Orientador: Prof. Dr. Nelson Augusto Rosário Filho / Co-orientadora: Profª. Drª. Lilian Pereira Ferrari / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Medicina Interna. Defesa : Curitiba, 19/12/2014 / Inclui referências / Resumo: A fibrose cística é uma doença hereditária autossômica recessiva, causada por mutações no gene CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator). Apresenta grande variação clínica, mesmo entre pacientes com o mesmo genótipo, sugerindo que outros fatores genéticos e/ou ambientais possam estar influenciando em seu curso, principalmente em relação à doença pulmonar. Um destes fatores é a lectina ligante de manose (MBL), proteína com importante papel na primeira linha de defesa do sistema imune inato, cuja deficiência aumenta a suscetibilidade para diferentes doenças infecciosas, principalmente a patógenos extracelulares. O estudo teve como objetivo analisar a frequência de mutações do gene CFTR e das concentrações séricas de MBL em crianças com fibrose cística identificadas pela triagem neonatal. Foram avaliadas 51 crianças com diagnóstico confirmado de fibrose cística, de ambos os gêneros, euro descendentes, identificadas pela triagem neonatal e acompanhadas no período de fevereiro de 2010 a janeiro de 2011. Foi coletada amostra sanguínea para extração de DNA e análise da concentração sérica de MBL. O DNA foi submetido à amplificação por PCR, e avaliado por eletroforese em gel de poliacrilamida(12%) ou agarose (2%) de acordo com o tamanho do fragmento. A concentração sérica de MBL foi determinada por meio de imunoensaio enzimático. Dos 102 alelos estudados, 84 (82,4%) correspondiam as mutações estudadas, sendo as maiores frequências observadas para p.Phe508del (38,2%) e p.Gly542X (26,5%). As mutações p.Asn1303lys, p.Lys684serfsX38 e p.Arg1162X foram detectadas em 9 (8,8%), 5 (4,9%) e 4 (3,9%) alelos respectivamente. Houve predomínio do genótipo p.GlyG542X/outra mutação (29,4%), seguido dos genótipos p. Phe508del/p. Phe508del (21,6%) e Phe508del/outra (17,7%). Destaca-se ainda o genótipo p.Phe508del/p.Gly542X (15,7%). Observou-se valores superiores para as mutações p.Gly542X e p.Asn1303lys em relação ao descrito na literatura (p<0,05). Não foi encontrada relação entre as infecções de vias aéreas superiores e inferiores e microbiota do escarro com os genótipos determinados (p>0,05). Em relação a MBL não foram encontradas diferenças estatísticas entre o grupo de crianças com fibrose cística e controles, assim como não foram encontradas relações entre os níveis de MBL e infecções de vias aéreas superiores e inferiores, microbiota do escarro e os genótipos CFTR pesquisados. Este estudo caracteriza-se por ser inédito no estado do Paraná em se tratando de análise de mutações do gene CFTR em crianças fibrocísticas triadas ao nascimento, e sugere que pacientes portadores da mutação p.Gly542X vinham a óbito antes mesmo do diagnóstico clínico da doença subestimando a frequência real desta mutação e consequente subdiagnóstico. Palavras chaves: fibrose cística, triagem neonatal, lectina ligante de manose. / Abstract: Cystic fibrosis is an autosomal recessive disorder caused by mutations in the CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator) gene. It has great clinical variation, even among patients with the same genotype, suggesting that other genetic and / or environmental factors may be influencing its course, primarily in relation to pulmonary disease. One of these factors is the mannose binding lectin (MBL) protein with an important role in the first line of defense of the innate immune system, whose deficiency increases susceptibility to various infectious diseases, primarily extracellular pathogens. The present study aimed to analyze the frequency of mutations in the CFTR gene and serum MBL concentrations in children with cystic fibrosis identified by newborn screening. Fifty one children with a confirmed diagnosis of cystic fibrosis, of both genders, euro descendants, identified by newborn screening and followed up from February 2010 to January 2011. We collected blood sample for DNA extraction and analysis of serum MBL. The DNA was subjected to PCR, and evaluated by electrophoresis in polyacrylamide gel (12%) or agarose (2%). The serum concentration of MBL was determined by using enzyme immunoassay. Of 102 alleles studied, 84 (82.4%) were detected, with the highest frequency observed for p.Phe508del (38.2%) and p.Gly542X (26.5%). The p.Asn1303lys, p.Lys684serfsx38 and p.Arg1162X mutations were detected in 9 (8.8%) 5 (4.9%) and 4 (3.9%) alleles respectively.There was a predominance of genotype p.GlyG542X / other mutation (29.4%), followed by genotypes p. Phe508del / w. Phe508del (21.6%) and Phe508del / other (17.7%). Another highlight is the genotype p.Phe508del / p.Gly542X (15.7%). We observed higher values for p.Gly542X and p.Asn1303lys mutations compared to that described in the literature (p < 0,05). No relationship between infections of upper and lower airways and sputum microorganisms with certain genotypes (p>0,05) was found. Regarding MBL no statistical differences were found between the group of children with cystic fibrosis and controls, as well as no relationship between levels of MBL and infections of upper and lower airway microorganisms of sputum and CFTR genotypes studied were found. This study is unique in Paraná in the case of analysis of fibrocystic children screened at birth and suggests that patients with the mutation p.Gly542X died even before the clinical diagnosis of the disease providing under diagnosis and led to underestimation of the actual frequency of this mutation in Paraná. Key words: cystic fibrosis, neonatal screening, mannose binding lectin.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:13:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AlexandreFSQ.pdf: 1970606 bytes, checksum: 5b6e9381595f936a1ed9bffd4f4fef7a (MD5) Previous issue date: 2008-05-12 / A galactose and sucrose specific lectin from the marine sponge Cliona varians named CvL was purified by acetone fractionation followed by Sepharose CL 4B affinity chromatography. Models of leukocyte migration in vivo were used to study the inflammatory activity of CvL through of mouse paw oedema and peritonitis. Effect of CvL on peritoneal macrophage activation was analyzed. Effects of corticoids and NSAIDS drugs were also evaluated on peritonitis stimulated by CvL. Results showed that mouse hind-paw oedema induced by sub plantar injections of CvL was dependent dose until 50?g/paw. This CvL dose when administered into mouse peritoneal cavities induced maxima cell migration (9283 cells/?L) at 24 hours after injection. This effect was preferentially inhibited by incubation of CvL with the carbohydrates D-galactose followed by sucrose. Pre-treatment of mice with 3% thioglycolate increases the peritoneal macrophage population 2.3 times, and enhanced the neutrophil migration after 24h CvL injection (75.8%, p<0.001) and no significant effect was observed in presence of fMLP. Finally, Pre-treatment of mice with dexamethason (cytokine antagonist) decreased 65.6%, (p<0.001), with diclofenac (non-selective NSAID) decreased 34.5%, (p<0.001) and Celecoxib (selective NSAID) had no effect on leukocyte migration after submission at peritonitis stimulated by CvL, respectively. Summarizing, data suggest that CvL shows pro-inflammatory activity, inducing neutrophil migration probably by pathway on resident macrophage activation and on chemotaxis mediated by cytokines / A lectina denominada CvL, com especificidade para D-galactose e sacarose foi purificada da esponja marinha Cliona varians atrav?s de fracionamento com acetona seguido por cromatografia de afinidade em Sepharose CL 4B. No presente trabalho, foi estudada a atividade inflamat?ria de CvL in vivo atrav?s dos modelos de edema de pata e migra??o de leuc?citos em peritonite induzida em camundongos. Foram analisados os efeitos de carboidratos na inibi??o da peritonite, o efeito da lectina na ativa??o de macr?fagos e o efeito de antiinflamat?rios no modelo de peritonite provocada pela CvL. Os resultados mostraram que o edema de pata induzido pela CvL foi dose dependente at? 50 ?g/pata. Essa mesma dose quando administrada na cavidade peritoneal, foi capaz de induzir migra??o celular (9.283 c?lulas/?L) com pico em 24 horas ap?s a administra??o. Este efeito foi inibido quando a CvL foi previamente incubada com os carboidratos D-galactose e sacarose. O pr?-tratamento dos camundongos com 3% de tioglicolato aumentou a popula??o de macr?fagos em 2,3 vezes o que provocou o aumento da migra??o de neutr?filos em 75,58% (p<0,0001) ap?s 24 horas da inje??o da CvL. No entanto, com a inje??o de fMLP n?o foi observado nenhum efeito significativo. O pr?-tratamento dos camundongos com dexametasona (cortic?ide antagonista de citocinas) reduziu a migra??o de neutr?filos em 65,6% (p<0,001), com diclofenaco ( antiinflamat?rio n?o ester?ide n?o seletivo) reduziu em 34,5% (p<0,001) e com Celecoxibe (antiinflamat?rio n?o ester?ide seletivo) n?o apresentou efeito. Os resultados do presente trabalho s?o indicativos de que a CvL possui atividade pr?-inflamat?ria, induzindo a migra??o de neutr?filos, provavelmente atrav?s da indu??o da libera??o de citocinas quimiot?cticas na ativa??o de macr?fagos residentes no perit?nio

nÃo hà / Cristais da lectina de sementes de Canavalia maritima (ConM) nativa foram obtidos pelo mÃtodo da difusÃo de vapor em gota suspensa com soluÃÃo do reservatÃrio contendo tampÃo Hepes 0,1M pH 8.43 com 4% v/v de polietilenoglicol 400 e 2M de sulfato de amÃnio. AtravÃs de âsoakingâ dos cristais com ligantes glicÃdicos foram produzidos cristais da lectina complexada aos aÃucares maltose e trealose. Os cristais obtidos de ConM nativa difrataram a uma resoluÃÃo mÃxima de 1,56 Ã, pertencendo ao grupo primitivo ortorrÃmbico, P21212 com parÃmetros de cÃlula de a=67.9, b=71.0, c=97.6 à e apresentando um dÃmero na unidade assimÃtrica (VM = 2,4 A3 Da-1). Com base nas densidades eletrÃnicas dos resÃduos da estrutura tridimensional resolvida, constatou-se que a sequencia de Perez et al (1991) apresentava erros, que quando corrigidos e comparados com a seqÃÃncia de ConA, aumentaram para 98% o grau de similaridade entre as duas lectinas. A estrutura de ConM nativa exibe um alto grau de enovelamento terciÃrio, tÃpico das lectinas de leguminosas, com visÃvel conservaÃÃo do sÃtio de ligaÃÃo a metais e loops envolvidos na oligomerizaÃÃo molecular. Embora a especificidade e o nÃmero de pontes de hidrogÃnio formadas na interaÃÃo com os dissacarÃdeos maltose e trealose seja a mesma, estruturalmente ocorrem diferenÃas no padrÃo de formaÃÃo de pontes de hidrogÃnio, principalmente na distribuiÃÃo do nÃmero de pontes de hidrogÃnio entre os dois resÃduos de glicose dos dissacarÃdeos. Os ensaios de atividade biolÃgica mostraram que o efeito relaxante concentraÃÃo-dependente da lectina de sementes de Canavalia maritima em anÃis de aorta isolados ocorre provavelmente atravÃs da interaÃÃo com um sÃtio de ligaÃÃo lectina-especÃfico presente no endotÃlio, resultando em liberaÃÃo de Ãxido nÃtrico. / Crystals of Canavalia maritima seeds lectin (ConM) were obtained using the vapor diffusion method in hanging drop by sparse matrix with reservatory solution containing 0,1 M HEPES, pH 8,43, 4% Polyethylene Glycol 400 and 2 M ammonium sulfate. The soaking technic was used to produce lectin crystals complexed with the carbohydrates maltose and trehalose. ConM native crystals diffracted to 1.56 à resolution, belonging to the primitive orthorhombic space group P21212, with unit-cell parameters a=67.9, b=71.0, c=97.6 Ã, consisting in a dimer in the asymmetric unit (VM = 2,4 A3 Da-1), with two metal binding sites per monomer, and loops involved in the molecular oligomerization. The structure was solved by standard molecular replacement techniques. The wrong amino acids residues previously suggested by manual sequencing by Perez et al. (1991) are now determinated as I17, I53, S129, S134, G144, S164, P165, S187, V190, S169, T196 and S202. These modifications confer 98% of similarity between ConM, ConA and ConBr. ConM structure presents a high level of tertiary protein folding, typically of legume lectins. Despite the specificity and the numbers of hydrogen bonds formed in the interaction with the disaccharides maltose and trehalose be the same, structurally changes occurs in the pattern of formation of the hydrogen bonds, especially in the distribution in the number of hydrogen bonds between the two glucose residues of the disaccharides. Our biological activity data show that the relaxant concentration-dependent effect of the seed lectin of Canavalia maritima on isolated aortic rings probably occurs via interaction with a specific lectin-binding site on the endothelium, resulting in a release of nitric oxide.

O Lúpus Eritematoso Sistêmico (LES) é uma doença inflamatória sistêmica autoimune caracterizada pela produção e deposição de imunocomplexos. Sua etiologia é pouco conhecida, mas há evidências da participação de fatores genéticos. Vários genes responsáveis pela síntese de proteínas do Sistema Complemento (SC) têm sido relacionados com LES. O gene MBL-2 responsável pela síntese da lectina ligadora da manose (MBL - mannose-binding lectin), uma proteína envolvida na ativação do SC, apresenta vários polimorfismos que se relacionam com a deficiência desta proteína e, conseqüentemente, estão associados com desenvolvimento de LES. Para verificar a possibilidade de alguns polimorfismos da MBL configurarem risco aumentado para LES e se há alguma interferência destes com as manifestações clínicas e laboratoriais da doença, foi conduzido um estudo de caso-controle, com 327 pacientes lúpicos e 165 controles saudáveis da mesma área geográfica, sendo avaliados os polimorfismos G57E (alelo C), G54D (alelo B), IVSnt5, R52C (alelo D) e R52H do gene MBL-2. A genotipagem foi realizada por Restriction Fragment Length Polymorphism-Polimerase Chain Reaction (RFLP-PCR) usando primers e enzimas de restrição específicas para cada polimorfismo. Os dados clínicos e laboratoriais foram coletados dos prontuários. Os resultados evidenciaram uma diferença estatisticamente significativa na freqüência do alelo D nos pacientes euro-descendentes quando comparados com os controles (9,6% versus 3,3%, P=0,001, odds ratio de 3,01, intervalo de confiança de 95%: 1,58- 6,06, P<0,05). As frequências dos alelos B e C não foram diferentes nos pacientes euro-descendentes e controles (alelo B: 15,9% versus 18,8%, P=0,317 e alelo C: 3,6% versus 3,0%, P=0,796). Os alelos IVSnt5 e R52H não foram encontrados nesta população. Achados clínicos e laboratoriais não tiveram diferença estatisticamente significativa em relação à presença ou ausência dos alelos mutantes. Os resultados apresentados apontam um aumento de cerca de três vezes no odds ratio para o desenvolvimento de LES em pessoas com a presença do alelo D. Nesta população estudada, não foi encontrada associação entre os alelos mutantes e a expressão fenotípica da doença.

Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-03-13T11:52:32Z No. of bitstreams: 2 TESE Afonso Cordeiro Agra Neto.pdf: 5198552 bytes, checksum: d837f12bcd56eb1a44a2ba8b0ab315cf (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T11:52:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE Afonso Cordeiro Agra Neto.pdf: 5198552 bytes, checksum: d837f12bcd56eb1a44a2ba8b0ab315cf (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014 / Algumas espécies de insetos podem atuar como vetores de doenças ou pragas agrícolas. O mosquito Aedes aegypti é o vetor da dengue e o besouro Sitophilus zeamais (gorgulho do milho) ataca diversos tipos de grãos armazenados. O surgimento de populações de insetos resistentes em decorrência da utilização de inseticidas sintéticos tem estimulado a busca por inseticidas naturais, incluindo as lectinas (proteínas que reconhecem especificamente carboidratos). Sementes de Moringa oleifera contêm as lectinas inseticidas cMoL (do inglês coagulant M. oleifera lectin) e WSMoL (do inglês water-soluble M. oleifera lectin). Para o isolamento de WSMoL, o extratoem água destilada de sementes de M. oleifera(EA) foi obtido e tratado com sulfato de amônio (60% de saturação) obtendo-se uma fração rica em lectina (FL), a qual foi aplicada em coluna de quitina. Já para o isolamento de cMoL, o extrato em NaCl 0,15 M foi obtido pela homogeneização das sementes em NaCl 0,15 M tratado com sulfato de amônio (60% de saturação) e cromatografado em coluna de gel de guar. Em seguida, o efeito das lectinasna sobrevivência e nas atividades de enzimas detoxificantes e digestivas de larvas de A. aegypti no quarto estágio das linhagens Rockefeller (susceptível ao organofosfato temefós) e Rec-R (resistente ao organofosfato temefós)foi avaliado. Investigou-se também os efeitos de EA, FL e WSMoLna sobrevivência e na atividade da tripsina de S. zeamais. WSMoL (0,197 mg/ml) matou as larvas Rockefeller (51,6%±2,8), enquanto cMoL não interferiu na sobrevivência dessas larvas. WSMoL e cMoL não apresentaram atividade larvicida contra Rec-R. WSMoL estimulou as atividades de proteases, tripsina e α-amilase das larvas Rockefeller, enquanto cMoL inibiu essas enzimas. WSMoL não interferiu na atividade de tripsina de larvas Rec-R, mas inibiu as atividades de protease e α-amilase. Dentre as atividades de enzimas digestivas de Rec-R, cMoLapenas inibiu a atividade de tripsina. cMoL inibiu fortemente a atividade de superóxido dismutase das larvas Rockefeller e Rec-R e WSMoL inibiu a atividade de β-esterase de larvas Rockefeller. As lectinas afetaramlevemente as atividades de α-esterase de ambas as linhagens. EA (58 à 145mg/g ) apresentou toxicidade aguda para S. zeamais (taxas de mortalidade variando de 21,7 a 50%), enquanto FL não matou os insetos. WSMoL causou apenas baixa mortalidade (12,0%±2,7) na concentração de 60 mg/g (mg de lectina por g de farinha de trigo). A ingestão de EA reduziu a taxa de consumo relativo, sendo observado efeito deterrente moderado a forte. FL e WSMoL reduziram a taxa de ganho relativo de biomassa e a eficiência na conversão do alimento ingerido, mas não exerceram ação deterrente. Apenas WSMoLaumentou a atividade de enzimas tripsina do intestino de S. zeamais. A presente tese apresenta ainda um capítulo contendo uma revisão bibliográfica que contempla características da biologia e ecologia de insetos praga de grãos armazenados, bem como informações sobre danos causados por eles na agricultura. As principais estratégias de controle e o uso de inseticidas naturais como alternativa de combate a estas pragas são também discutidos. Em conclusão: (1) WSMoL, embora seja capaz de matar larvas de A. aegypti susceptíveis a organofosfato (Rockefeller), não promoveu mortalidade de larvas resistentes (Rec-R); (2) os efeitos opostos de WSMoL na sobrevivência de larvas Rockefeller e Rec-R podem indicar que estas populações são fisiologicamente distintas em outros aspectos além da resistência a temefós; (3) os efeitos distintos de WSMoL e cMoL sobre as enzimas digestivas de larvas Rockefeller e Rec-R indicam a expressão de diferentes formas de enzimas entre essas linhagens; (4) o mecanismo de atividade larvicida de WSMoL para larvas Rockefeller pode envolver a estimulação de enzimas digestivas (proteases, tripsina e α-amilase) e inibição da atividade de β-esterase; (5) cMoL pode ser avaliada, no futuro, como um agente sinérgico para aumentar a susceptibilidade de larvas de A. aegypti com atividade aumentada de superóxido dismutase; (6) a toxicidade de EA para S. zeamais adultos pode resultar do seu efeito deterrente de alimentação; e (7) os danos na fisiologia nutricional de S. zeamais causados por WSMoL provavelmente envolvem um desequilíbrio do processo de digestão devido ao aumento da atividade de enzimas tripsina.

Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-03-26T12:40:52Z No. of bitstreams: 2 DISSERTACAO_ANA_PATRICIA IMPRIMIR OK 21 set.pdf: 882347 bytes, checksum: 3d3a08a765d53fef71a8057d31dd434e (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-26T12:40:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTACAO_ANA_PATRICIA IMPRIMIR OK 21 set.pdf: 882347 bytes, checksum: 3d3a08a765d53fef71a8057d31dd434e (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-07-22 / Sementes de Moringa oleifera possuem elevado conteúdo de óleo (27–40%), o qual é utilizado na produção de biocombustível. A torta de sementes corresponde ao material residual obtido após o processo de extração do óleo. As sementes de moringa contêm as lectinas WSMoL (do inglês water-soluble M. oleifera lectin) e cMoL (do inglês coagulant M. oleifera lectin). WSMoL possui atividade larvicida (CL50 de 0,197 mg/mL) contra Aedes aegypti, mosquito vetor da dengue. Diferentemente, cMoL não possui ação larvicida. O presente trabalho descreve a torta de moringa obtida após extração do óleo com solvente orgânico como fonte de lectinas e outros compostos com efeitos deletérios sobre larvas de A. aegypti. A torta foi obtida após extração do óleo das sementes de moringa com n-hexano durante 6 h, utilizando extrator do tipo Soxhlet. Suspensões aquosas à base da torta (CS, do inglês cake suspensions) foram obtidas a partir da adição de 0,2, 0,6, 1,2 ou 3,0 g do pó da torta a água destilada (1 L), seguida de rápida agitação manual por 3 min, repouso por 30 min e filtração em papel de filtro. As suspensões foram avaliadas quanto à atividade hemaglutinante, concentração de proteínas e efeito sobre o desenvolvimento larval. Para purificação de lectinas, extrato aquoso foi obtido através da homogeneização do pó da torta (10 g) em água destilada (100 mL) por 16 h a 4 °C, seguida de centrifugação (9.000 g, 15 min). O extrato foi tratado com sulfato de amônio a 60% e a fração de proteínas precipitadas, enriquecida em lectinas, foi dialisada contra NaCl 0,15 M e cromatografada em coluna de quitina equilibrada com NaCl 0,15 M. As proteínas adsorvidas na coluna foram eluídas com ácido acético 1,0 M e, após diálise contra água destilada, as frações que apresentaram atividade hemaglutinante foram reunidas (MoCL, M. oleifera cake lectins). MoCL foi avaliada quanto ao perfil eletroforético em SDS-PAGE e inibição da atividade hemaglutinante por carboidratos e glicoproteínas. Atividade larvicida do extrato de torta, fração enriquecida em lectinas e MoCL foi avaliada contra larvas de A. aegypti no quarto estágio. As suspensões à base da torta promoveram atraso no desenvolvimento larval. Dentre as larvas incubadas com CS1,2 e CS3,0, 50% e 60% não ultrapassaram o segundo estágio, respectivamente. Nenhuma das suspensões apresentou atividade hemaglutinante nem causou mortalidade das larvas. O extrato de torta e a fração enriquecida em lectinas apresentaram atividade hemaglutinante específica de 26,2 e 39,5, revelando que lectinas de sementes de moringa resistiram ao tratamento com n-hexano. MoCL apresentou atividade hemaglutinante específica de 93.622 (fator de purificação: 3.573) e três bandas polipeptídicas em SDS-PAGE de massas moleculares 10, 15 e 27 kDa. Esses resultados sugerem que MoCL consiste em uma mistura de WSMoL (que se apresenta com polipeptídeos de 10 e 15 kDa em SDS-PAGE) e cMoL (um polipeptídeo de 26,5 kDa em SDS-PAGE). Atividade hemaglutinante de MoCL foi inibida pelos monossacarídeos frutose, glicose, manose, galactose e N-acetilglicosamina, bem como pelas glicoproteínas asialofetuína, caseína e tiroglobulina. Extrato, fração e MoCL apresentaram atividade larvicida, com CL50 de 2,98, 0,95 e 0,89 mg/mL de proteínas, respectivamente. MoCL foi menos ativa que WSMoL obtida a partir de sementes inteiras, provavelmente devido à presença de cMoL na preparação. Em conclusão, torta de sementes de M. oleifera contém lectinas com ação larvicida e compostos capazes de atrasar o desenvolvimento de larvas de A. aegypti. Os resultados obtidos no presente trabalho agregam novos valores à torta de moringa como recurso biotecnológico, bem como a toda a cadeia de produção de biocombustível a partir da moringa.

Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-03-26T13:26:25Z No. of bitstreams: 2 2012-Dissertação-MaiaraMoura.pdf: 1301250 bytes, checksum: 16c807e57aca77f6770918a2750502f2 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-26T13:26:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 2012-Dissertação-MaiaraMoura.pdf: 1301250 bytes, checksum: 16c807e57aca77f6770918a2750502f2 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012-08-22 / Inseticidas sintéticos têm sido amplamente utilizados para o controle de populações de insetos-praga. Entretanto, a resistência adquirida por alguns insetos e a elevada toxicidade desses compostos sobre o ambiente e organismos não-alvos têm levado a um aumento na busca por produtos naturais isentos de toxicidade e efetivos no controle de insetos. Lectinas - proteínas ou glicoproteínas que reconhecem carboidratos e aglutinam células - isoladas de plantas têm apresentado atividade inseticida. A lectina solúvel em água isolada de sementes de Moringa oleifera (WSMoL) foi efetiva contra o mosquito Aedes aegypti, causando mortalidade de embriões ainda dentro dos ovos e de larvas no quarto estágio. Este trabalho reporta: 1) o efeito de WSMoL no crescimento e sobrevivência de larvas de Ephestia (Anagasta) kuehniella (mariposa da farinha) e Callosobruchus maculatus (caruncho ou gorgulho do feijão); 2) os parâmetros nutricionais (ECI: eficiência de conversão do alimento ingerido; ECD: eficiência de conversão do alimento digerido; DA: digestibilidade aproximada; e CM: custo metabólico) de larvas de E. kuehniella alimentadas ou não com a lectina; 3) a avaliação da susceptibilidade de WSMoL à digestão por proteases intestinais dos insetos através de eletroforese em gel de poliacrilamida em presença de dodecil sulfato de sódio (SDSPAGE). WSMoL foi isolada por cromatografia em coluna de quitina com alta atividade hemaglutinante específica (AHE, 1427), seguindo procedimento previamente estabelecido. A sobrevivência, o peso corporal e os parâmetros nutricionais das larvas de E. kuehniella não foram significativamente (p>0,05) afetados quando WSMoL (1 e 2 %, p/v) foi incorporada na dieta, em comparação com o controle. SDS-PAGE de WSMoL incubada com extrato de intestino de larvas de E. kuehniella revelou progressiva digestão da lectina com o aumento do tempo de incubação; WSMoL foi completamente digerida após 8 h de incubação. A ausência de atividade inseticida de WSMoL é provavelmente devido à rápida digestão da lectina por E. kuehniella. Diferentemente, WSMoL (1 e 2%, p/v) induziu mortalidade (39–43%) e redução do peso (27–54%) de larvas de C. maculatus de forma dose-dependente. WSMoL não foi digerida por extratos de intestino de larvas de C. maculatus mesmo após 72 h de incubação. Em conclusão, WSMoL apresentou atividade inseticida contra C. maculatus e seu mecanismo de ação envolve resistência a proteases deste inseto.

Submitted by Eduardo Barros de Almeida Silva (eduardo.philippe@ufpe.br) on 2015-04-14T14:01:16Z No. of bitstreams: 2 Dissertação KÉZIA MOURA.pdf: 1645406 bytes, checksum: 228e191c7a4f30a67acd5d55cee26e2b (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-14T14:01:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação KÉZIA MOURA.pdf: 1645406 bytes, checksum: 228e191c7a4f30a67acd5d55cee26e2b (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013 / CNPq;FACEPE / Lectinas são proteínas ligadoras de carboidratos e com atividade hemaglutinante (AH). Sementes de Moringa oleifera são utilizadas no tratamento de água e contêm uma lectina solúvel em água (WSMoL) com atividade coagulante. O objetivo deste trabalho foi avaliar a cinética de coagulação promovida por WSMoL através de medidas de absorbância (densidade óptica) e variação de resistência elétrica na interface eletrodo-solução, na ausência e presença de carboidratos e íons. Extrato aquoso (10%, p/v) de sementes foi fracionado com sulfato de amônio (60% de saturação) e o precipitado foi aplicado em coluna de quitina equilibrada com NaCl 0,15 M. WSMoL foi eluída com ácido acético 1,0 M e caracterizada quanto à massa molecular nativa, perfil em SDS-PAGE e ponto isoelétrico (PI). A atividade coagulante foi determinada empregando-se modelo de água turva com caolin a 1% em água de torneira. A AH e atividade coagulante de WSMoL foram também avaliadas na presença de Nacetilglicosamina, glicose e frutose em diferentes concentrações (25, 50, 100, 200 mM) e soluções de sais de cálcio e magnésio (20 mM). WSMoL nativa apresentou massa molecular 59,4 kDa. Em SDS-PAGE, foram observados três peptídeos com aproximadamente 30, 20 e 10 kDa. O PI determinado para WSMoL nativa foi de 5,5. A AH de WSMoL foi inibida por todos os carboidratos nas concentrações testadas (exceto frutose a 25 mM) e estimulada pelos íons cálcio e magnésio. A atividade coagulante de WSMoL foi demonstrada por redução da absorbância da solução de caolin e redução da resistência elétrica do meio aquoso em presença da lectina. A incubação da lectina com carboidratos nas concentrações que inibiram a AH ou com íons cálcio e magnésio promoveu a redução da atividade coagulante de WSMoL, demonstrada pela baixa eficiência na redução da absorbância e resistência elétrica do meio aquoso. A incubação com carboidratos na concentração de 200 mM aboliu a atividade coagulante da lectina. Em conclusão: 1) WSMoL nativa é uma proteína aniônica oligomérica; 2) a redução de absorbância e resistência elétrica promovida por WSMoL provavelmente envolve desestabilização de partículas em suspensão, seguida da formação de complexos entre WSMoL e as partículas; 3) a presença no meio aquoso de carboidratos inibidores da AH de WSMoL resulta em diminuição da atividade coagulante; e 4) cátions Ca2+ e Mg2+ estimularam a AH mas prejudicaram a atividade coagulante de WSMoL.

Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-04-17T15:15:30Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE DOUTORADO ARQUIVO UNICO PARA BIBLIOTECA (1.pdf: 1427600 bytes, checksum: 264276f1444fd2b25a895c531a6488bf (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T15:15:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE DOUTORADO ARQUIVO UNICO PARA BIBLIOTECA (1.pdf: 1427600 bytes, checksum: 264276f1444fd2b25a895c531a6488bf (MD5) Previous issue date: 2012-08 / Esta pesquisa visou avaliar a influência de um medicamento comercial (condroton®), cujo componente ativo é o sulfato de condroitina e da lectina de semente de Cratylia mollis (Cramoll 1,4) associados à crioterapia e ultrassom terapêutico, em lesão de cartilagem do joelho de coelhos. O extrato da semente de C. mollis 10% (p/v) foi preparado em NaCl 0,15 M, fracionado com sulfato de amônio (40-60% de saturação). A fração obtida (F40- 60) foi submetida a cromatografia de afinidade em Sephadex G-75. Cramoll 1,4 foi obtida por eluição bioseletiva com D-glicose 0,3 M em NaCl 0,15 M, dialisada contra NaCl 0,15 M durante 24 h, e liofilizada. O estudo foi realizado através da análise das comunidades celulares (média de 250 células/indivíduo), obtidas nos estudos histológicos. Foram utilizados 18 coelhos machos da raça Califórnia, albinos, pesando entre 2,5 a 3,5 Kg, correspondendo de dois a três meses de idade (Masoud et al., 1986), totalizando uma média de 4500 células analisadas. Foi realizada lesão na cartilagem, simulando osteoartrose nos joelhos dos coelhos, e posteriormente, os animais foram divididos em nove grupos (2 indivíduos/grupo) de tratamento. Grupo controle (GC) com nenhum procedimento terapêutico; Grupo submetido à aplicação de gelo (GG); Grupo submetido à terapia com ultrassom terapêutico tipo pulsado, marca KLD Avatar II®, com freqüência de 1 MHz, intensidade de 535 mW/cm2 (0,5W/cm2), pulso de 2:8 e previamente calibrado (GU); Grupo que recebeu injeção intra muscular de condroton® (GSC); Grupo que recebeu Cramoll 1,4 (GCramoll); Grupo submetido à aplicação de gelo e injeção de condroton® (GGSG); Grupo submetido a terapia com ultrassom e condroton® (GUSG); Grupo submetido à aplicação de gelo e Cramoll 1,4 (GGCramoll) e, Grupo submetido a terapia com ultrassom e Cramoll 1,4 (GUCramoll). Os resultados obtidos demonstraram que, quando comparadas a utilização do ultrassom terapêutico com condroton® (p=0,0251*); e ultrassom terapêutico com Cramol 1,4 (p=0,0414*), houve aumento da área do sulfato de condroitina em ambos os grupos, porém, este aumento foi maior no grupo tratado com Cramoll 1,4. A utilização de crioterapia concomitante ao uso de condroton® ou Cramol 1,4, não demonstrou diferenças no estudo, quando comparados os efeitos do tratamento entre 60 e 90 dias. A utilização de Cramol 1,4 aumentou a área do sulfato de condroitina (p=0,0001*), na osteoartrose da cartilagem do joelho de coelhos em 60 e 90 dias de tratamento, em comparação com o grupo controle. Observou-se também, aumento da área do colágeno com a utilização do condroton® com 60 dias de tratamento, (p=0,0001*), porém, diminuindo sua área no período de 90 dias. Desta forma os autores concluiram que o ultrassom terapêutico e a Cratylia mollis 1,4 tem efeitos positivos sobre a osteoartose induzida experimentalmente nos coelhos.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:50:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Cerne de Myracrodruon urundeuva é resistente à biodeterioração por fungos e cupins que promovem danos severos à madeira. Este trabalho descreve as atividades antioxidante, antifúngica e repelente contra Nasutitermes corniger de metabólitos secundários de cerne de M. urundeuva e atividade termiticida da lectina de cerne de M. urundeuva (MuHL). Extrato salino (ES, preparação com atividade hemaglutinante) e extrato metanólico (EM, sem atividade hemaglutinante) contêm compostos fenólicos, ácido gálico, flavonóides, luteolina, derivados cinâmicos, proantocianidinas, taninos hidrolisáveis e leucoantocianidinas. Ambos ES e EM mostraram atividade antioxidante e foram efetivos na inibição do crescimento de Fusarium. ES foi eficiente contra F. decemcellulare, F. moniliforme, F. oxysporum, e F. solani, mas ele teve pouco efeito contra F. lateritium. EM praticamente não teve efeito sobre F. decemcellulare e foi mais ativo do que ES contra F. lateritium. ES induziu mortalidade de N. corniger (CL50 de 1,81 mg/mL para soldados e 2,59 mg/mL para operários) e não teve atividade repelente. EM não teve atividade termiticida, mas foi um bom repelente. A presença de MuHL foi detectada em ES. MuHL foi isolada por cromatografia de afinidade (coluna de quitina) e o efeito da lectina sobre N. corniger foi avaliado pelos ensaios termiticida e repelente. MuHL foi submetida a tratamento com tripsina e analizada para a presença de contaminantes não protéicos. A atividade da lectina foi inibida pelo monossacarídeo N-acetilglicosamina e adsorveu na coluna de quitina. A preparação lectínica foi livre de metabólitos secundários que podem promover a mortalidade de insetos. Contato com lectina em todas as concentrações induziu mortalidade dos cupins. Os valores de CL50 foram 0,248 mg/mL para operários e 0,199 mg/mL para soldados, após 4 dias. Ensaio repelente indicou que a lectina não induziu um efeito de rejeição. A lectina permaneceu ativa após incubação com tripsina bovina. Este é o primeiro relato do efeito tóxico de lectinas sobre térmitas. As bioatividades detectadas assinalam a possibilidade da participação de metabólitos secundários e MuHL na resistência do cerne de M. urundeuva à biodeterioração. Adicionalmente, os resultados indicam o uso de resíduos de madeira como fonte de agentes bioativos naturais