Nos últimos anos tem ocorrido um aumento de infecções fúngicas, devido à elevação do número de pacientes imunossuprimidos, principalmente pelo surgimento da epidemia da AIDS (Acquired Immunodeficiency Syndrome). O uso aumentado de antifúngicos tem levado ao surgimento de cepas resistentes a estes agentes, já verificado com o azólico fluconazol, o agente antifúngico mais utilizado na terapia de manutenção de pacientes com AIDS, que desenvolvem criptococose. Neste trabalho, foram determinadas as Concentrações Inibitórias Mínimas (CIMs) de fluconazol para isolados clínicos de Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii, utilizando-se o teste de microdiluição em caldo padronizado pelo National Commitee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS), o método padrão para testar susceptibilidade antifúngica de leveduras. Foram testados 173 isolados clínicos de C. neoformans e C. gattii, sendo que as CIMs para fluconazol variaram de 0,125 a 16 μg/mL, com uma CIM50% de 2 e uma CIM90% de 4 μg/mL. Todos os isolados foram considerados sensíveis a fluconazol. Também foi realizado um teste de indução de resistência a fluconazol, por exposição de um isolado sensível, a concentrações crescentes da droga, para verificar se apenas a exposição, levaria ao desenvolvimento de resistência. No entanto, verificou-se apenas uma resistência transitória, em uma das subpopulações, sendo que o fenótipo de sensibilidade foi restaurado. Os dados obtidos neste trabalho estão em concordância com estudos nacionais e internacionais, que também utilizaram o teste padrão de microdiluição em caldo. A resistência entre isolados clínicos de C. neoformans e C. gattii ainda tem se mostrado rara em termos mundiais comparada a resistência adquirida por outras leveduras. No entanto, devido aos relatos de desenvolvimento de resistência durante a terapia de manutenção da criptococose, é importante alertar quanto à possibilidade do surgimento e da propagação de cepas resistentes. / In the last years have occurred an increase of fungal infections due to rise of number of immunocompromised patients, particularly by appearance of the Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS). The incresing use of antifungal agents has determined the appearance of resistants strains to this agents, already verified with the fluconazole azole, the antifungal agent more used in the maintenance therapy of AIDS patients that developing criptococosis. In this work were determined the Minimuns Inibitories Concentrations (MICs) of fluconazole to Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii clinical isolates, using the National Commitee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) broth microdilution method. This is the test standard to test antifungal susceptibility to yeasts. Were tested 173 clinical isolates of C. neoformans and C. gattii. The MICs to fluconazole ranged of 0.125 to 16 μg/mL and the MIC50% was 2 and MIC90% was 4μg/mL. All isolates were considered susceptibles to fluconazole. A test of fluconazole resistance inducing was carry out by exposure to drug incresing concentrations of one susceptible isolate, to verify if only the exposure can to result in the resistance development. However occurred only a temporary resistance in one of the subpopulations, since the susceptibility profile was restored. The data obtained in this work are in agreement with national and international studies that also used the standard broth microdilution method. The resistance between C. neoformans and C. gattii clinical isolates has been rare in the world when compared with others yeasts. Nonetheless due to references to resistance development during the maintenance therapy of cryptococosis, it’s important to remain alert as for possibility of appearance and spread of resistants strains.

Este estudo teve por objetivo avaliar a ação inibitória de duas soluções de quitosana através da determinação da concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM) de duas soluções de quitosana de diferentes procedências. A primeira solução de quitosana derivada de camarão, do tipo comercial Fluka, de PM 600.000 g/mol, G.A. 76% e a segunda solução de quitosana derivada de lula, de PM: '10 POT.7' g/mol e G.A.: 83%. As duas soluções foram ajustadas ao pH 5,0 e na concentração de 0,5% em solução acética a 1%. A melhor atividade antimicrobiana da quitosana ocorre em pH igual ou menor que cinco e ela sofre precipitação em pH superiores a 6,5. Estas duas características foram determinantes na escolha do pH utilizado no teste da CIM. Para confirmar que a inibição do crescimento dos enteropatógenos ocorreu pela ação da quitosana e não pelo pH ácido dos meios, vários testes foram realizados. A avaliação do crescimento dos enteropatógenos em ágar MacConkey, pH 5,0 (ótimo para quitosana) e 7,4(ótimo para o cultivo das bactérias utilizadas), o inóculo de cada bactéria foi preparado segundo o tubo 0,5 de Mc Farland (controle positivo), e a avaliação foi repetida utilizando o inóculo diluído 1:1000 para contagem do número de colônias, e não apresentaram diferenças significativas. Para confirmar estes dados foram realizados os controles negativos das duas soluções de quitosana e do meio de cultura MacConkey em pH 5,0 e 7,4, incubados a 37°C e lidos por 72 horas, sem qualquer alteração. A avaliação da reação de precipitação foi feita em caldo Müeller Hinton em pH 4,0; 5,0; 6,0; 7,0 e 8,0 para as duas soluções de quitosana (v/v), incubados a 37°C e lidos por 72 horas. A avaliação da CIM das duas soluções de quitosana para os enteropatógenos foi realizada por diluição seriada e os inóculos comparados ao tubo 0,5 de Mc Farland, sendo 10 'mü'L da suspensão bacteriana acrescida a cada tubo, incubados a 37°C por 24 horas. A leitura da ausência de turvação visível caracterizou a CIM. Todos os tubos que não apresentaram turvação visível foram plaqueados em ágar MacConkey, em pH 7,4 e incubados a 37°C por 24 horas para determinação da CBM, a qual foi determinada pela menor concentração capaz de causar morte total da população dos enteropatógenos. Todas as técnicas foram realizadas em triplicata para confirmação dos resultados / The aim of this study was to evaluate the inhibitory action of chitosan solutions derived from shrimp (Fluka commercial type, MW 600.000 g/mol, acetylation degree of 76%) and squid (MW '10 POT.7' g/mol, acetylation degree of 83%) through determination of minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) against enteropathogens: Salmonella enterica, Shigella sonnei and Escherichia coli EPEC. Those solutions were set to pH 5,0 and a 0,5% concentration in a 1% acetic acid solution. The best antimicrobial activity of chitosan occurs in pH less than or equal to 5,0 and it shows precipitation in pH greater than 6,5. Those features were decisive to choose the pH used in the MIC test. In order to confirm that the growth inhibition of enteropathogens occurred by the action of chitosan and not for the acid pH of the environments, growth evaluation tests of enteropathogens were accomplished in MacConkey agar, pH 5,0 (excellent for chitosan) and pH 7,4 (excellent for culture of used bacteria). The inoculum of each bacterium was prepared comparing with the 0,5 tube of McFarland (positive control) and the evaluation was repeated using the inoculum diluted in a salt solution 1:1000 to count the number of colonies, which did not show significant differences. The reaction evaluation of precipitation of chitosan was done in Müeller Hinton broth with pH ranging 4,0 - 8,0 for both solutions of chitosan (v/v), which were incubated at 37°C and read for 72 hours. The MIC evaluation for both solutions of chitosan for the enteropathogens was done by serial dilution and the inocula were compared to the 0,5 tube of McFarland, adding 10 'mü'L of bacterial suspension to each tube, which were incubated at 37°C for 24 hours. The MIC was distinguished by the absence of visible turbidity. Each tube that did not show visible turbidity was spread on MacConkey agar plates in pH 7,4, and incubated at 37°C for 24 hours to find the MBC, which was determined by the smallest concentration able to cause total death to the enteropathogen population. In both cases, the solutions of chitosan presented a high antimicrobial activity against the enteropathogens Salmonella enterica and Escherichia coli EPEC. However, the higher antimicrobial activity was observed in the enteropathogen Shigella sonnei

Nos últimos anos tem ocorrido um aumento de infecções fúngicas, devido à elevação do número de pacientes imunossuprimidos, principalmente pelo surgimento da epidemia da AIDS (Acquired Immunodeficiency Syndrome). O uso aumentado de antifúngicos tem levado ao surgimento de cepas resistentes a estes agentes, já verificado com o azólico fluconazol, o agente antifúngico mais utilizado na terapia de manutenção de pacientes com AIDS, que desenvolvem criptococose. Neste trabalho, foram determinadas as Concentrações Inibitórias Mínimas (CIMs) de fluconazol para isolados clínicos de Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii, utilizando-se o teste de microdiluição em caldo padronizado pelo National Commitee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS), o método padrão para testar susceptibilidade antifúngica de leveduras. Foram testados 173 isolados clínicos de C. neoformans e C. gattii, sendo que as CIMs para fluconazol variaram de 0,125 a 16 μg/mL, com uma CIM50% de 2 e uma CIM90% de 4 μg/mL. Todos os isolados foram considerados sensíveis a fluconazol. Também foi realizado um teste de indução de resistência a fluconazol, por exposição de um isolado sensível, a concentrações crescentes da droga, para verificar se apenas a exposição, levaria ao desenvolvimento de resistência. No entanto, verificou-se apenas uma resistência transitória, em uma das subpopulações, sendo que o fenótipo de sensibilidade foi restaurado. Os dados obtidos neste trabalho estão em concordância com estudos nacionais e internacionais, que também utilizaram o teste padrão de microdiluição em caldo. A resistência entre isolados clínicos de C. neoformans e C. gattii ainda tem se mostrado rara em termos mundiais comparada a resistência adquirida por outras leveduras. No entanto, devido aos relatos de desenvolvimento de resistência durante a terapia de manutenção da criptococose, é importante alertar quanto à possibilidade do surgimento e da propagação de cepas resistentes. / In the last years have occurred an increase of fungal infections due to rise of number of immunocompromised patients, particularly by appearance of the Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS). The incresing use of antifungal agents has determined the appearance of resistants strains to this agents, already verified with the fluconazole azole, the antifungal agent more used in the maintenance therapy of AIDS patients that developing criptococosis. In this work were determined the Minimuns Inibitories Concentrations (MICs) of fluconazole to Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii clinical isolates, using the National Commitee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) broth microdilution method. This is the test standard to test antifungal susceptibility to yeasts. Were tested 173 clinical isolates of C. neoformans and C. gattii. The MICs to fluconazole ranged of 0.125 to 16 μg/mL and the MIC50% was 2 and MIC90% was 4μg/mL. All isolates were considered susceptibles to fluconazole. A test of fluconazole resistance inducing was carry out by exposure to drug incresing concentrations of one susceptible isolate, to verify if only the exposure can to result in the resistance development. However occurred only a temporary resistance in one of the subpopulations, since the susceptibility profile was restored. The data obtained in this work are in agreement with national and international studies that also used the standard broth microdilution method. The resistance between C. neoformans and C. gattii clinical isolates has been rare in the world when compared with others yeasts. Nonetheless due to references to resistance development during the maintenance therapy of cryptococosis, it’s important to remain alert as for possibility of appearance and spread of resistants strains.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:07:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo9612_1.pdf: 1527054 bytes, checksum: 4ba0c12b939f08ce345a8f4969714c40 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2012 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A cultura do feijão (Phaseolus vulgaris L.) apresenta grande importância econômica e social no Brasil, constituindo a principal fonte de proteína vegetal e ferro na alimentação humana. no entanto, as doenças que incidem sobre a cultura causam grandes perdas na produção, estando a murcha de Fusarium, causada por Fusarium oxysporum f. sp. phaseoli, entre as mais importantes. Considerando que os marcadores moleculares vêm sendo utilizados para caracterizar diversidade genética em populações de fungos, e que a demanda por novas tecnologias que respeitem o ecossistema e não ofereçam riscos de contaminação estão se tornando cada vez mais importantes para o controle de doenças, este trabalho teve o objetivo de determinar a variabilidade genética por marcadores moleculares ISSP, ISSR e RAPD e a inibição por dos extratos de alho, alecrim, arruda e gengibre de sobre isolados de F.oxysporum f. sp. phaseoli provenientes do feijão comum com sintomas de murcha do Fusarium, coletados em diversos campos de cultivo do Estado de Pernambuco. A análise de agrupamento baseada nas distâncias dos três marcadores moleculares mostrou pouca variabilidade genética intraespecífica em F. oxysporum f. sp. phaseoli. A utilização dos extratos aquosos de alho, alecrim, arruda e gengibre apresentou inibição sobre os isolados desse fungo tanto no crescimento micelial quanto na produção de conídios. A pouca variabilidade observada com as várias técnicas empregadas inviabilizou o reconhecimento de correlações entre grupos e localidade. Os extratos podem ter potencial para serem utilizados como alternativa de controle de F. oxysporum f. sp. phaseoli, principalmente integrados a práticas de campo, minimizando assim, a utilização de agrotóxicos

Submitted by Danielle Karla Martins Silva (danielle.martins@ufpe.br) on 2015-03-04T12:41:48Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Fontes, ACL-Dissertação.pdf: 1524345 bytes, checksum: 49ccb51b445e3582cf2b86fb4ad6f4bf (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-04T12:41:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Fontes, ACL-Dissertação.pdf: 1524345 bytes, checksum: 49ccb51b445e3582cf2b86fb4ad6f4bf (MD5) Previous issue date: 2012 / A cultura do feijão (Phaseolus vulgaris L.) apresenta grande importância econômica e social no Brasil, constituindo a principal fonte de proteína vegetal e ferro na alimentação humana. no entanto, as doenças que incidem sobre a cultura causam grandes perdas na produção, estando a murcha de Fusarium, causada por Fusarium oxysporum f. sp. phaseoli, entre as mais importantes. Considerando que os marcadores moleculares vêm sendo utilizados para caracterizar diversidade genética em populações de fungos, e que a demanda por novas tecnologias que respeitem o ecossistema e não ofereçam riscos de contaminação estão se tornando cada vez mais importantes para o controle de doenças, este trabalho teve o objetivo de determinar a variabilidade genética por marcadores moleculares ISSP, ISSR e RAPD e a inibição por dos extratos de alho, alecrim, arruda e gengibre de sobre isolados de F.oxysporum f. sp. phaseoli provenientes do feijão comum com sintomas de murcha do Fusarium, coletados em diversos campos de cultivo do Estado de Pernambuco. A análise de agrupamento baseada nas distâncias dos três marcadores moleculares mostrou pouca variabilidade genética intraespecífica em F. oxysporum f. sp. phaseoli. A utilização dos extratos aquosos de alho, alecrim, arruda e gengibre apresentou inibição sobre os isolados desse fungo tanto no crescimento micelial quanto na produção de conídios. A pouca variabilidade observada com as várias técnicas empregadas inviabilizou o reconhecimento de correlações entre grupos e localidade. Os extratos podem ter potencial para serem utilizados como alternativa de controle de F. oxysporum f. sp. phaseoli, principalmente integrados a práticas de campo, minimizando assim, a utilização de agrotóxicos.

Peptídeos com ação inibitória sobre a enzima conversora de angiotensina I (ECA) e com o potencial de reduzir a pressão arterial têm sido obtidos a partir de diferentes tipos de alimentos ou matérias-primas, sendo grande o interesse em aproveitar resíduos da indústria alimentícia como fontes desses peptídeos. Neste aspecto, as amêndoas de cupuaçu (Theobroma grandiflorum S.), que são em sua maioria descartadas pela indústria, apresentam um teor considerável de proteínas e poderiam ser aproveitadas como fontes de peptídeos inibidores da ECA. Assim, o objetivo deste trabalho foi verificar se o concentrado proteico obtido a partir de amêndoas fermentadas de cupuaçu após ser submetido à hidrólise com a enzima pepsina poderia gerar peptídeos com ação inibitória sobre a ECA in vitro. Foi observado que após a hidrólise do concentrado proteico com pepsina por 1h foi obtido um efeito de 50 % de inibição da ECA, em ensaio realizado com o substrato Abz-FRK(Dnp)-P-OH. Posteriormente, esse hidrolisado foi submetido ao fracionamento por cromatografia em fase reversa (RP-HPLC) e resultou em cinco frações (F1-F5), das quais a terceira teve uma subfração (F3.1) com quatro novos peptídeos identificados por LC-MS/ MS com potencial em inibir a ECA. Esses quatro peptídeos (FWVAM, YRLAF, LGYFK, VTTVVTGLTF) foram sintetizados e submetidos aos ensaios para a determinação do IC50 e Ki. Os peptídeos YRLAF e LGYFK, que apresentaram mecanismo de inibição do tipo competitivo e acompetitivo, respectivamente, tiveram valores de IC50 de 4.73 e 11.11µM, e de Ki de 9.14 e 8.15 µM. Dentre os peptídeos identificados merece destaque VTTVVTGLTF que demonstrou ser um inibidor do tipo acompetitivo e apresentou as menores IC50 (0.70 µM) e Ki (2.79 µM). Em contraste, FWVAM atuou como substrato da ECA e não peptídeo inibidor. A partir dos resultados obtidos neste estudo fica demonstrado que as amêndoas fermentadas de cupuaçu podem ser fonte de peptídeos com ação inibitória da ECA, com potencial efeito anti-hipertensivo a ser, futuramente, investigado a partir de estudos in vivo. / Angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitory peptides with the potential to reduce blood pressure have been obtained from different types of food or raw materials, and there is a great interest in utilize residues from the food industry as sources of peptides. In this regard, cupuassu almonds (Theobroma grandiflorum S.), which are mostly discarded by the industry, has a considerable protein content and could be used as source of ACE-inhibiting peptides. Thus, the objective of this work was to verify if the protein concentrate obtained from fermented almonds of cupuassu after being submitted to the hydrolysis with the enzyme pepsin could generate peptides with inhibitory activity on ACE in vitro. In this study it was observed that after hydrolysis of the protein concentrate with pepsin for 1 h, a 50% effect of ACE inhibition was obtained in an assay performed with the Abz-FRK (Dnp) -P-OH substrate. Posteriorly, the hydrolyzate was subjected to fractionation by reverse phase chromatography (RP-HPLC) and resulted in five fractions (F1-F5), of which the third had a subfraction (F3.1) with four new peptides identified by LC-MS / MS with the potential to inhibit ACE. These four peptides (FWVAM, YRLAF, LGYFK, VTTVVTGLTF) were synthesized and assayed for IC50 and Ki. The YRLAF and LGYFK peptides, which showed a competitive and uncompetitive type inhibition mechanism respectively, presented IC50 values of 4.73 and 11.11µM, and the values for Ki were 9.14 and 8.15 µM. Among the peptides identified, it is possible to highlight VTTVVTGLTF, which was shown to be an inhibitor of the uncompetitive type and presented the lowest value for IC50 (0.70 µM) and Ki (2.79 µM). While FWVAM acted as a substrate of the ACE and not as an inhibitory peptide. From the results obtained in this study it is demonstrated that cupuassu fermented almonds can be a source of peptides with ACE inhibitory activity with potential antihypertensive effect to be further investigated from in vivo studies.

Camundongos C3H/HePAS infectados com Trypanosoma cruzi Sylvio X10/4 desenvolvem cardiomiopatia chagásica crônica semelhante aquela observada em pacientes portadores da doença de Chagas. A análise das células que infiltram o coração na fase crônica mostra uma maior frequência de leucócitos e maior expressão de PD-1 e PD-L1, moléculas inibitórias do sistema imune. Visando restaurar a resposta, tratamos camundongos primeiramente com anticorpos anti-PD-L1 e posteriormente com anticorpos anti-PD-L1 e anti-PD-1 em diferentes experimentos, que falharam em exercer uma diferença significativa na patologia cardíaca, parasitemia do sangue ou do coração associado ao aumento da resposta imune. Para fornecer co-estímulo além de bloquear interações inibitórias, realizamos o tratamento com anti-PD-1 e anti-PD-L1 associado a T. cruzi irradiado, que aumentou a patologia cardíaca e a bradicardia, assim como diminuiu a parasitemia sanguínea, sem mudanças no perfil das células T. O bloqueio das interações inibitórias associado ao desafio e ao co-estímulo das células T, leva a uma piora no funcionamento cardíaco associado à diminuição da parasitemia nos camundongos crônicos. / C3H/HePAS mice infected with T. cruzi Sylvio X10/4 parasites develop a chronic cardiomyopathy like the observed in human chagasic patients. Flow cytometry analysis of heart-infiltrating cells in chronically infected mice revealed higher leukocyte frequency with increased PD-1 and PD-L1 expression. In order to restore the immune response, mice were treated with anti-PD-L1 or with anti-PD-L1 and anti-PD-1, but neither exerted effects at heart pathology and parasitemia nor restored T cell response. Hence, we evaluated the possibility of using irradiated T. cruzi challenge to provide parasite antigen and co-stimulatory signaling to exhausted cells. Thus, association of anti-PD-1 and anti-PD-L1 treatment with irradiated T. cruzi challenge increased heart pathology and bradycardia as well as reduced blood parasitemia. Additionally, the treatment does not change T cell phenotype. Blocking both inhibitory interactions and provide antigen with co-stimulation seems to cause a loss in heart function despite decreasing parasitemia.

Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2016-04-08T16:03:25Z No. of bitstreams: 1 Helen Schimidt.pdf: 1449145 bytes, checksum: 45e0910b8692b3c06106da08de6216cb (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-08T16:03:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Helen Schimidt.pdf: 1449145 bytes, checksum: 45e0910b8692b3c06106da08de6216cb (MD5) Previous issue date: 2014-06-20 / O acidente vascular cerebral isquêmico é uma das principais causas de morbidade e mortalidade em todo o mundo. Entre os prejuízos observados nos sobreviventes, estão os déficits cognitivos para aprendizagem e memória. Acredita-se que essas deficiências são resultantes de danos secundários provocado pelo processo de isquemia-reperfusão, incluindo o estresse oxidativo. Estratégias para neuroproteção são investigadas para minimizar tais déficits após um evento isquêmico, especialmente aquelas capazes de modular o estresse oxidativo, seja melhorando a atividade antioxidante, ou diminuindo a produção de espécies reativas de oxigênio. Nesse estudo, nós investigamos o potencial neuroprotetor do exercício físico e do chá verde em um modelo animal de isquemia-reperfusão. Para isso, 80 ratos Wistar machos foram divididos em 8 grupos de acordo com a presença das intervenções para neuroproteção (8 semanas de exercício físico e/ou suplementação de chá verde) e para isquemia (oclusão, ou não, bilateral das carótidas comuns por 30 minutos). O exercício físico baseou-se em corrida, realizada em esteira, durante 30 minutos por dia, 5 vezes na semana. Para a suplementação com chá verde, a infusão foi colocada no lugar da água de beber, sendo trocada diariamente. Ao final das 8 semanas de intervenções foi realizado a cirurgia e 24h depois a memória foi avaliada em uma tarefa não aversiva e um teste de memória aversiva. Passados os testes comportamentais, o hipocampo e córtex pré-frontal foram removidos para análise bioquímica de marcadores de estresse oxidativo. Os resultados mostraram que a isquemia-reperfusão prejudica a aprendizagem e a memória, além de aumentar espécies reativas de oxigênio no hipocampo e no córtex pré-frontal. Oito semanas de exercício físico e/ou suplementação com chá verde antes do evento de isquemia-reperfusão foram capazes de promover neuroproteção; ambos os tratamentos, por separado ou em conjunto, reduziram os déficits cognitivos e foram capazes de manter o nível funcional das enzimas antioxidantes. / Ischemic stroke is a major cause of morbidity and mortality all over the world. Among impairments observed in survivors is a significant cognitive learning and memory deficit. It is believed that these deficits are due to oxidative stress caused by ischemia-reperfusion. Neuroprotective strategies are investigated to minimize such deficits after an ischemic event, especially those strategies that modulate oxidative stress by improving the antioxidant activity or decreasing the production of reactive oxygen species. Here we investigated the neuroprotective potential of physical exercise and green tea in an animal model of ischemia-reperfusion. Eighty male Wistar rats were divided into 8 groups and subjected to 8 weeks of exercise and / or supplementation with green tea before submission to a surgery and transient cerebral ischemia or a sham operation. The physical exercise was treadmill running performed 5 times per week during 30 minutes and the green tea was put in place of drinking water and daily changed. Ischemia-reperfusion was performed by occlusion of the bilateral common carotid arteries during 30 min. Later, memory was evaluated in aversive and in a non-aversive tasks. Hippocampus and prefrontal cortex were removed for biochemical analyses of possible oxidative stress effects. Ischemia-reperfusion impaired learning and memory and reactive oxygen species were increased in the hippocampus and prefrontal cortex. Eight weeks of physical exercise and/or green tea supplementation before the ischemia-reperfusion event showed a neuroprotective effect; both treatments by separate or together reduced the cognitive deficits and were able to maintain the functional level of antioxidant enzymes and glutathione.

No presente trabalho é apresentado o Teste de Omissões Voluntárias (Square-Skipping Test, SST), uma versão de papel e lápis da tarefa computadorizada do sinal inibitório. Na primeira parte do trabalho, são relatados estudos que utilizaram uma tarefa computadorizada do sinal inibitório com estímulos excitatórios e inibitórios apresentados visualmente em um procedimento lateralizado. As estratégias de esperar o sinal inibitório foram controladas com sucesso mediante o controle "on-line" da estabilidade dos tempos de reação ao sinal excitatório. Um dos objetivos foi elucidar algum possível fator comum subjacente ao desempenho na tarefa do sinal inibitório e no Teste da tarefa Dupla. Os tempos de reação ao sinal inibitório não foram afetados pela lateralização, enquanto que os tempos de reação ao sinal excitatório direito foram os mais rápidos. Esta vantagem, a qual parece envolver especialização hemisférica e comunicação interhemisférica, correlacionou com a perda no desempenho da tarefa de box-crossing quando combinada com a tarefa verbal no Teste da Tarefa Dupla. A diferença Parte B-menos-Parte A do Trail Making Test correlacionou com os tempos de reação simples. Os resultados também sugerem a associação entre o tempo de reação simples e funções executivas. Foi descartada uma assimetria no sentido do deslocamento da atenção entre hemicampos para explicar a vantagem dos tempos de reação ao sinal excitatório direito. O tempo de reação simples parece ser uma medida de capacidade executiva. A comparação do desempenho de adultos idosos e jovens, medido pela tarefa computadorizada, demostrou que o controle inibitório não foi afetado de forma significativa pela idade. Na segunda parte do trabalho, é apresentado o SST, o qual permite obter de forma prática e rápida, medidas da habilidade inibitória e outras capacidades executivas tais como a flexibilidade cognitiva, a atenção concentrada e a velocidade na busca visual. O SST foi validado mediante a comparação com o desempenho na tarefa computadorizada do sinal inibitório. A execução do SST requer marcar com ‘Xs’ quadradinhos alinhados em um caminho irregular impressos em uma folha A4 (Parte D), sendo que nas Partes A, B e C devem-se omitir alguns quadradinhos indicados. Na terceira tentativa do SST deve ser escrita a seqüência de dígitos ‘1, 2, 3’. A correlação com o teste computadorizado do sinal inibitório sugeriu que o controle inibitório seria medido pela Parte D preenchida com a seqüência de dígitos (Parte D3). A idade não afetou de forma significativa o desempenho na Parte D3. O fator idade parece afetar seletivamente o desempenho nas diferentes partes do SST; p. ex. na Parte A1, que correlacionou com o coeficiente de atenção concentrada do Teste de Toulouse-Pièron. Para evitar os efeitos da prática sobre o desempenho no SST, recomenda-se a execução do Teste da Tarefa Dupla antes da execução do SST, e de preferência na mesma sessão experimental. / The present study aims to contribute to the understanding of the inhibitory ability, within the framework of the neuropsychology. The objective was to develop a paper-and-pencil test to assess the ability to stop an action in a simple and rapid way. A computerized stop signal task was used to validate the test. In the first part of this work, studies that involved the computerized stop signal task are presented. The result of these studies allowed to raise some theoretical issues. The paper-and-pencil test is presented in the second part of this work. In the Experiment 1 the aim was to control experimentally the strategy of waiting for the stop-signal on a lateralized stop signal task, by means of an algorithm, which controlled, on-line, the variation of response latencies for the go-signal (GSRT). Thirty-four healthy volunteers participated in this study. The GRST of the group that performed the task without the algorithm were significantly higher than the GSRT of the group that performed the task with the algorithm, whereas the stop-signal reaction times did not reach significant differences between groups. This procedure provided more stable reaction times throughout the task, and shifted the probability of responding on stop-trials from 0.364 to 0.479. The Experiment 2 studied the relationship between reaction time, laterality, and executive functions were examined by employing two computerized tasks with lateralized visual stimuli. Simple reaction time (SRT) was correlated with the Part B-minus-A difference of Trail Making Test (TMT). No significant difference was found between left and right SRT. Reaction times for left go-signals of the Stop-task were longer than reaction times for right go-signals. The ratio of left go-signal-minus left SRT to right go-signal-minus-right SRT was correlated with the loss in the visuospatial component when it was combined with a concurrent verbal task in the Dual-Task Test. Results suggest association between SRT and executive functions, and the involvement of hemispheric specialization and interhemispheric transfer in both, the stop signal task and the Dual-Tasks Test. Results from Experiment 3 permit to discard the possibility that the observed right visual field advantage observed was due to the orienting of attention across hemifields. The left GSRT were significantly slower than right GSRT. The right GRST advantage was not due to an attentional shift between left and right visual hemifields. In the Experiment 4, the stopping ability of older people in the computerized stop task was explored. There were no significant differences between the stopping ability of older and younger adults. The Square-skipping Test (SST) a paper-an-pencil version of the stop signal computerized task. is described in the second part of this study. The SST is divided in four parts. The effect of the administration of the different parts of the SST was studied in Experiment 5. The results allow for the use of the four parts in the same trial, since there was no effect of order of administration. In Experiment 6 it was studied the effect of placing a digit sequence on the third trial of the test, instead of the X’s. It seems that a greater degree on the inhibitory ability is necessary to perform the task with the sequence "1, 2, 3", than with the sequence "3, 2, 1". Thus, the sequence "1, 2, 3" was used in the final version of the SST. The practice effects of the Dual-Task Test on the SST was studied in Experiment 7. The interaction Group x Trial showed a general decrease on the performance of participants without previous practice in the Dual-task Test, contrasting with the performance of participants with within-session practice, which showed a clear digit sequence load effect. The aim of Experiment 8 was to know possible aging effects in the performance of SST. A general decrease was observed in the performance of older adults compared with performance of young adults; the interaction Group x Trial showed that the slope of the curves were different. The performance in SST is significantly affected by age. Performance in SST correlated with performance in the stop signal and the SRT tasks, respectively. Performance in SST also correlates with TMT, with the visuospatial component of the mu index of the Dual-task and with the attention coefficient of the Toulouse-Pièron Test. The best predictor of the stopping ability was the performance on the Part D with the digit sequence (Part D3). Thus, SST seems to be a useful neuropsychological tool for the assessment of several executive functions, including the stopping ability, mental flexibility, speed for visual search and focused attention.

As deficiências de aprendizado são características comuns em pacientes afetados pela doença do xarope do bordo (DXB) ou pela acidemia metilmalônica. Os sintomas predominantemente neurológicos destas doenças incluem o retardo mental, atraso no desenvolvimento neuropsicomotor, convulsões e alterações neuroradiológicas variadas. Na DXB, a deficiência da atividade do complexo enzimático desidrogenase dos a-cetoácidos de cadeia ramificada acarreta o acúmulo tecidual dos aminoácidos leucina, valina e isoleucina, dos a-cetoácidos correspondentes, ácido a-cetoisocapróico, a-cetoisovalérico e a-ceto-b-metilvalérico, bem como dos a-hidroxiácidos que destes se derivam, ácido a-hidroxiisocapróico, ácido a-hidroxiisovalérico e ácido a-hidroxi-b- metilvalérico. Na acidemia metilmalônica, por sua vez, ocorre um acúmulo tecidual do ácido metilmalônico devido à deficiência da enzima metilmalonil-CoA mutase. Os níveis teciduais destes metabólitos aumentam ainda mais durante crises de descompensação metabólica. No presente trabalho investigamos o efeito da administração intrahipocampal dos metabólitos ácidos acima citados sobre o comportamento de ratos adultos, dez minutos antes ou imediatamente após o treino, em tarefas aversivas (esquiva inibitória) e não aversivas (habituação ao campo aberto). Déficits de aprendizado nas tarefas da esquiva inibitória e da habituação ao campo aberto foram observados para os metabólitos supracitados quando administrados antes do treino, mas não quando foram injetados após o treino. O o ácido metilmalônico injetado dez minutos antes do treino provocou déficit somente no teste de memória espacial, não surtindo efeito sobre a memória quando os animais foram testados na tarefa de esquiva inibitória. O pré-tratamento destes animais com substratos energéticos foi capaz de prevenir o déficit de memória causado por metabólitos acumulados nas doenças estudadas. Quando utilizou-se a creatina monohidratada ou o ácido succínico evidenciou-se prevenção do déficit de memória espacial causado pela administração do ácido a-hidroxiisovalérico no hipocampo de ratos adultos. Por sua vez, apenas o prétratamento com creatina monohidratada foi o único capaz de prevenir o déficit de memória de ratos administrados intrahipocampalmente com o ácido metilmalônico. Os estudos de captação de glutamato por fatias de córtex cerebral de ratos jovens evidenciaram diminuição na captação de L-[3H]glutamato quando as fatias eram incubadas por 23 minutos na presença dos ácidos CIC e HMV (25-50% de diminuição). Em contrapartida, a incubação com o ácido HIV aumentou a captação em 110%, acréscimo que foi prevenido quando ao meio de incubação foi adicionado 1mM de creatina monohidratada. Por último, verificamos que a viabilidade de células de córtex cerebral ou de hipocampo de ratos jovens não foi alterada quando medida através do método do MTT e da determinação da DHL no meio de incubação onde as fatias eram imersas. Em resumo, nossos resultados apontam para alterações importantes no aprendizado de animais tratados intrahipocampalmente com os metabólitos ácidos da DXB em tarefas aversivas e não aversivas, bem como alterações de aprendizado não essencial quando da administração do principal metabólito que se acumula na acidemia metilmalônica (MMA). Além disso, estes déficits comportamentais parecem estar ligados a um comprometimento do metabolismo energético cerebral, visto que o prétratamento com creatina em estudos com metabólitos que se acumulam nas duas doenças (HIV para a DXB e MMA para a acidemia metilmalônica) preveniu o déficit de memória destes animais, bem como o pré-tratamento com succinato evitou o déficit de aprendizado espacial causado pelo HIV nos animais. Por outro lado, antioxidantes ou o antagonista do receptor glutamatérgico NMDA MK-801 não preveniu esses efeitos. Além disso, apresentamos evidências de que o CIC e o HMV ativam o sistema glutamatérgico, bloqueando a captação de glutamato por fatias de córtex cerebral de ratos jovens, levando a um aumento da quantidade dos neurotransmissores na fenda sináptica. / Learning disability is a common feature of patients affected by maple syrup urine disease (MSUD) or methylmalonic acidaemia. The neurological symptoms include mental retardation, delay on neuropsychomotor development, seizures and alteration on neuroradiological images. MSUD is caused by severe deficiency of the branched-chain L-a-keto acid dehydrogenase complex (BCKAD) activity leads to tissue accumulation of aminoacids leucine, valine and isoleucine, the branched chain keto acids, a-ketoisocaproic, a-ketoisovaleric and a-keto-b-methylvaleric, and corresponding a-hydroxyacids, a-hydroxyisocaproic, a-hydroxyisovaleric and a- hydroxy-b-methylvaleric. The tissual accumulation of methylmalonic acid is the biochemical hallmark of the methylmalonic acidaemia because the methylmalonyl-CoA mutase is defective on this disease. The tissual levels of these metabolites are more proeminents in crisis of metabolic decompensation. In the present study we investigated the effect of acute administration of the acid metabolites cited above on the behavior of adult rats in the inhibitory avoidance and open field habituation tasks. The DXB acid metabolites producing learning deficits on aversive and spatial learning when infused 10 minutes before the training session of the tasks but not when infused immediatelly after training. The MMA injected 10 minutes before training provokes deficit only in the spatial task, and do not caused any effect on animals submitted to inhibitory avoidance task. The pretreatment with energetic substrates was the only effective on prevent the memory deficit caused by metabolites accumulating on MSUD or methylmalonic acidaemia. The prevention of the spatial memory deficit caused by a-hydroxyisovaleric acid was achieved by administration of creatine monohydrated or succinic acid. The creatine monohydrated was the only effective on prevention of learning deficit of open field habituation provoked by methylmalonic intrahippocampal administration. The results of cerebral glutamate uptake of 30 day-old rats showed a reduction of 25-50% by 30 min treatments with a-ketoisocaproic acid and a-hydroxy-b-methylvaleric acid, respectively. Differently, the a-hydroxyisovaleric acid elevated by 110% the glutamate uptake and the creatine monohydrated pretreatment (1mM) was effective on prevented this effect. We veryfied that cellular viability of cerebral cortical slices incubated with acid metabolites of MSUD was normal when the studies on cellular viability were performed by MTT method and by mean of the LDH activity in the incubation bath of the cells. The results of cerebral glutamate uptake of 30 day-old rats showed a reduction of 25- 50% by 30 min treatments with a-ketoisocaproic acid and and a-hydroxy-b- methylvaleric acid, respectively. Differently, the a-hydroxyisovaleric acid elevated by 110% the glutamate uptake on cortical slices of yang rats, and the creatine monohydrated pretreatment was effective on the prevention of this effect. In conclusion, our results pointing to strong alterations on learning of animals treated with MSUD acids metabolites on aversive and non aversive tasks., and suggest that non essential alterations occur on learning of animals treated with methylmalonic acid, which may be of value to elucidate some aspects of the neurological dysfuncion occuring on these diseases. The behavioral deficits may be linked to a compromise on cerebral energetic metabolism because the pre treatment with energetic substrates was effective on prevention in memory deficits caused by HIV and MMA. Otherwise, focal effects on glutamatergic system may be the causative of learning deficits provoked by administration of CIC and HMV, it is reasonable because the uptake of glutamate was reduced on rats treated with these metabolites, and it is causative of elevation on neurotransmitter levels in the synaptic cleft.