Avaliar a expressão das MMPs 2 e 9 e CD31 por meio de imunoistoquímica em carcinomas espoinocelulares de soalho bucal, e correlacionar os resultados com variáveis demográficas, estadiamento tumoral TNM, parâmetros microscópicos, como invasão perineural, embolização, grau de diferenciação tumoral, e sobrevida. Material e métodos: dados de prontuários de 41 pacientes foram coletados e o diagnóstico histopatológico foi revisado com lâminas recém preparadas. Seções de 5 m foram montadas em lâminas silanizadas e submetidas à imunomarcação pelo sistema streptoavidina-biotina utilizando os anticorpos anti MMP2, MMP 9 e CD31 humanos. A presença de imunomarcação das MMPs foi quantificada utilizando um retículo com 100 pontos em 20 campos de cada lâmina obtidos com objetiva de 40x. Os vasos foram identificados pela imunomarcação com anti-CD31 contando-se aqueles que apresentavam lumem e e tamanho menor do que 50m em cinco campos (objetiva de 20x) na área de maior vascularização das lesões. Para verificar a associação entre as variáveis numéricas e os marcadores, o teste não paramétrico U de Mann-Whitney foi utilizado e, em tabelas de contingência, o teste de freqüências do qui-quadrado foi aplicado. O teste exato de Fisher foi adotado quando pelo menos uma freqüência esperada foi menor do que 5 em tabelas 2X2. O Método de Kaplan-Meier foi utilizado para estimar as probabilidades de sobrevida global e o teste de logrank para comparar as curvas de sobrevida. O nível de significância de 5% foi adotado para todos os testes estatísticos. Resultados: houve correlação estatisticamente significante entre marcação para MMP 2 e metástase em linfonodo. Os fatores relacionados negativamente com a sobrevida foram estadiamento N, tipo histológico, invasão neural e marcação de MMP 9. Conclusão: a intensidade de imunomarcação de MMP 2 e MMP9 pode ser indicativa de metástase em linfonodo e menor probabilidade de sobrevida, respectivamente. / Compare the expression of MMPs 2 and 9 and CD31 by the use of immune histochemistry, in squamous cell carcinomas of the floor of the mouth, and obtain the relationship between those markers and demographic aspects, TNM stage, nerve invasion, blood vessel intravasation, degree of tumor differentiation and survival rates. Material and methods: data from 41 patients were reviewed. Tissue sections with 5 m were mounted in silanized glasses, and submmited to immune staining by the streptoavidin-biotin method, using the anti MMP2, MMP 9 and CD31 human antibodies. The presence of staining was quantified in a 100 points grade in 20 fields of each lesion, with a 40X magnification. Blood vessels smaller than 50m that were identified with the CD31 were counted in 5 fields of the hot spot area of the tumor. To verify the association between immune staining and numerical variables, the non parametric Mann-Whitney U test was used, and the chi-square test was verified. The exact Fisher test was adopted when at least one of the expected frequencies in 2X2 tables was less than 5. The Kaplan-Meier method was used to estimate the probabilities of global survival, and the log-rank test was used to compare the survival curves. Results: there was statistically significant association between MMP 2 immune staining and regional metastasis. The variables associated with poor survival rates were N stage, histological grade, nerve invasion and immune staining for MMP 9. Conclusion: the grade of immune staining can be an indicative of node metastasis and poor survival rate, respectively.

Orientador: Kleber Gomes Franchini / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-13T09:40:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Costa_AnaPaulaDalla_M.pdf: 3504258 bytes, checksum: c5455cd7943b5dcb62c07cb63be2f681 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Mudancas dinamicas que ocorrem no intersticio do coracao contribuem diretamente para o remodelamento miocardico decorrente de doencas cardiacas tais como infarto do miocardio, cardiopatia hipertensiva e cardiomiopatias. As metaloproteinases de matriz extracelular (MMPs) sao importantes no remodelamento destas doencas. Estimulos mecanicos e neuro-humoral regulam a expressao e atividade de MMPs atraves de multiplos processos. Em estudos previos verificamos que o silenciamento da FAK no VE de camundongos inibe a fibrose e reduz a atividade de MMP2. Objetivamos avaliar o papel da FAK no controle da ativacao de fibroblastos cardiacos de ratos(FCRNs), induzidos por estiramento mecanico. Os FCRNs foram cultivados em placas Bioflex e submetidos a estiramento ciclico (10%) por ate 8 horas, exceto os controles. A expressao e atividade da FAK foram avaliadas por imunoblottings com anticorpos especificos para FAK ou pFAK Tyr397, respectivamente. A expressao das MMPs 2 e 9 foi avaliada em imunoblottings e a atividade por zimografia ambas no sobrenadante da cultura. O estiramento provocou aumento de 2.4 vezes da quantidade de FAK fosforilada em Tyr397, alem da expressao e a atividade de MMP 2 e 9. Alem disto, modificou os parametros de proliferacao dos FCRNs, mostrando aumento de celulas positivas para Ki67 e BrdU. Do mesmo modo, a diferenciacao em miofibroblastos foi ativada(celulas positivas para a-actina de musculo liso (a-SMA). A inibicao genica da FAK atraves da tecnica de interferencia de RNA (siRNAFAK), nos FCRNs, inibiu a expressao de a-SMA, a atividade e a expressao das MMPs 2 e 9. Alem disso, a deplecao da FAK em FCRNs promoveu a diminuicao da fosforilacao em AKT Ser473, TSC-2 Thr1462, e S6 quinase Thr389 em resposta ao estiramento mecanico. A ativacao dos FCRNs foi impedida pelo pre-tratamento com o inibidor do complexo mTOR, rapamicina. Assim mostramos que a FAK medeia a ativacao de FCRNs invocado pelo estresse mecanico, possivelmente atraves da coordenacao da via de sinalizacao mTOR. Os resultados do presente estudo indicam a ativacao da FAK pode ter um papel critico na proliferacao e diferenciacao, e na ativacao de MMPs em FCRNs quando submetidos a estiramento, e ainda o knockdown da FAK apresenta efeitos contrarios, logo, infere-se o papel da FAK na ativacao de fibroblastos cardiacos. / Abstract: Dynamic changes that occur in the heart interstitium contribute directly to the myocardial remodeling due to heart disease such as myocardial infarction, hypertensive heart disease and cardiomyopathies. The extracellular matrixmetalloproteinases (MMPs) play an important role in remodeling in these diseases. Mechanical and neuro-humoral stimuli regulate the MMPs expression/activity through several processes which include the control of expression, activation by cascades of own MMPs and endogenous inhibitors. In recent studies from our laboratory showed that the FAK silencing in the left ventricle of mice inhibits the fibrosis development, and in parallel reduced the MMP2.activity and expression. The purpose of this study was to evaluate the role of FAK in controlling the MMP 2 and 9 expression and activity in rat cardiac fibroblasts. Cardiac fibroblasts from neonatal rat (FCRNs) were grown on silicon plates and then subjected to cyclic stretch (10%) for up to 8 hours, except the controls. The FAK expression and activity were assessed for imunoblottings through with specific antibodies to FAK or phospho -FAK Tyr397, respectively. The expression of MMP 2 and 9 was evaluated with specific antibodies in imunoblottings and activity through zimography both in the supernatant culture. Furthermore, FCRNs depleted of FAK was defective in AKT Ser473, TSC-2 Thr1462, and S6 kinase Thr389 phosphorylation in response to cyclic stretch. The activation of CF-P3/80 invoked by cyclic stretch was prevented by pre-treatment with the mTOR complex inhibitor rapamycin. These findings demonstrate that FAK signaling plays a critical role in mediating the activation of cardiac fibroblasts invoked by mechanical stress possibly by coordinating the downstream mTOR signaling pathway. The results of this study indicate that the activation of FAK can have a critical role to MMPs activation in cardiac fibroblasts, as well as, the proliferation and differentiation of these cells when subjected to stretching, and the FAK knockdown presents contrary effects, therefore, to corroborate infer the FAK role in differentiation and proliferation cell, and the MMPs balance in cardiac fibroblasts. / Mestrado / Biologia Estrutural, Celular e do Desenvolvimento / Mestre em Fisiopatologia Médica

Orientadores: Ubirajara Ferreira, Valeria H. A. Cagnon Quitete / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-13T17:35:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Reis_LeonardoOliveira_M.pdf: 4339458 bytes, checksum: 1e103884dabb1194ecfd6161caeed83d (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A destruição do complexo da distroglicana dependente da metaloproteinase da matriz pode ter papel importante no desenvolvimento e progressão do tumor urotelial. O carcinoma urotelial humano é frequente na bexiga e menos comum no trato urinário superior. Não há um modelo experimental animal bem definido e reprodutível de carcinoma urotelial do trato superior. Objetivos: Propor um novo modelo experimental de carcinoma urotelial que resulta de refluxo vesicoureteral em animais submetidos a tratamento com associação entre n-metil-n-nitrosourea e citrato de sódio intravesicais. Caracterizar a imunolocalização dos receptores de ?-distroglicana e metaloproteinase 9 na bexiga urinária, ureter e pelve renal deste modelo, assim como descrever aspectos morfológicos, imunohistoquímicos e proliferativos nestes órgãos. Metodologia: Cinqüenta ratas Fisher 344 foram divididas em dois grupos: Controle - recebeu 0,30ml de solução salina 0,9% intravesical; MNU-citrato - recebeu 0,15ml de MNU e 0,15ml de citrato de sódio intravesical, ambos em semanas alternadas, nas semanas 0, 2, 4 e 6, totalizando quatro doses. Após 15 semanas de tratamento, a bexiga, os ureteres, e as pelves renais foram coletados para análises morfológicas e imunohistoquímicas. Resultados: O grupo MNU-Citrato apresentou imunoreatividade reduzida de ?-DG e aumentada de MMP-9 e Ki-67. O tratamento associado de MNU e citrato de sódio levou ao desenvolvimento de carcinoma urotelial na bexiga e no trato urinário superior de todos os animais. Conclusões: O modelo proposto induziu lesão maligna de diversos graus em 100 % dos animais, sem comprometimento muscular. A imunolocalização da ?-DG foi muito diminuída em contraposição ao aumento da imunolocalização da MMP-9 nos diferentes órgãos estudados neste modelo e os aspectos morfológicos, imunohistoquímicos e proliferativos ao longo do urotélio (bexiga urinária, ureter e pelve renal) foram muito semelhantes, sendo que ocorreu aumento de apoptose e proliferação celular com expressivo predomínio deste último. Palavras chave: Distroglicana; Metaloproteinase de matriz; Carcinoma urotelial; Modelo animal experimental; Trato urinário superior / Abstract: The dystroglican complex destruction is done by matrix metalloproteinase and plays a critical role in the urothelial carcinoma development and progression. The human urothelial carcinoma is frequent on the bladder and less common on the upper urinary tract. There is no reproducible and well described experimental upper urothelial carcinoma model on this issue. Purposes: Describe a novel experimental upper urothelial carcinoma animal model which results in vesicoureteral reflux in animals submitted to associate treatment with the carcinogen n-methyl-n-nitrosourea and sodium citrate intravesically. Characterize the ?-DG and the MMP-9 immunolocalization in the bladder as well as in the upper urinary tract, and describe morphological, immunohistochemistry and proliferative aspects utilizing a novel experimental model. Materials and Methods: Fifty female Fischer 344 rats were divided into two groups: the control group received a 0.30ml dose of 0.9% physiological saline intravesically every other week for a total of 4 doses; the MNU-citrate group received 0.15 ml of MNU and 0.15ml of sodium citrate intravesically every other week for a total of 4 doses. After 15 weeks of treatment, bladder, ureters and renal pelvis were collected for morphological and immunohistochemistry analyses. Results: The MNU-Citrate group showed reduced ?-DG and increased MMP-9 and Ki-67 immunoreactivities. Associated treatment with MNU and sodium citrate was able to lead to both urinary bladder and upper urinary tract tumors in all animals. Conclusions: The proposed model showed cancer in several grades in 100 % of animals, with no muscular invasion. The immunolocalization was decreased for ?-DG and increased for MMP-9 in the analyzed tissues and the morphological, immunohistochemical and proliferative aspects of the urothelium (bladder, ureter e renal pelvis) were similar. Apoptosis and proliferation were increased, being the last one more intense / Mestrado / Cirurgia / Mestre em Cirurgia

Introdução: O Carcinoma Urotelial de Bexiga (CUB) é o segundo tumor urológico mais prevalente no Brasil. Devido ao elevado custo médico no processo que envolve seu diagnóstico, tratamento e seguimento, o CUB é um dos tipos de tumores mais caros para os sistemas de saúde. Embora existam fatores prognósticos definidos, como o estadiamento patológico, a diferenciação histológica e a presença de invasão angiolinfática (IAL), os mesmos demonstram-se insuficientes para uma acurada definição de comportamento da doença. Com a evolução da pesquisa molecular um grande número de potenciais novos marcadores de agressividade tem surgido. As Metaloproteinases da matriz (MMP) sao proteínas teciduais, pertencentes à família das endoproteinases, que degradam vários componentes da matriz extracelular. A expressão de diversas MMPs, especialmente MMP-2 e MMP-9 (gelatinases), bem como seus ativadores e inibidores, tem sido estudada como potencial marcador de comportamento tumoral em várias neoplasias. Objetivos: Avaliarmos os níveis de expressão dos genes das gelatinases MMP-2 e MMP-9 no CUB, assim como proteínas envolvidas em suas vias de ativação e inibição (MMP-14, IL-8, TIMP-1, TIMP-2, RECK e TGF-! ). Material e Método: Estudamos pela técnica de qRT-PCR a expressão dos 8 genes em amostras de CUB de 40 pacientes submetidos a RTUb, tendo como grupo controle amostras de urotélio sem câncer de 6 pacientes submetidos a prostatectomia aberta por HPB, bem como sua relação com marcadores prognósticos clássicos (estádio, grau e IAL). Resultados: Houve uma superexpressão de MMP-9 na maioria das amostras de CUB, bem como subexpressão de MMP-2, TIMP-1, TIMP-2, MMP-14, IL-8, TGF-! e RECK. Comparando os níveis de expressão dos genes com o estádio patológico, houve uma superexpressão de MMP-9 nos tumores pT1-2, quando comparados com pTa (p=0,026), bem como maior expressão de IL-8 nos tumores pT1 e pT2 (p=0,015 e p=0,048, respectivamente). Embora estatisticamente nao significativa, houve uma superexpressão de MMP-14 nos tumores pT2, quando comparados aos demais (p=0,087). Com relação ao grau histológico, também identificamos superexpressão de MMP-9 nos tumores de alto grau, quando comparados aos de baixo grau (p=0,012), assim como maior expressão de IL-8 nos tumores de alto grau (p=0,003). Conclusão: Houve uma superexpressão de MMP-9 e uma subexpressão de MMP-2, TIMP-1, TIMP-2, MMP-14, RECK, IL-8 e TGF-! no CUB, quando comparado com o grupo controle. Também identificamos uma superexpressão de MMP-9 e IL-8 em tumores pT1-2 quando comparados com pTa e de alto grau quando comparados com baixo grau. A subexpressão dos principais inibidores da MMP-9 (TIMP-1 e RECK) pode explicar sua superexpressão no CUB, assim como a superexpressão de IL-8 nos tumores invasivos e de alto grau pode agir como fator ativador da MMP-9 nestes mesmos tumores / Introduction: Bladder cancer (BC) is the second most common urological tumor in Brazil. Because its high cost on diagnosis, treatment and follow-up, BC is one of the most expensive malignancies for health care providers. Although we have well-known prognostic factors, like pathological stage, histologic grade and lymphovascular invasion, they are insufficient to figure more accurate tumor aggressiveness. Recent molecular biology helped us to discover a huge amount of potential markers. Matrix metalloproteinases (MMP) are tissue endopeptidases that degrade components of extracellular matrix. Expression of several MMP, specially MMP-2 and MMP-9 (gelatinases), and their activators and inhibitors, are investigated as potential behavior markers in many neoplasms. Objectives: The aim of this study was to evaluate expression levels of gelatinases MMP-2 and MMP-9 genes by quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) in BC, as well as other proteins evolved in the activation and inhibition pathways (MMP-14, IL-8, TIMP-1, TIMP-2, RECK e TGF-b). Material and Method: Present study analyzed tissue expression of 8 genes in BC samples of transutethral resection of 40 patients by qRT-PCR, as well as their relation with current prognostic factors (stage, grade and LVI). The control group was composed of utothelial tissue from 6 patients with benign prostatic hyperplasia (BPH) treated surgically with retropubic prostatectomy. Results: In the tumor samples, MMP-9 presented an overexpression and MMP-2, TIMP-1, TIMP-2, MMP-14, RECK, IL-8, and TGF-b were underexpressed in BC tissue compared to control. Comparing gene level expression to pathologic stage, there was MMP-9 overexpression in pT1-2 tumors compared to pTa (p=0.026), as wall as IL-8 overexpression in pT1 and pT2 tumors (p=0.015 e p=0.048, respectively). Although not statiscally significant, there was MMP-14 overexpression in pT2 tumors in comparison to pTa-1 (p=0.087). About grade, there was MMP-9 overexpression in high-grade tumors compared to low-grade (p=0.012), as well as IL-8 overexpression in high-grade tumors (p=0.003). There was not relation of any gene expression to LVI. Conclusions: We found overexpression of MMP-9 and underexpression of MMP-2, TIMP-1, TIMP-2, MMP-14, RECK, TGF-b and IL-8 in BC compared with the control group. According to the prognostic factors we found increased levels of MMP-9 and IL-8 gene expression in pT1-2 compared to pTa tumors and high-grade compared to low-grade tumors. Underexpression of major MMP-9 inhibitors (TIMP-1 and RECK) could explain MMP-9 overexpression in BC, as well as IL-8 overexpression in high-grade and stage tumors could act as activation factor of MMP-9 in these tumors

Orientador: José Eduardo Tanus dos Santos / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-21T14:39:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Goncalves_FlaviaMagazoni_D.pdf: 13094273 bytes, checksum: b37b538d1e8c37ba2a2ec5c8c99a5a30 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: A migrânea é uma cefaleia primária comum e altamente incapacitante que atinge cerca de 10% da população mundial, especialmente as mulheres. Apesar dos esforços, a fisiopatologia da migrânea não está completamente elucidada. No entanto, acredita-se que as metaloproteinases da matriz (MMPs) estejam envolvidas no rompimento da barreira-hematoencefálica durante uma crise de migrânea. O objetivo do presente trabalho é avaliar se polimorfismos funcionais nos genes da MMP-2 (C-1306T e C-735T) e da MMP-9 (C-1562T, -90(CA)n e R(279)Q) e haplótipos estão associados com a migrânea e se eles podem modificar os níveis circulantes de MMPs na migrânea. Para avaliar o efeito de polimorfismos da MMP-9, foram estudadas 102 mulheres sem migrânea (grupo controle) e 187 mulheres com migrânea (141 com migrânea sem aura; MSA e 46 com migrânea com aura; MA). As genotipagens para os polimorfismos C-1562T, -90(CA)n e R(279)Q da MMP-9 foram realizadas por PCR-RFLP, PCR convencional seguida de eletroforese em gel de poliacrilamida e PCR em Tempo Real, utilizando-se o sistema Taqman® para discriminação de alelo, respectivamente. As concentrações plasmáticas de MMP-9 e TIMP-1 foram determinadas por ELISA. Os genótipos para os polimorfismos da MMP-2 foram determinados por PCR em Tempo Real, utilizando-se o sistema Taqman® para discriminação de alelo em 148 mulheres sem migrânea e em 204 mulheres com migrânea (153 MSA e 51 MA). As concentrações plasmáticas da MMP-2 e do TIMP-2 foram avaliadas, respectivamente, por zimografia e por ELISA. Os haplótipos foram inferidos utilizando o programa PHASE. Este estudo é o primeiro a mostrar que polimorfismos funcionais e haplótipos nos genes da MMP-2 e da MMP-9 podem afetar os níveis circulantes das MMPs em pacientes com migrânea. Enquanto o haplótipo H6 (CLQ) da MMP-9 foi associado aos maiores níveis plasmáticos de MMP-9 nas pacientes com migrânea (359,8±69,53ng/ml versus 195,8±9,70ng/ml para o CLR; 201,5±18,67ng/ml para o CHR e 200,2±17,02ng/ml para o CHQ), as maiores concentrações de MMP-2 foram encontradas nas pacientes com migrânea com aura com o genótipo CC para o polimorfismo C-735T (1,29±0,07U.A. versus 0,96±0,06U.A. para os genótipos CT ou TT) e com o haplótipo H1 (CC) (1,24±0,05U.A. versus 0,94±0,05U.A. para o haplótipo CT) no gene da MMP-2. Apesar de não investigarmos os mecanismos moleculares que explicam esses resultados, podemos sugerir que o aumento dos níveis das MMPs associados a genótipos e haplótipos específicos podem predispor essas pacientes a um aumento da permeabilidade vascular da barreira hematoencefálica, promovendo assim o desenvolvimento de um ambiente neuroinflamatório no sistema nervoso central, contribuindo para uma crise de migrânea / Abstract: Migraine is a common primary headache and highly disabling, affecting approximately 10% of the population worldwide, especially women. Despite the efforts, the pathophysiology of migraine is not completely understood. However, it is believed that the matrix metalloproteinases (MMPs) are involved in the disruption of blood-brain barrier (BBB) during migraine attacks. The aim of this study was to evaluate whether functional polymorphisms in MMP-2 (C-1306T and C-735T) and MMP-9 (C-1562T, -90(CA)n and R(279)Q) genes and haplotypes are associated with migraine and whether they modify circulating MMPs levels in migraine. To evaluate the effect of MMP-9 polymorphisms, we studied 102 healthy women (controls) and 187 women with migraine (141 migraine without aura; MWA, and 46 migraine with aura; MA). Genotypes for C-1562T, -90(CA)n e R(279)Q MMP-9 polymorphisms were determined by PCR-RFLP, by conventional PCR followed by electrophoresis in polyacrylamide gels and by real time-PCR using Taqman® allele discrimination assays, respectively. The plasma MMP-9 and TIMP-1 concentrations were measured by ELISA. Genotypes for MMP-2 polymorphisms were determined by real time-PCR using Taqman® allele discrimination assays in 148 healthy women without history of migraine and in 204 women with migraine (153 MWA and 51 MA). The plasma concentrations of MMP-2 and TIMP-2 were evaluated by gelatin zymography and ELISA, respectively. Haplotypes were inferred using the PHASE program. This is the first study to show that functional MMP-2 and MMP-9 polymorphisms and haplotypes can affect the circulating MMPs levels in patients with migraine. While the MMP-9 H6 (CLQ) haplotyple is associated with high MMP-9 concentrations in patients with migraine (359,8±69,53ng/ml versus 195,8±9,70ng/ml for CLR; 201,5±18,67ng/ml for CHR and 200,2±17,02ng/ml for CHQ) , the highest concentrations of MMP-2 were found in patients with migraine with aura carrying the CC genotype for C-735T polymorphism (1,29±0,07A.U. versus 0,96±0,06A.U. for CT or TT genotypes) and the H1 (CC) haplotype (1,24±0,05A.U. versus 0,94±0,05A.U. for CT haplotype) in the MMP-2 gene. Although we have not investigated the molecular mechanisms explaining these results, we can suggest that an increase of the MMPs levels associated with these genotypes and haplotypes may predispose these patients to increased vascular BBB permeability, thus promoting the development of an inflammatory environment in their central nervous systems, which contributes to migraine attacks / Doutorado / Farmacologia / Doutora em Farmacologia

Made available in DSpace on 2014-08-20T14:30:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_luiz_eduardo_rilling_nova_cruz.pdf: 941247 bytes, checksum: b51c3277dc5892c9cf7c0ddc659e85c4 (MD5) Previous issue date: 2010-06-01 / The objective of the present study was the immunohistochemical evaluation of the proportion of mononuclear cells and the expression of MMP-2 and 9 on chronic periodontitis between smokers and non-smokers. From the 127 patients examined 31(16 non-smokers and 15 smokers) fulfill the inclusion criteria were included in the study. These patients underwent surgical procedures and 31 biopsies were collected and divided in two parts, one for histological preparation and the other for zymography. Each sample was histologically processed and exposed to monoclonal antibodies for B cells (anti-CD20), memory T cells (anti-CD45RO) and macrophages or monocytes (anti-CD68) detection. The samples showed a similar pattern, with connective tissue rich in inflammatory cells. The histometric analysis showed that the total amount of mononuclear inflammatory cells labeled did not differ significantly between smokers and non-smokers (p> 0.05). Evaluating each cell type separately, significant differences were not detected between groups (p> 0.05). When stratifying the samples into regions (coronal, middle and apical third) to evaluate the presence of individual cell types in each region significant differences between the groups were not detected (p> 0.05). The zymography of the samples suggested that the expression of MMP-2 and 9 showed no statistically significant differences between the two groups (p> 0.05). Thus, within the limits of this study, we can conclude that sites with chronic periodontitis in smokers and non-smokers did not differ in the amount of mononuclear inflammatory cells and in the expression of MMPs 2 and 9. / O estudo teve como objetivo a avaliação imunoistoquímica da proporção de células mononucleares e da expressão zimográfica da MMP-2 e 9 na periodontite crônica em fumantes e não-fumantes. Foram examinados 127 pacientes dos quais 31 preencheram os critérios de inclusão e foram inseridos no estudo, sendo 16 não-fumantes e 15 fumantes. Estes pacientes foram operados e 31 biópsias foram coletadas de área interproximal de dentes com bolsa periodontal >5mm e divididas longitudinalmente em duas partes, uma para análise histológica e outra para zimografia. As amostras foram processadas histologicamente e expostas aos anticorpos monoclonais para células B (anti-CD20), células T de memória (anti-CD45RO) e monócitos ou macrófagos (anti-CD68). De maneira geral, as amostras apresentaram padrão semelhante, com um tecido conjuntivo subjacente ao epitélio oral rico em células inflamatórias. A análise histométrica demonstrou que a quantidade total de células inflamatórias mononucleares marcadas não diferiu entre fumantes e não-fumantes (p>0,05). Ao avaliar cada tipo celular separadamente, também não foram detectadas diferenças estatisticamente significativas entre os grupos (p>0,05). Ao dividir as amostras em regiões (terço coronal, médio e apical) e avaliar a presença de cada tipo celular em cada uma das regiões também não foram detectadas diferenças estatísticas significantes entre os grupos (p>0,05). A avaliação das zimografias sugere que a expressão de MMP-2 e 9 não apresentaram diferenças estatisticamente significantes entre os dois grupos (p>0,05). Assim, dentro dos limites deste estudo, pode-se concluir que os sítios com periodontite crônica de fumantes e não-fumantes não diferem em relação à quantidade e localização de células inflamatórias mononucleares e na expressão de MMPs 2 e 9.

Introdução: O Carcinoma Urotelial de Bexiga (CUB) é o segundo tumor urológico mais prevalente no Brasil. Devido ao elevado custo médico no processo que envolve seu diagnóstico, tratamento e seguimento, o CUB é um dos tipos de tumores mais caros para os sistemas de saúde. Embora existam fatores prognósticos definidos, como o estadiamento patológico, a diferenciação histológica e a presença de invasão angiolinfática (IAL), os mesmos demonstram-se insuficientes para uma acurada definição de comportamento da doença. Com a evolução da pesquisa molecular um grande número de potenciais novos marcadores de agressividade tem surgido. As Metaloproteinases da matriz (MMP) sao proteínas teciduais, pertencentes à família das endoproteinases, que degradam vários componentes da matriz extracelular. A expressão de diversas MMPs, especialmente MMP-2 e MMP-9 (gelatinases), bem como seus ativadores e inibidores, tem sido estudada como potencial marcador de comportamento tumoral em várias neoplasias. Objetivos: Avaliarmos os níveis de expressão dos genes das gelatinases MMP-2 e MMP-9 no CUB, assim como proteínas envolvidas em suas vias de ativação e inibição (MMP-14, IL-8, TIMP-1, TIMP-2, RECK e TGF-! ). Material e Método: Estudamos pela técnica de qRT-PCR a expressão dos 8 genes em amostras de CUB de 40 pacientes submetidos a RTUb, tendo como grupo controle amostras de urotélio sem câncer de 6 pacientes submetidos a prostatectomia aberta por HPB, bem como sua relação com marcadores prognósticos clássicos (estádio, grau e IAL). Resultados: Houve uma superexpressão de MMP-9 na maioria das amostras de CUB, bem como subexpressão de MMP-2, TIMP-1, TIMP-2, MMP-14, IL-8, TGF-! e RECK. Comparando os níveis de expressão dos genes com o estádio patológico, houve uma superexpressão de MMP-9 nos tumores pT1-2, quando comparados com pTa (p=0,026), bem como maior expressão de IL-8 nos tumores pT1 e pT2 (p=0,015 e p=0,048, respectivamente). Embora estatisticamente nao significativa, houve uma superexpressão de MMP-14 nos tumores pT2, quando comparados aos demais (p=0,087). Com relação ao grau histológico, também identificamos superexpressão de MMP-9 nos tumores de alto grau, quando comparados aos de baixo grau (p=0,012), assim como maior expressão de IL-8 nos tumores de alto grau (p=0,003). Conclusão: Houve uma superexpressão de MMP-9 e uma subexpressão de MMP-2, TIMP-1, TIMP-2, MMP-14, RECK, IL-8 e TGF-! no CUB, quando comparado com o grupo controle. Também identificamos uma superexpressão de MMP-9 e IL-8 em tumores pT1-2 quando comparados com pTa e de alto grau quando comparados com baixo grau. A subexpressão dos principais inibidores da MMP-9 (TIMP-1 e RECK) pode explicar sua superexpressão no CUB, assim como a superexpressão de IL-8 nos tumores invasivos e de alto grau pode agir como fator ativador da MMP-9 nestes mesmos tumores / Introduction: Bladder cancer (BC) is the second most common urological tumor in Brazil. Because its high cost on diagnosis, treatment and follow-up, BC is one of the most expensive malignancies for health care providers. Although we have well-known prognostic factors, like pathological stage, histologic grade and lymphovascular invasion, they are insufficient to figure more accurate tumor aggressiveness. Recent molecular biology helped us to discover a huge amount of potential markers. Matrix metalloproteinases (MMP) are tissue endopeptidases that degrade components of extracellular matrix. Expression of several MMP, specially MMP-2 and MMP-9 (gelatinases), and their activators and inhibitors, are investigated as potential behavior markers in many neoplasms. Objectives: The aim of this study was to evaluate expression levels of gelatinases MMP-2 and MMP-9 genes by quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) in BC, as well as other proteins evolved in the activation and inhibition pathways (MMP-14, IL-8, TIMP-1, TIMP-2, RECK e TGF-b). Material and Method: Present study analyzed tissue expression of 8 genes in BC samples of transutethral resection of 40 patients by qRT-PCR, as well as their relation with current prognostic factors (stage, grade and LVI). The control group was composed of utothelial tissue from 6 patients with benign prostatic hyperplasia (BPH) treated surgically with retropubic prostatectomy. Results: In the tumor samples, MMP-9 presented an overexpression and MMP-2, TIMP-1, TIMP-2, MMP-14, RECK, IL-8, and TGF-b were underexpressed in BC tissue compared to control. Comparing gene level expression to pathologic stage, there was MMP-9 overexpression in pT1-2 tumors compared to pTa (p=0.026), as wall as IL-8 overexpression in pT1 and pT2 tumors (p=0.015 e p=0.048, respectively). Although not statiscally significant, there was MMP-14 overexpression in pT2 tumors in comparison to pTa-1 (p=0.087). About grade, there was MMP-9 overexpression in high-grade tumors compared to low-grade (p=0.012), as well as IL-8 overexpression in high-grade tumors (p=0.003). There was not relation of any gene expression to LVI. Conclusions: We found overexpression of MMP-9 and underexpression of MMP-2, TIMP-1, TIMP-2, MMP-14, RECK, TGF-b and IL-8 in BC compared with the control group. According to the prognostic factors we found increased levels of MMP-9 and IL-8 gene expression in pT1-2 compared to pTa tumors and high-grade compared to low-grade tumors. Underexpression of major MMP-9 inhibitors (TIMP-1 and RECK) could explain MMP-9 overexpression in BC, as well as IL-8 overexpression in high-grade and stage tumors could act as activation factor of MMP-9 in these tumors

INTRODUÇÃO: Recidivas locais e loco-regionais são as principais causas de falha do tratamento em pacientes portadores de carcinomas epidermóides de boca e orofaringe. A cirurgia de resgate é geralmente a melhor opção terapêutica para esses pacientes. Esse estudo tem por objetivo avaliar a importância prognóstica da expressão das proteínas EGFR, MMP-2, MMP-9 e VEGF em pacientes com recidiva local submetidos à cirurgia de resgate. CASUÍSTICA E MÉTODOS: Os prontuários de 111 pacientes portadores de recorrência local de carcinomas epidermóides de boca e orofaringe foram analisados de forma retrospectiva. A localização do tumor primário foi o lábio em 10 casos (9%), a cavidade oral em 68 (61%) e a orofaringe em 33 (30%). O tratamento prévio foi cirurgia em 33 casos (30%), radioterapia associada ou não à quimioterapia baseada em cisplatina em 46 (41%) e cirurgia com radioterapia adjuvante em 32 (29%). A expressão das proteínas EGFR, MMP-2, MMP-9 and VEGF foi avaliada com a técnica do Tissue Microarray. RESULTADOS: O intervalo livre de doença variou de 0,89 a 140,9 meses, com uma mediana de 6,87 meses. As recidivas foram diagnosticadas em intervalo de tempo inferior a 1 ano em 69 pacientes (62,2%) e após 1 ano em 42 (37,8%). Os pacientes com intervalo livre de doença inferior a 1 ano apresentaram pior resultado de sobrevida (p=0,01). O estádio clínico da recidiva (rEC) foi I ou II em 31 casos (27,9%) e III ou IV em 80 (72,1%). Pacientes com doença em estádio clínico mais avançado (rEC III ou IV) apresentaram piores taxas de sobrevida específica por câncer (p=0,04). Hiper-expressão do EGFR foi associada a pior resultado do tratamento. Os casos com EGFR positivo obtiveram sobrevida específica por câncer em 3 anos de 27,2%, enquanto pacientes com EGFR negativo alcançaram 64,3% de sobrevida em 3 anos (p=0,001). A expressão das proteínas MMP-2, MMP-9 e VEGF não se mostrou significativa para o prognóstico (p=0,83, p=0,15 e p=0,86, respectivamente). Na análise multivariada, apenas o intervalo livre de doença e a expressão do EGFR foram associadas à maior risco de morte. CONCLUSÕES: Recidivas locais de carcinomas epidermóides de boca e orofaringe são associadas a mau prognóstico. Intervalo livre de doença superior a 1 ano e ausência de expressão do EGFR foram os principais fatores associados a melhores resultados de sobrevida específica por câncer em pacientes submetidos à cirurgia de resgate. / INTRODUCTION: Local and regional relapses are the main sites of treatment failure in patients with oral and oropharyngeal squamous cell carcinoma. In these instances, salvage surgery is the most widely used treatment approach. The aim of this study is to analyze the prognostic effect of the expression of EGFR, MMP-2, MMP-9 and VEGF in patients with recurrent cancer sumitted to salvage surgery. METHODS: The charts of 111 patients with local recurrence of oral or oropharyngeal squamous cell carcinomas were retrospectively analyzed. The tumor sites were: the lip in 11 cases (9%), the oral cavity in 68 (61%) and the oropharynx in 33 (30%). The previous treatment was: Surgery in 33 patients (30%), radiotherapy with or without cisplatin based chemotherapy in 46 (41%) and surgery with adjuvant radiotherapy in 32 (29%). EGFR, MMP-2, MMP-9 and VEGF expressions were analyzed with tissue microarray immunohistochemical technique. RESULTS: The disease-free interval ranged from 0.89 to 140.9 months with a median of 6.87 months. The patients were categorized into two groups: Those with recurrence in less than 1 year (69 patients - 62.2%) and those with recurrence after 1 year (42 - 37.8%). The group with the shorter disease-free interval presented a worse prognosis (p=0.01). The clinical stage of recurrence (rCS) was I/II in 31 cases (27.9%) and III/IV in 80 cases (72.1%). Patients with more advanced diseases (rCS III/IV) had worse rates of cancer specific survival (CSS) than patients with rCS I/II (p=0.04). An over-expression of EGFR was associated with worse treatment results. Positive EGFR cases had a 3 year CSS of 27.2%, while EGFR negative patients had 64.3% (p=0.001). The MMP-2 and MMP-9 over-expression were also associated with a worse prognosis but without statistical significance (p=0.83 and p=0.15). VEGF expression did not show prognostic significance in this group of patients. In a multivariate analysis only the disease-free interval and over-expression of EGFR were associated with a higher risk of death. CONCLUSION: Local recurrence in oral and oropharyngeal squamous cell carcinomas usually indicates an unfavorable prognosis. A disease-free interval greater than 1 year and a negative EGFR expression are the main prognostic factors which indicate a better cancer specific survival rate in patients submitted to salvage surgery.

INTRODUÇÃO: Recidivas locais e loco-regionais são as principais causas de falha do tratamento em pacientes portadores de carcinomas epidermóides de boca e orofaringe. A cirurgia de resgate é geralmente a melhor opção terapêutica para esses pacientes. Esse estudo tem por objetivo avaliar a importância prognóstica da expressão das proteínas EGFR, MMP-2, MMP-9 e VEGF em pacientes com recidiva local submetidos à cirurgia de resgate. CASUÍSTICA E MÉTODOS: Os prontuários de 111 pacientes portadores de recorrência local de carcinomas epidermóides de boca e orofaringe foram analisados de forma retrospectiva. A localização do tumor primário foi o lábio em 10 casos (9%), a cavidade oral em 68 (61%) e a orofaringe em 33 (30%). O tratamento prévio foi cirurgia em 33 casos (30%), radioterapia associada ou não à quimioterapia baseada em cisplatina em 46 (41%) e cirurgia com radioterapia adjuvante em 32 (29%). A expressão das proteínas EGFR, MMP-2, MMP-9 and VEGF foi avaliada com a técnica do Tissue Microarray. RESULTADOS: O intervalo livre de doença variou de 0,89 a 140,9 meses, com uma mediana de 6,87 meses. As recidivas foram diagnosticadas em intervalo de tempo inferior a 1 ano em 69 pacientes (62,2%) e após 1 ano em 42 (37,8%). Os pacientes com intervalo livre de doença inferior a 1 ano apresentaram pior resultado de sobrevida (p=0,01). O estádio clínico da recidiva (rEC) foi I ou II em 31 casos (27,9%) e III ou IV em 80 (72,1%). Pacientes com doença em estádio clínico mais avançado (rEC III ou IV) apresentaram piores taxas de sobrevida específica por câncer (p=0,04). Hiper-expressão do EGFR foi associada a pior resultado do tratamento. Os casos com EGFR positivo obtiveram sobrevida específica por câncer em 3 anos de 27,2%, enquanto pacientes com EGFR negativo alcançaram 64,3% de sobrevida em 3 anos (p=0,001). A expressão das proteínas MMP-2, MMP-9 e VEGF não se mostrou significativa para o prognóstico (p=0,83, p=0,15 e p=0,86, respectivamente). Na análise multivariada, apenas o intervalo livre de doença e a expressão do EGFR foram associadas à maior risco de morte. CONCLUSÕES: Recidivas locais de carcinomas epidermóides de boca e orofaringe são associadas a mau prognóstico. Intervalo livre de doença superior a 1 ano e ausência de expressão do EGFR foram os principais fatores associados a melhores resultados de sobrevida específica por câncer em pacientes submetidos à cirurgia de resgate. / INTRODUCTION: Local and regional relapses are the main sites of treatment failure in patients with oral and oropharyngeal squamous cell carcinoma. In these instances, salvage surgery is the most widely used treatment approach. The aim of this study is to analyze the prognostic effect of the expression of EGFR, MMP-2, MMP-9 and VEGF in patients with recurrent cancer sumitted to salvage surgery. METHODS: The charts of 111 patients with local recurrence of oral or oropharyngeal squamous cell carcinomas were retrospectively analyzed. The tumor sites were: the lip in 11 cases (9%), the oral cavity in 68 (61%) and the oropharynx in 33 (30%). The previous treatment was: Surgery in 33 patients (30%), radiotherapy with or without cisplatin based chemotherapy in 46 (41%) and surgery with adjuvant radiotherapy in 32 (29%). EGFR, MMP-2, MMP-9 and VEGF expressions were analyzed with tissue microarray immunohistochemical technique. RESULTS: The disease-free interval ranged from 0.89 to 140.9 months with a median of 6.87 months. The patients were categorized into two groups: Those with recurrence in less than 1 year (69 patients - 62.2%) and those with recurrence after 1 year (42 - 37.8%). The group with the shorter disease-free interval presented a worse prognosis (p=0.01). The clinical stage of recurrence (rCS) was I/II in 31 cases (27.9%) and III/IV in 80 cases (72.1%). Patients with more advanced diseases (rCS III/IV) had worse rates of cancer specific survival (CSS) than patients with rCS I/II (p=0.04). An over-expression of EGFR was associated with worse treatment results. Positive EGFR cases had a 3 year CSS of 27.2%, while EGFR negative patients had 64.3% (p=0.001). The MMP-2 and MMP-9 over-expression were also associated with a worse prognosis but without statistical significance (p=0.83 and p=0.15). VEGF expression did not show prognostic significance in this group of patients. In a multivariate analysis only the disease-free interval and over-expression of EGFR were associated with a higher risk of death. CONCLUSION: Local recurrence in oral and oropharyngeal squamous cell carcinomas usually indicates an unfavorable prognosis. A disease-free interval greater than 1 year and a negative EGFR expression are the main prognostic factors which indicate a better cancer specific survival rate in patients submitted to salvage surgery.

Os tumores hipofisários mesmo sendo, em sua maioria, benignos, podem apresentar comportamento invasivo, com extensão para seio cavernoso, seio esfenoidal e clivo. As metaloproteinases de matriz tipo 2 (MMP-2) e 9 (MMP-9) e o inibidor tecidual de metaloproteinases-2 (TIMP-2) têm sido estudados em relação ao comportamento invasivo desses tumores, em especial quanto à invasão do seio cavernoso. Esse estudo teve como objetivo avaliar a expressão proteica das MMP-2, MMP-9 e do TIMP-2 nos tumores hipofisários e sua relação com invasão do seio cavernoso e, de maneira inédita, investigar a expressão dessas proteínas em nível plasmático. Adicionalmente, foram avaliadas a expressão dos RNAs mensageiros (RNAm) das MMP-2 e TIMP-2 com intuito de correlacioná-las com a expressão proteica no tecido tumoral, bem como a expressão do marcador de proliferação Ki67. Foram selecionados 77 casos, todos com amostras de tumor emblocado em parafina para análise imuno-histoquímica (IHQ). Destes, foram coletadas amostras de tumor fresco em 29 pacientes e de sangue periférico pré-operatório em outros 29 casos. A expressão proteica plasmática foi detectada de forma semi-quantitativa utilizando um arranjo de anticorpos em membrana comercial. A expressão dos RNAm das MMP-2 e TIMP-2 foi avaliada por reação em cadeia da polimerase quantitativo (qPCR) em tempo real. Do total de casos, 20 pacientes apresentavam tumores com invasão para o seio cavernoso. A expressão proteica tumoral das MMP-2, MMP-9 e TIMP-2 apresentou-se aumentada no grupo invasivo, contudo esta diferença não foi estatisticamente significante em relação ao grupo não- invasivo. A expressão plasmática das MMP-9 e TIMP-2 também não mostrou diferença entre os dois grupos e não se correlacionou com a expressão tumoral. A expressão plasmática da MMP-2 não foi detectada em nenhum caso. Quanto à expressão do RNAm das MMP-2 e TIMP-2, também não houve diferença significante entre os grupos e nem correlação com a expressão proteica tecidual ou plasmática. Foi observada uma diferença significante na dimensão tumoral [3.6 (2.5-5.2) x 2.0 (1.3-2.7); P < 0.001] e no índice do Ki67 [1.05 (0.27-25) x 0.5 (0.2-1.0); P < 0.001] entre os grupos invasivo e não-invasivo respectivamente. Em conclusão, em nossa coorte, não foi encontrada relação entre a expressão tecidual e plasmática das MMP-2, MMP-9 e TIMP-2 e a invasão para o seio cavernoso nos adenomas hipofisários / Pituitary tumors, although mostly benign, may present invasive behavior, with extension to the cavernous sinus, sphenoid sinus and clivus. Type 2 (MMP-2) and type 9 (MMP-9) matrix metalloproteinases and the metalloproteinase tissue inhibitor type 2 (TIMP-2) have been studied in relation to the invasive behavior of these tumors, especially regarding invasion of the cavernous sinus. The aim of this study was to evaluate the protein expression of MMP-2, MMP-9 and TIMP-2 in pituitary tumors and its relation with invasion of the cavernous sinus and, in an unprecedented way, to investigate the expression of these proteins at the plasma level. Additionally, expression of MMP-2 and TIMP-2 messenger RNAs (mRNAs) was evaluated in order to correlate with protein expression in tumor tissue, as well as Ki67 proliferation marker expression. A total of 77 cases were selected, all of them with paraffin embedded tumor samples for immunohistochemical analysis (IHC). Of these, fresh tumor samples were collected in 29 patients and preoperative peripheral blood in another 29 cases. Protein plasma expression was detected semi-quantitatively using a commercial membrane antibody array. Expression of MMP-2 and TIMP-2 mRNAs was evaluated by quantitative realtime polymerase chain reaction (qPCR). Of the total cases, 20 patients presented tumors invasive to the cavernous sinus. Tumor protein expression of MMP-2, MMP-9 and TIMP-2 was increased in the invasive group, not reaching, however, statistically significant difference as compared with the non-invasive group. Plasma expression of MMP-9 and TIMP-2 also did not differ between the two groups and did not correlate with tumor expression. Plasma expression of MMP-2 was not detected in any case. Concerning MMP-2 and TIMP-2 mRNA expression, there was also no significant difference between groups and no correlation with tissue or plasma protein expression was observed. A significant difference was observed in tumor size [3.6 (2.5-5.2) x 2.0 (1.3-2.7); P < 0.001] and in the Ki67 index [1.05 (0.27-25) x 0.5 (0.2-1.0); P < 0.001] between the invasive and non-invasive groups respectively. In conclusion, in our cohort, no relationship was found between the tissue and plasma expression of MMP-2, MMP-9 and TIMP-2 and the invasion of the cavernous sinus in pituitary adenomas