Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol. inst., 2005. / Härtill 4 uppsatser.

Diss. (sammanfattning) Umeå : Umeå universitet, 2008. / Härtill 4 uppsatser.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-06-05T21:22:13Z No. of bitstreams: 1 Caroline Brandi Schlaaepfer Sales Expressao de componentes da via de sinalizacao....pdf: 1798926 bytes, checksum: d4bb00f0a9c879a36a9a0c59bc3a1be8 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-05T21:22:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Caroline Brandi Schlaaepfer Sales Expressao de componentes da via de sinalizacao....pdf: 1798926 bytes, checksum: d4bb00f0a9c879a36a9a0c59bc3a1be8 (MD5) Previous issue date: 2012 / Universidade Federal da Bahia. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / Os mecanismos moleculares envolvidos no desenvolvimento do carcinoma escamocelular oral (CECO) ainda são pouco conhecidos. Vias de sinalização que participam do desenvolvimento embrionário, como a via Sonic Hedgehog (SHH), podem estar associadas ao desenvolvimento de tumores e ainda participar da progressão tumoral através do estímulo a angiogênese. Este trabalho teve como objetivo avaliar o perfil de expressão gênica de componentes da via de sinalização SHH, Sonic Hedegehog (SHH), Patched 1 (PTCH1) e Hedgehog interacting protein (HHIP), que possam estar relacionados a angiogênese em CECO, bem como os níveis de expressão do vascular endothelial growth factor (VEGF-A) e a microdensidade vascular (MDV) nestes tumores. Após aprovação do CEP (Parecer 229/10), a casuística foi composta por 66 casos de CECO no total. Para as reações de PCR quantitativo (qPCR) foram utilizadas amostras criopreservadas de 50 casos de CECOs, 8 casos de Mucosa Adjacente ao Tumor (MAT) e 2 casos de Mucosa Não Neoplásica de paciente saudável (MNN). Após extração de RNA, o DNA complementar foi obtido com o auxílio de High-Capacity cDNA Reverse-Transcription. As reações de qPCR foram conduzidas no aparelho ABI Prism 7900 utilizando o sistema Taqman, sendo a quantificação relativa avaliada pelo método comparativo de Cq (ΔΔCQ). Foram utilizados 56 blocos parafinizados para a confecção do tissue microarray (TMA) e análise da expressão de proteínas VEGF-A e CD34 (MDV), utilizando sistema EnVision AdvancedTM . Foi detectada expressão de HHIP e PTCH1 em CECO e MAT indicando ativação da via SHH nestas lesões. Dezessete (34%) casos de CECO não apresentaram expressão de SHH, os outros 33 (66%) tumores expressaram tal gene, indicando que a ativação desta via de sinalização pode ser através ou não do ligante. Correlação positiva foi observada entre a expressão de SHH e HHIP (rs=0.29; p=0.044, Teste de Spearman) e SHH e PTCH1 (rs=0.49; p=0.0003, Teste de Spearman) em CECO. A correlação positiva entre SHH e VEGF-A (rs=0.37; p=0.0086; Teste de Spearman) sugere uma participação da via SHH na angiogênese em CECOs, ao mesmo tempo maiores níveis de expressão de VEGFA, parecem favorecer um aumento da densidade de vasos sanguíneos (rs=0.55;p=0.0050; Teste de Sperman). Maiores níveis de transcritos e da proteína VEGF-A estavam relacionados a CECOs com invasão perineural e moderadamente diferenciados. Por último, maior expressão de VEGF-A foi detectada em MAT (p=0.034, Teste de Mann Whitney). Assim, a correlação positiva entre a expressão gênica de SHH e VEGF-A indica esta via pode participar da angiogênese tumoral. Além disso, isoladamente, a expressão do gene VEGF-A foi o fator que mais contribui para uma maior MDV e uma maior expressão deste, em nível de transcrito e de proteína, esteve relacionado a CECO de comportamentos mais agressivos. A expressão de HHIP, PTCH1 e VEGF-A em MAT indica que via SHH pode estar ativada nas margens tumorais e, corrobora para a existência de um campo de cancerização que envolve tecidos fenotipicamente normais. Além disso, maior expressão de VEGF-A nesta localização, sugere que a margem tumoral pode participar na secreção de fatores de crescimento para o tumor. / Sonic Hedgehog (SHH) signaling has been implicated in tumor development and progression by stimulating angiogenesis, and its molecular mechanisms involving these events are little known in oral squamous cell carcinomas (OSCC). The aim of this study was to characterize the transcripts expression involved in the SHH pathway (SHH, PTCH1, HHIP, VEGF-A) and microvessel density in these neoplasms. In this study, a total of 50 CECOs, eight non-tumor epithelium adjacent to oral cancer (NTEA), and two oral mucosa obtained from healthy individuals were included. After RNA extraction, complementary DNA was obtained using the High-Capacity cDNA Reverse-Transcriptio. qPCR reactions were conducted in the ABI Prism 7900 using Taqman Gene Expression System. Cq (ΔΔCQ) relative quantification method was perfomed for gene expression analysis. Fifty six paraffin-embedded specimens of OSCC were used for tissue microarray (TMA) and by immunohistochemistry, VEGF and CD34 using EnVision System Advanced TM were used. HHIP and PTCH1 transcripts were detected in OSCC and NTEA indicating their SHH pathway activation. Seventeen (34%) OSCC cases were negative for SHH gene expression. This results indicate that activation of SHH pathway may be either through SHH ligand or not. Our results showed a positive correlation between SHH and HHIP (rs=0.29; p=0.044, Spearman test) and SHH and PTCH1 (rs=0.49; p=0.0003, Spearman test) gene expression in OSCC. The positive correlation between the expression of SHH and VEGF-A (rs=0.37; p=0.0086; Spearman test) suggests an involvement of the SHH pathway on angiogenesis of OSCC, whereas higher levels of VEGF-A expression seems to increase the microvessel density of OSCC (rs=0.55;p=0.0050; Sperman test). Higher levels of transcripts and VEGF-A protein were related to OSCC with perineural invasion and those moderately differentiated. Finally, increased expression of VEGF-A was detected in NTEA (p = 0.034, Mann Whitney test). Thus, the positive correlation between the gene expression of SHH and VEGF-A indicates that pathway could participate in tumor angiogenesis. Moreover, VEGF-A gene expression was the only factor that contributed to a greater MVD in our series. In addition, increased expression of this gene and protein was related to more aggressive behavior of OSCC. The expression of HHIP, PTCH1 and VEGF-A in NTEA also indicates that SHH pathway can be activated in the tumor margins and might suggest existence of a field cancerization involving phenotypically normal cells. At the same time, increased gene expression of VEGF-A in this location suggests that adjacent cells to oral cancer could actively participate in the secretion of important growth factors to the tumor developing.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The aim of this study was to evaluate the effects of methylene blue (MB) photosensitizer (PS) solubilized in ethanol in antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) as an adjuvant periodontal treatment, at oxidative stress (OS) parameters and vascular behavior in rat model. Besides, investigate greater involvement of angiogenesis at the destruction or healing stages of periodontal disease (PD). One hundred and twenty male adult Wistar rats were divided randomly into five groups. The control groups were negative control (NC) (no PD, n=15) and positive control (PC) (with PD, without any treatment, n=15). The other groups had PD and underwent different types of treatment, such as scaling and root planing (SRP) and irrigation with 1mL of saline solution (SRP, n=30); SRP and aPDT with MB solubilized in water (aPDT I, n=30); SRP and aPDT with MB containing ethanol (aPDT II, n=30). The PD was induced via the installation of a ligature around the mandibular right first molar. After 7 days, the ligature was removed and animals received treatment. At 7, 15 and 30 days, rats were euthanized and the gingival tissue surrounding the induction area was removed for histomorphometric analysis of the number and diameter of blood vessels by staining with hematoxylin and eosin (H&E). The collected blood was centrifuged and the plasma was used to determine lipid peroxidation by quantifying thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), vitamin C (VIT C) and glutathione reduced (GSH) levels. The oxidative status showed higher TBARS levels in PC group in 7, 15 and 30 days, and indicated a protective influence of aPDT II on plasma observed from lower lipid peroxidation. GSH levels were consumed in PC, aPDT I and aPDT II groups throughout the experiment. Furthermore, aPDT II also increased antioxidant defenses in plasma: i) higher levels of GSH, and ii) increased levels of VIT C. Interestingly, the VIT C plasmatic levels were restored in the aPDT II group in the 30th experimental day. Histomorphometric findings in 7 days showed that treated groups (SRP, aPDT I and aPDT II) showed higher number of blood vessels, and the aPDT II group showed the highest values among them. From these results, aPDT modifies PD course, reducing oxidative systemic damage and stimulating the antioxidant defense system, thus protecting the areas closely affected by PD in rats. Moreover, was observed a relationship between increased expression of angiogenesis and repair stage of the PD. In summary, we suggest that the aPDT with MB solubilized in ethanol provides better therapeutic responses in periodontal treatment. / O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do fotossensibilizador (Fs) azul de metileno (AM) solubilizado em etanol na terapia fotodinâmica antimicrobiana (TFDa) como um tratamento periodontal adjuvante, sob parâmetros de estresse oxidativo (EO) e de comportamento vascular em modelo de rato. Bem como, investigar o maior envolvimento da angiogênese no estágio de avanço ou reparo da doença periodontal (DP). Cento e vinte ratos Wistar adultos machos foram randomizados e divididos em cinco grupos. Os grupos controles eram controle negativo (CN) (sem DP, n = 15) e controle positivo (CP) (com DP, sem qualquer tratamento, n = 15). Os demais grupos apresentavam DP e foram submetidos a diferentes tipos de tratamentos, como raspagem e alisamento radicular (RAR) e irrigação com 1 mL de solução salina (RAR, n = 30); RAR e TFDa com AM solubilizado em água (TFDa I, n = 30); RAR e TFDa com AM contendo etanol (TFDa II, n = 30). A DP foi induzida através da colocação de uma ligadura ao redor do primeiro molar inferior direito. Após 7 dias, a ligadura foi removida e os animais receberam tratamento. Aos 7, 15 e 30 dias, os ratos foram eutanasiados e o tecido gengival circundante à área de indução foi removido para análise histomorfométrica do número e diâmetro dos vasos sanguíneos através da coloração com Hematoxilina e Eosina (HE). O sangue recolhido foi centrifugado e o plasma foi utilizado para determinar os níveis de peroxidação lipídica mensurados pelas substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), vitamina C (VIT C) e glutationa reduzida (GSH). O status oxidativo demostrou maiores níveis de TBARS no grupo CP em 7, 15 e 30 dias, e indicou uma influência protetora da TFDa II no plasma observada a partir de menor peroxidação lipídica. Níveis de GSH foram consumidos nos grupos CP, TFDa I e TFDa II durante o experimento. Ainda, TFDa II também aumentou as defesas antioxidantes no plasma: a) níveis mais elevados de GSH, e b) aumento dos níveis de VIT C. Interessantemente, os níveis plasmáticos de VIT C foram restaurados no grupo TFDa II no trigésimo dia experimental. Os achados histomorfométricos mostraram em 7 dias que os grupos tratados (RAR, TFDa I e TFDa II) apresentaram elevado número de vasos sanguíneos, e o grupo TFDa II apresentou os maiores valores entre eles. A partir destes resultados, fica evidente que TFDa modifica a DP, reduzindo o dano oxidativo sistêmico, e estimula o sistema de defesa antioxidante, protegendo, assim, as zonas afetadas intimamente pela DP em ratos. Além disso, foi observado uma relação entre a maior expressão da angiogênese e o estágio de reparo da DP. Em síntese, sugerimos que a TFDa com AM solubilizado em etanol proporciona melhores respostas terapêuticas no tratamento periodontal.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:19:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissACBS.pdf: 10545595 bytes, checksum: 079933a164ff065ae11e54e43ae5200a (MD5) Previous issue date: 2004-12-20 / The purpose of this study was to analyze the 660 nm GaAlAs laser effect with 10 mW and 40 mW, during 10 seconds, on angiogenesis process and repair quality after partial lesion of Achilles tendon in rats. It was used 104 male rats, that 96 rats had been submitted to lesion by a falling of 186 g from a height of 20 cm, above the right tendon. These rats had been randomly divided in 3 groups, treated in 3 (n = 32), 5 (n = 32) and 7 (n = 32) days, respectively. Each of these groups was divided again into 4 subgroups, which were submitted to laser with mean output of 10 mW (n = 8) and 40 mW (n = 8), a sham treatment (n = 8), and a group with no treatment (n = 8). The analyzes were made by vessels count that have been previous prepared with nanquim ink and by a semiqualitative analyze of polynuclear cells presence, mononuclear cells presence, collagen organization and neovascularization. A fourth group with 8 animals was established as control, without lesion and used as reference for qualitative analyze. The comparison of the groups made evident that the animals submitted to laser showed more vessels number than the control groups (p<0,05) and the 40 mW subgroup showed better vascularization than the others after 3 days of irradiation. (p<0,01). The semiqualitative analyze showed statistical difference (p<0,05) when considering collagen organization and neovascularization in the comparison between the 10 mW, 40 mW and control. Qualitatively, the groups treated with laser showed better repair aspect. The results permit us to conclude that Low Level Laser Therapy with 660 nm promoted an increase of the blood vessels number and better repair quality and the mean output of 40 mW had begun the neovascularization precocious, showing significant difference after 3 days of application. / A proposta desse estudo foi analisar os efeitos do laser AsGaAl, de 660 nm, com 10 mW e 40 mW de potência de saída, aplicado durante 10 segundos, no processo de angiogênese e qualidade de reparo após lesão parcial do tendão calcâneo de ratos. Foram utilizados 104 ratos machos, sendo que 96 foram submetidos à lesão com a queda de um peso de 186 gramas na altura de 20 cm sobre o tendão direito. Estes foram divididos aleatoriamente em 3 grupos, tratados em 3 (n = 32), 5 (n = 32) e 7 (n = 32) dias, respectivamente. Cada um desses grupos foi ainda dividido em 4 subgrupos, submetidos ao laser com potência de saída de 10 mW (n = 8) e 40 mW (n = 8), grupo placebo (n = 8) e grupo sem tratamento (n = 8). As análises foram feitas através da contagem dos vasos que foram previamente corados com tinta nanquim e por meio de uma análise semiqualitativa da presença de células polimorfonucleares, mononucleares, organização de colágeno e neovascularização. Um quarto grupo com 8 animais foi estabelecido como controle padrão, sem lesão que foi utilizado como referência para a análise qualitativa. A comparação dos grupos evidenciou que os animais irradiados mostraram maior número de vasos do que os grupos controle (p<0,05) e o subgrupo de 40 mW apresentou melhor vascularização que os demais após 3 dias de irradiação (p<0,01). A análise semiqualitativa evidenciou diferença estatística (p<0,05) quando foi considerada a organização de colágeno e a neovascularização na comparação entre os grupos 10 mW e 40 mW com os controle. Qualitativamente os grupos tratados com laser apresentaram melhor aspecto do reparo. Os resultados nos permitem concluir que a terapia laser de baixa intensidade, com comprimento de onda de 660 nm promoveu aumento na neovascularização e melhora na qualidade de reparo e a potência de saída de 40 mW iniciou a neovascularização precocemente, mostrando diferença significativa após 3 dias de aplicação.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A pesquisa para o desenvolvimento de novas drogas quimioterápicas, tem se baseado nas propriedades dos produtos de origem natural. Estudos experimentais em animais indicam que o álcool perílico (AP), um monoterpeno originalmente isolado dos óleos essenciais de várias plantas é capaz de causar a regressão de diferentes tipos de tumores. O tratamento clássico preconizado para os astrocitomas anaplásicos e glioblastoma multiforme consiste de: ressecção cirúrgica, radioterapia e/ou quimioterapia e raramente apresentam efeito curativo. O presente trabalho teve como objetivo analisar o efeito do AP na proliferação, na alteração da morfologia, na síntese de proteínas e migração celular de diferentes linhagens de glioblastoma murino e humano. Foram utilizados modelos in vitro de cultivo de células e ensaios in vivo de migração celular. O tratamento in vitro com o AP nas concentrações v/v de 0,003%, 0,02%, 0,03%, 0,3%, 3% e 30% nas linhagens de glioblastoma C6 de murinos e linhagens A172 e U87MG de glioblastoma humano, mostrou que mesmo nas concentrações (v/v) mais baixas (0,03% e 0,3%) o AP promove a inibição da proliferação celular e da síntese de proteínas. O tratamento in vitro com o AP a 0,3% v/v causou após 15 minutos perda da permeabilidade celular e mais tardiamente, 50 minutos, alterações acentuadas na citoarquitetura das linhagens C6, U87MG e A172. Nos ensaios in vivo com ovos embrionados, o tratamento com o AP nas concentrações v/v 0,3% e 0,03% causou efeito inibitório na migração celular da linhagem C6. Os resultados sugerem uma eficácia quimioterápica do AP na citotoxidade e na inibição da migração celular de linhagens de glioblastoma murino e humano. / The search for new chemotherapeutic drugs has increased, especially for those that have a natural origin. Perillyl alcohol (POH), is a naturally occurring monoterpene, found in the essential oils of citrus fruits and other plants, with pronounced chemotherapeutic activity and minimal toxicity in preclinical studies. Standard treatment of anaplastic gliomas and glioblastoma multiforme consisting of surgical resection, radiation therapy and/or chemotherapy is rarely curative. This work aimed to evaluate in vitro and in vivo effects of POH treatment, cell proliferation, changes in morphology, protein synthesis, and migration of distinct lineage of glioblastoma cells. It was chosen in vitro culture systems and in vivo assays for assessing cellular migration. In vitro treatment of POH at concentrations of (v/v) 0.003%, 0.02%, 0.03%, 0.3%, 3% and 30%, consistently inhibited proliferation of murine C6 and human A172 and U87MG of glioblastoma cells. In vitro treatment of POH at low concentrations 0.03% v/v and 0.3% v/v also produced marked changes in cell morphology and inhibited protein synthesis. Likewise in vitro assays with 0.3% v/v POH treatment for 15 minutes, initially caused marked alteration in membrane permeability and later (50 minutes) drastic changes in the cytoarchitecture of C6, U87MG and A172 cells. Furthermore, previous in vitro treatment of glioblastoma cells with 0.3% v/v and 0.03% v/v POH showed inhibition of cell migration and anti-metastatic activity in the in vivo model of the chick embryo with C6 cell line. Such results indicate the chemotherapeutic action of POH by promoting cytotoxicity and arresting migration of murine and human glioblastoma cell lines

Avaliar a expressão das MMPs 2 e 9 e CD31 por meio de imunoistoquímica em carcinomas espoinocelulares de soalho bucal, e correlacionar os resultados com variáveis demográficas, estadiamento tumoral TNM, parâmetros microscópicos, como invasão perineural, embolização, grau de diferenciação tumoral, e sobrevida. Material e métodos: dados de prontuários de 41 pacientes foram coletados e o diagnóstico histopatológico foi revisado com lâminas recém preparadas. Seções de 5 m foram montadas em lâminas silanizadas e submetidas à imunomarcação pelo sistema streptoavidina-biotina utilizando os anticorpos anti MMP2, MMP 9 e CD31 humanos. A presença de imunomarcação das MMPs foi quantificada utilizando um retículo com 100 pontos em 20 campos de cada lâmina obtidos com objetiva de 40x. Os vasos foram identificados pela imunomarcação com anti-CD31 contando-se aqueles que apresentavam lumem e e tamanho menor do que 50m em cinco campos (objetiva de 20x) na área de maior vascularização das lesões. Para verificar a associação entre as variáveis numéricas e os marcadores, o teste não paramétrico U de Mann-Whitney foi utilizado e, em tabelas de contingência, o teste de freqüências do qui-quadrado foi aplicado. O teste exato de Fisher foi adotado quando pelo menos uma freqüência esperada foi menor do que 5 em tabelas 2X2. O Método de Kaplan-Meier foi utilizado para estimar as probabilidades de sobrevida global e o teste de logrank para comparar as curvas de sobrevida. O nível de significância de 5% foi adotado para todos os testes estatísticos. Resultados: houve correlação estatisticamente significante entre marcação para MMP 2 e metástase em linfonodo. Os fatores relacionados negativamente com a sobrevida foram estadiamento N, tipo histológico, invasão neural e marcação de MMP 9. Conclusão: a intensidade de imunomarcação de MMP 2 e MMP9 pode ser indicativa de metástase em linfonodo e menor probabilidade de sobrevida, respectivamente. / Compare the expression of MMPs 2 and 9 and CD31 by the use of immune histochemistry, in squamous cell carcinomas of the floor of the mouth, and obtain the relationship between those markers and demographic aspects, TNM stage, nerve invasion, blood vessel intravasation, degree of tumor differentiation and survival rates. Material and methods: data from 41 patients were reviewed. Tissue sections with 5 m were mounted in silanized glasses, and submmited to immune staining by the streptoavidin-biotin method, using the anti MMP2, MMP 9 and CD31 human antibodies. The presence of staining was quantified in a 100 points grade in 20 fields of each lesion, with a 40X magnification. Blood vessels smaller than 50m that were identified with the CD31 were counted in 5 fields of the hot spot area of the tumor. To verify the association between immune staining and numerical variables, the non parametric Mann-Whitney U test was used, and the chi-square test was verified. The exact Fisher test was adopted when at least one of the expected frequencies in 2X2 tables was less than 5. The Kaplan-Meier method was used to estimate the probabilities of global survival, and the log-rank test was used to compare the survival curves. Results: there was statistically significant association between MMP 2 immune staining and regional metastasis. The variables associated with poor survival rates were N stage, histological grade, nerve invasion and immune staining for MMP 9. Conclusion: the grade of immune staining can be an indicative of node metastasis and poor survival rate, respectively.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-04-05T14:15:05Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Luiz Guilherme Azevedo de Freitas - 2015.rar: 1426984 bytes, checksum: c47c37209a55ad44e556ff3bdda85752 (MD5) license_rdf: 19874 bytes, checksum: 38cb62ef53e6f513db2fb7e337df6485 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-04-05T15:23:49Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Luiz Guilherme Azevedo de Freitas - 2015.rar: 1426984 bytes, checksum: c47c37209a55ad44e556ff3bdda85752 (MD5) license_rdf: 19874 bytes, checksum: 38cb62ef53e6f513db2fb7e337df6485 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-05T15:23:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Luiz Guilherme Azevedo de Freitas - 2015.rar: 1426984 bytes, checksum: c47c37209a55ad44e556ff3bdda85752 (MD5) license_rdf: 19874 bytes, checksum: 38cb62ef53e6f513db2fb7e337df6485 (MD5) Previous issue date: 2015-07-21 / To evaluate the safety of single intravitreal injection of 0,1ml of sunitinib (one group with 1mg/ml and the other group with 10mg/ml), 0,1ml of a solution containing solid lipid nanoparticles and 0,1ml of a solution containing nanocapsules analyzing the possible toxic effects by the electrophysiology and histology in the albino rabbits retina. An experimental controlled study was performed with 20 eyes of albino rabbits. It were performed intravitreal injections of 0,1ml (1mg/ml) of sunitinib in 5 eyes, 0,1ml (10mg/ml) of sunitinib in 5 eyes, 0,1ml of nanocapsules solution in 5 eyes and 0,1ml of a solution containing solid lipid nanoparticles in 5 eyes. Contralateral eye did not receive any treatment and was used as control. Changes in electroretinography were not observed in groups of sunitinib (1mg/ml and 10mg/ml) and in the group of solid lipid nanoparticles. However, in the group of the nanocapsules significant changes were found. They were in the morphology and at the electroretinogram. At histological study only the group of nanocapsules degenerative changes were detected. Changes were severe edema and formation of cytoplasmic vacuoles, suggesting retinal toxicity. / O presente estudo teve por objetivo avaliar a segurança da injeção intravítrea de 0,1ml de sunitinibe (um grupo com 1mg/ml e o outro grupo com 10mg/ml), 0,1ml de solução contendo nanocápsulas e 0,1ml de solução contendo nanopartículas lipídicas sólidas analisando os possíveis efeitos tóxicos à retina de coelhos albinos detectados pela eletrofisiologia e histologia por microscopia óptica. Foi realizado estudo experimental, com 20 olhos de coelhos albinos, nos quais foram realizadas injeções intravítreas de 0,1ml (1mg/ml) de sunitinibe (5 olhos), 0,1ml (10mg/ml) de sunitinibe (5 olhos), 0,1ml de solução contendo nanocápsulas (5 olhos) e 0,1ml de solução contendo nanopartículas lipídicas sólidas (5 olhos). Os olhos adelfos não receberam injeção e foram utilizados com o controle. Não foram observadas alterações eletrorretinográficas nos grupos do sunitinibe (1mg/ml e 10mg/ml) e no grupo das nanopartículas lipídicas sólidas. No grupo das nanocápsulas houveram alterações significativas tanto na morfologia quanto na amplitude e tempo das ondas do eletrorretinograma. Ao estudo histológico, somente o grupo das nanocápsulas apresentou alterações degenerativas (núcleos tumefeitos) com acentuado edema e formação de vacúolos citoplasmáticos, sugerindo toxidade retiniana.

INTRODUÇÃO: O impacto do aumento de expressão do fator de crescimento endotelial no curso da Leucemia Mielóide Crônica (LMC) ainda é desconhecido, porém há relatos de que estes pacientes apresentam maior densidade vascular em medula óssea do que em indivíduos saudáveis, principalmente em crise blástica. Outro fator recentemente associado ao aumento da angiogênese é a expressão anormal da proteína hsecurina, que, por sua vez, inibi uma protease denominada separase, responsável pela separação das cromátides irmãs durante a anáfase da mitose. Por esses motivos, quantificamos células endoteliais circulantes e VEGF em portadores de LMC como marcador de angiogênese e expressão do gene hsecurina. MÉTODOS: Realizamos análise prospectiva e consecutiva de uma coorte de 31 pacientes com LMC em fase crônica ao diagnóstico, 23 em crise blástica, 30 em fase acelerada, atendidos no ambulatório de Hematologia da FMUSP e 50 indivíduos saudáveis, doadores de plaquetas por aférese, para quantificação da porcentagem de células endoteliais circulantes e subtipos pelo método de citometria de fluxo no laboratório de Imunopatologia HC/FMUSP. Desta coorte 25 pacientes em fase crônica, 14 em crise blástica, 26 em fase acelerada e 32 indivíduos saudáveis foram analisados para os genes hsecurina e VEGF por PCR quantitativo em tempo real. RESULTADOS: A mediana da porcentagem das células endoteliais circulantes foi de 0, 0146% em LMC em crise blástica e 0,0059% no grupo controle, p < 0,01 às custas das células endoteliais maduras (p < 0,01). A mediana de células endoteliais circulantes em crise blástica foi de 0, 0146%, superior à da fase acelerada (0,0059%), p < 0,01 com predomínio de células endoteliais maduras (p < 0,01). Em relação à expressão do gene VEGF observamos aumento estatisticamente significativo nas fases crônica (p < 0,01), acelerada (p < 0,01) e crise blástica (p = 0,04). Encontramos aumento significativo da expressão do gene hsecurina na crise blástica da doença, com mediana de 0,390 em relação aos grupos controle com mediana de 0,125 (p < 0,01) e fase acelerada, com mediana de 0,230 (p = 0,04). Os pacientes na fase crônica da doença apresentaram mediana de 0,260 e p = 0,03 quando comparados com o grupo controle. CONCLUSÃO: Observamos neste estudo que a quantificação de CEC é uma ferramenta útil para predizer e identificar precocemente a progressão da LMC para fase blástica, diferentemente da variável VEGF que foi elevado em todas as fases da doença. A expressão do gene hSecurina na fase crônica da doença foi significantemente alta, demonstrando provável relação com a elevação da taxa de proliferação celular. Entretanto, estudos complementares do gene hSecurina deverão ser realizados na crise blástica da LMC, para entendermos com precisão o real significado nesta fase da doença. / INTRODUCTION: The impact of the increased expression of vascular endothelial growth factor in the course of chronic myeloid leukemia (CML) is still unknown, but there are reports that those patients have higher vascular density in bone marrow than healthy individuals, particularly in blast crisis. Another factor recently associated with increased angiogenesis is the abnormal expression of protein hSecurin, which, in turn, inhibits a protease called separase, responsible for the separation of sister chromatids during the anaphase of mitosis. For these reasons, we quantified circulating endothelial cells and VEGF in patients with CML as a marker of angiogenesis and hSecurin gene expression. METHODS: We performed a prospective analysis of consecutive cases in a cohort of 31 patients with CML in chronic phase at diagnosis, 23 in blast crisis, 30 in accelerated phase who attended the outpatient Hematology FMUSP ward, and 50 healthy subjects, platelet apheresis donors, for quantification of the percentage of circulating endothelial cells and subtypes through the flow cytometry method, at HC/FMUSP Immunopathology laboratory. In this cohort, 25 patients in chronic phase, 14 in blast crisis, 26 in accelerated phase, and 32 healthy subjects were tested for the genes VEGF and hSecurin by quantitative real-time PCR. RESULTS: The median percentage of circulating endothelial cells was 0.0146% in CML in blast crisis and 0.0059% in the control group, p <0.01 at the expense of mature endothelial cells (p <0.01). The median circulating endothelial cells in blast crisis was 0.0146% higher than in accelerated phase (0.0059%), p <0.01 with predominance of mature endothelial cells (p <0.01). Regarding the expression of the VEGF gene, a statistically significant increase was observed in chronic phase (p <0.01), accelerated (p <0.01) and blast crisis (p = 0.04). We found a significant increase in hSecurin gene expression in blast crisis disease, with a median of 0.390 compared to control groups, with a median of 0.125 (p <0.01) and accelerated phase, with a median of 0.230 (p = 0.04). Patients with chronic disease had a median of 0.260 and p = 0.03 compared with the control group. CONCLUSION: In this study, we observed that the quantification of CPB is a useful tool to predict and identify the early progression of CML to blast phase, unlike the VEGF variable, which was elevated in all stages of the disease. The expression of hSecurin gene in chronic phase was significantly higher, demonstrating a likely relationship with the increased cell proliferation rate. However, further studies of hSecurin gene should be made in the blastic crisis of CML to understand precisely the real meaning at this stage of the disease.

INTRODUÇÃO: O Carcinoma de Células Renais (CCR) é reposnsável por mais de 200.000 casos a cada ano no mundo, representando cerca de 2% de todos os cânceres. O CCR do tipo células claras (CRCC) é o subtipo mais comum da doença e é responsável por 75 a 80% dos casos, com maiores taxas de invasão local, desenvolvimento de metástases e mortalidade. As novas terapias alvo são baseadas em moléculas e anticorpos antiangiogênicos alterando o curso da doença, mas os resultados até agora não são satisfatórios. OBJETIVOS: Nosso objetivo nesse estudo foi estudar miRNAs e seus possíveis genes alvo relacionados com a angiogênese em CRCC tentando trazer novos conhecimentos relacionados às vias moleculares associadas à doença. MÉTODOS: Os níveis de expressão dos miRNAs miR-99a, 99b, 100, 199a, 106a, 106b, 29a, 29b, 29c, 126, 200a, 200b e seus respectivos genes alvo: mTOR, HIF1-alfa, VHL, PDGF, VEGF, VEGFR1 e VEGFR2 foram avaliados por alfaRT-PCR utilizando amostras de tecido tumoral de 56 pacientes com diagnóstico de CRCC e 5 amostras de tecido renal benigno como controle. Os resultados foram comparados com o tamanho tumoral, grau nuclear de Fuhrman e invasão microvascular, considerando os critérios de risco propostos por Dall\'Oglio et al (2007). RESULTADOS: Encontramos subexpressão da maioria dos genes, exceto VEGFA e PDGF, enquanto que a análise dos miRNAs mostrou subexpressão apenas dos miRs 100 e 126. Comparamos a expressão dos genes com seus possíveis miRNAs reguladores, e encontramos que mTOR apresentou subexpressão, enquanto miR99a apresentou superexpressão na maioria das amostras. Esta relação também ocorreu entre VEGFA e o miR126 e entre os miRNAs 106a, 106b, e seu gene alvo VHL. Considerando os grupos de risco, a superexpressão do miR200b foi associada com pacientes de alto risco (p = 0,01) e a superexpressão do miR126 foi associada com menor grau de Fuhrman (I-II) (p = 0,03). CONCLUSÕES: Os resultados mostram que em CRCC há um desequilíbrio na expressão de genes e miRNAs relacionadas com a angiogênese. Além disso através dos nossos achados podemos especular o papel do miR200b e do miR126 no prognóstico de CRCC / BACKGROUND: There are more than 200,000 cases of renal cell carcinoma (RCC) each year in the world, accounting for approximately 2% of all cancers. RCC clear cell type (ccRCC) is the most common subtype of RCC and accounts for 75 to 80% of the cases with highest rates of local invasion, development of metastasis and mortality. New target therapy is based on antiangiogenic antibodies and molecules, changing the course of the disease, but the results so far are disappointing. OBJECTIVES: Our aim is to study miRNAs and their target genes related to angiogenesis in ccRCC trying to bring some new knowledge to the molecular pathways related to the disease. METHODS: The expression levels of miRNAs miR-99a, 99b, 100; 199a; 106a; 106b; 29a; 29b; 29c; 126; 200a, 200b and their respective target genes: mTOR, HIF1-Î ±, VHL, PDGF, VEGF, VEGFR1 and VEGFR2 were evaluated using alfaRT-PCR.in snap-frozen tumor tissue samples from 56 patients diagnosed with ccRCC and 5 samples of benign renal tissue as control. The results were related to tumor size, Fuhrman nuclear grade and microvascular invasion, considering the risk criteria proposed by Dall\'Oglio et al. (2007). RESULTS: We compared the expression of genes with their possible regulatory miRNAs, and we found that mTOR was underexpressed while miR99a was overexpressed in most samples. This relationship also occurs between VEGFA and miR126 and between miRNAs 106a, 106b, and their target gene VHL. Considering the risk groups the overexpression of miR200b was associated with high-risk patients (p = 0.01) and the overexpression of miR126 was associated with lower Fuhrman grade (I-II) (p = 0.03). CONCLUSIONS: Our results show that in ccRCC there is an unbalance in the expression of genes and miRNAs related to angiogenesis and cell proliferation and survival. Furthermore with our findings we can speculate the role of miR200b and miR126 in the prognostic of ccRCC. We believe that the relationship between miRNAs and their respective genes should be more profoundly searched as markers and possible therapeutic agents in this neoplasia