Orientador : Yong Kun Park / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-16T18:04:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Jafelice_LuciaReginaSantos_M.pdf: 1786780 bytes, checksum: 2450c005203fb9734fd5847547c2d540 (MD5) Previous issue date: 1985 / Resumo: A linhagem de Mucor miehei NRRL 3420, que é produtora de renina microbiana, foi submetida a diferentes períodos de exposição à radiação ultravioleta para induzir mutações com o objetivo de se obter urna linhagem altamente produtora da enzima coagulante de leite. Após vários estudos, determinou-se que exposição à radiação durante 101 151 e 201 provocava taxa de mortalidade superior a 99,99% aumentando a probabilidade de se encontrar mutantes entre os sobreviventes. Novecentas colônias foram isoladas e estudadas quanto a produção enzimática comparando-se com a linhagem original não mutada. Foi obtida urna linhagem mutada que apresentou 122% a mais de produtividade enzimática. A enzima foi então produzida por fermentação semi-sólida em meio farelo de trigo: H2O (1:1), purificada e caracterizada corno protease ácida a termoestável e que necessita de íons Ca2+ para sua ação. A enzima bruta foi utilizada no processamento de queijo minas frescal resultando um produto de boa qualidade / Abstract: The strain Mucor miehei NRRL 3420, which is a microbial rennet producer, was exposed to ultraviolet radiation during different time periods to promote its mutation. The objective of this treatment was to obtain a lineage with a high rate of milk clotting enzyme production. After some experiments, 10' 15! and 20' of ultraviolet radiation exposure showed a mortality rate superior of 99,99%, indicating a great chance to find a mutant among the survivors. The enzymatic production was studied comparing 900 isolated colonies with their original lineage. Through such a procedure one mutated strain was obtained which showed an increase of 122% in enzyme production. The enzyme was produced by semi solid fermentation with wheat bran: water (1:1). It was purified and characterized as a thermostable acid protease, which reacted only in the presence of calcium ions. To test the efficiency of the crude enzyme extract, was used a "minas frescal" cheese-processing system. The product exhibited good quality / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

De los 120 microorganismos aislados de suelos de cítricos de la localidad de Huaral, se identificaron 46 cepas con capacidad de hidrólisis sobre el almidón que representan el 38.33%, existiendo un predominio de B. circulans, con 28.33%; B. Firmus, 23.91%; Faenibacillus spp. 17.39%; B. coagulns, 15.22%,; B. megaterium, 8.70%; B. alvei, 4.35%; B. Lentus, 2.17%. En la fermentación conducida en matraz agitado con caldo almidón modificado según Achi, (1992) B. megaterium MFFB-UNMSM-39 alcanza la mayor actividad de amilasa con 16.10 U/mL., a 45ºC, pH 7.5, y 150 rpm; mientras que en biorreactor de tanque agitado registra una producción de 25.38 U/mL. a 45ºC, pH 7.5, 150 rpm, y 1.5 vvm, que representa un incremento de 9.28 U/mL. (57.63%) por efecto de la aereación y agitación. En el screening al evaluar los ingredientes del sustratos almidón de yuca a 45ºC; pH 7.5; 75 rpm y 1.5 vvm, se encuentra significancia estadística con un α = 0.05, para almidón de yuca; extracto de levadura; citrato de sodio y cloruro de calcio. En la etapa de optimización ascendente, cuando los factores se incrementa en base al cloruro de calcio en 0.3 g/L, se logra incrementar la producción de amilasa y se acorta el periodo de latencia. En la etapa de optimización final se ha encontrado los valores óptimos de los factores; almidón de yuca (X1 = 25.41 g) y cloruro de calcio (X2 = 2.87 g), estos valores corresponden a la cima de la superficie respuesta descrita por el modelo matemático estimado. La enzima amilasa en biorreactor de tanque agitado con caldo almidón almidón de yuca tanto en la fase del screening, optimización ascendente, y optimización final, fueron de 27.40 U/mL; 32.84 U/mL; 33.22 U/mL respectivamente, y la aparición de la producción de amilasa se observó a las 20 horas hacia finales de la fase logarítmica, incrementándose rápidamente de las 28 a las 40 horas y de las 28 a las 36 horas en la fase estacionaria, alcanzando la máxima producción a las 60 horas, para el Screening y optimización ascendente; sin embargo en la optimización final, la enzima hace su aparición a las 16 horas hacia finales de la fase logarítmica, incrementándose aceleradamente de las 24 a las 36 horas para alcanzar su máxima producción a las 60 horas en la fase estacionaria. / Of the 120 isolated microorganisms of floors of citric of the town of Huaral, 46 stumps were identified with hidrólisis capacity on the starch that they represent 38.33%, existing a prevalence of B. circulans, with 28.33%; B. Firmus, 23.91%; Faenibacillus spp. 17.39%; B. coagulns, 15.22%,; B. megaterium, 8.70%; B. alvei, 4.35%; B. Lentus, 2.17%. In the fermentation driven in upset flask with broth starch modified according to Achi, (1992) B. megaterium MFFB-UNMSM-39 reaches the biggest amylase activity with 16.55 U/mL., at 45ºC, pH 7.5, and 150 rpm; while in biorreactor of upset tank it registers a production of amylase with 25.38 U/mL., at 45ºC, pH 7.5, and 150 rpm; that represents an increment of 57.82% for effect of the aereación and agitation. In the screening when evaluating the ingredients of the substrates cassaava starch to 45ºC; pH 7.5; 75 rpm and 1.5 vvm, It meets statistical significance with α = 0.05, for cassava starch; yeast extract; sodium of citrate and chloride of calcium. In the stage of upward optimization, when the chloride of calcium is increased in 0.3 g/L, the amylase production is increased in 1% and shortens the period of latency. In the stage of final optimization has been the good values of those factors; yucca starch (X1 = 25.41 g) and chloride of calcium (X2 = 2.87 g), these values correspond to the summit of the surface answer described by the dear mathematical pattern. The enzyme amylase in biorreactor upset tank with broth starch so much of the screening, upward optimization, and final optimization, the maximum productions of the amylase enzyme were of 27.40 U/mL; 32.84 U/mL; 33.22 U/mL respectively, and the appearance of the amylase production was observed at the 20 hours toward final of the logarithmic phase, increased fasted at the 28 at 40 hours and 28 at 36 hours reaching the maximum production at the 60 hours in the stationary phase for screening and upward optimization; however in the final optimization the enzyme appears at the 16 hours toward final of the logarithmic phase, increased fasted at the 24 at 36 hours for to reach the maximum production at the 60 hours in the stationary phase.

De los 120 microorganismos aislados de suelos de cítricos de la localidad de Huaral, se identificaron 46 cepas con capacidad de hidrólisis sobre el almidón que representan el 38.33%, existiendo un predominio de B. circulans, con 28.33%; B. Firmus, 23.91%; Faenibacillus spp. 17.39%; B. coagulns, 15.22%,; B. megaterium, 8.70%; B. alvei, 4.35%; B. Lentus, 2.17%. En la fermentación conducida en matraz agitado con caldo almidón modificado según Achi, (1992) B. megaterium MFFB-UNMSM-39 alcanza la mayor actividad de amilasa con 16.10 U/mL., a 45ºC, pH 7.5, y 150 rpm; mientras que en biorreactor de tanque agitado registra una producción de 25.38 U/mL. a 45ºC, pH 7.5, 150 rpm, y 1.5 vvm, que representa un incremento de 9.28 U/mL. (57.63%) por efecto de la aereación y agitación. En el screening al evaluar los ingredientes del sustratos almidón de yuca a 45ºC; pH 7.5; 75 rpm y 1.5 vvm, se encuentra significancia estadística con un α = 0.05, para almidón de yuca; extracto de levadura; citrato de sodio y cloruro de calcio. En la etapa de optimización ascendente, cuando los factores se incrementa en base al cloruro de calcio en 0.3 g/L, se logra incrementar la producción de amilasa y se acorta el periodo de latencia. En la etapa de optimización final se ha encontrado los valores óptimos de los factores; almidón de yuca (X1 = 25.41 g) y cloruro de calcio (X2 = 2.87 g), estos valores corresponden a la cima de la superficie respuesta descrita por el modelo matemático estimado. La enzima amilasa en biorreactor de tanque agitado con caldo almidón almidón de yuca tanto en la fase del screening, optimización ascendente, y optimización final, fueron de 27.40 U/mL; 32.84 U/mL; 33.22 U/mL respectivamente, y la aparición de la producción de amilasa se observó a las 20 horas hacia finales de la fase logarítmica, incrementándose rápidamente de las 28 a las 40 horas y de las 28 a las 36 horas en la fase estacionaria, alcanzando la máxima producción a las 60 horas, para el Screening y optimización ascendente; sin embargo en la optimización final, la enzima hace su aparición a las 16 horas hacia finales de la fase logarítmica, incrementándose aceleradamente de las 24 a las 36 horas para alcanzar su máxima producción a las 60 horas en la fase estacionaria. / Of the 120 isolated microorganisms of floors of citric of the town of Huaral, 46 stumps were identified with hidrólisis capacity on the starch that they represent 38.33%, existing a prevalence of B. circulans, with 28.33%; B. Firmus, 23.91%; Faenibacillus spp. 17.39%; B. coagulns, 15.22%,; B. megaterium, 8.70%; B. alvei, 4.35%; B. Lentus, 2.17%. In the fermentation driven in upset flask with broth starch modified according to Achi, (1992) B. megaterium MFFB-UNMSM-39 reaches the biggest amylase activity with 16.55 U/mL., at 45ºC, pH 7.5, and 150 rpm; while in biorreactor of upset tank it registers a production of amylase with 25.38 U/mL., at 45ºC, pH 7.5, and 150 rpm; that represents an increment of 57.82% for effect of the aereación and agitation. In the screening when evaluating the ingredients of the substrates cassaava starch to 45ºC; pH 7.5; 75 rpm and 1.5 vvm, It meets statistical significance with α = 0.05, for cassava starch; yeast extract; sodium of citrate and chloride of calcium. In the stage of upward optimization, when the chloride of calcium is increased in 0.3 g/L, the amylase production is increased in 1% and shortens the period of latency. In the stage of final optimization has been the good values of those factors; yucca starch (X1 = 25.41 g) and chloride of calcium (X2 = 2.87 g), these values correspond to the summit of the surface answer described by the dear mathematical pattern. The enzyme amylase in biorreactor upset tank with broth starch so much of the screening, upward optimization, and final optimization, the maximum productions of the amylase enzyme were of 27.40 U/mL; 32.84 U/mL; 33.22 U/mL respectively, and the appearance of the amylase production was observed at the 20 hours toward final of the logarithmic phase, increased fasted at the 28 at 40 hours and 28 at 36 hours reaching the maximum production at the 60 hours in the stationary phase for screening and upward optimization; however in the final optimization the enzyme appears at the 16 hours toward final of the logarithmic phase, increased fasted at the 24 at 36 hours for to reach the maximum production at the 60 hours in the stationary phase.

Orientador: Yong Kun Park / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-16T20:34:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zenin_CeliaTaeko_M.pdf: 1850173 bytes, checksum: d0a12c92198da3f4c96f812926d3ce69 (MD5) Previous issue date: 1978 / Resumo: De duzentos e quarenta e nove linhagens de microrganismos isolados do solo foi encontrado quatro linhagens produtoras de tirosinase, das quais escolheu-se a linhagem que produziu maior atividade de tirosinase. Esta, foi classificada como Bacillus subtilis e verificada que produz a enzima intracelularmente. Dentre vários meios de cultura testados, o microrganismo crescido no meio constituído de 1% de peptona, 1% de levedura e 2% de glicose, a pH 7,0 , apresentou melhor rendimento na produção de tirosinase. O estudo da produção de tirosinase por B.subtilis foi realizado no minifermentador da New Brunswick modelo M-1000, à 30°C e 1 vvm de aeração, com o meio de cultura acima descrito. No decurso da fermentação foi verificado que o valor de pH do meio de cultura cai durante a fase exponencial de crescimento, retornando ao nível ligeiramente acima do inicial no fim dessa fase. A produção da enzima foi verificada no fim da fase exponencial de crescimento, atingindo o máximo de produção ã 48 horas de incubação, com uma atividade 5,7 x 102 unidades de tirosinase por mililitro de suspensão celular. Algumas características enzimáticas da tirosinase intracelular e B.subtilis foram estudadas na forma semipurificada e na forma de enzima imobilizada natural (cell-bound enzyme).A enzima emipuríficada pelo fracionamento com sulfato de amônio apresentou pH ótimo 7,0 , temperatura ótima de 25°C e estabilidade em pH na faixa de 6,0 a 7,5. A sua atividade não foi alterada na presença de ions metálicos como Al2(SO4)3, MgSO4, MnSO4, CuSO4, BaSO4, CaCl4, CoCl2 e KCl, porém foi inibida na presença dos agentes quelantes KCN, tiouréia, dietilditiocarbamato de sódio e cisteina. A eletroforese da tirosinase semipurifiçada mostrou que a enzima move em direção ao cátodo à pH 4,0. O estudo cine tico da enzima apresentou respectivamente para os valores de Km e Vmax 7,5 x 10-4M de L-tirosina e 13,5 x 10-3 umoles de L-DOPA/min/mg de proteína. A tirosinase na forma de enzima imobilizada natural apresentou características semelhantes à tirosinase na forma semipurificada, exceto na cinética de enzima , sendo obtido os valores de 9,0 x 10-4 M de L-tirosina e 7,1 x 10-4 ?moles de L-DOPA/min/mg de massa celular, respectivamente para Km e Vmax. A conversão de L-tirosina ã L-DOPA pela tirosinase de B.subtilis foi realizada com suspensão de células intactas contendo 11 x 10-4 unidades de tirosinase por mililitro e substrato L-tirosina em três diferentes concentrações. Estes foram incubados ã 30 C, pH 7,0, por 40 horas, adicionando-se periodicamente ácido ascórbico para prevenir a oxidação do produto formado. O máximo de conversão de L-tirosina para L-DOPA foi obtido quando a concentração do substrato foi de 12mM / Abstract: Two hundred forty nine strains of microorganisms were isolated from soil, and four strains were to be producers of tyrosine. One o£ strains, wich is classified as Bacillus subtilis , was best producer of tyrosinase, and the enzyme was produced intracellulary. The best culture medium for the production of tyrosine by B. subtilis was found to be: 1% peptone, 1% yeast and 2% glucose, at pH 7,0. The study on the enzyme production by the strain was done with the culture medium, described above in a minifermentor (New Brunswick model M-1000) at 30°C with aeration (one volume / volume/minute). Time course of fermentation by B.subtilis demonstrated that the pH has fallen during exponential cell growth and elevated at the end of the phase.Enzyme production has begun at end of the exponential cell growth and achieved maximum enzyme production at 48 hours of incubation with an activity of 5,7 x 10 units of tyrosinase per milliliter of cell suspension. Characterization for both, cell bound and semipurified tyrosinase from B.subtilis were studied. The semipurified enzyme with ammonium sulfate fractionation showed as following. Optimum pH and temperature were around 7,0 and 25°C. The enzyme was stable at pH between 6,0 and 7,5. Metal ions such as Al2(SO4)3, MgSO4, MnSO4, CuSO4, BaSO4, CaCl4, CoCl2 and KCl not influenced on tyrosinase activity. KCN, thiourea, sodium diethildithiocarbamate and cysteine have inhibited the enzyme activity. Eletrophoretic behavior of tyrosinase showed that the enzyme moved forward cathod at pH 4,0. Kinetic study of the enzyme showed that values of both Km and Vmax were 7.5 x 10-4 M of L-tyrosine and 13.5 x 10-3 ?moles of L-DGPA/min/mg of protein, respectively Cell bound tyrosinase exhibited similar characteristics except enzyme kinetics and values for both Km and Vmax were 9.0 x 10-4 M of L-tyrosine and 7.1 x 10~4 ?moles of L-DOPA/min/mg of cell suspension. Conversion of L-tyrosine to L-DOPA by B.subtilis tyrosinase was performed by cell bound tyrosinase containing 11 x 10 * units of enzyme activity per ml and substrate (L-tyrosine) of three différents concentrations, at 30°C, pH 7,0 for 40 hours, and periodicaly ,ascorbic acid was added to reaction mixture to prevent further oxidation of the product.The maximum conversion of L-tyrosine to L-DOPA was obtained when the substrate concentration was 12 mM / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador : Arthur E. Humphrey / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Tecnologia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-17T16:31:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sadir_Ricardo_D.PDF: 2292020 bytes, checksum: f9b71f4a34d69ee25059c4a465791b39 (MD5) Previous issue date: 1969 / Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The abstract is available with the full electronic document / Doutorado / Doutor em Engenharia de Alimentos

Tese (livre-docencia) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Tecnologia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-17T22:15:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sadir_Ricardo_LD.pdf: 2622943 bytes, checksum: 1b3f08a7251c680495ccb9ec6c00a7b2 (MD5) Previous issue date: 1972 / Resumo: Pesquisamos o cultivo da Candida lipolytica ATCC 8661 em querosene com 76% de compostos parafínicos, como única fonte de carbono e energia. Dos 46 meios de cultura experimentados, só aqueles com uréia e NH4Cl foram os mais adequados como fonte nitrogenada. Nutrientes orgânicos tais como extrato de levedura e farelo de arroz, adicionados ao meio de cultura inorgânica, não melhoraram o rendimento em biomassa; melaço de cana de açúcar, produz uma marcante queda do rendimento. A autólise da levedura é menos intensiva quando usa-se NH4NO3 como fonte hidrogenada...Observação: O resumo, na íntegra poderá ser visualizado no texto completo da tese digital. / Abstract: Cultivation of Candida lipolytica ATCC 8661, in kerosene with 76% paraffin, as sole carbon and energy source was investigated. From 46 cultures medium experimented, only those with urea and NH4Cl were the most suitable nitrogen source. Organic nutrient such as yeast extract and rice bran added to the inorganic medium, did not improve biomass yield; black trap molasses produce a marked drop in yield...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Tese (livre-docencia) - Univer / Livre-Docente em Tecnologia de Alimentos

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-04-20Bitstream added on 2014-06-13T19:14:46Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_bh_me_rcla.pdf: 1162673 bytes, checksum: f5fe030f67c2007c0812e4e797484647 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Dentre as principais enzimas utilizadas em biocatálise destacam-se as lipases, pois apresentam capacidade de catalisar reações tanto em meio aquoso como em meio orgânico. Do ponto de vista econômico e industrial, as lipases obtidas de micro-organismos são as mais utilizadas, devido a sua relativa facilidade de produção e abundância de micro-organismos capazes de sintetizá-las. A principal barreira à implantação de lipases em sistemas de biocatálise é seu custo elevado. A utilização de técnicas como método de planejamento fatorial e análise de superfície tem sido utilizadas para a otimização das condições de cultivo e catálise, visando aumento de atividade e redução de custos de fermentação. Outra estratégia importante tem sido o desenvolvimento de técnicas de imobilização enzimática, permitindo a recuperação e reutilização da enzima após a catálise. A adsorção é a abordagem de imobilização mais utilizada, devido à facilidade de uso e baixo custo. Este trabalho apresenta a otimização da produção de lipase pelo fungo filamentoso Fusarium oxysporum, utilizando delineamento fatorial (DCCR) e análise de superfície de resposta (MSR), a imobilização da enzima em diferentes suportes e a caracterização da lipase imobilizada. Inicialmente, foram estudados separadamente oito fontes de carbono e cinco fontes de nitrogênio. No DCCR foram avaliadas quatro variáveis na produção de lipase: concentração da fonte de carbono, concentração da fonte de nitrogênio, surfactante Triton X-100 e adição de extrato de levedura. Após o estudo de condições de cultivo, a enzima foi imobilizada em diferentes suportes: encapsulação em gel de polióxido de etileno (PEO) e alginato de cálcio e, adsorção em Celite® 545 e Octil Sepharose CL-4B. Neste trabalho também foi estudada a caracterização bioquímica... / Of the main enzymes used in biocatalysis lipases stand out, since they have the ability to catalyze reactions in both aqueous and in organic medium. From the economical and industrial point of view, lipases obtained from microorganisms are the most used due to their relative ease of production and the abundance of microorganisms capable of synthesizing them. The main barrier to implementation of lipases in biocatalysis systems is their high cost. The use of techniques such as method of factorial design and response surface methodology has been used for the optimization of culture conditions and catalysis, aiming to increase activity and reduce costs of fermentation. Another important strategy has been the development of techniques for immobilizing enzymes, allowing the recovery and reuse of the enzyme after catalysis. The adsorption is the approach most widely used for immobilization, due to ease of use and low cost. This work presents the optimization of lipase production by the filamentous fungus Fusarium oxysporum, using central composite design (CCD) and response surface methodology (RSM), the enzyme immobilization in different media and characterization of immobilized lipase. Initially were studied eight separate carbon sources and five nitrogen sources. In CCD four variables were evaluated in the production of lipase: carbon source concentration, nitrogen source concentration, surfactant Triton X-100 and yeast extract adding. After the study of the cultivation conditions, the enzyme was immobilized onto various matrix: encapsulation in polyethylene oxide (PEO) gel and calcium alginate, and adsorption on Celite® 545 and Octyl Sepharose CL-4B. This work also studied partial biochemical characterization of free and immobilized enzyme on Celite. Among the carbon sources studied, the oils that gave the highest values of lipase... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Valéria Marta Gomes de Lima / Banca: Cintia Duarte de Freitas Milagre / Banca: Alessandra Machado Baron / Resumo: Dentre as principais enzimas utilizadas em biocatálise destacam-se as lipases, pois apresentam capacidade de catalisar reações tanto em meio aquoso como em meio orgânico. Do ponto de vista econômico e industrial, as lipases obtidas de micro-organismos são as mais utilizadas, devido a sua relativa facilidade de produção e abundância de micro-organismos capazes de sintetizá-las. A principal barreira à implantação de lipases em sistemas de biocatálise é seu custo elevado. A utilização de técnicas como método de planejamento fatorial e análise de superfície tem sido utilizadas para a otimização das condições de cultivo e catálise, visando aumento de atividade e redução de custos de fermentação. Outra estratégia importante tem sido o desenvolvimento de técnicas de imobilização enzimática, permitindo a recuperação e reutilização da enzima após a catálise. A adsorção é a abordagem de imobilização mais utilizada, devido à facilidade de uso e baixo custo. Este trabalho apresenta a otimização da produção de lipase pelo fungo filamentoso Fusarium oxysporum, utilizando delineamento fatorial (DCCR) e análise de superfície de resposta (MSR), a imobilização da enzima em diferentes suportes e a caracterização da lipase imobilizada. Inicialmente, foram estudados separadamente oito fontes de carbono e cinco fontes de nitrogênio. No DCCR foram avaliadas quatro variáveis na produção de lipase: concentração da fonte de carbono, concentração da fonte de nitrogênio, surfactante Triton X-100 e adição de extrato de levedura. Após o estudo de condições de cultivo, a enzima foi imobilizada em diferentes suportes: encapsulação em gel de polióxido de etileno (PEO) e alginato de cálcio e, adsorção em Celite® 545 e Octil Sepharose CL-4B. Neste trabalho também foi estudada a caracterização bioquímica... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Of the main enzymes used in biocatalysis lipases stand out, since they have the ability to catalyze reactions in both aqueous and in organic medium. From the economical and industrial point of view, lipases obtained from microorganisms are the most used due to their relative ease of production and the abundance of microorganisms capable of synthesizing them. The main barrier to implementation of lipases in biocatalysis systems is their high cost. The use of techniques such as method of factorial design and response surface methodology has been used for the optimization of culture conditions and catalysis, aiming to increase activity and reduce costs of fermentation. Another important strategy has been the development of techniques for immobilizing enzymes, allowing the recovery and reuse of the enzyme after catalysis. The adsorption is the approach most widely used for immobilization, due to ease of use and low cost. This work presents the optimization of lipase production by the filamentous fungus Fusarium oxysporum, using central composite design (CCD) and response surface methodology (RSM), the enzyme immobilization in different media and characterization of immobilized lipase. Initially were studied eight separate carbon sources and five nitrogen sources. In CCD four variables were evaluated in the production of lipase: carbon source concentration, nitrogen source concentration, surfactant Triton X-100 and yeast extract adding. After the study of the cultivation conditions, the enzyme was immobilized onto various matrix: encapsulation in polyethylene oxide (PEO) gel and calcium alginate, and adsorption on Celite® 545 and Octyl Sepharose CL-4B. This work also studied partial biochemical characterization of free and immobilized enzyme on Celite. Among the carbon sources studied, the oils that gave the highest values of lipase... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Evalúa el desempeño de cinco métodos fenotípicos para la detección de metalobetalactamasas (MBL) en bacilos gram negativos. Es un estudio observacional, descriptivo y de corte transversal. Utiliza 100 aislamientos de bacilos gram negativos tipificados genotípicamente en estudios preliminares. Los métodos que se evalúan son: Prueba de discos combinados con inhibidor (EDTA), Prueba de sinergia de doble disco, Test de Hodge Modificado (cepa E. coli ATCC 25922), Test de Hodge Modificado (cepa K. pneumoniae ATCC 700603) y Blue Carba Test. De los 32 aislamientos productores de MBL, 27 son del tipo IMP, 3 del tipo VIM y 2 del tipo NDM. De los 68 aislamientos no productores de MBL, 66 son aislamientos no poseedores de MBL, 1 del tipo CTX + impermeabilidad y 1 aislamiento del tipo. El método de discos combinados con inhibidor y el método de sinergia de doble disco son los más específicos (100%) y el Blue Carba Test el más sensible (100%). Respecto a los discos de EDTA se encuentra un índice Kappa de 1.0 entre los discos comerciales y los discos in-house, es decir una concordancia perfecta. En conclusión, los cinco métodos presentaron un buen desempeño para la detección de MBL. Se recomienda la implementación de un método fenotípico para la detección de MBL en los laboratorios clínicos de rutina. El método debe ser elegido según costo-beneficio de acuerdo a las características de la cepa MBL prevalente.

Seminario de Título entregado a la Universidad de Chile en cumplimiento parcial de los requisitos para optar al Título de Ingeniera en Biotecnología Molecular. / El océano comprende el 71% de la superficie de la Tierra, participando en el control del clima, y proveyendo más del 50% del oxígeno disponible en la atmósfera. Las comunidades microbianas que habitan los ambientes marinos se caracterizan por ser determinantes en la producción primaria, además de ser diversas en sus funciones y distribución, siendo fundamentales en la mantención de los ciclos biogeoquímicos. Éstas poseen distintas estrategias para habitar estos ambientes, ya que en estos existen variaciones en los factores abióticos, tales como temperatura, disponibilidad de oxígeno o salinidad, que determinan cambios a nivel biótico. El dinamismo de los ambientes marinos favorece el intercambio de información genética mediado por la transferencia horizontal de genes (HGT). Está descrito que la conjugación es el mecanismo que posee una mayor tasa de ocurrencia en estos ambientes, por lo que estudiar los elementos genéticos móviles (EGM) conjugativos resulta necesario para comprender que genes son potencialmente transferidos. Este proceso se inicia cuando la enzima relaxasa, codificada por el EGM identifica el origen de transferencia (oriT) en el ADN del elemento a transferir, y realiza el corte con el que se inicia la movilización del elemento conjugativo a la célula receptora por medio del sistema de secreción de tipo IV (T4SS). Esta misma relaxasa es la que empalma el ADN transferido. Lo particular de esta enzima, es que es un elemento ubicuo para los elementos conjugativos, lo que la convierte junto a los genes que la codifican (genes mob) en marcadores de movilidad génica por conjugación, y por tanto en un sistema de clasificación de estos elementos. Se ha descrito que los genes transferidos en plásmidos movilizables o conjugativos son capaces de conferir capacidades adaptativas a determinados microorganismos, tales como resistencia a antibióticos o a metales pesados, mientras que a nivel comunitario su efecto aún requiere de mayor estudio. En este seminario de título se planteó la búsqueda e identificación de relaxasas y genes mob, tanto in sílico como in situ, en muestras marinas de la región de Valparaíso. In sílico, se identificaron 28 proteínas con dominios funcionales descritos para relaxasas mediante la utilización de modelos ocultos de Markov (HMM) en un metagenoma obtenido desde el proyecto “TARA Oceans”, correspondiente a una estación ubicada frente a las costas de la región central de Chile, realizando además una cuantificación de los genes mob correspondientes a las proteínas identificadas, obteniendo que más del 70% de las lecturas reclutadas respondían a sólo dos familias de relaxasas (MOBP y MOBH). Para el estudio in situ se analizaron muestras marinas colectadas de una zona intermareal en Montemar, región de Valparaíso, en los meses de enero, marzo y julio de 2018. Estas muestras se trataron utilizando distintos protocolos de extracción de ADN, diferenciando ADN total y ADN plasmidial. Se evaluó la presencia de genes codificantes para relaxasas en los distintos tratamientos de las muestras mediante DPMT (Degenerate Primer Mob Typing) donde se logró identificar la presencia de la familia MOBQu mediante esta técnica. Posteriormente se realizó una cuantificación del gen codificante para esta familia mediante q-PCR, obteniendo que la muestra extraída con un kit comercial para extracción de ADN plasmidial se encontraba enriquecida en estos genes. Con estos resultados podemos demostrar que estas estrategias permitieron la identificación de relaxasas y los genes que las codifican en sistema marino, y así inferir la presencia de elementos conjugativos en estos. / The ocean comprises 71% of the Earth's surface, participating in climate control, and providing more than 50% of the oxygen available in the atmosphere. The microbial communities that inhabit marine environments are characterized by being determinant in primary production, diverse in their functions and distribution, and fundamental in the maintenance of biogeochemical cycles. These communities have different strategies to inhabit these environments, since in these there are variations in the abiotic factors, such as temperature, availability of oxygen or salinity, which determine changes at the biotic level. The dynamism of marine environments favors the exchange of genetic information by horizontal gene transfer (HGT). It is reported that conjugation is the mechanism that has a higher rate of occurrence in these environments, so studying the conjugative mobile genetic elements (EGM) is necessary to understand which genes are potentially transferred. This process is initiated when the relaxase enzyme, encoded by the EGM, identifies the origin of transfer (oriT) in the DNA of the element to be transferred, and performs the cut with which the mobilization of the conjugative element to the recipient cell is initiated through the Type IV secretion system (T4SS). This same relaxase enzyme is the one that splices the transferred DNA. A particular issue about this enzyme is that it is a ubiquitous element for the conjugative elements, which converts it together with the genes that code it (mob genes) into markers of gene mobility by conjugation, and therefore in a classification system of these elements. It has been reported that genes transferred in mobilizable or conjugative plasmids are able to confer adaptive capacities to certain microorganisms, such as resistance to antibiotics or heavy metals, while at the community level their effect still requires further V-ix study. In this work we proposed the search and identification of relaxases and mob genes, both in silico and in situ, in marine samples from the Valparaíso region. In silico, 28 proteins with functional domains described for relaxases were identified by using hidden Markov models (HMM) in a metagenome obtained from the "TARA Oceans" project, corresponding to a station located off the coasts of the central region of Chile, also carrying out a quantification of the mob genes corresponding to the identified proteins, obtaining that more than 70% of the readings recruited responded to only two families of relaxases (MOBP and MOBH). For the in situ study, marine samples collected from an intertidal zone in Montemar, Valparaíso region, in the months of January, March and July 2018 were analyzed. These samples were subjected to different protocols for total DNA and plasmid DNA extraction, evaluating the presence of genes coding for relaxases in the different treatments of the samples by means of DPMT (Degenerate Primer Mob Typing) where it was possible to identify the presence of the MOBQu family. A quantification of the gene coding for this family was performed by q-PCR, obtaining that the sample extracted with a commercial kit for plasmid DNA extraction was enriched in these genes. With these results we can demonstrate that these strategies allowed the identification of relaxases and the genes that codify them in the marine system, and thus infer the presence of conjugative elements in them.