Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-19Bitstream added on 2014-06-13T20:38:29Z : No. of bitstreams: 1 moura_acs_me_araiq.pdf: 1236232 bytes, checksum: a709145cb5de5a7efb7d91cdfaf1362f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As plantas medicinais utilizadas no tratamento de diversas doenças são fontes de uma infinidade de novas moléculas de interesse para a humanidade. Este trabalho investigou a composição química das partes aéreas do chá e do extrato metanólico de Indigofera hirsuta (Fabaceae), popularmente conhecida como “anileira” e encontrada no Cerrado brasileiro. O chá foi fracionado por cromatografia de permeação em gel e cromatografia líquida de média pressão, tendo-se isolado: kaempferol, ácido protocatecuico, kaempferol-3-O-β-D-glucopiranosideo, triptofano e uracila. O extrato metanólico foi fracionado por cromatografia líquida de alta pressão, que possibilitou o isolamento de: ácido gálico, galato de metila, rutina e kaempferol-3-O-β-D-glucopiranosideo. As substâncias foram identificadas por técnicas espectroscópicas (UV, IV e RMN) e as estruturas confirmadas pelo uso da técnica acoplada de HPLC-DAD-ESI-MS. O chá, extrato metanólico e as substâncias isoladas foram avaliados quanto à atividade antioxidante, utilizando-se DPPH. O extrato metanólico apresentou significativa atividade antioxidante, enquanto que o chá não apresentou atividade antioxidante considerável, quando comparados com o padrão ácido gálico. Das substâncias isoladas, o galato de metila apresentou a maior atividade antioxidante. O chá de I. hirsuta foi também avaliado quanto à atividade gastroprotetora em lesões induzida por etanol absoluto em 3 diferentes doses: 125 mg.Kg-1, 250 mg.Kg-1 e 500 mg.Kg-1, sendo a menor dose a que apresentou melhor efeito. Contudo, o chá de Indigofera hirsuta não apresentou atividade gastroprotetora / Medicinal plants used in the treatment of various diseases and are source of many new molecules. This work investigates the chemical composition of the aerial parts of the infusion and methanol extract of Indigofera hirsuta (Fabaceae), popularly known as “anileira” and found in the Brazilian Cerrado. The infusion was fractionated by gel permeation chromatography and medium pressure liquid chromatography, it was possible to isolate kaempferol, protocatecuic acid, kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside, tryptophan and uracil. The methanol extract was fractionated by high pressure liquid chromatography, which allowed the isolation of gallic acid, methyl gallate, rutin and kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside. The substances were identified by spectroscopic techniques (UV, IR and NMR) and confirmed by the use of HPLC-DAD-ESI-MS coupling. The infusion, methanol extract and isolated compounds were evaluated for their antioxidant activity using DPPH. The methanol extract showed significant antioxidant activity, while the tea did not show significant antioxidant activity, when compared to gallic acid. Among the isolated substances methyl gallate presented the highest antioxidant activity. The I. hirsuta was also evaluated for its gastroprotective activity in lesions induced by absolute ethanol in 3 different doses (125 mg.Kg-1, 250 mg.Kg-1 and 500 mg.Kg-1).The lowest dose showed the best effect. However, the infusion not active gastroprotective

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-21Bitstream added on 2014-06-13T19:58:53Z : No. of bitstreams: 1 holzbach_jc_me_araiq.pdf: 5449837 bytes, checksum: 65991506015b0b72166c7da9e520f8a7 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente trabalho descreve o isolamento e a elucidação estrutural dos constuintes químicos de Aristolochia gigantea Mart. A. gigantea desenvolve um forte sistema subterrâneo de caules e raízes (tubérculos e rizomas). Os extratos etanólicos destas partes da planta foram submetidos a cromatografia (CC, CCDP e CLAE), resultando em doze e oito substâncias, respectivamente. Entre as quais, uma nova aristolactama, aristolactama 9-[O-b-glicopiranosil-O-(1 ׳׳® ׳ 2 )-b-glicopiranosídeo], e duas alcamidas, cis- e trans-N-p-coumaroil-3-O-metildopamina juntamente com as substâncias conhecidas alantoína, b-sitosterol, E-nerolidol, (+)-kobusina, (+)- eudesmina, cis- e trans-N-feruloiltiramina, trans-N-coumaroiltiramina, cis- e trans-Nferuloil- 3-O-metildopamina, aristolactama Ia 8-β-O-glicosídeo, aristolactama Ia N-β- glicosídeo, aristolactama IIIa e magnoflorina. Suas estruturas foram determinadas por análises espectroscópicas. Os efeitos dos extratos, da alantoína, (+)-kobusina e (+)-eudesmina na ação das fosfolipases e proteases dos venenos das serpentes Bothrops jararacussu e Crotalus durissus terrificus foram avaliados. A alantoína foi o inibidor mais eficiente das fosfolipases enquanto a (+)-eudesmina e os extratos apresentaram atividade inibitória moderada. Além disso, os extratos, a alantoína e a (+)-eudesmina mostraram atividade moderada para as proteases de Bothrops jararacussu enquanto a (+)-kobusina apresentou maior potencial inibitório. / The present work describes the isolation and structural elucidation of the chemical constituents of Aristolochia gigantea Mart. A. gigantea develops a strong system of subterranean stems and roots (tuberous or rhizomatous roots). Ethanol extracts of these plant parts were subjected to chromatography (CC, TLC, and HPLC) to give twelve and eight compounds, respectively. Among which, a new aristolactam, aristolactam 9-O-b-D-glucopyranosyl-(1 ׳ 2→׳׳ )-b-D-glucoside, and two alkamides, cisand trans-N-p-coumaroyl-3-O-methyldopamine together with the known compounds allantoin, E-nerolidol, b-sitosterol, (+)-kobusin, (+)-eudesmin, cis- and trans-Nferuloyltyramine, trans-N-coumaroyltyramine, cis- and trans-N-feruloyl-3-Omethyldopamine, aristolactam Ia 8-b-O-glucoside, aristolactam Ia N-b-D-glucoside, aristolactam IIIa, and magnoflorine. Their structures were determined by spectroscopic analyses. Effects of extracts, allantoin, (+)-kobusin and (+)-eudesmin on action of phospholipases and proteases from venoms of the snakes Bothrops jararacussu and Crotalus durissus terrificus were evaluated. Allantoin was the most efficient inhibitor of phospholipases whereas (+)-eudesmin and the extracts showed moderate inhibitory activity. In addition, the extracts, allantoin, and (+)-eudesmin showed moderate activity on proteases from Bothrops jararacussu whereas (+)- kobusin showed the highest inhibitory potential.

Resumo: A etiologia da colite ulcerativa ainda permanece desconhecida, porém atinge uma grande parcela da população mundial. A maioria das terapias disponiveis tem eficácia limitada e geram significativos clínicos efeitos adversos. A especie medicinal Mouriri pusa Gardn. (Melastomataceae) foi citada diversas vezes pela população local do Tocantins como útil no tratamento de distúrbios do trato digestório. Os estudos preliminares com essa planta tem apresentado efeitos gastroprotetores e cicatrizantes intensos. Estudos fitoquimicos de seu extrato metanólico revelaram presença de (-)- epicatequina, além de outros flavonóides, e taninos. Nesse projeto, induziu-se colite ulcerativa em ratos per injeção local de acido trinitrobenzenosulfonico (TNBS). Foram analisados parametros morfológicos, inflamatórios, imunohistoquimicos e Western Blot. 0 efeito da (-)-epicatequina foi avaliado em modele agudo nas doses de 5,10,25 e 50 mg/kg (p.o). Os animais receberam os tratamentos uma vez por dia durante 3 dias antes da indução de colite, 2 h e 24 h após a mesma. Observou-se macroscopicamente que as doses de 10 e 50 mg/kg (EC10 e ECSO)de epicatequina foram efetivas em reduzir 0 grau de seriedade da lesão, sendo confirmado pela análise microscópica para EC10. Nas quantificações do tecido intestinal, observou-se que a concentração de glutationa em EC10 foi maior que no controle, mostrando um possivel mecanismo de ação, já que a manutenção da glutationa no tecido inflamado pode indicar potencial antioxidante da substância. Observou-se diminuição de COX-2, um parametro inflamatório, e um aumento de PCNA, antigeno de proliferação celular, em EC10, dicando ação antiinflamatória e estimuladora de proliferação celular. EC10 e EC50 foram usadas então para o modelo crônico de colite, no qual os diferentes grupos de animais receberam, após indução de colite no primeiro dia ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Ulcerative colitis etiology is still not completely known, however, it is present among great portion of world's population. The majority of available therapies has limited efficacy and provides significant adverse effects. The medicinal species Mouriri pusa Gardn. (Melastomataceae) has been often mentioned by local population from Tocantins as useful in the treatment of gastrointestinal disorders. Previous studies with this plant have presented intense gastroprotective and cicatrizing effects. Phyochemical studies of its methanolic extract revealed presence of (-)-epicatechin, besides other flavonoids, and tannins, In this work, ulcerative colitis was induced in rats by local injection of TNBS (Trinitrobenzenesulphonic acid). We analyzed morphological, inflammatory, immunohistochemical and Western Blot parameters. (-)- Epicatechin effect was evaluated in acute model in 5, 10, 25 e 5Omg/kg doses (p.o). The animals received treatments once a day for 3 days before colitis induction, and 2 h and 24 h after it. The doses of 10 and 5Omg/kg (EC10 and EC5O) were macroscopically observed to be effective in reducing lesion seriousness, what was confirmed by microscopical analysis for EC10. By quantifications in the colon tissue, it was observed that glutathion concentration in EC10 was greater than in control, showing a possible echanism of action, since glutathione maintenance in the inflamed tissue may . dicate antioxidant potential from the compound. It was observed COX-2 reduction, an inflammatory parameter, and an increase in PCNA, proliferating cell antigen, in EClO, indicating anti-inflammatory and proliferation stimulating action. EC10 and EC were then used for chronic colitis model, in which the groups, after colitis induction in the first Day, treatments for 21 days. At the end of each week, some of the rats from each group were killed for accompaniment, and after the second week ... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Cláudia Helena Pellizzon / Coorientador: Clélia Akiko Hiruma-Lima / Banca: Luís Cláudio Di Stasi / Banca: João Carlos Palazzo de Mello / Mestre

Orientador: Wagner Vilegas / Coorientador: Miriam Sannomiya / Banca: Alba Regina Monteiro Souza Brito / Banca: Elfriede Marianne Bacchi / Resumo: O uso de fitoterápicos padronizados com assegurada comprovação de eficácia e segurança tem apresentado resultados terapêuticos surpreendentes em diversos países. Contudo, no Brasil, onde há grande potencial de produção de fitoterápicos devido a sua enorme biodiversidade, há deficiências na correta caracterização química das matérias-primas e escassez de ensaios farmacológicos e toxicológicos desses materiais, etapas essenciais para assegurar eficácia e segurança dos fitoterápicos. Machaerium hirtum (Fabaceae) é utilizada popularmente para o tratamento de diarréia, tosse e câncer. Um estudo químico que identifique as substâncias presentes nesta espécie e as quantifique pode fornecer subsídios para o entendimento destas atividades. A primeira etapa consistiu no isolamento das substâncias do extrato EtOH 70% das partes aéreas de M. hirtum por meio de cromatografia de permeação em gel seguida de purificação das substâncias por HPLC-RI. A identificação das substâncias foi feita por Ressonância Magnética Nuclear e por Espectrometria de Massas. O perfil químico do extrato foi estabelecido por HPLC-PDA e a quantificação das substâncias foi feita com base em suas agliconas, pelo método da calibração externa. Foi possível identificar as flavonas saponarina (8,69 ± 0,46 mg/g de extrato), isovitexina (6,44 ± 0,45 mg/g de extrato), isoorientina, que se apresentou abaixo do limite de quantificação (LOQ) e swertisina, presente no perfil cromatográfico em co-eluição com outra substância. Tais resultados são fundamentais para a padronização do extrato EtOH 70% das folhas de Machaerium hirtum / Abstract: The use of standardized phytomedicines with proven efficacy and safety has shown surprising therapeutic results in various countries. Brazil has great potential for production of herbal medicine due to its enormous biodiversity. However, there are deficiencies in the correct characterization of chemical raw materials and few reliable pharmacological and toxicological tests of these materials, essential steps to ensure efficacy and safety of herbal medicines. Machaerium hirtum (Fabaceae) is popularly used to treat diarrhea, cough and cancer. A chemical study to identify the substances present in this species may provide and quantify contributions to the understanding of these activities. The first step was the isolation of substances of 70% EtOH extract of aerial parts of M. hirtum by gel permeation chromatography followed by purification of substances by HPLC-RI. The identification of substances was performed by Nuclear Magnetic Resonance and Mass Spectrometry. The chemical profile of the extract was established by HPLC-PDA and quantification of the substances was based on their aglycones by the method of external calibration. It was possible to identify the flavones saponarin (8,69 ± 0,46 mg/g of extract), isovitexin (6,44 ± 0,45 mg/g of extract), isoorientin, which was below the limit of quantification (LOQ) and swertisin, present in the chromatographic profile in co-elution with another substance. These results are fundamental to the standardization of the crude 70% EtOH extract from the leaves of Machaerium hirtum / Mestre

Orientador: Dulce Helena Siqueira Silva / Banca: Angela Regina Araújo / Banca: André Luiz Meleiro Porto / Banca: Ernani Pinto Júnior / Banca: Jacqueline Aparecida Takahashi / Resumo: As macroalgas Dichotomaria marginata e Padina gymnospora foram coletadas no litoral paulista e seus microrganismos associados, Penicillium citrinum (Dm1) e Penicillium chrysogenum (Pg1), respectivamente, foram isolados e identificados. Os microrganismos foram cultivados em arroz parboilizado estéril e as culturas obtidas foram extraídas com acetato de etila e submetidas a partição. A fração FMeCN de cada extrato foi submetida às técnicas cromatográficas a fim de isolar os metabólitos secundários. Os extratos das macroalgas foram submetidos a partição e as frações resultantes submetidas a estudo químico por CLAE-DAD, CLAE-DAD/EMIES e RMN 1H. A comparação dos perfis cromatográficos das frações obbtidas das macroalgas permitiu uma abordagem qualitativa dos constituintes por gerar informações sobre a composição química das macroalgas em estudo. Os ácidos graxos foram analisados nas frações apolares das macroalgas e microrganismos associados por CG-EM e resultou na identificação de 27 substâncias nas frações hexânicas das macroalgas, sendo 19 da D. marginata e 8 da P. gimnospora, enquanto para os microrganismos, 32 substâncias foram identificadas, sendo 16 de P. citrinum e 16 de P. chrysogenum. A fração em MeCN de P. citrinum forneceu 17 substâncias, sendo 4 alcaloides quinolizidínicos: citrinadina A (1), citrinadina B (2), 18- desidroxi-citrinadina B (3), chrisogenamida (4); 4 alcaloides quinolactínicos: quinolactinas A (11), B1/B2 (12), B (13) e D (14) e 9 policetídeos: dicitrinina A (5), 1,5-dihidroxi-2-metil-3-(1-metil-2-hidroxi)-propilbenzeno (6), esclerotinina A (7), descarboxidihidrocitrinona (8), 1-carboxi-8-hidroxi-6-metilxantona éster metílico (9), ácido linoléico (10), ácido italícico (15), citrinina (16), e 1,3,8-tri-hidroxi-6- (hidroximetil)antraceno-9,10-diona (17). Adicionalmente, 9 substâncias foram obtidas a partir de P. chrysogenum, sendo 3... / Abstract: Macroalgae Dichotomaria marginata and Padina gymnospora were collected at Sao Paulo State shore and their associated microrganisms, Penicillium citrinum (Dm1) and Penicillium chrysogenum (Pg1), respectively, were isolated and identified. The microorganisms were cultivated in sterile parboilized rice and the resulting cultures were extracted with ethyl acetate and submitted to partitioning. Fraction FMeCN of each extract was submitted to chromatography aiming at the isolation of secondary metabolites. The macroalgae extracts were submitted to partitioning and the resulting fractions were analyzed by HPLC-DAD, HPLC-DAD-MS/ESI and 1H NMR. The chromatographic profile comparison for the resulting fractions from macroalgae allowed the qualitative assessment of the chemical constituents, and afforded information on the chemical composition of the macroalgae. Fatty acids were analysed in the low polarity fractions of the macroalgae and microrganisms extracts by GC-MS and resulted in the identification of 27 compounds from the hexane fractions of macroalgae, including 19, from D. marginata, and 8, from P. gimnospora, whereas 32 fatty acids were identified from the microorganisms, including 16 from P. citrinum and 16, from P. chrysogenum. Fraction in MeCN from P. citrinum afforded 17 compounds: 4 quinolizidine alkaloids: citrinadin A (1), citrinadin B (2), 18-dehydroxy-citrinadin B (3), chrysogenamide (4); 4 quinolactin alkaloids: quinolactins A (11), B1/B2 (12), B (13) and D (14), and 9 poliketides: dicitrinin A (5), 1,5-dihydroxy-2-methyl-3-(1-methyl-2-hydroxy)-propylbenzene (6), esclerotinin A (7), decarboxydihydrocitrinone (8), de 1-carboxy-8-hydroxy-6- methylxanthone methyl ester (9), linoleic acid (10), italicic acid (15), citrinin (16), e 1,3,8-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)antracene-9,10-dione (17). Aditionally, 9 compounds were obtained from P. chrysogenum, 3 nucleotides: adenosine (18)... / Doutor

Orientador: Vanderlan da Silva Bolzani / Co-orientador: Adriano Defini Andricopulo / Banca: Ian Castro-Gamboa / Banca: Flávio da Silva Emery / Banca: Norberto Peporine Lopes / Banca: Sylvie Michel / Resumo: Os produtos naturais são uma importante fonte de inspiração para o desenvolvimento de novos fármacos. O presente trabalho visou identificar produtos naturais bioativos que pudessem ser usados como modelo para o planejamento de novos compostos com propriedades antitumorais. A falta de dados organizados é ainda uma das dificuldades das áreas de produtos naturais e química medicinal. Portanto, a compilação de dados disponíveis sobre os metabólitos secundários sejam de espécies vegetais ou de outras fontes é de grande valor. Esse fato nos motivou a propor como primeiro objetivo deste projeto, a criação de uma base de dados contendo informações botânicas, químicas e biológicas dos metabólitos secundários obtidos e publicados pelo NuBBE durante 15 anos. A base de dados poderá ser útil não apenas para a pesquisa em química de produtos naturais atual do grupo, mas para todos interessados em estudos de planejamento de moléculas bioativas, metabolômica e dereplication, já que está disponível para acesso livre na internet. Um artigo científico descrevendo a criação da base de dados foi publicado na revista Journal of Natural Products em 2013. Os compostos da base de dados foram utilizados como fonte de moléculas para uma triagem virtual baseada na estrutura do receptor com a proteína tubulina para a identificação de moduladores dessa proteína. Baseado nos resultados de triagem virtual foi realizada a avaliação biológica in vitro das substâncias utilizando a proteína tubulina e ensaios de migração celular (wound healing e câmara de Boyden). Os ensaios biológicos indicaram uma série de guanidinas e a piplartina como principais compostos bioativos dentre os avaliados. A piplartina foi selecionada como modelo para o planejamento de novos compostos, pois apresentou relevante inibição de migração celular, além de estar descrito na literatura como citotóxico e... / Abstract: Natural products are an important source for the design of new drugs. This thesis aimed at the identification of bioactive natural products to be used as models for the design of compounds with antitumor properties. The lack of organized data is still one of the drawbacks in the natural products and medicinal chemistry area. Therefore, the compilation of accessible data of secondary metabolites from plant species or other sources is of great value, especially for the identification of molecular leads. This fact inspired us to propose as first objective of this thesis, the creation of the NuBBE database (NuBBEDB) containing botanical, chemical, and biological information of the secondary metabolites obtained and published by NuBBE in 15 years. This database can be useful not only for the current research in natural products of the group, but for the scientific society interested in bioactive compounds, metabolomics, and dereplication. A scientific paper describing the creation of the database was published in the Journal of Natural Products in 2013. NuBBEDB compounds were used as molecular source for the virtual screening with the protein tubulin. Based on the results of the virtual screening the biological evaluation of selected compounds was performed with the protein tubulin, and cell migration assays (Wound Healing and Boyden Chamber). The results of the biological assays indicated a series of guanidines and piplartine as active compounds. Piplartine was selected to be a model for the design of new compounds because it inhibited cell migration and is described in the literature as cytotoxic and selective, an interesting profile for this project. A series of 5 analogue compounds were designed and synthesized aiming at a better understanding of structure activity relationship and improvement of the biological activity. The compound designed by molecular simplification showed activity in the cell... / Doutor

Resumo: O presente trabalho avaliou a citotoxicidade in vitro de produtos naturais (terpenos, iridóides e derivados fenólicos) em linhagens celulares de adenocarcinoma murino de mama (LM3) e de pulmão (LP07), buscando uma possível correlação entre estrutura molecular e atividade antitumoral. A ordem de citotoxicidade na linhagem LM3 foi tingenona> pristimerina> plumericina> cromeno> paclitaxel> escandenina> acetato de bauerenila> ácido p-cumárico> ácido clorogênico. Na linhagem LP07, a exceção é a inversão de posição entre os ácidos clorogênico e p-cumárico e escandenina e paclitaxel. Pristimerina, tingenona, plumericina e o cromeno foram mais ativos que o controle positivo, taxol. Os nor-triterpenos pentacíclicos quinonametídeos tingenona (IC50=0,002 μmol/mL em LP07 e 0,003 μmol/mL em LM3) e pristimerina (IC50=0,005 μmol/mL em LP07 e LM3) apresentaram a maior citotoxicidade nas linhagens tumorais. A avaliação da relação estrutura e atividade indicaram os anéis A e B essenciais para o efeito citotóxico, devido à cetona ,ß-insaturada. A interação de pristimerina e tingenona com N-acetilcisteína foi confirmada por métodos espectrofotométricos e biológicos, constituindo um provável mecanismo de ação das substâncias. A atividade mutagênica das moléculas mais promissoras, pristimerina, tingenona e plumericina foi avaliada in vitro na presença e ausência de ativação metabólica (S9) e não demonstraram mutagenicidade (RM<2). / Abstract: This study evaluates the in vitro cytotoxicity of natural products such as terpenes, iridoids, and phenolic derivatives in the cell lines of adenocarcinoma murine of the breast (LM3) and lung (LP07). The study attempted to identify possible correlations between the molecular structure of these natural products and anticancer activity. The sequence for cytotoxic activity in the LM3 line was tingenone> pristimerin> plumericine> cromene> paclitaxel> scandenin> bauerenyl acetate> p-coumaric acid> chlorogenic acid. This sequence was similar to the LP07 cell line, however the exception was the inverse order between clorogenic and p-coumaric acid and between scandenine and taxol. Pristimerine, tingenone, plumericine and cromene were more potent than taxol, the positive control substance in this study in all cell lines. The quinone-methide triterpene tingenone (IC50=0,002 μmol/mL in LP07 and 0,003 μmol/mL in LM3) and pristimerin (IC50=0,005 μmol/mL in LP07 and LM3) showed the largest level of cytotoxicity in the cell lines. The structure-activity relationship suggests that rings A and B containing an , ßunsaturated carbonyl group are essential for the observed cytotoxic activity. The interaction between pristimerin and tingenone with N-acetilcysteine was proved by byological and spectrophotometric methods, estabilishing a likely action mechanism to these compounds. The in vitro mutagenic activity was evaluated for the most promising compounds: pristimerine, tingenone and plumericine, and they did not show mutagenic potential (RM<2). / Orientador: Wagner Vilegas / Coorientador: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Chung Man Chin / Banca: Dionéia Camilo Rodrigues de Oliveira. / Mestre

Orientador: Maysa Furlan / Banca: Nivaldo Boralle / Banca: Marcos Pivatto / Resumo: O perfil químico de folhas e frutos de Piper fuligineum foi analisado por cromatografia líquida de alta eficiência. A composição química de média polaridade dos dois órgãos vegetais apresentou semelhança. As análises demonstraram também que os frutos apresentavam composição química complexa, principalmente devido a presença de substâncias de maior polaridade. Essas análises permitiram selecionar as folhas de P. fuligineum para dar continuidade aos estudos químicos. Estes estudos resultaram no isolamento de cinco substâncias, sendo duas kavalactonas: (E)-6-(8-feniletil)-4-metoxi-2H-piran-2-ona e 6-(2-fenil-7,8-diidroxetil)-4-metoxi-2H-piran-2-ona; uma cromanona: (2,2-dimetil-4-oxocromano-6-carboxilato de metila) e dois derivados prenilados do acido benzoico: 4-hidroxi-3-(3-metilbutil-2-en-1-il)benzoato de metila e 4-metoxi-3-(3-metil-1-oxobut-2-en-1-il) benzoato de metila. As estruturas químicas das substâncias foram determinadas utilizando técnicas espectrométricas, incluindo RMN 1D e 2D. Todas as substâncias estão sendo descritas pela primeira vez em Piper fuligineum. A substância 4 é inédita como produto natural. O extrato etanolico das folhas e as frações obtidas de P. fuligineum foram avaliadas quanto ao potencial tripanocida frente à forma epimastigota da cepa Y de Trypanosoma cruzi, mostrando promissora atividade do extrato etanólico com IC50 de 26,67 g.mL-1 quando comparado com o controle positivo, benznidazol, com IC50 de 11,11 g.mL-1. O extrato acetato de etila, a fração clorofórmica e a substância 1 foram submetidos a testes antifúngicos frente aos fungos Candida albicans, C.krusei, C. tropicalis, C. parapsilosis e a levedura Cryptococcus neoformans. O extrato apresentou forte atividade frente ao fungo Candida tropicalis e moderada atividade frente aos fungos C. krusei, C. parapsilosis e a levedura Cryptococcus neoformans, enquanto a fração clorofórmica apresentou forte atividade frente ao... / Abstract: The chemical profile of leaves and fruits of Piper fuligineum was analyzed by high performance liquid chromatography. The chemical composition of medium polarity related to leaves and fruits showed great similarity. The analysis also showed that the chemical composition of the fruits was more complex, mainly due to the presence of more polar substances. These analyzes allowed the selection of the leaves of P. fuligineum to continue the chemical studies. The chemical studies of the leaves of Piper fuligienum resulted in the isolation of six compunds, including two kavalactones (4- methoxy-6- [(E)-2-phenyl -vinyl] -2H-pyran-2-one and 6-(1,2-dihydroxy-2-phenyl- ethyl)-4-methoxy-2H- pyran-2-one), one chromanone (methyl-2,2-dimethyl-4-oxo-6- cromanacarboxylate) and two prenylated derivatives of benzoic acid (methyl-4-hydroxy-3-(3-methyl-2- buten-1-yl) benzoate and methyl-4-methoxy-3-(3-methyl -2-butenoyl) benzoate. The chemical structures of the isolated compounds were determined using spectrometric techniques, including 1D and 2D NMR. All compounds were described for the first time in Piper fuligineum, and the compound 4 is a new natural product. The ethanolic leaf extract and fractions obtained from P. fuligineum were evaluated for trypanocidal potential against epimastigote form of Trypanosoma cruzi Y strain, showing promising activity of the ethanol extract with IC50 of 26.67 g.mL-1 compared with the positive control benznidazole, with IC50 of 11.11 g.mL-1. The ethyl acetate extract, the chloroform fraction and substance 1 underwent antifungal drugs against fungi Candida albicans, C.krusei, C. tropicalis, C. parapsilosis and Cryptococcus neoformans yeast. The extract showed strong activity against the fungus Candida tropicalis and moderate activity against fungi C. krusei, C. parapsilosis and Cryptococcus neoformans yeast while the chloroform fraction showed strong activity against the fungus C. krusei, and moderate activity against... / Mestre

Orientador: Maysa Furlan / Banca: Marcia Nasser Lopes / Banca: Roberto Carlos Campos Martins / Resumo: O aumento na demanda pela descoberta de novos fármacos de origem vegetal levou os químicos orgânicos a intensificarem estudos para a elucidação da rota metabólica de formação dos metabólitos de interesse. Muitas vezes, esses metabólitos mostram baixo acúmulo nas matrizes vegetais e/ou apresentam complexidade estrutural, que impossibilitam a obtenção dos mesmos por síntese ou semi-síntese. Com isso, o entendimento dos processos biossintéticos envolvidos em sua formação pode facilitar a obtenção dos mesmos por técnicas biotecnológicas. Para tanto, a espécie Piper tuberculatum, conhecida por acumular amidas piperidínicas, piperidônicas e isobutílicas, com potenciais atividades antitumoral, carrapaticida, antifúngica, inseticida entre outros, se configura em um excelente modelo para tais estudos funcionais. À partir do extrato de folhas e frutos foram isoladas as amidas piplartina e piperina, majoritárias na planta. A síntese dos precursores fenilpropanoídicos: ácido 3',4'-metilenodióxicinâmico e ácido ferúlico, bem como os mesmos marcados com isótopos estáveis: ácido [1-OD, 2-D]-3',4'-metilenodióxicinâmico e ácido [1-OD, 2-D]-ferúlico, foi realizada para os estudos biossintéticos. Os precursores, L-lisina, ácido 3',4'-metilenodióxicinâmico e ácido malônico foram incorporados na fração solúvel do extrato enzimático das folhas de Piper tuberculatum. Foram determinadas as condições ótimas de extração da enzima baseadas em três parâmetros; temperatura (31 °C), tempo de reação (90 minutos) e concentração de precursores (10 mM). Os produtos formados foram avaliados por cromatografia líquida e espectrometria de massas. As análises foram monitoradas utilizando a piperina como padrão, observando a sua formação. Para a determinação da concentração protéica foi utilizado o método de Bradford e a análise das proteínas presentes foi feita utilizando gel de eletroforese... / Abstract: The increase in demand for discovery of new drugs from plant origin has led also to increase organic studies to elucidate the metabolic pathway of the secondary metabolites of interest. Often, these metabolites show low concentration in plant as well structural and configurational complexity distinguishes them from synthetic products and prohibit their synthesis or semi - synthesis. Thus, understanding the biosynthetic processes involved in their formation can facilitate to obtain them by biotechnology techniques. Therefore, the Piper tuberculatum species known to accumulate piperidinic, piperidonic and isobutyl amides that show potential antitumoral, acaricidal, antifungal and insecticidal activities, is set in an excellent model for such functional studies. From leaves and fruits extract two compounds were isolated, the piperine and piplartine, main amides found in Piper tuberculatum. The synthesis of phenylpropanoids precursors: 3'-4'- methylenedioxycynamic acid and ferulic acid as well the same compounds labeled with stable isotopes: acid [1 -OD , 2- D]-3'-4'- methylenedioxycynamic acid and [1 -OD , 2- D]- ferulic acid were performed for the biosynthetic studies. The precursors, L-lysine, 3'-4'- methylenedioxycynamic acid and malonic acid were incorporated in the soluble enzyme fraction of Piper tuberculatum. The optimum conditions for extraction of the enzyme were based on three parameters; temperature (31 ° C), time of reaction (90 minutes) and concentration of precursors (10 mM). The products were analyzed by liquid chromatography and mass spectrometry. The analyzes were monitored using piperine as standard and its formation was determined. For determination of protein concentration the Bradford method was used. The analyze of the proteins was performed by using one-dimensional electrophoresis (SDS- PAGE). / Mestre

Orientadores: Pedro Luiz Rosalen, Hyun Koo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-07T01:21:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Yatsuda_Regiane_D.pdf: 2220152 bytes, checksum: af7c550978d5b4b9b4ba19a84d7cb6c0 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O uso de plantas medicinais vem crescendo nos últimos anos e isto é devido principalmente as descobertas de suas propriedades biológicas, e entre estas plantas destacam-se as do gênero Mikania. Assim, a procura pela descoberta de novos produtos naturais com atividade antibacteriana para a prevenção de doenças bucais e talvez com menores efeitos adversos quando comparados aos produtos industrializados seria muito importante para obtenção de um meio efetivo de controle da formação de um biofilme patogênico. Assim, em estudos anteriores, a fração hexânica das plantas Mikania laevigata e Mikania glomerata apresentaram atividade antimicrobiana e inibiram a aderência dos estreptococos do grupo mutans. Deste modo, o objetivo geral deste trabalho foi avaliar o efeito antimicrobiano dos compostos isolados das frações hexânicas das plantas M. laevigata e M. glomerata (guaco) sobre os estreptococos do grupo mutans. Para isso, foram realizados três estudos, sendo o objetivo do estudo 1 analisar a composição química e o efeito antimicrobiano dos compostos isolados e identificados das frações hexânicas das plantas M. laevigata e M. glomerata sobre o crescimento bacteriano e a aderência celular dos estreptococos do grupo mutans. O objetivo do estudo 2 foi determinar a influência destes compostos isolados na formação e na composição de polissacarídeos de biofilmes de Streptococcus mutans UA159 formados em discos de hidroxiapatita, na queda de pH gücolítico e seu efeito na translocação de prótons pela atividade da ATPase. Além disso, foram realizados estudos para analisar seu efeito na atividade de glucosiltransferase (GTF) B em solução (GTF-sol) e em superfície (GTF-sup). O objetivo do estudo 3 foi avaliar as atividades dos compostos isolados da Mikania utilizando modelo experimental de cárie em ratos. No estudo 1, os ácidos cupressênico, diterpênico e caurenóico foram os compostos que apresentaram atividade antimicrobiana (CIM entre 2,5-20 ng/mL e CBM entre 2,5-40 jjg/mL) e inibição da aderência celular entre 1,25-5 ug/mL, sendo que os compostos espatulenol, caurenol, ácido grandiflórico não apresentaram atividade biológica nas concentrações testadas. No estudo 2, somente os três compostos ativos isolados da Mikania foram avaliados na concentração 500 }ig/mL. Os resultados demonstraram que os ácidos cupressênico, diterpênico e caurenóico apresentaram efeito na viabilidade bacteriana dos biofilmes, reduziram a produção de ácidos orgânicos (pH final entre 6,4-5,8) e a atividade da ATPase (28-40%). Os compostos também foram potentes inibidores da atividade de GTFs, tanto em solução quanto em superfície de hidroxiapatita, sendo 50-60% de redução para GTF B-sol e 50-80% de redução para GTF B-surf. Nos biofilmes, o peso seco e a quantidade de polissacarídeos solúveis, insolúveis e intracelulares também foram significativamente reduzidos com o tratamento dos três compostos (p<0,05). No estudo 3, a aplicação tópica 2 vezes ao dia dos ácidos cupressênico, diterpênico e caurenóico (500 ug/mL) promoveu a redução na incidência de cárie em superfície lisa e sulcai (p<0,05), além da diminuição na porcentagem de infecção por S. mutans UA159 pelos ácidos diterpênico e caurenóico, não sendo afetada a microbiota total dessas ratas. Desta brma, concluímos que os ácidos cupressênico, diterpênico e caurenóico isolados da M. laevigata e M. glomerata possuem potencial antimicrobiano, inibindo os fatores de virulência dos Streptococcus mutans e a cárie em modelo in vivo, demonstrando serem promissores agentes anti-cárie e antí-placa / Abstract: Considering the great use of plants as medicinal substances in the popular medicine, it is critical to investigate their biological and chemical properties in order to not anly help to enhance our understanding of the therapeutic potential of these natural products, but also how to make them more effective pharmacological agents. The development of therapeutic agents aimed at disrupting both colonization of the teeth by dental pathogens and the subsequent formation of dental plaque is one of the prime strategies to reduce the incidence of tooth decay. The hexanic fraction of the plants Mikania laevigata and Mikania glomerata showed antimicrobial activities and inhibit the adherence of mutans streptococci. The overall aim of this study was to evaluate the antimicrobial effect of the isolated compounds of the hexanic fractions of Mikania laevigata and Mikania glomerata (guaco) on mutans streptococci. Therefore, three studies were carried out. in study 1 ,the antimicrobial activity of the isolated compounds was assessed by determination of minimum inhibitory concentration (MIC), minimum bactericidal concentration (MBC) and inhibition of cell adherence (Adh) to glass surface of mutans streptococci. In study 2, the influence of the isolated compounds were evaluated on viability, development, polysaccharide composition and acidogenicity of S. mutans biofilms, on glucans production by purified glucosyltransferases (GTFs) adsorbed to hydroxyapatite beads, and on membrane-associated F-ATPase and glycolytic activities. In study 3, the influence of the isolated compounds on caries development in vivo was evaluated. The acids cupressenic, diterpenic and kaurenoic were the compounds most effective in inhibiting the growth of the bacterial strains tested (MIC 2.5-20 ug/ml and MBC 2.5-40 ug/ml) and adherence cells (1.25-5 ug/ml). These three compounds were tested on the concentration of 500 pg/ml on tne study 2, and showed antimicrobial activity reducing the viable cells and the dry-weight of the biofilm treated, and also reduced the soluble, insoluble extracellular and intracellular polysaccharide of this biofilms. The compounds were able to reduce the acid production on the biofilms (final pH between 6.4 and 5.8) and the activity of F-ATPase (28-40%). The activity of the GTF B on solution (50-60%) and on surface (50-80%) of hydroxyapatite was also reduced by the three compounds. In study 3, the topical application twice a day of cupressenic, diterpenic and kaurenoic acids (500 ug/ml) showed cariostatic effect on smooth-surface and sulcal caries, and also showing reduction of the percentage of Streptococcus mutans UA159 infection by diterpenic and kaurenoic acids (p<0.05), not showing differences on the total microbiology (p>0.05). In conclusion, the cupressenic, diterpenic and kaurenoic acids isolated from M. laevigata and M. glomerata have relevant antimicrobial activity and inhibit the virulence factors of mutans streptococci in vitro and in vivo, being promising anti-caries and anti-plaque agents / Doutorado / Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica / Doutor em Odontologia