Submitted by Pedro Barros (pedro.silvabarros@ufpe.br) on 2018-08-17T22:49:50Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Livia Lais de Santana Silva.pdf: 1382903 bytes, checksum: e25b848c35a8e9115597040262fcf804 (MD5) / Approved for entry into archive by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-08-24T22:38:29Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Livia Lais de Santana Silva.pdf: 1382903 bytes, checksum: e25b848c35a8e9115597040262fcf804 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-24T22:38:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) DISSERTAÇÃO Livia Lais de Santana Silva.pdf: 1382903 bytes, checksum: e25b848c35a8e9115597040262fcf804 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / CAPES / A WSMoL (do inglês water-soluble Moringa oleifera lectin) é uma lectina (proteína que reconhece carboidratos) proveniente das sementes da Moringa oleifera, as quais são utilizadas no tratamento de água. Algumas espécies de insetos podem atuar como vetores de doenças ou pragas agrícolas. O mosquito Aedes aegypti é o vetor da dengue e sabe-se que o extrato de sementes de M. oleifera e WSMoL são tóxicos para as larvas deste inseto. O extrato de sementes e WSMoL apresentaram uma concentração letal a 50% das larvas após 24 horas de exposição (CL₅₀) igual a 0,27 mg/mL e 0,197 mg/mL, respectivamente. Entretanto, para uma adequada utilização desse inseticida natural se faz necessário a realização de testes ecotoxicológicos a fim de avaliar os possíveis efeitos causados em organismos aquáticos não-alvo. Neste trabalho, foi avaliada a toxicidade de extrato de semente e WSMoL para larvas de Danio rerio, espécie de peixe muito utilizada na Ecotoxicologia devido à facilidade de observação de seu comportamento e desenvolvimento e serem sensíveis na fase larval. As larvas de D. rerio foram expostas a diferentes concentrações do extrato de sementes ou WSMoL por 168 horas (7 dias),tendo sido avaliados efeitos letais por meio da determinação da taxa de mortalidade. Além disso, efeitos sub-letais comportamentais e bioquímicos sobre a velocidade natatória das larvas e atividade da acetilcolinesterase, respectivamente,também foram avaliados. Foi observado um efeito dose dependente na taxa de mortalidade de D. rerio tanto para o extrato quanto para a lectina purificada. Após 24 horas, os valores de CL₅₀/₂₄h foram 0,365 e 0,21 mg/mL para extrato e WSMoL, respectivamente. Esses resultados mostram que a susceptibilidade das larvas de D. rerio a WSMoL foi similar a das larvas de A. aegypti (6% de diferença nos valores de LC₅₀/₂₄h) enquanto extrato é aproximadamente 34% mais potente para as larvas do mosquito. Após 96 horas, os valores de CL₅₀/₂₄h para extrato e WSMoL foram 0,031 e 0,135 mg/mL, respectivamente. Com relação à velocidade natatória dos indivíduos expostos ao extrato, houve um aumento significativo (p < 0,05) após incubação nas concentrações 0,03 e 0,27 mg/mL e uma diminuição para larvas incubadas com 0,81 mg/mL por esse mesmo período. Para incubação por 168 h, a velocidade foi maior que no grupo controle para os tratamentos a 0,27 e 0,81 mg/mL. Nos ensaios com WSMoL, a média da velocidade de natação de larvas expostas à lectina por 72 h foi significativamente (p < 0,05) menor que no controle nos tratamentos com 0,1 e 0,2 mg/mL. Para 168 h, a velocidade foi também menor que no controle no tratamento a 0,1 mg/mL enquanto para as concentrações de 0,02 e 0,05 mg/mL foi similar (p > 0,05) ao controle.Larvas expostas por 168 h ao extrato aquoso na concentração 0,81 mg/mL e a WSMoL na concentração de 0,1 mg/mL apresentaram uma redução significativa na atividade da acetilcolinesterase. Levando em consideração os resultados obtidos, esses inseticidas naturais devem ser usados cuidadosamente, uma vez que as concentrações necessárias para o controle de A. aegyptiforam podem também causar efeitos tóxicos letais e sub-letais para organismos não-alvo como o peixe D. rerio. Recomenda-se o uso em recipientes de armazenamento de água, e não em ecossistemas aquáticos como lagoas e lagos. / Some insect species can act as vectors of diseases or as agricultural pests. The WSMoL (water soluble Moringa oleifera lectin) is a lectin (protein that recognizes carbohydrate) derived from the seeds of Moringa oleifera, which are used in water treatment. The mosquito Aedes aegypti is the vector of dengue and it is known that M. oleifera seed extract and WSMoL are toxic to larvae of this insect. The seed extract and WSMoL showed a lethal concentration to 50% of the larvae after 24 hours of exposure (LC₅₀) equal to 0.27 mg/mL and 0.197 mg/mL, respectively. However, for proper use of these natural insecticides, it is necessary to carry out ecotoxicological tests in order to assess the possible effects on non-target aquatic organisms. In this work, the toxicity of seed extract and WSMoL to zebrafish (Danio rerio) larvae was evaluated. Danio rerio is a fish species very used in Ecotoxicology due to the ease of observation of its behavior and development and for being sensitive in the larval stage. D. rerio larvae were exposed to different concentrations of the seed extract or WSMoL for 168 h (7 days) and the lethal effects were assessed by determining the mortality rate. Additionally, behavioral and biochemical sublethal effects on larval swimming velocity and acetylcholinesterase activity, respectively, were also evaluated. It was observed a dose dependence effect on D. rerio mortality rate for both the extract and the purified lectin. After 24 h, the values of LC₅₀/₂₄h were 0.365 and 0.21 mg/mL to extract and WSMoL, respectively. These results show that the D. rerio larvae susceptibility to the WSMoL was similar to A. aegypti larvae (6% difference in LC₅₀/₂₄h values) while extract was about 34% more potent against mosquito larvae. After 96 h, the values of LC₅₀/₂₄h for extract and WSMoL were 0.031 and 0.135 mg/mL, respectively. Concerning the swimming velocity of individuals exposed to the extract there was a significant increase (p <0.05) after incubation for 72 h at 0.03 and 0.27 mg/mL and a decrease for larvae incubated at 0.81 mg/mL for this same period. For 168 h incubation, the velocity was higher than control group for treatments at 0.27 and 0.81 mg/mL. In tests with WSMoL, the average swimming velocity of larvae exposed to the lectin for 72 h was significantly (p <0.05) lower than the control on treatments with 0.1 and 0.2 mg/mL. For 168 h, the velocity was also lower than the control on treatment with 0.1 mg/mL, and with concentrations of 0.02 and 0.05 mg/mL the values were similar (p>0.05) to the control. Larvae exposed for 168 h to the aqueous extract at a concentration of 0.81 mg/mL and WSMoL at 0.1 mg/mL showed a significant reduction in the activity of acetylcholinesterase. Considering the results, these natural insecticides must be used carefully used since the concentrations necessary for the control of A. aegypti also can cause lethal toxic effects and sub-lethal to non-target organisms such as D. rerio fish. It is not recommended to use these natural insecticides in aquatic ecosystems such as ponds and lakes, but in water storage containers.

Effects of feeding Moringa oleifera leaf meal as an additive on growth performance of chicken, physico- chemical shelf-life indicators, fatty acids profiles and lipid oxidation of broiler meat The main objective of the study was to determine the effect of M.oleifera leaf meal (MOLM) as an additive on growth performance, carcass characteristics, physico-chemical shelf-life indicators (colour, ultimate pH, driploss), fatty acids profiles and lipid oxidation of meat from broilers. A total of 432 1day old unsexed broiler chicks (Aviane 48) were randomly allocated to four dietary treatments (TRTS) in 72 cages. There were 18 cages per treatment and each cage allocated 6 chicks. Water and feed was provided at ad libitum. The feeding phases were, prestarter (0-7 Days), starter (8-18 Days), grower (19-28 Days), finisher (29-35 Days). The four TRTS contained graded levels of MOLM at 1000g/ton, 750g/ton, 500g/ton, and 0g/ton (control), respectively. The birds were slaughtered at 35 days of age. Breast muscles were sampled for meat, ultimate pH (pHu ), colour, drip loss over a 7 days shelf-life test. After each day’s test sub-samples were dipped in liquid nitrogen and kept at -180 C for thiobarbituric acid reactive substances determination. On Day1 and Day 7 extra sub-samples were also kept at -180 C for fatty acids analysis.The TRTS had no effect on average feed intake (AFI), feed conversion efficiency (FCE), and on average daily gain (ADG). Slaughter weight (SW), carcass weight (CW), dressing percentage and gizzard weight (GW) values were similar in all TRTS. Liver weight (LW), heart weight (HW), and gastro-intestinal fat (GIF) differed in all the TRTS, with treatment 2 having the highest value of HW (28.3±2.55), and LW (44.2±1.60) was the highest on treatment 4 . The pH values in all TRTS were constant from Day1 to Day5, reached peak on Day6, and then declined on Day7. Meat from broilers given treatment 1 with MOLM (1000g/ton) had the highest lightness (L*) values. The redness (a*) values were the highest in meat from treatment 2 (750g/ton MOLM). Treatments had no effect on yellowness (b*) values and on drip loss of the breasts. During storage L* values were high from Day1 to Day5 and decreased from Day6 to Day7. Drip loss increased with storage time as expected. Treatment 4 (control) had the highest proportions of poly-unsaturated fatty acids (PUFA) (30.3±1.87). Treatment 1 (1000g/ton) had the highest proportion of saturated fatty acids (SFA) (60.9±1.87). Treatment 1 (1000g/ton) had the highest proportion of SFA (60.9±4.30). Treatment 2 (750g/ton) had the highest n-6/n-3 ratio than other TRTS. Days had no effect (P>0.05) on PUFA, SFA, and n-6/n-3 ratio. Treatment 1 had a highest amount of malondialdehyde (MDA), treatment 4 had no effect (P>0.05) on MDA . Storage time had an effect (P<0.05) on MDA levels, except for on Day1 and Day7. Day2 had the highest amount of MDA (0.7±0.08). The use of MOLM as an additive in broiler diets reduced lipid oxidation in meat, and maintained the quality of the broiler meat during storage. It also did not have any adverse effects on the growth performance of broilers. Therefore, it has the potential to be used as an additive in broiler diets.

Trabajo de suficiencia profesional / Este proyecto de tesis surge al comprobar la existencia de toneladas de moringa disponibles en el Perú y el incremento de producción de la misma que desafortunadamente no se vincula con la demanda nacional de aquella; debido al desconocimiento, escasa valoración y el hábito de consumo poco desarrollado de nutracéuticos en el país, que creemos es una de las formas de consumo más coherentes con las potencialidades de la moringa (como nutracéutico). EE.UU., por otro lado, al representar uno de los mercados más competitivos en cuanto a la comercialización de nutracéuticos creímos podría dar respuesta a tal disyuntiva. Este informe, por tanto, tuvo como objetivo general, determinar la existencia de una oportunidad de mercado para la moringa oleífera procedente de Perú en el segmento de nutracéuticos de EE.UU. Este a su vez fue dividido en 7 objetivos específicos, que en resumen buscaron demostrar las cualidades de la moringa como producto nutracéutico además de evaluar la viabilidad del mercado a ofertarla en temas de reglamentación comercial; volumen, estructura y crecimiento del mismo; competencia; precios y estructura de acuerdo a los del segmento; canales de distribución más rentables y comportamiento de consumidores finales. Cada uno de ellos fue medido de forma distinta pero que en conjunto respondieron a variados análisis de entrevistas de expertos en temas de moringa, análisis cuantitativos para temas de proyecciones y datos claves procesados de estudios norteamericanos del segmento de nutracéuticos en la actualidad, entre otros. Así pues, se obtuvo como conclusión final la efectiva oportunidad de mercado por cada uno de estos objetivos.

Made available in DSpace on 2014-06-12T17:38:39Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo2455_1.pdf: 3972614 bytes, checksum: 270efd640f9dd24091773fe7d2b42124 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Comunidade Semeando o Futuro / Um grande problema encontrado no gerenciamento dos resíduos urbanos diz respeito ao tratamento de lixiviado produzido, que pode contaminar o solo, lençóis freáticos e leitos dos rios, gerando um forte impacto ambiental. A Fitorremediação é uma técnica complementar aos métodos convencionais de tratamento da água e solo por apresentar potencial para tratamento in situ, sendo economicamente viável. Objetivo deste trabalho é estudar em laboratório o uso de uma espécie florestal na recuperação de solo contaminado e no tratamento de lixiviado de aterro sanitário. Para avaliar o potencial da fitorremediação foi utilizada a espécie florestal Moringa oleífera Lam, em fase de muda, os processos de absorção e translocação dos metais das raízes para as partes aéreas e sua distribuição nos diferentes tecidos foram analisados. O experimento foi realizado em casa de vegetação, os tratamentos constituíram-se de solo Natural (SN), da barreira de empréstimo do aterro, e Solo Contaminado por resíduos sólidos urbanos da célula experimental da Chesf (SC), Composto orgânico e lixiviado do aterro controlado da Muribeca. Cada tratamento teve seis repetições. As variáveis estudadas foram: No solo, os atributos químicos, físicos e concentração dos metais pesados e na planta: altura, diâmetro do caule, biomassa e absorção de metais da raiz e parte aérea. Após 120 dias as mudas foram coletadas, separadas os tecidos vegetais, secas em estufa e moídas para análises. Para avaliar a eficiência do extrato da semente da Moringa no tratamento do lixiviado foram utilizadas dosagens de 12,5 g/L; 25; 26; 50; 62,5 e 75 g/L de extrato de Moringa, através dos ensaios Jartest. Os resultados da biomassa da Moringa em lisímetros e vasos apresentaram altas concentrações de Fe, Mn e Zn, na parte aérea e na parte radicular das plantas do solo Contaminado, a Moringa, teve alta taxa de crescimento, produziu muita biomassa e sistema radicular excelente. A Moringa em lisímetros e vasos acumulou grandes quantidades Zn em concentrações maiores do que as encontradas no solo, características de plantas acumuladoras. Os resultados das dosagens do extrato da semente de Moringa apresentaram taxas de remoção para Cor (96%) Turbidez (82%) e Coliformes (97%). A dosagem de 37,5g/L apresenta maior eficiência para o pré-tratamento do lixiviado, no entanto, o extrato da Moringa não se mostra eficiente na remoção de DQO e DBO. Existe viabilidade da espécie Moringa oleífera Lam de recuperar solo contaminado por resíduos sólidos urbanos através da Fitorremediação, bem como potencial de suas sementes, na forma de extrato, para o prétratamento do lixiviado de aterros sanitários

SOUSA, Ana Márjory Paiva. Peptídeos ovicidas de Moringa oleifera Lamarck: isolamento, caracterização bioquímica e alvos de ação no modelo biológico Haemonchus contortus. 2016. 96 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Anderson Silva Pereira (anderson.pereiraaa@gmail.com) on 2017-01-03T19:05:07Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_ampsousa.pdf: 2885745 bytes, checksum: 4097cf4de7e3b7b43f092ae22ef6189d (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-01-07T12:27:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_ampsousa.pdf: 2885745 bytes, checksum: 4097cf4de7e3b7b43f092ae22ef6189d (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-07T12:27:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_ampsousa.pdf: 2885745 bytes, checksum: 4097cf4de7e3b7b43f092ae22ef6189d (MD5) Previous issue date: 2016 / Haemonchus contortus is the most dominant endoparasite of sheep and goats, causing huge economic losses. Several anthelmintics have been used to minimize the losses caused by parasitic infection. However, anthelmintic resistance in nematodes has become a major practical problem in many countries and has stimulated the search for alternative and environmentally acceptable control methods, such as bioactive compounds from medicinal plants. The current study reports on the purification and partial characterization of bioactive peptides from Moringa oleifera seeds with ovicidal activity against H. contortus. The purification protocol entailed obtaining an aqueous extract, steps of separations by membranes (cut off 12 and 2 kDa) and ion exchange chromatography. The protein material obtained was subjected to egg hatch assay, flocculant activity, protease inhibition and resistance to proteolysis. Subsequent characterization was performed using SDS-PAGE electrophoresis, high performance liquid chromatography (HPLC) and circular dichroism (CD). The aqueous seed extract from M. oleifera seeds exhibited ovicidal effect inhibiting 96 ± 0.8% of egg hatching rate of H. contortus. Anthelmintics peptides, isolated from the total aqueous extract showed 82 ± 1% ovicidal activity (EC90 of 202.3 µg) and presented a single band of apparent molecular mass of 6.5 kDa under reducing conditions. Furthermore, they showed in vitro flocculant effect (EC90 of 0.812 µg), trypsin inhibitor activity (41 ± 11%), papain inhibitor activity (99 ± 0.2%) and were highly resistant to proteolysis, remaining active even after 24 hours of incubation with pronase E. The peptides were adsorbed on cationic resin and separated in least four isoforms of similar molecular masses (6.5 kDa) distributed by SDS-PAGE, and high purity detected by HPLC. Circular dichroism analysis revealed that three of the isoforms have content of 70% random coil structures, while the fourth isoform found showed α-helix rich structures (69%). Finally, studies involving changes in ionic strength of the medium indicated that electrostatic interactions may be a common mechanism between flocculant and ovicidal activity of the peptides. The results obtained demonstrated the discovery of peptides from M. oleifera with important anthelmintic properties and suggest an affordable and sustainable option for alternative parasite control. / Haemonchus contortus, principal helminto endoparasita de caprinos e ovinos, é uma espécie de alta patogenicidade que tem apresentado resistência múltipla a diversas classes de drogas anti-helmínticas. Frente à limitação de controles químicos eficazes, tem-se estimulado a busca por novas opções de tratamento. Em função de seus potenciais terapêuticos, eficiência e especificidade, os peptídeos destacam-se na área de pesquisas que visam à produção de biofármacos. Investigações de algumas espécies vegetais têm revelado interessantes potencialidades nematicidas. Moringa oleifera Lam. (Moringaceae) é uma espécie vegetal conhecida por suas diferentes propriedades farmacológicas, cujos efeitos anti-helmínticos foram recentemente reportados. O objetivo do presente estudo consistiu em identificar compostos de natureza proteica presentes em sementes de moringa, ativos contra o parasita gastrintestinal H. contortus. Após obtenção de um extrato proteico que exibiu potente atividade ovicida (96 ± 0,8%), etapas de separações por membranas (cut off 12 e 2 kDa) mostraram que o efeito observado era devido, exclusivamente, a moléculas de baixa massa molecular (< 12 kDa), sendo essas, tanto de origem proteica como não proteica. A fração proteica dotada de atividade ovicida foi capaz de inibir em 82 ± 1% a taxa de eclosão de ovos de H. contortus e apresentou-se como banda única, de massa molecular aparente de 6,5 kDa sob condições redutoras. Além da ação ovicida, os peptídeos também apresentaram forte efeito floculante in vitro e foram altamente resistentes à proteólise permanecendo ativos mesmo após 24 horas de digestão com pronase E. Atuação como inibidores de proteases também foi atribuída ao acervo funcional das moléculas. Atividade antipapainásica (99 ± 0,2%) e antitripsínica (41 ± 11%) foram alcançadas utilizando-se 50 e 100 µg de proteínas, respectivamente. A determinação de uma EC90 para atividade floculante (0,812 µg) cerca de 250 vezes menor do que a EC90 para atividade ovicida (202,3 µg) foi um resultado relevante, uma vez que, a existência de correlação positiva entre às diferentes atividades possibilitou o uso do teste de floculação como forma alternativa de detectar a presença dos peptídeos ovicidas ao longo das etapas de purificação. A eluição da fração ativa através de cromatografia em matriz de troca iônica permitiu a separação da mesma em moléculas distintas obtidas através de variações de gradiente iônico. Assim, a fração ativa inicial mostrou ser, na verdade, uma mistura de peptídeos com pelo menos quatro isoformas moleculares que exibiram massas semelhantes em torno de 6,5 kDa, distribuídas por SDS-PAGE, e com elevado grau de pureza detectado por HPLC. Análises espectroscópicas revelaram ainda que três das isoformas obtidas possuem espectros de CD com mínimos e máximos típicos de arranjos desordenados (70% de estruturas aleatórias), enquanto que a quarta isoforma encontrada apresentou padrão conformacional distinto, exibindo arranjos em alfa hélice como conteúdo dominante (69%), porém com ocorrência de estruturas não ordenadas bastante representativas (31%). Quanto ao modo de ação, observou-se uma significativa inversão do efeito ovicida quando o material foi ensaiado em solução cuja força iônica foi alterada para 0,15 M na presença de NaCl. A relação entre as atividades floculantes e ovicidas foi investigada e mecanismos de interações eletrostáticas foram apontados como requisito comum ao desempenho funcional das moléculas. Os resultados aqui obtidos revelam novas e importantes aplicabilidades funcionais para um grupo de peptídeos já bastante explorado por seus efeitos floculantes, sendo essas moléculas candidatas em potencial para atuarem no controle alternativo de helmintoses.

SILVA NETO, João Xavier da. Purificação, caracterização bioquímica e atividade contra Candida spp. de uma nova proteína ligante à quitina de sementes de Moringa oleifera LAM. 2015. 107 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by Anderson Silva Pereira (anderson.pereiraaa@gmail.com) on 2017-01-03T21:25:00Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_jxsilvaneto.pdf: 2404793 bytes, checksum: 93a0fd622fcab8a18f01b51110307929 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-01-10T19:09:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_jxsilvaneto.pdf: 2404793 bytes, checksum: 93a0fd622fcab8a18f01b51110307929 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-10T19:09:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_jxsilvaneto.pdf: 2404793 bytes, checksum: 93a0fd622fcab8a18f01b51110307929 (MD5) Previous issue date: 2015 / Candida species encompass a group of yeast that normally lives on the skin and mucous surfaces of human beings, in which the infectious disease candidiasis can occur, with severe consequences particularly for immunocompromised patients. The available antifungal drugs used for the candidiasis treatment are usually toxic and can lead to the development of resistant strains. A promising alternative to the conventional treatments is the use of plant proteins. Moringa oleifera is a plant with valuable nutritional and medicinal properties, including antimicrobial activity. This work aimed to purify a chitin-binding protein from M. oleifera seeds and to evaluate its antifungal properties against Candida species. Mo-CBP2 (Mo: Moringa oleifera; CBP: Chitin Binding Protein) was purified from the albumin fraction of M. oleifera seeds through chitin affinity chromatography followed by cation exchange chromatography. Mo-CBP2 represented about 0.14% of the total seed protein and appeared as a single band on native PAGE. By mass spectrometry, Mo-CBP2 presented 13,160 Da. However, in contrast, after native gel filtration chromatography (pH 7.5) two protein peaks with molecular masses of 33.0 and 66.0 kDa emerged from Mo-CBP2. By SDS-PAGE, Mo-CBP2 migrated as a single band with an apparent molecular mass of 25.0 kDa. Nevertheless, Tricine-SDS-PAGE of Mo-CBP2 under non-reduced conditions revealed two protein bands in the range of 13.0 and 17.0 kDa. After DTT and β-mercaptoethanol treatments, Mo-CBP2 appeared as been composed of masses of 7.0 and 4.0 kDa. Altogether, these results suggest that Mo-CBP2 exists in different oligomeric forms. Moreover, Mo-CBP2 is a basic glycoprotein (pI 10.9) with 4.1% sugar, with did not display hemagglutinating or hemolytical activity upon rabbit erythrocytes. A comparative analysis of the sequence of triptic peptides from Mo-CBP2 in solution, after LC-ESI-MS/MS, revealed similarity with other M. oleifera proteins, as the 2S albumin Mo-CBP3. Mo-CBP2 possesses in vitro antifungal activity against Candida albicans, C. parapsilosis, C. krusei and C. tropicalis, with MIC ranging from 9.45 to 37.9 µM. In addition, Mo-CBP2 (18.9 µM) increased the cell membrane permeabilization and oxigen reactive species production in C. albicans and promoted degradation of circular plasmid DNA (pUC18) from Escherichia coli. The results presented in this work point out the potential of Mo-CBP2 as a new antifungal protein active against Candida spp / Candida ssp. compreendem um grupo de leveduras que normalmente vivem na pele e mucosas do homem, podendo ocasionar candidíase, com consequências graves particularmente para indivíduos imunocomprometidos. Os principais antifúngicos utilizados no tratamento da candidíase são tóxicos e podem levar ao aparecimento de cepas resistentes. Uma alternativa promissora aos tratamentos convencionais é o uso de proteínas vegetais. Moringa oleifera é uma planta de grande valor nutricional e medicinal, com atividade antimicrobiana. Este trabalho objetivou purificar uma proteína ligante à quitina de sementes de M. oleifera e avaliar sua atividade antifúngica contra espécies de Candida. Mo-CBP2 (Mo: Moringa oleifera; CBP: “Chitin Binding Protein”) foi purificada a partir da fração albumina de sementes de M. oleifera por cromatografia de afinidade em matriz de quitina, seguida de cromatografia de troca catiônica. Mo-CBP2 representou em torno de 0,14% da proteína total da semente e se apresentou como uma única banda na eletroforese em condição nativa. Por espectrometria de massas, Mo-CBP2 é uma proteína de 13.160 Da. Em contraste, Mo-CBP2 emergiu em dois picos, com massas moleculares correspondentes a 33,0 e 66,0 kDa, após cromatografia de filtração em gel (pH 7,5). Mo-CBP2 apresentou-se como uma única banda proteica com massa molecular aparente de 25,0 kDa quando analisada por PAGE-SDS. Todavia, em Tricina-SDS-PAGE, Mo-CBP2, em condições não redutoras, resultou em duas bandas proteicas, uma na faixa de 13,0 kDa e outra superior a 17,0 kDa e, após tratamento com DTT e β-mercaptoetanol, mostrou bandas com massas moleculares aparentes de 7,0 e 4,0 kDa. Os dados em conjunto sugerem que Mo-CBP2 existe em diferentes formas oligoméricas. Mo-CBP2 é uma glicoproteína básica (pI 10,9) com 4,1% de carboidratos, não apresentando atividade hemaglutinante ou hemolítica frente a eritrócitos de coelho. A análise comparativa das sequências dos peptídeos trípticos obtidos a partir da Mo-CBP2 em solução, após LC-ESI-MS/MS, revelou similaridade com outras proteínas de M. oleifera, como a albuminas 2S denominada de Mo-CBP3. Mo-CBP2 foi capaz de inibir, in vitro, o crescimento de C. albicans, C. parapsilosis, C. krusei e C. tropicalis, com CIM variando de 9,45 a 37,9 µM. Em adição, Mo-CBP2 (18,9 µM) aumentou a permeabilidade da membrana celular e induziu a produção de espécies reativas de oxigênio em C. albicans, além de ter degradado o DNA do plasmídeo circular (pUC18) de Escherichia coli. Os resultados obtidos apontam para o potencial de uso da Mo-CBP2 como uma nova proteína antifúngica ativa contra Candida spp.

LUZ, P. B. Efeito protetor da lectina de sementes de Moringa oleifera na pancreatite aguda induzida por ceruleína em camundongos via modulação da inflamação e estresse oxidativo. 2017. 133 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, Ceará, 2017. / Submitted by Farmacologia Pós-Graduação (posgfarmacologia@gmail.com) on 2017-07-31T15:30:02Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_pbluz.pdf: 3256883 bytes, checksum: e491f2004c525ad6475a074ed7f1745a (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-07-31T16:12:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_tese_pbluz.pdf: 3256883 bytes, checksum: e491f2004c525ad6475a074ed7f1745a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-31T16:12:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_tese_pbluz.pdf: 3256883 bytes, checksum: e491f2004c525ad6475a074ed7f1745a (MD5) Previous issue date: 2017-02-03 / Acute pancreatitis (AP) is an inflammatory disease that primarily affects the pancreas, and can progress with insufficiency of many organs, such as lung and liver. Despite its significant morbidity and mortality rate, there are not therapeutic alternatives for PA cure. Moringa oleifera is a plant native to Asia, Africa and South America, with extensive expansion into the Brazilian Northeast and widely used in folk medicine. MoCBP4 is a lectin purified from M. oleifera seeds with anti-inflammatory and antinociceptive activities. The present study aimed to evaluated the effect of MoCBP4 on the functional, inflammatory and molecular alterations characteristic of PA in vivo and in vitro models. Mice were treated orally with MoCBP4 at doses 20, 40 and 80 mg/kg and after 1 hour they received five injections of cerulein (50 μg/kg) intraperitoneally at 1hour intervals between administrations.The animals were euthanized after 6 hours of the last administration of cerulein. The pancreas, lung, liver and blood were collected to evaluate the pancreatic edema, amylase, lipase, AST, ALT, MPO activity, TNF-α, IL-1β, IL-6, NP-SH, MDA, NO2-, COX-2, NF-ĸB and NOSi, in addition to histological analysis. Cytosolic Ca2+ levels were measured in acinar cells stimulated by cholecystokinin-8 (CCK). The effects of MoCBP4 were evaluated on TLC-S-induced acinar cell necrosis and on FMLP and PMA-stimulated neutrophils production of ROS.The statistical analyses were performed using analysis of variance followed by the Newman-Keuls or Kruskal Wallis/Dunn post hoc test. Values of p< 0.05 were considered statistically significant. MoCBP4 (20, 40 and 80 mg / kg) reduced, respectively, pancreatic edema (13%, 21% and 41%); amylase (18%, 14% and 28%); lipase (51%, 39% and 33%); AST (42%, 47% and 36%); ALT (30%, 50%, 37%); MPO activity in the pancreas (58%, 51% and 43%), lung (42%, 56% and 42%) and liver (51%, 66% and 56%). In the histological analysis, MoCBP4 at dose of 40mg / kg was able to significantly attenuate the inflammatory infiltrate and necrosis in the pancreas, besides reducing lung and hepatic damage. MoCBP4 (40 mg/kg) decreased the pancreatic levels of TNF-α, IL1-β and IL-6 (40%, 55% and 67%) and also reduced plasma levels of TNF-α and IL1-β (68% and 63%); MoCBP4 (40 mg/kg) increased plasma levels of NP-SH and significantly reduced MDA and NO2-. MoCBP4 (40 mg / kg) reduced the pancreatic immunostaining of COX-2, TNF-α, iNOS and NF-ĸB.MoCBP4 at concentration 1 μM reduced sustained levels of cytosolic Ca2+ on the acinar cells stimulated by CCK . MoCBP4 (1 μM) attenuated TLC-S-induced acinar cell necrosis in 73%. MoCBP4 (10 μM) attenuated ROS production by neutrophils stimulated by fMLP (59%) and PMA (58%). These data show that MoCBP4 protects against acute edematous pancreatitis induced by cerulein, and this effect is associated with attenuation of local and systemic inflammatory response mediated by reduction of neutrophils and pro-inflammatory cytokines, as well as oxidative stress and tissue injury.In isolated cells, MoCBP4 was able to attenuate neutrophil activation, in addition to reducing overall and sustained of Ca2+ in the acinar cell cytosol and, probably for this reason, reduced cell death by necrosis. / Pancreatite aguda (PA) é uma doença inflamatória que acomete primariamente o pâncreas, podendo evoluir com insuficiência de múltiplos órgãos, tais como pulmão e fígado. Apesar da sua significante taxa de morbidade e mortalidade, ainda não há alternativas terapêuticas para a cura da PA. Moringa oleifera é uma planta originária da Ásia, da África e da América do Sul com ampla ocorrência no nordeste brasileiro é largamente utilizada na medicina popular. A MoCBP4 é uma lectina purificada a partir das sementes de M. oleífera com comprovadas atividades anti-inflamatória e antinociceptiva. No presente estudo, foi avaliado o efeito da MoCBP4sobre as alterações funcionais, inflamatórias e moleculares características da PA em modelos in vivo e in vitro. Camundongos foram tratados com MoCBP4 nas doses de 20, 40 e 80 mg/kg por via oral e após 1 hora receberam cinco injeções de ceruleína (50µg/kg) por via intraperitoneal com intervalos de 1hora entre as administrações. A eutanásia dos animais ocorreu após 6 horas da última administração de ceruleína e o pâncreas, pulmão, fígado e sangue foram coletados para avaliação do edema pancreático, amilase, lipase, AST, ALT, atividade de MPO, TNF-α, IL-1β, IL-6, NP-SH, MDA, NO2-, COX-2, NFĸB e NOSi, além das análises histológicas. Alterações dos níveis de Ca2+ citosólico foram mensuradas em células acinares do pâncreas de camundongos estimuladas por colecistocinina-8 (CCK). Foram avaliados os efeitos da MoCBP4 sobre a necrose de células acinares induzida por TLC-S e sobre a produção de EROsem neutrófilos isolados da medula óssea estimulados por fMLP e PMA. Para estatística foi utilizado ANOVA/Teste de Newman-Keuls ou Kruskal Wallis/Teste de Dunn. P<0,05 foi aceito.MoCBP4 (20, 40 e 80 mg/kg) reduziu, respectivamente, o edema pancreático (13%, 21% e 41%); amilase (18%, 14% e 28%); lipase (51%, 39% e 33%); AST (42%, 47% e 36%); ALT (30%, 50%, 37%); atividade de MPO no pâncreas (58%, 51% e 43%), no pulmão (42%, 56% e 42%) e no fígado (51%, 66% e 56%). Na análise histológica, MoCBP4 na dose de 40mg/kg foi capaz de atenuar significantemente o infiltrado inflamatório e a necrose no pâncreas, além de reduzir danos pulmonar e hepático. MoCBP4 (40 mg/kg) diminuiu os níveis pancreáticos das citocinas TNF-α, IL1-β e IL-6 (40%, 55% e 67%) e também os níveis plasmáticos de TNF-α, IL1-β (68% e 63%); aumentou os níveis plasmáticos de NP-SH e reduziu significantemente MDA e NO2- no plasma. MoCBP4 (40 mg/kg) reduziu a imunomarcação de COX-2, TNF-α, iNOS e NF-ĸB no pâncreas. Em células acinares estimuladas por CCK, MoCBP4 (1 µM) reduziu os níveis sustentados de Ca2+citosólico. MoCBP4 (1 µM) atenuou a necrose de células acinares induzida por TLC-S em 73%. MoCBP4 (10 µM) atenuou a produção de EROs em neutrófilos estimuladas por fMLP (59%) e PMA (58%). Estes dados reunidos evidenciam que MoCBP4 protege contra a pancreatite aguda edematosa induzida por ceruleína, sendo este efeito associado à atenuação da resposta inflamatória local e sistêmica intermediada por redução dos neutrófilos e citocinas pró-inflamatórias, bem como pelo estresse oxidativo e lesão tecidual. Em células isoladas, MoCBP4 foi capaz de atenuar a ativação de neutrófilos, além de reduzir o aumento global e sustentado de Ca2+ no citosol de células acinares e, provavelmente, por esta razão, reduziu a morte celular por necrose.

PEREIRA, M. L. Aspectos estruturais, farmacológicos e toxicológicos de Mo-CBP4, uma proteína ligante à quitina de Moringa oleifera com atividade anti-inflamatória e antinociceptiva via oral. 2014. 211 f. Tese (Doutorado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2014. / Submitted by Daniel Eduardo Alencar da Silva (dealencar.silva@gmail.com) on 2015-01-22T17:51:51Z No. of bitstreams: 1 2014_tese_mlpereira.pdf: 5385701 bytes, checksum: bf5a77dbe6d55bd0fb09e766abc43303 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2016-01-26T22:44:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_tese_mlpereira.pdf: 5385701 bytes, checksum: bf5a77dbe6d55bd0fb09e766abc43303 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-26T22:44:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_tese_mlpereira.pdf: 5385701 bytes, checksum: bf5a77dbe6d55bd0fb09e766abc43303 (MD5) Previous issue date: 2014 / Mo-CBP4 is a chitin-binding protein that is associated with the antinociceptive and anti-inflammatory effects of Moringa oleifera seeds, a tree known for its medicinal value. The aim of this study was the structural, pharmacological and toxicological characterization of Mo-CBP4, focusing on its use as a therapeutic agent. Mo-CBP4 is a 11.8 kDa heterodimer, composed by 3.9 kDa and 8.4 kDa chains. Mo-CBP4 sequencing by Edman degradation and mass spectrometry showed the presence of many basic amino acid residues and high similarity with other proteins from M. oleifera seeds. Circular dichroism spectroscopy showed that the Mo-CBP4 contains 36% α-helix, 15% β-sheet, 19% turn and 30% unordered and high structural stability to temperature and pH variations. Mo-CBP4 (0.1, 1.0 and 10 mg/kg) by intravenous administration showed anti-inflammatory activity on the model of carrageenan-induced peritonitis in rats, with inhibition (79%) of neutrophil migration already at the lowest dose. Mo-CBP4 (40 mg/kg), when administered by oral route on mice, using the same mentioned model, also presented anti-inflammatory activity, causing a significant inhibition (48%) of neutrophil migration. Mo-CBP4 retained this activity even after heating at 100 °C or pre-incubation with 0.1 M N-acetyl-D-glucosamine, both for 1 hour. Serum levels of IL-1β and IL-10 after peritonitis induction changed in Mo-CBP4-pretreated mice. In addition, Mo-CBP4 (10 mg/kg), administered intraperitoneally, also showed antinociceptive activity by using the formalin (2.5%) test in mice model, inhibiting just the peripheral pain. In the carrageenan-induced mechanical hypernociception model, animals pretreated with oral Mo-CBP4 (20, 40 and 80 mg/kg), 1 hour prior to inflammatory agent use, proved to be more resistant to sensitization after 1, 3 and 5 hours, with maximal inhibition at a dose of 40 mg/kg, being this activity correlated with the reduction of neutrophil migration. Direct hypernociception caused by epinephrine or PGE2 was not affected with Mo-CBP4 pretreatment. Mo-CBP4 did not impair the locomotor activity of animals in the open field test. In general, no toxic signs or adverse effects were seen after oral administration of Mo-CBP4 at a single dose (2000 mg/kg) or after repeated doses (10, 40 and 100 mg/kg). Similarly, cytotoxicity and genotoxicity tests with Mo-CBP4, using tumour or normal cells, showed no toxicity. The results suggest that due to anti-inflammatory and antinociceptive properties, high stability and apparent lack of toxicity, Mo-CBP4 has great potential as a future biopharmaceutical drug. / Mo-CBP4 é uma proteína ligante à quitina, com atividade anti-inflamatória e antinociceptiva, isolada de sementes de Moringa oleifera Lamarck, uma árvore conhecida pelo seu valor medicinal. Este trabalho teve como objetivo a caracterização estrutural, farmacológica e toxicológica de Mo-CBP4, com foco na sua utilização como agente terapêutico. Mo-CBP4 é um heterodímero de 11,8 kDa, composto por cadeias de 3,9 kDa e 8,4 kDa. O sequenciamento de Mo-CBP4 por degradação de Edman e espectrometria de massas mostrou a presença de muitos resíduos de aminoácidos básicos e alta similaridade com proteínas isoladas de sementes de M. oleifera. Análises espectroscópicas utilizando dicroísmo circular demonstraram que Mo-CBP4 é composta por α-hélices (36%), folhas-β (15%), voltas (19%) e estruturas ao acaso (30%), com alta estabilidade estrutural frente a variações de temperatura e pH. Mo-CBP4 (0,1, 1,0 e 10 mg/kg), por via endovenosa, mostrou atividade anti-inflamatória no modelo de peritonite induzida por carragenina em ratos, com inibição (79%) da migração de neutrófilos já na menor dose. Atividade anti-inflamatória de Mo-CBP4 (40 mg/kg) também ocorreu por via oral em camundongos, usando o mesmo modelo citado, com significativa inibição (48%) da migração de neutrófilos. Tal atividade permaneceu mesmo após aquecimento da proteína a 100 °C por 1 hora, porém, a pré-incubação com N-acetil-D-glucosamina 0,1 M foi capaz de reverter sua ação. Os níveis séricos de IL-1β e IL-10, após indução de peritonite, sofreram alteração com o pré-tratamento da proteína. Adicionalmente, Mo-CBP4 (10 mg/kg) mostrou atividade antinociceptiva, verificada através do teste da formalina (2,5%), quando administrada via intraperitoneal, inibindo apenas a dor periférica. No modelo de hipernocicepção mecânica induzida por carragenina, animais tratados via oral com a proteína (20, 40 e 80 mg/kg), 1 hora antes do agente inflamatório, mostraram-se mais resistentes à sensibilização após 1, 3 e 5 horas, apresentando inibição máxima na dose de 40 mg/kg, estando essa atividade relacionada com a redução da migração de neutrófilos. A hipernocicepção direta causada por PGE2 ou epinefrina não sofreu alteração com o pré-tratamento de Mo-CBP4. A proteína também não causou comprometimento na atividade locomotora dos animais, quando submetidos ao teste do campo aberto. A administração oral de Mo-CBP4 em dose única (2000 mg/kg) ou em doses repetidas (10, 40 e 100 mg/kg) não resultou em efeitos tóxicos ou adversos. Similarmente, avaliação da citotoxicidade e genotoxicidade de Mo-CBP4, utilizando células tumorais ou normais, mostrou ausência de toxicidade. Os resultados obtidos sugerem que devido às propriedades anti-inflamatória e antinociceptiva, alta estabilidade e aparente ausência de toxicidade, Mo-CBP4 possui grande potencial como um futuro biofármaco.

RODRIGUES, Felipe Augusto Rocha. Estudo das propriedades citotóxica, genotóxica e antitumoral de um benzil-isotiocianato isolado de Moringa oleifera (Moringaceae). 2010. 142 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2010. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-03-26T11:59:47Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_farrodrigues.pdf: 7433234 bytes, checksum: 7cace7d3ba0455e3f11ead05da57543d (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-03-26T12:23:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_farrodrigues.pdf: 7433234 bytes, checksum: 7cace7d3ba0455e3f11ead05da57543d (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-26T12:23:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_farrodrigues.pdf: 7433234 bytes, checksum: 7cace7d3ba0455e3f11ead05da57543d (MD5) Previous issue date: 2010 / Moringa oleifera Lam. é uma planta tropical com grande importância por seus usos medicinais. Vários compostos já foram isolados de diferentes partes da planta, e dentre as atividades farmacológicas podemos destacar a antitumoral. Este trabalho determinou, inicialmente, a atividade citotóxica, por MTT, do composto 4-(4′-O-acetil-α-L-ramnopiranosiloxi)benzil isotiocianato (MFLC-1), frente a linhagem leucêmica de HL-60 e células mononucleadas isoladas de sangue periférico (CMSP) após 24h de incubação. O composto mostrou-se ativo contra células tumorais de HL-60 e CMSP, onde apresentou uma ligeira seletividade para as células tumorais. Os estudos acerca do mecanismo de ação da atividade citotóxica foi aprofundado em células HL-60 após 24 horas de incubação com e sem pré-incubação com α-tocoferol (40μM) através dos seguintes ensaios: 1- Mensuração do estresse oxidativo através do TBARS; 2- Coloração por May-Grunwald-Giemsa; 3- Avaliação da integridade de membrana, viabilidade celular e concentração de células; 4- Determinação do conteúdo de DNA nuclear da célula; 5- Determinação da externalização da fosfatidilserina em células HL-60; 6- Determinação da ativação de caspases iniciadoras (-8 e -9) e efetoras (-3 e -7). O composto induziu estresse oxidativo, diminuiu o número de células e a viabilidade celular e induziu ativação de caspases iniciadoras (8 e 9) e efetoras (3 e 7). Na análise das células coradas por May-Grunwald-Giemsa, podemos observar características morfológicas sugestivas de morte celular por apoptose seguida de necrose secundária na maior concentração (1,4μg/mL). Quando pré-incubamos as células de HL-60 com α-tocoferol (40μM), todas as características, tanto bioquímicas quanto morfológicas, são suprimidas indicando um importante papel do estresse oxidativo na indução de morte celular promovida pelo composto MFLC-1. A genotoxicidade do MFLC-1 foi determinada em células HL-60 e CMSP após 24h de incubação, onde observamos a formação de ligações cruzadas (cross-links) no DNA, o que foi revertido pela exposição das células tratadas a proteinase K. Dessa forma, observamos um aumento do índice de dano ao DNA com o aumento da concentração, indicando a formação de cross-link do tipo DNA-proteína. Também observamos que o composto é mais genotóxico para as células tumorais que as normais. O efeito antitumoral (in vivo) do MFLC-1 foi analisado em camundongos transplantados com o tumor Sarcoma 180 e tratados nas doses de 25 e 50 mg/Kg/dia por via intraperitoneal. A inibição do crescimento tumoral foi de 55,11% e 71,58% nas doses testadas de 25 e 50mg/Kg, respectivamente. A análise histopatológica dos órgãos dos animais mostrou que MFLC-1 provoca efeitos tóxicos moderados, principalmente no fígado e no baço, mas esses podem ser considerados como reversíveis.

Submitted by LAUREN NOZOMI MARQUES YABUKI null (lauren.yabuki@gmail.com) on 2017-05-17T14:03:14Z No. of bitstreams: 1 CDteseVFLaurenNMYabuki.pdf: 1692197 bytes, checksum: 0e2de834b5de4870ca633c5aabcb9954 (MD5) / Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-05-17T14:19:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 yabuki_lnm_dr_rcla.pdf: 1692197 bytes, checksum: 0e2de834b5de4870ca633c5aabcb9954 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-17T14:19:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 yabuki_lnm_dr_rcla.pdf: 1692197 bytes, checksum: 0e2de834b5de4870ca633c5aabcb9954 (MD5) Previous issue date: 2017-04-12 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A técnica de difusão em filmes finos por gradiente de concentração (DGT) tem se consolidado como uma excelente ferramenta analítica capaz de fornecer concentrações lábeis por tempo, pré-concentração dos analitos e amostragem in situ, porém a aplicação desta técnica em águas de drenagem ácida de mina (DAM) é complicada devido à redução da adsorção do amostrador tradicional (resina ligante Chelex-100) para metais em baixo pH. Este estudo, avalia a utilização da técnica DGT para determinação das concentrações lábeis de Al, Cd, Cu, Mn, Ni, Pb U e Zn em águas de DAM, empregando novos agentes ligantes preparados a partir de biomassas (cascas de banana, borra de café e sementes de moringa) impregnadas em agarose. As medições DGT foram realizadas em soluções padrão em laboratório e in situ. Resultados laboratoriais mostram que os agentes ligantes podem ser empregados em águas com pH baixo (pH 3,5) para os íons Cd, Cu, Ni, Pb e Zn. Já os íons Al, Mn e U não apresentaram linearidade nas curvas de imersão para nenhuma biomassa pesquisada. Para a análise de amostras in situ de DAM, houve baixas recuperações dos íons Cd, Cu, Ni e principalmente para Zn com 5,7% da fração solúvel com o gel de agarose-moringa, podendo indicar a baixa eficiência dos agentes ligantes ou algum efeito matriz inerente durante a determinação por ICP-OES. Por outro lado, houve recuperações satisfatórias para a imersão em amostras do Rio Corumbataí e do Rio Piracicaba, ressaltando o emprego destes agentes ligantes pesquisados em matrizes aquáticas diferentes das matrizes de DAM. Este estudo mostra que o uso da técnica DGT pode ser estendido para águas com pH baixo (desde que sejam avaliados as limitações e condições de contorno avaliadas neste estudo) podendo ser uma ferramenta útil para o monitoramento em tempo integrado de concentrações lábeis em diferentes sistemas aquáticos. / The diffusive gradients in thin films (DGT) technique has consolidated as an excellent analytical tool capable of providing labile concentrations by time, analytical preconcentration and in situ sampling, but the application of this technique in acid mine drainage waters (AMD) is limited by the reduction of adsorption of the traditional binding layer (Chelex-100 chelating resin) to metals at low pH. This study proposes the use of the DGT technique to determine the concentrations of Al, Cd, Cu, Mn, Ni, Pb U and Zn in AMD using new binding agents prepared from biomass (Musa cavendishi banana peel, spent coffee grounds and shelled Moringa Oleifera seeds) impregnated with agarose. DGT measurements were performed in laboratory standard solutions and in situ. Laboratory results showed that the binding agents can be used in waters with low pH (pH 3.5) for Cd, Cu, Ni, Pb and Zn. Al, Mn and U ions did not present linearity in the deployment curves for any biomass studied. For the analysis of in situ AMD samples, there were low recoveries of the Cd, Cu, Ni, and mainly Zn ions with 5.7% of the soluble fraction with the agarose-moringa gel, indicating the low efficiency of the binding agents at low values pH or some inherent matrix effect during determination by ICP-OES. On the other hand, there were satisfactory recoveries for deployment in samples from the Corumbataí River and the Piracicaba River, highlighting the use of these binding layers in aquatic matrices other than AMD matrices. This study shows that the use of the DGT technique can be extended to waters with low pH (provided that the limitations and contour conditions evaluated in this study are evaluated) and can be a useful tool for the integrated time monitoring of labile concentrations in different aquatic systems. / CNPq: 142171/2014-0