Orientador: Gisele Fabrino Machado / Banca:Daniela Bernadete Rozza / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Resumo: As neoplasias mamárias em gatas representam o terceiro tipo neoplásico mais frequente nesta espécie. A maioria destas neoplasias são malignas, e exibem alto potencial metastático. Devido a isto, e a escassez de trabalhos referentes ao prognóstico de gatas com câncer de mama, foram avaliados em 32 amostras de neoplasia mamária de gatas, a expressão imuno- histoquímica de alguns marcadores de prognóstico. As amostras foram segregadas em grupos seguindo os parâmetros de classificação da organização mundial de saúde em carcinomas tubulopapilares, cribriformes e sólidos e de acordo com o método de Nottighan modificado em graus I, II e III. Os cortes histológicos foram submetidos a processamento imuno-histoquímico para avaliação da expressão da metaloproteinase 9 (MMP-9), do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), da proteína de proliferação celular Ki- 67 e de linfócitos TCD3+, CD79+ e macrófagos, afim de se avaliar os diferentes padrões de classificação. Os resultados da marcação imuno- histoquímica foram avaliados com auxílio de um sistema de análise de imagem computadorizada para determinar a porcentagem da área imunomarcada. Em relação à classificação morfológica observou-se diferença significativa entre a densidade de linfócitos TCD3+ entre os grupos. Durante a análise nas amostras segregadas de acordo com a gradação histológica verificou-se diferença significativa entre a imunomarcação da MMP-9, entre a intensidade de infiltração de células TCD3+ e uma tendência de variação na proteína Ki-67. Observamos também correlação positiva entre os níveis de expressão da MMP-9 e da Ki-67, da MMP-9 e células TCD3, e da proteína Ki-67 com as células TCD3. Desta forma concluímos que classificação histológica dos carcinomas de mama em gatas não é um bom parâmetro para determinação do prognóstico da doença... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The mammary tumors in cats represent the third most common tumor type in the species. Most of these are malignant neoplasms exhibit a high metastatic potential. Because of this and the lack of studies regarding the prognosis for cats with breast cancer were evaluated 32 samples of breast cancer in cats. These samples were grouped according to morphological and histological classification, and the sections were submitted to immunohistochemical processing to evaluate the expression of metalloproteinase 9 (MMP-9), the vascular endothelial growth factor (VEGF) protein of cell proliferation Ki-67 and CD3 + T lymphocytes, and CD79 + macrophages in order to evaluate differences in the different grading standards. The results of immunohistochemical marking were evaluated by using a system of computerized image analysis to assess the percentage of area immunomarked. Regarding the morphological classification showed a significant difference between the amount of T lymphocytes CD3 + between the groups. During analysis the samples segregated according to histologic grading there was significant difference between the immunostaining of MMP-9, between the intensity of infiltration of T cells CD3 + and a tendency of variation in the Ki-67 protein. We also observed a positive correlation between the expression levels of MMP-9 and Ki-67, MMP-9 and TCD3 cells, and Ki-67 protein in cells T CD3+. Thus we conclude that histologic classification of breast carcinomas in cats is not a good parameter for determining the prognosis of the disease when evaluated together with the levels of immunohistochemical expression of MMP- 9, VEGF and Ki67. The best best parameters for determining the prognosis was observed when the histological grade was considered . The higher was the proliferative index determined by the positivity of Ki-67 protein from neoplastic cells, the greater... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

INTRODUÇÃO: O carcinoma espinocelular de origem bucal (CEC) apresenta uma alta taxa de mortalidade devido à invasividade das células tumorais. A migração celular, principal evento da invasão e metástase, pode ser regulada tanto por fatores intrínsecos, como adesão e contratilidade celular, quanto extrínsecos, como composição, densidade e remodelagem da matriz extracelular (MEC). OBJETIVO: Avaliar o papel de elementos intrínsecos e extrínsecos sobre o processo invasivo do carcinoma espinocelular de origem bucal. MÉTODOS: Foi realizada imuno-histoquímica para as proteínas: Miosina II (isoformas A, B e C), metaloproteinases de matriz (1, 2, 9 e 14); imunofluorescência as proteínas: e-caderina, n-caderina, FAK, paxilina, vinculina e fibronectina em amostras de CEC oral. Foi realizado ensaio de migração nas seguintes condições: 1 – matriz 2D com o substrato de fibronectina, ou laminina ou matrigel; 2 – matriz 3D com colágeno na presença ou não de fibronectina ou laminina; 3 – matriz 3D com diferentes concentrações de colágeno (0,6; 1,2 e 1,8 mg/ml) + fibronectina na presença ou não de um inibidor de MMP. Foi realizado análise de adesão celular utilizando-se o microscópio TIRF e o microscópio confocal, tanto em matrizes 2D quanto 3D. Foram realizados esferoides celulares para avaliar a contratilidade celular, através do plaqueamento das células em gel de agarose e a utilização de drogas que inibem ou que induzem a contratilidade, bem como a partir de células transfectadas com versões fosfomiméticas para a cadeia leve de miosina. Foi realizado ainda western blotting para proteínas: e-caderina, FAK, vinculina, paxilina, N-caderina, integrinas e as isoformas de miosina II, bem como foi avaliado os níveis de ativação das proteínas da família RhoGTPase, as quais estão envolvidas no controle da migração celular. RESULTADOS: A expressão das MMPs analisadas e das isoformas de miosinas foi maior nas zonas de invasão tumoral, sendo que o CEC oral também apresenta uma maior expressão de proteínas associadas à adesão com a MEC. A migração celular foi afetada pela densidade e a composição da MEC, bem como pela atividade das MMPs. Adicionalmente, a modulação das proteínas de adesão célula-matriz altera a velocidade de migração, a direcionalidade dessa migração e também a forma de migração, mudando de uma migração coletiva para uma migração individual. O aumento na contratilidade células resulta numa dispersão celular enquanto que a diminuição da contratilidade resulta numa melhor adesão célula – célula. CONCLUSÕES: O comportamento das células tumorais pode ser modulado através de fatores extrínsecos como, por exemplo, a alteração no microambiente tumoral, seja ela por mudança no substrato ou na densidade da matriz, e também dos fatores intrínsecos como a alteração nos níveis de miosina. / INTRODUCTION: Oral squamous cell carcinoma (OSCC) presents high mortality index due to the invasive phenotype of tumor cells. Cell migration is the main event in cell invasion and metastasis and it can be regulated by intrinsic factor, such as adhesion and cell contractility, and extrinsic factors, such as density and extracellular matrix (EMC) remodeling. OBJECTIVE: Analyze the role of intrinsic and extrinsic factor during the invasive process of oral squamous cell carcinoma. METHODS: We performed immunostaining in OSCC samples for the following proteins: myosin II (isoforms A, B and C), matrix metalloproteinase (1, 2, 9 and 14) e-cadherin, n-cadherin, FAK, paxillin, vinculin and fibronectin. We also performed migration assays with OSCC cell line in the following conditions 1 – 2D matrix with fibronectin or laminin or matrigel; 2 – 3D matrix with collagen in the presence or not of fibronectin or laminin; 3 – 3D matrix with different collagen concentration (0,6; 1,2 e 1,8 mg/ml) with fibronectin in the presence or not of the MMP inhibitor. In order to analyze cell adhesion, it was performed Total Internal Reflectance Fluorescence and Confocal microscopy, in 2D and 3D matrix. To analyze cell contractility, cells were plated in agarose gel in order to produce spheroids, which were treated with drugs that inhibit or induce cell contractility or cells were previously transfected with Myosin Light Chain phosphomimetics mutants. It was also performed western blotting to: e-cadherin, n-cadherin, FAK, paxillin, vinculin and myosin II isoforms, as well as it was analyze the levels in RhoGTPase family, which are involved in cell migration control. RESULTS: The expression to MMPs and myosin II isoforms were higher at invasion zone of the tumor, and the OSCC presented higher expression of proteins associated to adhesion to ECM. Cell migration was affected by the EMC composition and density and by MMP activity. Also, the modulation of cell-matrix adhesion proteins altered migration speed, cell directionality as well as influenced the switch between collective and single cell migration. The increase in cell contractility resulted in cell dispersion while the decrease in cell contractility resulted in a better cell-cell adhesion. CONCLUSIONS: The behavior of cell tumor can be modulate by extrinsic factors, for example, the change in tumor microenvironment, by the change in the EMC substrate or density and by intrinsic factors such as the alteration in myosin levels.

Os venenos de serpentes são complexas misturas com proteínas e peptídeos que apresentam uma variedade de atividades biológicas. Devido à riqueza de seus componentes, várias moléculas encontradas no veneno vêm sendo utilizadas com fins terapêuticos, como agentes anticoagulantes ou analgésicos. Recentemente, diversos estudos têm mostrado que substâncias oriundas do veneno de serpentes são eficazes agentes antitumorais tanto in vivo quanto in vitro. Os estudos referentes ao veneno de C. vegrandis são escassos, o que o torna um interessante objeto de investigação para o isolamento de possíveis biomoléculas com potencial antitumorigênico. No presente trabalho analisamos este veneno com o intuito de isolar novas toxinas com atividade antitumoral. Observamos atividade em varias frações que apresentaram imunoreatividade frente a um anticorpo anti-jararagina, sugerindo a presença de metaloproteinases que, sabidamente, apresentam atividade contra certos tipos de tumores. Pela análise de seqüenciamento de novo foram identificadas sequencias peptídicas idênticas as encontradas na espécie C.durissus durissus. Foi identificada também uma fração ativa de baixo peso molecular que acreditamos ser um análogo à crotoxina que já foi relatada neste veneno. / Snake venoms are complex mixtures with proteins and peptides that have a variety of biological activities. Due to the high diversity of its components, several molecules found in the venom have been used for therapeutic purposes, such as anticoagulants or analgesics. Recently, several studies have shown that substances derived from snake venom are effective antitumor agents both in vivo and in vitro. The studies on the venom of C. vegrandis are scarce, turning it into an interesting object of investigation for the isolation of new biomolecules with potential antitumour potential. In this paper we analyzed this venom in order to isolate new toxins with antitumor activity. Cytotoxicity was detected in various fractions, and the most active showed immunoreactivity against an anti-jararrhagin, suggesting the presence of metalloproteases. Some toxins from this class have already been shown to be active against certain types of tumors. We also identified a low molecular weight active fraction of believed to be analogous to a crotoxin has already been in this venom.

Submitted by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2017-04-05T13:00:34Z No. of bitstreams: 1 Ivo Vieira de Sousa Neto - Disserta????o 2017.pdf: 2737065 bytes, checksum: 1cd7648ac58e3666049799e60c295c9a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-05T13:00:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ivo Vieira de Sousa Neto - Disserta????o 2017.pdf: 2737065 bytes, checksum: 1cd7648ac58e3666049799e60c295c9a (MD5) Previous issue date: 2017-02-21 / Matrix metalloproteinases (MMPs) play an important physiological role in tissue remodeling. However, the effect of resistance training (RT) volume on MMP activity in different tissues and serum remains to be determined. Thus, the aim of the present study was to investigate the effects of different RT volume on MMP activity in skeletal muscle, visceral adipose tissue and in the circulation. Twenty-one four-month-old Wistar rats were randomly divided into three groups (n=7 per group): sedentary control (SC); RT with four ladder climbs (RT-4; 50%, 75%, 90% and 100% of their maximal carrying capacity) and TR with eight ladder climbs (RT-8 with two sets for each load). The eightweek RT consisted of climbing a 1.1-m vertical ladder with weights secured to the animals??? tails. MMP-2 and -9 activity were analyzed by zymography. RT-8 group displayed higher active MMP-2 activity as compared with SC and RT-4 in skeletal muscle (p < 0.05). There was no significant difference between groups for pro-MMP-2 and intermediate-MMP-2 activity in visceral adipose tissue, while RT-8 group presented lower active MMP-2 activity as compared with SC (p < 0.05). Plasma pro and active MMP-2 and MMP-9 activity was lower in RT-8 as compared with RT-4 (p < 0.05). These results suggest that higher volume RT is able to positively modulate the activity of MMPs in skeletal muscle (up-regulating), visceral adipose tissue and circulation (downregulating). These effects are important for the physiological and homeostatic functions of tissues. / As metaloproteinases de matriz (MMPs) desempenham papel fisiol??gico importante na remodela????o dos tecidos. Contudo, os efeitos do volume do treinamento de for??a (TF) sobre a atividade das MMPs em diferentes tecidos e na circula????o ainda precisam ser investigados. Portanto, o objetivo do presente estudo foi investigar os efeitos do TF em diferentes volumes sobre a atividade da MMPs no m??sculo esquel??tico, no tecido adiposo visceral e na circula????o. Vinte e um ratos Wistar de quatro meses de idade foram divididos aleatoriamente em tr??s grupos (n = 7 por grupo): controle sedent??rio (CS); TF com quatro escaladas (TF-4; 50%, 75%, 90% e 100% da capacidade de carga m??xima) e TF com oito escaladas (TF-8; com duas s??ries para cada carga). O TF de oito semanas consistiu em escalar uma escada vertical de 1,1 m com sobrecargas atadas ??s caudas dos animais. A atividade das MMP-2 e -9 foi analisada pela t??cnica de zimografia. TF-8 apresentou maior atividade da isoforma ativa da MMP-2 em compara????o com CS e TF-4 no m??sculo esquel??tico (p<0,05). N??o houve diferen??a significativa entre os grupos na atividade das isoformas pr?? e intermedi??ria da MMP-2 no tecido adiposo visceral; por outro lado, TF-8 apresentou menor atividade da isoforma ativa da MMP-2 quando comparado ao grupo CS (p<0,05). Em rela????o ??s isoformas pr?? e ativa da MMP-2 e MMP-9 na circula????o, TF-8 apresentou menor atividade em compara????o com TF-4 (p <0,05). Estes resultados sugerem que um maior volume de TF ?? capaz de modular, de forma positiva, a atividade da MMPs, principalmente a isoforma ativa da MMP-2 , tanto no m??sculo esquel??tico (aumentando) como no tecido adiposo visceral e circula????o (diminuindo), sendo estes efeitos importantes para as fun????es fisiol??gicas e homeost??ticas dos tecidos.

INTRODUÇÃO: O carcinoma espinocelular de origem bucal (CEC) apresenta uma alta taxa de mortalidade devido à invasividade das células tumorais. A migração celular, principal evento da invasão e metástase, pode ser regulada tanto por fatores intrínsecos, como adesão e contratilidade celular, quanto extrínsecos, como composição, densidade e remodelagem da matriz extracelular (MEC). OBJETIVO: Avaliar o papel de elementos intrínsecos e extrínsecos sobre o processo invasivo do carcinoma espinocelular de origem bucal. MÉTODOS: Foi realizada imuno-histoquímica para as proteínas: Miosina II (isoformas A, B e C), metaloproteinases de matriz (1, 2, 9 e 14); imunofluorescência as proteínas: e-caderina, n-caderina, FAK, paxilina, vinculina e fibronectina em amostras de CEC oral. Foi realizado ensaio de migração nas seguintes condições: 1 – matriz 2D com o substrato de fibronectina, ou laminina ou matrigel; 2 – matriz 3D com colágeno na presença ou não de fibronectina ou laminina; 3 – matriz 3D com diferentes concentrações de colágeno (0,6; 1,2 e 1,8 mg/ml) + fibronectina na presença ou não de um inibidor de MMP. Foi realizado análise de adesão celular utilizando-se o microscópio TIRF e o microscópio confocal, tanto em matrizes 2D quanto 3D. Foram realizados esferoides celulares para avaliar a contratilidade celular, através do plaqueamento das células em gel de agarose e a utilização de drogas que inibem ou que induzem a contratilidade, bem como a partir de células transfectadas com versões fosfomiméticas para a cadeia leve de miosina. Foi realizado ainda western blotting para proteínas: e-caderina, FAK, vinculina, paxilina, N-caderina, integrinas e as isoformas de miosina II, bem como foi avaliado os níveis de ativação das proteínas da família RhoGTPase, as quais estão envolvidas no controle da migração celular. RESULTADOS: A expressão das MMPs analisadas e das isoformas de miosinas foi maior nas zonas de invasão tumoral, sendo que o CEC oral também apresenta uma maior expressão de proteínas associadas à adesão com a MEC. A migração celular foi afetada pela densidade e a composição da MEC, bem como pela atividade das MMPs. Adicionalmente, a modulação das proteínas de adesão célula-matriz altera a velocidade de migração, a direcionalidade dessa migração e também a forma de migração, mudando de uma migração coletiva para uma migração individual. O aumento na contratilidade células resulta numa dispersão celular enquanto que a diminuição da contratilidade resulta numa melhor adesão célula – célula. CONCLUSÕES: O comportamento das células tumorais pode ser modulado através de fatores extrínsecos como, por exemplo, a alteração no microambiente tumoral, seja ela por mudança no substrato ou na densidade da matriz, e também dos fatores intrínsecos como a alteração nos níveis de miosina. / INTRODUCTION: Oral squamous cell carcinoma (OSCC) presents high mortality index due to the invasive phenotype of tumor cells. Cell migration is the main event in cell invasion and metastasis and it can be regulated by intrinsic factor, such as adhesion and cell contractility, and extrinsic factors, such as density and extracellular matrix (EMC) remodeling. OBJECTIVE: Analyze the role of intrinsic and extrinsic factor during the invasive process of oral squamous cell carcinoma. METHODS: We performed immunostaining in OSCC samples for the following proteins: myosin II (isoforms A, B and C), matrix metalloproteinase (1, 2, 9 and 14) e-cadherin, n-cadherin, FAK, paxillin, vinculin and fibronectin. We also performed migration assays with OSCC cell line in the following conditions 1 – 2D matrix with fibronectin or laminin or matrigel; 2 – 3D matrix with collagen in the presence or not of fibronectin or laminin; 3 – 3D matrix with different collagen concentration (0,6; 1,2 e 1,8 mg/ml) with fibronectin in the presence or not of the MMP inhibitor. In order to analyze cell adhesion, it was performed Total Internal Reflectance Fluorescence and Confocal microscopy, in 2D and 3D matrix. To analyze cell contractility, cells were plated in agarose gel in order to produce spheroids, which were treated with drugs that inhibit or induce cell contractility or cells were previously transfected with Myosin Light Chain phosphomimetics mutants. It was also performed western blotting to: e-cadherin, n-cadherin, FAK, paxillin, vinculin and myosin II isoforms, as well as it was analyze the levels in RhoGTPase family, which are involved in cell migration control. RESULTS: The expression to MMPs and myosin II isoforms were higher at invasion zone of the tumor, and the OSCC presented higher expression of proteins associated to adhesion to ECM. Cell migration was affected by the EMC composition and density and by MMP activity. Also, the modulation of cell-matrix adhesion proteins altered migration speed, cell directionality as well as influenced the switch between collective and single cell migration. The increase in cell contractility resulted in cell dispersion while the decrease in cell contractility resulted in a better cell-cell adhesion. CONCLUSIONS: The behavior of cell tumor can be modulate by extrinsic factors, for example, the change in tumor microenvironment, by the change in the EMC substrate or density and by intrinsic factors such as the alteration in myosin levels.

INTRODUÇÃO: O carcinoma espinocelular de origem bucal (CEC) apresenta uma alta taxa de mortalidade devido à invasividade das células tumorais. A migração celular, principal evento da invasão e metástase, pode ser regulada tanto por fatores intrínsecos, como adesão e contratilidade celular, quanto extrínsecos, como composição, densidade e remodelagem da matriz extracelular (MEC). OBJETIVO: Avaliar o papel de elementos intrínsecos e extrínsecos sobre o processo invasivo do carcinoma espinocelular de origem bucal. MÉTODOS: Foi realizada imuno-histoquímica para as proteínas: Miosina II (isoformas A, B e C), metaloproteinases de matriz (1, 2, 9 e 14); imunofluorescência as proteínas: e-caderina, n-caderina, FAK, paxilina, vinculina e fibronectina em amostras de CEC oral. Foi realizado ensaio de migração nas seguintes condições: 1 – matriz 2D com o substrato de fibronectina, ou laminina ou matrigel; 2 – matriz 3D com colágeno na presença ou não de fibronectina ou laminina; 3 – matriz 3D com diferentes concentrações de colágeno (0,6; 1,2 e 1,8 mg/ml) + fibronectina na presença ou não de um inibidor de MMP. Foi realizado análise de adesão celular utilizando-se o microscópio TIRF e o microscópio confocal, tanto em matrizes 2D quanto 3D. Foram realizados esferoides celulares para avaliar a contratilidade celular, através do plaqueamento das células em gel de agarose e a utilização de drogas que inibem ou que induzem a contratilidade, bem como a partir de células transfectadas com versões fosfomiméticas para a cadeia leve de miosina. Foi realizado ainda western blotting para proteínas: e-caderina, FAK, vinculina, paxilina, N-caderina, integrinas e as isoformas de miosina II, bem como foi avaliado os níveis de ativação das proteínas da família RhoGTPase, as quais estão envolvidas no controle da migração celular. RESULTADOS: A expressão das MMPs analisadas e das isoformas de miosinas foi maior nas zonas de invasão tumoral, sendo que o CEC oral também apresenta uma maior expressão de proteínas associadas à adesão com a MEC. A migração celular foi afetada pela densidade e a composição da MEC, bem como pela atividade das MMPs. Adicionalmente, a modulação das proteínas de adesão célula-matriz altera a velocidade de migração, a direcionalidade dessa migração e também a forma de migração, mudando de uma migração coletiva para uma migração individual. O aumento na contratilidade células resulta numa dispersão celular enquanto que a diminuição da contratilidade resulta numa melhor adesão célula – célula. CONCLUSÕES: O comportamento das células tumorais pode ser modulado através de fatores extrínsecos como, por exemplo, a alteração no microambiente tumoral, seja ela por mudança no substrato ou na densidade da matriz, e também dos fatores intrínsecos como a alteração nos níveis de miosina. / INTRODUCTION: Oral squamous cell carcinoma (OSCC) presents high mortality index due to the invasive phenotype of tumor cells. Cell migration is the main event in cell invasion and metastasis and it can be regulated by intrinsic factor, such as adhesion and cell contractility, and extrinsic factors, such as density and extracellular matrix (EMC) remodeling. OBJECTIVE: Analyze the role of intrinsic and extrinsic factor during the invasive process of oral squamous cell carcinoma. METHODS: We performed immunostaining in OSCC samples for the following proteins: myosin II (isoforms A, B and C), matrix metalloproteinase (1, 2, 9 and 14) e-cadherin, n-cadherin, FAK, paxillin, vinculin and fibronectin. We also performed migration assays with OSCC cell line in the following conditions 1 – 2D matrix with fibronectin or laminin or matrigel; 2 – 3D matrix with collagen in the presence or not of fibronectin or laminin; 3 – 3D matrix with different collagen concentration (0,6; 1,2 e 1,8 mg/ml) with fibronectin in the presence or not of the MMP inhibitor. In order to analyze cell adhesion, it was performed Total Internal Reflectance Fluorescence and Confocal microscopy, in 2D and 3D matrix. To analyze cell contractility, cells were plated in agarose gel in order to produce spheroids, which were treated with drugs that inhibit or induce cell contractility or cells were previously transfected with Myosin Light Chain phosphomimetics mutants. It was also performed western blotting to: e-cadherin, n-cadherin, FAK, paxillin, vinculin and myosin II isoforms, as well as it was analyze the levels in RhoGTPase family, which are involved in cell migration control. RESULTS: The expression to MMPs and myosin II isoforms were higher at invasion zone of the tumor, and the OSCC presented higher expression of proteins associated to adhesion to ECM. Cell migration was affected by the EMC composition and density and by MMP activity. Also, the modulation of cell-matrix adhesion proteins altered migration speed, cell directionality as well as influenced the switch between collective and single cell migration. The increase in cell contractility resulted in cell dispersion while the decrease in cell contractility resulted in a better cell-cell adhesion. CONCLUSIONS: The behavior of cell tumor can be modulate by extrinsic factors, for example, the change in tumor microenvironment, by the change in the EMC substrate or density and by intrinsic factors such as the alteration in myosin levels.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:18:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2857.pdf: 11303199 bytes, checksum: e1e51cdf6acc5b01445639c49dd0e72d (MD5) Previous issue date: 2010-03-17 / Universidade Federal de Minas Gerais / Peripheral nerves are frequently target of traumatic injuries and their functional recovery is generally incomplete. The aim of the present study was to evaluate the effects of 660 or 780 nm low-level laser therapy (LLLT) GaAlAs using different energy densities (10, 60 and 120 J/cm2) on nerve sciatic recovery after severe (neurotmesis) or moderate (axonotmesis) injuries in rat. One hundred and twenty eight Wistar male rats (275g) were divided into 16 groups, and they were performed as follow: For axonotmesis: Normal (N); axonotmesis (CR); axonotmesis and 660 nm LLLT with 10 J/cm2 irradiation (CR660 10J); CR660 60J; CR660 120J; CR780 10J; CR780 60J; CR780 120J. For neurotmesis: N; neurotmesis (TT); TT660 10J; TT660 60J; TT660 120J; TT780 10J; TT780 60J; TT780 120J. The LLLT irradiation was performed using a fix potence of 40 mW and a spot area of 4 mm2. Nerves submitted to axonotmesis or neurotmesis were irradiated with LLLT daily during 10 consecutive days starting on the first post-operatory. However, neurotmesis groups received additionally one month of LLLT applied every other day. Tibialis anterior (TA) muscles and sciatic nerve were evaluated 28 (axonotmesis) and 84 (neurotmesis) after surgery. The follow analyses were performed: muscle fiber, axon, myelin and nerve fiber cross-sectional area (CSA); matrix metalloproteinases (MMP) 2 and 9 activities; sciatic functional index; S-100 immunofluorescence. Data were submitted to homogeneity and normality tests. Anova one-way followed by Tukey tests and Kruskal-Wallis followed by Newman-Keuls tests were performed when data was parametric or non-parametric, respectively. Significance level was set at 5%. The results of the present study showed that groups irradiated with 660 nm LLLT with 10 or 60 J/cm2, and 780 nm 10 or 120 J/cm2 showed normal values of nerve fiber and myelin CSA. The 660 nm LLLT, regardless the energy density used, accelerated muscle fiber recovery and increased the MMP-2 activity in nerve. Furthermore, it also decreased the MMP-9 and MMP-2 activities in nerves and muscles respectively. All axotomized animals recovery normal levels of function on the 28 day after surgery. Regarding neurotmesis groups, TT660 120J presented higher values of myelin and nerve fiber CSA compared to TT. Superior values of muscle fiber CSA were observed in TT660 60 e 120J e TT780 10J compared to TT. These LLLT parameters were also efficient to decrease MMP-2 activity in TA muscles. All groups submitted to neurotmesis did not recover normal function after 84 days of injury. Based on the proposed objective, it is possible to conclude that LLLT, considering specific protocols vi of application, recovered nerves effectively, avoided muscle fiber atrophy and acted on the muscle and nerve extracellular matrix remodeling via MMPs regulation. / O objetivo do estudo foi analisar a ação dos lasers de baixa intensidade (GaAlAs) com diferentes comprimentos de ondas (660 e 780 nm), em diferentes densidades de energia (10 J/cm², 60 J/cm² e 120 J/cm2) na regeneração do nervo ciático do rato após lesões moderadas (axoniotmese) e graves (neurotmese). Para tal, 128 ratos Wistar (275 g) foram divididos em 16 grupos: Para axoniotmese: Normal (N); axoniotmese (CR); axoniotmese irradiado com laser 660 nm com 10 J/cm2 (CR660 10J); CR660 60J; CR660 120J; CR780 10J; CR780 60J; CR780 120J. Para neurotmese: N; neurotmese (TT); TT660 10J; TT660 60J; TT660 120J; TT780 10J; TT780 60J; TT780 120J. A estimulação a laser foi realizada com potência fixa de 40 mW e área do feixe de 4,0 mm2. O laser foi aplicado durante 10 dias consecutivos, a partir do primeiro dia do pós-operatório nos nervos com axoniotmese e neurotmese. Entretanto, para os grupos neurotmese foi acrescido de mais um mês de aplicação em dias alternados. Os músculos tibiais anteriores (TA) e os nervos ciáticos foram avaliados após 28 (axoniotmese) e 84 dias (neurotmese) após a cirurgia. Para investigar a área de secção transversa (AST) das fibras musculares, axônios, mielina e fibra nervosa; número de fibras nervosas foi feita morfometria. A atividade das metaloproteinases de matriz (MMPs) 2 e 9 foi realizada para observar o remodelamento da matriz. O índice funcional do nervo ciático foi para avaliar a função. A imunoflorescência com anticorpo S-100 foi utilizada para a observar a bainha de mielina e células de Schwann. Os dados foram submetidos a testes de homogeneidade e normalidade. Os testes Anova one-way seguido por Tukey e Kruskal-Wallis seguido por Newman-Keuls foram usados em amostras paramétricas e não paramétricas, respectivamente. Um nível de significância de 5% foi adotado. Os resultados deste estudo mostram que os grupos axoniotmese irradiados com lasers 660 nm 10 e 60 J/cm2, 780 nm 10 e 120 J/cm2 apresentaram AST da fibra nervosa e da mielina semelhante aos valores normais. O laser 660 nm, independente da densidade de energia utilizada, acelerou a recuperação da atrofia muscular e aumentou a atividade da MMP-2 nos nervos ciáticos dos grupos axoniotmese. Ele também reduziu a atividade da MMP-9 nos nervos e da MMP-2 nos músculos. Todos os animais submetidos à axoniotmese recuperaram a função normal após 28 dias de lesão. Em relação aos grupos neurotmese, foram observados valores superiores de AST da bainha de mielina e de fibra nervosa no grupo TT660 120J comparado ao TT. Valores de AST das fibras musculares foram superiores ao TT nos grupos TT660 60 e 120J e TT780 10J. Estes parâmetros de laser também foram eficientes em promover a diminuição da atividade de MMP-2 nos músculos TA. Todos os grupos submetidos à neurotmese não recuperaram totalmente a função após 84 dias de lesão. Com base no objetivo proposto podemos concluir que a laserterapia, em determinados protocolos de aplicação, mostrou-se efetiva na recuperação do nervo, evitou a atrofia do muscular e atuou no remodelamento da matriz extracelular do músculo e do nervo periférico via regulação das MMPs.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:01Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-12-15Bitstream added on 2014-06-13T19:03:54Z : No. of bitstreams: 1 elias_gp_dr_araca.pdf: 1560641 bytes, checksum: 3dad8c2298005cfeb8d0a078880f5e66 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade das glândulas salivares, a mineralização dental e a participação da metaloproteinase de matriz (MMP-9) nesta mineralização em filhotes de ratas espontaneamente hipertensas (SHR) tratadas ou não com atenolol. Ratas SHR e normotensas Wistar foram tratadas com atenolol (100mg/Kg/dia, via oral) durante os períodos de prenhez e lactação. Os grupos controle receberam o mesmo volume de água sem atenolol. O fluxo salivar, induzido por nitrato de pilocarpina, a concentração de proteínas (método de Lowry), a atividade da amilase (método cinético a 405 nm), o peso das glândulas salivares (parótidas, submandibulares e sublinguais), a microdureza do esmalte e da dentina de incisivos e molares e a expressão da MMP-9 (imonuperoxidase) no tecido dental foram comparados entre filhotes de ratas SHR e Wistar tratadas ou não com atenolol. Os resultados obtidos foram submetidos ao teste estatístico mais adequado, paramétrico (ANOVA ou test t de Student’s) ou não paramétrico (Kruskal-Wallis), sendo consideradas significativas as diferenças quando p<0,05. Filhotes SHR apresentaram menor fluxo salivar e concentração de proteínas do que filhotes Wistar, mas a atividade da amilase não foi diferente entre os grupos. O peso das glândulas salivares foi semelhante entre filhotes SHR e Wistar... / The objective of the present study was analyzed the salivary activity, the dental mineralization and the role of matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) on this mineralization, in pups (30 days) of spontaneously hypertensive rats (SHR) treated, or not treated, with atenolol. Female SHR and normotensive Wistar rats were treated during pregnancy and lactation periods with Atenolol 100mg/Kg/day by oral administration. For the control group, the animals received the same water volume without the drug. The salivary flow rate (stimulated by pilocarpine injection), the protein concentration (Lowry method), salivary amylase activity (kinetic method at 405 nm), the weight of salivary glands (parotid, submandibular and sublingual), the enamel and dentin microhardness of incisors and molars teeth and the matrix metalloproteinase-9 (MMP-9, gelatinase B) localization (imunoperoxidase) in dental tissue were compared between SHR and Wistar pups of female rats treated or not with atenolol. The results were analyzed by parametric (ANOVA or Student s tests) or non-parametric (Kruskal-Wallis) tests (p<0,05). The salivary flow rate and salivary protein concentration were reduced in SHR pups. There was no alteration in amylase activity between groups. The salivary glands weight was not different between SHR and Wistar pups either. Decreased enamel and dentin microhardness were observed in incisors and molar teeth of SHR pups. No alterations in MMP-9 positive staining were observed in predentin and odontoblasts of both groups, however the density of stained ameloblasts cells and external enamel surface were higher in incisors teeth of SHR pups. Atenolol-treated SHR and Wistar rats pups showed decrease in submandibular gland weight, in saliva s flow rate and protein concentration, but no alteration in amylase activity. Atenolol increased enamel and dentin microhardness of incisors teeth of SHR and...(Complete abstract, click electronic address below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-28Bitstream added on 2014-06-13T18:56:32Z : No. of bitstreams: 1 lima_tb_me_jabo.pdf: 771997 bytes, checksum: 40a70c69fd98451018e80c0fa212d383 (MD5) / Estudaram-se os efeitos do cetorolaco de trometamina à 0,5%, sem conservante, quanto ao tempo de epitelização, a alterações clínicas, histológicas (HE), sobre expressão da Óxido Nítrico Sintase induzível (iNOS) e da Metaloproteinase-9 (MMP-9) na ceratite ulcerativa causada por álcali em coelho. Doze olhos foram tratados (GT) com o fármaco e outros 12 com solução salina (GC), imediatamente à ocorrência das úlceras e a cada 6 horas. Decorridas 24h, seis córneas (n=6) de cada grupo foram colhidas (primeiro momento). As demais (n=6), o foram após a reepitelização (segundo momento). Em ambos os momentos, avaliaram-se o infiltrado inflamatório e as condições do epitélio neoformado (HE). Por imunoistoquímica, a imunomarcação de iNOS e de MMP-9 foi avaliada. A média do tempo de epitelização no GT foi de 55 horas. No GC, ele foi de 44 horas (p<0,05). Às 24 h, as córneas do GT apresentaram menor exsudação inflamatória (p<0,01), comparativamente ao GC. No segundo momento, o GT mostrou discreta exsudação inflamatória (p>0,05) e camada epitelial simples. O GC mostrou maior estratificação no epitélio neoformado. A média de imunomarcação de iNOS em células do estroma foi maior em GT, no primeiro e segundo momentos, comparativamente a GC (p>0.05). No segundo momento, a região central expressou mais iNOS, comparativamente à periférica, tanto em GT (p<0,01), quanto em GC (p<0,05). No epitélio, não se observaram diferenças significativas dos escores de imunomarcação de iNOS entre os grupos e os momentos (p=0.69). Os escores de imunomarcação para MMP-9, no epitélio, foram menores em GT, comparativamente a GC (p=0,69). A média de imunomarcação de MMP-9 em células do estroma, no segundo momento, foi maior na região central, comparativamente à periférica (p=0.32). Não houve correlação entre a... / We studied the effects of ketorolac tromethamine at 0.5% without preservative, about the time of epithelialization, the clinical, histological (HE) on the expression of inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) and metalloproteinase-9 (MMP -9) in ulcerative keratitis in rabbits caused by alkali. Twelve eyes were treated (GT) to the drug and 12 with saline (GC), immediately to the occurrence of ulcers and every 6 hours. After 24h, six corneas (n = 6) of each group were harvested (first moment). The other (n = 6), were after reepithelialization (second time). In both instances, we evaluated the inflammatory infiltrate and conditions of the newly formed epithelium (HE). For immunohistochemistry, immunostaining of iNOS and MMP-9 was assessed. The average time of epithelialization in GT was 55 hours. In the GC, it was 44 hours (p <0.05). At 24 h, the corneas of GT showed lower inflammatory exudation (p <0.01) compared to the CG. In the second phase, the GT revealed mild inflammatory exudation (p> 0.05) and simple epithelial layer. The GC showed greater stratification in the newly formed epithelium. The average immunostaining of iNOS in stromal cells was higher in GT, the first and second moments compared to control group (p> 0.05). In the second step, the central region expressed more iNOS compared to peripheral in both TG (p <0.01) and in control group (p <0.05). In the epithelium, there were no significant differences in scores of iNOS immunostaining between groups and time (p = 0.69). The scores of immunostaining for MMP-9 in the epithelium were lower in GT compared to GC (p = 0.69). The average immunostaining of MMP-9 in stromal cells, the second time was greater in the central region as compared to the peripheral (p = 0.32). There was no correlation between the immunostaining of iNOS and MMP-9 as well as the quantity... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-01-19Bitstream added on 2014-06-13T20:50:08Z : No. of bitstreams: 1 schweigert_a_me_araca.pdf: 714062 bytes, checksum: 9d2cbde1f9ebd958c778197ccd0452e5 (MD5) / As neoplasias mamárias em gatas representam o terceiro tipo neoplásico mais frequente nesta espécie. A maioria destas neoplasias são malignas, e exibem alto potencial metastático. Devido a isto, e a escassez de trabalhos referentes ao prognóstico de gatas com câncer de mama, foram avaliados em 32 amostras de neoplasia mamária de gatas, a expressão imuno- histoquímica de alguns marcadores de prognóstico. As amostras foram segregadas em grupos seguindo os parâmetros de classificação da organização mundial de saúde em carcinomas tubulopapilares, cribriformes e sólidos e de acordo com o método de Nottighan modificado em graus I, II e III. Os cortes histológicos foram submetidos a processamento imuno-histoquímico para avaliação da expressão da metaloproteinase 9 (MMP-9), do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), da proteína de proliferação celular Ki- 67 e de linfócitos TCD3+, CD79+ e macrófagos, afim de se avaliar os diferentes padrões de classificação. Os resultados da marcação imuno- histoquímica foram avaliados com auxílio de um sistema de análise de imagem computadorizada para determinar a porcentagem da área imunomarcada. Em relação à classificação morfológica observou-se diferença significativa entre a densidade de linfócitos TCD3+ entre os grupos. Durante a análise nas amostras segregadas de acordo com a gradação histológica verificou-se diferença significativa entre a imunomarcação da MMP-9, entre a intensidade de infiltração de células TCD3+ e uma tendência de variação na proteína Ki-67. Observamos também correlação positiva entre os níveis de expressão da MMP-9 e da Ki-67, da MMP-9 e células TCD3, e da proteína Ki-67 com as células TCD3. Desta forma concluímos que classificação histológica dos carcinomas de mama em gatas não é um bom parâmetro para determinação do prognóstico da doença... / The mammary tumors in cats represent the third most common tumor type in the species. Most of these are malignant neoplasms exhibit a high metastatic potential. Because of this and the lack of studies regarding the prognosis for cats with breast cancer were evaluated 32 samples of breast cancer in cats. These samples were grouped according to morphological and histological classification, and the sections were submitted to immunohistochemical processing to evaluate the expression of metalloproteinase 9 (MMP-9), the vascular endothelial growth factor (VEGF) protein of cell proliferation Ki-67 and CD3 + T lymphocytes, and CD79 + macrophages in order to evaluate differences in the different grading standards. The results of immunohistochemical marking were evaluated by using a system of computerized image analysis to assess the percentage of area immunomarked. Regarding the morphological classification showed a significant difference between the amount of T lymphocytes CD3 + between the groups. During analysis the samples segregated according to histologic grading there was significant difference between the immunostaining of MMP-9, between the intensity of infiltration of T cells CD3 + and a tendency of variation in the Ki-67 protein. We also observed a positive correlation between the expression levels of MMP-9 and Ki-67, MMP-9 and TCD3 cells, and Ki-67 protein in cells T CD3+. Thus we conclude that histologic classification of breast carcinomas in cats is not a good parameter for determining the prognosis of the disease when evaluated together with the levels of immunohistochemical expression of MMP- 9, VEGF and Ki67. The best best parameters for determining the prognosis was observed when the histological grade was considered . The higher was the proliferative index determined by the positivity of Ki-67 protein from neoplastic cells, the greater... (Complete abstract click electronic access below)