeitos da L-DOPA, evidenciando um possÃvel efeito sinÃrgico entre essas drogas. Em outra etapa do estudo, avaliou-se a atividade anti-inflamatÃria/antinociceptiva do CV. Assim, no modelo de edema de pata, induzido por carragenina ou dextrano, verificou-se uma diminuiÃÃo do volume do edema da pata dos ratos, apÃs tratamento com CV, em relaÃÃo aos do grupo controle (tratado apenas com Ãgua destilada). O CV produziu efeito antinociceptivo, nos testes da formalina e das contorÃÃes abdominais, induzidas por Ãcido acÃtico, como tambÃm nos testes da placa quente e de Hargreaves, possivelmente atravÃs da ativaÃÃo de receptores opioides e da reduÃÃo do processo inflamatÃrio. Nestes testes de nocicepÃÃo e inflamaÃÃo, o CV potencializou os efeitos da morfina, indometacina e dexametasona. Portanto, nossos resultados evidenciaram os efeitos neuroprotetores do CV e de seus princÃpios bioativos, EC e EGCG, possivelmente decorrentes de suas propriedades anti-inflamatÃrias e antioxidantes, tornando-as opÃÃes terapÃuticas futuras para a prevenÃÃo ou tratamento de doenÃas neurodegenerativas, como a doenÃa de Parkinson.