La infección con el virus de la inmunodeficiencia humana (HIV), causa una profunda inmunodepresión que expone a las personas infectadas a diversas infecciones oportunistas. Lepidium peruvianum Ch. presenta varias propiedades como, su capacidad estimulante de la reproducción y energizante, investigaciones recientes han demostrado su capacidad antitumoral e inmunoestimulante. El objetivo del presente trabajo fue determinar la actividad de tres tipos de extractos (clorofórmico, acuoso y metanólico) de L. peruvianum Ch. en cultivos de leucocitos de personas saludables y HIV-1+. Para ello, células sanguíneas de 5 voluntarios sanos y 5 HIV-1+ fueron cultivadas por triplicado en presencia de cada extracto a una concentración final de 800µg/mL y se incubó por 16 horas a 37 ºC. Se realizó el recuento de los leucocitos y sus 4 estirpes celulares (linfocitos, neutrófilos, eosinófilos y monocitos) mediante hemograma manual y de las poblaciones de linfocitos T CD3+CD4+ y CD3+CD8+ por citometría de flujo. Se empleó el medio de cultivo RPMI como control negativo de la prueba. En las personas saludables, para las 4 estirpes celulares evaluadas, el extracto clorofórmico logró incrementar significativamente el número de linfocitos (p=0.003). La población linfocitaria T CD3+CD4+ presentó un incremento celular con el extracto clorofórmico (p= 0.004).En las personas HIV-1+, los 3 extractos lograron incrementar el número de leucocitos. En los individuos pertenecientes al estadío C se observó que el extracto clorofórmico logró un incremento significativo del número de linfocitos respecto al control. Estos resultados pueden ser de gran ayuda para utilizar a L. peruvianum Ch. en el tratamiento de personas infectadas con HIV-1 contribuyendo con restaurar el nivel y funcionamiento de las células T infectadas por el virus. Palabras Clave: Lepidium peruvianum, Lepidium meyenii, maca, inmunoestimulante, metabolitos secundarios, HIV-1, SIDA. / Infection with the human immunodeficiency virus (HIV), causes a profound immunosuppression that exposes people infected to various opportunistic infections. Lepidium peruvianum Ch. has several properties, the most known, its ability stimulating the reproduction and energizing or revitalizing, recent research has shown antitumor and immunostimulatory capacity. The aim of this study was to determine the activity of three types of extracts (chloroform, methanol and aqueous) of L. peruvianum Ch. in cultures of leukocytes from healthy people and HIV-1+. To do this, blood cells from 5 healthy and 5 HIV-1+ volunteers were cultured in triplicate in the presence of each extract at a final concentration of 800μg/mL and incubated for 16 hours at 37 ° C. We performed the counting of leukocytes and their 4 cell lines (lymphocytes, neutrophils, eosinophils and monocytes) through a hemogram and populations of T lymphocytes CD3+ CD4+ and CD3+ CD8+ by flow cytometry. We employed RPMI culture medium as negative control test. In healthy people, for the 4 cell lines tested, the chloroform extract was able to increase significantly the number of lymphocytes (p= 0.003). The CD3+CD4+ lymphocyte population showed an increase cell with the chloroform extract (p= 0.004). In people HIV-1+ the 3 extracts were able to increase the number of leukocytes. In individuals belonging to stage C showed that the chloroform extract achieved a significant increase in number of lymphocytes over control. These results may be helpful to use a L. peruvianum Ch. in treating people infected with HIV-1 contributing to restore the level and function of T cells infected with the virus. Key Words: Lepidium peruvianum, Lepidium meyenii, maca, immunostimulant, secondary metabolites, HIV-1, AIDS.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La hematología ha mostrado ser una buena herramienta para apoyar al diagnóstico de diversas condiciones en animales. En peces destinados a producción, es necesario estudiar y estandarizar las metodologías para obtener parámetros sanguíneos y así contar con indicadores que aporten al control sanitario. El recuento de leucocitos totales otorga información en relación al estatus inmunológico, pero los métodos validados representan cierta dificultad al momento de su uso en terreno ya que requieren implementos de laboratorio y personal calificado para su ejecución. Por ello, el objetivo principal fue establecer un método de recuento indirecto de leucocitos totales en frotis sanguíneo en individuos de trucha arcoíris clínicamente sanos, como alternativa al método estándar utilizado comúnmente en laboratorio. En dos muestreos separados por 2 semanas se obtuvo muestras de sangre en tubos con heparina litio de 54 ejemplares de trucha arcoíris (Oncorhynchus mykiss) procedentes de la piscicultura Río Blanco, Quinta región. A cada muestra se le realizaron recuentos totales de leucocitos mediante el método directo del hemocitómetro en cámara de Neubauer (RTL-CN) y recuentos totales de leucocitos por método indirecto en frotis sanguíneo (RTL-FS). El promedio de recuento en RTL-CN fue 19.499 leucocitos/μL con coeficiente de variación (CV) de 47,88%. El promedio de recuento en RTL-FS fue 43.552 leucocitos/μL con coeficiente de variación de 32,18%. Estos resultados muestran un menor coeficiente variación en el recuento indirecto (RTL-FS) lo que podría deberse a la rigurosidad con que se trabajó la preanalítica y analítica del método, condiciones que son puntos críticos en la ejecución de los recuentos celulares. La correlación entre ambos métodos fue de 0,65 (p<0,0001) positiva y estadísticamente significativa, pero no suficiente para validar el recuento indirecto según lo sugerido por la literatura (≥0,80) aún cuando es más alta que la obtenida por Veliz (2013) bajo la misma metodología, lo que sugiere la posibilidad de ser utilizada en estimaciones de leucocitos. Basado en lo anterior, se postuló un modelo matemático predictor de valores promedio de recuento de leucocitos en cámara de Neubauer a partir de recuentos de leucocitos realizados en frotis sanguíneo. De acuerdo a lo referido hasta ahora en la literatura, este sería el primer modelo matemático descrito con el objetivo principal de generar una herramienta de apoyo al diagnóstico que pueda ser utilizada en el monitoreo de leucocitos totales en peces a nivel de terreno / Hematology has shown to be very useful as a diagnostic approach tool in several animal conditions. Particularly, in fish culture species is necessary to study and standardize methodologies in order to obtain reliable blood parameters to assess sanitary control. White blood cell (WBC) counts bring relevant information of the immunologic status in fish, but validated laboratory methods are time consuming and require qualified people to develop them. The aim of this study was to establish an indirect WBC count in blood smears as an alternative method to the hemocytometer in Neubauer chamber. Fifty four rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) specimens from Río Blanco fish farm, located in the Fifth Region, were sampled twice separated by 2 weeks. In each fresh blood sample WBC counts were performed by a direct hemocytometer method in Neubauer chamber (RTL-CN) and by an indirect method in blood smears (RTL-FS). The average count in RTL-CN was 19,499 leucocytes/μL with a variation coefficient (CV) of 47.88%. The average count in RTL-FS was 43,552 leucocytes/μL with a variation coefficient of 32.18%. This results show a less CV in the indirect method (RTL-FS) which may be explained by the accuracy in preanalytic and analytic work, requirements that are essential and critical in manual cell counts. The correlation between both methods was 0.65 (p<0,0001) positive and statistically significant, higher than the one obtained in a similar study (Veliz, 2013), but not enough to be validated, although it suggests the indirect method could be used in leucocyte estimations in blood smears. Based on the above and other statistical information obtained in this work, we propose a mathematical predictive model of WBC counts obtained by means of smear leucocyte counts, which in our understanding, is the first screening hematological tool for fish leucocytes

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. / Made available in DSpace on 2012-10-20T13:37:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 196919.pdf: 1245563 bytes, checksum: e5b57000d33d53abd6813beb3add944c (MD5) / O presente estudo investigou a relação entre as [taquicininas], em especial a [substância P] e situações de [estresse], avaliando respostas comportamentais no [labirinto em cruz elevado] (LCE) e na distribuição de [leucócitos] em camundongos. Nossos resultados mostraram que as fêmeas são mais sensíveis à administração central de SP, apresentando efeitos do tipo ansiogênicos mais evidentes que os dos machos, além de linfopenia, leucopenia. Os pré-tratamentos farmacológicos com aminoglutetimina, propranolol e naloxona sugerem uma participação dos glicocorticóides e dos b-adrenoceptores, mas não dos receptores opióides do tipo m, na modulação dos efeitos estudados, em animais submetidos ao estresse de natação e também naqueles tratados com SP centralmente. Ambos os grupos submetidos ao estresse de natação ou tratados centralmente com SP têm seus efeitos comportamentais e sangüíneos inibidos pelo pré-tratamento com um [antagonista do receptor taquicinérgico NK1] (FK-888) e do [antagonista de receptor de interleucina IL-1b] (??IL-1ra)?, indicando que uma via comum provável entre as alterações comportamentais e fisiológicas produzidas pela SP e pelo estresse seria via liberação de [citocinas].

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / Los fibroblastos cardíacos (FC) son considerados células centinelas del tejido cardíaco, por su compleja y variada respuesta en la mantención de la homeostasis o frente a un evento de injuria cardíaca, como infarto al miocardio (MI). La necrosis de cardiomiocitos involucra la liberación diversos patrones moleculares asociados a daño (DAMPs), entre ellos el heparán sulfato (HS), constituyente de la matriz extracelular (MEC) de FC que ejerce sus efectos a través del receptor Tipo-Toll 4 (TLR4). La cascada inflamatoria gatilla la infiltración y adhesión de leucocitos, que se encargan de limpiar restos celulares y liberar citoquinas que favorecen la diferenciación de FC a miofibroblastos (MFC), iniciando el proceso fibrótico y formación de cicatriz. La activación crónica de MFC por citoquinas y DAMPs en esta etapa puede provocar deposición excesiva de colágeno, conocida como fibrosis cardiaca, con consecuencias como arritmias e insuficiencia cardíaca. El objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto de HS en la expresión de proteínas de adhesión en el FC junto con la adhesión de leucocitos y sus consecuencias en la modulación del fenotipo del FC. Se demostró que en FC in vitro, HS aumenta la expresión de ICAM-1 y VCAM-1, y como consecuencia de ello, aumenta la adhesión de células mononucleares de bazo (SMC) y polimorfonucleares de médula ósea (PMN) a FC. El co-cultivo de FC con SMC generó un aumento en la expresión de alfa-actina de músculo liso (α-SMA), que es revertido al pre-tratar los FC con HS. Estos resultados dan cuenta del rol dual del HS durante las etapas de la cicatrización post-MI, permitiendo la adhesión de SMC y diferenciación de los FC a un fenotipo pro-fibrótico, pero manteniendo a la vez características pro-inflamatorias necesarias para llevar a cabo el proceso de cicatrización, y mantener la homeostasis con el fin de mantener el funcionamiento del tejido cardíaco / Cardiac fibroblasts (CF) act as sentinel cells of the heart tissue, due to its complex response in the maintenance of homeostasis or in cardiac injury events, such as myocardial infarction (MI). Cardiomyocyte necrosis involves the release of various damage-associated molecular patterns (DAMPs) including heparan sulfate (HS), constituent of the extracellular matrix (ECM), whose effects are exerted through the TLR4 receptor. The inflammatory cascade triggers the infiltration and adhesion of leukocytes, which are responsible of clearing cell debris and releasing cytokines that promote CF differentiation to myofibroblast (CMF), initiating the fibrotic process and scar formation. Chronic activation of CMF at this stage may cause excessive collagen deposition, known as cardiac fibrosis, with consequences such as arrhythmia and heart failure. The overall objective was to study the effect of HS on the expression of adhesion proteins in CF, along with leukocyte adhesion and its consequences in modulating the phenotype of CF. HS enhanced ICAM-1 and VCAM-1 expression, with increased spleen mononuclear cells (SMC) and bone marrow granulocytes (PMN) adhesion to CF. Co-culture of CF with SMC caused an increment of α-SMA expression, skewing CF towards a profibrotic phenotype, but pre-treating CF with HS partially reverted this effect. These data shows the dual role of HS during the initial stages of wound healing, allowing the adhesion of SMC and differentiation of CF to a profibrotic phenotype, while mantaining proinflammatory properties to ensure tissue homeostasis and prevent complications such as heart rupture / FONDECYT N° 1130300

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Compara la depresión y la violencia intrafamiliar con el recuento de leucocitos en un grupo de gestantes atendidas en los centros de salud “Carmen Alto” y “Belén” en Huamanga, departamento de Ayacucho. La población estuvo compuesta por 67 gestantes entre 15 y 38 años, a quienes se les aplicó la ficha de tamizaje en violencia intrafamiliar (VIF), el cuestionario autorreportado de síntomas (SRQ-18) y análisis bioquímicos en sangre, orina y secreción vaginal. Los resultados de los instrumentos psicológicos y los arrojados por los exámenes de laboratorio con respecto al recuento de leucocitos fueron analizados a través del paquete estadístico SPSS (versión 15.0 en español) mediante la prueba T de muestras independientes, la ANOVA, la prueba de Kruskall-Wallis y la U de Mann-Whitney. Los resultados indican una asociación estadísticamente significativa entre el recuento de leucocitos en la muestra de sangre con depresión (0.014) tomando en cuenta varianzas desiguales, no existiendo diferencia significativa entre la depresión y el recuento de leucocitos en orina y secreción vaginal. Así mismo se encontró solamente diferencia mínima significativa entre las medias de las gestantes no victimas de VIF con aquellas que presentan VIF psicológico (0,048) en su recuento de leucocitos en secreción vaginal. / Tesis

Aquesta tesi (mitjançant cinc estudis) va ser destinada a investigar factors que tenen un efecte potencial sobre la salut materna durant la gestació i el postpart temprà, tenint en compte la melatonina com una possible millora de la salut i el rendiment de les vaques. En el primer estudi, els factors que afecten els leucòcits perifèrics de la mare, com un indicador d'estat immune, entre els dies 90-210 de gestació van ser, la interacció entre l'edat de la vaca i Neospora caninum, l'estació, la gestació gemelar, la producció de llet i el temps de mostreig. Seguint el sistema immune matern més enllà en la seva fase més crítica, el segon i el tercer estudis resumeixen els diferents factors que afecten el sistema immunològic de la mare des del dia 220 de gestació fins a 30 dies postpart. El toro d'IA, les glicoproteïnes associades a la gestació (PAG), la interacció N. caninum-C. burnetii, l'estació, l'edat, la gestació gemelar i el temps de mostreig afectaven significativament els leucòcits materns. L'objectiu del quart estudi va ser avaluar la dosi adequada de la melatonina, per provar els seus possibles efectes en la millora de la salut de la mare durant el peripart i la dosi de 332 mg / kg era la més adequada. Finalment, els possibles efectes de la melatonina en millorar la salut materna durant el peripart van ser avaluats en el cinquè estudi. Les vaques tractades amb melatonina tenien menys probabilitat de ser repetidores i de perdre la gestació, i, per tant, tenien menys dies oberts. / Esta tesis (mediante cinco estudios) fue destinada a investigar factores que tienen un efecto potencial sobre la salud materna durante la gestación y el posparto temprano, teniendo en cuenta la melatonina como una posible mejora de la salud y el rendimiento de las vacas. En el primer estudio, los factores que afectan a los leucocitos periféricos de la madre, como un indicador de estado inmune, entre los días 90-210 de gestaion fueron, la interacción entre la edad de la vaca y Neospora caninum, la estación, la gestación gemelar, la producción de leche y el tiempo de muestreo. Siguiendo el sistema inmune materno más allá en su fase más crítica, el segundo y el tercer estudios resumen los diferentes factores que afectan al sistema inmunológico de la madre desde el día 220 de gestación hasta 30 días posparto. El toro de IA, las glicoproteínas asociadas a la gestación (PAG), la interacción N. caninum-C. burnetii, la estación, la edad, la gestación gemelar y el tiempo de muestreo afectaban significativamente los leucocitos maternos. El objetivo del cuarto estudio fue evaluar la dosis adecuada de la melatonina, para probar sus posibles efectos en la mejora de la salud de la madre durante el periparto y la dosis de 332 mg/kg era la más adecuada. Por último, los posibles efectos de la melatonina en mejorar la salud materna durante el periparto fueron evaluados en el quinto estudio. Las vacas tratadas con melatonina tenian menos probabilidad de ser repetidoras y de perder la gestación, y, por lo tanto, tenian menos días abiertos. / This thesis (by means of five studies) aimed at investigating factors that have potential effect on the maternal health during gestation and the early postpartum, plus considering melatonin for improving cows’ health and performance. In the first study, factors affecting maternal peripheral leukocytes, as an indicator to immune status, between Days 90-210 of gestaion were, the interaction between cows’ age and Neospora caninum-seropositivity, season, twin-pregnancy, milk production and time. Following the maternal immune system further in its most critical phase, the second and third studies summarize different factors affecting maternal immune system from gestation Day 220 till 30 days postpartum. Artificial inseminating bull, plasma pregnancy associated glycoproteins (PAGs), N. caninum-C. burnetii interaction, season, age, twin-pregnancy and time were found to significantly affect maternal peripheral leukocytes during that stage. The aim of the forth study was to evaluate proper melatonin dose as subcutaneous implants, for testing its possible effects in enhancing maternal health during the peripartum. Melatonin dose of 332 μg/kg was the most adequate. Finally, possible melatonin effects on enhancing maternal health during the peripartum were evaluated in the fifth study. Melatonin treated cows were found to have less likelihood of repeat breeding syndrome and pregnancy loss, and, therefore, less days open.

[pt] Os analisadores hematológicos são sistemas de medição que permitem identificar elementos sanguíneos, incluindo a contagem diferencial dos cinco tipos de leucócitos encontrados no sangue periférico: neutrófilos, linfócitos, monócitos, eosinófilos e basófilos. Devido à inexistência de materiais de referência certificados ou métodos de referência para a análise diferencial de leucócitos, tem sido habitual avaliar o desempenho de novos analisadores comparando-os com sistemas tradicionalmente disponíveis e bem consolidados. Em 2015, foi lançada uma nova tecnologia portátil e de baixo custo, o modelo DxH500 (Beckman Coulter), baseada na perda axial de luz usando LED azul como emissor, combinada à medição de impedância. O presente trabalho compara o desempenho do DxH500 com um modelo bastante utilizado desde seu lançamento em 2001 para exames laboratoriais em larga escala, o modelo LH750 (Beckman Coulter), baseado na combinação dos princípios de impedância, condutividade e dispersão de luz (VCS). No estudo foram examinadas 310 amostras pareadas. A análise comparativa entre os resultados fornecidos por cada dispositivo indicou uma boa correlação para a caracterização de neutrófilos, linfócitos, monócitos e eosinófilos. Apesar da reduzida correlação observada para a contagem de basófilos, esse resultado não apresenta relevância clínica já que os valores obtidos para as amostras avaliadas foram muito reduzidos, inferiores aos limites de referência. Embora a análise comparativa realizada tenha apontado para um desempenho equivalente utilizando-se tecnologias com princípios diversos, a adequada avaliação dos dispositivos de análise hematológica requer o desenvolvimento de materiais de referência certificados, uma demanda fundamental para a garantia da confiabilidade na quantificação diferencial de leucócitos. / [en] Hematology analyzers are measurement systems that allow the identification of blood elements, including differential counting of the five types of leukocytes found in peripheral blood: neutrophils, lymphocytes, monocytes, eosinophils, and basophils. Because of the lack of certified reference materials or reference methods for differential leukocyte analysis, it has been customary to evaluate the performance of new analyzers by comparing them with traditionally available and well-established systems. In 2015, a new low-cost, portable technology was introduced, the Beckman Coulter DxH500 model, based on the axial loss of light using blue LED as a combined transmitter for impedance measurement. The present work compares the performance of the DxH500 with a widely used model since its launch in 2001 for large-scale laboratory tests, the Beckman Coulter model LH750, based on the combination of impedance, conductivity and scatter (VCS). In the study, we examined 310 paired samples. The comparative analysis between differential leukocyte evaluation results provided by each device indicated a good correlation for the characterization of neutrophils, lymphocytes, monocytes, and eosinophils. Despite the low correlation observed for basophil counts, this result is not clinically relevant since the values obtained for the evaluated samples were very low, lower than the reference limits. Although the comparative analysis carried out pointed to an equivalent performance using technologies with different principles, the adequate evaluation of hematological analysis devices requires the development of certified reference materials, fundamental demand for the reliability of the differential quantification of leukocytes.