Introdução: Citomegalovírus (CMV) é um DNA vírus de alta prevalência, e tem uma capacidade peculiar de infectar e permanecer integrado ao DNA das células do hospedeiro, mantendo-se na forma de infecção latente. O vírus também pode ocasionar doença, o que normalmente ocorre em pacientes imunocomprometidos, promovendo o aumento da morbidade e mortalidade nestes pacientes. As doenças inflamatórias intestinais (DII), doença de Crohn (DC) e retocolite ulcerativa (RCU), são enfermidades crônicas que afetam o trato gastrointestinal. A fisiopatologia e o tratamento destas doenças, muitas vezes, pode induzir um estado de imunossupressão. Isso incitou a ideia de que os pacientes com DII são mais susceptíveis à infecção e doença por CMV. Ainda há dúvidas e controvérsias sobre a relação entre a doença inflamatória intestinal e o CMV. Objetivos: Avaliar a frequência de infecção por CMV em pacientes com doença inflamatória intestinal, e se existe associação entre replicação viral do CMV com a atividade da DII, mediante índices clínicos e laboratoriais. Metodologia: Pacientes com DII previamente diagnosticada foram submetidos à entrevista, revisão de registros e coleta de amostras de sangue e fezes. Foram realizados os seguintes exames: pesquisa de citomegalovírus por IgG e IgM no sangue, pela técnica de reação em cadeia por polimerase (PCR) em tempo real no sangue e pela técnica de PCR qualitativa nas fezes. Estes resultados foram correlacionados com os valores de hemoglobina, proteína C-reativa, velocidade de hemossedimentação, calprotectina fecal e índices clínicos. Resultados: Quatrocentos pacientes foram elegíveis, sendo 249 com DC e 151 com RCU. No grupo de pacientes com DC, 67 apresentavam doença moderada ou grave pelo índice clínico, porém 126 se mostravam com doença ativa mediante a avaliação da calprotectina fecal. No grupo de pacientes com RCU, 21 exibiam doença moderada pelo índice clínico, mas 76 se encontravam com doença ativa, mediante a avaliação da calprotectina fecal. Drogas imunossupressoras foram amplamente utilizadas pelos pacientes, 143 pacientes com DC faziam uso de azatioprina e, destes, 48 usavam terapia combinada (anti TNF-alfa + azatioprina). Na RCU, a azatioprina foi usada por 41 pacientes e, destes, sete faziam uso de terapia combinada. Avaliando os dois grupos, 90,9% dos pacientes apresentaram anticorpos IgM contra o CMV no sangue e dez pacientes também exibiram IgG. A detecção do DNA CMV PCR em tempo real no sangue apresentou valores abaixo do limite inferior (150 cópias/mL) em todos os 400 pacientes. Enquanto isso, o DNA CMV PCR qualitativo, realizado na amostra fecal, indicou nove pacientes expressando valores positivos. Com efeito, nos 400 pacientes, identificaram-se 332 infectados sem replicação viral, 19 pacientes com replicação viral e 24 não infectados. Os pacientes com DII em uso de terapia combinada apresentaram uma chance maior de replicação viral 3,63 vezes em comparação aos pacientes que não fizeram uso deste tratamento. Conclusão: A infecção latente pelo CMV foi bastante prevalente, mas a infecção ativa foi rara. A utilização de terapia combinada, entretanto, em doentes com DII, tem associação com a replicação viral do CMV, mas sem indicar relação com a atividade inflamatória da DII / Background: Cytomegalovirus (CMV) is a highly prevalent DNA virus that has a peculiar ability to infect the host and remains integrated to his DNA as a latent infection. The virus can also appear in the form of disease, which most commonly occurs in immunocompromised patients, increasing their morbidity and mortality. Inflammatory bowel diseases (IBD), Crohn\'s disease (CD) and ulcerative colitis (UC) are chronic diseases that affect the gastrointestinal tract. The pathophysiology and treatment of these diseases often induce a state of immunosuppression, hence the assumption that patients with inflammatory bowel disease may be at greater risk for cytomegalovirus disease. However, there are still doubts and controversies about the relationship between IBD and CMV. Aim: Evaluate the frequency of CMV infection in patients with IBD correlating it with clinical and laboratorial activity indices of IBD. Methods: Patients with a previous diagnosis of IBD underwent interviews, a medical record review and collection of blood and fecal samples. The search of CMV was performed by IgG and IgM blood serology, real-time PCR in blood and qualitative PCR in feces. These results were correlated with red blood cell levels, Creactive protein, erythrocyte sedimentation rate and fecal calprotectin. Patients with CD were evaluated by Crohn\'s disease activity index and UC patients, by Truelove & Witts index. Results: Four hundred patients were eligible: 249 patients with CD and 151 with UC. In the CD group, using clinical index, 67 patients had moderate or severe disease, but 126 patients presented with active disease by evaluating fecal calprotectin. In patients with UC, 21 exhibited moderate disease by clinical index, but 76 patients presented with active disease by evaluating fecal calprotectin. Immunosuppressive drugs were widely used by patients. On CD, 143 patients of them were using azathioprine, and of these, 48 were using combo therapy (anti TNFalpha + azathioprine). On the UC, azathioprine was used in 41 patients, and seven of these were taking combo therapy. The great majority of patients (90,9%) had positive CMV IgG, ten patients had positive CMV IgM, nine patients had positive qualitative detection of CMV DNA by PCR in faeces, and in all 400 patients quantitative detection of CMV DNA by real-time PCR in blood was negative. In the 400 patients, we identified 332 CMV infected without viral replication, 19 patients CMV infected with viral replication (active infection) and 24 non-infected CMV patients. Analyzing the 19 patients with active infection, we only found an association with the use of combo therapy (anti TNF-alpha + azathioprine), and patients on combo therapy have a viral replication chance 3.63 times compared to patients who do not use this treatment. Conclusion: Latent cytomegalovirus infection is extremely frequent in the inflammatory bowel disease population, but the active cytomegalovirus infection is rare; and the use of combination therapy in patients with IBD is associated with viral replication of CMV, but without presenting relation to inflammatory activity of IBD

Introdução: O envolvimento gastroduodenal pode ocorrer na doença de Crohn (DC). Seu diagnóstico histológico definitivo é habitualmente realizado através da demonstração do granuloma não caseoso. O achado de gastrite focal H. pylori negativa em biopsias gástricas de pacientes com DC ileal e/ou colônica, apesar de não ser específico, também sugere o envolvimento da doença neste segmento. Objetivos: avaliar a frequência da gastrite focal em pacientes com DC comparada à de pacientes com retocolite ulcerativa (RCU) e controles, assim como as frequências da infecção pelo H. pylori nessas populações e correlacioná-las com a presença de gastrite focal; avaliar a capacidade da imunohistoquímica em diferenciar a gastrite focal nos três grupos; avaliar as associações entre dados demográficos, aspectos clínicos, laboratoriais, uso de medicamentos, presença de sintomas do trato gastrintestinal (TGI) superior e achados endoscópicos com presença de gastrite focal em pacientes com doença inflamatória intestinal (DII); e avaliar a associação entre uso de medicamentos nesses pacientes e infecção pelo H. pylori. Métodos: Foram estudados 62 pacientes com DC, 35 pacientes com RCU e 40 pacientes controles. Todos foram submetidos à endoscopia digestiva alta (EDA) com biopsias para o teste da urease, exame histológico e imunohistoquímico. Resultados: Dos 137 pacientes estudados foram excluídos dois pacientes com DC e um com RCU. Não houve diferença estatisticamente significante entre os grupos com relação à idade (p=0,921) e sexo (p=0,192). A maioria dos pacientes com DC estava em remissão clínica (75%). Cerca de 80% dos pacientes com DC faziam uso de azatioprina. H. pylori foi positivo em 18/60 (30%) pacientes com DC, 12/34 (35%) na RCU e 20/40 (50%) no grupo controle sem diferença estatisticamente significante entre os grupos (p=0,131). Não foram observadas associações estatisticamente significantes entre uso de medicamentos e infecção pelo H. pylori nos pacientes com DII. A gastrite focal H. pylori negativa foi diagnosticada em 7/42 (16,7%) na DC, 3/22 (13,6%) na RCU e 2/20 (10%) no grupo controle, sem diferença estatisticamente significante entre eles (p=0,919). A gastrite focal H. pylori positiva foi diagnosticada em 2/18 (11%) na DC, 3/12 (25%) na RCU e 7/20 (35%) no grupo controle, sem diferença estatisticamente significante (p=0,213). Não foram observadas associações estatisticamente significantes entre características clínicas, laboratoriais, uso de medicamentos, sintomas do TGI superior, achados endoscópicos e gastrite focal. No entanto, foi observado que o uso de azatioprina nos pacientes com DC H. pylori negativos apresentou uma tendência a reduzir a gastrite focal. A imunohistoquímica da gastrite focal dos pacientes com DC e RCU H. pylori negativos foi semelhante e diferiu do grupo controle por este apresentar um maior acúmulo de linfócitos B (CD20). Já a imunohistoquímica da gastrite focal dos pacientes com DC, RCU e controles H. pylori positivos foi indistinguível. Conclusões: Pacientes com DII tendem a ser menos infectados pela bactéria H. pylori. A frequência de gastrite focal H. pylori negativa diagnosticada em nosso estudo foi menor do que a descrita na literatura. O uso de imunossupressor (azatioprina) pode estar relacionado com tal achado / Introduction: Gastroduodenal involvement may occur in Crohns disease (CD). Definitive histological diagnosis of CD in the upper gastrointestinal (GI) tract normally relies on the demonstration of epitheloid granuloma which is considered the histological hallmark of gastric CD. If granulomas are absent, the description of focally enhanced gastritis (FEG) or focal active gastritis in gastric biopsies of patients with known ileal and/or colonic CD, although not exclusive to CD, suggests the involvement of the disease at this site. Objectives: To access the prevalence of FEG in CD patients compared with a group of ulcerative colitis (UC) and CD/UC-free controls, as well as the frequencies of H. pylori infection in those population and correlate them to the presence of FEG; evaluate the capacity of immunohistochemistry in differentiating FEG in the three groups; evaluate the correlation with demographic and clinical characteristics, laboratory findings, current medical therapy as well as the presence of forgut symptoms and mucosal lesions at endoscopy with the presence or absence of FEG in patients with inflammatory bowel disease (IBD) and evaluate the association between medical therapy and H. pylori infection in IBD patients. Methods: We studied 62 patients with CD, 35 patients with UC and 40 patients from control group. All underwent upper GI endoscopy. Biopsy specimens taken from angulus, antrum and gastric body were evaluated by urease test, histology and immunohistochemistry. Results: Of the 137 patients studied we excluded 2 patients with CD and 1 with UC. There was no statistically significant difference among the groups in terms of age (p=0.921) and gender (p=0.192). The majority of CD patients were in clinical remission (75%). Around 80% of CD patients were taking azathioprine. H. pylori was positive in 18/60 (30%) CD patients, in 12/34 (35%) UC and in 20/40 (50%) controls with no statistically significance difference among the groups (p=0.131). No association was found between use of medications and H. pylori infection in IBD patients. In H. pylori negative patients, FEG was diagnosed in 16.7% cases (7/42) of CD, compared with 13.6% (3/22) of UC patients and 10% (2/20) of controls, with no statistically significance difference among them (p=0.919). In H.pylori positive patients, FEG was diagnosed in 11% cases (2/18) of DC, 25% (3/12) in UC and 35% (7/20) of controls with no significant difference among them (p=0.213). There was no statistical interrelationship between FEG and demographic and clinical characteristics, laboratory findings, use of medications, upper GI symptoms and endoscopic findings. However, it was observed that use of azathioprine in H. pylori negative CD patients presented a tendency to reduce FEG. In H. pylori negative patients, immunohistochemistry of FEG of CD and UC was similar and differed from controls as it presented a higher accumulation of B lymphocytes (CD20). On the other hand in H. pylori positive IBD patients, immunohistochemistry of FEG was indistinguishable from controls. Conclusions: IBD patients tend to be less infected by H. pylori. The frequency of H. pylori negative FEG diagnosed in our study was lower than described in literature. The use of immunossupressants (azathioprine) may be related to such findings

Submitted by Eunice Novais (enovais@uepg.br) on 2018-02-22T13:31:43Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Nauana Hay Paiva.pdf: 2299112 bytes, checksum: d9eac670828127f267396863b468ab2f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-22T13:31:43Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Nauana Hay Paiva.pdf: 2299112 bytes, checksum: d9eac670828127f267396863b468ab2f (MD5) Previous issue date: 2017-07-07 / As vilosidades intestinais são estruturas digitiformes da camada mucosa do intestino delgado que ampliam a superfície desse órgão, otimizando o processo de absorção dos nutrientes. A morfogênese das vilosidades intestinais ocorre de forma indireta em galinhas. Primeiramente, surgem projeções longitudinais da mucosa. Essas projeções sofrem dobramento e adquirem padrão zigue-zague, que é a base para a formação das vilosidades. Estudo anterior do nosso grupo relatou pela primeira vez que as projeções da mucosa de embriões de galinhas se bifurcavam. Entretanto, embora vários aspectos morfológicos da morfogênese das vilosidades intestinais de galinhas sejam conhecidos, não há na literatura dados a respeito da bifurcação das projeções da mucosa. O objetivo do presente trabalho foi compreender o papel da bifurcação na morfogênese das vilosidades intestinais no jejuno de embriões de galinhas. Análises histológicas, avaliação da proliferação celular pela incorporação de BrdU e reação de PAS foram realizadas durante o período de ocorrência da bifurcação. Para avaliar a proliferação celular, a injeção de BrdU in ovo foi padronizada. As análises histológicas permitiram estabelecer que a bifurcação ocorre entre o 13º e 15º dia e definir a sequência de mudanças morfológicas do processo. A avaliação da proliferação celular mostrou que as células do epitélio da mucosa e as envolvidas no processo de bifurcação estavam proliferando. A reação de PAS revelou a presença de membrana basal nas células envolvidas na bifurcação. Os dados permitem concluir que o processo de bifurcação envolve mudanças morfológicas correlacionadas à proliferação de células epiteliais que culminam com a formação das pré-vilosidades. / The intestinal villi are finger-like projections of the small intestinal mucosa that extend its surface, optimizing the process of nutrient absorption. The intestinal villi morphogenesis of the chick occurs indirectly. At first, longitudinal previllous ridges appear in the intestine. The previllous ridges fold into zigzag pattern, and finally individual villi are formed. Our previous study reported, for the first time, the bifurcation of the previllous ridges on chick embryos. Although morphological aspects of the intestinal villi morphogenesis of the chickens are known, there are no data from the previllous ridges bifurcation. The present work aimed to understand the role of bifurcation in the intestinal villi morphogenesis of the chick embryos. Histological analysis, evaluation of cell proliferation by incorporation of BrdU and PAS reaction were performed during the period of bifurcation. To evaluate cell proliferation, injection of BrdU in ovo was standardized. The histological analyses allowed to establish that the bifurcation occurs between the 13th and 15th day and to define the sequence of morphological events during the process. The evaluation of cell proliferation showed that cells of the mucosal epithelium and involved in the bifurcation were proliferating. The PAS reaction revealed the presence of basement membrane in the cells involved in the bifurcation process. The data allow us to conclude that the morphological changes of the bifurcation are correlated to the proliferation of epithelial cells and culminate to formation of previllous.

O intestino apresenta a maior área do corpo exposta ao ambiente, recebendo constantemente antígenos provenientes da alimentação e de microrganismos. A fim de manter a homeostase, evitando respostas inflamatórias desnecessárias e ao mesmo tempo respondendo apropriadamente à possíveis ameaças ao tecido, as células intestinas tem que ser capazes de perceber e responder apropriadamente a uma diversa gama de perturbações vindas do ambiente. Além do seu vasto sistema imune o intestino também abriga o maior número de neurônios fora do sistema nervoso central, os quais compõe o Sistema Nervoso Entérico (SNE). O SNE é composto por aproximadamente 100 milhões de neurônios que são capazes de regular autonomamente diversas funções fisiológicas do intestino e também de receber e enviar sinais para os sistemas nervoso autônomo simpático e parassimpático. Diversas evidências clínicas correlacionam inflamações intestinais com alterações no SNE, demonstrando a importância de se entender melhor as relações neuroimunes presentes no intestino. Os macrófagos são células essências da imunidade inata que residem tanto na área do intestino conhecida como lâmina própria como também na área conhecida como muscularis. Essas células fagocíticas desempenham um importante papel nas respostas antibacterianas e também na manutenção da homeostase do tecido, sendo capazes de adaptar rapidamente sua fisiologia em resposta aos sinais ambientais. Neste trabalho avaliamos a existência de uma comunicação bidirecional entre macrófagos e neurônios intestinais. Caracterizamos as duas populações de macrófagos presentes no intestino em homeostase e após um estimulo com SpiB um mutante de Salmonella, avaliando assim como estas células respondem à sinais de infecção provenientes do lúmen intestinal. Utilizando abordagens in vivo e in vitro, observamos que os macrófagos presentes na região da muscularis respondem rapidamente a uma possível infecção presente no lúmen regulando positivamente genes de proteção tecidual e reparo de danos, como Arg1 e Chi3l3. Nossos resultados indicam ainda que são os neurônios através da liberação de norepinefrina capaz de ativar os receptores β2 adrenérgicos presentes nos macrófagos intestinais que induzem a expressão dos genes relacionados com a proteção tecidual e reparo de danos. Observamos ainda que esta via induzida através da ativação dos receptores β2 adrenérgicos parece conferir também aos macrófagos um papel neuro-protetor em caso de danos teciduais. Em conjunto nossos resultados indicam a presença de uma comunicação neuroimune bidirecional entre os neurônios e macrófagos intestinais capaz de modular a resposta dos macrófagos a uma infecção entérica e de proteger os neurônios em caso de danos teciduais / The intestine is the largest area of the body exposed to the environment, which receives food and microbe antigens. In order to maintain homeostasis, avoiding unnecessary inflammation, and at the same time responding properly to potential treats to the tissue, intestinal cells must be able to sense and respond properly to this diverse set of environmental perturbations. In addition to a vast immune system, the intestine also harbors the largest collection of neurons outside the central nervous system, which constitute the enteric nervous system (ENS). The ENS is composed of approximately 100 million neurons that are capable of regulating the physiological functions of the gut autonomously and also receive input and send signals to the sympathetic and parasympathetic nervous system. Numerous clinical findings correlate gut inflammation with abnormalities in the ENS, revealing the importance of a better understanding of the neuro-immune interactions at this site. Macrophages comprise an essential innate immune cell residing both in the intestinal lamina propria and muscularis regions. These phagocytic cells play important roles in anti-microbial responses but also in tissue homeostasis, being able to quickly adapt their physiology in response to environmental cues. We evaluated the crosstalk between intestinal macrophages and surrounding enteric neurons, characterizing how these cells respond to possible infection in the intestinal lumen. Using in vivo and in vitro approaches, we found that macrophages in the intestinal muscularis quickly respond to a possible distal luminal infection, up regulating tissue-protective and wound repair genes, like Arg1 and Chi3l3. Also, our results indicate that the neurons trough norepinephrine release and subsequent activation of the β2 adrenergic receptor present on the intestinal macrophages are the ones up regulating tissue-protective and wound repair genes. We also observed that this pathway, trough the β2 adrenergic receptor activation seems to induce a neuro-protective role to these macrophages under tissue damage scenarios. All together our results indicate that a neuro-immune crosstalk between neurons and macrophages modulates macrophages response towards enteric infections and confers neuro-protection in case of tissue damage

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-12-02Bitstream added on 2014-06-13T19:27:36Z : No. of bitstreams: 1 alvaradocastillo_jd_me_jabo.pdf: 988380 bytes, checksum: 09570908d8a54c64319e62527b7b0239 (MD5) / A larvicultura é uma das fases críticas na produção intensiva de peixes ornamentais, principalmente quanto à alimentação, uma vez que para cobrir as exigências nutricionais das larvas, são fornecidas elevadas quantidades de alimento vivo (náuplios de Artemia) o que, conseqüentemente, aumenta os custos nesta fase de criação. Neste contexto, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da substituição precoce e gradual do alimento vivo (A) pelo alimento inerte (R) sobre o desempenho zootécnico das larvas de acará bandeira. Foram conduzidos seis experimentos com duração de 5, 8, 11, 14, 17 e 24 dias após o início da alimentação exógena (IAE). Em cada experimento, o delineamento experimental foi em blocos casualizados (desovas) com sete tratamentos: jejum, ração, Artemia e quatro diferentes tempos para iniciar a retirada total do alimento vivo (9, 12, 15 e 18 dias após o IAE). A substituição do alimento vivo pelo inerte teve um período de alimentação mista de três dias antes da retirada total dos náuplios de Artemia. Durante esse período o alimento vivo foi reduzido gradualmente em proporções de 25%, 50% e 75% a cada dia. Durante todo o período experimental a qualidade da água foi mantida em condições ideais para o bom desenvolvimento da espécie. Em síntese, a alimentação com náuplios de Artemia quando comparados com a ração como alimento inicial, favoreceu o crescimento das larvas e desenvolvimento das vilosidades intestinais. Embora, as larvas alimentadas apenas com ração mostraram-se capazes de sobreviver e crescer, a criação é inviável em termos produtivos. As taxas de sobrevivências das larvas que receberam náuplios de Artemia não apresentaram diferenças significativas entre os tratamentos avaliados. No entanto, aquelas alimentadas com dieta viva por um período maior, apresentaram melhores taxas de crescimento... / Larviculture is one of the critical aspects in intensive production of ornamental fish, especially including feed once that to provide the nutritional requirements of larvae, are necessary large amounts of live food (Artemia nauplii), which therefore increases the costs in this rearing phase. In this context, the aim of this study was to evaluate the effects of early and gradual replacement of live food (A) by inert on the growth performance of larvae angelfish. Six experiments were performed with lasting of 5, 8, 11, 14, 17 and 24 days after the beginning of exogenous feeding (BEF). The experimental design was randomized blocks (spawnings) with seven treatments: fasting, diet inert, Artemia and four different times to start the total withdraw of live food (9, 12, 15 and 18 days after BEF). During throughout the experimental period the water quality were maintained at ideal conditions for the successful development of the specie. Replacement of live food by inert diet had a mixed period of three days before the complete withdraw of Artemia, and the amount of this was gradually reduced in proportions of 25%, 50% and 75% in each day. In summary, feeding with Artemia nauplii when compared to formulated diet as initial food, favored the growth larvae and the normal gut development. Although, the larvae fed exclusively with formulated diet was able to survive and grow, rearing is not viable in productive terms. Survival rates of larvae fed with Artemia nauplii showed no significant differences between the treatments. However, those fish that were fed with live diet for a longer period showed the best and highest growth rates, final biomass, alometric condition factor, size uniformity and showed few visible morphological changes in the epithelial lining of the intestinal villi or few signs of excessive scaling epithelium, when compared to larvae in which the replacement was done earlier... (Complete abstract click electronic access below)

O intestino apresenta a maior área do corpo exposta ao ambiente, recebendo constantemente antígenos provenientes da alimentação e de microrganismos. A fim de manter a homeostase, evitando respostas inflamatórias desnecessárias e ao mesmo tempo respondendo apropriadamente à possíveis ameaças ao tecido, as células intestinas tem que ser capazes de perceber e responder apropriadamente a uma diversa gama de perturbações vindas do ambiente. Além do seu vasto sistema imune o intestino também abriga o maior número de neurônios fora do sistema nervoso central, os quais compõe o Sistema Nervoso Entérico (SNE). O SNE é composto por aproximadamente 100 milhões de neurônios que são capazes de regular autonomamente diversas funções fisiológicas do intestino e também de receber e enviar sinais para os sistemas nervoso autônomo simpático e parassimpático. Diversas evidências clínicas correlacionam inflamações intestinais com alterações no SNE, demonstrando a importância de se entender melhor as relações neuroimunes presentes no intestino. Os macrófagos são células essências da imunidade inata que residem tanto na área do intestino conhecida como lâmina própria como também na área conhecida como muscularis. Essas células fagocíticas desempenham um importante papel nas respostas antibacterianas e também na manutenção da homeostase do tecido, sendo capazes de adaptar rapidamente sua fisiologia em resposta aos sinais ambientais. Neste trabalho avaliamos a existência de uma comunicação bidirecional entre macrófagos e neurônios intestinais. Caracterizamos as duas populações de macrófagos presentes no intestino em homeostase e após um estimulo com SpiB um mutante de Salmonella, avaliando assim como estas células respondem à sinais de infecção provenientes do lúmen intestinal. Utilizando abordagens in vivo e in vitro, observamos que os macrófagos presentes na região da muscularis respondem rapidamente a uma possível infecção presente no lúmen regulando positivamente genes de proteção tecidual e reparo de danos, como Arg1 e Chi3l3. Nossos resultados indicam ainda que são os neurônios através da liberação de norepinefrina capaz de ativar os receptores β2 adrenérgicos presentes nos macrófagos intestinais que induzem a expressão dos genes relacionados com a proteção tecidual e reparo de danos. Observamos ainda que esta via induzida através da ativação dos receptores β2 adrenérgicos parece conferir também aos macrófagos um papel neuro-protetor em caso de danos teciduais. Em conjunto nossos resultados indicam a presença de uma comunicação neuroimune bidirecional entre os neurônios e macrófagos intestinais capaz de modular a resposta dos macrófagos a uma infecção entérica e de proteger os neurônios em caso de danos teciduais / The intestine is the largest area of the body exposed to the environment, which receives food and microbe antigens. In order to maintain homeostasis, avoiding unnecessary inflammation, and at the same time responding properly to potential treats to the tissue, intestinal cells must be able to sense and respond properly to this diverse set of environmental perturbations. In addition to a vast immune system, the intestine also harbors the largest collection of neurons outside the central nervous system, which constitute the enteric nervous system (ENS). The ENS is composed of approximately 100 million neurons that are capable of regulating the physiological functions of the gut autonomously and also receive input and send signals to the sympathetic and parasympathetic nervous system. Numerous clinical findings correlate gut inflammation with abnormalities in the ENS, revealing the importance of a better understanding of the neuro-immune interactions at this site. Macrophages comprise an essential innate immune cell residing both in the intestinal lamina propria and muscularis regions. These phagocytic cells play important roles in anti-microbial responses but also in tissue homeostasis, being able to quickly adapt their physiology in response to environmental cues. We evaluated the crosstalk between intestinal macrophages and surrounding enteric neurons, characterizing how these cells respond to possible infection in the intestinal lumen. Using in vivo and in vitro approaches, we found that macrophages in the intestinal muscularis quickly respond to a possible distal luminal infection, up regulating tissue-protective and wound repair genes, like Arg1 and Chi3l3. Also, our results indicate that the neurons trough norepinephrine release and subsequent activation of the β2 adrenergic receptor present on the intestinal macrophages are the ones up regulating tissue-protective and wound repair genes. We also observed that this pathway, trough the β2 adrenergic receptor activation seems to induce a neuro-protective role to these macrophages under tissue damage scenarios. All together our results indicate that a neuro-immune crosstalk between neurons and macrophages modulates macrophages response towards enteric infections and confers neuro-protection in case of tissue damage

Escherichia coli enteroinvasora (EIEC) é um dos agentes etiológicos da disenteria bacilar, caracteriza-se pela destruição do epitélio do cólon provocado pela resposta inflamatória induzida após invasão da mucosa por bactérias. Cepas de EIEC são bioquímica, genética e patogênica semelhante a Shigella spp. A patogenicidade de EIEC e Shigella dependem da presença da pInv plasmídeo, que contém os genes necessários para a colonização bacteriana na mucosa intestinal. Recentemente, demonstrou-se que genes plasmidias ospC1, ospG e ospF de S. flexneri estão envolvidos na inibição da resposta inflamatória em células epiteliais intestinais, um fator importante na iniciação da colonização bacteriana e produção de doença. Como a EIEC mostrou doença menos grave, foi analisada as sequências de aminoácido, avaliada a transcrição destes genes plasmídiais e resposta inflamatória modulada por este micro-organismo na célula epitelial intestinal Caco-2. As células Caco-2 foram infectadas em momentos diferentes com 11 sorotipos de EIEC e S. flexneri (M90T). Os dados sobre a capacidade de invasão e sobrevivência de bactérias, expressão de genes de bactérias e da quimiocina IL-8 foram obtidos por CFU, RT-PCR, e ELISA, respectivamente. A significância estatística foi avaliada por ANOVA de dois fatores. Os 11 sorotipos de EIEC estudados apresentaram similaridade de 100% com S.flexneri para OspC1 e OspF,contudo, foram diferentes na homologia do OspG. Quando comparamos as sequências de aminoácido dos 11 sorotipos observamos 100% de similaridade entre eles para OspG, sugerindo o envolvimento destas proteínas na modulação da resposta imune induzida por estes micro-organismos. Os sorotipos de EIEC apresentam diferenças na capacidade de invasão dos enterócitos. Algumas diferenças significativas foram observadas na transcrição dos genes e na produção de IL-8. Os sorotipos de EIEC O29: H-e O167: H-apresentou um baixo transcrição de genes ospC1 e ospF, e um aumento significativo na produção de IL-8 quando comparado com outros sorotipos. Além disso, demonstrou que a maior transcrição destes genes por alguns sorotipos de EIEC parecem estar relacionados com a menor indução de IL-8. Estes dados sugerem que as proteínas OspC1 e OspF desempenham um papel na resposta inflamatória. No entanto, não se observou relação na transcrição ospG para a produção de IL-8. Estes resultados sugerem que as proteinas efetoras OspC1 e OspF estão envolvidas na inibição da resposta inflamatória em células epiteliais do intestino favorecendo a invasão da EIEC. / Enteroinvasive E. coli (EIEC) is one of the etiological agents of bacillary dysentery, it is characterized by the destruction of the colonic epithelium caused by the inflammatory response induced upon invasion of the mucosa by bacteria. Strains of EIEC are biochemical, genetic and pathogenic similar to Shigella spp. The pathogenecity of EIEC and Shigella depend on the presence of the plasmid pInv, which contains the genes necessary for bacterial colonization in the intestinal mucosa. Recently, it was demonstrated that the plasmid genes ospC1, ospG and ospF of S. flexneri are involved in inhibition of the inflammatory response in intestinal epithelial cells, an important factor in the initiation of bacterial colonization and production of disease. As EIEC has showed less severe disease, we evaluated the transcription of these plasmid genes and inflammatory response modulated by this microorganism in the intestinal epithelial cell Caco-2. The Caco-2 cells were infected in different times with 11 serotypes of EIEC and S. flexneri M90T strain. The data about sequences of amino acids, invasiveness and survival of bacteria, bacterial genes expression, and chemokine IL-8 were obtained by CFU, RT-PCR, and ELISA, respectively. The statistical significance was evaluated by two-way ANOVA. All EIEC serotypes studied showed 100% similarity with S.flexneri to OspC1 and OSPF, however, were different in the homology of OspG. Compared the amino acid sequences of the 11 serotypes observed 100% similarity between them to OspG, suggesting the involvement of them in modulating of the immune response induced by these microorganisms. There were no differences in the invasion the enterocytes among EIEC serotypes. However, some significant differences were observed in the transcription of those genes and production of IL-8. The EIEC serotypes O29:H- and O167:H- showed a low transcription of genes ospC1 and ospF, and a significant increase in production of IL-8 when compared with other serotypes. Furthermore, it was shown that the high transcription of ospF and ospC1 by some EIEC serotypes are related to low induction of IL-8. These data suggested that the proteins OspC1 and OspF play a role in the inflammatory response. However, we did not observed association between ospG transcription to the production of IL-8. These results lead us to believe that the effector proteins OspF and OspC1 are involved in inhibition of the inflammatory response in intestinal epithelial cells favoring the EIEC invasion.

Orientador: Semíramis Guimarães Ferraz Viana / Resumo: Giardia duodenalis é um dos principais agentes etiológicos de diarreia infecciosa, sobretudo em crianças em idade pré-escolar que vivem em comunidades de baixa renda. Estudos da diversidade genética de G. duodenalis ampliaram o conhecimento da epidemiologia nas infecções humanas, entretanto um dos temas mais interessantes e menos conhecidos é a possível interação de Giardia com o microbioma do hospedeiro e com patógenos concomitantes. No presente estudo, avaliou-se a composição e a diversidade da comunidade bacteriana de crianças saudáveis e crianças com diarreia, parasitadas por Giardia e outros protozoários intestinais. Os isolados de Giardia obtidos nessa população foram caracterizados geneticamente. Amostras de fezes foram obtidas de 181 crianças de 0 a 6 anos de idade, das quais 156 crianças hígidas atendidas em centros de educação infantil e 25 crianças com diarreia atendidas no PS Infantil Municipal. Cada amostra de fezes foi processada para o exame microscópico e submetida à extração de DNA a ser empregado em duas etapas distintas: (1) amplificação e sequenciamento Sanger para a caracterização genética de Giardia e o diagnóstico de Blastocystis sp, Dientamoeba fragilis, Enterocytozoon bieneusi e Cryptosporidium spp. e (2) amplificação do gene 16s RNA ribossomal e sequenciamento de nova geração (plataforma Illumina MiSeq) para a caracterização da microbiota intestinal. Giardia (36,5%) e Blastocystis (41,7%) foram os parasitas mais prevalentes. A caracterização genética... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Giardia duodenalis is one of the major etiological agents of infectious diarrhea, especially in preschool children living in low-income settings. Studies focused on genetic diversity of G. duodenalis have provided insights for a better understanding of epidemiology in human infections. However, one of the most interesting and least known issues is the possible interplay between Giardia and the host microbiome and concomitant pathogens. In this work, we evaluated the diversity and composition of bacterial community of healthy children and children presenting with diarrhea infected by Giardia and/or other intestinal protozoa. In addition, Giardia isolates infecting this population were genotyping. A total of 181 stool samples from children aged 0 to 6 years old (156 from daycare children and 25 from diarrheic children attending in an emergence pediatric center) were tested by microscopic examination and submitted to DNA extraction for the following steps: (1) conventional PCR/sequencing for Giardia genotyping and the diagnosis of Blastocystis sp, Dientamoeba fragilis, Enterocytozoon bieneusi and Cryptosporidium spp and (2) next-generation sequencing (Illumina MiSeq) based analysis of intestinal microbiota. Giardia (36.5%) and Blastocystis (41.7%) were the most prevalent parasites. Analysis of Giardia sequences retrieved from 61 isolates revealed infections by assemblages A (31%), B (69%) and mixed infections A+B (3%). Metagenomic analyzes revealed similarity of bacterial microb... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Sérgio Alberto Rupp de Paiva / Resumo: A Doença Inflamatória Intestinal (DII) apresenta curso variável. O tratamento adequado da fase aguda pode levar à remissão clínica da doença, cujo seguimento ocorre ambulatorialmente. Nesta condição, os pacientes mantêm hábito de vida normal e alguns ainda permanecem com inflamação. Esta situação de doença e estilo de vida pode interferir na composição corporal e no estado nutricional dos pacientes. Doença de Crohn (DC) e Retocolite Ulcerativa (RCU) são doenças heterogêneas em diversos aspectos, dentre eles na composição corporal e no estado nutricional. O objetivo do estudo foi avaliar clusters relacionados à variação do estado nutricional na DIl. Foi realizado estudo transversal com pacientes com DII, submetidos a avaliação clínica (Crohn’s Disease Activity Index (CDAI), escore de Mayo e uso de medicações), nutricional (recordatório de 24 horas, International Physical Activity Questionnaire (IPAQ), peso, estatura, Índice de Massa Corporal (IMC), absorciometria por raios-X de dupla energia (DEXA), análise de bioimpedância elétrica (BIA), força de preensão manual, teste de caminhada de 6 minutos) e laboratorial (hemoglobina (Hb), hematócrito (Ht), Proteína C Reativa (PCR), velocidade de hemossedimentação (VHS), albumina). Com base nestes parâmetros, foram diagnosticados com Desnutrição (Global Leadership Initiative on Malnutrition, GLIM) e Sarcopenia (European Working Group on Sacopenia in Older People 2, EWGSOP2). Foram realizados testes estatísticos descritivos por meio do ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Inflammatory Bowel Disease (IBD) presents a variable course. Adequate treatment of the acute phase may lead to clinical remission of the disease, which is followed in the outpatient clinic. In this condition, patients maintain normal life habit and some still remain with inflammation. Both disease and lifestyle situation may interfere with the body composition and nutritional status of the patients. Crohn's disease (CD) and ulcerative colitis (UC) are heterogeneous diseases in several aspects, including body composition and nutritional status. The aim of the study was to evaluate clusters related to the variation of the nutritional status in IBD. A cross-sectional study was performed with IBD patients, by clinical (Crohn's Disease Activity Index (CDAI), Mayo score and medications), nutritional (24-hour recall, International Physical Activity Questionnaire (IPAQ), weight, stature, Body Mass Index (BMI), dual energy X-ray absorptiometry (DEXA), electrical bioimpedance (BIA), handgrip force, 6-minute walk test) and laboratorial evaluation (hemoglobin (Hb), hematocrit (Ht), C-Reactive Protein (CRP), erythrocyte sedimentation rate (ESR), albumin). Based on these parameters, were diagnosed Malnutrition (Global Leadership Initiative on Malnutrition (GLIM) and Sarcopenia (European Working Group on Sacopenia in Older People 2, EWGSOP2). Descriptive statistical tests were performed by mean ± standard deviation for numerical variables with normal or median distribution and quartiles (Q1... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Luiz Claudio Di Stasi / Resumo: A Doença Inflamatória Intestinal (DII) é uma doença inflamatória crônica e idiopática do intestino que inclui duas doenças distintas: a Doença de Crohn e a Retocolite Ulcerativa. Os pacientes acometidos pela DII podem sofrer de dor abdominal, diarreia e de outros sintomas socialmente inaceitáveis que comprometem sua qualidade de vida. Embora exista uma grande quantidade de fármacos destinados ao tratamento da DII, fatores como o alto custo de aquisição, os efeitos colaterais e o fato de uma parte dos pacientes não responderem inicialmente ao tratamento, têm despertado o interesse de pesquisadores na busca de novas abordagens de tratamento para a doença. Uma das alternativas é a utilização de produtos naturais com propriedades antioxidante e/ou imunomoduladora, assim como de produtos que possam modular a microbiota intestinal, prevenindo recidivas ou complementando o tratamento de pacientes acometidos pela DII. Com base nisso, estudos realizados por nosso grupo de pesquisa com a farinha de banana nanica verde (Musa sp AAA) demonstraram que a espécie apresentou um efeito anti-inflamatório intestinal. Considerando a similaridade química, a espécie Musa sp AAB (banana prata) foi selecionada para a realização do presente estudo. As bananas são ricas em fibras, amido resistente e fenóis, além de apresentarem alto valor nutricional por serem excelentes fontes de potássio, cálcio, fósforo e vitaminas A, B e C. De forma geral, as bananas apresentam atividades antidiarreica, antiulcero... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Inflammatory bowel disease (IBD) is a chronic and idiopathic inflammation of gastrointestinal tract that comprises two major disorders: Crohn's Disease and Ulcerative Colitis. Patients affected by IBD may suffer abdominal pain, diarrhea and other socially unacceptable symptoms that compromise their quality of life. Although there are a large number of drugs for the treatment of IBD, factors such as the high cost of acquisition, side effects and the fact that many patients do not respond initially to the available treatment, have aroused the interest of researchers to evaluate new therapeutic approaches to disease. One of these alternatives is the use of natural products with antioxidant and/or immunomodulatory properties, as well as products which can modulate the intestinal microbiota, preventing relapses or complementing patient treatments. Based on this, our research group conducted studies with green dwarf banana flour (Musa sp AAA) and demonstrated its intestinal anti-inflammatory effect. Bananas are rich in fiber, resistant starch and phenols, and have high nutritional value as they are excellent sources of potassium, calcium, phosphorus and vitamins A, B and C. Generally, bananas present antidiarrheal, antiulcerogenic, antimicrobial, hypoglycemic, antihypertensive, antihypertensive and diuretic activities. Indeed, Musa sp AAA variety increased the production of SCFAs probably because they produce prebiotic effects due to the presence of fibers and resistant starch in i... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre