Made available in DSpace on 2014-06-12T23:04:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8844_1.pdf: 1399832 bytes, checksum: 021702de2fe4d0a16899996719c938ed (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2004 / O objetivo deste estudo é analisar os aspectos morfométricos e morfológicos da fossa intercondilar femoral e dos côndilos femorais em joelhos de indivíduos adultos jovens de ambos os sexos, comparando os caracteres morfológicos dentre os gêneros. Foram analisadas 46 radiografias simples da fossa intercondilar femoral dos joelhos direito e esquerdo, obtidas de 46 indivíduos de ambos os sexos, com faixa etária entre 18 e 35 anos e sem patologias prévias dos membros inferiores. A amostra foi dividida em dois grupos: 46 joelhos normais de 23 indivíduos do sexo masculino (grupo 1, G1) e 46 joelhos normais de 23 indivíduos do sexo feminino (grupo 2, G2). Para obtenção das imagens radiográficas, os indivíduos foram posicionados sobre a mesa de exame em genuflexo com as mãos e os joelhos apoiados sobre a mesa. A amplitude articular dos joelhos foi fixada em 75º e determinada através de um goniômetro clínico. As imagens radiográficas foram digitalizadas através de um scanner com o auxílio de uma câmara de iluminação e foi realizado o tracejamento de linhas referenciais para a mensuração. Para melhor visualização dos limites da fossa, foram feitos vários cliques com o mouse demarcando a área com 10 a 20 pontos. As variáveis foram mensuradas através do software KEYCAD complete version 1.0© (1993). Inicialmente os joelhos direito e esquerdo de cada grupo foram comparados entre si, não havendo diferenças estatisticamente significantes para todas as variáveis analisadas. A análise comparativa da lbc quanto à lateralidade e quanto ao gênero, demonstrou que os valores masculinos (D=82,17mm, E=82,13mm, p<0,05) se sobrepuseram aos femininos (D=70,28mm, E=69,82mm, p<0,05) em ambos os lados. Não houve diferença estatística significante para a lf entre os grupos analisados quanto ao gênero (p=0,177), apenas no lado esquerdo (G1=23,44mm, G2=21,27mm, p<0,05). Para a variável B foram observados valores masculinos significativamente maiores tanto na análise comparativa quanto à lateralidade (D=25,93mm, E=25,60mm, p<0,05) quanto entre os gêneros (G1=25,76mm, G2=21,88mm, p<0,05). Na comparação entre os gêneros, a variável A foi significativamente maior no sexo masculino (22,23mm, p<0,05), quanto à lateralidade houve diferença estatística apenas no lado esquerdo (G1=22,72mm, G2=19,63mm, p<0,05). O sexo masculino (lcl=29,76mm, lcm=29,72mm, p<0,05) apresentou côndilos femorais mais largos do que o feminino (lcl=23,59mm, lcm=24,92mm, p<0,05), independente do lado. Não houve relevância estatística (p=0,150) na análise da af entre os grupos analisados quanto à lateralidade e quanto ao gênero. O sexo masculino apresentou valores superiores para Aº (D=72,16º, E=71,91º, p<0,05). O sexo feminino (0,3074) apresentou um I.L.I. maior do que o masculino (0,2763, p<0,05) independente de lado. Observou-se um percentual maior de fossas de formato cônico (70,6%), seguido pelas formas circular (19,6%) e retangular (9,8%) em ambos os sexos e lados. A observação dos resultados deste estudo permite concluir que não há diferença morfométrica entre os joelhos direito e esquerdo de um mesmo indivíduo e que o gênero é fator de variação morfométrica e morfológica da epífise distal do fêmur em relação à fossa intercondilar femoral e aos côndilos femorais. Os dados apresentados oferecem parâmetros de comparação para estudos posteriores envolvendo joelhos com lesão do L.C.A

Orientador: Bruno Watanabe Minto / Resumo: O presente estudo objetiva estabelecer padrões elastográficos normais das principais estruturas da articulação femorotibiopatelar (joelho) de cães saudáveis, em diferentes faixas etárias. Foram examinados 30 cães (60 articulações) da raça Beagle sem alterações musculoesqueléticas, os quais foram distribuídos em três grupos: jovens, adultos e idosos. Realizou-se elastografia ARFI do ligamento patelar, menisco medial, ligamento cruzado caudal e ligamento cruzado cranial de cada articulação. Análises qualitativas e quantitativas detectaram correlação positiva da velocidade de cisalhamento, ou seja, da rigidez das estruturas, com a idade dos cães. O ligamento patelar apresentou aumento gradual de sua rigidez em relação à idade; já o menisco e os ligamentos cruzados mostraram-se mais rígidos nos filhotes do que nos adultos, mas também revelaram suas maiores rigidezes nos animais idosos. Avaliou-se também a diferença de elasticidade das estruturas de acordo com o gênero e a condição reprodutiva dos animais. As fêmeas apresentaram todas as estruturas mais rígidas que os machos, com velocidades de cisalhamento diferindo entre 0,30 e 0,36 m/s dentre os dois gêneros; e apenas o menisco medial não se mostrou mais rígido nos animais castrados em relação aos inteiros, sendo a diferença daquele de apenas 0,02 m/s e a dos ligamentos de 0,40 a 0,47 m/s entre os grupos. Já quanto ao peso, não houve significância estatística em relação à elasticidade das estruturas. Tais achados corroboram os ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study is to establish normal elastographic patterns of the main knee structures of healthy dogs in different age groups. Thirty Beagles (60 joints) without musculoskeletal diseases were divided into three groups: young, adult and elderly. We performed ARFI elastography of the patellar ligament, medial meniscus, caudal cruciate ligament and cranial cruciate ligament. Qualitative and quantitative analyzes were performed, detecting a positive correlation of the shear velocity (rigidity of the structures) and the age of the dogs (p = 0.012). The patellar ligament showed a gradual increase in its rigidity in relation to age; the meniscus and the cruciate ligaments were more rigid in the pups than in adults, but also showed greater rigidity in elderly animals. The difference in elasticity of structures according to sex and reproductive condition was also evaluated. The females had all the structures more rigid than the males, with shear velocities differing between 0.30 and 0.36 m / s between the two groups. Only the medial meniscus did not appear to be more rigid in castrated animals. There was no statistical significance regarding the elasticity of the structures, according to weight. ARFI elastography is feasible technique in canine knees, not only as a method for the early diagnosis of ligament and meniscal alterations, but also to evaluate repercussion of instability in the contralateral limb and the impact of surgical and physiotherapeutic treatments. It is be... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Determina la recuperación de la fuerza muscular del cuádriceps y la variación del trofismo muscular del muslo en pacientes post operados de ligamento cruzado anterior en un lapso de tres meses en el programa de medicina física y rehabilitación del Centro Médico Naval Cirujano Mayor Santiago Távara. Es un estudio analítico, observacional y de tipo longitudinal. Participan 20 pacientes, entre los 20 y 50 años de edad, con diagnóstico médico de post operado de ligamento cruzado anterior. La fuerza muscular se evalúa en dos momentos, la primera evaluación se realiza al finalizar la etapa inflamatoria (tercera semana post quirúrgica) y la segunda, tres meses después. El instrumento que se utiliza para la medida de la fuerza es el test de fuerza máxima o también llamado test de resistencia máxima (1RM), cuyo índice de confiabilidad oscila entre 0.92 a 0.98. La estimación del valor de 1RM es por medio de la ecuación de Brzycki y para la categorización de la fuerza muscular, se utiliza la escala de Vivian Heyward. Encuentra que los pacientes post operados de ligamento cruzado anterior muestran un 37,5% de incremento en la fuerza muscular del cuádriceps después de tres meses de haber iniciado el programa de rehabilitación física. Al iniciar el tratamiento fisioterapéutico el 80% los pacientes presentan una fuerza muscular que los ubica dentro de una categoría mala; tres meses después de iniciado el tratamiento fisioterapéutico, el 95% de los pacientes se ubican dentro de la categoría buena. / Tesis

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La ruptura del ligamento cruzado anterior (LCA) es la patología más frecuente de la rodilla canina, sin embargo sigue siendo una entidad de la que se sabe poco. Aunque afecta a perros de todos los tamaños, se observa con mayor frecuencia en animales adultos de razas grandes. En estudios epidemiológicos recientes se ha descrito que es más prevalente en razas como el Rottweiler, el Terranova y el Labrador retriever. En 1983 el estudio de Barclay Slocum sobre la biomecánica en el modelo activo de la rodilla, definió la fuerza de empuje tibial craneal como fuerza de primera importancia que aparece durante el apoyo de la extremidad, proponiendo la hipótesis de su implicación en la etiología de las lesiones del LCA y además la relacionó con el peso del perro y el plano de inclinación o pendiente de la meseta tibial. Esta teoría fue la base sobre la que se desarrollaron las novedosas técnicas de nivelación de la meseta tibial como alternativa quirúrgica para la reparación de la ruptura del LCA. En el presente estudio, realizado entre agosto de 2007 y agosto de 2008 en el Hospital Clínico Veterinario de la Universidad Autónoma de Barcelona, se evaluó la aplicación de la osteotomía tibial en cuña en 52 casos de ruptura del LCA parcial o completa, correspondiendo a 43 perros de diferentes razas, peso y edad. Se obtuvieron resultados positivos uniformes con respecto a un rápido retorno de la función, con reducción del desarrollo de la enfermedad degenerativa articular y una muy baja incidencia de complicaciones. Las ventajas de esta técnica son la fácil aplicación del procedimiento, la reducción del área a disecar y una mejor rotación de la tibia en casos de rotación interna. El equipamiento necesario para llevarla a cabo está fácilmente disponible y los resultados son comparables a los encontrados en perros tras una técnica de osteotomía niveladora de la meseta tibial (ONMT). / Universidad Autónoma de Barcelona (UAB), Facultad de Veterinaria

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Introducción: La regeneración ósea a es un procedimiento requerido en odontología en técnicas quirúrgicas reconstructivas, implantología y en periodoncia. En los últimos años la Ingeniería Tisular ( IT ) se encuentra centrada en el desarrollo de terapias más eficiente para la regeneración de tejido óseo. La IT es una disciplina que se basa en tres elementos principales; a ) señales bioactivas, ( b ) Andamio ( scaffold ) y ( c) Células madre. Un requerimiento fundamental de la IT es el de disponer de fuentes apropiadas de células madres para el desarrollo de nuevas terapias, así como el de conocer las propiedades de estas células para cada aplicación específica. Las células madre son células no diferenciadas que tienen la capacidad de auto renovarse, diferenciarse a multilinajes de células individuales y regenerar en vivo diferentes tejidos. Últimamente se ha generado el interés de aislar células madre de origen dental, donde se han identificadas MSCs en pulpa dental ( DPSCs) , dientes deciduos exfoliados ( SHED) , folículo dental, papila apical radicular ( SCAP ) y ligamento periodontal ( PDLSCs) . Sin embargo, hasta el momento no se conocen estudios que comparen y demuestren diferencias en la habilidad de estas células de distinto origen, para diferenciarse hacia el linaje óseo; ni tampoco que indiquen qué técnica de aislamiento podría ser más apropiada para este propósito. El objetivo del presente estudio consiste en aislar y comparar la capacidad de diferenciación osteogénica de las DPSCs y PDLSCs, utilizando para ello dos técnicas de aislamiento, explante y digestión enzimática. Materiales y Métodos: Se recolectaron terceros molares impactados de pacientes sanos, previa firma de consentimiento informado y se les extrajo el ligamento periodontal y pulpa dental. Ambos tejidos fueron cultivados y aislados mediante el método de digestión enzimática y explante. Se analizó la viabilidad mediante la técnica exclusión azul de tripán y ensayo MTS. La capacidad de diferenciación osteogénica se evaluó a través de la medición de la actividad de fosfatasa alcalina, depósitos de matriz mineralizada y expresión de genes tempranos. Adicionalmente las células fueron sometidas a un periodo de criopreservación donde posteriormente se evaluó su viabilidad. 1 Resultados Para DPSCs y PDLSCs se obtuvieron valores de viabilidad cercanos al 90%, sin diferencia significativas entre ellas. Al evaluar la viabilidad celular a tiempos determinados, las DPSCs- digestión obtiene los mayores valores en cuanto a la cantidad de células al finalizar el cultivo. Los resultados en relación a la diferenciación osteogénica muestran mayores niveles de actividad de ALP y mayores depósitos de matriz mineralizada para las DPSCs, analizados con rojo alizarín y microscopía SEM. Ambos tejidos son capaces de mantener una viabilidad adecuada luego de un proceso de criopreservación. Conclusiones Células osteoprogenitoras aisladas de pulpa dental, presentan mejores propiedades de diferenciación al linaje óseo, comparado con las células madre obtenidas de ligamento periodontal. Las DPSCS-digestión aparecen como una alternativa promisoria para aplicaciones en ingeniería de tejidos orientada a la regeneración ósea en odontología.

A utilização de fatores de crescimento no tratamento periodontal tem sido amplamente estudada. No entanto, sua aplicabilidade no tratamento de seres humanos ainda não foi estabelecida. Os objetivos deste trabalho foram determinar os efeitos da aplicação de PDGF-BB, IGF-1, TGF-ß1 e sua combinação na proliferação de células cultivadas originadas do ligamento periodontal de humano (células FL2). Além disso, analisou-se a adesão dessas células a fragmentos radiculares periodontalmente comprometidos tratados previamente ou não por associação de ácido cítrico e tetraciclina após a raspagem. Para tanto, foi estabelecida cultura primária de fibroblastos obtidos de 3º molares retidos e/ou impactados extraídos de pacientes saudáveis. Para analisar a taxa de proliferação celular, foram plaqueadas 72 placas de Petri contendo inicialmente 103 células aleatoriamente divididas em 4 grupos que receberam a adição de PDGF-BB (grupo 1), TGF-ß1 (grupo 2), IGF-1 (grupo 3) ou de sua combinação (grupo 4) ao meio de cultura e 2 grupos controle (sem adição de fatores de crescimento) e contadas em triplicatas após 1, 3, 5 e 7 dias. Paralelamente, foram obtidos 30 fragmentos de dentes extraídos de 14 pacientes com perda de inserção à sondagem > 6 mm aleatoriamente distribuídos em 10 grupos de acordo com o tratamento: raspagem (grupo 1), raspagem e aplicação dos fatores de crescimento isolados ou em combinação (grupos 2-5), raspagem e condicionamento ácido (grupo 6) ou raspagem, condicionamento ácido e aplicação dos fatores de crescimento isolados ou em combinação (grupos 7-10). Os resultados obtidos foram estatisticamente avaliados pelo teste ANOVA e por métodos descritivos. Os resultados demonstraram que o TGF-ß1 apresentou os melhores efeitos na proliferação de células do ligamento periodontal em cultura, enquanto que na adesão das células aos fragmentos a combinação dos três fatores apresentou resultados mais favoráveis, com diferenças estatisticamente significantes (p<0,05) em relação aos grupos tratados sem o condicionamento ácido radicular, com exceção do grupo tratado através da combinação. Esses dados sugerem que a aplicação de fatores de crescimento, especialmente do TGF-ß1 associado ou não ao PDGF-BB e IGF-1, poderia ser favorável à regeneração dos tecidos periodontais perdidos com o processo de doença periodontal. / The use of growth factors in regenerative periodontal treatment has been largely reviewed in the past years. However, its applicability in humans is not established yet. The purpose of this study was to determine the effects of the application of PDGF-BB, IGF-1, TGFß1 alone or in combination over the proliferation of cultured human periodontal ligament fibroblasts (FL2 cells). Besides, the adhesion of FL2 cells to periodontally compromised root fragments previously treated or not with citric acid and tetracycline was evaluated. Periodontal ligament fibroblasts were obtained from third molars extracted from healthy patients and treated as explants in order to develop a primary cell line culture. To analyze the growth factor effects on periodontal ligament cells, 72 Petri dishes were cultured with 103 cells each randomly distributed among 4 experimental and 2 control groups. The experimental groups received PDGF-BB (group 1), TGF-ß1 (group 2), IGF-1 (group 3) or its combination (group 4) added to the culture medium while the controls received the supplemented culture medium only. The Petri dishes were counted in triplicates 1, 3, 5 and 7 days after the culture allowing the establishment of a growth curve for each treatment group. In a parallel experiment, 30 teeth fragments were obtained from 14 patients presenting probing attachment level > 6 mm and were randomly distributed among 10 treatment groups: scaling (group 1), scaling and growth factor application (groups 2-5), scaling and acid treatment (group 6) and scaling and acid treatment followed by growth factor application (groups 7-10). The data were statistically evaluated by ANOVA and descriptive methods. The results obtained have demonstrated that TGF-ß1 provided the more pronounced effects over cultured periodontal ligament fibroblasts proliferation while the combination of growth factors presented the most significant results over the its adhesion to periodontally compromised tooth fragments previously treated by scaling and citric acid associated to tetracycline conditioning for 3 minutes. These results were statistically different from the non-conditioned treatment groups (p<0,05), except for the group treated with the combination of growth factors. These findings suggest that these substances, especially TGF-ß1 combined or not with PDGF-BB and IGF-1, could enhance regeneration of periodontal tissues lost with the disease.

Resumo: O diagnóstico preciso e a elaboração de um plano de tratamento adequado podem constituir uma tarefa bastante complexa, especialmente nos traumatismos dentoalveolares, pois necessitam de uma abordagem multidisciplinar e conhecimento sobre o processo de reparo após o traumatismo. O objetivo do trabalho foi analisar o conhecimento dos cirurgiões dentistas sobre plano de tratamento das injúrias do ligamento periodontal após traumatismo dentoalveolar. Para tanto, a partir de um questionário, foram abordadas perguntas referentes ao perfil dos profissionais entrevistados e conduta frente às injúrias do ligamento periodontal (concussão, subluxação, luxação extrusiva, luxação lateral e luxação intrusiva) ocasionadas por traumatismo dentoalveolar. Seiscentos e noventa e três cirurgiões dentistas que participaram da 23ª Reunião Anual da SBPqO (2006) responderam o questionário e os dados obtidos foram submetidos à análise descritiva, enquanto o teste estatístico foi aplicado para demonstrar as freqüências e o nível de significância entre as variáveis (Teste qui-quadrado ou Teste Exato de Fisher). De acordo com os resultados obtidos, grandes dificuldades foram encontradas com relação ao plano de tratamento das luxações extrusiva, lateral e intrusiva. De maneira geral, a especialidade não influenciou na elaboração de planos adequados para as injúrias mais complexas. Foi possível concluir que os cirurgiões dentistas não apresentam conhecimento suficiente para tratar de maneira adequada as injúrias mais severas do ligamento periodontal após traumatismo dentoalveolar / Abstract: An accurate diagnosis and the establishment of an adequate treatment plan may constitute quite a complex task, particularly in cases of dentoalveolar trauma, which require a multidisciplinary approach and knowledge of the repair process in tooth injuries. The aim of this study was to analyze the dentists' knowledge of the treatment plan for periodontal ligament injuries after dentoalveolar trauma. For such purpose, a questionnaire was prepared with questions arguing about the profile of the interviewed professionals and their conduct facing periodontal ligament injuries (concussion, subluxation, extrusive luxation, lateral luxation and intrusive luxation) secondary to dentoalveolar trauma. Six hundred and ninety three dentists attending the 23rd Annual Meeting of the SBPqO (2006) filled out the questionnaire and the obtained data were subjected to descriptive analysis. Either chi-square test or Fisher's exact test was applied to determine the frequencies and the significance level among the variables. The results revealed great difficulties in establishing a treatment plan for extrusive, lateral and intrusive luxations. In general, the dental specialty of the participants did not influence the elaboration of adequate treatment plans for the most severe injuries. It could be concluded that dentists do not have sufficient knowledge to treat properly the most severe types of periodontal ligament injuries following a dentoalveolar trauma

A utilização de fatores de crescimento no tratamento periodontal tem sido amplamente estudada. No entanto, sua aplicabilidade no tratamento de seres humanos ainda não foi estabelecida. Os objetivos deste trabalho foram determinar os efeitos da aplicação de PDGF-BB, IGF-1, TGF-ß1 e sua combinação na proliferação de células cultivadas originadas do ligamento periodontal de humano (células FL2). Além disso, analisou-se a adesão dessas células a fragmentos radiculares periodontalmente comprometidos tratados previamente ou não por associação de ácido cítrico e tetraciclina após a raspagem. Para tanto, foi estabelecida cultura primária de fibroblastos obtidos de 3º molares retidos e/ou impactados extraídos de pacientes saudáveis. Para analisar a taxa de proliferação celular, foram plaqueadas 72 placas de Petri contendo inicialmente 103 células aleatoriamente divididas em 4 grupos que receberam a adição de PDGF-BB (grupo 1), TGF-ß1 (grupo 2), IGF-1 (grupo 3) ou de sua combinação (grupo 4) ao meio de cultura e 2 grupos controle (sem adição de fatores de crescimento) e contadas em triplicatas após 1, 3, 5 e 7 dias. Paralelamente, foram obtidos 30 fragmentos de dentes extraídos de 14 pacientes com perda de inserção à sondagem > 6 mm aleatoriamente distribuídos em 10 grupos de acordo com o tratamento: raspagem (grupo 1), raspagem e aplicação dos fatores de crescimento isolados ou em combinação (grupos 2-5), raspagem e condicionamento ácido (grupo 6) ou raspagem, condicionamento ácido e aplicação dos fatores de crescimento isolados ou em combinação (grupos 7-10). Os resultados obtidos foram estatisticamente avaliados pelo teste ANOVA e por métodos descritivos. Os resultados demonstraram que o TGF-ß1 apresentou os melhores efeitos na proliferação de células do ligamento periodontal em cultura, enquanto que na adesão das células aos fragmentos a combinação dos três fatores apresentou resultados mais favoráveis, com diferenças estatisticamente significantes (p<0,05) em relação aos grupos tratados sem o condicionamento ácido radicular, com exceção do grupo tratado através da combinação. Esses dados sugerem que a aplicação de fatores de crescimento, especialmente do TGF-ß1 associado ou não ao PDGF-BB e IGF-1, poderia ser favorável à regeneração dos tecidos periodontais perdidos com o processo de doença periodontal. / The use of growth factors in regenerative periodontal treatment has been largely reviewed in the past years. However, its applicability in humans is not established yet. The purpose of this study was to determine the effects of the application of PDGF-BB, IGF-1, TGFß1 alone or in combination over the proliferation of cultured human periodontal ligament fibroblasts (FL2 cells). Besides, the adhesion of FL2 cells to periodontally compromised root fragments previously treated or not with citric acid and tetracycline was evaluated. Periodontal ligament fibroblasts were obtained from third molars extracted from healthy patients and treated as explants in order to develop a primary cell line culture. To analyze the growth factor effects on periodontal ligament cells, 72 Petri dishes were cultured with 103 cells each randomly distributed among 4 experimental and 2 control groups. The experimental groups received PDGF-BB (group 1), TGF-ß1 (group 2), IGF-1 (group 3) or its combination (group 4) added to the culture medium while the controls received the supplemented culture medium only. The Petri dishes were counted in triplicates 1, 3, 5 and 7 days after the culture allowing the establishment of a growth curve for each treatment group. In a parallel experiment, 30 teeth fragments were obtained from 14 patients presenting probing attachment level > 6 mm and were randomly distributed among 10 treatment groups: scaling (group 1), scaling and growth factor application (groups 2-5), scaling and acid treatment (group 6) and scaling and acid treatment followed by growth factor application (groups 7-10). The data were statistically evaluated by ANOVA and descriptive methods. The results obtained have demonstrated that TGF-ß1 provided the more pronounced effects over cultured periodontal ligament fibroblasts proliferation while the combination of growth factors presented the most significant results over the its adhesion to periodontally compromised tooth fragments previously treated by scaling and citric acid associated to tetracycline conditioning for 3 minutes. These results were statistically different from the non-conditioned treatment groups (p<0,05), except for the group treated with the combination of growth factors. These findings suggest that these substances, especially TGF-ß1 combined or not with PDGF-BB and IGF-1, could enhance regeneration of periodontal tissues lost with the disease.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Odontologia, Florianópolis, 2009. / Made available in DSpace on 2012-10-24T15:18:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 276657.pdf: 3219044 bytes, checksum: c6d78c71a089cc2beb0d99894aa79ad8 (MD5) / Diversas pesquisas clínicas ou com cultura de células têm sido realizadas com o intuito de identificar o meio mais adequado para a conservação de dentes avulsionados ou de fibroblastos periodontais. Embora, na maioria das vezes, essas pesquisas confirmem ou refutem uma hipótese experimental, normalmente elas dão origem a algumas dúvidas. Esta tese de doutorado é composta de 4 pesquisas desenvolvidas com os objetivos de: 1) verificar se a renovação do leite, em intervalos regulares de 12, 24 ou 48h, é capaz de prolongar sua capacidade de manter a viabilidade de fibroblastos do ligamento periodontal humano (FLPH); 2) verificar se o tempo de estocagem da solução salina balanceada de Hank (HBSS) exerce influência sobre a sua capacidade de manter a viabilidade de FLPH; 3) comparar o efeito de diferentes meios de conservação sobre a viabilidade de FLPH; e 4) comparar o efeito de diferentes meios de conservação sobre a viabilidade e a capacidade proliferativa de FLPH. Para executá-las, as células foram conservadas, a 5 e/ou a 20°C, em própolis, clara de ovo, água de coco, HBSS, Save-A-Tooth®, leite desnatado e leite integral por períodos variáveis. Células armazenadas em Meio Essencial Mínimo (MEM) a 37°C e em água de torneira (5 e/ou a 20°C) serviram de controle-positivo e negativo, respectivamente. A viabilidade e a capacidade de proliferação celular foram determinadas pelo ensaio MTT. Os dados foram analisados pelos testes de Kruskal-Wallis, Scheffé e Mann-Whitney (a=5%). Com base nos resultados obtidos nos diferentes experimentos foi possível concluir que: 1) a renovação do leite foi capaz de prolongar a sua capacidade de manter a viabilidade de FLPH somente quando realizada, a cada 48h, no leite mantido a 5ºC; 2) o tempo de estocagem da HBSS influenciou negativamente a sua capacidade de manter a viabilidade de FLPH; 3) em ambas as temperaturas, o leite desnatado foi o melhor meio de conservação, seguido pelo leite integral e HBSS. O própolis, a clara de ovo e a água de coco podem ser indicados para a conservação de fibroblastos periodontais por um período máximo de 3h; 4) em ambas as temperaturas, os meios mais efetivos em manter a viabilidade celular (0h) foram o leite desnatado e o leite integral. Quando os meios foram mantidos a 5°C, o leite desnatado e o leite integral proporcionaram maior capacidade proliferativa aos FLPH. Quando mantidos a 20°C, a HBSS revelou os melhores resultados. / Several clinical trials or cell culture studies have been carried out in order to identify the most appropriate storage medium for the maintenance of avulsed teeth or periodontal fibroblasts. Although in most cases, these studies confirm or refute an experimental hypothesis, they often give rise to some uncertainties. This doctoral thesis is composed of 4 studies developed with the following purposes: 1) to analyze whether the replacement of milk at 12, 24 or 48 h, can extend its ability to maintain human periodontal ligament fibroblasts (HPDLF) viability; 2) to verify if the storage time influences the effectiveness of Hank's balanced salt solution (HBSS) in maintaining HPDLF viability; 3) to compare the effect of different storage media to preserve HPDLF viability; and 4) to evaluate the effect of different storage media on the maintenance of the viability and proliferative capacity of HPDLF. The cells were stored at 5 and / or 20°C in propolis, egg white, coconut water, HBSS, Save-A-Tooth ®, skimmed and whole milk for different periods of time. Cells stored at 37°C in Minimum Essential Medium (MEM) and tap water (5 and / or 20°C) served, respectively, as positive and negative controls. The viability and cellular proliferation capacity was determined by MTT assay. Data were analyzed by Kruskal-Wallis, Scheffe and Mann-Whitney tests (á = 5%). Based on the results obtained in the different experiments, it was concluded that: 1) milk replacement was able to extend its ability to maintain HPDLF viability only when carried out every 48 hours at 5°C, 2) the storage time of HBSS negatively influenced its effectiveness, 3) at both temperatures, skim milk, followed by whole milk and HBSS preserved significantly more viable cells than any other tested solution. Propolis, egg white and coconut water can be indicated to preserve HPDLF for up to 3 hours, 4) at both temperatures, the most effective mediums to maintain cell viability (0 h) were skimmed and whole milk. When the media were kept at 5° C, skimmed and whole milk provided higher proliferative capacity to HPDLF. When kept at 20°C, HBSS showed the best results.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-graduação em Odontologia / Made available in DSpace on 2012-10-23T14:48:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 263918.pdf: 1851045 bytes, checksum: b00c02c9b8564ca5d808e654762f5881 (MD5) / Os objetivos deste estudo foram: estabelecer uma linhagem de fibroblastos oriundos de ligamento periodontal de dentes humanos; avaliar a efetividade de diferentes meios de conservação em manter a viabilidade desses fibroblastos; e verificar o efeito de diferentes temperaturas sobre a efetividade dos meios estudados. Uma vez estabelecida a linhagem de fibroblastos, a viabilidade celular foi avaliada pelo método colorimétrico MTT, após a conservação a 37°C por 3, 6, 24, 48 e 72h em diferentes meios: Meio Essencial Mínimo (MEM- controle-positivo), solução salina balanceada de Hank (HBSS) estéril, HBSS não estéril, leite desnatado, Save-A-Tooth® e água (controle-negativo). Para verificar o efeito da temperatura, o experimento foi repetido utilizando-se os mesmos meios e períodos, porém cultivando-se as células em temperatura ambiente (20°C). A viabilidade celular também foi avaliada pelo método de exclusão do Azul de Tripano. As células foram coradas após 6, 24, 48 e 72h de contato com MEM, HBSS estéril, HBSS não estéril, leite desnatado e Save-A-Tooth® a 20°C. Todos os experimentos foram realizados em triplicata. Calculadas as médias dos valores de absorbância (MTT) e do percentual de viabilidade celular (Azul de Tripano), a comparação dos resultados foi realizada pelo teste de Kruskal-Wallis. Posteriormente, foi aplicado o teste de comparações múltiplas de Scheffé para localizar as diferenças significativas entre as médias de absorbância e o percentual de células viáveis nos diferentes meios e períodos, num nível de significância de 5%. O teste de Mann-Whitney foi utilizado para comparar os resultados obtidos com o ensaio MTT à temperatura ambiente e a 37°C. Os resultados do MTT realizado à temperatura ambiente demonstraram que o controle-positivo (MEM-37) foi o melhor meio de conservação, seguido pelo leite e depois pela HBSS não estéril e estéril. Após 72h, o desempenho do leite e da HBSS estéril e não estéril foi semelhante. No experimento a 37°C, o leite foi o melhor meio de conservação até 24h. Após 48 e 72h, o desempenho do leite diminuiu e o da HBSS aumentou, apresentando resultados similares aos do grupo-controle. Independentemente da temperatura de cultivo, a água foi o pior meio de conservação e o Save-A-Tooth® demonstrou resultados semelhantes aos da água a partir de 24h. Em relação ao efeito da temperatura, no geral o cultivo a 37°C reduziu a viabilidade das células conservadas em água e em Save-A-Tooth®, mas aumentou a das mantidas em leite, HBSS estéril e HBSS não estéril, pelo menos até 24h. Pelo método do corante Azul de Tripano, os melhores meios de conservação foram o leite e a HBSS estéril e não estéril, não havendo diferença estatística entre eles, em qualquer período de tempo. Foi concluído que: a técnica de cultivo celular utilizada permitiu a obtenção de uma linhagem de fibroblastos periodontais; a temperatura interfere na efetividade do meio de conservação; leite desnatado, à temperatura ambiente, pode ser utilizado como meio de conservação até 48h. The aims of this study were to establish a fibroblast lineage from human periodontal ligament cells, to evaluate the effectiveness of different storage media for maintaining the viability of fibroblasts, and to verify the effect of different temperatures on the effectiveness of these media. After the determination of the fibroblasts lineage, the cell viability was evaluated by the MTT colorimetric method, after preservation at 37°C for 3, 6, 24, 48, and 72h in the following media: Minimal Essential Medium (MEM - positive-control), sterile and non-sterile Hank's balanced salt solution (HBSS), non-fat milk, Save-A-Tooth®, and water (negative-control). In order to verify the effect of the temperature, the experiment was repeated using the same storage media and periods, but with cell culturing at room temperature (20°C). The cell viability was also evaluated by Trypan Blue exclusion method. The cells were stained after 6, 24, 48, and 72h of contact with MEM, sterile and non-sterile HBSS, non-fat milk, and Save-A-Tooth® at 20°C. All experiments were performed in triplicate. After calculating the mean absorbance values (MTT) and the mean percent cell viability (Trypan Blue), the results were compared using the Kruskal-Wallis test. Scheffé's multiple comparisons test was used to determine the differences between absorbance means and the percent of viable cells in the different media and periods (p = 0.05). Mann-Whitney's test was used to compare the results obtained from MTT at room temperature and 37o C. MTT results at room temperature revealed that the positive-control (MEM-37) was the best storage medium, followed by milk, non-sterile HBSS, and sterile HBSS. After 72h, the performance of milk, sterile and HBSS non-sterile was similar. Milk was the best storage medium at 37o C for up to 24h. After 48 and 72h, milk performed poorer and HBSS performed better, exhibiting similar results to the positive-control. Regardless of the culture temperature, water was the poorer preservation medium, while Save-A-Tooth® showed similar results to the water after 24h. The culture at 37o C reduced the viability of cells preserved in water or Save-A-Tooth®, but increased the viability of cells maintained in milk, sterile and non-sterile HBSS, for up to 24h. The Trypan Blue staining method showed that the best storage media were milk, sterile and non-sterile HBSS, without statistical difference between them. Based on these results, it was concluded that the cell culture used allowed to obtain a periodontal fibroblasts lineage; the temperature interferes in the storage medium effect; non-fat milk at room temperature can be used for preservation for up to 48h.