Memoria para optar al título profesional de Ingeniero Agrónomo Mención Sanidad Vegetal / Callisphyris apicornis Fairmaire & Germain (Coleoptera: Cerambycidae) es una especie xilófaga nativa y polífaga, que ataca: manzanos, membrillero, feijoa, y zarzaparrilla. Para incrementar el conocimiento acerca de la biología sexual de esta especie, información relevante para desarrollar estrategias de control de plagas basadas en semioquímicos. Se analizó comportamiento de cortejo y cópula en 31 secuencias exitosas (terminaron en cópula), grabadas en video en el campo. Los pasos observables, homogéneos y discretos realizados por machos y hembras fueron identificados. Las frecuencias de individuos que realizaron los pasos fueron colocadas en celdas (en una tabla de contingencia) indicando el número de individuos que, habiendo realizado un paso previo, realizaron el paso siguiente (cadenas de primer orden de Markov). La prueba exacta de Fisher fue utilizada para identificar dependencia entre pasos. Las frecuencias de la transición fueron calculadas y las que fueron significativas se utilizaron para construir un etograma que muestra la secuencia, las frecuencias, y las rutas seguidas por insectos. El índice de estereotipia fue utilizado para identificar la variabilidad dentro de la secuencia. Se utilizó la regresión logística binaria para identificar si la temperatura ambiente, velocidad de viento, y hora del día fueron variables significativas. Las secuencias del comportamiento fueron altamente aeterotipadas y no azarozas. La secuencia del comportamiento en machos fue caracterizada por: "aproximacion", "monta", "aproximación de genitalias", "cópula", "desacople", "guardia", y "vuelo". Las hembras tienden a permanecer inmóvil durante la cópula. El primer contacto ocurre entre las antenas y patas del macho con diferentes partes del cuerpo de la hembra. El cortejo es breve e imperceptible. La hembra acepta o rechaza a los machos escapando o pateándolos con su tercer par de patas. Solo la temperatura ambiente fue significativa para la ocurrencia del comportamiento, mayoritariamente entre los 19 y 23º C. En términos generales, los resultados sugieren que el comportamiento sexual en machos de Callisphyris apicicornis es compatible con el desarrollo de técnicas de control mediante feromonas. / Callisphyris apicornis Fairmaire & Germain (Coleoptera: Cerambycidae) is a native xylophagous, and polyphagous species, affecting apples, quincy, feijoa, and zarzaparrilla (Ribes spp). In order to increase the knowledge about this species sexual biology, information relevant to develop semiochemical-based pest control strategies, courtship and mating behaviors were analyzed in 31 successful sequences (ending in mating), videotaped in the field. Observable, homogeneous, and discrete steps performed by males and females were identified. Frequencies of individuals performing the steps were placed in cells (in a contingency table) indicating the number of individuals that, having performed a previous step, were performing the current one (first order Markov chains). Fisher test was used to identify dependency between steps. Transition frequencies were calculated and significant ones were used to build an ethogram showing the sequence, frequencies, and routes followed by insects. A stereotypy index was used to identify the variability within the sequence. Binary logistic regression was used to identify whether ambient temperature, wind speed, or the time of the day were significant variables. The behavioral sequences were non random and highly stereotyped. The sequence in males was characterized by “approaching”, “riding”, “genitalia approaching”, “mating”, “uncoupling”, “guarding”, and “flight”. Females tend to stay stationary during mating. First contact used to occur between antennae and legs males with different parts of the female body. Courtship was brief and unconspicuous. Females either accepted/rejected males by walking away or by kicking them with their last pair of legs. Only ambient temperature was significant for the occurrence of the behavioral sequence, mostly between 19º to 23º C. Overall, results suggest that sexual behavior in Callisphyris apicicornis males is compatible with the development of pheromone-based management and control techniques.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La tripanosomiasis americana es una enfermedad crónica transmitida principalmente por vectores. Estos vectores triatominos hematófagos transmiten Trypanosoma cruzi a una amplia variedad de mamíferos, que por lo general son su fuente de alimento. Esta Memoria de Título tuvo como objetivo determinar el perfil de la alimentación de Mepraia spinolai, un vector triatomino silvestre, presente en zonas endémicas de Chile. Los insectos fueron capturados en las regiones de Coquimbo, Valparaíso y Metropolitana. Las muestras de contenido intestinal fueron analizadas por un ensayo de inmunoabsorción ligado a una enzima (ELISA) estandarizado en este estudio, que identifica y discrimina la presencia de antígenos séricos de Homo sapiens sapiens y nueve especies de animales (Canis familiaris, Felis catus, Capra hircus, Mus musculus, Gallus gallus, Octodon degus, Thylamys elegans, Phyllotis darwini y Oryctolagus cuniculus). Los anti-sueros contra estas especies se utilizaron a diluciones de 1: 40.000 a 1: 800.000, seguido de una IgG de cabra anti-conejo (anticuerpo secundario) diluido 1: 2000, y la adición del sustrato azino-bis 3-etilbenzotiazolin- 6-ácidosulfónico (ABTS). Las absorbancias se leyeron a 405 nm de longitud de onda en un lector de ELISA (Bio-Rad ®). Los resultados se expresaron en forma descriptiva en frecuencias. Nuestros resultados indican que la fuente de alimentación más frecuente en esta área fue P. darwini, seguido de O. degus, O. cuniculus, M. musculus, G. gallus, T. elegans, C. familiaris, F. catus y C. hircus. También se identificaron las fuentes de alimentación mixtas. / American trypanosomiasis is a chronic disease transmitted mainly by vectors. The hematophagous triatomine vectors transmit Trypanosoma cruzi to a wide variety of mammals, which usually are their food source. This Undergraduate Thesis aimed to determine the feeding profile of Mepraia spinolai, a sylvatic triatomine vector, present in endemic areas of Chile. The insects were captured in the regions of Coquimbo, Valparaiso and Metropolitana. Samples of intestinal contents were analyzed by an Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) standardized in this study, that identifies and discriminates the presence of serum antigens from Homo sapiens sapiens and nine animal species (Canis familiaris, Felis catus, Capra hircus, Mus musculus, Gallus gallus, Octodon degus, Thylamys elegans, Phyllotis darwini and Oryctolagus cuniculus). Anti-sera against these animals were used at dilutions of 1: 40,000 to 1: 800,000, followed by a secondary goat anti-rabbit IgG diluted 1: 2000, and the addition of azino-bis substrate 3-etilbenzotiazolin- 6-ácidosulfónico (ABTS). The absorbances were read at 405 nm wavelength on an ELISA reader (Bio-Rad ®). The results were descriptively expressed in frequencies. Our data indicate the most frequent feeding source in this area was P. darwini, followed by O. degus, O. cuniculus, M. musculus, G. gallus, T. elegans, C. familiaris, F. catus and C. hircus. Mixed food sources were also identified. / Financiamiento: Proyecto Fondecyt No. 1100339 y Proyecto Fondecyt Iniciación No. 11110251.

Tesis para optar al Grado de Magíster en Ciencias Animales y Veterinarias mención Medicina Preventiva Animal. / Financiamiento: Proyecto Fondecyt 1140650.

Biocandle es un modelo de negocio que busca alcanzar la demanda del mercado de repelentes de insectos. Está diseñado en la presentación de una vela aromática que ahuyenta a los insectos y al mismo tiempo proporciona propiedades de aromaterapia que agregan valor a través de las diferentes esencias utilizadas para su elaboración, y a diferencia de otros productos, está hecho con componentes naturales que no son dañinos. a la salud de las personas. El problema que encontramos y, por lo tanto, nos motivó a llevar a cabo este proyecto es que muchas personas tienen problemas con los insectos, sin embargo, no encuentran la manera perfecta de lidiar con ellos, ya que las alternativas que existen actualmente en el mercado no son agradables. para ellos debido al olor y la toxicidad en el caso de tabletas repelentes o repelentes en aerosol y la textura cuando se aplica a la piel en el caso de repelentes en crema. Para comprender el problema, hicimos un análisis del mercado a través de entrevistas y, en consecuencia, pudimos validar el interés en el producto descrito anteriormente. Además, aplicamos diferentes herramientas durante el proyecto, tales como DAFO, marketing y recursos humanos, finanzas y análisis de costos con datos reales de los suministros necesarios para la elaboración y el costo de entrega, entre otros. / Biocandle is a business model that seeks to reach the market demand of insect repellents. It is designed in the presentation of an aromatic candle that drives away insects and at the same time it provides aromatherapy properties which add value through the different essences used for its elaboration, and unlike other products, it is made with natural components that are not harmful to people's health. The problem we have found and therefore, motivated us to carry out this project is that many people have problems with insects, however, they do not find the perfect way to deal with them, since the alternatives that currently exist in the market are not pleasant for them due to the smell and toxicity in the case of repellent tablets or spray repellents and the texture when applied to the skin in the case of cream repellents. To understand the problem, we did an analysis to the market through interviews and in consequence, we were able to validate the interest in the product described above. Moreover, we applied different tools during the project such as SWOT, marketing and human resources, Finance and cost analysis with real data of the supplies needed for the elaboration and delivery cost, among others. / Trabajo de investigación

El virus de la laringotraqueitis infecciosa (VLTI) es responsable de una importante enfermedad respiratoria en aves. La glicoproteína G (gpG) es un factor de virulencia en el VLTI, identificada como una proteína viral de unión a quimioquinas (CKBP) capaz de unirse a quimioquinas de aves y de otras especies modulando su actividad. Esto hace de la gpG una proteína de interés científico y comercial, requiriéndose, por lo tanto, tener suficiente cantidad de proteína disponible para futuros estudios funcionales y estructurales. Se describe un método para la producción de gpG recombinante del VLTI en un biorreactor de tanque agitado, infectando la línea celular de Spodoptera frugiperda Sf-9 con el baculovirus BV-gpG. Para este fin, fue necesario una caracterización previa del crecimiento de las células Sf-9; a su vez, optimizar la producción de gpG a pequeña escala y finalmente, definir parámetros operacionales en el biorreactor Biostat B plus que aseguren un ambiente hidrodinámico adecuado para el crecimiento e infección de las células. Las células Sf-9 mostraron una velocidad específica máxima de crecimiento (µmax) de 0,026/h, un tiempo de doblaje poblacional (TDP) de 27 horas y una densidad celular máxima de 8,7x106 cel/mL. A pequeña escala, la producción de gpG fue mayor al cosechar las células a las 72 horas post infección (hpi) independientemente de la multiplicidad de infección (MOI) empleada en el rango de 1,2 a 20. Una mayor producción de gpG fue obtenida al infectar las células durante la fase de crecimiento exponencial temprana comparada a la fase de crecimiento exponencial tardía. La densidad óptima de infección varió en dependencia del empleo de medio condicionado (2x106 cel/mL) o de medio fresco (7x106 cel/mL). En el manejo del biorreactor, se observó que el empleo de una velocidad de agitación de 170 rpm, una tasa de aireación de 0.04 vvm y un valor de pO2 de 40%, mostraron que las células Sf-9 no fueron sensibles a un estrés de corte de 0.38 N/m2 a un valor de número de Reynolds alto (20x104) en condiciones de aireación por sparger. Una eficiente producción de gpG en 3,5 L de biorreactor fue lograda infectando el cultivo en fase de crecimiento exponencial, a una densidad de 2x106 cel/mL, un MOI de 2 y cosechado a las 72 hpi. Mediante un ELISA sandwich se logró cuantificar el rendimiento volumétrico de gpG his, el cual fue de 3.66 mg/L, lo que representa un aumento de 2 fold comparado a la producción en el matraz. Los resultados demuestran la factibilidad de producir glicoproteína G en células de insecto infectadas con un baculovirus a escala de biorreactor. / Tesis

Determina el porcentaje de Lutzomyias naturalmente infectadas con Bartonella bacilliformis usando la técnica de PCR en tiempo real. Esta prueba es desarrollada en un trabajo anterior para poder detectar cantidades tan pequeñas como 100fg de ADN de Bartonella en Lutzomyias. Se utiliza el protocolo anterior usando primers del gen del citrato sintetasa como blanco. En este estudio se estandariza la prueba en un equipo de tiempo real diferente y se refina el protocolo para obtener mejores resultados. Se procesan muestras de la zona epidémica de Cusco, zona donde se encuentra distribuida la especie Lutzomyia peruensis. Se usa las Lutzomyia peruensis hembras sin alimentar en grupos de cinco (pool) para extraer el ADN. Los resultados obtenidos de las 627 muestras procesadas, 45 muestras son positivas que equivale a un rango de infección de 7.18%. La sensibilidad de la prueba es 100% y especificidad es de 95.50% basada en las pruebas usando muestras controles. / Tesis

We present comments on an article published by Villacañas de Castro and Hoffmeister (2020). The authors studied a tritrophic system composed of a plant, its pollinating seed predator, and a parasitoid of the latter. Their concern was whether the parasitoid modifies the interaction between the plant and its pollinator-herbivore along the mutualism-antagonism gradient, but they reduced their question to how the parasitoid impacts plant fitness. After showing that the parasitoid increases seed output of the plant by decreasing the amount of seeds consumed by the pollinating seed predator, they tested whether seed output is a good proxy for plant fitness. They argue that it is not by showing that the increased seed density has a negative impact in survival probability and flower production, likely due to plant intraspecific competition. The work presented shows careful experimentation and interesting results, but we do not share some of their conclusions. Most importantly, we believe that the net effect of the parasitoid on the plant-herbivore interaction can’t be adequately investigated by focusing on individual plant fitness. Thus, we first suggest considering the number of surviving plants up to adulthood as a proxy for population performance to address this question. Using this proxy, we show that the increase in seed output due to the parasitoid is beneficial to the plant population until its carrying capacity is achieved. Next, using a population dynamics model, we show under which particular conditions the negative effect of intraspecific competition outweighs the positive effect of seed density increase (due to parasitoid’s defense). When these conditions don’t hold, the role of plant intraspecific competition is basically limited to the prevention of unbounded population growth, while the parasitoid’s net effect is an increase in the plant’s equilibrium density over its carrying capacity when interacting only with the pollinating seed predator, thus making the system more stable.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / En Chile se han reconocido tradicionalmente dos vectores de la enfermedad de Chagas: Triatoma infestans (vector doméstico), que se encuentra prácticamente erradicado de las viviendas humanas; y Mepraia espinolai (vector silvestre), que ha cobrado particular importancia en los últimos años debido al potencial que tiene de invadir y colonizar viviendas humanas. El objetivo de esta memoria fue determinar en terreno la capacidad de M. spinolai para seleccionar hospederos, ocupando como modelo al conejo europeo (Oryctolagus cunuculus) y a roedores silvestres. El diseño experimental consistió en colocar en terreno una jaula con un conejo de pequeño tamaño, otra con un roedor silvestre y una tercera jaula vacía como control. Las jaulas fueron colocadas sobre una bandeja plástica que permitía recolectar las vinchucas atraídas por los diferentes hospederos. Para determinar el efecto de la temperatura radiante superficial de los hospederos, se realizó el mismo diseño anterior, pero las jaulas fueron cubiertas con plumavit de 5 cm. de espesor, lo que permitía mantenerlas aisladas de la temperatura ambiental. Con un equipo datalogger se obtuvo un registro de la temperatura al interior y exterior de las jaulas. En el primer diseño experimental se observó que las vinchucas seleccionaron a los animales y no al control. De un total de 730 vinchucas recolectadas en los 79 experimentos realizados, un 65,38 % fueron capturadas en el conejo, un 35,34 % fueron capturadas en el roedor y sólo un 0,27 % de ellas se encontraron en el control. Estas diferencias fueron significativas con el control, pero no entre animales. Al comparar los promedios de insectos atraídos por cada mamífero no se encontraron diferencias significativas. Las fechas en que se realizó el estudio influyeron significativamente en el promedio de insectos capturados. Al comparar entre meses dentro del año 2004, no se encontraron diferencias significativas en ambos mamíferos, a diferencia de lo que ocurrió en el año 2005. En la serie de experimentos con jaulas cubiertas con plumavit, se observó que de un total de 188 insectos capturados en los 55 experimentos realizados, un 51,6 % fueron recolectados en el conejo, un 45,74 % fueron recolectadas en el roedor y un 2,65 % de ellos se encontraron en el control. Las diferencias fueron significativas con el control, pero no entre mamíferos. Tampoco se obtuvo un resultado significativo al comparar los promedios de insectos atraídos por cada animal. Las fechas no influyeron significativamente en los promedios de insectos capturados. Sin embargo, al comparar la selección de cada animal entre meses, sí se encontraron diferencias significativas. No se encontraron diferencias significativas al comparar la captura de vinchucas entre el conejo c/plumavit y s/plumavit. Lo mismo se observó en el roedor. Con los datos obtenidos se puede concluir que M. spinolai es un insecto oportunista, el cual se alimenta dependiendo de la oferta disponible de mamíferos en el ambiente. Para este triatomino la temperatura ambiental y el calor radiante de los hospederos tienen un importante rol en su actividad y en la atracción hacia una presa animal. / FONDECYT No.1040711

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La enfermedad de Chagas, zoonosis ampliamente distribuida en América, es causada por el protozoo Trypanosoma cruzi que es transmitido principalmente a través de las deyecciones de insectos hematófagos de la subfamilia Reduviidae. En Chile existen dos vectores reconocidos de la enfermedad de Chagas: Triatoma infestans (ciclo doméstico) y Mepraia spinolai (ciclo silvestre), denominadas vulgarmente como vinchucas. Estos artrópodos al adaptarse a una alimentación exclusiva de sangre han desarrollado modificaciones anatómicas, fisiológicas y conductuales. Existen diversos factores claves de sus potenciales hospederos que le permiten al insecto realizar con éxito la detección y selección de éstos. Entre los más relevantes se pueden citar la temperatura superficial, CO2, estímulos visuales, olfativos y factores nutricionales de la sangre. El objetivo de esta memoria fue determinar la selección de hospedero por M. spinolai bajo condiciones de laboratorio, ocupando como modelos a dos hospederos habituales de este insecto: Oryctolagus cuniculus (conejo europeo) y Octodon degus (degu). Se estableció la capacidad de M. spinolai de seleccionar entre estos dos hospederos en función de la diferencia de temperatura superficial radiante, del CO2 y olor emitido por estos hospederos, como factores de atracción efectivos para el insecto. En el laboratorio se confrontaron insectos de terreno y laboratorio, frente a conejos (adultos y juveniles) y degus (adultos). Se construyeron tres tipos de dispositivos con el fin de que el insecto, estando expuesto según fuera el caso sólo a la temperatura, sólo al olor (con o sin supresión del CO2) o a todos los factores de atracción emitidos por hospederos, pudiera seleccionar a uno de los mamíferos. Se monitoreó la temperatura ambiental y superficial de los hospederos, el CO2 emitido y la humedad ambiental, además se midió la frecuencia de elección de hospedero y la latencia de elección. Se observó que vinchucas de terreno, enfrentadas a gabinetes con o sin hospedero, seleccionaron significativamente más los que alojaron a un animal adulto (p < 0,02). Cuando los insectos fueron confrontados al par degu adulto/conejo juvenil, demoraron menos tiempo en elegir al degu (p = 0,025). Cuando los insectos estuvieron expuestos sólo a la temperatura superficial, prefirieron al conejo adulto (p < 0,05), excepto los insectos de terreno que prefirieron al roedor cuando 2 este fue confrontado al conejo juvenil (p < 0,05). En el experimento en que a las vinchucas sólo se les permitió percibir el olor de los mamíferos, los insectos prefirieron conejos a los que no se les suprimió su emisión de CO2 (p < 0,001) demorándose menor tiempo las vinchucas de terreno en seleccionar a sus hospederos (p = 0,01). Los resultados de los otros experimentos que evaluaron la importancia del olor y CO2 emitido por los hospederos, no permiten realizar afirmaciones concluyentes respecto a preferencia e importancia de claves olfativas. Con los datos obtenidos se puede concluir que M. spinolai prefiere y selecciona hospederos adultos, sin que pareciese importar el efecto especie. Además el insecto es más atraído por fuentes térmicas cuya magnitud sobrepase la temperatura ambiental, cuando ésta se encuentra dentro de su rango óptimo de preferencia. Cuando a las vinchucas se les permitió estar en contacto sólo con el olor emitido por los potenciales hospederos, hubo una clara preferencia sólo por el conejo al que no se le suprimió su emisión de CO2. Estos resultados nos indican que bajo condiciones de laboratorio, la temperatura superficial y el olor son los estímulos más relevantes en la decisión de selección de hospedero por parte de M. spinolai. Además, se puede suponer que las claves emitidas por los hospederos deben sobrepasar un umbral sobre el cual M. spinolai va a elegir oportunísticamente. / Proyecto FONDECYT No.1040711

Se evaluó las diferencias bioquímicas en el ámbito de la actividades proteolíticas y de la inhibición de la actividad proteolítica ensayas con proteínas de hojas de papa, entre los clones "resistentes" (282LM87B, 220LM87B, 136LM86B y 662LM86B) y "susceptible" (Revolución) a la mosca minadora Liriomyza huidobrensis, Blanchard (Díptera, Agromyzidae), una plaga perjudicial del cultivo de la papa (Solanum tuberosum spp) especialmente en lugares donde el uso de insecticidas es intenso. Las plantas de papa resistentes, y Revolución, fueron sometidas previamente al daño por el ataque de adultos de la mosca minadora (daño por mosca) o por herida con estilete (daño artificial), y para ser evaluados mediante el grado de inducción de las proteínas en las hojas. Entre los clones resistentes, se encontró importantes márgenes de variación de las actividades proteolíticas en las hojas y la inhibición proteolítica de los extractos de larvas por efecto de las proteínas de hojas de los clones 282LM87B y 662LM86B con respecto a Revolución. Las unidades de actividad proteolítica por gramo de proteína de las de hojas (ug-') y las unidades de actividad proteolítica de larvas (U) fueron 20,5 ug-' y 0.05 U con 282LM87B; 20.83 ug-' y 0,12 U con 662LM86B y 17,5 ug-' y 0,25 U con Revolución, respectivamente. Mediante ensayos de zimografía para determinar isoinhibidores de proteasas se encontró dos bandas, de 63 y 105 kDa de peso molecular aproximado, expresados mayormente entre los clones resistentes. Este ensayo determinó una diferenciación visual importante entre los clones resistentes con el susceptible. Se siguió el nivel de expresión de la banda de 105 kDa entre plantas de diferentes edades (20-80 días) dañadas artificialmente y en el cual se observó disminución en el nivel de su expresión en plantas de más de 60 días. Se discute la correlación de los niveles mayores de actividad proteolítica y de la inhibición de la actividad proteolítica hallados en los clones resistentes, especialmente en 282LM87B, con el atributo de la resistencia a la mosca minadora. Palabras claves: Sólanum tuberosum, mosca minadora, zimografia, plantas resistentes.