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Structural characterization of JIP3 recruitment by Kinesin-1 / Caractérisation structurale du recrutement de JIP3 par la Kinésine-1Raio vilela, Fernando Augusto 06 June 2019 (has links)
Le transport intracellulaire de cargos est un processus critique au sein des cellules eucaryotes, et notamment au niveau des neurones, pour contrôler différentes fonctions dont la maturation et la transmission synaptique. La kinésine-1 est un moteur moléculaire capable de transporter différents types de cargos, comme des organelles, des vésicules ou des assemblages macromoléculaires le long des microtubules. La kinésine-1 est un hétérotétramère constitué d’un homodimère de chaînes lourdes (KHC) associé à deux chaînes légères (KLC) ; les deux chaînes, KHC et KLC étant capables de recruter des cargos. L’un des premiers cargos de la kinésine-1 à avoir été identifiés sont les protéines JIP3/4 (JNK-Interacting Protein 3/4) ; elles jouent aussi un rôle de protéines adaptatrices pour le transport d’autres cargos de la kinésine-1. La kinésine-1 recrute les protéines JIP3/4 de deux façons distinctes et indépendantes (i) via KHC et (ii) via KLC. Le recrutement de JIP3/4 par KHC et KLC est capable, via des mécanismes moléculaires distincts, d’activer la motilité de la kinésine-1 et donc de contrôler le transport intracellulaire dans lequel elle est impliquée et les fonctions associées au sein des neurones.Au cours de mon travail de thèse, j’ai contribué à caractérisé par des approches bio-informatiques, biochimiques/biophysiques et structurales, les deux modes de recrutement des protéines JIP3/4 par la kinésine-1 : (i) via KHC et (ii) via KLC. Ce travail a permis d’apporter des nouveaux éléments pour comprendre le mode de recrutement de ces protéines cargos/adaptatrices par la kinésine-1, mais aussi de mieux comprendre les mécanismes moléculaires de son activation par les protéines JIP3/4. / The intracellular transport of cargos is a crucial process on eukaryotic cells, and notably in neurons, in order to regulate different functions as cell’s maturation and synaptic transmission. The Kinesin-1 is a molecular motor capable of transporting different types of cargos as organelles, vesicles and macromolecular assemblies along the microtubules. It is a heterotetramer composed by a homodimer of heavy chains (KHC) bound to two light chains (KLC), where both KHC and KLC are capable of cargos recruitment. One of the first identified cargos of Kinesin-1 is JIP3/4 (JNK-Interacting Protein 3/4), which are also adaptor proteins, intermediating the transport of other cargos. Kinesin-1 recruits JIP3/4 by two different and independent modes, (i) via KHC and (ii) via KLC. Therefore, JIP3/4 recruitment by KHC and KLC activates the motility of Kinesin-1, by distinct mechanisms, allowing the intracellular transport of cargos and the associated functions in neurons. During my PhD, I contributed to the characterization of the dual binding mode of Kinesin-1 and JIP3/4 by bioinformatical, biochemical/biophysical and structural approaches. This work allowed a better understanding of the cargos’ recruitment by Kinesin-1, as well as the molecular mechanisms of Kinesin-1 activation by JIP3/4.
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Contrôle sensoriel de l'inhibition présynaptique des inputs musculaires lors de la locomotion fictiveMénard, Ariane January 2001 (has links)
Thèse numérisée par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.
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Récepteur liant le facteur activateur de plaquettes étude de la désensibilisation à long terme par un agoniste ou un agoniste inverseDupré, Denis J January 2004 (has links)
Le WEB2086 figure parmi les molécules ayant une activité inverse élevée pour le récepteur du PAF. Cette molécule a déjà été utilisée comme traitement pour l'asthme et représente une avenue intéressante pour une potentielle thérapie anti-cancéreuse. Nos résultats suggèrent que le WEB2086 permet la diminution de l'expression de son récepteur, le PAFR.Le même phénomène est observé avec l'agoniste PAF. Ces deux ligands n'ont cependant pas toutes les mêmes caractéristiques pharmacologiques. Nous avons donc décidé d'étudier les différentes voies de signalisation et de circulation intracellulaires activées suite à une stimulation au PAF ou au WEB2086.Le PAFR, qui peut être désensibilisé par les PKC, est phosphorylé suite à une stimulation au PAF ou au WEB2086 par des PKC d'isoformes différentes. Il semble que les PKC [bêta], [thêta] et [zêta] soit préférablement utilisées par le WEB2086, alors que les PKC [delta], [alpha], [epsilon] et [zêta] sont stimulées lorsque les récepteurs sont en mis présence de PAF. Les mécanismes régissant la signalisation et la circulation intracellulaire du PAFR ne sont pas connus. Nos travaux tentent d'élucider ces mécanismes, en comparant les voies de signalisation induites par le PAF et le WEB2086.Le mécanisme de circulation intracellulaire permettant la dégradation du PAFR utilise la voie des endosomes précoces et tardifs lors de la stimulation au PAF. Cependant, le mécanisme est différent suite à une stimulation au WEB2086. Les récepteurs sont ciblés à la dégradation indépendamment du type de ligand utilisé, soit un agoniste ou un agoniste inverse. L'utilisation d'inhibiteurs du protéasome et des lysosomes a permis d'établir que ces deux systèmes sont utilisés pour diminuer l'expression du récepteur du PAF. La compréhension des mécanismes de la régulation négative du PAFR et de la signalisation induite par les agonistes inverses donneront des outils pour la mise en place de modèles généraux de la régulation du récepteur et faciliteront le développement de thérapies ciblant efficacement la signalisation du récepteur.--Résumé abrégé par UMI.
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Influence du statut calcique et en vitamine D sur l'homéostasie calcique : répercussion sur le calcium intracellulaire et sur l'osMailhot, Geneviève January 2003 (has links)
Thèse numérisée par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.
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Rôle de la protéine tyrosine phosphatase DEP-1 dans la régulation du programme angiogénique induit par le VEGFChabot, Catherine 03 1900 (has links)
Depuis la découverte de la première protéine possédant une activité tyrosine
kinase (protein tyrosine kinase [PTK]) dans les années 1980, l’importance des PTKs et
de la phosphorylation sur résidu tyrosine dans la régulation des événements de
signalisation intracellulaire est bien établie. Quant aux protéines qui possèdent une
activité tyrosine phosphatase (protein tyrosine phosphatase [PTP]), dont l’existence n’a
été dévoilée qu’une dixaine d’années plus tard, elles ont longtemps été perçues comme
des enzymes dont le rôle ne se résumait qu'à contrecarrer passivement les activités des
PTKs. Il est maintenant clair que les activités des PTPs sont spécifiques, hautement
régulées, et qu’elles doivent être coordonnées avec celles des PTKs pour une régulation
adéquate des événements de signalisation intracellulaire. En dépit de cette évidence, la
contribution des PTPs à la régulation des différents processus physiologiques
fondamentaux demeure encore peu caractérisée. C’est le cas, notamment, de
l’angiogenèse, le processus par lequel de nouveaux vaisseaux sanguins sont formés à
partir de ceux préexistants. Le VEGF (Vascular endothelial growth factor), un des
facteurs angiogéniques les plus importants, est connu pour induire majoritairement ses
effets biologiques via l’activation du récepteur à activité tyrosine kinase VEGFR2
(Vascular endothelial growth factor receptor 2). Puisque l’angiogenèse est impliquée
dans le développement d’une multitude de pathologies, dont la progression tumorale,
une meilleure caractérisation des PTPs qui assurent la qualité de la réponse
angiogénique en agissant de pair avec le VEGFR2 s’avère cruciale et ce, afin de raffiner
les outils thérapeutiques actuels.
L’expression de la PTP DEP-1 corrèle avec la déphosphorylation du récepteur
VEGFR2 localisé au niveau des jonctions cellules-cellules et contribue à l’inhibition de
la prolifération des cellules endothéliales en réponse au VEGF lorsque les cellules sont
à confluence. Par contre, la contribution spécifique de DEP-1 à la régulation des voies
de signalisation et des réponses biologiques induites par le VEGF demeurait toujours
inconnue. Les travaux de recherche présentés dans cette thèse démontrent tout d’abord
que DEP-1 régule négativement l’activité tyrosine kinase de VEGFR2 en
déphosphorylant spécifiquement les résidus tyrosine Y1054/Y1059 de sa boucle
d’activation. Cette déphosphorylation mène par conséquent à une diminution générale
de la phosphorylation du récepteur et à une atténuation de la plupart des voies de
signalisation induites par le VEGF, incluant la voie mitogénique PLCγ-ERK1/2. Par
ailleurs, malgré ce rôle négatif global, nos travaux révèlent étonnement, et pour la
première fois, que DEP-1 contribue d’une manière positive à la promotion de la survie
des cellules endothéliales via l’activation de la voie Src-Gab1-Akt en aval du récepteur
VEGFR2. Ce pouvoir pro-survie de DEP-1 dans les cellules endothéliales réside avant
tout dans sa capactié à déphosphoryler la tyrosine inhibitrice de Src (Y529). Au cours
de notre étude, nous avons pu identifier deux résidus tyrosine au niveau de l’extrémité
carboxy-terminale de DEP-1, Y1311 et Y1320, dont la phosphorylation est dépendante
de Src. Nos travaux révèlent par ailleurs que ces deux résidus tyrosine phosphorylés
lient le domaine SH2 de Src et que la Y1320 est principalement requise pour
l’activation de Src et d’Akt en réponse au VEGF dans les cellules endothéliales.
Ces résultats constituent donc une avancée majeure dans la compréhension des
mécanismes moléculaires par lesquels DEP-1 peut réguler le programme angiogénique
dépendant du VEGF. De plus, cette découverte d’un rôle positif pour DEP-1 dans la
survie des cellules endothéliales pourrait mener à l’élaboration de nouvelles approches
thérapeutiques visant à inhiber cette fonction spécifique de DEP-1 pour bloquer l'angiogenèse pathologique. / Since the discovery of the first protein tyrosine kinase [PTK] in 1980, the
importance of these proteins and of tyrosine phosphorylation cascades in the regulation
of intracellular signaling events has been well-established. The protein tyrosine
phosphatases [PTPs], whose existence was only revealed ten years later, have been
regarded for a long time as passive PTKs conteracting enzymes. It is now evident that
PTPs activities are specific, exquisitely regulated, and that they have to be coordinated
with PTKs activities for an appropriate regulation of intracellular signaling events.
Despite these findings, the contribution of PTPs to the regulation of many fundamental
physiological processes is not well-characterized. This is the case of angiogenesis, the
process whereby new vessels are generated from pre-existing ones. Vascular endothelial
growth factor (VEGF), one of the most important angiogenic factors, is known to
induce its biological effects mainly by activating VEGFR2 (Vascular endothelial
growth factor receptor 2). As angiogenesis is involved in the development of a
multitude of pathologies, including tumoral progression, a better characterization of
PTPs, which ensure the quality of the angiogenic response by acting together with
VEGFR2, is crucial to refine current therapeutic tools.
Expression of a PTP called DEP-1 correlates with dephosphorylation of
VEGFR2, and contributes to the inhibition of VEGF-induced endothelial cell
proliferation at high cell confluence. However, the specific contribution of DEP-1 to the
regulation of signaling pathways and biological responses induced by VEGF remained
unknown. The research presented in this thesis demonstrates that DEP-1 negatively
regulates the tyrosine kinase activity of VEGFR2 by dephosphorylating the specific
tyrosine residues Y1054/Y1059 in its activation loop. Consequently, this leads to a
global decrease in the phosphorylation of the receptor and to a reduced activation of
most of the signaling cascades induced by VEGF, including the mitogenic PLCγ-
ERK1/2 pathway. Moreover, despite this negative role, our work reveals for the first
time that DEP-1 contributes in a positive way to promote the survival of endothelial
cells via the activation of the Src-Gab1-Akt pathway downstream of VEGFR2. This
survival function of DEP-1 in endothelial cells is accomplished by the
dephosphorylation of the Src inhibitory tyrosine (Y529). During our study, we
identified two residues in the carboxy-terminal tail of DEP-1, Y1311 and Y1320, whose
phosphorylation is dependent on Src. These two phosphorylated tyrosine residues bind
to the SH2 domain of Src, and our work also revealed that mostly Y1320 is required for
Src and Akt activation upon VEGF stimulation of endothelial cells.
These findings represent a major step forward in our understanding of the
molecular mechanisms by which DEP-1 may regulate the VEGF-dependent angiogenic
program. Moreover, the discovery of a positive role for DEP-1 in the survival of
endothelial cells could lead to the development of new therapeutic approaches to inhibit this specific function of DEP-1 in order to block pathological angiogenesis.
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Étude moléculaire des mécanismes d’action de potentiateurs du canal CFTR sur le canal KCa3.1Longpré-Lauzon, Ariane 08 1900 (has links)
Les cellules épithéliales des voies aériennes respiratoires sécrètent du
Cl- via le canal CFTR. La fibrose kystique est une maladie génétique fatale
causée par des mutations de ce canal. La mutation la plus fréquente en
Amérique du Nord, ∆F508, met en péril la maturation de la protéine et affecte
les mécanismes d’activation du canal. Au cours des dernières années,
plusieurs molécules ont été identifiées par criblage à haut débit qui peuvent
rétablir l’activation de protéines CFTR mutées. Ces molécules sont nommées
potentiateurs. Les canaux K+ basolatéraux, dont KCa3.1, jouent un rôle bien
documenté dans l’établissement d’une force électromotrice favorable à la
sécrétion de Cl- par CFTR dans les cellules épithéliales des voies aériennes
respiratoires. Il a par exemple été démontré que l’application de 1-EBIO, un
activateur de KCa3.1, sur des monocouches T84 résulte en une augmentation
soutenue de la sécrétion de Cl- et que cette augmentation était réversible suite
à l’application de CTX, un inhibiteur de KCa3.1(Devor et al., 1996). Dans le
cadre d’une recherche de potentiateurs efficaces en conditions physiologiques
et dans un contexte global de transport trans-cellulaire, il devient essentiel de
considérer les effets des potentiateurs de CFTR sur KCa3.1. Une
caractérisation électrophysiologique par la méthode du patch clamp et
structurelle via l’utilisation de canaux modifiés par mutagenèse dirigée de
différents potentiateurs de CFTR sur KCa3.1 fut donc entreprise afin de
déterminer l’action de ces molécules sur l’activité de KCa3.1 et d’en établir les
mécanismes.
Nous présentons ici des résultats portant sur les effets sur KCa3.1 de
quelques potentiateurs de CFTR possédant différentes structures. Un criblage
des effets de ces molécules sur KCa3.1 a révélé que la genisteine, le SF-03,
la curcumine et le VRT-532 ont des effets inhibiteurs sur KCa3.1. Nos résultats
suggèrent que le SF-03 pourrait agir sur une protéine accessoire et avoir un
effet indirect sur KCa3.1. La curcumine aurait aussi une action inhibitrice
indirecte, probablement via la membrane cellulaire. Nos recherches sur les
effets du VRT-532 ont montré que l’accessibilité au site d’action de cette
v
molécule est indépendante de l’état d’ouverture de KCa3.1. L’absence d’effets
inhibiteurs de VRT-532 sur le mutant constitutivement actif V282G indique que
cette molécule pourrait agir via l’interaction CaM-KCa3.1 et nécessiter la
présence de Ca2+ pour agir. Par ailleurs, un autre potentiateur de CFTR, le
CBIQ, a des effets potentiateurs sur KCa3.1. Nos résultats en canal unitaire
indiquent qu’il déstabilise un état fermé du canal. Nos travaux montrent aussi
que CBIQ augmente la probabilité d’ouverture de KCa3.1 en conditions
sursaturantes de Ca2+, ainsi que son affinité apparente pour le Ca2+. Des
expériences où CBIQ est appliqué en présence ou en absence de Ca2+ ont
indiqué que l’accessibilité à son site d’action est indépendante de l’état
d’ouverture de KCa3.1, mais que la présence de Ca2+ est nécessaire à son
action. Ces résultats sont compatibles avec une action de CBIQ déstabilisant
un état fermé du canal. Finalement, des expériences en Ba2+ nous ont permis
d’investiguer la région du filtre de sélectivité de KCa3.1 lors de l’action de CBIQ
et nos résultats pointent vers une action de CBIQ dans cette région. Sur la
base de nos résultats nous concluons que CBIQ, un potentiateur de CFTR,
aurait un effet activateur sur KCa3.1 via la déstabilisation d’un état fermé du
canal à travers une action sur sa ‘gate’ au niveau du filtre de sélectivité. De
plus, les potentiateurs de CFTR ayant montré des effets inhibiteurs sur KCa3.1
pourraient agir via la membrane ou via une protéine accessoire du canal ou sur
l’interaction CaM-KCa3.1.
Dans l’optique de traitements potentiels de la fibrose kystique, nos
résultats indiquent que le CBIQ pourrait être un potentiateur efficace pusiqu’il
est capable de trimuler à la fois KCa3.1 et CFTR. Par contre, dans les cas du
VRT-532 et du SF-03, une inhibition de KCa3.1 pourraient en faire des
potentiateurs moins efficaces. / Airway epithelial cells are the site of Cl- secretion through CFTR. Cystic
fibrosis is a fatal genetic disease caused by mutations in CFTR. The most
frequent mutation in North America (∆F508) results in impaired maturation and
altered channel gating of the protein. In the last years, several small molecules
were identified by high throughput screening that could restore mutated CFTR
function. Compounds addressing CFTR gating defects are referred to as
potentiators. The basolateral K+ channel KCa3.1 has been documented to play
a prominent role in establishing a suitable driving force for CFTR-mediated Clsecretion
in airway epithelial cells. It has been shown, for example, that the
application of 1-EBIO on T84 monolayers results in a sustained increase of Clsecretion
and that this current can be reversed by application of CTX, a KCa3.1
inhibitor (Devor et al., 1996). Thus, in a global approach of transepithelial
transport, the research for physiologically relevant CFTR potentiators should
also consider their effects on the KCa3.1 channel. Electrophysiological patch
clamp measurements and channel structural modification by site directed
mutagenesis were used to characterize the action of CFTR potentiators on
KCa3.1 and study their molecular mode of action.
In this work we present results on the effects on KCa3.1 of several
CFTR potentiators of different structures. We observed that the CFTR
potentiators genistein, curcumin, SF-03 and VRT-532 could inhibit KCa3.1
activity at concentrations known to activate CFTR. Our results suggest that SF-
03 could act indirectly on KCa3.1 through a mechanism involving an accessory
protein. Curcumin would also have an indirect inhibitory effect, probably
mediated by the plasma membrane, as documented for other ion channels. A
detailed study of VRT-532 revealed that this molecule has access to its binding
site in a state independent manner, and is poorly effective on the V282G
mutant of KCa3.1, which is constitutively active. These results suggest that
VRT-532 could act through the CaM/KCa3.1 complex and require the presence
of Ca2+ to inhibit channel activity. In contrast, CBIQ, another CFTR potentiator,
succeeded to activate KCa3.1. Our results in single channel show that CBIQ
vii
destabilizes a non conducting state of the channel. We also showed that this
molecule increases the apparent Ca2+ affinity as well as the channel open
probability, even in saturating Ca2+ conditions. Experiences in which Ba2+ was
used as a probe were also performed to determine if the action mechanism of
CBIQ involves an effect on the selectivity filter. Our results showed that Ba2+
could displace CBIQ from its interacting site, suggesting that the increases in
channel activity induced by CBIQ could result from a change in the energetics
of the channel at the level of the selectivity filter. On the basis of our results, we
conclude that CBIQ, a CFTR potentiator, could activate KCa3.1 by destabilizing
a non conducting state of the channel, probably through an action near the
selectivity filter region. Also, CFTR potentiators having an inhibitory effect on
KCa3.1 are likely to act through the plasmic membrane, the CaM/KCa3.1
interaction or an accessory protein of the channel.
In a perspective of future treatments for CF, our results indicate that
CBIQ could be an efficient potentiator since this product stimulates KCa3.1 as
well as CFTR. Conversly, the VRT-532 and SF-03 could be less efficient than
on CFTR alone, due to their inhibition of KCa3.1.
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Trafic intracellulaire de l’ARN de la télomérase chez Saccharomyces cerevisiæ : relation entre biogénèse de la télomérase et homéostasie des télomèresGallardo, Franck 02 1900 (has links)
Le contrôle de la longueur des télomères est une étape critique régissant le potentiel
réplicatif des cellules eucaryotes. A cause du problème de fin de réplication, les
chromosomes raccourcissent à chaque cycle de division. Ce raccourcissement se produit
dans des séquences particulières appelées télomères. La longueur des télomères est en
relation directe avec les capacités prolifératives des cellules et est responsable de la limite
de division de Hayflick. Cependant, dans certains types cellulaires et dans plus de 90% des
cancers, la longueur des télomères va être maintenue par une enzyme spécialisée appelée
télomérase. Encore aujourd’hui, comprendre la biogénèse de la télomérase et savoir
comment elle est régulée reste un élément clé dans la lutte contre le cancer. Depuis la
découverte de cette enzyme en 1985, de nombreux facteurs impliqués dans sa maturation
ont été identifiés. Cependant, comment ces facteurs sont intégrés dans le temps et dans
l’espace, afin de produire une forme active de la télomérase, est une question restée sans
réponse. Dans ce projet, nous avons utilisé la levure Saccharomyces cerevisiæ comme
modèle d’étude des voies de biogénèse et de trafic intracellulaire de l’ARN de la
télomérase, en condition endogène.
La première étape de mon travail fut d’identifier les facteurs requis pour
l’assemblage et la localisation de la télomérase aux télomères en utilisant des techniques
d’Hybridation In Situ en Fluorescence (FISH). Nous avons pu montrer que la composante
ARN de la télomérase fait la navette entre le noyau et le cytoplasme, en condition
endogène, dans les cellules sauvages. Nos travaux suggèrent que ce trafic sert de contrôle
qualité puisqu’un défaut d’assemblage de la télomérase conduit à son accumulation
cytoplasmique et prévient donc sa localisation aux télomères. De plus, nous avons identifié
les voies d’import/export nucléaire de cet ARN.
Dans une deuxième approche, nous avons réussi à développer une méthode de
détection des particules télomérasiques in vivo en utilisant le système MS2-GFP. Notre
iv
étude montre que contrairement à ce qui a été précédemment décrit, la télomérase n’est pas
associée de façon stable aux télomères au cours du cycle cellulaire. En fin de phase S, au
moment de la réplication des télomères, la télomérase se regroupe en 1 à 3 foci dont
certains colocalisent avec les foci télomériques, suggérant que nous visualisons la
télomérase active aux télomères in vivo. La délétion des gènes impliqués dans l’activation
et le recrutement de la télomérase aux télomères entraine une forte baisse dans
l’accumulation des foci d’ARN au sein de la population cellulaire. Nos résultats montrent
donc pour la première fois la localisation endogène de l’ARN TLC1 in situ et in vivo et
propose une vue intégrée de la biogenèse et du recrutement de la télomérase aux télomères. / Telomere length control is a critical step that governs the replicative potential of
eukaryotic cells. Due to the end replication problem, chromosomes shorten at each round of
division. This attrition occurs in specialized sequences at the extremity of chromosomes
called telomeres. Telomere size is in direct relationship with proliferative potential and
responsible for Hayflick’s division limit. However, in different cell type and in cancers, an
end-specialized enzyme called telomerase maintains telomere length. Reactivation of
telomerase in somatic cells triggers a pre-tumoral phenotype and more than 90% of cancers
highly express this enzyme. Still today, understanding how telomerase is synthesized and
reactivated can be a key step for the understanding of cancer arising and progression. Since
the discovery of this enzyme in 1985, several factors involved in the regulation of this
enzyme have been discovered. However, the spatio-temporal regulation of telomerase
biogenesis and regulation has not been determined. We used the yeast S.cerevisiæ to study
the biogenesis and recruitment of telomerase to telomeres.
The first step in my work was to determine the factors required for the biogenesis
and recruitment of telomerase to telomeres using fluorescence in situ hybridization. We
have shown that the telomerase RNA component shuttles between the nucleus and the
cytoplasm in wild type endogenous conditions. We have shown that this intracellular
trafficking is used as a quality control mechanism that prevents the nuclear localization of
miss assembled telomerase complexes. Moreover, we have identified the import/export
pathways of the telomerase RNA.
In a second step, we developed an in vivo localization system to follow the
telomerase RNA dynamics. We used the MS2-GFP system to track this RNA in vivo. Our
study shows that, contrary to what was previously described, telomerase is not stably
associated to telomeres during the cell cycle but freely diffuses in the nucleus of G1 cells.
In late S phase, at the moment of telomere replication, telomerase clusters in 1 to 3 big foci
vi
that colocalizes with telomeres clusters in vivo, suggesting the visualization of active
telomerase particles replicating telomeres. Disruption of gene coding for telomerase
activators triggers a great reduction of telomerase RNA clusters in a cell population.
Altogether, our results shows for the first time the localization of the endogenous form of
the telomerase RNA and propose an integrated view of telomerase biogenesis and
recruitment to telomeres.
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Plasticity following spinalization and step-training in the catCôté, Marie-Pascale January 2006 (has links)
Thèse numérisée par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.
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Dynamique des processus cellulaires et moléculaires dans la symbiose du charançon du genre Sitophilus / Dynamics of cellular and molecular processes in the symbiosis of the weevil SitophilusVigneron, Aurélien 11 May 2012 (has links)
Depuis leur radiation après le Carbonifère, il y a 325 millions d’années, les insectes ont colonisé la majorité des milieux terrestres. Ce grand pouvoir colonisateur est en partie dû à leur association avec des bactéries symbiotiques intracellulaires, nommés endosymbiotes. Ces derniers complémentent le régime alimentaire de l’insecte et lui permettent de survivre sur des milieux nutritionnellement pauvres ou déséquilibrés. Les endosymbiotes sont transmis maternellement, ce qui assure la pérennité de l’association au cours des générations. Ils sont maintenus dans des cellules spécialisées, les bactériocytes, qui forment à leur tour un organe, le bactériome. L’étude des spécificités moléculaires et cellulaires des bactériocytes est un enjeu majeur dans la compréhension des mécanismes de régulation des endosymbiotes. Toutefois, la caractérisation de ces spécificités reste peu élucidée. Afin d’approcher les spécificités moléculaire, cellulaire et immunitaire du bactériome, ainsi que la réponse immunitaire systémique du charançon dirigée contre un pathogène, nous avons construit et séquencé 7 banques d’ADNc provenant du charançon des céréales : Sitophilus oryzae (Coléoptère, Curculionide). L’analyse in silico des banques, appuyée par une étude transcriptomique, a montré que le bactériome présente une forte expression de gènes impliqués dans la survie et le développement cellulaire, et dans le trafic vésiculaire. Le bactériome présente aussi une réponse immunitaire spécifique et modulée, puisqu’à l’exception d’un peptide antimicrobien, la coléoptéricine-A, les effecteurs de l’immunité ne sont pas (ou peu) exprimés. Par ailleurs, nous avons montré que la réponse immunitaire des larves de charançon aux infections bactériennes serait modulée en présence des endosymbiotes. Le deuxième volet de cette thèse s’est focalisé sur le stade adulte du charançon, chez qui les bactéries symbiotiques sont hébergées dans des bactériomes situés à l’apex des caeca mésentériques qui tapissent l’intestin moyen de l’insecte. Cette association est éphémère chez l’adulte qui perd ses endosymbiotes 15 jours après la mue imaginale. Nous avons recherché les mécanismes moléculaires et cellulaires responsables de cette élimination, ainsi que les causes écophysiologiques et évolutives sous-jacentes. Par des approches histologiques et transcriptomiques, nous avons démontré que l’élimination des symbiotes est la conséquence de l’activation simultanée de l’apoptose et de l’autophagie. Par ailleurs, nous avons montré que l’élimination du symbiote survient après la formation ultime de la cuticule par l’insecte adulte, et que cette élimination symbiotique était corrélée à une diminution des besoins nutritionnels de l’insecte, notamment en acides aminés aromatiques. / Résumé
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Étude de la toxicité du peptide amyloïde beta Aß42 dans la levure Saccharomyces cerevisiae / Toxicity study of beta amyloid peptide Aß42 in Saccharomyces cerevisiaeVignaud, Hélène 28 November 2013 (has links)
La maladie d’Alzheimer est la maladie neurodégénérative la plus fréquente chez l’Homme et constitue un enjeu économique et de santé publique majeur. Les cerveaux de patients atteints présentent une atrophie corticale associée à deux types de lésions : les dégénérescences neurofibrillaires, constituées de protéines Tau agrégées, et les plaques amyloïdes, composées majoritairement de peptides amyloïde beta Aß agrégés. Les peptides Aß et leur agrégation seraient à l’origine de la pathogenèse. Afin d’éclaircir les mécanismes moléculaires à la base de la toxicité d’Aß, nous avons construit un modèle de toxicité d’Aß dans la levure Saccharomyces cerevisiae. Ce modèle a permis d’établir que la toxicité d’Aß dans la levure est intimement liée à sa sécrétion et au trafic vésiculaire. Ce modèle nous a également permis de réaliser une étude structure-toxicité du peptide et de mettre en évidence des éléments en cis importants pour la toxicité d’Aß. Une nouvelle voie d’agrégation des peptides toxiques en structure riche en feuillet ß anti-parallèle a pu ainsi être mise en évidence. Le modèle de toxicité d’Aß et l’existence de variants très toxiques d’Aß dans la levure nous a permis de réaliser des cribles génétiques afin de rechercher les éléments modulant la toxicité d’Aß in vivo. Le trafic vésiculaire, en particulier l’endocytose via le remodelage du cytosquelette d’actine, un complexe responsable de la formation de vésicules intraluminales appelé ESCRT, forment autant de pistes à étudier pour améliorer notre compréhension de la toxicité d’Aß. / Alzheimer’s disease is the most common neurodegenerative disease. This pathology is caused by aggregation of Aß peptides. The exact mechanism of neuronal cell dysfunction in Alzheimer’s disease is poorly understood and numerous models have been used to decipher the mechanisms leading to cellular death. In order to clarify the molecular mechanisms underlying the toxicity of Aß, we generated a new model to study Aß toxicity in yeast Saccharomyces cerevisiae. In our model, Aß toxicity is closely related to its secretion and its intracellular traffic. Indeed, when Aß is targeted to the secretory pathway, it is able to produce toxic species. Interestingly, we demonstrated also that even if Aß is addressed to the secretory pathway, it is still able to form cytoplasmic aggregates. Moreover, with this model, we generated new highly toxic mutants of Aß by random mutagenesis. In order to correlate structural conformation ‘signature’ to Aß toxicity, we performed a structure-toxicity study of these new variants. In vitro, we demonstrated that a new anti-parallel aggregation pathway is associated with highly toxic mutants of Aß. Then, using our Aß yeast model and also these harmful variants, we performed genetic screens in order to identify candidate genes able to modulate Aß toxicity in vivo. Given these different screens, we found that vesicular trafficking, endocytosis via actin cytoskeleton remodeling, and ESCRT-III (Endosomal Sorting Complex Required for Tansport) open new avenues to improve our understanding of Aß toxicity.
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