Submitted by Alison Vanceto (alison-vanceto@hotmail.com) on 2017-02-07T10:35:47Z No. of bitstreams: 1 TeseCMP.pdf: 2337703 bytes, checksum: 27d55740b52010374ef6d09b5fb74efa (MD5) / Approved for entry into archive by Camila Passos (camilapassos@ufscar.br) on 2017-02-08T12:04:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseCMP.pdf: 2337703 bytes, checksum: 27d55740b52010374ef6d09b5fb74efa (MD5) / Approved for entry into archive by Camila Passos (camilapassos@ufscar.br) on 2017-02-08T12:08:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseCMP.pdf: 2337703 bytes, checksum: 27d55740b52010374ef6d09b5fb74efa (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-08T12:10:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseCMP.pdf: 2337703 bytes, checksum: 27d55740b52010374ef6d09b5fb74efa (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Peripheral nerve injury disrupts the normal functions of neurons and leads to rapid and progressive alterations in structural skeletal muscle, such as muscle atrophy and fibrosis, causing functional deficits. Electrical stimulation (ES) has been recommended to treat denervated muscles. The best parameters of ES to minimize muscle atrophy due to denervation is controversial. Furthermore, it is not clear if ES can, in fact, affect reinnervation of denervated muscles. Thus, this thesis has two main objectives: 1) to verify if ES, applied to denervated muscles by surface electrodes, can affect neuromuscular recovery after nerve crush injury in rats; and 2) to assess the impact of ES on fibrosis establishment in denervated muscles. Two manuscripts were produced and used the same experimental groups. Thirtyfive Wistar rats were divided into 5 groups: (1) Normal (N); (2) 7-day denervation (D7d); (3) 7-day denervation and ES (DES7d); (4) 15-day denervation (D15d); and (5) 15-day denervation and ES (DES15d). Tibialis anterior (TA) muscle denervation was induced by crushing the sciatic nerve. The ES protocol to stimulate TA muscles consisted of: 200 contractions per day divided into 4 consecutive series of 50 contractions, with 10-minute rests between each set. The following parameters were used: exponential monophasic pulse; width time: 2x chronaxie; amplitude: motor level; time On: 3s and Off: 6s. The sciatic functional index was calculated. Muscle excitability was assessed considering the rheobasis, chonaxie and accommodation. Morphometric analyses, such as the muscle fiber cross-sectional area and percentage of connective tissue proliferation were used to characterize muscle morphology. Molecular markers related to reinnervation (neural cell adhesion molecule, NCAM), neuromuscular junction organization and maintenance (MuSK, Dok-7 and nicotinic Acetylcholine Receptors (nAChR) subunits), muscle mass control (atrogin-1, MuRF1, myoD and myostatin), fibrosis (TGF-β and myostatin), extracellular matrix remodeling (metaloproteinases, MMPs) and inflammation (TWEAK/Fn14) were investigated by molecular biology techniques such as western-blot, qPCR or zymography. The main results showed ES impaired natural recovery of denervated muscles accentuating disability, muscle atrophy and fibrosis, as well as reducing muscle excitability. These morphofunctional and electrophysiological changes were related to different modulations of all molecular markers investigated in a timely manner. Overall, this thesis provides evidence that ES can delay the reinnervation process by modulating factors related to NMJ stability and organization, as well as induced disability and muscle atrophy, and decreased muscle excitability. In addition, ES applied to denervated muscles induced muscle fibrosis by modulating inflammatory pathways and also extracellular matrix production and remodeling. Warnings should be given to rehabilitation teams when recommending ES to treat denervated muscles. / A lesão nervosa periférica interrompe as funções normais dos neurônios e leva a alterações rápidas e progressivas no músculo esquelético, tais como a atrofia muscular e a fibrose, causando perdas funcionais. Para o tratamento dos músculos desnervados a estimulação elétrica (EE) tem sido utilizada. A escolha dos melhores parâmetros de EE para minimizar a atrofia muscular devido a desnervação, é controversa. Além disso, não está claro se a EE pode afetar, de fato, a reinervação de músculos desnervados. Assim, esta tese tem dois objetivos principais: 1) verificar se a EE, aplicada aos músculos desnervados com eletrodos de superfície, pode afetar a recuperação neuromuscular após axonotmese do nervo ciático em ratos; e 2) avaliar o impacto da EE no estabelecimento da fibrose do músculo desnervado. Dois manuscritos foram produzidos e contavam com os mesmos grupos experimentais. Trinta e cinco ratos Wistar foram divididos em 5 grupos: (1) Normal (N); (2) Desnervado 7 dias (D7d); (3) Desnervado e ES 7 (DES7d); (4) Desnervado 15 dias (D15d); e (5) Desnervado e ES 15 dias (DES15d). Foi realizada a axonotmese no nervo isquiático. O protocolo de EE do músculo tibial anterior consistiu em: 200 contrações por dia, divididas em 4 séries consecutivas de 50 contrações, com 10 minutos de descanso entre cada série. Foram utilizados os seguintes parâmetros: pulso monofásico exponencial; tempo: 2 vezes cronaxia; amplitude: nível motor; TON: 3s e TOFF: 6s. O índice funcional do ciático foi calculado. A excitabilidade muscular foi avaliada considerando a reobase, cronaxia e acomodação. Análises morfométricas, tais como área de secção transversa da fibra muscular e a porcentagem de proliferação do tecido conjuntivo foram utilizados para caracterizar a morfologia. Marcadores moleculares relacionados à reinervação como a N-CAM (molécula de adesão celular neural), organização e manutenção da junção neuromuscular (JNM) (MuSK, Dok-7 e receptores de acetilcolina), controle de massa muscular (atrogin-1, MuRF1, myoD e miostatina), fibrose (TGF-β e miostatina), remodelação da matriz extracelular (metaloproteinases) e, inflamação (TWEAK / Fn14) foram investigados por técnicas de biologia molecular como western-blot, qPCR ou zimografia. Os principais resultados mostraram que a EE provocou perda da recuperação natural dos músculos desnervados acentuando a perda funcional, a atrofia muscular e a fibrose, assim como, reduzindo a excitabilidade muscular. Estas alterações morfofuncionais e eletrofisiológicas foram relacionadas à diferentes modulações de todos os marcadores moleculares, no decorrer do tempo estudado. De modo geral, a presente tese forneceu provas de que a EE pode atrasar o processo de reinervação por fatores relacionados com a estabilidade e a organização da JNM, bem como a induzir à incapacidade e à atrofia muscular, com diminuição da excitabilidade muscular. Além disso, a EE aplicada aos músculos desnervados induziu fibrose através da modulação da via inflamatória e também pela produção e remodelamento da matriz extracelular. Cuidados devem ser tomadas pelas equipes de reabilitação ao utilizar a EE no tratamento de músculos desnervados.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-28Bitstream added on 2014-06-13T18:51:08Z : No. of bitstreams: 1 semolin_lms_me_jabo.pdf: 459480 bytes, checksum: a04688b37ebdfeff1509f159e7641c20 (MD5) / O linfoma é uma doença linfoproliferativa caracterizada pela multiplicação clonal de linfócitos malignos no seio dos órgãos linfóides, afetando principalmente os linfonodos, ou outros órgãos viscerais sólidos, com prognóstico dependente de vários fatores, incluindo invasão tecidual. Enzimas proteolíticas MMP-2 e MMP-9 estão sendo estudadas quanto à importância neste processo de progressão tumoral por propiciarem a penetração e infiltração celular. Considerando a importância atual destas enzimas e o papel ainda não fundamentado nas neoplasias hematopoiéticas, avaliou-se a expressão de MMP-2 e MMP-9 em cães acometidos por linfoma multicêntrico e cães hígidos, através de técnica imuno-histoquimica de linfonodo e eletroforese zimográfica de linfonodo e soro, estabelecendo a relação entre a expressão destas enzimas e os fatores prognósticos como estadiamento, imunofenotipo e grau histopatológico da neoplasia e resposta ao tratamento. Observou-se maior expressão tecidual de MMP-9 nos animais com linfoma, através de técnica imuno-histoquimica, sem correlação exata com prognóstico. Eletroforese zimográfica do linfonodo demonstrou correlação da MMP-9 com imunofenótipo T e animais em doença progressiva, inferindo possível prognóstico negativo quanto à sobrevida. Valores de MMP-2 não apresentaram relação clara com o processo tumoral, assim como os valores séricos das duas enzimas. Desta forma, a MMP-9 demonstrou participação no processo neoplásico, porém sem determinação prognóstica exata / Lymphoma is a lymphoproliferative disease characterized by clonal proliferation of malignant lymphocytes within lymphoid organs, mainly affecting the lymph nodes, or other solid visceral organs, with prognosis depends on several factors, including tissue invasion. Proteolytic enzymes MMP-2 and MMP-9 have been studied as to the importance of tumor progression in this process by propitiate the penetration and cellular infiltration. Considering the current importance of these enzymes and the role not grounded in hematopoietic malignancies, we evaluated the expression of MMP-2 and MMP-9 in dogs affected by multicentric lymphoma and healthy dogs by immunohistochemistry technique of lymph node and zymography electrophoresis of lymph node and serum, establishing the relationship between the expression of these enzymes and prognostic factors such as tumor staging, immunophenotyping, histological grade and response to treatment. We observed increased expression of MMP-9 tissue in animals with lymphoma by immunohistochemistry technique, no exact correlation with prognosis. Zymography electrophoresis of lymph node demonstrated correlation of MMP-9 with T-cell phenotype and progressive disease, inferring possible negative prognosis regarding survival. Values of MMP-2 showed no clear relation with the tumoral process as well as serum levels of the two enzymes. Thus, MMP-9 demonstrated involvement in the neoplastic process, but without accurate prognostic determination

Orientador: Áureo Evangelista Santana / Banca: Márcia Ferreira da Rosa Sobreira / Banca: Júlio Lopes Siqueira / Resumo: O linfoma é uma doença linfoproliferativa caracterizada pela multiplicação clonal de linfócitos malignos no seio dos órgãos linfóides, afetando principalmente os linfonodos, ou outros órgãos viscerais sólidos, com prognóstico dependente de vários fatores, incluindo invasão tecidual. Enzimas proteolíticas MMP-2 e MMP-9 estão sendo estudadas quanto à importância neste processo de progressão tumoral por propiciarem a penetração e infiltração celular. Considerando a importância atual destas enzimas e o papel ainda não fundamentado nas neoplasias hematopoiéticas, avaliou-se a expressão de MMP-2 e MMP-9 em cães acometidos por linfoma multicêntrico e cães hígidos, através de técnica imuno-histoquimica de linfonodo e eletroforese zimográfica de linfonodo e soro, estabelecendo a relação entre a expressão destas enzimas e os fatores prognósticos como estadiamento, imunofenotipo e grau histopatológico da neoplasia e resposta ao tratamento. Observou-se maior expressão tecidual de MMP-9 nos animais com linfoma, através de técnica imuno-histoquimica, sem correlação exata com prognóstico. Eletroforese zimográfica do linfonodo demonstrou correlação da MMP-9 com imunofenótipo T e animais em doença progressiva, inferindo possível prognóstico negativo quanto à sobrevida. Valores de MMP-2 não apresentaram relação clara com o processo tumoral, assim como os valores séricos das duas enzimas. Desta forma, a MMP-9 demonstrou participação no processo neoplásico, porém sem determinação prognóstica exata / Abstract: Lymphoma is a lymphoproliferative disease characterized by clonal proliferation of malignant lymphocytes within lymphoid organs, mainly affecting the lymph nodes, or other solid visceral organs, with prognosis depends on several factors, including tissue invasion. Proteolytic enzymes MMP-2 and MMP-9 have been studied as to the importance of tumor progression in this process by propitiate the penetration and cellular infiltration. Considering the current importance of these enzymes and the role not grounded in hematopoietic malignancies, we evaluated the expression of MMP-2 and MMP-9 in dogs affected by multicentric lymphoma and healthy dogs by immunohistochemistry technique of lymph node and zymography electrophoresis of lymph node and serum, establishing the relationship between the expression of these enzymes and prognostic factors such as tumor staging, immunophenotyping, histological grade and response to treatment. We observed increased expression of MMP-9 tissue in animals with lymphoma by immunohistochemistry technique, no exact correlation with prognosis. Zymography electrophoresis of lymph node demonstrated correlation of MMP-9 with T-cell phenotype and progressive disease, inferring possible negative prognosis regarding survival. Values of MMP-2 showed no clear relation with the tumoral process as well as serum levels of the two enzymes. Thus, MMP-9 demonstrated involvement in the neoplastic process, but without accurate prognostic determination / Mestre

Orientador: José Luiz Laus / Coorientador: Alexandre Pinto Ribeiro / Banca: Cristiane dos Santos Honsho / Banca: Ana Lúcia Abreu Silva / Resumo: Estudaram-se os efeitos do cetorolaco de trometamina à 0,5%, sem conservante, quanto ao tempo de epitelização, a alterações clínicas, histológicas (HE), sobre expressão da Óxido Nítrico Sintase induzível (iNOS) e da Metaloproteinase-9 (MMP-9) na ceratite ulcerativa causada por álcali em coelho. Doze olhos foram tratados (GT) com o fármaco e outros 12 com solução salina (GC), imediatamente à ocorrência das úlceras e a cada 6 horas. Decorridas 24h, seis córneas (n=6) de cada grupo foram colhidas (primeiro momento). As demais (n=6), o foram após a reepitelização (segundo momento). Em ambos os momentos, avaliaram-se o infiltrado inflamatório e as condições do epitélio neoformado (HE). Por imunoistoquímica, a imunomarcação de iNOS e de MMP-9 foi avaliada. A média do tempo de epitelização no GT foi de 55 horas. No GC, ele foi de 44 horas (p<0,05). Às 24 h, as córneas do GT apresentaram menor exsudação inflamatória (p<0,01), comparativamente ao GC. No segundo momento, o GT mostrou discreta exsudação inflamatória (p>0,05) e camada epitelial simples. O GC mostrou maior estratificação no epitélio neoformado. A média de imunomarcação de iNOS em células do estroma foi maior em GT, no primeiro e segundo momentos, comparativamente a GC (p>0.05). No segundo momento, a região central expressou mais iNOS, comparativamente à periférica, tanto em GT (p<0,01), quanto em GC (p<0,05). No epitélio, não se observaram diferenças significativas dos escores de imunomarcação de iNOS entre os grupos e os momentos (p=0.69). Os escores de imunomarcação para MMP-9, no epitélio, foram menores em GT, comparativamente a GC (p=0,69). A média de imunomarcação de MMP-9 em células do estroma, no segundo momento, foi maior na região central, comparativamente à periférica (p=0.32). Não houve correlação entre a... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: We studied the effects of ketorolac tromethamine at 0.5% without preservative, about the time of epithelialization, the clinical, histological (HE) on the expression of inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) and metalloproteinase-9 (MMP -9) in ulcerative keratitis in rabbits caused by alkali. Twelve eyes were treated (GT) to the drug and 12 with saline (GC), immediately to the occurrence of ulcers and every 6 hours. After 24h, six corneas (n = 6) of each group were harvested (first moment). The other (n = 6), were after reepithelialization (second time). In both instances, we evaluated the inflammatory infiltrate and conditions of the newly formed epithelium (HE). For immunohistochemistry, immunostaining of iNOS and MMP-9 was assessed. The average time of epithelialization in GT was 55 hours. In the GC, it was 44 hours (p <0.05). At 24 h, the corneas of GT showed lower inflammatory exudation (p <0.01) compared to the CG. In the second phase, the GT revealed mild inflammatory exudation (p> 0.05) and simple epithelial layer. The GC showed greater stratification in the newly formed epithelium. The average immunostaining of iNOS in stromal cells was higher in GT, the first and second moments compared to control group (p> 0.05). In the second step, the central region expressed more iNOS compared to peripheral in both TG (p <0.01) and in control group (p <0.05). In the epithelium, there were no significant differences in scores of iNOS immunostaining between groups and time (p = 0.69). The scores of immunostaining for MMP-9 in the epithelium were lower in GT compared to GC (p = 0.69). The average immunostaining of MMP-9 in stromal cells, the second time was greater in the central region as compared to the peripheral (p = 0.32). There was no correlation between the immunostaining of iNOS and MMP-9 as well as the quantity... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:32:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FernandoJON_TESE.pdf: 1862708 bytes, checksum: c0bcb5ceb1bfbf2e1312b265a0c10350 (MD5) Previous issue date: 2013-09-13 / Periodontal disease is an infectious disease resulting from the immunoinflammatory response of the host to microorganisms present in the dental biofilm which causes tissue destruction. The objective of this study was to evaluate the immunohistochemical expression of cyclophilin A (CYPA), extracellular matrix metalloproteinase inducer (EMMPRIN) and matrix metalloproteinase 7 (MMP-7) in human specimens of clinically healthy gingiva (n=32), biofilm-induced gingivitis (n=28), and chronic periodontitis (n=30). Immunopositivity for CYPA, EMMPRIN and MMP-7 differed significantly between the three groups, with higher percentages of staining in chronic periodontitis specimens, followed by chronic gingivitis and healthy gingiva specimens (p < 0.001). Immunoexpression of CYPA and MMP-7 was higher in the intense inflammatory infiltrate observed mainly in cases of periodontitis. Analysis of possible correlations between the immunoexpression of EMMPRIN, MMP-7 and CYPA and between the expression of these proteins and clinical parameters (probing depth and clinical attachment loss) showed a positive correlation of CYPA expression with MMP-7 (r = 0.831; p < 0.001) and EMMPRIN (r = 0.289; p = 0.006). In addition, there was a significant positive correlation between probing depth and expression of MMP-7 (r = 0.726; p < 0.001), EMMPRIN (r = 0.345; p = 0.001), and CYPA (r = 0.803; p < 0.001). These results suggest that CYPA, EMMPRIN and MMP-7 are associated with the pathogenesis and progression of periodontal disease / A doen?a periodontal ? uma entidade infecciosa que resulta da resposta imuno-inflamat?ria do hospedeiro aos microrganismos presentes no biofilme dent?rio, levando ? destrui??o tecidual. O prop?sito do presente estudo foi avaliar a express?o imuno-histoqu?mica da ciclofilina A (CYPA), do indutor de metaloproteinases da matriz extracelular (EMMPRIN) e da metaloproteinase da matriz 7 (MMP-7) em esp?cimes humanos de gengiva clinicamente saud?vel (n=32), gengivite induzida por biofilme dent?rio (n=28) e periodontite cr?nica (n=30). Foram realizadas bi?psias das tr?s condi??es cl?nicas e feita a an?lise imuno-histoqu?mica atrav?s da contagem total do n?mero de c?lulas positivas, correlacionando-a com par?metros cl?nicos. A imunopositividade da CYPA, do EMMPRIN e da MMP-7 revelou diferen?a estatisticamente significativa entre os tr?s grupos, com maiores percentuais de positividade nos esp?cimes de periodontite cr?nica, seguidos pelos esp?cimes de gengivite cr?nica e de gengiva saud?vel (p < 0,001). Foi evidenciada maior express?o de CYPA e MMP-7 nos grupos que tinham infiltrado inflamat?rio mais intenso. Foram observadas correla??es das imunoexpress?es de EMMPRIN, MMP-7 e CYPA, tanto entre si como com par?metros cl?nicos (profundidade de sondagem e perda de inser??o cl?nica). Foram verificadas correla??es positivas entre a express?o de CYPA e as express?es da MMP-7 (r = 0,831; p < 0,001) e do EMMPRIN (r = 0,289; p = 0,006). Al?m disso, a profundidade de sondagem revelou correla??o positiva, estatisticamente significativa, com as express?es de MMP-7 (r = 0,726; p < 0,001), EMMPRIN (r = 0,345; p = 0,001) e CYPA (r = 0,803; p < 0,001). Esses resultados evidenciam que a CYPA, o EMMPRIN e a MMP-7 podem estar associadas ? patog?nese e progress?o da doen?a periodontal

Introdução O papel das alterações hemodinâmicas sobre o remodelamento do ventrículo esquerdo tem sido pouco estudado, especialmente na hipertrofia cardíaca por sobrecarga de volume. A queda da pressão arterial sistêmica e o aumento da pressão de enchimento do ventrículo esquerdo afetam negativamente a pressão de perfusão miocárdica e podem, assim, prejudicar a perfusão subendocárdica, preferencialmente. As conseqüências para o remodelamento do ventrículo esquerdo ainda não foram determinadas. Objetivos Os objetivos do presente estudo foram investigar o papel da pressão de perfusão coronariana (PPC) no remodelamento subendocárdico e os possíveis efeitos sobre a função cardíaca em um modelo de fístula aorto-cava. Métodos Ratos machos Wistar, pesando 330-350 g, foram submetidos ao modelo de fístula aorto-cava (grupo FAC) ou à cirurgia fictícia - sham (grupo SH). Duas avaliações hemodinâmicas foram realizadas: hemodinâmica inicial, com uma semana de cirurgia e hemodinâmica final, com oito semanas de cirurgia. Duas regiões do ventrículo esquerdo foram examinadas: a região subendocárdica (SE) e a região não subendocárdica (não SE). O fluxo miocárdico foi determinado com microesferas coloridas na semana 1. A expressão e a atividade de metaloproteinase (MMP), o estresse oxidativo, os níveis de citocinas, a atividade de mieloperoxidase e a fração de volume do colágeno foram determinados na semana 8. A estrutura e a função cardíacas foram avaliadas com ecocardiografia realizada na semana 8. Resultados Comparado ao grupo SH, FAC apresentou PPC inicial (86+ - 3 mmHg vs. 52 + - 5 mmHg; P <0,0001) e PPC final (86+ - 2 mmHg vs. 54 + - 4 mmHg, P <0,0001) menores e +dP/dt (5917+ - 266 mmHg/s vs. 4511 + - 285 mmHg/s; P = 0,0021) e - dP/dt (5639 + - 396 mmHg/s vs. 4343 + - 274 mmHg/s; P = 0,0121) finais menores. Também, a fração de encurtamento (55,8 + - 1,2% vs. 45,1 + - 2,1%; P = 0,0014) e a espessura relativa de parede do ventrículo esquerdo (0,72 + - 0,02 vs. 0,58 + - 0,03; P = 0,0058) foram menores. Ainda em FAC, o fluxo miocárdico foi menor em SE (2,7 + - 0,5 mL/min/g) comparado a não SE (4,8 + - 0,8 mL/min/g) e também menor comparado a SE (6,7 + - 0,4 mL/min/g) e não SE (7,5 + - 0,5 mL/min/g) de SH. A expressão e a atividade da MMP-2 predominaram em SE de FAC, particularmente nos animais com PPC <60 mmHg. Aumento dos níveis de IL-1beta e IL-6 foram também predominantes em SE de FAC. Já a atividade da mieloperoxidase e os níveis de TNF-alfa e IL-10 foram comparáveis entre os grupos. Comparado a SH, FAC apresentou maior fração de volume do colágeno tanto em SE (1,1+ - 0,1% vs. 7,7 + - 0,4%; P <0,0001) quanto em não SE (1,0 + - 0,1% vs. 4,9 + - 0,3%, P <0,0001). Das variáveis hemodinâmicas, a análise multivariada demonstrou que a PPC inicial foi a única associada de forma independente com a fibrose SE (R2 = 0,76; P <0,0001), com a +dP/dt (R2= 0,55; P = 0,0004) e com a -dP/dt (R2= 0,91; P <0,0001). Houve correlação da PPC final com a expressão (R2 = 0,55; P <0,0001) e a atividade da MMP-2 (R2 = 0,88; P <0,0001) e da fibrose SE com a +dP/dt (R2 = 0,55; P = 0,0004) e com a -dP/dt (R2 = 0,85; P <0,0001). Conclusão Na fístula, a diminuição da PPC está associada a dano em SE, representado por isquemia, estresse oxidativo, aumento de citocinas e de MMP-2, com desenvolvimento de fibrose. O remodelamento de SE interfere negativamente na função do ventrículo esquerdo. / Introdution The role of hemodynamic changes in left ventricular remodeling has been poorly investigated, especially in the context of volume overload cardiac hypertrophy. Low diastolic blood pressure and high left ventricular filling pressure are expected to negatively affect coronary driving pressure and thereby put in jeopardy subendocardial perfusion, in particular. The consequences to global left ventricular remodeling remain undetermined. Objectives The aim of this study was to investigate the role of coronary driving pressure (CDP) in the development of subendocardial remodeling and the conceivable effects on cardiac function, using a rat model of aortocaval fistula. Methods Wistar rats weighting 330-350 g were submitted to aortocaval fistula (ACF group) or sham (SH group) operations. Two hemodynamic measurements were determined following surgery: initial, at week 1; and final, at week 8. Two distinct myocardial layers were examined: the subendocardium (SE) and the non-subendocardium (non SE). Myocardial blood flow was determined at week 1. Metalloproteinase expression and activity, oxidative stress, cytokine levels, myeloperoxidase activity, and fibrosis deposition were assessed at week 8. Cardiac structure and function were determined by means of echocardiography at week 8. Results Compared with SH, ACF showed lower initial (86 + - 3 mmHg vs. 52 + - 5 mmHg; P <0.0001) and final (86+ - 2 mmHg vs. 54 + - 4 mmHg, P <0.0001) CDP and lower final +dP/dt (5917 + - 266 mmHg/s vs. 4511+ - 285 mmHg/s; P = 0.0021) and -dP/dt (5639?396 mmHg/s vs. 4343 + - 274 mmHg/s; P = 0.0121). Left ventricular fractional shortening (55.8 + - 1.2% vs. 45.1+ - 2.1%; P = 0.0014) and relative wall thickness were also lower (0.72 + - 0.02 vs. 0.58 + - 0.03; P = 0.0058). ACF showed lower myocardial blood flow in SE (2.7 + - 0.5 mL/min/g) as compared with non SE (4.8 + - 0.8 mL/min/g) and as compared with both SE (6.7 + - 0.4 mL/min/g) and non SE (7.5 + - 0.5 mL/min/g) regions in SH. Metalloproteinase-2 expression and activity predominated in SE of ACF animals, particularly in those with CDP <60 mmHg. Increased levels of IL-6 and IL-1beta also predominated in SE of ACF. Otherwise, myeloperoxidase activity, and TNF-alfa and IL-10 levels were similar in both groups. Compared with SH, ACF showed higher collagen volume fraction in SE (1.1 + - 0.1% vs. 7.7 + - 0.4%; P <0.0001) and non SE (1.0 + - 0.1% vs. 4.9 + - 0.3%, P <0.0001) regions. Multivariate analyses disclosed initial CDP as the only hemodynamic parameter independently associated with SE fibrosis (R2 = 0.76; P <0.0001) and with +dP/dt (R2= 0.55; P = 0.0004) and -dP/dt (R2= 0.91; P <0.0001). Final CDP correlated with both the expression (R2 = 0.55; P <0.0001) and the activity of metalloproteinase-2 (R2 = 0.88; P <0.0001) and SE fibrosis correlated with both +dP/dt (R2 = 0.55; P = 0.0004) and -dP/dt (R2 = 0.85; P <0.0001). Conclusion Low coronary driving pressure early in the course of ACF is associated with SE damage characterized by ischemia, oxidative stress, increase in cytokines and MMP-2, the development of fibrosis and by this mechanism interferes negatively in left ventricular function.

Os tumores da cérvice-uterina, que representam uma das principais doenças ginecológicas em mulheres na idade reprodutiva em todo o mundo, estão etiologicamente associados com a infecção pelo papilomavírus humano (HPV). A progressão de uma lesão intraepitelial escamosa de baixo-grau (LSIL) a um carcinoma invasivo de cérvix uterina está acompanhada da degradação da matriz extracelular (MEC) devido à ação progressiva das metaloproteinases de matriz (MMP-2, MMP-9 e MMP-14) no processo de invasão e metástase. Entretanto, o balanço entre as MMPs e seus reguladores como RECK e TIMPs é necessário para controlar esta invasão. O objetivo deste projeto consiste em avaliar a atividade e a expressão das metaloproteinases 2, 9, e 14, e caracterizar a expressão do gene supressor de metástase RECK e do inibidor tecidual de metaloproteinases (TIMP-2), em modelo de queratinócitos humanos infectados com retrovírus recombinantes que expressam os oncogenes E6 e/ou E7 de HPV 16, em culturas cultivadas em monocamada e organotípicas. Para isso, utilizamos ensaios de real-time PCR, zimografia, western blot, imunocitoquímica, ensaio de ELISA e imunohistoquímica. Em culturas em monocamada observamos que as células que expressam as oncoproteínas E6E7 de HPV16 apresentaram menores níveis protéicos de RECK e TIMP-2 em relação ao controle pXLSN. Quando analisamos as culturas organotípicas, também observamos esta diminuição dos níveis de RNAm e protéicos de RECK em rafts que expressam E6E7, acompanhado pelo aumento da atividade de MMP-9, em relação ao controle. Também observamos que o tratamento das culturas com a citocina TNF aumenta a expressão gênica, protéica e atividade de MMP-9 em todas as linhagens analisadas. Além disso, os oncogenes E6 e/ou E7 não afetam a expressão e/ou atividade de MMP-2, MT1-MMP. Nossos dados demonstraram que a expressão das oncoproteínas E6E7 de HPV16 estão relacionadas com o desequilíbrio entre MMPS e seus inibidores, sugerindo que em uma fase pré-invasiva do carcinoma cervical, não somente as MMPs, mas, principalmente seus inibidores são críticos para início da progressão tumoral. / Cervical cancer is etiologically associated with to high-risk human papillomavirus (HPV) infection. It has been observed that matrix metalloproteinases (MMPs) -2, -9, and MT1-MMP are required for basement membrane degradation during cervical carcinoma progression. Moreover, a counterbalancing among MMPs and their regulators, such as TIMPs and RECK, is necessary to modulate invasion. In order to study the effect of HPV oncogenes on MMPs expression, primary human keratinocytes (PHKs) were infected with recombinant retroviruses expressing wild-type HPV16 E6 and/or E7 oncogenes and were used to seed monolayers and organotypic cultures. Quantitative real-time PCR (Q-PCR), western blot, zimography, immunocitochemistry, ELISA assay and immunohistochemistry were used to determine the expression level and activity of MMP-2, MMP-9, MT1-MMP and their inhibitors RECK and TIMP-2. We observed that cultures expressing E6E7 presented lower RECK and TIMP-2 protein levels than control keratinocytes. In addition, rafts cultures presented the same lower RECK levels additionally presenting higher MMP-9 activity than control. Furthermore, we observed that expression of E6 and/or E7 proteins do not affect MMP-2 and MT1-MMP protein levels and/or activity. We also observed that TNF treatment enhance the MMP-9 gene and protein expression and activity in all studied cell lines. Taken together, our results demonstrate that HPV16E6E7 expression is related with the unbalance between MMPs and their inhibitors, suggesting that in the initial steps of HPV-related cervical disease, not only MMPs but also RECK and TIMP-2 are critical for tumor progression.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-05-25T14:19:45Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação_Dafne_C_A_Quixabeira.pdf: 2494498 bytes, checksum: df9aad949df97edff70e2580bdd977c5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-25T14:19:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Dissertação_Dafne_C_A_Quixabeira.pdf: 2494498 bytes, checksum: df9aad949df97edff70e2580bdd977c5 (MD5) Previous issue date: 2016-02-25 / CAPES / CNPQ / FACEPE / O câncer de colo do útero apresenta distribuição a nível mundial, correspondendo ao quarto mais incidente entre as mulheres. Está associado à infecção prévia pelo Papillomavírus Humano (HPV) em quase a totalidade dos casos. Diversos cofatores atuam em consonância ao HPV para o surgimento de lesões cervicais e posterior carcinoma. Importante destaque como cofator deve ser dado às metaloproteinases de matriz (MMP), enzimas proteolíticas que participam da lise tanto de componentes da matriz extracelular (MEC), como os que não pertencem a matriz. Particularmente a MMP-2 tem destaque relevante no câncer cervical, por favorecer a progressão de lesões in situ para a invasão ao lisar a membrana basal. Polimorfismos na região promotora desse gene têm sido associados ao aumento do risco da progressão do câncer e formação de metástases. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a possível associação dos polimorfismos de base única (SNP) -1306C/T e -735C/T, presentes na região promotora do gene da MMP-2 em lesões cervicais em mulheres de dois Estados da região Nordeste do Brasil. Foram avaliados 52 casos de lesões intraepiteliais de baixo grau (LSIL) e 67 lesões intraepiteliais de alto grau (HSIL) para o polimorfismo -1306 C/T. Enquanto que 63 casos de LSIL e 73 casos de HSIL foram selecionados para a avaliação do SNP 735C/T. 95 casos com citologia normal foram selecionados como grupo controle do -1306C/T e 91 casos para o -735 C/T. A amplificação gênica e posterior genotipagem foram feitas por meio de PCR-RFLP, com o uso das enzimas Pvu II e Hinf I, para os SNP-1306C/T e -735C/T, respectivamente. A MMP-2 C1306T não apresentou associação significativa entre os grupos LSIL e o controle (p=0,1734OR=0.37; 95 % CI=0.3-1.58). Assim como entre os grupos controle e HSIL (p=0,7118 OR=0.08; 95 % CI=0.93-3.3). O mesmo foi observado para a avaliação do MMP-2 C735T, pois não foi encontrada associação significativa entre o grupo LSIL e o controle (p=0,7948; OR=0,94; 95 % CI=0,56-2,15), bem como entre o grupo HSIL e o controle (p=0,7398; OR=1,07; 95 % CI=0,50-1,64). A presença do genótipo TT no modelo recessivo apresentou-se como fator protetor da progressão das lesões cervicais (p=0,03566; OR=0,66; 95 % CI=0,10-0,96). Em relação ao uso de contraceptivo oral como cofator, não foram encontradas associações, tanto entre os casos LSIL (p=0,370 OR=0.65; 95 % CI=0.35-1.93) e HSIL (p=0,6527; OR=0.08; 95 % CI=0.93-3.3) -1306C/T, quanto para os casos LSIL (p=0,57649; OR= 0,9; 95% CI=0.60-2.54) e HSIL (p=0,6269; OR= 0,74; 95% CI=0.47-1.57) do -735C/T. A associação entre a infecção pelo HPV e os genótipos C735T e C1306T não foi significativa (p >0,05). No presente estudo, apenas a presença do genótipo TT do MMP-2 C735T apresentou relevância estatística como fator protetor da progressão das lesões cervicais para a malignidade. / Cervical cancer is a global health problem being the fourth most incident cancer in women. This type of cancer is associated with prior infection with Human Papillomavirus (HPV) in almost all cases. Some cofactors act with HPV in the development of lesions and posterior cervical carcinoma. An important cofactor are matrix metalloproteinases (MMP). Proteolytic enzymes that participate in the lysis component of the extracellular matrix (ECM). Particularly MMP-2 excels in cervical cancer progression by promoting the intraepithelial lesions to invasion due to lysis of the basal membrane. Polymorphisms in the promoter region of the MMP-2 gene has been associated with increased risk of progression to cancer and metastasis. This study aimed to evaluate the possible association of single nucleotide polymorphisms (SNP) -1306C / T and 735C / T, present in the promoter region of the MMP-2 gene in cervical lesions in women in States of northeastern Brazil. We evaluated 52 cases of low grade intraepithelial lesions (LSIL) and 67 cases of high grade (HSIL) for the polymorphism -1306 C/T. While other 63 LSIL cases and 73 HSIL cases were evaluated for SNP -735C/T. 95 cases with normal cytology were selected with the control group -1306C / T and 91 cases for the -735 C / T. Gene amplification and subsequent genotyping were performed by PCR-RFLP. For this we used the restriction enzyme Pvu II (for SNP-1306C / T) and Hinf I (for SNP -735C / T). The MMP-2 C1306T showed no significant association between the LSIL group and the control (p = 0,1734OR = 0:37; 95% CI = 0.3-1.58). As well as between the control group and HSIL (p = 0.7118 OR = 0:08; 95% CI = 0.933.3). The same was observed for the evaluation of MMP-2 compared C735T LSIL group and the control group (p = 0.7948, OR = 0.94; 95% CI = 0.56 to 2.15). There was also no association between HSIL group and the control (p = 0.7398; OR = 1.07; 95% CI = 0.50 to 1.64). The presence of the TT genotype in recessive model was presented as a protective factor in the progression of cervical lesions (p = 0.03566; OR = 0.66; 95% CI = .10-.96). Regarding the use of oral contraceptive as a cofactor, no significant associations found between LSIL cases (p = 0.370 OR = 0.65; 95% CI = 0.35-1.93) and HSIL (p = 0.6527; OR = 0:08; 95% CI = 0.93-3.3) from -1306C / T group, as well as LSIL (p = 0.57649; OR = 0.9; 95% CI = 0.60-2.54) and HSIL (p = 0.6269, OR = 0 74; 95% CI = 0:47 to 1:57) of -735C / T group. The association between HPV infection and the C735T and C1306T genotypes was not significant (p> 0.05). In the present study, only the presence of the TT genotype of MMP-2 C735T showed statistically significant protective factor in the progression of cervical lesions to malignancy.

O efeito inflamatório da jararagina, toxina hemorrágica do veneno de Bothrops jararaca, foi avaliado através de um sistema in vitro (células peritoneais murinas-MPACs) e in vivo (coxim plantar de camundongos), onde foi avaliada a produção de mRNA que codifica as citocinas TNF-a, IL-1b e IL-6 por RT-PCR e a liberação destas no sobrenadante de cultura e no local de injeção (ELISA). Além disso, o domínio da jararagina responsável pela liberação local das citocinas foi estudado. Nossos resultados mostram que a jararagina induziu a expressão de mRNA que codifica para o TNF-a, IL-1b e IL-6 em MPACs, 4 horas após o estímulo, entretanto a ação enzimática da jararagina interferiu com a detecção dstas citocinas no sobrenadante da cultura. A jararagina inibida com EDTA induziu a liberação destas citocinas no modelo in vitro (MPACs). No modelo in vivo foi verificada a liberação local de TNF-a, IL-1b e IL-6 no sobrenadante do homogenato do tecido, sendo a IL-6 a citocina liberada em maior quantidade. Tanto o domínio disintegrina/rico em cisteína, como o metaloproteinase, da jararagina, participam desta liberação. Este estudo mostrou o envolvimento direto de citocinas em um modelo inflamatório, liberadas pela metaloproteinase de veneno botrópico, em cultura de células e também no local da injeção. / The inflammatory effect of jararhagin, a haemorrhagic toxin from Bothrops jararaca venom, was evaluated in an in vitro (Murine Peritoneal Adherent Cells-MPACs) and in vivo system (mouse footpad), through the production of TNF-a, IL-1b and IL-6 mRNA (RT-PCR) and the release of these cytokines in the culture supernatant and locally at the site of injection (ELISA). In addition the domain of jararhagin responsible for the local release of cytokines was studied. Our results showed that the jararhagin can induce the mRNA expression for TNF-a, IL-1b and IL-6 in MPACs at 4 hours after treatment, however the enzymatic activity of jararhagin was found to affect the detection of the cytokines in the culture supernatant. The jararhagin inhibited with EDTA was found to induce the release of these cytokines by MPACs. Concerning the in vivo model, the local release of TNF-a, IL-1b and IL-6 was detected in the footpad homogenate. Both of the jararhagin domains, the metalloproteinase and the disintegrin/cystein rich domains play a role in this release. This study showed the direct involvment of cytokines in an inflammatory model, released by snake venom metalloproteinases in the cell culture and also locally at the site of injection.

Introdução: A obstrução infravesical (OIV) de longo prazo secundária a hiperplasia prostática benigna (HPB) pode causar alterações funcionais e morfológicas na bexiga. Um dos principais eventos consiste no aumento da deposição de colágeno e perda de complacência vesical, levando a alteração de armazenamento e esvaziamento urinário. O aumento da deposição de colágeno na matriz extracelular (MEC) da musculatura detrusora é a principal razão para a diminuição da complacência vesical. Na bexiga, assim como em outros órgãos, este fenômeno depende da atividade equilibrada de enzimas proteolíticas, incluindo as metaloproteinases (MMP) e os seus inibidores endógenos (inibidores teciduais de metaloproteinases-TIMPs). Como estes fenômenos são desconhecidos na bexiga obstruída, o objetivo deste estudo foi avaliar a expressão gênica de colágeno, MMPs e seus inibidores na bexiga de pacientes com obstrução infravesical. Material e Métodos: Foi realizada uma análise prospectiva e controlada de 43 pacientes com OIV devido a HPB, que foram submetidos à ressecção transuretral da próstata (RTUP) entre 2011 e 2012. Como grupo controle foram selecionados espécimes de músculo detrusor de 10 pacientes que foram submetidos a prostatectomia radical retropúbica devido adenocarcinoma de próstata. Todos estes pacientes tinham idade menor que 60 anos, tamanho de próstata menor que 30 gramas ao ultra-som e escore internacional de sintomas prostáticos (IPSS) menor que 7. Todos os pacientes foram submetidos a estudo urodinâmico pré e pós operatório (após 6 meses). A biópsia de fragmento de músculo da bexiga foi realizada ao final da RTUP e colocada em solução estabilizadora de RNA para quantificação da expressão de colágenos I e III, metaloproteinases de matriz 1, 2 e 9, e inibidores de MMPs (TIMP1, TIMP2 e RECK) na bexiga de pacientes com HPB. Os genes descritos foram avaliados através da técnica de reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qRT-PCR). Resultados: Todos os pacientes com HPB tinham confirmado OIV, através da análise do estudo urodinâmico (média de pressão detrusora no fluxo máximo de 78,5 cmH2O e fluxo urinário máximo de 7,7 ml / s). O gene MMP1 mostrou-se superexpresso em pacientes com HPB (mediana = 1,87). MMP9, TIMP1 e RECK estavam subexpressos na maioria dos casos, enquanto TIMP2, colágeno I e III foram superexpressos (1,5, 4,4 e 1,9 vezes, respectivamente). No que diz respeito às características clínicas e urodinâmicas encontramos que MMP2 foi mais expresso entre pacientes com um baixo IPSS global (0,005) e sem urgência (p=0,035). Colágeno III foi mais expresso em pacientes com contrações vesicais não inibidas (p = 0,049). Os outros genes não mostraram nenhuma correlação estatística com quaisquer características clínicas ou urodinâmicas. Após 6 meses de RTU, pacientes que possuíam expressão aumentada de duas ou mais MMPs, apresentaram resolução da CNI em 66,6% dos casos, contra 14,0% quando apenas uma ou nenhuma MMP estava aumentada (p=0,038) Conclusões: Encontramos um perfil de superexpressão de MMP1, TIMP2, colágenos I e III, e expressão baixa de MMP9, TIMP1 e RECK nos pacientes com OIV. Considerando o escore de sintomas prostáticos e a urgência miccional, encontramos curiosamente uma maior expressão de MMP2 em pacientes menos sintomáticos e sem urgência miccional. Encontramos uma associação entre a maior expressão de colágeno III com HD. A expressão aumentada de duas ou mais MMPs está relacionada à maiores taxas de resolução das CNIs. / Introduction: Long-term Bladder outlet obstruction (BOO) secondary to Benign prostatic Hyperplasia (BPH) can cause functional and morphological abnormalities in the bladder, such as increased collagen deposition and loss of compliance, leading to urinary storage and voiding symptoms. A decrease in bladder compliance is known to be correlated with deterioration of renal function. Increased deposition of collagen in the extracellular matrix (ECM) is the primary reason for a decreased compliance. In the bladder, as in other organs, this phenomenon is dependent on the balanced activity of proteolytic enzymes, including matrix metalloproteinases (MMPs) and their endogenous inhibitors, tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMPs). The imbalance between MMPs and TIMPs is a key regulator in ECM turnover. Since these mechanisms are unknown in the obstructed bladder, the objective of this study was to evaluate gene expression of collagen, MMPs and their inhibitors in patients with bladder outlet obstruction due to BPH. Material and Methods: We performed a prospective and controlled analysis of 43 patients with BOO due to BPH who underwent transurethral resection of the prostate (TURP) from 2011 to 2012. The control group was comprised of 10 bladder specimens from patients with < 60 years who underwent radical prostatectomy with an International Prostatic Symptom Score (IPSS) < 8 and prostate volume < 30 grams. All patients underwent urodynamic analysis pre and post operatively after 6 months. A biopsy of the bladder muscle was performed at the end of TURP for analysis of collagen, metalloproteinases and TIMPs gene expressions. For this purpose we used the quantitative real time polymerase chain reaction method (qRT-PCR). Results: All patients with BPH had confirmed BOO confirmed through urodynamic analysis (mean detrusor pressure at maximun flow 78.5 cmH2O and mean maximun flow 7.7 ml/s). MMP1 gene showed an important an overexpression in patients with BPH (median = 1.87). A similar phenomenon occurred in a lesser extent to MMP2, to which 13 of 23 subjects had under-expression (mean = 1.2). MMP9, TIMP1 and RECK were under-expressed in the majority of cases, while TIMP2, colagen I and III were over-expressed (1.5, 4.4 and 1.9x respectively) (figure). With regard to clinical and urodynamic characteristics we found that MMP2 was more over-expressed among patients with a low global IPSS (0.005) and without urgency (p=0.035). Colagen III was more over-expressed in patients with non-inhibited bladder contractions (p=0.049), RECK was more over-expressed in patients with a decreased complacence (p=0.049). The other genes showed no statistical correlation with any clinical or urodynamic characteristics. After 6 months of TURP, patients with non-inhibited bladder contractions showed resolution in 66.6% of cases, when had increased expression of two or more (> 02) MMPs in patients compared with 14.0% when only 01 MMP was increased (p = 0.038) Conclusions: BOO is related with an over-expression of MMP1, TIMP2, colagens I and III, and with an under-expression of MMP9, TIMP1 and RECK. Detrusor overactivity is related with higher collagen III expression, this fact may be due to a lower MMP1 expression. A lower global IPSS and no urgency were related to a higher expression of MMP2, sugesting that this gene may be inhibiting collagen deposition in the bladder. The increased expression of two or more MMPs isrelated to greater rates of resolution of non-inhibited bladder contractions