Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol. inst., 2004. / Härtill 4 uppsatser.

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol. inst., 2005. / Härtill 5 uppsatser.

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol. inst., 2005. / Härtill 4 uppsatser.

Diss. (sammanfattning) Umeå : Univ., 2007. / Härtill 4 uppsatser.

Thesis (PhD.(Physiology)--Faculty of Health Sciences)-University of Pretoria, 2008. / Summary in English and Afrikaans. Includes bibliographical references.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:13:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Leila_Parente.pdf: 6581377 bytes, checksum: 53f5a33a755753138bfb33661373f45c (MD5) Previous issue date: 2008-09-11 / The Calendula officinalis L. is an annual herb, originating in the Mediterranean region, belonging to the Asteraceae family and well known as calendula. Displays orange or yellow flowers, which are attributed medicinal properties, with emphasis on healing activity. In this study, the ethanolic extract of flowers of C. officinalis grown in Brazil was prepared by soaking the cold and fractionated to obtain fractions of dichloromethane and hexane. The angiogenesis activity of the extract and fractions was evaluated using the model of membrane corioalantóide in embryonated chicken eggs. But the healing effect of the extract was evaluated by the model of skin wounds in rats, with assessment of macroscopic and microscopic characteristics. In this model, the ethanol extract of angiogenesis activity in the dermis of rats was also evaluated by immunohistochemistry, and measured the intensity of expression of vascular endothelial growth factor (VEGF). The in vitro antibacterial activity of extract and fractions was evaluated by determining the minimum inhibitory concentration (MIC) using the dilution plate. The ethanol extract and the fractions of calendula showed marked angiogenesis activity, demonstrated in both experimental models used. This activity was not related to the observed increase in intensity of expression of VEGF, which may be related to other pro-angiogenic factors. In the model of skin wounds in rats the ethanolic extract showed anti-inflammatory activity, demonstrated by the decrease in serous exudation of hyperemia, the deposition of fibrin and epidermal hyperplasia, besides the presence of more thin crusts and soaked in the control group. There was an increase in the amount of collagen in granulation tissue and antibacterial activity was observed, mainly on gram-positive bacteria. Still, the C. officinalis served as positive about the process of vascular neoformation and activity in healing skin wounds in rats, and also presented antibacterial activity in vitro. Thus, it is the healing effect attributed to this species / A Calendula officinalis L. é uma herbácea anual, originária da região Mediterrânea, pertencente á família Asteraceae e conhecida popularmente como calêndula. Apresenta flores alaranjadas ou amareladas, às quais são atribuídas propriedades medicinais, com destaque à atividade cicatrizante. Neste trabalho, o extrato etanólico das flores da C. officinalis cultivada no Brasil foi preparado por maceração à frio e fracionado para obtenção das frações diclorometano e hexânica. A atividade angiogênica do extrato e frações foi avaliada, utilizando-se o modelo da membrana corioalantóide em ovos embrionados de galinha. Já o efeito cicatrizante do extrato foi avaliado pelo modelo de feridas cutâneas em ratos, com avaliação das características macroscópicas e microscópicas. Nesse modelo, a atividade angiogênica do extrato etanólico na derme de ratos também foi avaliada por imunoistoquímica, sendo mensurada a intensidade de expressão do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF). A atividade antibacteriana in vitro do extrato e das frações foi avaliada pela determinação da concentração inibitória mínima (CIM) pelo método de diluição em placa. O extrato etanólico e as frações da calêndula apresentaram acentuada atividade angiogênica, evidenciada nos dois modelos experimentais utilizados. Esta atividade evidenciada não foi relacionada ao aumento da intensidade da expressão do VEGF, podendo estar relaciona a outros fatores pró-angiogênicos. No modelo das feridas cutâneas em ratos o extrato etanólico apresentou atividade antiinflamatória, demostrada pela diminuição da exsudação serosa, da hiperemia, da deposição de fibrina e da hiperplasia epidermal, além da presença de crostas mais delgadas e umedecidas em relação ao grupo controle. Houve aumento na quantidade de colágeno no tecido de granulação e foi observada atividade antibacteriana, principalmente sobre bactérias gram-positivas. Ainda, a C. officinalis atuou de forma positiva sobre o processo de neoformação vascular e da atividade cicatricial em feridas cutâneas em ratos, e apresentou ainda atividade antibacteriana in vitro. Desta forma, justifica-se o efeito cicatrizante atribuído a essa espécie vegetal

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Um programa de computador foi desenvolvido especificamente para a segmentaÃÃo e quantificaÃÃo de angiogÃnese corneana em imagens digitais capturadas in vivo. O propÃsito foi estabelecer um mÃtodo automÃtico para quantificar, de forma rÃpida, objetiva e acurada, a progressÃo temporal da resposta angiogÃnica. Desenvolveu-se ainda um modelo de angiogÃnese corneana inflamatÃria em coelhos, induzida por uma cauterizaÃÃo alcalina pontual, onde a resposta angiogÃnica foi avaliada, conforme cinco mÃtodos manuais, nos dias 3, 6, 9, 12, 15, 18 e 21 apÃs a cauterizaÃÃo, ocasiÃes em que tambÃm foram obtidas, de maneira padronizada, imagens digitais da cÃrnea. O software à composto de cinco mÃdulos, com funÃÃes especÃficas, que identificam e segmentam automaticamente os neovasos e quantificam a resposta angiogÃnica mediante a determinaÃÃo de trÃs parÃmetros principais: Ãrea de neovascularizaÃÃo, comprimento vascular total e nÃmero de vasos sangÃÃneos. Assim, o sistema dispensa a rotulaÃÃo prÃvia da neovascularizaÃÃo, propiciando, por conseguinte, o monitoramento espacial e temporal da resposta angiogÃnica in vivo. A avaliaÃÃo da validade do mÃtodo automÃtico proposto envolveu a determinaÃÃo do grau da correlaÃÃo entre cada um dos quantificadores automÃticos e os cinco parÃmetros manuais. Compreendeu ainda a comparaÃÃo do reconhecimento automÃtico dos vasos sangÃÃneos realizado pelo software em 50 subimagens com o reconhecimento manual efetuado, consensualmente, por trÃs examinadores (padrÃo-ouro), determinando-se entÃo a sensibilidade, especificidade e o coeficiente de concordÃncia kappa. Para avaliar a confiabilidade, trÃs examinadores utilizaram o mÃtodo automÃtico para analisar 50 imagens em dois momentos. A concordÃncia intra e interexaminadores foi medida pelo coeficiente de correlaÃÃo intraclasse. Para ilustrar a utilidade do mÃtodo automÃtico, delineou-se um ensaio que avaliou o efeito dos fÃrmacos prednisona, talidomida, Ãcido acetilsalicÃlico, etoricoxib e celecoxib no modelo de angiogÃnese corneana inflamatÃria. A anÃlise dos grÃficos dos quantificadores manuais e automÃticos revelou que a evoluÃÃo temporal da resposta angiogÃnica no modelo de angiogÃnese corneana inflamatÃria seguiu um padrÃo bifÃsico: crescimento exponencial atà o dia 12 (fase de proliferaÃÃo), seguido de crescimento linear atà o dia 21 (fase de maturaÃÃo). Constatou-se uma forte correlaÃÃo linear positiva estatisticamente significante entre os quantificadores automÃticos e manuais, denotando que o mÃtodo automÃtico mensurou a resposta angiogÃnica de forma anÃloga à realizada pelo mÃtodo manual. A sensibilidade do mÃtodo automÃtico foi 85,32%, enquanto sua especificidade foi 96,37%. A concordÃncia entre o reconhecimento manual e o reconhecimento automÃtico dos vasos sangÃÃneos foi classificada pela estatÃstica kappa como quase perfeita. A concordÃncia interexaminadores foi avaliada em seis situaÃÃes, sendo classificada como excelente em quatro delas e como boa nas outras duas. A concordÃncia intra-examinador foi mensurada em nove situaÃÃes, sendo classificada como boa em apenas uma e como excelente nas demais. AlÃm disso, o sistema automÃtico foi capaz de identificar diferenÃas na intensidade do efeito antiangiogÃnico dos diferentes fÃrmacos avaliados, possibilitando graduar a atividade inibitÃria em plena (prednisona), parcial (talidomida, Ãcido acetilsalicÃlico e etoricoxib) e insuficiente (celecoxib), demonstrando, assim, o seu valor como mÃtodo para anÃlise quantitativa de angiogÃnese. Portanto, tais dados demonstram que o sistema automÃtico proposto constitui um mÃtodo de quantificaÃÃo de angiogÃnese acurado e reprodutÃvel. / A software was developed specifically for segmentation and quantification of corneal angiogenesis in digital images acquired in vivo. The purpose was to establish an automatic method to quantify the corneal progression of the neovascular response in a rapid, objective and accurate manner. It was also developed a model of inflammatory corneal angiogenesis in rabbits induced by a punctual alkaline cauterization. Angiogenic response was evaluated at days 3, 6, 9, 12, 15, 18 and 21 after cauterization. At these occasions, digital images of cornea were also captured in a standardized fashion. The software is composed of five modules, each with specific functions, which automatically identify and segment the neovessels and quantify the neovascular response through the calculation of three main parameters: neovascularization area, total vascular length and blood vessels number. Thus, the system does not require previous enhancement of the neovascularization, so that it provides the temporal and spatial monitoring of the angiogenic response in vivo. To assess the validity of the automatic method, it was determined the correlation degree between each automatic parameters and the five manual variables. It was also evaluated by comparing automatic recognition of blood vessels performed by the software on 50 subimages with the manual recognition performed by three raters by consensus (gold-standard) and then calculating the sensitivity, specificity and kappa coefficient. To assess reliability, three raters used the automatic method for analysing 50 images at two moments. The intra and inter-raters agreement was assessed by calculating intraclass correlation coefficient. To illustrate the utility of the automatic method, it was designed an assay that evaluated the effect of prednisone, thalidomide, acetylsalicylic acid, etoricoxib and celecoxib in the model of inflammatory corneal angiogenesis. The analysis of the graphics of the manual and automatic parameters showed that the temporal progression of the neovascular response in this model followed a biphasic pattern: exponential growth until day 12 (proliferation phase), followed by linear growth until day 21 (maturation phase). It was found a statistically significant positive linear correlation between automatic and manual variables, denoting that both methods measured the angiogenic response in an analogous fashion. The sensitivity of the automatic method was 85.32% and the specificity was 96.37%. The agreement between manual and automatic recognition of blood vessels was classified as almost perfect, according to kappa statistics. The inter-raters agreement was measured in six situations and it was classified as good in two of them and as excellent in the others. Among the nine situations analysed, the intra-rater agreement was classified as good in only one of them and as excellent in the others. Furthermore, the automatic system was able to detect differences in the intensity of the antiangiogenic effect of tested drugs, allowing the inhibitory activity to be graduated as full (prednisone), partial (thalidomide, acetylsalicylic acid and etoricoxib) and insufficient (celecoxib), demonstrating, thus, its value as method for quantitative analysis of angiogenesis. Therefore, such results demonstrate that the proposed automatic system constitutes an accurate and reproducible method of angiogenesis quantification.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Livia C de S N Bianchi - Oftalmologia.pdf: 3291987 bytes, checksum: bf690044678ae1c1ecf40768b3ef062a (MD5) Previous issue date: 2012-03-27 / Purpose: To evaluate the efficacy and safety of strontium-90 epimacular brachytherapy combined with intravitreal bevacizumab for treating subfoveal choroidal neovascularization secondary to exudative age-related macular degeneration. Its effects on visual acuity and macular thickness at 36 months of follow up were also studied. Methods: Sixteen patients with predominantly classic, minimally classic and occult choroidal neovascularization were treated with a single 24 Gy dose of radiation during pars plana vitrectomy, associated to two injections of bevacizumab at baseline and one injection at the one-month visit. The patients underwent a complete ophthalmologic examination, which included fluorescein angiography and optical coherence tomography, at the initial visit, every three months during the first year, and every six months during the second and third years of follow up. Results: Of the 16 cases, 2 patients (12.5%) lost more than 15 letters at the end of 36 months, and 3 (18.75%) lost fewer than 15 letters. Among the patients with improved visual acuity, 3 (18.75%) gained less than 15 letters and 8 (50%) gained more than 15 letters at the end of treatment. The mean best corrected visual acuity showed a gain of 16.0 letters at 12 months. After 36 months (n = 16), the mean best corrected visual acuity showed a gain of 10.4 letters. Of the 16 eyes included in the study, six required further therapy. The evaluation of macular thickness showed decreased thickness in 10, among the 16 patients (62.5%). Three eyes (18.75%) had similar values at the beginning and the end of 36 months, and 3 eyes (18.75%) showed increased macular thickness. Conclusion: Epimacular brachytherapy combined with bevacizumab may be considered a possible therapeutic option for choroidal neovascularization in age-related macular degeneration. The procedure was thought to be safe and was well tolerated by the patients. The treatment resulted in anatomical and functional improvements, compatible with currently available therapies. / Objetivo: Avaliar a eficácia e segurança da braquiterapia epimacular com estrôncio 90 e bevacizumabe intravítreo para tratamento da neovascularização coróidea subfoveal secundária à degeneração macular relacionada à idade exsudativa, e observar seus efeitos na acuidade visual e espessura macular, em 36 meses de seguimento. Metodologia: Foram estudados 16 pacientes portadores de neovascularização coróidea, (predominantemente clássicas, minimamente clássicas e ocultas) tratados com dose única de radiação de 24Gray, durante vitrectomia via pars plana, associada a duas injeções de bevacizumabe uma no início do tratamento e a outra um mês após. Foram realizados exame oftalmológico completo, angiofluoresceinografia e tomografia de coerência óptica na visita inicial, a cada três meses durante o primeiro ano e a cada seis meses durante o segundo e o terceiro anos de seguimento. Resultados: Dos 16 casos, 2 (12,5%) perderam mais de 15 letras ao final de 36 meses, e 3 pacientes (18,75%) perderam menos de 15 letras. Dentre os pacientes que melhoraram a acuidade visual, 3 (18,75%) ganharam menos de 15 letras e 8 (50%) ganharam mais de 15 letras ao final do tratamento. A média da melhor acuidade visual corrigida demonstrou ganho de 16,0 letras ao final de 12 meses. Após 36 meses (n = 16), a média da melhor acuidade visual corrigida apresentou um ganho de 10,4 letras pela tabela ETDRS. Dos 16 olhos observados, 6 necessitaram de tratamento adicional. Na avaliação da espessura macular, 10 (62,5%) dos 16 pacientes apresentaram diminuição da espessura, 3 olhos (18,75%) mantiveram valores semelhantes no início e ao final de 36 meses, e 3 olhos (18,75%) apresentaram aumento da espessura macular. Conclusão: A braquiterapia epimacular combinada ao uso de bevacizumabe se mostra como uma possível opção terapêutica para a neovascularização de coróide na degeneração macular relacionada à idade. O procedimento foi considerado seguro e bem tolerado, com melhora antômica-funcional compatível aos tratamentos atualmente disponíveis.

O melanoma é a forma mais letal entre os cânceres de pele. Essa neoplasia freqüentemente apresenta-se resistente a abordagens terapêuticas. A angiogênese associada ao tumor representa um crítico passo da tumorigênese, resultado da ação de diferentes citocinas e fatores de crescimento como VEGF produzidos no microambiente tumoral. As galectinas extracelulares participam de múltiplos processos biológicos incluindo angiogênese tumoral e metástases, sua interação com as células presentes no microambiente tumoral pode ocorrer via receptores toll-like sugerindo seu envolvimento nos processos pro-inflamatórios e na secreção de citocinas. Recentemente mostramos que a ausência de gal-3 no estroma e parênquima tumoral diminui a angiogênese por interferir na resposta de macrófagos via VEGF e/ou TGFbeta1. Entretanto, o envolvimento de galectinas extracelulares na angiogênese e na modulação do sistema imune no microambiente tumoral ainda não está esclarecido. Assim, este estudo visa buscar respostas ao envolvimento das galectinas no crescimento tumoral e angiogênese contribuindo ao combate do melanoma maligno. Nossos resultados mostram a participação das galectinas 1 e 3 no crescimento tumoral e seu envolvimento com macrófagos via receptores toll-like, além de coordenarem a modulação do perfil de polarização de macrófagos derivados da medula óssea de camundongos wild-type. Dessa forma, podemos inferir que essas galectinas agem como coordenadoras de mudança de perfil dos macrófagos, uma vez que inibidas extracelularmente promovem uma diminuição do crescimento tumoral em camundongos wild-type, inoculados com células de melanoma murino e uma manutenção do perfil de macrófagos M1 in vitro. Assim, concluimos que as galectinas 1 e 3 extracelulares são importantes para o crescimento tumoral de melanomas murinos pois promovem o crescimento tumoral e são coordenadoras da mudança do perfil de macrófagos / Melanoma is the most aggressive form of skin cancer. This tumor often presents itself resistant to therapeutic approaches. The tumor-associated angiogenesis is a critical step in tumorigenesis and the result of the action of several cytokines and growth factors such as VEGF produced in the tumor microenvironment. The extracellular galectins participate in multiple biological processes including tumor angiogenesis and metastasis, their interaction with cells present in the tumor microenvironment may occur via toll-like receptors suggesting their involvement in pro-inflammatory processes and the secretion of cytokines. We have recently shown that the absence of Gal-3 the stroma and tumor parenchyma decreases angiogenesis by interfering with the macrophage response by VEGF and / or TGFbeta1. However, the involvement of extracellular galectins on angiogenesis modulation of the immune system in the tumor microenvironment is not yet clear. This study aims is to find answers to the involvement of galectins on tumor growth and angiogenesis contributing to the study of the malignant melanoma. Our results demonstrate the involvement of galectin 1 and 3 on tumor growth and its involvement in macrophage by toll-like receptors pathway, and coordinating the modulation of the polarization profile in wild-type mice bone marrow derived macrophages. Therefore, we show these galectins act as coordinators of macrophages profile change, since inhibited extracellularly promote a reduction in tumor growth in wild-type mice inoculated with murine melanoma cells and macrophages M1 maintenance of profile in vitro. Thus, we conclude that galectins 1 and 3 extracellular are important for tumor growth of murine melanomas because they promote tumor growth and are coordinators of change macrophages profile

Objetivos: Os objetivos deste estudo foram: 1) determinar a eficácia da transferência gênica do vetor de adenovírus sorotipo 5, carreando o gene do receptor do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) solúvel humano (sVEGFR1) para a glândula lacrimal (GL); 2) investigar se a expressão de sVEGFR1 interfere na neovascularização da córnea (NVC), induzida por queimadura alcalina; 3) avaliar a segurança do procedimento. Métodos: Trinta e dois ratos Wistar foram submetidos à queimadura central da córnea direita com solução de hidróxido de sódio (NaOH) 1 M. Os animais foram divididos em três grupos e injetados diretamente em sua GL direita 25 ?l de vetores virais AdVEGFR1 (1x1010 pfu) (12 animais), 25 ?l do vetor AdNull (1x1010pfu) (10 animais), ou 25 ?l de solução salina (Controle). Após sete dias, a NVC foi observada e fotografada na lâmpada de fenda. A secreção lacrimal foi medida com fenol. A presença do sVEGFR1 na GL foi testada por qPCR (quantitative polymerase chain reaction) e a coloração, por imunofluorescência. O qPCR foi também utilizado para comparar o RNA mensageiro (RNAm) de ilterleucina-1beta (IL-1?), ilterleucina-6 (IL-6) e fator de necrose tumoral alfa (TNF-?) na GL e no gânglio do trigêmeo (GT). Resultados: O vetor AdVEGFR1 transfectou 83% dos ratos. O sVEGFR1 estava presente nas células acinares da GL. A NVC foi prevenida em nove de doze animais do grupo AdVEGFR1, em comparação com o grupo Ad-Null (3:10) e o grupo Controle (1:10) (p=0,0317). A secreção lacrimal e o RNAm das citocinas na GL e no GT foram semelhantes nos três grupos (p>0,05). Conclusões: A transferência gênica do vetor adenoviral para a GL demonstrou expressão local do sVEGFR1 humano, e evitou a NVC na maioria dos olhos expostos a queimaduras alcalinas, se mostrando seguro para a estrutura e função da GL. / Purpose: The aims of this study were: 1) to determine the efficacy of adenovirus vector serotype 5 (Ad) encoding human soluble VEGF receptor 1 (sVEGFR1) gene transfer to the lacrimal gland (LG); 2) to investigate whether expression of sVEGFR1 acts in corneal neovascularization (CNV), induced by alkali burn and; 3) to evaluate the safety of the procedure. Methods: AdVEGFR1viral vectors (25 ?l, 1x1010pfu) were injected in the right LG of rats and compared with AdNull vector (25 ?l, 1x1010pfu) or 25?l saline (Control) before cornea alkali burn with 1 M NaOH. After seven days, CNV was observed and photographed in the slit lamp. Tear secretion was measured with phenol red thread. The animals were tested for human VEGFR1 mRNA and protein in the LG by qPCR and immunofluorescence staining, respectively. qPCR was also used to compare the mRNA of IL-1?, IL-6, and TNF-? in LG and ipsilateral trigeminal ganglion (TG). Results: Ad-VEGFR1 transfected 83% of the rats. VEGFR1 was present in LG acinar cells. CNV was prevented in 9 of 12 animals of Ad-VEGFR1 group, compared to Ad-Null (3:10) and Control (1:10) (p=0.0317). The tear secretion and the cytokines mRNA in LG and TG were similar all three groups (p>0.05). Conclusion: Adenoviral vector gene transfer to LG as the has shown local expression of human sVEGFR1, as It prevented CNV in most of the eyes exposed to alkali burn and was safe for LG structure and function.