Oxigênio molecular singlete [O2(1Δg)], uma espécie excitada, desempenha um papel importante em sistemas químicos e biológicos. É um poderoso eletrófilo, que reage com moléculas ricas em elétrons através de cicloadições [2+2], [4+2] e reações tipo ene. Ácidos graxos poliinsaturados, proteínas e DNA são alvos vulneráveis para o ataque de O2(1Δg). Os endoperóxidos de derivados de naftaleno são muito úteis e versáteis como fontes limpas de O2(1Δg), uma vez que são quase quimicamente inertes. Por outro lado, o desenvolvimento de novas fontes de O2(1Δg) ainda é uma tarefa desafiadora. Os derivados de naftaleno são capazes de armazenar O2(1Δg) por reação de cicloadiação [4+2] e liberá-lo em temperaturas amenas, o que os torna muito adequados para uso em estudos biológicos. A síntese destes compostos está baseada em modificações nos substituintes ligados nas posições 1 e 4 da estrutura do naftaleno. Na primeira parte deste trabalho, a síntese de três endoperóxidos derivados do naftaleno solúveis em água foi realizada. DHPNO2 e NDPO2 foram preparados de acordo com métodos similares descritos na literatura. A síntese de um novo endoperóxido dicatiônico derivado do naftaleno (NBTEO2) foi desenvolvida, contendo dois grupos de cloreto de amônio quaternário nas posições 1,4 do anel aromático. O intermediário chave na síntese dos três endoperóxidos é o BBMN, o qual foi preparado a partir da bromação radicalar do 1,4-dimetilnaftaleno. Nossos resultados têm indicado que este composto dicatiônico pode ser uma fonte química de O2(1Δg) em potencial, e pode ser explorado em estudos com mitocôndrias, onde o papel biológico de O2(1Δg) é investigado. A segunda parte deste trabalho foi dedicada a investigar a geração de O2(1Δg) através das reações entre hidroperóxidos de lipídeos (ácido oleico, linoleico e colesterol), hidroperóxidos orgânicos (cumeno e t-butila), bem como peróxido de hidrogênio com NO2+, utilizando o composto NO2BF4. Evidências da geração de O2(1Δg) foram obtidas através de medidas de emissão de luz na região do infravermelho próximo, no comprimento de onda de 1270 nm. Além disso, a prova inequívoca da presença de O2(1Δg) foi demonstrada através da caracterização espectral direta da emissão de luz no infravermelho próximo. O uso de azida de sódio como captador físico de O2(1Δg), juntamente com as medidas da quimiluminescência, contribuíram para identificar a geração desta espécie na reação entre hidroperóxidos de lipídeos e NO2BF4. Embora seja uma abordagem química, nossos resultados adicionaram informações importantes sobre a peroxidação lipídica, principalmente quando espécies reativas de nitrogênio estão envolvidas. O O2(1Δg) poderia ser gerado como um subproduto da peroxidação lipídica em condições onde espécies reativas de nitrogênio interagem com hidroperóxidos lipídicos. Isto pode contribuir para um melhor entendimento deste evento complexo com implicações fisiológicas ou fisiopatológicas. / Singlet molecular oxygen [O2(1Δg)], an excited species, plays an important role in chemical and biological systems. It is a powerfull electrophile, reacting with electron rich molecules through [2+2] cycloadditions, [4+2] cycloadditions and ene reactions. Polyunsaturated fatty acids, proteins and DNA are vulnerable targets for O2(1Δg) reaction. Naphthalene derivatives endoperoxides are very useful and versatile as a clean source of O2(1Δg), once they are almost chemically inert. On the other hand, developing new sources of O2(1Δg) are still a challenging task. Naphthalene derivatives are able to trap O2(1Δg) by [4+2] cycloaddition and release it in mild temperatures, which make them very suitable for biological studies. The synthesis of these compounds is based on modifications in substituents bonded in 1,4 positions of nafhthalene backbone. In the first part of present work, the synthesis of three water soluble naphthalene derivatives endoperoxides was performed. DHPNO2, NDPO2 were prepared according to similar methods described in the literature. A new di-cationic naphthalene derivative endoperoxide (NBTEO2) synthesis was developed, containing two quaternary ammonium chloride groups in 1,4-positions of aromatic ring. The key intermediate: for the synthesis of the three endoperoxides is the compound BBMN, which was prepared from radicalar bromination of 1,4-dimethylnaphthalene. Our results have indicated that this di-cationic compound can be a potential chemical source of O2(1Δg) and may be explored in mitochondrial studies where O2(1Δg) biological role is investigated. The second part of this work is dedicated to the investigation of generation of O2(1Δg) through reaction of lipid hydroperoxides (oleic acid, linoleic acids and cholesterol), organic hydroperoxides (cumene and t-butyl), as well as hydrogen peroxide with NO2+, using the compound NO2BF4. Evidences of generation of O2(1Δg) were obtained recording the monomol light emission measurement in near infrared region at wavelength of 1270 nm. Moreover, the proof of the presence of O2(1Δg) was unequivocally demonstrated by the direct spectral characterization of near-infrared light emission. The use of sodium azide as a physical quencher of O2(1Δg), associated to chemiluminescence measurements, contributed to identify the generation of this species in the reaction of lipid hydroperoxides and NO2BF4. Although, it is a chemical approach, our results add important information about lipid peroxidation, mainly when reactive species of nitrogen are involved. O2(1Δg) might be generate as a byproduct of lipid peroxidation, in conditions where reactive nitrogen species interact with lipid hydroperoxides. This might contribute to a better understand of this complex event and physiological or physiopathological implications

O objetivo neste trabalho foi avaliar o efeito da adição de óleo de canola (OC) ou linhaça (OL) na dieta de ovelhas em lactação sobre o consumo, produção e composição química do leite e desempenho reprodutivo com sincronização do estro. No experimento I, 33 ovelhas da raça Santa Inês receberam os óleos que foram adicionados a uma ração base contendo 50% de volumoso (feno de Cynodon dactylon). As dietas experimentais foram: Controle sem adição de óleo; Canola adição de 3% de OC (%MS) e Linhaça - adição de 3% de OL (%MS). Uma vez por semana, as ovelhas foram ordenhadas mecanicamente, num intervalo de 3h e o leite da segunda ordenha foi amostrado para determinação da composição química e do perfil de ácidos graxos (AG). A colheita de sangue para determinação sérica de AG não esterificados (AGNE) foi realizada a cada duas semanas. A produção e composição química do leite não diferiu entre as dietas, porém o consumo de matéria seca (CMS) e nutrientes diminuiu nos animais alimentados com as dietas com óleos e a concentração de AGNE no sangue aumentou. O fornecimento de óleos diminuiu a concentração de AG de cadeia curta e aumentou os de cadeia média e longa, AG insaturados totais, mono e poliinsaturados, a quantidade de ácido linoleico conjugado (CLA) total e AG da família n-3 na gordura do leite. A dieta controle apresentou os maiores valores de AG saturados, indice de aterogenicidade e atividade da enzima 9-dessaturase. A adição de 3% de óleo rico em oleico ou linolênico não afetou a produção de leite e o desempenho das crias. No experimento II, 222 ovelhas foram distribuídas, de acordo com o peso e a condição corporal, em 3 grupos. Os óleos utilizados foram os mesmos do Experimento I, entretanto a dieta basal continha 40% de bagaço de cana-de-açúcar como fonte de volumoso. As dietas experimentais foram fornecidas 45 dias antes da sincronização do estro cujo protocolo consistiu na inserção vaginal de dispositivo com progesterona (D0) por 5 dias, aplicação i.m. de eCG (1,5 mL), prostaglandina (2,0 mL) e colocação dos carneiros no 5o dia. No D0 foram coletados dados de peso corporal das fêmeas. O horário da retirada (D5) foi anotado e a observação de estro teve duração de 72h imediatamente após a retirada do dispositivo vaginal. O repasse iniciou-se no D16 e teve duração de 13 dias. Não houve influência das dietas sobre o peso corporal e no número de crias por fêmea. As taxas de apresentação de estro, de prenhez durante a observação de estro e durante o repasse não sofreram influência das dietas, assim como o tempo (h) para a apresentação de estro. A taxa de prenhez total foi superior nos animais que receberam a dieta controle e inferior naqueles que receberam OL. A suplementação com fontes de óleo rico em ácido oleico ou linolênico não melhorou os índices reprodutivos de ovelhas da raça Santa Inês. / The objective in this study was to evaluate the effect of the addition of canola oil (CO) or linseed oil (LO) on milk production and composition and reproductive performance of Santa Inês ewes. In the experiment I, 33 Santa Inês ewes were fed diets containing 50% of roughage (Cynodon dactylon hay). Experimental diets included a control (no oil) and two remaining diets with the addition of 3% of CO or LO (dry matter basis). Ewes were mechanically milked once a week and milk production, in a 3 hours interval, was recorded and sampled for composition and fatty acid (FA) profile determination. The addition of oils decreased DM intake and incresead serum non-esterified FA concentration. Lamb performance, milk yield and chemical composition were not altered by the diets. Feeding oils decreased short and medium chain FA, saturated FA (SFA), 9-dessaturase enzyme activity and atherogenicity index; and increased C18:0, C18:1 n-9, C18:2 cis-9, trans-11 C18:2 (CLA), C18:1 trans-11, C18:3 n-3, long chain, mono and polyunsaturated FA (PUFA) in milk fat. In addition, both oils improved FA profile of milk fat, and LO increased the concentration of healthier FA (trans-11 C18:1, cis-9 trans-11 CLA, total CLA and n-3 FA). In the experiment II, 222 Santa Inês ewes were assigned, according to body weight (BW) and body condition score, to one of three experimental diets to determine the effects of fat sources on pregnancy and estrus index, BW, time to estrus and number of lambs per ewe. Ewes were fed diets containing 40% of sugarcane bagasse as the roughage source and the experimental diets included a control (no oil) and two remaining diets with the addition of 3% of CO or LO (dry matter basis). All ewes were fed the experimental diets 45d before the estrus synchronization. The synchronization protocol consisted on vaginal insertion of a progesterone (P4) device for 5d (D0), rams introduction, i.m. injection of eCG (1.5 mL) and PGF2 (2.0 mL) on the 5th day (D5). At D0 the ewes BW was obtained. The time of P4 device withdrawal (D5) was recorded and estrus observation lasted 72 hours. The 2nd service began at D16 and lasted 13 days. The BW and number of lambs per ewe were not affected by diets. The rates of onset of estrus, pregnancy at 1st and 2nd services and time for the onset of estrus were not affected by diets. The total pregnancy rate was higher in animals from the control diet compared to those fed LO. Supplementation of oil rich in oleic acid or linolenic acid did not improve reproductive rates of Santa Inês ewes.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:40:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 652887 bytes, checksum: ad4dee06ecf4d63d24b45ff4edea5ab4 (MD5) Previous issue date: 2013-03-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This work aimed to evaluated the biochemical and physiological changes resulting from priming of cabbage seeds with different vigor levels, obtained after to exposure of seeds to different times of accelerated aging. The seeds were subjected to priming in a polyethylene glicol aerated solution (PEG) 6000 in concentration of 284 g L-1, corresponding to the osmotic potential of -1.0 MPa, for six days. After priming the seeds were dried until reaching the initial water content. The control consisted of unprimed seeds. The seeds of each treatment were tested for germination, first count germination, seedling emergence, controlled deterioration test, speed germination index, germination rate index in substrate, germination speed, radicle length and total dry matter. Besides, were performed the germination curves for each level of force. Also were performed, analysis for lipid, carbohydrate, protein and starch content. The experimental design was completely randomized with four replications in a 4x2 factorial (aged seeds for 24, 33 and 42 hours and not aged seeds) with and without priming. The data were submeted to Analysis of variance and differences between means were performed using Tukey and F tests, respectively, both at p <0.05. Were observed beneficial priming effects effectively minimizing the damage caused by artificial againg longer on seeds (33 and 48 hours). Superior results were found in tests of vigor, seedling dry weight and reserve compounds when compared to the control unconditioned. In seeds with lower physiological unprimed the imbibition time for root protrusion was greater. Lower times of germination were recorded for seeds primed, which showed higher protein content and lower content of total soluble and reducing sugars, high germination percentage and vigor when compared to unpriming seeds. Therefore, it can be concluded that priming may be an alternative to improve the physiological quality of less vigorous seeds subjected to stress from high temperature and humidity. / O objetivo foi avaliar as alterações bioquímicas e fisiológicas decorrentes do osmocondicionamento de sementes de repolho com diferentes níveis de vigor, obtidos após exposição a diferentes tempos de envelhecimento acelerado. As sementes foram submetidas ao condicionamento osmótico em solução aerada de polietileno glicol (PEG) 6000 na concentração de 284 g L-1, correspondendo ao potencial osmótico de -1,0 MPa, por seis dias. Após o condicionamento, as sementes foram secas até o atingirem o teor de água inicial. A testemunha consistiu de sementes não condicionadas. As sementes de cada tratamento foram submetidas aos testes de germinação, primeira contagem de germinação, emergência das plântulas, teste de deterioração controlada, índice de velocidade de germinação, índice de velocidade de emergência em substrato, velocidade de germinação, comprimento da radícula e matéria seca total. Além disso, foram realizadas as curvas de germinação para cada nível de vigor. Também foram realizados análises de teor de lipídeos, carboidratos, proteínas e amido. O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado, com quatro repetições em esquema fatorial 4x2, (sementes envelhecidas durante 24, 33 e 42 horas e não envelhecidas) sem e com condicionamento osmótico. A análise de variância e a comparação de médias foram realizadas através do teste F e Tukey, respectivamente, ao nível de p>0,05. Foram observados os efeitos benéficos do osmocondicionamento minimizando eficientemente os danos causados pelo maior tempo de envelhecimento artificial das sementes (33 e 48 horas). Resultados superiores foram encontrados nos testes de vigor, massa seca de plântulas e compostos de reserva quando comparados às testemunhas não condicionadas. Em sementes com menor potencial fisiológico não osmocondicionadas o tempo de embebição para a protrusão da raiz foi maior. Menores tempos de germinação foram registrados para as sementes osmocondicionadas, as quais apresentaram maiores conteúdos de proteínas e menor teor de açúcares solúveis totais e redutores, maiores porcentagens de germinação e maior vigor, quando comparadas com sementes sem osmocondicionamento. Portanto pode-se concluir que o osmocondicionamento pode ser uma alternativa para melhorar a qualidade fisiológica das sementes de menor vigor submetidas a estresse por alta temperatura e umidade.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA14MA138.pdf: 701716 bytes, checksum: ae5be4aae0f8d732a1c72c1f572ee5fa (MD5) Previous issue date: 2014-07-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Feeding trans-10, cis-12 conjugated linoleic acid (CLA) to lactating ewes reduces milk fat by down-regulating gene expression of enzymes involved in lipid synthesis in mammary gland. An example is acetyl-CoA carboxylase alpha (ACC&#945;), a key enzyme in the de novo fatty acid synthesis pathway. ACC&#945; is encoded by mRNAs transcribed from three promoters, PI, PII and PIII, characterized as tissue-specific in the ovine genome. This study evaluated the effects of a rumen-unprotected trans-10, cis-12 CLA supplement fed to crossbred Lacaune/Texel lactating ewes, on gene expression of different mRNA transcripts of ACC&#945;. Twelve ewes arranged in a completely randomized design received for 14 days one of the following treatments, at 15 (early), 70 (mid) and 120 (late) days of lactation: Control (forage + 0.9 kg of concentrate-DM) and CLA [forage + 0.9 kg of concentrate + 28g/d of CLA (29.9% trans-10, cis-12)]. The CLA supplement was orally dosed. Mammary gland and adipose tissue biopsies were taken on day 14. Subsequently RNA was extracted, cDNA synthesized and real time PCR analysis conducted. Data were analyzed by MIXED procedure. Milk fat content was reduced by CLA supplementation in all stages of lactation. Compared to Control, in the mammary gland CLA reduced (P<0.05) transcript from PIII in early and mid lactation, increasing transcript from PI in adipose tissue. In the late lactation there was a higher milk fat depression and transcripts PII-derived were downregulated. Overall, our results suggest that trans-10, cis-12 CLA down-regulates ACC&#945; gene expression by decreasing expression from promoter II and III in mammary tissue and increases ACC&#945; gene expression by increasing expression promoter I in adipose tissue, having influences of stage of lactation on the behavior of mRNA isoforms of ACC&#945; / A Suplementação com ácido linoleico conjugado (CLA trans-10, cis-12) para ovelhas em lactação reduz a gordura do leite regulando a expressão dos genes de enzimas envolvidas na síntese lipídica na glândula mamária. Um exemplo é a acetil-CoA carboxilase alfa (ACC&#945;), uma enzima chave na síntese de novo de ácidos graxos. A ACC&#945; é codificada por mRNAs transcritos a partir dos promotores PI, PII, PIII, caracterizados como tecido-específico no genoma ovino. Este estudo avaliou os efeitos da suplementação com CLA trans-10, cis-12 desprotegido da bio-hidrogenação ruminal para ovelhas em lactação cruzadas Lacaune/Texel, sobre a expressão gênica de diferentes transcritos de mRNA da ACC&#945;. Doze ovelhas arranjadas em um delineamento experimental inteiramente casualizado receberam por 14 dias um dos seguintes tratamentos, durante o início, meio e fim de lactação: Controle (forragem + 1 kg de concentrado) e CLA [forragem + 1kg de concentrado + 30mL/d de CLA (29,9% trans-10, cis-12)]. A suplementação com CLA foi administrada oralmente. Foram feitas biópsias de glândula mamária e tecido adiposo no 14º dia de cada período experimental. O RNA foi extraído, o cDNA sintetizado para posterior análise por PCR real time. Os dados foram analisados pelo procedimento MIXED. Teor de gordura do leite foi reduzido pela suplementação de CLA em todos os períodos de lactação. Comparado ao controle, o CLA reduziu (P<0,05) os transcritos oriundos do PIII na glândula mamária no início e meio da lactação, aumentando transcritos oriundos PI no tecido adiposo. No final da lactação houve uma maior depressão da gordura do leite e transcritos derivados do PII foram reduzidos. Em suma, nossos resultados sugerem que o CLA trans-10, cis-12, regula a expressão gênica da ACC&#945;, diminuindo a expressão a partir do promotor II e III, no tecido mamário e aumentando a expressão gênica ACC&#945; através do PI no tecido adiposo, apresentando influências da fase de lactação sobre o comportamento das isoformas de mRNA da ACC&#945;

A doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA) compreende um espectro de alterações que inclui a esteatose simples e a esteatohepatite não alcoólica e é considerada o componente hepático da Síndrome Metabólica. Estudos já demonstraram que os produtos finais de glicação avançada (AGEs) estimulam a produção de proteínas de matriz extracelular, a geração de espécies reativas de oxigênio e de citocinas pró-inflamatórias por células hepáticas e que poderiam participar da patogênese da DHGNA. Em vista da escassez de informações sobre os efeitos metabólicos dos AGEs no fígado, apesar do seu potencial para causar dano hepático, nós avaliamos os efeitos da administração crônica de albumina modificada por glicação avançada sobre: (1) variáveis associadas com a homeostase glicêmica e a sensibilidade à insulina; (2) a expressão hepática de genes envolvidos na via dos AGEs, no metabolismo da glicose e de lípides, no estresse oxidativo e na inflamação; (3) a ativação de proteínas envolvidas na via de sinalização insulínica; (4) a morfologia e o conteúdo de glicogênio hepático. O estudo foi realizado em ratos Wistar que receberam, por via intraperitoneal, 20 mg/kg/peso corporal de albumina de rato modificada (AlbAGE) ou não (AlbCTRL) por glicação avançada durante 12 semanas. A administração crônica de AlbAGE não alterou as concentrações de alanina aminotransferase (ALT) e aspartato aminotransferase (AST) ou outras variáveis analisadas, mas induziu a resistência insulínica, conforme detectado pelo teste de tolerância à insulina (ITT). Os demais resultados, no entanto, sugerem um aumento da sensibilidade insulínica no território hepático, conforme evidenciado pela ativação da serine/threoninespecific protein kinase (AKT), inativação da glicogênio sintase cinase (GSK3), aumento do conteúdo do glicogênio hepático e a diminuição da expressão dos genes da via da gliconeogênese Pck1 e G6pc. Outros resultados observados foram uma redução no conteúdo de gordura hepatica e na expressão dos genes lipogênicos Acaca e Fasn e dos genes pró-inflamatórios Nfkb1, Tnf e Il6. Os mecanismos que poderiam explicar a melhora concomitante da sensibilidade hepática à insulina e do perfil inflamatório após exposição crônica aos AGEs não estão claros, mas incluem a inativação da GSK3beta, enzima que exerce efeitos metabólicos e anti-inflamatórios. Nossos achados devem estar relacionados com a via de administração intraperitoneal empregada neste estudo, que resulta na absorção direta dos AGEs para a circulação portal, o que, por sua vez, torna o fígado a primeira linha de defesa contra a toxicidade desses compostos. Uma vez no fígado, os AGEs desencadeiam respostas adaptativas para contrabalançar os seus efeitos potencialmente prejudiciais / The Nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) comprises a spectrum of conditions that includes simple steatosis and nonalcoholic steatohepatitis and it is considered the hepatic component of the Metabolic syndrome. Studies have shown that advanced glycation end products (AGEs) stimulate the production of extracellular matrix proteins, the generation of reactive oxygen species and of proinflammatory cytokines by liver cells, and that they could participate in NAFLD pathogenesis. In view of the paucity of information regarding the metabolic effects of AGEs on the liver, despite their potential to cause hepatic injury, we evaluated the effects of chronic administration of albumin modified by advanced glycation in (1) variables associated with glucose homeostasis and insulin sensitivity; (2) hepatic expression of genes involved in AGEs, glucose and fat metabolism, oxidative stress and inflammation; (3) activation status of proteins involved in insulin signaling and; (4) hepatic morphology and glycogen content. The study was performed in Wistar rats receiving, by intraperitoneal route, 20 mg/kg/body weight of rat serum albumin modified (AlbAGE) or not (AlbCTRL) by advanced glycation for 12 weeks. Chronic administration of AlbAGE did not alter alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST) concentrations or other evaluated variables, but induced insulin resistance, as detected by the insulin tolerance test. The remaining results, however, suggested an increase in insulin sensitivity in the hepatic territory, evidenced by activation of serine/threonine-specific protein kinase (AKT), inactivation of glycogen synthase kinase (GSK3), increased hepatic glycogen content, and decreased expression of the gluconeogenesis genes Pck1 and G6pc. Other observed findings were a reduction in hepatic fat content, in the expression of the lipogenic genes Acaca and Fasn and of the proinflammatory genes Nfkb, Tnf, and Il6 genes. Mechanisms that could explain the concomitant improvement in hepatic insulin sensitivity and in the inflammatory profile after chronic exposure to AGEs are not clear, but include inactivation of GSK3beta which exerts metabolic and anti-inflammatory effects. Our findings may be related to the intraperitoneal route of administration employed in this study, which results in direct absorption of AGEs into the portal circulation and, it turn, makes the liver the first-line of defense against the toxicity of these compounds. Once in the liver, AGEs trigger adaptive responses to counterbalance their potentially damaging effects

Evidências apontam para o envolvimento da peroxidação lipídica em diversas patologias. Os hidroperóxidos de lipídios (LOOH) são os produtos primários da peroxidação lipídica e sua decomposição resulta em produtos de maior reatividade e toxicidade, como os radicais peroxila. Esses radicais desempenham papel importante na propagação da peroxidação lipídica e também podem gerar oxigênio molecular singlete (1O2) por meio da combinação de dois radicais peroxila. Neste trabalho investigamos a possibilidade dos LOOH, em particular dos hidroperóxidos de ácido linoléico (LAOOH), de servirem como fonte 1O2 na presença de oxidantes de relevância biológica como metais, peroxinitrito ou ácido hipocloroso. A formação de 1O2 foi claramente demonstrada na reação de LAOOH com esses oxidantes pelas detecções (i) da emissão bimolecular na região espectral do vermelho (&#955;>570 nm), (ii) da emissão monomolecular no infravermelho-próximo (&#955;=1270 nm), (iii) do espectro de emissão no infravermelho, e (iv) da intensificação e supressão da luminescência na presença de D2O e azida, respectivamente. Além disso, os mecanismos de reação foram estudados utilizando LAOOH marcados com oxigênio-18 (LA18O18OH) e captadores químicos específicos para 1O2 aliada à tecnica de detecção por HPLC acoplada à espectrometria de massa. Os resultados mostraram a formação de 1O2 marcado [18(1O2) ] na reação de LA18O18OH com os três oxidantes, revelando que os átomos de oxigênio do 1O2 são derivados do hidroperóxido. Em conjunto, as evidências obtidas levam à conclusão de que os LOOH podem servir como fontes potenciais de 1O2 em sistemas biológicos em situações onde haja a coexistência de LOOH e metais, peroxinitrito ou ácido hipocloroso. / Evidences point to the involvement of lipid peroxidation in several diseases. Lipid hydroperoxides (LOOH) are the primary products of lipid peroxidation and their decomposition generates more reactive and toxic compounds, such as peroxyl radicals. These radicals play an important role in the propagation of lipid peroxidation and may also generate singlet molecular oxygen (1O2) by the combination of two peroxyl radicals. In this study we have investigated the possibility of LOOH, in particular linoleic acid hydroperoxide (LAOOH), to be a source of 1O2 in the presence of biologically relevant oxidants such as, metal ions, peroxynitrite or hypochlorous acid. The formation of 1O2 was clearly demonstrated in the reaction of LAOOH with all the three tested oxidants by detecting: (i) the dimol light emission in the red spectral region (&#955;>570 nm), (ii) the monomol light emission in the near-infrared region (&#955;=1270 nm), (iii) the infrared light emission spectrum, and (iv) the enhancing effect of deuterium oxide and the quenching effect of azide on light emission. Furthermore, the mechanism was studied using LAOOH labeled with 18-oxygen isotope (LA18O18OH) and specific 1O2 chemical traps in combination with HPLC coupled to mass spectrometry detection. The results have showed the formation of 18-oxygen labeled 1O2 [18(1O2) ] in the reaction of LA18O18OH with the three oxidants, indicating that oxygen atoms in 1O2 are derived from the hydroperoxide. Altogether, the obtained evidences lead to the conclusion that LOOH may serve as a potential source of 1O2 in biological systems, in situations where LOOH can interact with metals, peroxynitrite or hypochlorous acid.

Introdução:Uma das causas da doença cardiovascular do diabético é a dislipidemia associada ao diabetes mellitus tipo 2 (DM2), caracterizada basicamente por hipertrigliceridemia e baixa concentração de HDL-colesterol. O bom controle da glicemia geralmente resulta em diminuição dos triglicerídeos plasmáticos, mas há controvérsia na literatura quanto aos níveis de HDL-colesterol e outros parâmetros lipídicos. As transferências lipídicas para a HDL têm importante função na sua formação e remodelamento e no seu papel antiaterogênico do transporte reverso do colesterol. A transferência de lípides entre as lipoproteínas é bidirecional e depende da estrutura e concentração da lipoproteína doadora e receptora, assim como da ação das proteínas de transferências, CETP e PLTP. Objetivo:Investigar as relações dos níveis glicêmicos com as transferências lipídicas para a HDL e com outros parâmetros do metabolismo lipídico em pacientes com DM2. Métodos:143 pacientes com DM2, que não estavam usando drogas hipolipemiantes, foram selecionados e separados em dois grupos: grupo com hemoglobina glicada (HbA1c) <= 6,5% (n=62) e grupo com HbA1c > 6,5% (n=81). O método in vitro de transferência lipídica para a HDL foi realizado através da incubação sob agitação, por 1 hora, de uma nanoemulsão doadora contendo colesterol esterificado e não esterificado, fosfolipídios e triglicerídeos, marcados radioativamente, com o plasma do paciente, seguido de precipitação química e contagem dos lipídios radiomarcados transferidos para HDL. Outras determinações plasmáticas do metabolismo lipídico também foram realizadas. Foi também verificado o percentual de pacientes nos dois grupos com o perfil lipídico dentro das metas estabelecidas pela American Diabetes Association. Pacientes com ou sem uso de insulina e com níveis maiores e menores de ácidos graxos livres (AGL) foram comparados quanto aos parâmetros estudados. Resultados:O grupo HbA1c > 6,5% apresentou maior trigliceridemia (205±115 vs 140±54mg/dl; p < 0,0001) e colesterol não esterificado (36,4±7,6 vs 33,7±5,7mg/dl; p > 0,05), além de apresentar maior concentração de triglicerídeos na partícula de HDL (9,2±2,8 vs 8,1±2,3%; p < 0,05), do que o grupo HbA1c<=6,5%. As concentrações de triglicerídeos, colesterol total e não esterificado e também o colesterol da fração não-HDL correlacionaram-se positivamente com a HbA1c (r=0,25, r=0,19, r=0,18, r=0,17, respectivamente, p < 0,05). A concentração de colesterol esterificado da HDL correlacionou-se negativamente com a HbA1c (r=-0,19, p < 0,05). Os pacientes com HbA1c <= 6,5% atingiram mais a meta trigliceridêmica do que os com HbA1c > 6,5% (66 vs 37%; p < 0,001). Os pacientes com maiores níveis de AGL tiveram maior trigliceridemia (196±105 vs 153±81 mg/dl; p < 0,01) e atividade de LCAT (1,36±0,10 vs 1,29±0,10 470/390nm; p < 0,01), além de uma maior concentração de triglicerídeos na partícula de HDL (9,4±2,9 vs 7,8±2,0%; p < 0,001), em relação aos pacientes com menores níveis de AGL. A transferência dos quatro lipídios da nanoemulsão para a HDL foi igual na comparação de todos os grupos deste estudo. Conclusão:Os resultados deste estudo mostraram pela primeira vez que junto com os triglicerídeos, o colesterol não esterificado é também um marcador de pobre controle glicêmico em pacientes com DM2 / Introduction:One cause of cardiovascular disease (CVD) of patients with type 2 diabetes mellitus (T2DM) is diabetic dyslipidemia, characterized primarily by hypertriglyceridemia and low HDL-cholesterol. Good blood glucose control usually results in decreased plasma triglycerides, but there is controversy in the literature as to the levels of HDL-cholesterol and other lipid parameters. Lipid transfers to HDL play an important role in the formation and remodeling of HDL and on its antiatherogenic role of reverse cholesterol transport. The transfer of lipids between lipoproteins is bidirectional and depends on the structure and concentration of the donor and acceptor lipoprotein as well as the action of the transfers proteins, PLTP and CETP. Objective:Investigate the relationship of blood glucose levels with lipid transfers to HDL and other parameters of lipid metabolism in patients with T2DM. Methods:143 patients with T2DM, who were not using lipid-lowering drugs, were selected and divided into two groups: group with glycated hemoglobin (HbA1c) <= 6.5% (n=62) and group with HbA1c > 6.5% (n=81). In vitro lipid transfers to HDL was performed by 1 hour incubation under stirring of a donor nanoemulsion containing radioactively labeled unesterified and esterified cholesterol, phospholipids and triglycerides with whole patient plasma, followed by chemical precipitation and counting of radiolabeled lipids transferred to HDL. Other determinations of plasma lipid metabolism were also performed. It was also checked the percentage of patients in both groups with lipid profile within the targets set by the American Diabetes Association criteria. Patients with or without insulin use and with higher and lower free fatty acids (FFA) levels were also compared for the studied parameters. Results:HbA1c>6.5% group had higher triglyceridemia (205 ± 115 vs 140 ± 54 mg/dl, p<0.0001) and unesterified cholesterol (36.4 ± 7.6 vs 33.7 ± 5.7 mg/dl, p<0.05) than the HbA1c<=6.5% group. The concentrations of triglycerides, total and unesterified cholesterol and also non-HDL cholesterol was positively correlated with HbA1c (r=0.25, r=0.19, r=0.18, r=0.17, respectively, p<0,05). The concentration of esterified cholesterol from HDL was negatively correlated with HbA1c (r = -0.19, p<0.05). Patients with HbA1c<=6,5% achieved more the triglyceridemic target than the patients with HbA1c>6.5% (66 vs 37%, p<0.001). Patients with higher levels of FFA had higher triglycerides levels (196 ± 105 vs 153 ± 81 mg/dl, P<0.01) and LCAT activity (1.36 ± 0.10 vs 1.29 ± 0.10 470/390nm, p<0.01), in addition to a higher concentration of triglycerides in the HDL particle (9.4 ± 2.9 vs 7.8 ± 2.0%, p <0.001). The transfer of the four lipid of the nanoemulsion to HDL was equal in the comparison of all the studied groups. Conclusion:The results of this study showed for the first time that unesterified cholesterol, along with triglycerides, is also a marker of poor glycemic control in patients with T2DM

Os efluentes com elevadas concentrações de lipídios, apesar de demonstrarem elevado potencial para produção de metano podem causar inibição da atividade do consórcio anaeróbio, impossibilitando a produção de biogás. O presente trabalho teve como objetivo o estudo de um reator anaeróbio compartimentado (ABR) com cinco compartimentos tratando efluente simulado de laticínio. Para tanto, a biomassa, foi adaptada por 51 dias e em seguida submetida a tempos de detenção de hidráulica (TDH) de 72h, 24h e 12h, tendo o monitoramento se estendido por 340 dias. Enquanto operando com TDH de 24, o sistema foi submetido a choques hidráulicos e de carga orgânica através da diminuição do TDH para 12 h. O reator absorveu bem a carga, e em 36 horas recuperou os valores prévios de eficiência. Quando operou permanentemente com 12 horas, todavia, problemas de flotação de biomassa e obstruções foram constantes. As eficiências de remoção de matéria orgânica alcançadas para cada condição aplicada foram de 92 &plusmn; 3,0; 91 &plusmn; 1,8 e 90 &plusmn; 2,4% para os TDH de 72h, 24h e 12h, respectivamente. Esses valores foram estatisticamente semelhantes (Anova e L-Fisher). A percentagem de metano no biogás aumentou com a redução de TDH, tendo sido 41 &plusmn; 23, 53 &plusmn; 27 e 62 &plusmn; 12% quando os TDH foram 72, 24 e 12 horas, respectivamente. A produção média de alcalinidade foi de 320&plusmn;25 mg.CaCO3.L-1, sendo esta observada desde o início da operação. A relação média entre alcalinidade intermediária e parcial foi de 0.1&plusmn;0.06 em amostras coletadas na saída do sistema. Embora apresentando problemas de obstrução com o menor TDH, o ABR foi eficiente, robusto e confiável ao tratar efluente de laticínios, tendo produzido um efluente líquido de alta qualidade e biogás rico em metano. / Effluents with high concentrations of lipids, although demonstrating high potential for methane production represents potential inhibition of the anaerobic consortium activity, depleting the production of biogas. This project was carried out monitoring an anaerobic hybrid baffled reactor with five compartments (ABR) treating simulated dairy wastewater. The biomass, was adapted for 51 days and then subjected to hydraulic retention times (HDT) of 72h, 24h and 12h, resulting in a monitoring period of 340 days. While operating with 24h of HRT, the system was subjected to three organic and hydraulic shock loads, when its HDT was decreased to 12 h. The reactor absorbed the shock within 36 hours, achieving similar efficiencies to the previous condition. Nevertheless, although presenting high organic matter efficiencies, when permanently operating with HDT of 12 h, clogging problems due to biomass flotation were constant. The organic matter removal efficiencies for each operational condition were 92 &plusmn; 3%, 91 &plusmn; 1.8%, 90 &plusmn; 2,4%. Those values were statistically similar. The methane percentage in the biogas increased with the HDT reduction, being 41 &plusmn; 23, 53 &plusmn; 27, and 62 &plusmn; 12% when the HDT were 72, 24 and 12 hours. Alkalinity production was observed since the beginning of operation. The mean relation between intermediate and partial alkalinity was 0.1&plusmn;0.006 in samples collected in the system output. Although presenting clogging problems with the smallest HDT, the ABR was efficient, robust and reliable when treating dairy effluents, producing a high quality liquid effluent and a methane rich biogas.

Os membros da família paraoxonase (PON1, PON2 e PON3) tem sido objeto de grande interesse por prevenir o estresse oxidativo e o processo inflamatório, condições que estão em evidência em pacientes que possuem anemia falciforme. A anemia falciforme é causada por uma mutação pontual no gene ? globina que resulta em uma alteração na estrutura da molécula, gerando a HbS. Sua fisiopatologia envolve múltiplas alterações nos eritrócitos falcêmicos, hemólise, ativação de mediadores inflamatórios, disfunção das células endoteliais, episódios vaso-oclusivos e estresse oxidativo. Deste modo, o objetivo do presente estudo foi avaliar a atividade da enzima PON1, relacionando-as com os polimorfismos PON1 192 e 55, PON2 311 e 148 e PON3 10340, 2115, 45486 e 55146, bem como avaliar marcadores de inflamação e o perfil lipídico em pacientes portadores de anemia falciforme. A casuística foi composta por 43 indivíduos com anemia falciforme e 43 indivíduos saudáveis. O sangue foi coletado, para as determinações bioquímicas e determinação das atividades arilesterase e paraoxonase da PON1. O DNA foi extraído de leucócitos do sangue periférico pelo método de extração salina. A análise dos polimorfismos foi realizada por PCR/RFLP e por PCR em tempo real. A pesquisa de autoanticorpos anti-LDL oxidada foi feira por ELISA. Em relação ao polimorfismo do gene da PON1 192QR foi encontrada uma diferença significativa entre o genótipo 192RR, que apresentou maior frequencia no grupo caso (32,6%) do que no grupo controle (13,9%) (p=0,0064). A atividade arilesterase apresentou valores significativamente menores nos pacientes com anemia falciforme (p<0,001). Houve correlação positiva entre atividade arilesterase e as variáveis apolipoproteína A1(Apo A1) (p=0,0042), colesterol total (CT) (p=0,0066) e lipoproteína de alta densidade (HDL) (p=0,0283) e correlação negativa com leucócitos (p=0,04). Em relação à atividade paraoxonase foi encontrada uma correlação positiva e significativa entre a atividade da enzima e a transferrina (p=0,0094). Os títulos de anticorpos anti-oxLDL diferiram significativamente entre os grupos, grupo caso apresentando valores maiores quando comparados ao grupo controle (p<0,001). O mesmo aconteceu para a dosagem dos níveis séricos de Proteína C Reativa (p<0,001). Concentrações significantemente diminuídas de CT, lipoproteína de baixa densidade (LDL), HDL e Apo A1 e B foram observadas nos pacientes com anemia falciforme em relação ao grupo controle (p< 0,01). Conclusões: Os pacientes falciformes estão apresentaram mais estresse oxidativo que os indivíduos saudáveis, o que poderia influenciar na gravidade da doença / The members of paraoxonase family (PON1, PON2 and PON3) have been the subject of great interest by preventing oxidative stress and inflammation, conditions that are evident in patients who have sickle cell anemia. Sickle cell anemia is caused by a point mutation in the ? globin gene that results in a change in structure of the molecule, generating the HbS. Its pathophysiology involves multiple changes in sickle cell erythrocytes, hemolysis, activation of inflammatory mediators, endothelial cell dysfunction, vaso-occlusive episodes and oxidative stress. Thus, the objective of this study was to evaluate the activity of PON1 enzyme, associating them to the PON1 192 e 55, PON2 311 e 148 e PON3 10340, 2115, 45486 e 55146 polymorphisms, as well as evaluating inflammation markers and lipid profile in patients with sickle cell anemia. The casuistry has consisted of 43 individuals with SCD and 43 healthy. Blood was collected for biochemical studies and determination of arylesterase and paraoxonase activities of PON1. DNA was extracted from peripheral blood leukocytes by extraction saline. The analysis of the polymorphisms was performed by PCR / RFLP and real time PCR. The determination of autoantibodies anti-oxidized LDL was performed by ELISA. Regarding the PON1 192QR gene polymorphism was found a significant difference between genotype 192RR, with the highest frequency in the case group (32.6%) than in the control group (13.9%) (p = 0.0064). The arylesterase activity values were significantly lower in patients with sickle cell anemia (p <0.001). A positive correlation between arylesterase activity and variables apolipoprotein A1 (Apo A1) (p = 0.0042), total cholesterol (TC) (p = 0.0066) and high density lipoprotein (HDL) (p = 0.0283) and negative correlation with leukocytes (p = 0.04). Regarding paraoxonase activity was found a positive and significant correlation between the enzyme activity and transferrin (p = 0.0094). The titers of anti-oxLDL differed significantly between groups, with higher values in the case group compared to the control group (p <0.001). The same happened to the determination of serum C-reactive protein (p <0.001). Significantly decreased concentrations of TC, low density lipoprotein (LDL), HDL and Apo A1 and B were observed in patients with sickle cell disease in the control group (p <0.01). Conclusions: Patients with sickle cell disease presented more oxidative stress than healthy ones, which could influence in the severity of the disease

As nanopartículas são consideradas promissores vetores para a liberação eficaz e segura de ácidos nucléicos para tipos específicos de célula ou tecido, proporcionando uma alternativa aos vetores virais para terapia gênica. No entanto, com a maioria destes sistemas não torna possível a entrega de oligonucleotídeos nas células in vivo de forma especifica. O uso de uma nanoemulsão funcionalmente semelhante à lipoproteina de baixa densidade poderia resolver esse problema, pois esta particula é capaz de direcionar o transporte das moléculas para a internalização celular através de receptores de LDL. Aqui, descreve-se um sistema lipidico semelhante à lipoproteína de baixa densidade, LDE, capaz de direcionar e liberar RNA de interferência (RNAi) para as células tumorais in vitro e in vivo em um modelo celular que expressa resistência a múltiplas drogas (células de sarcoma uterino; MESSA/ Dx5). Estudou-se também as caracteristicas de captação do complexo LDE-RNAi e a regulação especifica do gene mdr-1. Os resultados sugerem que a LDE é estavel e liga-se com alta afinidade aos RNAis permitindo que eles entrem nas células tumorais, com localização citoplasmática. Em conclusão, a LDE, por direcionar o RNAi a receptores de LDL favorece o silenciamento do gene mdr-1 por RNAi nas células MES-SA/Dx5 aumentando sua sensibilidade a quimioterápicos / Nanoparticles are considered promising vectors for efficient and safe delivery of nucleic acids to specific types of cell or tissue, providing an alternative to viral vectors for gene therapy. However, most of these systems cannot target and deliver oligonucleotides to specific cells in vivo. The use of nanoemulsion functionally resemble low density emulsion could solve this problem, once particle is capable of direct the molecules transport to the cell through internalization in LDL receptors. Here, we describe a lipid system similar to low density lipoprotein, LDE, capable of targeting and release small interfering RNA (siRNA) to tumor cells in vitro and in vivo in a cell model that expresses multidrug resistance (sarcoma uterine cell line; MES-SA/Dx5). Were also studied the characteristics of uptake of the complex LDE-siRNA, as well as the downregulation of mdr-1 gene. The results suggest that LDE is stable and bind with high affinity to siRNAs allowing them to enter tumor cells, with cytoplasmic localization enhanced. In conclusion, LDE, binds to siRNA through LDL receptors, and promotes mdr-1 silenciament by RNAi in MES-sa/Dx5 cells, increasing their sensitivity to chemotherapeutics agents