Orientador: Áulus Cavalieri Carciofi / Banca: Áureo Evangelista Santana / Banca: Ricardo Souza Vasconcellos / Banca: Lilian Rose Marques de Sá / Banca: Márcio Antonio Brunetto / Resumo: As possíveis diferenças que acometem cães de diferentes idades ainda são pouco estudadas e descritas para esta espécie. O presente estudo avaliou e comparou a composição da microbiota nas fezes e seus produtos de fermentação, aspectos histológicos da mucosa intestinal e a imunidade de cães filhotes, adultos e velhos. Para tal, 30 cães beagle foram divididos igualmente em três grupos: o grupo filhotes (GF), composto por filhotes do desmame aos 10 meses de idade; o grupo adultos (GA), composto por cães adultos entre cinco e seis anos e o grupo velhos (GV), composto por cães velhos entre 10 e 13 anos. Os animais receberam a mesma dieta e nenhum outro tipo de intervenção por 30 dias e após este período amostras de fezes frescas foram colhidas para a mensuração de: pH, determinação da concentração de lactato, ácidos graxos de cadeia curta e ramificada, amônia, indol, fenol, aminas, imunoglobulina A e composição da microbiota. Também foi adquirida amostra de sangue periférico para quantificação das populações linfocitárias CD4+CD5+, CD5+, CD8+CD5+, e CD21+ por citometria de fluxo, sendo esta analisada em cinco idades (45, 66, 87, 105 e 300 dias) do GF e a média destas avaliações comparada com GA e GV. Após esta análise, foi realizado teste de hipersensibilidade cutânea tardia e ao final destes, os animais foram anestesiados e submetidos a procedimento endoscópico para coleta de fragmentos do estômago e intestinos delgado e grosso para análise histológica dos mesmos. Considerou-se como significativos valores de P≤0,05 e como tendência valores de P<0,1. Observou-se que o GF apresentou maior número de Bifidobacterium spp. e Cluster IV. GV apresentou indicativo de menor atividade sacarolítica bacteriana observada pela menor concentração de acetato, propionato, butirato e ácidos graxos voláteis totais o que... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Possible differences that may occur in dogs of different ages have been little studied and described in this specie. The aim of this study was to evaluate and compare the composition of microbiota and some fermentation products in the feces, histological aspects of intestinal mucosa and immunity of puppies, adults and senior dogs. To perform this, 30 beagle dogs were divided into three groups: Puppy group (GF), composed of puppies from weaning to 10 months old, Adult group (GA), composed of adult dogs between five and six years and Old group (GV), composed of old dogs between 10 and 13 years. Animals received the same diet and no other intervention for 30 days, and after this period, fresh fecal samples were collected for measurement of pH, determining the concentration of lactate, short and branched chain fatty acids, ammonia, indol, phenols, amines, immunoglobulin A and composition of the microbiota. It was also acquired a peripheral blood sample for quantification of lymphocyte populations CD4+CD5+, CD5+, CD8+CD5+, and CD21+ by flow cytometry, which was analyzed in five ages of GF (45, 66, 87, 105 and 300 days) and the average of these evaluations compared with GA and GV. After this analysis was performed the delayed type hypersensitivity test and by the end of this, animals were anesthetized and submitted to an endoscopic procedure for collecting fragments of stomach and small and large intestines for histological analysis. P values ≤0.05 was considered significant and P values <0.1 as a trend. GF showed greater number of Bifidobacterium spp. and Cluster IV. GV presented an indication of reduced bacterial saccharolytic activity observed by the lower concentration of acetate, propionate, butyrate, and total volatile fatty acids which resulted in higher pH in the feces of this group. GF showed... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Luiz Edivaldo Pezzato / Coorientador: Luiz Roberto Furlan / Banca: Elisabeth Criscuolo Urbinati / Banca: Jesus Aparecido Ferro / Banca: Maria Célia Portella / Banca: Eduardo Gianini Abimorad / Resumo: A aquicultura brasileira apresenta-se como atividade comercial em franca ascensão e, dentre as espécies nativas, o pacu, Piaractus mesopotamicus, destaca-se como uma das mais cultivadas nas regiões Sul, Sudeste e Centro Oeste do Brasil. Contudo, à semelhança do que ocorre com as demais espécies de interesse comercial, a produção do pacu enfrenta problemas ao longo do processo produtivo, tais como a alta densidade populacional utilizada, fornecimento incorreto de rações e estresse, que resultam em redução da produtividade e aumento na taxa de mortalidade. Uma das estratégias estudadas para melhorar o manejo alimentar em peixes consiste na utilização da privação alimentar por tempo determinado com a finalidade de promover compensação do crescimento, durante o período de realimentação. Entretanto, informações relacionadas às respostas fisiológicas, de modulação celular e de possíveis alterações na microbiota intestinal provocada por este tipo de manejo ainda são discordantes. A compreensão destas informações é necessária para o desenvolvimento de estratégias que minimizem o estresse ocasionado pela privação alimentar. Diante do exposto, a proposta deste trabalho foi avaliar o impacto do jejum prolongado, seguido de curto período de realimentação, sobre os parâmetros fisiológicos, expressão de genes relacionados ao processo de crescimento e estresse, prevalência de determinados grupos bacterianos na mucosa e conteúdo intestinal, além da clonagem, identificação e validação de genes de referência para normalização de dados de expressão gênica em estudos com pacus. Os resultados obtidos demonstraram que o pacu apresenta grande capacidade de mobilização das reservas endógenas, porém a recuperação das mesmas é mais rápida em peixes de menor tamanho. O presente estudo apresenta as primeiras comparações experimentais para validação de genes de referência para o pacu. Os genes clonados... / Abstract: The Brazilian aquaculture is as a commercial activity on the rise. Among the native species, pacu, Piaractus mesopotamicus, stands out as one of the most reared in the southern, central and northeastern Brazil. However, similar to what occurs with other commercial species, the production of pacu experience problems during the production process, such as high population density used, incorrect food supply and stress, resulting in reduced productivity and increased mortality. One of the strategies investigated to improve the management of fish feeding is the use of dietary restrictions for a certain time to promote growth compensation during the refeeding period. However, information related to physiological responses and cell modulations caused by this type of management are still unknown. Understanding this information is necessary for the development of strategies to minimize the stress caused by food restriction. The purpose of this study was to evaluate the impact of prolonged fasting, followed by short refeeding on the physiological parameters, gene expression related to growth and stress, the prevalence of certain bacterial groups in the mucosa and intestinal content and cloning, identification and validation of reference genes for normalization of gene expression data in studies with pacu. The results showed that the pacu has great capacity for mobilization of endogenous reserves, but their recovery is faster in smaller fish. This study presents the first experimental comparisons for validation of reference genes for pacu. Cloned, sequenced and validated genes will be used in future studies of gene expression with this species. In addition, this study provides the first information about the changes in intestinal microbiota in pacu. The use of qPCR for the detection and quantification of specific bacterial groups proved to be an important tool for assessing changes in bacterial communities in the mucosa and intestinal contents of fish / Doutor

Orientador: Lucia Maria Carareto Alves / Banca: Rodrigo Matheus Pereira / Banca: Mariana Carina Frigieri / Resumo: O trabalho objetiva avaliar o papel da comunidade bacteriana na dinâmica dos sedimentos. No presente trabalho, compararam-se as comunidades bacterianas presentes em sedimentos de dois viveiros de piscicultura, um reservatório de água (V1) e o outro com condições de elevada carga orgânica (V4), os quais estão inseridos em um sistema sequencial com fluxo contínuo de água. As coletas de sedimentos foram realizadas em dois períodos distintos, um sendo na seca (Julho e Agosto/2012) e outro na chuva (Janeiro e Fevereiro/2012). A comunidade bacteriana foi avaliada através do sequenciamento do gene 16S rRNA. Os filos bacterianos permaneceram praticamente inalterados nas amostras V1 comparadas nas duas épocas estudadas. Nas amostras do V4 observou-se variação na frequência dos organismos encontrados em relação às diferentes coletas. A predominância em V1 foi dos filos Firmicutes seguido do Proteobacteria, Acidobacteria e Actinobacteria. No V4, o maior número de sequências encontradas pertencia ao filo Proteobacteria, seguido de Acidobacteria, Firmicutes, Actinobacteria, Chloroflexi, Nitrospira, Gemmatimonadetes e TM7. A comparação da população bacteriana dos dois viveiros estudados em diferentes épocas mostrou que as bactérias variam de acordo com as condições climáticas e estão intimamente interligadas com a concentração de nutrientes do local. Estas diferenças são importantes na elucidação do papel desenvolvido pelos procariotos na dinâmica dos sedimentos / Abstract: The aim of this study was identify the bacterial communities in dynamic of the sediment. In this study, we compared the bacterial communities present in sediment of two fish farm pond a used as water reservoir (V1) and the other with conditions of high nutrient load (V4), which are inserted in a sequential system with continous water flow (six ponds). The sediment sampling were conducted in two distinct periods one in dry season (July and August/2012) and another in the rain (January and February/2012). The bacterial community was assessed by sequencing the 16S rRNA. Through this data we observed in V1 regardless of time of year the bacterials phyla remained virtually unchanged.In V4 samples, was observed a variation in the frequency of organisms found in relation to different collections. In V1 was the predominance of the Phylum Firmicutes followed Proteobacteria, Acidobacteria and Actinobacteria. The largest number of sequences found at V4 belonged to the Proteobacteria phylum followed Acidobacteria, Firmicutes, Actinobacteria, Chloroflexi, Nitrospira, Gemmatimonadetes and TM7. A comparison of the bacterial population of the two ponds studied at different times showed that the bacteria at these sites varies according to the climatic conditions and are closely linked with nutrient concentration local. These differences are important in elucidating the role played by prokaryotes in the sediment dynamics / Mestre

Orientador: Manoel Victor Franco Lemos / Coorientador: Alessandro de Mello Varani / Banca: Lucia Maria Carareto Alves / Banca: Luciano Takeshi Kishi / Resumo: O entomopatógeno Bacillus thuringiensis têm se destacado no controle biológico de insetos-praga como alternativa viável em substituição aos inseticidas químicos. A bactéria é caracterizada pela produção de cristais protéicos em concomitância com o processo de esporulação. Esses cristais são formados por polipeptídeos que apresentam propriedade entomopatogênica frente a diversas ordens de insetos, porém são inócuos ao meio ambiente. Dessa forma, o conhecimento da diversidade de genes de B. thuringiensis presente no solo é de extrema importância para compreender sua distribuição ecológica e seus efeitos em habitats diferentes. Em paralelo, o uso de técnicas de análise envolvendo metagenômica são propostas para estudar comunidades microbianas presentes no meio ambiente, permitindo inclusive o acesso a microrganismos incultiváveis. A partir desta proposta o presente trabalho analisou a diversidade de genes codificadores das proteínas entomopatogênicas de B.thuringiensis em seqüências metagenômicas de DNA extraído de solo com cultivo de cana-de-açúcar e solo de floresta nativa em estações climáticas distintas. Foi possível identificar linhagens que possivelmente deram origem ao material genético via plataforma MG-RAST e os genes codificadores das proteínas entomopatogênicas foram identificados utilizando o software BLAST. Os resultados evidenciam uma provável influência das estações climáticas sobre a diversidade dos genes obtidos por este tipo de análise / Abstract: The entomopathogen Bacillus thuringiensis is the most used alternative to control pests as opposed to the use of chemical products. This bacterium is able to produce crystals protein with entomopathogenic properties coded by the cry genes during its sporulation phase. The knowledge of the diversity of cry genes found in B. thuringiensis that is considered a soil bacterium is of extreme importance to allow us to understand the ecological distribution and its potential effects on the environment. Aside from this, the use of metagenomics techniques are being proposed to study microbial communities, as a way to overcame uncultivable microorganism. Based on such proposition this work aimed to evaluate the presence of B. thuringiensis entomopathogenic protein coding genes from metagenomic DNA extracted from soil samples on which sugar-cane has been cultivated as well as native forest soil samples obtained during different seasons of the year. It was possible to identify some strains of B. thuringiensis using the platform MG-RAST and their respective cry genes using the software BLAST. The obtained results allowed us to consider the influence of the climate on the diversity of cry genes that could be recognized by this type of analysis / Mestre

Orientador: Katia Sivieri / Banca: Daniela Cardoso Umbelino Cavallini / Banca: Fernanda Lopes Kinouchi / Resumo: O câncer de cólon é um dos tipos de cânceres mais prevalentes e, sua etiologia pode estar relacionada à fatores genéticos, ambientais e tipo de dieta. Por isso, o setor de alimentos investe cada vez mais no desenvolvimento de alimentos funcionais e entre esses, se destacam as bactérias probióticas e ingredientes prebióticos. O objetivo desta pesquisa foi avaliar os efeitos do consumo de probiótico (Lactobacillus acidophilus CRL 1014) e prebiótico (extrato de yacon) sobre a microbiota intestinal de animais induzidos quimicamente ao câncer de cólon. Foram utilizados 175 ratos machos Wistar divididos aleatoriamente em cinco tratamentos: Tratamento I-GCN: animais controle negativo (animais sadios que consumiram apenas a ração comercial); Tratamento II-GCP: animais controle positivo (induzidos quimicamente ao câncer de cólon e que consumiram apenas a ração comercial); Tratamento III-GPRO: (induzidos quimicamente ao câncer de cólon e que consumiram ração comercial + L. acidophilus CRL 1014); Tratamento IV-GPRE: (induzidos quimicamente ao câncer de cólon e que consumiram ração comercial + yacon); Tratamento V-GS: (induzidos quimicamente ao câncer de cólon e que consumiram ração comercial + L. acidophilus CRL 1014+ yacon). Os animais induzidos foram inoculados semanalmente com 1,2 dimetilhidrazina durante 2 semanas, sendo 2 induções semanais na concentração de 40mg/kg de peso. O L. acidophilus CRL 1014, na concentração de 109UFC/mL foi administrado aos animais na quantidade de 3 ml/kg de peso/dia, já o extrato aquoso de yacon foi administrado na quantidade de 10% de FOS/ração. Foram realizadas análises microbiológicas dos gêneros Enterococcus spp., Lactobacillus spp., Bifidobacterium spp., Enterobactérias, Clostridium spp., Bacteroides spp., aeróbios facultativos e aeróbios totais por método convencional. Foi realizada a análise de PCR- DGGE para o gênero Lactobacillus spp., além da produção de ácidos ... / Abstract: Colon cancer is one of the most prevalent types of cancer, and its etiology may be related to genetic, environmental factors and type of diet. Therefore, the food industry invests in the development of functional foods, such as probiotic bacteria and prebiotic ingredients. This research was evaluate the effects of consumption of probiotic (Lactobacillus acidophilus CRL 1014) and prebiotic (yacon extract) on the gut microbiota on 1.2 dimethylhydrazine (DMH) induced colon carcinogenesis in Wistar rats. The animals were randomly allocated into five groups (n=35): Treatment I-GCN: negative control animals (healthy animals + commercial feed); Treatment II-GCP: positive control animals (DMH induced + commercial feed); Treatment III-GPRO: (DMH induced + commercial feed + L. acidophilus CRL 1014); Treatment IV-GPRE: (DMH induced + commercial feed + yacon); Treatment V-GS: (DMH induced + commercial feed + L. acidophilus CRL 1014+ yacon). The induced animals were inoculated with DMH twice weekly for 2 weeks at a concentration of 40mg/kg weight. The probiotic, L. acidophilus CRL 1014 was administered in 109CFU/mL (3 ml/kg body weight) and the yacon extract (10% FOS/ feed),once daily. Microbiological analysis of Enterococcus spp., Lactobacillus spp., Bifidobacterium spp., Enterobacteriaceae, Clostridium spp., Bacteroides spp., total aerobes and facultative anaerobes were performed by plate count. Analysis of PCR-DGGE for the lactobacilli community, short-chain fatty acids (SCFA) production, ammonium ions and fecal pH were performed. The viable counts showed that the Enterococcus spp., at the end of the experimental protocol, the treated groups showed higher than controls count. The counts of Enterobacteriaceae and Bacteroides spp., were higher to GCP. There was an increase of Lactobacillus spp. for GPRO and Bifidobacterium ssp. for GPRE and GS. All groups increased counts facultative anaerobes, and GPRO was the only group that reduced total aerobes ... / Mestre

Orientador: Maurício Bacci Júnior / Coorientador: André Rodrigues / Banca: Lara Durães Sette / Banca: Fernando Dini Andreote / Resumo: A associação entre formigas cortadeiras da tribo Attini e micro-organismos é reconhecidamente vasta. No presente trabalho verificou-se a presença de variados táxons de fungos relacionados às operárias da formiga cortadeira Atta laevigata. Operárias foram coletadas do interior do ninho e na trilha de forrageio,nas cidades de Rio Claro e Bauru, e parte dessas formigas passaram por um procedimento de limpeza para retirada de micro-organismos externos ao corpo e a outra parte não foi submetida à lavagem.Dos dois grupos o DNA foi extraído e amplificado para a região rRNA ITS de fungos. Essa região foi sequenciada e utilizada na identificação de unidades taxonômicas moleculares operacionais (MOTUs). Cinquenta táxons moleculares foram identificados, sendo vinte contaminantes eventuais, facilmente removíveis pela limpeza, e 30 simbiontes internos ou mais fortemente aderidos ao corpo das operárias. Dentre esses 30 táxons, quatro (Cladosporium cladosporioides, Epicocum sp., Hypocrea virens e Nigrospora sp.) foram identificados nas duas localidades geográficas e em grande quantidade, sendo candidatos a simbiontes mais estáveis e funcionais das formigas. Entre os demais táxons prospectados houve grande frequência de Trichosporon chiarelli e Coriolopsis rigida. Esse trabalho demonstroua ampla capacidade das formigas adquirirem e transportarem uma variada microbiota e consiste num passo inicial para elucidar o papel dos fungos associados ao corpo de A. laevigata / Abstract: There is a deep and widely known association among Attini ants and microorganisms. In this paper it was investigated the presence of various taxa of fungi related to the Attini leaf-cutter antAtta laevigata. Leafcutter ants were collected from inside the nests and foraging trails in two different localities (Rio Claro and Bauru), and they were washed in order to remove external microorganisms from their bodies. Leafcutters which have not been washed also were used. Ant DNA was extracted and purifiedand the fungal rRNA ITS region was amplified. PCR products were cloned and sequenced in order to identify fungal species based on the operationalmolecular taxonomic unit (MOTU) criteria. As a result, 50 fungal species were recognized; 20 of them were identified as casual contaminants and as 30 were found as symbionts more tightly adhered to ant body. Four out of these 30 symbionts (Cladosporium cladosporioids, Epicocum sp., Hypocrea virens and Nigrospora sp.) were identified in the two geographic localities and in large quantity. Thus, these are candidates to a more stable and functional symbionts of the ants. There were large quantity of the Trichosporon chiarelli and Coriolopsis rigida among the prospected ants. This paper shows the enhanced capacity of the ants to acquiring and transporting a varied of fungi and it is in an initial point to elucidate the role of fungi associated to the body ofA. laevigata / Mestre

O guaraná (Paullinia cupana) é uma planta nativa da América do Sul, e suas sementes tem sido utilizadas por tribos amazônicas desde antes da colonização. O extrato de guaraná é consumido popularmente nos dias de hoje, entretanto pouco se sabe sobre a relação desse extrato com a microbiota intestinal. A microbiota possui um papel central na absorção de nutrientes da dieta e na regulação do metabolismo energético, sendo modificada na obesidade. A microbiota intestinal também é afetada pelo consumo de compostos vegetais, sendo muitas vezes regulada positivamente por dietas ricas em polifenóis. Todavia, o consumo de extratos vegetais pode gerar um desfecho tóxico, assim como alterações negativas na microbiota. O efeito de extratos ricos em compostos secundários deve ser estudado individualmente. Nesse trabalho avaliamos as alterações no ecossistema intestinal causadas pelo extrato comercial de sementes do Guaraná em animais saudáveis e no contexto da obesidade.Induzimos a obesidade em animais através de uma dieta que mimetiza a dieta ocidental, caracterizada por uma maior quantidade de gordura, sal e açúcar refinado, e uma menor quantidade de fibras. Os animais também foram submetidos ao tratamento com um extrato comercial de Guaraná, cafeína ou salina. A disbiose intestinal foi medida no conteúdo cecal através da amplificação e sequenciamento da porção ribossomal 16S. Também foi medida a atividade enzimática no fígado, rins e intestino delgado, assim como a quantidade de citocinas proinflamatórias no soro. A dieta obesogênica gerou um aumento no ganho de peso e no acúmulo de gordura dos animais comparada com a dieta Chow. Tanto o Guaraná quanto a cafeína não foram capazes de reverter o ganho de peso e o acúmulo de gordura. Também observamos a diminuição da atividade da enzima CAT no rim nos animais que receberam guaraná, independente da dieta. A dieta obesogênica induziu alterações na microbiota intestinal semelhantes às da obesidade, diminuindo a proporção de Bacteroidetes sobre Firmicutes, aumentando o gênero Mucispirilum e diminuindo os gêneros Lactobacillus e Bifidobacterium. Os tratamentos com guaraná e cafeína na dieta Chow diminuíram a proporção B/F, assim como o gênero Bifidobacterium. Observamos um aumento no filo Proteobacteria nos animais do grupo controle obeso. Esse aumento foi revertido pelo tratamento com guaraná. Analisando os gráficos de clusterização e landscape, observamos uma maior distância entre a microbiota dos animais que receberam dietas diferentes do que a dos animais que receberam tratamentos diferentes. Os tratamentos com guaraná ou cafeína modificaram o ecossistema intestinal, mas sem a capacidade de diminuir o acúmulo de gordura ou o ganho de peso. A maior alteração na microbiota foi devido à dieta obesogênica e não aos tratamentos, mostrando que os efeitos anti-obesogênicos do guaraná observados em outros estudos provavelmente não são via microbiota intestinal. / Guarana (Paullinia cupana) is a plant native of South America, and its seedshave been used by Amazonian tribes since before colonization. Guarana extract is consumed popularly today, however little is known about the interactions of this extract with the intestinal microbiota. The gut microbiota plays a central role in the absorption of nutrients from the diet and in the regulation of energy metabolism, being altered in obesity. The intestinal microbiota is also affected by the consumption of plant metabolites and is often regulated positively by diets rich in polyphenols. However, the consumption of plant extracts can generate a toxic outcome, as well as negative changes in the microbiota. Therefore, the effect of plant extracts should be studied individually. In this work, we evaluated the changes in the intestinal ecosystem caused by the administration of a commercial extract of Guaraná seeds in healthy animals and in the context of obesity. We induced obesity in animals through a diet that mimics the western diet, characterized by a higher amount of fat, salt and refined sugar, and a smaller amount of fiber. The animals were also treated with a commercial extract of Guarana, caffeine or saline. Intestinal dysbiosis was evaluated by cecal content, amplification and sequencing of the 16S ribosomal portion. The antioxidant enzymatic activity of the liver, kidney and small intestine was measured as well as the concentration of pro-inflammatory cytokines in the serum. The obesogenic diet increased the weight gain and fat accumulation of the animals compared to the Chow diet. Both Guarana and caffeine were unable to reverse weight gain and fat accumulation. We observed a lower activity of the Glutathione Peroxidase enzyme in the kidney and small intestine in the animals that received obesogenic diet compared to the Chow diet, regardless of the treatment. We also observed the decrease of Catalase enzyme activity in the kidney of animals that received Guarana, regardless of diet. The obesogenic diet induced changes in the intestinal microbiota similar to other works in literature, reducing the proportion of Bacteroidetes/Firmicutes (B/F), increasing the genus Mucispirilum and decreasing the genera Lactobacillus and Bifidobacterium. Guarana and caffeine treatments in the Chow diet decreased the B/F ratio, thus the Bifidobacterium genus. We observed an increase in the phylum Proteobacteria, in the animals of the Obese Control group. This increase in the phylum Proteobacteria, was reversed by the treatment with Guaraná. Analyzing the phylogenetic proximity charts and landscape, we observed a greater distance between the animals that received different diets than animals that received different treatments. Treatments with guarana or caffeine modified the intestinal ecosystem, but without the ability to decrease fat accumulation or weight gain. The major change in the microbiota was due to the obesogenic diet and not to the treatments, showing that the antiobese effects of guarana observed in other studies probably are not via intestinal microbiota.

O armazenamento de saliva para avaliação da microbiota bucal muitas vezes é necessário, principalmente em estudos epidemiológicos. O objetivo desse estudo foi avaliar a viabilidade e a variabilidade da microbiota bucal, de amostras de saliva armazenadas em temperaturas de -20ºC e em nitrogênio liquido (N2L), após 3 e 10 meses. Uma alíquota de cada amostra de saliva estimulada, usando goma de mascar sem açúcar, foi processada em até 45 minutos após a sua coleta. As amostras foram armazenadas seguindo três métodos diferentes: no primeiro método, as amostras de saliva foram preparadas com glicerol 10% (G) e mantidas a -20ºC durante 8 horas e então armazenadas em botijão com N2L; no segundo foi utilizado o mesmo protocolo, porém, sem glicerol; no terceiro método as alíquotas foram preparadas com glicerol 10% e mantidas a -20ºC. Após semeadura das amostras e incubação o número de unidades formadoras de colônias (UFC) foi determinado e uma média de 30 colônias de cada amostra foi identificada por meio de provas bioquímicas. Não houve diferença significativa na contagem de UFC/mL das amostras processadas imediatamente após a coleta (2,1 x 107 UFC/mL) e após 3 meses de armazenamento em N2L (G) (4,5 x 106 UFC/mL), N2L (1,6 x 106 UFC/mL), e -20ºC (2,2 x 106 UFC/mL). Porém, após 10 meses de preservação em N2L (G) (4,5 x 105 UFC/mL), e N2L (2,3 x 105 UFC/mL), observou-se uma redução (p=0.0183) do número de UFC/mL em comparação com a avaliação inicial. Não houve diferença significativa no número de UFC nas amostras armazenadas com e sem crioprotetor. A determinação da variabilidade da microbiota bucal mostrou que as bactérias presentes nas amostras frescas dos gêneros Streptococcus, Staphylococcus e Bacillus mantiveram-se nos diferentes tempos de avaliação, mesmo que em diferentes concentrações. Baseado nos resultados obtidos pode-se sugerir que preservação de saliva a -20ºC e a -196ºC, são métodos de armazenamento eficazes, para avaliação da microbiota bucal, por um período de 3 e 10 meses. / Saliva storage for oral microbiota evaluation often is required, especially in epidemiologic studies. The aim of the present study was to assess the effects of different storage methods upon viability and the variability of the oral microbiota in saliva samples. One aliquot of each saliva sample was processed until 45 minutes after collection. Saliva was stimulated using chewing gum sugar free. The samples were storage following three different methods: in the first method, aliquots of saliva were mixed with glycerol 10% (G) and maintained at -20ºC for 8 hours and then stored in N2L; the second followed the same protocol without glycerol; and in the third method aliquots were prepared with glycerol 10% and maintained at -20ºC. From each sample the number as the colony-forming units (CFU/mL) was determined and 30 colonies were chosen and cells were identified by biochemical assays. There was not statistically significant difference on the number of CFU/mL of samples processed immediately after de collection and after 3 months as storage. However, after 10 months of storage in N2L, there was a decrease in the number of CFU/mL (p=0.0183) in comparison with the initial evaluation, and the number of CFU/mL in the samples stored with and without glycerol did not showed statistically significant difference. Although in different percentages of cell number, the oral microbiota variability evaluation showed that Streptococcus, Staphylococcus and Bacillus were maintained in the different times of evaluation. Based on our results, it is possible to suggest that the preservation of saliva in -20ºC and -196ºC are efficient storage methods for oral microbiota evaluation for a period of 3 and 10 months.

Submitted by João Arthur Martins (joao.arthur@ufpe.br) on 2015-04-10T15:12:38Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Joyce Gomes de Moraes.pdf: 1543049 bytes, checksum: 49ce32bd65ac7688e9a25b6740f8b854 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-10T15:12:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Joyce Gomes de Moraes.pdf: 1543049 bytes, checksum: 49ce32bd65ac7688e9a25b6740f8b854 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014-06-25 / A Constipação Intestinal Crônica Funcional (CICF) é uma entidade nosológica complexa e multifatorial. Constitui a maior causa de constipação intestinal na população infantil, com frequência significativa em lactentes. Estudos mostram que crianças com CICF apresentam a microbiota alterada, sendo o baixo teor de fibras na dieta considerado como uma possível explicação para esse achado. O nosso objetivo foi: comparar crianças constipadas e não constipadas quanto à microbiota fecal, utilizando como modelo os gêneros Bifidobacterium e Lactobacillus; analisar o consumo de frutas, legumes, vegetais e guloseimas nos dois grupos de crianças e verificar se houve associação do tipo de parto, presença de aleitamento materno, prematuridade, história familiar de constipação e a presença de CICF. As crianças foram recrutadas no Centro de Saúde Antônio Luís de Souza (CSALS), em Camaragibe-PE. Foram considerados casos crianças entre seis e 36 meses de idade que preencheram os critérios de Roma III para CICF. O grupo comparativo tinha a mesma faixa etária. O grupo caso foi formado por 39 crianças e o comparativo, por 40 crianças. As mães das crianças responderam a formulários sobre eventos do pré-natal e pós-natal imediato, aleitamento e condições econômicas. Foi realizada avaliação nutricional e da ingestão alimentar das crianças, sendo a última por intermédio de um questionário de frequência alimentar. As crianças tiveram amostras de fezes coletadas e analisadas por SYBR® Green. Não houve diferença estatística entre o consumo de frutas, legumes, verduras e guloseimas entre os grupos. As crianças constipadas consumiram significativamente mais produtos lácteos (p> 0,001) quando comparadas às crianças não constipadas. Não houve diferença estatística quanto ao teor de Bifidobacterium por miligramas de fezes entre os grupos, as crianças constipadas apresentaram um teor significativamente menor de Lactobacillus por miligramas de fezes (p=0,015) quando comparadas às crianças não constipadas. Foi verificado ainda que entre as crianças constipadas uma maior freqüência de parto cesáreo, menor tempo de aleitamento materno e história familiar para constipação positiva.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-11-08T15:35:28Z No. of bitstreams: 1 Torquato Marques dos Santos Neto.pdf: 904299 bytes, checksum: c17075235080d94df5a658dc133c7707 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-08T15:35:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Torquato Marques dos Santos Neto.pdf: 904299 bytes, checksum: c17075235080d94df5a658dc133c7707 (MD5) Previous issue date: 2010-06-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The curdle Cheese traditionally is produced in artisan way in small properties located in the States northeast Brazilian from raw milk without addition of cultures starters. The objective of this work was to characterize microbiot of the curdle cheese produced from raw milk of the milk basin of the State of Pernambuco, north-eastern of Brazil and to test alternative the ohmic heating while of pasteurization of the cow milk to be used for the production of the curdle cheese. A total of 500 bacteries had been isolated in the 5 studied cities, being that 370 samples (74%), had presented characteristics of acid lactic bacteries (BALs). Amongst the BALs the Lactococcus lactis presented the frequency of 78,38% in relation to excessively; Enterococcus faecalis (18.92%) and Leuconostoc spp (2.77%). The BALs identified by morphotintorials testsand biochemists (84.21%) had been confirmed by sequencialting of the gene 16S rRNA. The Bacillus cereus enters the not acid lactic bacter got 42.31% of frequency of the averages observed in the studied cities. After to be dealt with by ohmic heating, was observed the absence to fosfatasis and presence to peroxidasis beyond the reduction the microbial load. From the joined Portary in the 146 was evidenced that the cheeses if do not adjust the denomination “average humidity” (of 36,0 45,9g/100g) defined for the curdle cheese for the Resolution in the 7 of 28 of November of 2000 of the Ministry of Agriculture and the Supplying, characterizing themselves as cheeses of high humidity (between 46,0 and 54,9g/100g, in accordance with, of 07 of March of 1996). It was a bigger acceptability of the cheese produced from ohmic if compared milk with the cheese produced from pasteurized milk. The knowledge of microbiot of theartisan curdle cheese could be an initial step to be identified as product of geographic indication (GI). The results indicate that the ohmic heating could be introduced in the process of pasteurization of milk without influencing its quality negative. / O Queijo de coalho é tradicionalmente produzido de modo artesanal em pequenas propriedades localizadas nos estados do Nordeste brasileiro a partir do leite cru sem adição de culturas iniciadoras. O objetivo deste trabalho foi caracterizar a microbiota do queijo de coalho produzido a partir de leite cru em 5 municípios da bacia leiteira do Estado de Pernambuco, no Nordeste do Brasil e testar o aquecimento ôhmico enquanto alternativa de pasteurização do leite de vaca a ser utilizado para a produção do queijo de coalho. Um total de 500 bactérias foi isolado nos municípios estudados, sendo que 370 amostras (74%), apresentaram características de bactérias ácido – lácticas (BALs). Dentre as BALs o Lactococcus lactis apresentou a frequência de 78,38% em relação às demais; Enterococcus faecalis (18,92%) e Leuconostoc spp(2,77%). Foram escolhidas aleatoriamente 38 amostras de BALs identificadas por provas morfotintoriais e bioquímicas, destas 84,21% foram confirmadas por sequenciamento do gene 16S rRNA. Entre as bactérias não ácido láticas o Bacillus cereus obteve 42,31% de freqüência das médias observadas nos municípios estudados. O leite cru, após ser submetido ao aquecimento ôhmico apresentou ausência da fosfatase e presença da peroxidase, além da diminuição da carga microbiana. A partir dos dados encontrados para os queijos produzidos pelo leite obtido após aquecimento ôhmico foi constatado que os mesmos não se enquadram na denominação “média umidade” (de 36,0 a 45,9g/100g) definida para o queijo de coalho pela Resolução no7 de 28 de novembro de 2000 do Ministério da Agricultura e do Abastecimento, caracterizando-se como queijos de alta umidade (entre 46,0 e 54,9g/100g, deacordo com a Portaria no 146, de 07 de março de 1996). Houve uma maior aceitabilidade do queijo produzido a partir do leite ôhmico se comparado com o queijo produzido a partir do leite pasteurizado. O conhecimento da microbiota do queijo de coalho artesanal poderá ser um passo inicial para ser identificado como produto de indicação geográfica (IG). Os resultados indicam que o aquecimento ôhmico poderá ser introduzida como processo de pasteurização de leite sem influenciar negativamente a sua qualidade.