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Caracterização de isolados clínicos de Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii quanto à susceptibilidade a flunocazolAmaro, Maria Cristina de Oliveira January 2006 (has links)
Nos últimos anos tem ocorrido um aumento de infecções fúngicas, devido à elevação do número de pacientes imunossuprimidos, principalmente pelo surgimento da epidemia da AIDS (Acquired Immunodeficiency Syndrome). O uso aumentado de antifúngicos tem levado ao surgimento de cepas resistentes a estes agentes, já verificado com o azólico fluconazol, o agente antifúngico mais utilizado na terapia de manutenção de pacientes com AIDS, que desenvolvem criptococose. Neste trabalho, foram determinadas as Concentrações Inibitórias Mínimas (CIMs) de fluconazol para isolados clínicos de Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii, utilizando-se o teste de microdiluição em caldo padronizado pelo National Commitee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS), o método padrão para testar susceptibilidade antifúngica de leveduras. Foram testados 173 isolados clínicos de C. neoformans e C. gattii, sendo que as CIMs para fluconazol variaram de 0,125 a 16 μg/mL, com uma CIM50% de 2 e uma CIM90% de 4 μg/mL. Todos os isolados foram considerados sensíveis a fluconazol. Também foi realizado um teste de indução de resistência a fluconazol, por exposição de um isolado sensível, a concentrações crescentes da droga, para verificar se apenas a exposição, levaria ao desenvolvimento de resistência. No entanto, verificou-se apenas uma resistência transitória, em uma das subpopulações, sendo que o fenótipo de sensibilidade foi restaurado. Os dados obtidos neste trabalho estão em concordância com estudos nacionais e internacionais, que também utilizaram o teste padrão de microdiluição em caldo. A resistência entre isolados clínicos de C. neoformans e C. gattii ainda tem se mostrado rara em termos mundiais comparada a resistência adquirida por outras leveduras. No entanto, devido aos relatos de desenvolvimento de resistência durante a terapia de manutenção da criptococose, é importante alertar quanto à possibilidade do surgimento e da propagação de cepas resistentes. / In the last years have occurred an increase of fungal infections due to rise of number of immunocompromised patients, particularly by appearance of the Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS). The incresing use of antifungal agents has determined the appearance of resistants strains to this agents, already verified with the fluconazole azole, the antifungal agent more used in the maintenance therapy of AIDS patients that developing criptococosis. In this work were determined the Minimuns Inibitories Concentrations (MICs) of fluconazole to Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii clinical isolates, using the National Commitee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) broth microdilution method. This is the test standard to test antifungal susceptibility to yeasts. Were tested 173 clinical isolates of C. neoformans and C. gattii. The MICs to fluconazole ranged of 0.125 to 16 μg/mL and the MIC50% was 2 and MIC90% was 4μg/mL. All isolates were considered susceptibles to fluconazole. A test of fluconazole resistance inducing was carry out by exposure to drug incresing concentrations of one susceptible isolate, to verify if only the exposure can to result in the resistance development. However occurred only a temporary resistance in one of the subpopulations, since the susceptibility profile was restored. The data obtained in this work are in agreement with national and international studies that also used the standard broth microdilution method. The resistance between C. neoformans and C. gattii clinical isolates has been rare in the world when compared with others yeasts. Nonetheless due to references to resistance development during the maintenance therapy of cryptococosis, it’s important to remain alert as for possibility of appearance and spread of resistants strains.
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Alterações histopatológicas iniciais pulmonares na infecção aguda experimental de camundongos Swiss webster imunocompetentes por Cryptococcus neoformans e C. gatti.Lourenço, Manoel Gionovaldo Freire January 2008 (has links)
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Previous issue date: 2008 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de janeiro, RJ, Brasil / O envolvimentonto do sistema nervoso central com meningites tem sido tradicionalmente relatado em ambas as infecções por C. neoformans e C. gattii, com ou sem sinais clínicos ou radiológicos de lesão pulmonar. Quase todas as formas disseminadas por cepas de C. neoformans ocorreram em indivíduos imunocomprometidos, exceto em poucos casos com fatores predisponentes, sugerindo a existência de alguns mecanismos de escape. Em contraste criptococose por C. gattii, quase sempre afeta indivíduos sem prejuízo imune identificável, e comumente apresenta lesões pulmonares e do sistema nervoso central associado à meningite. Como os mecanismos envolvidos nos estágios precoces da infecção pulmonar por espécies de Cryptococcus ainda são poucos conhecidos, foram acompanhados separadamente o processo de internalizaçao, de duas cepas de C. neoformans e C. gattii, nos pulmões de camundongos imunocompetentes, descrevendo esta penetração e comparando possíveis diferenças. Materiais e Métodos: Camundongos Swiss Webster foram instilados intratraquealmente com: a) 10 5 leveduras de C. neoformas em 50µL de salina (30 animais); b) 10 5 leveduras de C. gattii em 50µL de salina (30 animais); ou c) 50µL de salina sem leveduras de Cryptococcus (10 animais). Após a instilação o abdômen dos camundongos foi comprimido e liberado para promover uma inalação profunda. Os animais foram mortos 2, 12, 24, 48 e 72h após a instilação.A cada período os animais foram submetidos a eutanásia por injeção intraperitonial de 1.0 mL de pentobarbital sódico a 2,5%. Resultados e Discussão: A histopatologia entre os pulmões de camundongos infectados por C. neoformans ou C. gattii revelaram peculiaridades importantes. Uma das diferenças principais foi a expressão precoce da cápsula de polissacarídeo por C. neoformans em comparação com C. gattii. Pór causa da expressão precoce da sua cápsula de polissacarídeo, C. neoformans é maior em tamanho, o que pode contribuir para seu escape dos mecanismos de defesa do hospedeiro e, maior persistência no trato respiratório. Este mecanismo de escape e a conseqüente dificuldade para difusão resultam numa grande reação inflamatória local acompanhada de brotamento precoce. Conclusões: a invasão pulmonar e os mecanismos de disseminação de Cryptococcus no trato respiratório em estágios precoces da infecção experimental não dependeram diretamente da participação de células mononucleares e neutrofilicas. Este processo aconteceu, pela interação física entre os fungos e o epitélio respiratório, contudo sendo desconhecido os mecanismos intrínsecos / The envolvimentonto central nervous system with meningitis has traditionally been reported in both infections C. and C. neoformans gattii, with or without clinical or radiological signs of lung injury. Almost all forms disseminated by strains of C. neoformans occurred in immunocompromised individuals, except in a few cases with predisposing factors, suggesting the existence of some escape mechanisms. In contrast cryptococcosis by C. gattii, often affects individuals without identifiable immune injury, and commonly shows pulmonary lesions and central nervous system associated with meningitis. As the mechanisms involved in the early stages of pulmonary infection by Cryptococcus species are still little known, were tracked separately the process of internalization of two strains of C. and C. neoformans gattii, the lungs of immunocompetent mice, describing and comparing this penetration possible differences. Materials and Methods: Swiss Webster mice were intratracheally instilled with: a) 10 5 yeasts of C. 50μL neoformas in saline (30 animals), b) 10 5 yeasts C. gattii in 50μL of saline (30 animals), or c) 50μL of saline without yeast Cryptococcus (10 animals). After instillation, the abdomen of the mice was compressed and released to promote a deep inhalation. Animals were sacrificed 2, 12, 24, 48 and 72h after instilação.A each period the animals were euthanized by intraperitoneal injection of 1.0 mL of 2.5% sodium pentobarbital. Results and Discussion: The histopathology of the lungs of mice infected with C. or C. neoformans gattii revealed important peculiarities. One of the main differences is the early expression of capsule polysaccharide by C. in comparison to C. neoformans gattii. Because of their expression of early polysaccharide capsule, C. neoformans is larger in size, which may contribute to their escape from host defense mechanisms, and greater persistence in the respiratory tract. This escape mechanism and the consequent difficulty for the diffusion result in significant local inflammatory reaction accompanied by sprouting early. Conclusions: Lung invasion and the mechanisms of dissemination of Cryptococcus in the respiratory tract in the early stages of experimental infection did not directly dependent on the participation of mononuclear cells and neutrophilic. This process took place, the physical interaction between fungi and respiratory epithelium, but the mechanisms are unknown intrinsic
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Suscetibilidade in vitro de Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii frente a drogas antifúngicas pela citometria de fluxoMorales, Bernardina Penarrieta January 2009 (has links)
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Previous issue date: 2014-05-06 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Cryptococcus neoformans (C. n) e Cryptococcus gattii (C. g) são agentes da criptococose. A carência de publicações sobre teste de suscetibilidade de C. n e principalmente de C. g é evidente. A maioria de isolados clínicos de C. g mostra-se suscetível in vitro a fluconazol e itraconazol; no entanto o surgimento de resistência a drogas antifúngicas incentivou os testes de suscetibilidade in vitro. Como conseqüência, Clinical and Laboratory Standadards Institute \2013 CLSI, anteriormente National Committee for Clinical Laboratory Standards \2013 NCCLS, publicaram metodologia padronizada M27-A2 para alcançar reprodutibilidade e permitir a comparação de resultados de suscetibilidade entre laboratórios, porém alguns problemas como o tempo de incubação e o padrão de leitura levaram à busca de técnicas alternativas, tais como a citometria de fluxo. O objetivo deste trabalho é padronizar a técnica de citometria de fluxo para o teste de suscetibilidade in vitro de C.n e C.g. visando a redução do tempo de incubação, a utilização de leitura automatizada e a obtenção de resultados rápidos e reprodutíveis
A concentração inibitória mínima (CIM) de 20 isolados de C.n e 21 de C.g foi determinada por citometria de fluxo e os resultados comparados com o protocolo padrão proposto pelo CLSI/M27A-2. Após duas horas de incubação com anfotericina B utilizando FUN-1, C. gattii resultou em 100% de concordância entre as duas técnicas para diluição de 2\03BCg/mL e 95,2% para 1\03BCg/mL e C. neoformans resultou em 100% de concordância para 1 e 2\03BCg/mL. Para azólicos e flucitosina, foram obtidos resultados reprodutíveis com o fluorocromo Acridine Orange após 18 horas de incubação, que resultou em 78% de concordância entre as duas técnicas para fluconazol, 85% para itraconazol e 97% para flucitosina. Em ambas as metodologias, C. gattii foi menos suscetível do que C. neoformans frente ao itraconazol e flucitosina (p<0,05). A citometria de fluxo é uma ferramenta útil, com potencial para testes in vitro e determinação da CIM dos antifúngicos estudados, com apreciável redução do tempo mínimo para obtenção de resultados / Cr
yptococcus neoformans
(
C.n
) and
Cryptococcus gattii
(
C.g
) are the agents of cryptococcosis.
The lack of publications on susceptibility tests of
C.n
and especially
C.g
is evident. Most clinical
isolates of
C.g
proved to be susceptible
in vitro
to fluconazol
e and itraconazole and yet the
emergence of resistance to antifungal drugs encouraged susceptibility testing
in vitro
. As a
consequence,
Clinical and Laboratory Standadards Institute
–
CLSI
(
National Committee for
Clinical Laboratory Standards
–
NCCLS
)
pub
lished standardized methodology to achieve
reproducibility and allow comparison of susceptibility results between laboratories
(M27
-
A2
document)
, however some problems of methodology, like incubation time and standard reading,
led to the search for alterna
tive techniques, such as flow cytometry. The objective of this work is
to standardize the technique of flow cytometry to test the
in vitro
susceptibility of
C
.
n
and
C
.
g
in
order to reduce the incubation time, use of automated reading and
obtain
fast and re
producible
results
. The minimum inhibitory concentration (MIC) of 20 isolates of
C.n
and 21 of
C.g
was
determined by flow cytometry and the results compared with the standard protocol proposed by
CLSI/M27A
-
2.
Flow citometry showed 100% agreement with CLSI/
M27A
-
2 results for 2
μ
g/mL
and 95.2% for 1
μ
g/mL dilution when
C.g
isolates were tested, and 100% agreement for 1 and
2
μ
g/ml dilution when
C.n
were tested
after two hours of incubation with amphotericin B using
FUN
-
1
.
Reproducible results were obtained with fluorochrome Acridin
e Orange for azoles and
flucytosine after 18 hours incubation, resulting in 78% agreement for fluconazole, 85% for
itraconazole and 97% for flucytosine.
C.g
was less susceptible than
C.n
against itraconazole and
flucytosine (p <0.05) in both methodologies.
Flow cytometry is a useful tool, with potential for
in
vitro
susceptibility test
s
of the antifungal agents studied, with appreciable reduction in the
minimum time for achieving results.
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Colonização cutâneo-mucosa e/ou infecção por Cryptococcus neoformans em indivíduos infectados pelo HIV, com e sem síndrome de imunodeficiência adquiridaestudo prospectivo e evolutivo de coorte interrompidaVieira, Iracema Forni January 2000 (has links)
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Previous issue date: 2000 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / No período de abril de 1990 a maio de 1999 foi realizado estudo prospectivo de colonização cutâneo-mucosa e/ou infecção por Cryptococcus neoformans em 100 indivíduos infectados pelo HIV, com e sem SIDA. Os espécimes clínicos examinados foram respectivamente: raspados de interdígito dos pés e das mãos, da superfície dorsal da língua, swab de fossa nasal, urina e escarro. Todos os espécimes foram semeados em placas contendo meio niger. As colônias fenoloxidase positivas foram subcultivadas e identificadas. O estudo foi subdividido em três etapas. Na primeira fase, de abril de 1990 a dezembro de 1992, dos 100 indivíduos investigados, obtivemos isolamento de C. neoformans de seis, sendo uma colonização transitória, dois casos compatíveis com colonização ou infecção brônquica inicial e outros três com doença disseminada. Na segunda fase, correspondente à interrupção do protocolo de janeiro de 1993 a dezembro de 1995, foi realizada a revisão dos 100 prontuários desta casuística, sendo apurados cinco casos de criptococose disseminada e 60 óbitos por variadas causas, dos quais seis relacionados com criptococose disseminada. Na terceira fase, 28 indivíduos remanescentes da casuística original foram resubmetidos ao protocolo inicial de investigação, sendo encontrado um caso de colonização brônquica por C. neoformans var. gattii sorotipo B em mulher grávida, a qual três anos após este achado, apresentou criptococose disseminada por C. neoformans var. neoformans / Mucocutaneous colonization and/or infection by Cryptococcus neoformans was prospectively studied from April 1990 to May 1999 in 100 individuals infected by HIV, with and without AIDS. Clinical specimens included in the study were: interdigital scrapings of hands and feet, scraping of the dorsal surface of the tongue, nasal swab, urine and sputum. All specimens were plated onto niger seed agar. Phenoloxidase-positive colonies were subcultivated and identified. The study was performed in three steps. In the first step, from April 1990 until December 1992, C. neoformans was isolated from 6 out of the 100 individuals studied: one had transient colonization, two were compatible with colonization or initial bronchial infection and three had disseminated cryptococcosis. In the second step, corresponding to the period of interruption of the protocol from January 1993 to December 1995, review of the case history of the patients showed that 5 had disseminated cryptococcosis and at least 60 died from various causes, 6 of whom related to disseminated cryptococcosis. In the third step, 28 remaining individuals from the original casuistic were re-evaluated according to the protocol of the first step, disclosing one case of bronchial colonization by C. neoformans var. gattii serotype B in a pregnant woman who three years later presented disseminated cryptococcosis by C. neoformans var. neoformans
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Caracterização da atividade antifúngica de extrato aquoso de sementes de Allamanda polyanthaBresciani, Fernanda Regina January 2013 (has links)
número de casos de infecções fúngicas invasivas tem aumentado nas duas últimas décadas, estando associado com aumento do número de pacientes com AIDS ou submetidos a terapias imunossopressoras. Cryptococcus neoformans e C. gattii estão entre os agentes causadores mais comuns dessas infecções. Os antifúngicos atualmente utilizados apresentam limitações relacionadas à toxidade e surgimento de resistência, tornando importante a busca por novos medicamentos. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a atividade antifúngica do extrato aquoso bruto de sementes de Allamanda polyantha (APCSE) frente a C. neoformans e C. gattii. Os valores de concentração inibitória mínima (CIM) foram determinados por teste de microdiluição. APCSE apresentou melhor atividade contra C. gattii (CIM 70 e 36 Xg/mL, para as linhagens R265 e R272, respectivamente) em comparação com C. neoformans H99 (CIM 563 Xg/mL). APCSE inibiu formação de cápsula polissacarídica em C. neoformans, fenótipo associado à virulência, e reduziu o tamanho de corpo celular em C. gattii. Aparentemente, APCSE inibiu a divisão celular completa em C. neoformans, causando a formação de cadeias lineares de células que apresentam fragmentação nuclear e não reagem com marcador para oligômeros de quitina. Quatro compostos foram isolados de APCSE por métodos cromatográficos e identificados por ressonância magnética nuclear: plumieridina, plumierídeo, protoplumericina, além de uma mistura dos iridoides plumericina e isoplumericina. Os valores de CIM de plumieridina e plumierídeo para Cryptococcus spp. foram maiores que os de APCSE, indicando que outros compostos podem estar contribuindo para atividade do extrato ou que os compostos possuem maior eficência em associação. Protoplumericina não foi ativa contra Cryptococcus spp. Plumierídeo foi um dos compostos causadores de alteração morfológica em C. neoformans. APCSE e compostos isolados a partir do extrato apresentaram potencial atividade antifúngica e podem prover uma nova ferramenta para estudos da biologia celular de C. neoformans e C. gattii. / The number of cases of invasive fungal infections has increased in the last two decades, and is associated with increased numbers of patients with AIDS or patients undergoing immunosuppressive therapies. Cryptococcus neoformans and C. gattii are among the most common causative agents of such infections. Antifungal drugs currently used have limitations related to toxicity and emergence of resistance, making it important to search for new drugs. The objective of this study was to evaluate the antifungal activity of an aqueous crude seed extract from Allamanda polyantha (APCSE) against Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii. The values of minimum inhibitory concentration (MIC) were determined by broth microdilution test. APCSE showed better activity against C. gattii (MIC 70 and 36 Xg/mL, for strain R265 and R272, respectively) compared with C. neoformans H99 (MIC 563 Xg/mL). APCSE inhibited polysaccharide capsule formation in C. neoformans, a virulence associated phenotype, and reduced the cell body size in C. gattii. Apparently, APCSE inhibited cell division in C. neoformans, causing the formation of linear chains of cells that exhibit nuclear fragmentation and do not react with marker for chitin oligomers. Four compounds were isolated from APCSE by chromatographic methods and identified by nuclear magnetic resonance: plumieridine, plumieride, protoplumericin, and a mixture of the iridoids plumericin and isoplumericin. MIC values of plumieridine and plumieride for Cryptococcus spp were higher than those of APCSE, indicating that other compounds may be contributing to the activity of the extract or that these compounds are more efficient in combination. Protoplumericin was not active against Cryptococcus spp. Plumieride was one of the compounds causing morphological change in C. neoformans. APCSE and compounds isolated from this extract showed potential antifungal activity and may provide a new tool for studies of C. neoformans and C. gattii cell biology.
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Variabilidade genética de Cryptococcus neoformans isolado de pacientes HIV positivos atendidos no Hospital Nereu Ramos de Florianópolis, Santa CatarinaDambrós, Bibiana Paula January 2005 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-graduação em Biotecnologia / Made available in DSpace on 2013-07-15T23:08:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1
223774.pdf: 1385999 bytes, checksum: 40e28c5a941c3142d2646b4d37cb75b6 (MD5) / A criptococose é uma infecção fúngica de distribuição mundial causada pela levedura encapsulada Cryptococcus neoformans. Esta doença é de grande importância em pacientes imunocomprometidos, podendo também acometer indivíduos imunocompetentes. A infecção pelo C. neoformans resulta da inalação basidiósporos, conídios ou blastoconídios pouco capsulados (4 a 5µm) presentes no ambiente, podendo inicialmente causar infecção sintomática ou assintomática na área subpleural dos pulmões, ser erradicada ou ainda permanecer dentro de um granuloma em estado latente. Este patógeno pode ser classificado em três variedades: C. neoformans var grubii (sorotipo A), com distribuição mundial, C. neoformans var neoformans (sorotipo D) freqüentemente encontrado na Europa e América do Sul e C. neoformans var gattii (sorotipos B e C) regiões tropicais e subtropicais e o híbrido sorotipo AD. No Brasil, as três variedades são os agentes etiológicos da criptococose em humanos. O objetivo deste estudo foi avaliar a variabilidade genética de amostras de C. neoformans isoladas de pacientes HIV positivos atendidos no Hospital Nereu Ramos de Florianópolis, Santa Catarina. Os 35 isolados clínicos analisados foram caracterizados como C. neoformans var grubii, sorotipo A, através da metodologia de PCR-RFLP do fragmento de 597 pb do gene CAP59. A PCR-fingerprinting com o iniciador M13 agrupou 34 isolados clínicos no padrão molecular VNI e uma amostra apresentou perfil distinto. A caracterização das 35 amostras através da técnica de RAPD utilizando 4 iniciadores aleatórios 3303, 3304, 3306 e 3307 mostrou baixa variabilidade genética das amostras. O sequenciamento do fragmento de 597 pb do gene CAP59 de duas amostras representativas juntamente com o padrão sorotipo A LMM794, mostrou uma homologia de 96% na seqüência nucleotídica e de aminoácidos predita com as seqüências de sorotipo A e AD depositadas no GenBank. Nossos resultados adicionam novas informações sobre a Biologia Molecular do C. neoformans no Estado de Santa Catarina.
Cryptococcus neoformans is an encapsulated yeast-like fungus of worldwide distribution and the etiologic agent of cryptococcosis. This disease is a common opportunistic infection among patients with immunosupression and in apparently immunocompetent individuals. The infection is acquired by the inhalation of infectious propagules present in the environment. Therefore, the primary settlement of the pathogens is in the lungs, a site from which dissemination may occur. This fungus is classified in three varieties C. neoformans var. grubii (serotype A) of worldwide distribution, C. neoformans var. neoformans (serotype D) isolated rather frequently in Europe and South America, C. neoformans var. gattii (serotypes B and C) isolated in tropical and subtropical regions and a hybrid serotype AD. In Brazil, these three distinct neoformans varieties are the main casual agents of human cryptococcosis. The main goal of this dissertation is to study the genetic variability of C. neoformans samples isolated from patients attended at the Hospital Nereu Ramos Hospital, Florianópolis, Santa Catarina state, Brazil. Thirty-five clinical isolates were characterized, based on morphological and molecular data. All 35 clinical isolates were identified as C. neoformans var. grubii, representing serotype A, by PCR-RFLP analysis of CAP59 gene 597pb restriction fragment. A PCR-fingerprinting with the microsatellite-specific primer M13 grouped 34 isolates into the molecular type VNI and one showed distinct profile. The genetic variability among C. neoformans isolates were studied using randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis. The four arbitrary polymerase chain reaction primers used in this study detected low genetic variability among the samples. The CAP59 nucleotide and predicted amino acid sequences analysis of two representative samples and serotype pattern A LMM794 of C. neoformans showed more than 96% similarity among serotype A and AD deposited in GenBank database. Our results add considerable new information to the available data on molecular biology of C. neoformans in the Santa Catarina State, Brazil.
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Isolamento e caracterização de leveduras de uma madeireira e sua correlação com um caso clínico de criptocoseCrestani, Juliana January 2007 (has links)
A incidência de micoses tem aumentado drasticamente, representando a maioria de infecções oportunistas. As leveduras vêm se destacando pelo modo ao qual infectam o hospedeiro, por suas defesas contra o sistema imune dos hospedeiros e por serem amplamente distribuídas no ambiente. A criptococose é a terceira mais freqüente infecção em indivíduos HIV-positivos e atualmente o número de casos em pessoas ditas “aparentemente imunocompetentes” vem aumentando drasticamente. Os agentes etiológicos são ambas as leveduras Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii. A infecção humana se dá pela inalação de propágulos infectivos de um sítio ambiental. Nesse estudo, nós relatamos um caso de criptococose disseminada em um individuo de 66 anos, do sexo masculino, HIV-negativo, o qual residia e trabalhava em uma Madeireira na cidade de Cachoeira do Sul – RS. O diagnóstico inicial foi realizado por biópsia de um nódulo subcutâneo e posteriormente foi realizada a confirmação da disseminação da doença através de Raio-X pulmonar e Ressonância Magnética Cerebral. Com base nesse caso clinico, foi proposto isolar os agentes causais da criptococose e outras leveduras dessa Madeireira. As leveduras foram isoladas para caracterizar a microbiota leveduriforme desse local e avaliar a que outras micoses emergentes os trabalhadores dessa Madeireira estão expostos. Foram coletadas amostras de monitoramento do ar, excretas de pombos e galinhas, serragem, pó de madeira, poeira, cascas e folhas de árvores do gênero Eucaliptus. As amostras foram coletas das quatro vezes no período de um ano (2005), sendo realizadas uma coleta por estação do ano. As amostras coletadas totalizaram 40 sítios amostrais do ar interno da madeireira, 40 amostras de excretas (pombos e galinhas) e 63 amostras no interior da madeireira (serragem, pó de madeira, poeira, casca de eucalipto e folha de eucalipto). De alguns desses sítios amostrais foram obtidos três isolados de C. neoformans var. grubii, um isolado de C. gattii e 180 leveduras. Dentre as leveduras, foram identificados 7 diferentes gêneros do Filo Basidiomycota e 10 pertencentes ao Filo Ascomycota. Dentre as espécies de leveduras identificadas, algumas são patógenos, porém a maioria é saprofítica. Os gêneros prevalentes são: Candida, Cryptococcus, Debaryomyces e Pichia. Estudos no ambiente doméstico de indivíduos infectados podem sugerir medidas profiláticas pelo conhecimento dos patógenos aos quais eles estão expostos.
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Efeito de metabólitos secretados por Cryptococcus neoformans na interação com macrófagos murinosSantos, Tatiane Silva dos 01 June 2017 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-graduação em Medicina Tropical, 2017. / Texto parcialmente liberado pelo autor. Conteúdo restrito: Capítulos 5,6,7 e 8. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-07-24T17:06:17Z
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Previous issue date: 2017-09-20 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq). / O fungo Cryptococcus neoformans é um agente causador da micose sistêmica criptococose, que tem levado a óbito cerca de 181 mil pessoas por ano ao redor do mundo. A doença atinge principalmente pessoas imunodeprimidas e adquiriu maior importância clínica a partir da década de 1980, com o aparecimento da AIDS. Como em outras doenças fúngicas, o diagnóstico e o tratamento dessa doença ainda não são ideais, reforçando a necessidade de estudar-se melhor a relação parasito-hospedeiro na busca por melhores estratégias para reverter esses problemas. Nos últimos anos tem se mostrado que pequenos metabólitos podem ter um importante papel na interação parasita-hospedeiro. Demonstrou-se previamente, que moléculas de baixo peso molecular (menor que 1 KDa) presentes no meio condicionado (CM) de culturas estacionários de C. neoformans da linhagem H99, afetavam o crescimento planctônico e em biofilmes desse fungo, bem como a produção de melanina e a secreção de polissacarídeos capsulares por esse fungo. Em continuidade a esses estudos, no presente trabalho analisou-se a influência dessas mesmas moléculas secretadas pelo fungo na sua interação com macrófagos murinos primários. Fungos e macrófagos foram co-incubados por períodos de 2h ou 24h em uma razão de infecção de 2:1 na presença ou não do CM e foram analisados os possíveis efeitos na fagocitose dos fungos, na sobrevivência fúngica pós-interação e na produção de citocinas por esses macrófagos (TNF-α, IL-12, IL-1β, IL-6 e MCP-1, e IL-10). Observou-se uma potencial atividade antifagocítica de metabólitos presentes no CM, uma vez que na presença do CM houve um menor percentual de fagocitose dos fungos. Além disso, o CM produziu um aumento significativo no número de unidades formadoras de colônia do fungo após a interação com os macrófagos por 24h, sugerindo, portanto, a possibilidade de existir nessas amostras, moléculas capazes de estimular o crescimento extra e/ou intracelular do fungo. Interessantemente, após 24 h de fagocitose, observa-se um número bem menor de fungos intracelulares nos macrófagos contendo fungo, do que nas amostras controle sem CM. A produção de citocinas só foi avaliada no período de 2h de interação e não foram observadas diferenças significativas na produção de TNF-α, IL-1β, IL-6, apenas uma diminuição da produção de MCP-1 na presença de CM indicando um potencial papel anti-inflamatório de moléculas presentes nessa amostra. Em resumo, foi possível constatar que os pequenos metabólitos presentes no CM podem afetar a viabilidade e/ou crescimento fúngico na sua interação com macrófagos, possivelmente inibindo a sua internalização por fagócitos e inibindo a produção de citocinas pró-inflamatórias. Dessa maneira, um maior conhecimento das moléculas presentes no CM bem com o melhor detalhamento de suas atividades podem ajudar no melhor entendimento das interações fungo-hospedeiro na criptococcose. / The fungus Cryptococcus neoformans is a causative agent of the systemic mycosis cryptococcosis, a disease leading to about 181 thousand deaths per year worldwide. The disease affects mainly immunocompromised individuals and gained greater clinical importance from the 1980s, with the onset of AIDS. As in other fungal diseases, the diagnosis and treatment of this pathology is still far from ideal, reinforcing the need to better study the host-parasite interaction in the seek for best strategies to revert these problems. In the recent years, small metabolites were shown to play important roles in host-parasite interactions. It was previously demonstrated that low molecular weight molecules (lower than 1 KDa), present in conditioned medium (CM) from stationary cultures of C. neoformans strain H99, affected the planktonic and biofilm growth of this fungus, as well the production of melanin and secretion of capsular polysaccharides by this fungus. To further study the role of those molecules, in the present work we analyzed the influence of these secreted molecules, during fungal interaction with primary murine macrophages. Fungal cells and macrophages were co-incubated for periods of 2h or 24h in an infection ratio of 2:1, in the presence or absence of CM. Then we analyzed the possible effects of these molecules on fungal phagocytosis by macrophages, fungal survival, and macrophage cytokine production (TNF-α, IL-12, IL-1β, IL-6, MCP-1, and IL-10). We observed a potential anti-phagocytic activity of metabolites present in CM, which samples showed a lower percentage of fungal internalization. In addition, the CM produced a significant increase in the number of colony forming units of the fungus, obtained after 24h interaction with macrophages. This suggests that molecules capable to stimulate the extra and/or intracellular growth of the fungus might exist in these samples. Interestingly, after 24h phagocytosis, a significantly lower number of intracellular fungi were observed in fungus-containing macrophages when compared to control samples without CM. The production of cytokines was evaluated only within a period of 2h interaction and no significant differences were observed in the production of TNF-α, IL-1β, IL-6. Only a decrease in the production of MCP-1 in the presence of CM was detected, suggesting a potential anti-inflammatory role of the molecules present in this sample. In summary, it was possible to confirm that small metabolites present in CM might affect fungal viability and/or growth while interacting with macrophages, possibly inhibiting their internalization by these phagocytes and the production of pro-inflammatory cytokines. Thus, a better characterization of the molecules present in CM and of their activities could improve the understanding of fungus-host interactions in cryptococcosis.
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Diferenciação das espécies Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii utilizando a metodologia de PCR multiplex e determinação do perfil epidemiológico de pacientes com meningite criptocócicaLeal, Ana Lusia January 2006 (has links)
Cryptococcus neoformans é uma levedura oportunista que pode se alojar no sistema nervoso central causando meningite, meningoencefalite e encefalite principalmente em indivíduos com algum comprometimento do sistema imune. É responsável por 4,5% das infecções oportunistas que acometem pacientes portadores do Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV-positivos). Cryptococcus gattii é um patógeno primário responsável por uma alta incidência de criptococomas no pulmão e no cérebro e que apresenta uma alta morbidez neurológica e uma resposta retardada à terapia antifúngica. O diagnóstico da criptococose é, atualmente, baseado na detecção da levedura em amostras clínicas, no cultivo com posterior identificação bioquímica e na pesquisa de antígenos circulantes. A diferenciação entre as espécies C. neoformans e C. gattii, na maioria dos laboratórios, é realizada utilizando o meio de cultura ágar canavanina-glicina-azul de bromotimol (CGB) e demora em torno de sete dias. Neste trabalho foi padronizada uma metodologia de PCR multiplex que pode vir a substituir as provas bioquímicas utilizadas atualmente para a identificação das espécies de Cryptococcus, reduzindo em 6 dias o tempo necessário para a identificação das espécies. A metodologia também se mostrou mais específica na identificação das espécies, concordando com os resultados das sorotipagens em todos os 132 isolados de Cryptococcus testados, enquanto o resultado obtido com o cultivo em ágar CGB foi discordante em 6 dos 132 isolados, sendo 5 falso-positivos e 1 falso negativo. Foi também realizado o primeiro estudo epidemiológico do perfil de pacientes com meningite criptocócica no estado do Rio Grande de Sul notificados no Laboratório Central de Saúde Pública IPB-LACEN/RS no período de 2000 a 2005. A maioria dos pacientes é do sexo masculino (77,12%), branco (83,5%), na faixa etária entre 30 a 39 anos (46,24%) e infectados pelo HIV (95%).
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Caracterização de isolados clínicos de Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii quanto à susceptibilidade a flunocazolAmaro, Maria Cristina de Oliveira January 2006 (has links)
Nos últimos anos tem ocorrido um aumento de infecções fúngicas, devido à elevação do número de pacientes imunossuprimidos, principalmente pelo surgimento da epidemia da AIDS (Acquired Immunodeficiency Syndrome). O uso aumentado de antifúngicos tem levado ao surgimento de cepas resistentes a estes agentes, já verificado com o azólico fluconazol, o agente antifúngico mais utilizado na terapia de manutenção de pacientes com AIDS, que desenvolvem criptococose. Neste trabalho, foram determinadas as Concentrações Inibitórias Mínimas (CIMs) de fluconazol para isolados clínicos de Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii, utilizando-se o teste de microdiluição em caldo padronizado pelo National Commitee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS), o método padrão para testar susceptibilidade antifúngica de leveduras. Foram testados 173 isolados clínicos de C. neoformans e C. gattii, sendo que as CIMs para fluconazol variaram de 0,125 a 16 μg/mL, com uma CIM50% de 2 e uma CIM90% de 4 μg/mL. Todos os isolados foram considerados sensíveis a fluconazol. Também foi realizado um teste de indução de resistência a fluconazol, por exposição de um isolado sensível, a concentrações crescentes da droga, para verificar se apenas a exposição, levaria ao desenvolvimento de resistência. No entanto, verificou-se apenas uma resistência transitória, em uma das subpopulações, sendo que o fenótipo de sensibilidade foi restaurado. Os dados obtidos neste trabalho estão em concordância com estudos nacionais e internacionais, que também utilizaram o teste padrão de microdiluição em caldo. A resistência entre isolados clínicos de C. neoformans e C. gattii ainda tem se mostrado rara em termos mundiais comparada a resistência adquirida por outras leveduras. No entanto, devido aos relatos de desenvolvimento de resistência durante a terapia de manutenção da criptococose, é importante alertar quanto à possibilidade do surgimento e da propagação de cepas resistentes. / In the last years have occurred an increase of fungal infections due to rise of number of immunocompromised patients, particularly by appearance of the Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS). The incresing use of antifungal agents has determined the appearance of resistants strains to this agents, already verified with the fluconazole azole, the antifungal agent more used in the maintenance therapy of AIDS patients that developing criptococosis. In this work were determined the Minimuns Inibitories Concentrations (MICs) of fluconazole to Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii clinical isolates, using the National Commitee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) broth microdilution method. This is the test standard to test antifungal susceptibility to yeasts. Were tested 173 clinical isolates of C. neoformans and C. gattii. The MICs to fluconazole ranged of 0.125 to 16 μg/mL and the MIC50% was 2 and MIC90% was 4μg/mL. All isolates were considered susceptibles to fluconazole. A test of fluconazole resistance inducing was carry out by exposure to drug incresing concentrations of one susceptible isolate, to verify if only the exposure can to result in the resistance development. However occurred only a temporary resistance in one of the subpopulations, since the susceptibility profile was restored. The data obtained in this work are in agreement with national and international studies that also used the standard broth microdilution method. The resistance between C. neoformans and C. gattii clinical isolates has been rare in the world when compared with others yeasts. Nonetheless due to references to resistance development during the maintenance therapy of cryptococosis, it’s important to remain alert as for possibility of appearance and spread of resistants strains.
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