Orientador: Maria Cristina Cintra Gomes Marcondes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-19T11:39:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_AndreGustavode_M.pdf: 2220744 bytes, checksum: ad8fc9b9eb42ef7af7f4733b165e19b0 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: O crescimento do câncer promove o desenvolvimento de caquexia em função de intensa espoliação de nutrientes, principalmente, de gordura e proteína corpórea total. A via de sinalização da mTOR controla o crescimento celular e alguns estudos apontam que a inibição dessa via por metformina (M) pode diminuir a taxa de desenvolvimento tumoral. Desse modo, o presente estudo avaliou os efeitos da administração de metformina associada à dieta rica em leucina (L), em animais com tumor de Walker 256 (W), sobre o metabolismo protéico muscular, na hipótese de melhorar o estado caquético. Ratos Wistar jovens foram distribuídos em oito grupos, de acordo com a presença ou não de tumor, tratamento com metformina (36 mg x Kg-1) e/ou dieta rica em leucina (dieta com excesso de 3%). Foram analisados parâmetros somáticos e bioquímicos bem como vias de sinalização celular no músculo gastrocnêmico. No grupo W, o crescimento tumoral induziu perda de 20% da massa corpórea; proporcionou redução de 70% na massa gorda, alem da diminuição da concentração sérica de glicose, de proteínas totais e albumina. As concentrações de GH e IGF-1 foram reduzidas, porém a concentração de ACTH foi elevada em todos os grupos com tumor. Os grupos portadores de tumor tiveram maiores taxas de degradação protéica muscular, embora as taxas de síntese não tenham sido alteradas. A suplementação com leucina estimulou a síntese protéica nos animais não portadores de tumor, e os resultados sugerem que esse efeito tenha sido via Akt ou Erk, enquanto que a metformina estimulou a sinalização via IRS-1, levando à ativação de Erk. A evolução tumoral promoveu espoliação da massa protéica e modulação dos processos de síntese protéica, através da inibição da Erk e IRS-1. A suplementação com leucina foi capaz de estimular a síntese protéica nos animais não portadores de tumor, porém o tratamento com metformina não foi eficaz em diminuir o crescimento das células tumorais, provavelmente em função da baixa concentração que foi administrada aos animais / Abstract: Tumour growth induces cachexia by intense nutrient waste, characterized by involuntary host weight loss, mainly depleting the total body protein and fat. mTOR signaling pathway controls the cell growth regulating translation of mRNA, and the inhibition of this pathway by compounds such as metformin (M) could decrease tumour growth rate. Knowing these facts, the aim of this study was to evaluate metformin effects associated to leucine-rich diet in Walker 256 (W) tumour-bearing animals, on muscle protein metabolism, trying to improve the cachectic state. Young male Wistar rats were distributed into 8 groups, according to the tumour implant, the treatment with metformin (36 mg x kg-1) and/or leucine-rich diet (3% leucine). After the sacrifice of the animals we evaluated some somatic and biochemical parameters as well as the muscle cell signaling pathways.. Tumour growth promotes 20%reduction of body mass and 70% of fat mass. Glucose serum was 50% decreased and also the total serum proteins (20% less) and albumin (25% reduced). GH and IGF-1 concentrations were decreased in all tumour-bearing groups, while ACTH concentration was increased. Tumour-bearing groups had higher protein degradation rates while protein synthesis rates were not changed, showing decreased protein turnover. Leucine rich-diet stimulated protein synthesis in non-tumour-bearing groups and these results suggest that this effect was through Akt or Erk pathways and metformin stimulated signaling through IRS-1, leading to Erk activation. Tumour growth promoted lean body mass spoliation and modulated protein synthesis through Erk and IRS-1 inhibition. Leucine-rich diet was able to stimulate protein synthesis in non tumour-bearing animals, although the treatment with metformina was not thus effective in decreasing tumour's cells growth, probably by low dose concentration / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Antonio Ari Gonçalves / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T15:30:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Costa_EuniceCristinadaSilva_D.pdf: 2678840 bytes, checksum: 439eb1d320bc5d4828c77cb0e086e763 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Objetivos: Metformina e glibenclamida são fármacos utilizados para diminuir a glicemia de diabéticos tipo 2. Metformina reduz a absorção gastrintestinal de glicose e a gliconeogênese hepática e aumenta a captação de glicose periférica. Por sua vez, glibenclamida aumenta a liberação de insulina após bloquear canais de K+. Apesar destes efeitos, metformina em altas concentrações e glibenclamida podem influenciar o sistema cardiovascular e acelerar a progressão de doenças vasculares, predispondo o coração à falência cardíaca ou infarto. Estas e outras mudanças fisiológicas podem ser associadas a um ECG anormal, mostrando aumento do intervalo QT e de sua dispersão (QTd). Estas mudanças podem ser associadas a um baixo limiar para arritmias ventriculares e provocar morte súbita durante isquemia. Neste estudo avaliamos os efeitos do tratamento com metformina e/ou glibenclamida em ratos diabéticos por aloxana sobre os intervalos do ECG: QT e suas derivadas QTc, QTd, e QTcd. Em outra série experimental avaliamos a pressão desenvolvida pelo ventrículo esquerdo (LVP) e as suas derivadas (DP/Dt+ e DP/Dt-), usando a preparação de Langendorff utilizando coração isolado de ratos diabéticos. A isquemia foi provocada pela perfusão (1 h) com noradrenalina (NE). Além disso, o glicogênio foi medido em coração de ratos antes e após perfusão com noradrenalina. As alterações histológicas no ventrículo também foram estudadas. Métodos: Ratos Wistar machos, diabéticos por aloxana, foram tratados com metformina (3,5, 30 e 74 mg.g-1 de peso corporal ¿ p.c) ou glibenclamida (0,10 mg/g-1 p.c) e/ou glibenclamida e metformina (0,10 + 3,5 mg.g-1 p.c), simultaneamente durante 30 dias. O ECG foi registrado no 15o e 30o dia de tratamento. No 30º dia, sob anestesia, o coração foi isolado e perfundido com solução de Krebs-Henseleit em um aparelho de Langendorff. A isquemia foi induzida com noradrenalina 10-6 M (2 ml.min-1.g-1) mantida durante 1 h na solução perfusora. O glicogênio tecidual (mg.100.mg-1) foi extraído de fragmentos de ventrículo de ratos em repouso ou após a perfusão. O glicogênio foi medido pelo método do fenol sulfúrico. Em outros grupos de ratos, preparados de modo idêntico, os corações foram removidos sob anestesia e fixados em formoldeído em tampão PBS. Secções de ventrículo foram preparadas depois de embebidas em parafina e em seguida, os cortes foram fixados em lâminas e corados pelo método hematoxilina eosina (HE). O ensaio do glicogênio ventricular foi feito usando o método ácido de Schiff. Os núcleos foram contados e as suas áreas foram medidas (mm2). Os grânulos de glicogênio foram detectados pela coloração violeta do citoplasma, usando o método de schiff (PAS positivo) e fotografados. Resultados: Após 15 e 30 dias, a glicemia, o intervalo QT e as suas derivadas aumentaram nos ratos diabéticos. Após 30 dias, a glicemia diminuiu em ratos diabéticos que foram tratados com doses baixa ou intermediária de metformina (3,5 e 30 mg.g-1 p.c.), ou com glibenclamida e com a combinação glibenclamida + metformina (3,5 mg.g-1 p.c.). Entretanto, o grupo tratado com a dose mais alta de metformina (74 mg.g-1 p.c) não teve a sua glicemia diminuída. Por outro lado, nos ratos tratados com doses: baixa ou intermediária de metformina os intervalos do ECG: QTc, QTd e QTcd foram reduzidos, em relação ao grupo diabético tratado com a maior dose de metformina. Estes resultados também produziram melhores efeitos em comparação aos grupos diabéticos tratados com glibenclamida e nos grupos tratados com a associação glibenclamida e metformina. Doses baixas, intermediárias e altas (3,5, 30 e 74 mg.g-1 p.c.) de metformina aumentou o armazenamento de glicogênio no ventrículo de ratos diabéticos de 0,19 ± 0,007 (controle) para 0,38 ± 0,007 mg.100 mg-1, 0,5 ± 0,05 mg.100 mg-1 e 0,7 ± 0,04 mg.100 mg-1 (p< 0,05), respectivamente. Quanto à pressão sistólica ventricular, houve rápido aumento da pressão logo no inicio da perfusão com NE no grupo controle, com pico de pressão a 145 ± 9,7 mmHg), seguido de lenta queda até 99 ± 3 mmHg. Esta tendência foi observada também nas derivadas DP/Dt+ e DP/Dt-. Metformina (3,5 e 30 mg.g-1 p.c) e glibenclamida isoladamente ou em associação com metformina protegeram o músculo cardíaco durante a isquemia, não diferindo do grupo controle. Contudo, ratos diabéticos não tratados ou tratados com a maior dose de metformina, desenvolveram pressão sistólica máxima inferior a todos os grupos experimentais, revertendo aos níveis basais mais rapidamente que nos demais grupos. As derivadas DP/Dt+ e DP/Dt- mostraram curvas semelhantes. Após a isquemia, o glicogênio diminuiu em todos os grupos, sendo 0,09 ± 0,007 no grupo controle; 0,1 ± 0,006 nos diabéticos e 0,6 ± 0,005 nos diabéticos tratados com 74 mg.g-1 pc de metformina. O tratamento com glibenclamida e/ou metformina diminuiu o estoque de glicogênio de 0,62 ± 0,05 mg.100 mg-1 para 0,19 ± 0,05 mg.100 mg-1 e de 0,74 ± 0,03 mg.100 mg-1 para 0,22 ± 0,008 mg.100 mg-1, respectivamente. Entretanto, a utilização de glicogênio foi proporcional em todos os grupos. A análise morfológica demonstrou um aumento na quantidade dos núcleos no coração de ratos diabéticos de 21,33 ± 1.17 (no grupo controle) para 36,6 ± 5 (p< 0,05) e redução na média da área dos núcleos, de 0,16 ± 0,02 (controle) para 0,08 ± 0,01 (p< 0,05). No grupo tratado com a menor concentração de metformina (DM 3.5) diminuiu a quantidade de núcleos de 36,6 ± 5 (grupo diabético) para 22,8 ± 2 (p< 0,05), porém aumentou a média da área dos núcleos de 0,08 ± 0,01 mm2 para 0,17± 0,01 mm2 (p< 0,05). Nos grupos tratados com as maiores doses de metformina (30 e 74 mg.g-1 p.c.), a quantidade de núcleos aumentou para 34,16 ± 1,85 e 47,29 ± 2,92, respectivamente), e suas respectivas áreas aumentaram para 0,86 ± 0,05 e 0,5 ± 0,06, diferindo dos grupos controle e dos diabéticos não tratados. Nos grupos diabéticos tratados com glibenclamida e glibenclamida + metformina, as áreas dos núcleos aumentaram de 0,08 ± 0,01 mm2 para 0,71 ± 0,09 mm2 e 0,67 ± 0,01 mm2, respectivamente, (p< 0,001). Conclusões: O aumento na dispersão dos intervalos QT com o tratamento pode significar um risco de arritmia que predispõe ratos à morte súbita. Os resultados da pressão obtidos pelo método de Langendorff indicam que a força de contração diminuiu durante o período de isquemia por NE, sugerindo que o coração estava mais rígido. Estes resultados permitem-nos deduzir que as maiores doses de metformina, 74 mg.g-1 indicados como as máximas para humanos, podem causar sérios prejuízos ao trabalho cardíaco em caso de sobrecarga. Por outro lado, altas doses de metformina, de glibenclamida e a associação entre estas drogas aumentam a quantidade e o tamanho dos núcleos. Conseqüentemente, o ventrículo hipertrofia, em decorrência do aumento da atividade celular, prejudicando de modo importante, a estrutura e a função cardíaca. Portanto, este aumento de glicogênio está associado à severidade e à duração do diabetes. Assim, o coração torna-se altamente susceptível à isquemia / Abstract: Metformin and glibenclamide are pharmacos used to decrease blood glucose on type 2 diabetics. Metformin decreases gastrointestinal absorption of glucose and gluconeogenesis and increases peripheric glucose uptake. Glibenclamide increases insulin secretion by blocking K+ channels. Besides these effects, metformin and glibenclamide may influence cardiovascular system, which accelerate the progression of vascular disease, predisposing heart to failure or infarct. These abnormalities associated to physiological changes may generate an abnormal ECG, with an increased QT interval and its correspondent dispersion (QTd). These changes could be associated to a lower threshold for malignant ventricular arrhythmias and a sudden death by ischemia. The aim of this study was to evaluate the effects of metformin and/or glibenclamide treatment on QT intervals and its derivatives: QTc, QTd, and QTcd. We also evaluated the pressure developed by left ventricle (LVP) and calculate the correspondents derivatives (DP/Dt+ and DP/Dt-) on heart isolated from diabetic rats, under ischemia caused by norepinephrine (NE). Glycogen was measured after ischemia and compared to control heart, non-submitted to NE. We also analyzed the histological changes in ventricle cells. Methods: Male Wistar diabetic rats were treated by metformin (3.5, 30 and 74 µg.g-1 b.w) or glibenclamide (0.13 µg.g-1 b.w) and its association to metformin (0.13 µg.g-1 b.w + 3.5 µg.g-1 b.w) during 30 days. A 6-lead ECG was recorded initially and after 15 and 30 days treatment. At the end, under anaesthesia, heart were isolated and perfused by Krebs-Henseleit solution in a Langendorff apparatus. Ischemia were induced by adding norepinephrine 10-6 M to the solution (2 ml.min-1.g) during 1 h. Glycogen (mg.100 mg-1 wet tissue) was measured on heart at rest or after perfusion, using the fenol sulfuric method. In another group, after anaesthesia hearts were removed, cleaned and fixed in phormoldheyde in PBS buffer. Thin ventricle sections were made and after paraffin embedding, fine slices were cut and stained with hematoxilin eosin (HE). Ventricle glycogen assay was performed on those slides using the acid Schiff process. The number of nuclei was counted out and nuclei area was measured (mm2). Glycogen granules were recognized the violet colored cytoplasm. Results: After 15 and 30 days, glycemia, QT interval and its derivates increased on diabetic rats. On the other hand, diabetic rats treated during 30 days by low and intermediate doses of metformin (3.5 and 30 µg.g-1 b.w.) or glibenclamide or glibenclamide plus metformin, all decreased glycemia. However, the group treated with the highest dose of metformin (74 µg.g-1 b.w) failed to reduce glycemia. On the other hand, the groups treated by low and intermediate doses reduced the ECG intervals: QTc, and QTd, and QTcd, in contrast to the diabetic group treated with the highest metformin dose and the groups treated by glibenclamide and glibenclamide associated to metformin. Metformin, in low and high doses (3.5, 30 and 74 mg.g-1 b.w.) increased glycogen storage on diabetic rat ventricle, from 0.19 ± 0.007 (control group) to 0.38 ± 0.007 mg.100 mg-1, 0.5 ± 0.05 mg.100 mg-1 and 0.7 ± 0.04 mg.100 mg-1, p< 0.05, respectively. The treatment with glibenclamide alone or associated to metformin increased glycogen, too. In the control group, isolate hearts showed a rapid increase on ventricular pressure, just initiation of NE perfusion (145 ± 9.7 mmHg), followed by a slow fall to 99 ± 3 mmHg. Similar changes was found on the derivates DP/Dt+ and DP/Dt-. Metformin (3.5 and 30 mg.g-1), glibenclamide and glibenclamide associated to metformin protected cardiac muscle during ischemia, similarly to the control group (p> 0.05). But, the non-treated diabetic group and the group treated by 74 mg.g-1 of metformin, produced a maximal pressure which were inferior to the control group and the reversion of the LVP, DP/Dt+ and DP/Dt- was faster than that of the control group. After ischemia, glycogen was reduced on all groups to 0.09 ± 0.007 mg.100 mg-1 on control group; 0.1 ± 0.006 mg.100 mg-1 on diabetic group and 0.06 ± 0.005 mg.100 mg-1 on DM74. However, this decrease was inferior to that of the group treated by the highest dose. The treatment with glibenclamide alone and associated to metformin diminished glycogen storage from 0.62 ± 0.05 mg.100 mg-1 to 0.19 ± 0.05 mg.100 mg-1 and 0.74 ± 0.03 mg.100 mg-1 to 0.22 ± 0.008 mg.100 mg-1. However its utilization was proportional for all groups. Heart submitted to ischemia decreases its reserve, (p< 0.05 compared to non-ischaemic). These results suggested that high doses metformin, in special 74 mg.g-1 b.w., indicated as maximal for humans, makes heart prompt to ischemia. Diabetic rat hearts showed an increase on the amount of nuclei, from 21.33 ± 1.17 to 36.6 ± 5 (p< 0.05) and a reduction of its area, from 0.16 ± 0.02 mm2 to 0.08 ± 0.01 mm2 (p< 0.05) in comparison to the control group. The lowest dose of metformin (DM 3.5) diminished the amount of nuclei (36.6 ± 5 vs 22.8 ± 2; p< 0.05) and increased theirs size (0.08 ± 0.01 vs 0.17± 0.01). The amount of nuclei increased to 34.16 ± 1.85 and 47.29 ± 2.92 during the treatment with high metformin doses, (30 and 74 mg.g-1 b.w., respectively), and the nuclei area increased to 0.86 ± 0.05 mm2 and 0.5 ± 0.06 mm2, respectively, differing from control and non-treated diabetic groups. Similar result, was obtained on the group treated by glibenclamide and/or metformin, on cardiac cells, which the nuclei area increased to 0.71 ± 0.09 mm2 and 0.67 ± 0.01 mm2, respectively, (p< 0.001). Conclusions: The increased dispersion of QT intervals during treatment may be subjacent to the risks of arrhythmias that predispose humans to sudden death. Results shown on Langendorff methodology indicate that contraction force decreased, suggesting that ventricle muscle were prone to ischemia. Then, high metformin doses (74 mg.g-1), as indicated for humans, may cause damage to cardiac work during overload. High metformin doses, glibenclamide and glibenclamide associated to metformin increase the number of nuclei, as well, theirs size. Consequently, the ventricle hypertrophy due to an increased cellular activity may cause important injuries to cardiac structure and function. We can conclude that, the increased glycogen content on ventricle was associated to the severity and the duration of diabetes. Then, heart became more susceptible to the ischemia effects / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

A compreensão dos mecanismos que regulam o endométrio e suas implicações clínicas podem contribuir para melhorar as taxas de implantação do embrião humano. Apesar de muitas proteínas e moléculas influenciarem a receptividade endometrial, sua contribuição coordenada para o processo de implantação do embrião ainda é pouco compreendida. Dentre a complexa rede que guia este processo em direção à preparação de um endométrio receptivo se encontram as citocinas, das quais a interleucina-11 (IL-11) e o fator inibidor de leucemia (LIF) desempenham papel essencial. Estudos demonstram que a interrupção das vias de sinalização celular dessas citocinas prejudica ou mesmo impede a implantação, implicando diretamente na fertilidade feminina. Além disso, a hiperinsulinemia afeta negativamente a fertilidade da mulher. Dentro desse contexto, a metformina, fármaco antidiabético, pode exercer efeitos positivos sobre a expressão da IL-11 e LIF, revertendo o possível prejuízo do excesso de insulina sobre a secreção dessas citocinas. Para avaliar esse efeito, utilizou-se um modelo de cultura primária de células estromais de endométrio humano expostas aos hormônios sexuais femininos estrogênio e progesterona, divididas em grupos: controle, metformina, insulina, e associação insulina e metformina. Utilizando RT-qPCR e ensaio imunoenzimático de ELISA, foram avaliadas a expressão gênica e proteica, respectivamente, das duas citocinas. Não foram observadas diferenças entre os grupos. O ensaio de MTT para avaliar a proliferação celular permitiu a verificação da ação antiproliferativa da metformina sobre o grupo hiperinsulinêmico. Embora as hipóteses formuladas nesse estudo encontrem forte sustentação na literatura, no modelo proposto não foi possível encontrar diferenças na expressão da IL-11 e LIF. Dada a complexa regulação de todos os fatores considerados nessa pesquisa e suas múltiplas inter-relações, mais estudos são necessários para esclarecer os mecanismos que orquestram essa complexa rede. / The understanding of the endometrium regulation and its clinical implications can help to improve implantation rates of the human embryo. Although many proteins and molecules influence the endometrial receptivity, their coordinated contribution to embryo implantation process is still poorly understood. Among the complex pathways involved in this process toward the preparation to a receptive endometrium are the cytokines, including interleukin -11 (IL- 11) and leukemia inhibitory factor (LIF) that play an essential role. It has been shown that disruption of cellular signaling pathways of these cytokines impairs or even prevents implantation, direct implications on fertility. Moreover, the hyperinsulinemia can negatively affected women's fertility. Within this context, metformin, an antidiabetic drug, may exert positive effects on the expression of IL-11 and LIF, reversing the possible effects insulin excess. To evaluate this effect, a model of primary culture of human endometrial stromal cells exposed to female sex hormones estrogen and progesterone was used. Cells were divided in groups: control, metformin, insulin, association insulin and metformin. From qRT-PCR and ELISA immunoenzymatic assay gene expression and protein, respectively, of the two cytokines were evaluated. No differences were observed between groups. Additionally, the assay to evaluate cell proliferation MTT found the important antiproliferative action of metformin on hyperinsulinemic group. In the proposed model could not find differences in the expression of IL-11 and LIF. Given the complex regulation of all factors considered in this study and their multiple interrelationships, more studies are required to unravel the mechanisms that orchestrate this complex network.

Orientador: Amanda Martins Baviera / Resumo: O diabetes mellitus (DM) é uma síndrome metabólica crônica caracterizada por deficiência na produção pancreática de insulina e/ou prejuízos em suas ações teciduais, culminando principalmente em hiperglicemia. A manutenção da hiperglicemia por longos períodos é um dos principais fatores envolvidos no estabelecimento e manutenção do estresse glico-oxidativo, o qual está implicado no desenvolvimento das complicações micro e macrovasculares do DM, resultando em morbidade e mortalidade significativas. A metformina tem sido um dos principais agentes antidiabéticos orais utilizados para o tratamento do DM; entretanto, é crescente o interesse no uso de produtos naturais como terapia complementar, seja por seus benefícios aditivos aos efeitos da terapia clássica, seja pelo potencial antioxidante. O licopeno é um carotenoide encontrado em diversos vegetais, em especial tomates frescos e seus derivados. Diversos estudos vêm demonstrando vários benefícios atribuídos ao licopeno: redução da glicemia, dislipidemia, inflamação e em biomarcadores relacionados ao estresse glico-oxidativo. Diante do exposto, o licopeno surge como uma opção terapêutica complementar interessante aos fármacos já utilizados no tratamento do DM. O objetivo deste estudo é investigar o potencial antidiabético do iogurte enriquecido com metformina ou licopeno, isolados ou co-administrados, em ratos diabéticos, avaliando parâmetros fisiológicos, bioquímicos, marcadores do estresse glico-oxidativo e potencial antioxidan... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Objetivo: Evaluar el efecto de la suplementación con Vitamina D, como coadyuvantterapéutico en el control glicémico, en ratas Long-Evans con normovitaminosis Dinducidas a diabetes experimental. Materiales y métodos: Estudio experimentaejecutado en 10 ratas Long-Evans machos, inducidas a diabetes, mediante ladministración de aloxano al 5%. Se obtuvieron valores de glucosa y hemoglobinglicosilada previamente al tratamiento con metformina, en el grupo control, metformina con vitamina D, en el grupo experimental. Se sometieron a seguimientpor cuatro semanas mediante un dosaje de glucosa en ayunas semanal. Para el grupexperimental, se añadió el dosaje de calcio sérico total pre y post tratamiento. Scompararon resultados mediante la prueba no paramétrica U de Mann-WhitneyResultados: Tras 4 semanas de seguimiento, se realizó el análisis bivariado, en el cual se compararon los niveles de glucosa en ayunas entre el grupo control y experimentahallándose que los resultados no fueron significativamente diferentes (p>0.05)Conclusiones: La suplementación con vitamina D como coadyuvante a la metformina no disminuye significativamente el nivel glucosa en ratas inducidas a diabetes mellitusexperimental.

Objetivo: Avaliar o controle glicêmico em pacientes que utilizaram metformina ou insulina para tratamento do diabetes gestacional, identificando fatores preditores da necessidade de insulina complementar nas pacientes que tiveram, como terapêutica inicial, a metformina. Método: pacientes com DG que não obtiveram controle glicêmico com dieta e exercícios físicos foram randomizadas para receber metformina (n=46) ou insulina (n=46). Os critérios de inclusão foram: gestação única, realização de dieta e exercícios físicos por período mínimo de uma semana, sem controle glicêmico satisfatório, ausência de fatores de risco para acidose láctica, ausência de anormalidades anatômicas e/ou cromossômicas do produto conceptual. Foram excluídas as gestantes que apresentaram perda de seguimento pré-natal. Resultado: A comparação das médias glicêmicas pré-tratamento medicamentoso não mostrou diferença estatisticamente significativa entre os grupos (p=0,790). Porém, após a introdução dos medicamentos, foram observados médias glicêmicas menores no grupo metformina, ao longo do dia (p=0,020), principalmente, após o jantar (p=0,042). Pacientes que utilizaram metformina tiveram menor ganho de peso (p=0,002) e, também, menor frequência de hipoglicemia neonatal (p=0,032). Doze pacientes do grupo metformina (26,08%) necessitaram de insulina complementar para controle glicêmico. A idade gestacional precoce (odds ratio 0,71, CI95% 0,52-0,97; p=0,032) e a média glicêmica pré-tratamento medicamentoso (odds ratio 1,061, CI95% 1,001-1,124; p=0,046) foram identificadas como preditoras da necessidade de insulina complementar. Conclusão: A metformina foi eficaz em propiciar controle glicêmico adequado, com menor ganho de peso e menor frequência de hipoglicemia neonatal. Foi identificado grupo de pacientes com maior probabilidade de necessitar de complementação com insulina para atingir controle glicêmico / Objective: To evaluate glycemic control in women receiving metformin or insulin for the treatment of gestational diabetes, and to identify factors predicting the need for supplemental insulin in women initially treated with metformin. Methods: Women with gestational diabetes who did not achieve glycemic control with diet and exercise were randomized to receive either metformin (n=46) or insulin (n=46). Criteria for inclusion were singleton pregnancy, diet and exercise for a minimum period of one week without satisfactory glycemic control, absence of risk factors for lactic acidosis, and absence of anatomic and/or chromosome anomalies of the conceptus. Patients who were lost to prenatal follow-up were excluded. Results: Comparison of mean pretreatment glucose levels showed no significant difference between groups (P=.790). However, lower mean glucose levels across the day were observed in the metformin group after introduction of the drug (P=.020), especially after dinner (P=.042). Women using metformin presented less weight gain (P=.002) and a lower frequency of neonatal hypoglycemia (P=.032). Twelve women in the metformin group (26.08%) required supplemental insulin for glycemic control. Early gestational age (OR=0.71, 95%CI: 0.52-0.97; P=.032) and mean pretreatment glucose level (OR=1.061, 95%CI: 1.001-1.124; P=.046) were identified as predictors of insulin need. Conclusion: Metformin was found to provide adequate glycemic controlwith lower mean glucose levels across the day, less weight gain and a lower frequency of neonatal hypoglycemia. Logistic regression analysis showed that gestational age at diagnosis and mean pretreatment glucose level were predictors of the need for supplemental insulin therapy in women initially treated with metformin

Os tumores de musculatura liso do útero se desenvolvem a partir do miométrio e podem apresentar carcterísticas clínicas malignas e benignas. Dentre eles, o leiomiossarcoma (LMS) é o tumor maligno mais comum, com altas taxas de metástase e recidiva, mesmo sendo diagnosticado em estágios iniciais. Já os leiomiomas (LM) são os tumores benignos mais frequentes em mulheres em idade reprodutiva. Ambos possuem mesma diferenciação celular, porém com comportamentos clínico e biológico bastante distintos, e até o momento não se dispõe de tratamento específico ou curativo. Nesse contexto, a busca por novos alvos moleculares pode contribuir não só para um melhor entendimento dessas neoplasias, como também para a descoberta de novas terapias. Em estudo prévio foi observada a expressão aumentada de FOXO3a nos sarcomas uterinos, em comparação aos LMs e ao miométrio adjacente (MM). Além disso, sua expressão foi crescente de acordo com o potencial de malignidade do tumor. Assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar in vitro o efeito de terapia alvo específica para FOXO3a em células de LM e LMS. Para isto, linhagens celulares de MM (ATCC PCS-460-011), LM (THESCs - CRL-4003) e LMS (SK-UT-1 - HTB-114) foram caracterizadas quanto à expressão basal de FOXO3a (gene e proteína) e submetidas a tratamento com Genisteína e Metformina ou inativação do gene por siRNA. Os efeitos dos tratamentos foram avaliados por PCR em tempo real, Western Blot, imunocitoquímica, ensaios de proliferação, migração e apoptose. Nossos resultados mostraram que todos os tratamentos realizados interferiram na capacidade de proliferação e migração das células, com maior inibição após as 48 horas nos LMS e 72h nos LM. O efeito obtido na transfecção com siRNA apresentou maior eficiência após 48 h da transfecção nos LMS e 72h nos LM. Os efeitos da inibição de FOXO3a foram maiores na proliferação e migração dos LM, porém os resultados não foram estatisticamente significativos. Dentre as substâncias testadas, a Metformina apresentou maior efeito sobre a proliferação, migração e viabilidade das linhagens celulares. A Genisteína também apresentou efeito inibitório nas células, porém o controle com veículo também apresentou o mesmo efeito citotóxico. De modo geral, os efeitos obtidos com os fármacos, foram tempo e concentração dependentes. Em conjunto, nossos resultados sugerem um relevante do FOXO3a nos tumores de musculatura lisa uterinos, além de apresentá-lo como potencial alvo para terapia específica / Smooth muscle tumors of the uterus develop from the myometrium and may present benign and malignant clinical features. Among them, leiomyosarcoma (LMS) is the most frequent malignant tumor, with high rates of metastasis and relapse, even when diagnosed in early stages. On the other hand, leiomyomas (LM) are the most frequent benign tumors in women of reproductive age. Both have the same cellular differentiation, but with very different clinical and biological behaviors, and so far no specific or curative treatment is available. In this context, the search for new molecular targets can contribute not only for a better understanding of these neoplasms, but also for the discovery of new therapies. In a previous study, increased expression of FOXO3a in uterine sarcomas was observed, compared to LMs and adjacent myometrium (MM). In addition, its expression was increasing according to the malignancy potential of the tumor. Thus, the aim of the present study was to evaluate in vitro, the effect of specific targeted therapy for FOXO3a on LM and LMS cells. For this, MM (ATCC PCS-460-011), LM (THESCs-CRL-4003) and LMS (SK-UT-1-HTB-114) cell lines were characterized for basal expression of FOXO3a (gene and protein) and subsequently submitted to treatment with metformin and genistein, or silencing of FOXO3a by siRNA. The effects of the treatments were evaluated by real-time PCR, Western Blot, immunocytochemistry, proliferation, migration and apoptosis assays. Our results showed that all treatments interfered in the proliferation and migration capacity of the cells, with greater inhibition after 48 hours for LMS and 72 hours LM. The effect obtained in the transfection with siRNA showed higher efficiency after 48 hours of transfection in LMS and 72 hours in LM. The effects of inhibition of FOXO3a were greater in the proliferation and migration of the LM, but the results were not statistically significant. Among the substances tested, Metformin had a greater effect on proliferation, migration and viability of the cell lines. Genistein also had an inhibitory effect on the cells, but the control with the vehicle also presented the same cytotoxic effect. In general, the effects obtained with the drugs were time and concentration dependent. Together, our results suggest a relevant role of FOXO3a in uterine smooth muscle tumors, in addition to presenting it as a potential target for specific therapy

OBJETIVO: avaliação da expressão gênicado receptor do fator de crescimento semelhante à insulina de (Insulin-Like Growth Factor- IGF) 1 em células da granulosa luteinizadas do cumulusde mulheres não obesas, com sensibilidade à insulina normal, com síndrome dos ovários policísticos (SOP) tratadas e não tratadas com metformina. MODELO DO ESTUDO: prospectivo, longitudinal, randomizado. PACIENTES E MÉTODOS: avaliamos 12 mulheres com ciclosovulatórios, 9 mulheres com SOP e 8 mulheres com SOP e tratadas com metformina, ao menos 8 semanas na dose de 1.700 mg/dia. Todos os grupos foram similares com relação ao peso, ao índice de massa corporal (IMC), à circunferência da cintura e com sensibilidade à insulina normal. Todas as mulheres foram submetidas à estimulação ovariana controlada com uso de agonista de GnRH em protocolo longo e gonadotrofinas para ciclos de FIV/ICSI. As células da granulosa do cumulusforam obtidas por microdissecção dos cinco maiores folículos pré-ovulatórios. A expressão gênica do receptor de IGF-1 foi determinada com técnica da Reação da Polimerase em Cadeia a partir da Transcrição Reversa (Reverse transcriptase - Polymerase Chain ReactionRT-PCR) emiquantitativa. Foram avaliadas as concentrações séricas e foliculares de estradiol, progesterona, testosterona, hormônio folículo estimulante (Follicle-Stimulating Hormone- FSH), hormônio luteinizante (Luteinizing Hormone - LH), Sex Hormone-Binding Globulin(SHBG), glicose, insulina e IGF-1. Para análise estatística, foram utilizados os testes: ANOVA, Newman-Keuls, coeficiente de Pearsone regressão linear múltipla, sendo considerado nível de significância de 5%. RESULTADOS: não foram observadas diferenças com relação à expressão gênica do receptor de IGF-1 nos três grupos analisados (P>0,05). O número de oócitos (20,4 vs. 13,1 vs.11,5, P= 0,009), os níveis séricos de estradiol (1.896,00 pcg/mL vs. 985,20 pcg/mL vs.908,10 pcg/mL,P = 0,03) e testosterona (1,43 ng/mL vs.0,89 ng/mL vs. 0,82 ng/mL pcg/mL,P = 0,02) foram maiores no grupo de mulheres com SOP não tratadas com metformina em comparação com as mulheres com ciclos ovulatórios e tratadas com metformina, respectivamente. As mulheres com ciclos ovulatórios (50.710±42.520 ng/mL) apresentaram maiores concentrações foliculares de progesterona quando comparados com as mulheres com SOP tratadas (13.660±5.212 ng/mL) e não tratadas com metformina (17.680±6.644 ng/mL) (P=0,01). Na avaliação da regressão múltipla, a testosterona sérica não sofreu influência da expressão gênica do receptor de IGF-1 ou do IMC. CONCLUSÕES: as altas concentrações séricas de estradiol e testosterona, maior número de oócitos no grupo de mulheres com SOP não tratadas com metformina nos levam a concluir que mulheres com SOP provavelmente têm uma maior sensibilidade à estimulação da esteroidogênese ovariana quando comparadas com mulheres sem essa doença, embora não tenhasido encontrada diferença na expressão do receptor de IGF-1 nos trêsgrupos analisados. A similaridade dos resultados deste estudo entre mulheres com SOP tratadas com metformina e com ciclos ovulatórios nos levam a \"hipotetizar\" que um dos possíveis mecanismos de ação da metformina no sistema IGF-1 nas células da granulosa do cumulus poderia ser por mecanismos pós-receptores. / OBJECTIVE: evaluation of the gene expression of the IGF-I receptor in luteinized cumulus granulosa cells from non-obese women with normal insulin sensitivity and with polycystic ovarian syndrome (PCOS)treated or nor with metformin. STUDY MODEL: prospective,longitudinal, randomized. PATIENTS AND METHODS: we evaluated 12 women withovulatory cycles and 9 women with PCOS who had been treated for at least 8 weeks with a metformin dose of 1700 mg/day. All groups were similar interms of weight, body mass index (BMI), and waist circumference and all had normal insulin sensitivity. All women were submitted to controlled ovarian stimulation with a GnRH agonist in a long protocol and with gonadotropins for IVF/ICSI cycles. Cumulus granulosa cells were obtained by microdissection of the five largest pre-ovulatory follicles. Gene expression of the IGF-1 receptor was determined by semiquantitative RT-PCR. Serum and follicular concentrations of estradiol, progesterone, testosterone, FSH, LH, insulin, SHBG, and IGF-1 were determined. Data were analyzed statistically by ANOVA and by the Newman-Keuls test and the Pearson coefficient and linear multiple regression were calculated, with the level of significance set at 5%. RESULTS: no difference in geneexpression of the IGF-I receptor were observed between the three groups studied (P>0.05). The number of oocytes (20.4 vs. 13.1 vs. 11.5, P= 0.009) and the serum levels of estradiol (1,896.00 pcg/mL vs. 985.20 pcg/mL vs.908.10 pcg/mL,P = 0.03) and testosterone (1.43 ng/mL vs.0.89 ng/mL vs. 0.82 ng/mL pcg/mL,P = 0.02) were higher in the group of women with PCOS not treated with metformin than in women with ovulatory cycles and in women treated with metformin, respectively. The women with ovulatory cycles (50.710±42.520 ng/mL) presented higher follicular concentrations of progesterone compared with women with PCOS treated (13.660±5.212 ng/mL) or not with metformin (17.680±6.644 ng/mL) (P=0.01). Multiple regression revealed that serum testosterone was not affected by the gene expression of the IGF-1 receptor or by BMI. CONCLUSIONS: the high serum concentrations of estradiol and testosterone and the larger number of oocytes in the group ofwomen with PCOS not treated with metformin lead us to conclude that women with PCOS probably have greater sensitivity to stimulation ofovarian steroidogenesis than women without the disease, although no difference was detected in the expression of the IGF-I receptor between the three groups studied. The similarity ofthe present results for the women with PCOS treated with metformin and for the women with ovulatory cycles leads us to hypothesize that one of the possible mechanisms of action of metformin on the IGF-1 system in cumulus granulosa cells may be of the post-receptor type.

O diabetes mellitus (DM) está associado com alguns tipos de câncer. No entanto, estudos realizados sobre a associação entre DM e câncer de cabeça e pescoço (CCP) apresentaram resultados controversos. Na avaliação da associação entre DM e câncer, destaque deve ser dado à metformina, medicamento utilizado no DM tipo 2, que se mostra inversamente associado a alguns tumores. O objetivo deste estudo foi avaliar a associação entre DM e CCP, bem como o impacto do uso de metformina no risco de CCP. Este estudo caso-controle incluiu 1021 casos de CCP com confirmação histológica de carcinoma espino celular selecionados em cinco hospitais de grande porte no estado de São Paulo entre 2011 e 2014. Os 1063 controles foram recrutados nos mesmos hospitais, pareados por frequência com os casos por sexo e idade (em grupos de 5 anos). Para avaliar o risco de CCP associado ao DM, odds ratios (OR) e intervalos com 95 por cento de confiança (IC 95 por cento ) foram estimados por meio de regressão logística não condicional. Os participantes diabéticos tiveram associação inversa com o CCP (OR = 0,68; IC 95 por cento : 0,49-0,95), e a proteção foi maior entre diabéticos usuários metformina (OR = 0,54; IC 95 por cento : 0,29-0,99). Diabéticos usuários de metformina que eram fumantes (OR = 0,13; IC 95 por cento : 0,04-0,44), ou consumidores de álcool acima de 40 g/ dia (OR = 0,31; IC 95 por cento : 0,11-0,88) apresentaram proteção ainda maior com relação ao CCP, comparado aos não diabéticos. Em conclusão, os indivíduos diabéticos apresentaram risco inverso de CCP e o uso de metformina pode explicar, ao menos parcialmente, esta associação. / Diabetes mellitus (DM) is directly associated with some cancers. However, studies on the association between DM and head and neck cancer (HNC) have rendered controversial results. Assessing DM and cancer, emphasis should be given to metformin, a medication used for DM type 2, which is shown to be inversely associated with some cancers. The objective of this study was to evaluate the association between DM and HNC, as well as the impact of metformin use on the risk of HNC. This case-control study included 1021 HNC cases with squamous cell carcinoma, histologically confirmed, and admitted in five large hospitals in the state of São Paulo, from 2011 to 2014. A total of 1063 controls were selected in the same hospitals and were frequency-matched to cases by sex and age (in 5-year groups). In order to assess the risk of CCP associated with DM, odds ratios (OR) and 95 per cent confidence intervals (CI 95 per cent ) were estimated using unconditional logistic regression. Diabetic participants had an inverse risk of HNC (OR=0.68; 95 per cent CI: 0.49 0.95), and this inverse association was more intense among diabetic metformin users (OR=0.54; 95 per cent CI: 0.29-0.99). Diabetic metformin users that were current smokers (OR=0.13; 95 per cent CI: 0.04-0.44) or had an alcohol consumption of >40 g/day (OR=0.31; 95 per cent CI: 0.11-0.88) had lower risk of HNC than non-diabetic participants. In conclusion, DM patients have um inverse risk of HNC and the use of metformin may at least partially explain this association.

A metformina é uma droga utilizada para tratamento da diabetes tipo 2. O PPAR-&alpha; tem um papel central no controle imunometabólico. Portanto, o objetivo do estudo foi avaliar os efeitos imunometabólicos da dieta hiperlipídica (HFD), em camundongos C57BL6 (WT) e knockout para PPAR-&alpha;, tratados com metformina. Métodos: Os animais foram submetidos a uma HFD por 12 semanas, nos últimos dez dias de dieta os animais foram tratados com metformina. A oxidação de palmitato no músculo esquelético, As citocinas, no fígado, no tecido adiposo retroperitoneal, em hepatócitos e macrófagos intraperitoneais foram analisados. Resultados: O tratamento aumentou a oxidação de palmitado no músculo, promoveu um efeito anti-inflamatório no tecido adiposo e reverteu à inflamação dos macrófagos. No fígado e nos hepatócitos, a metformina causou um efeito inflamatório. Conclusão: A inflamação hepática foi induzida pelo tratamento e o efeito principal foi a um potencial aumento na inflamação nos hepatócitos. Os macrófagos tiveram uma resposta anti-inflamatória, assim como o tecido adiposo. / Metformin is a drug used to treatment of type 2 diabetes. PPAR-&alpha; plays a central role in immunometabolic control. Therefore, the aim of the study was to evaluate the effects of imumnometabolics of high fat diet (HFD) in C57BL6 mice (WT) and knockout for PPAR-&alpha; treated with metformin. Methods: The animals were subjected to a HFD for 12 weeks in the last ten days of diet the animals were treated with metformin. The palmitate oxidation in skeletal muscle, cytokines in the liver, in the retroperitoneal adipose tissue, hepatocytes and intraperitoneal macrophages were analyzed. Results: The treatment increased palmitate oxidation in muscle, it has promoted an anti-inflammatory effect in adipose tissue and macrophages to inflammation reversed. In the liver and hepatocytes, metformin caused an inflammatory effect. Conclusion: The liver inflammation was induced, and treatment was a main effect to a potential increase in inflammation in hepatocytes. Macrophages have an anti-inflammatory response, as well as adipose tissue.