O aminoácido glutamato é o principal neurotransmissor excitatório do SNC de mamíferos e participa de funções importantes como cognição, memória, aprendizagem e plasticidade neuronal. Porém, excessiva estimulação dos receptores glutamatérgicos pode resultar em morte celular, processo este denominado excitotoxicidade e que está associado à processos neurodegenerativos. A remoção do glutamato da fenda sináptica, que ocorre através de transportadores dependentes de sódio de alta afinidade, localizados principalmente nos astrócitos, é o principal mecanismo modulatório das ações glutamatérgicas e responsável pela manutenção de concentrações extracelulares abaixo dos níveis neurotóxicos. O Ácido quinolínico (AQ), um agonista NMDA, é uma potente neurotoxina endógena, cujo acúmulo no cérebro parece estar envolvido na etiopatologia das convulsões. Entretanto, apesar do seu envolvimento em muitas doenças, os mecanismos moleculares e danos cerebrais ainda não são perfeitamente elucidados. Os derivados da guanina com funções extracelulares, sejam os nucleotídeos GTP, GDP ou GMP, e o nucleosídeo guanosina mostraram exercer ações tróficas em células neurais, bem como modular o sistema glutamatérgico. Os resultados demonstram que vários sistemas de transporte de glutamato são afetados pela ação do ácido quinolínico, e que os nucleotídeos da guanina podem exercer ação modulatória destas respostas. Nos estudos in vitro, o AQ estimulou a liberação de glutamato em sinaptossomas e inibiu a captação de glutamato por astrócitos. Observou-se ainda que o AQ inibiu a captação vesicular de glutamato, porém os nucleotídeos da guanina foram capazes de prevenir esta inibição, indicando uma possível modulação neste tranportador. Nos estudos in vivo, usando um modelo experimental de indução de convulsão por AQ, observou-se que a liberação sinaptossomal glutamatérgica também está estimulada, porém este efeito foi completamente abolido pela guanosina, quando este nucleosídeo foi capaz de prevenir a convulsão. AQ também estimula a captação vesicular de glutamato e inibe a captação vesicular de GABA; da mesma forma, os nucleotídeos da guanina exercem seus efeitos modulatórios, já que tanto a inibição quanto o aumento de captação retornaram aos níveis do controle quando houve prevenção da convulsão. Adicionalmente, estas alterações na captação vesicular de glutamato parecem ser relacionadas ao AQ, já que em outros modelos (picrotoxina, cainato, cafeína, PTZ ou eletrochoque transcorneal) não foram observadas alterações. Nossos resultados sugerem que os nucleotídeos da guanina exercem importante função como neuromoduladores e ainda neuroprotetores. / Glutamate is the main excitatory neurotransmitter in mammalian CNS, involved in processes such as plasticity, learning and memory, and neural development. However, an excessive glutamate receptors activation can induce intracellular events which lead to the neural death through excitotoxic events, wich are associated to the etiology of neuodegeneratives disorders. The removal of glutamate from the synaptic cleft, which occurs by high affinity of sodium-dependent transporters, located mainly in astrocyte membranes, is the major mechanism for modulating of glutamate actions, responsible for maintaining its extracellular concentrations below neurotoxic levels. Quinolinic acid (QA), an NMDA agonist, is a potent endogenous neurotoxin. Accumulation of QA in the brain seems to be involved in the ethiopatogeny of convulsions. However, in spite of its involvement in many diseases, the molecular mechanisms linking QA and brain damage are far from understood. Extracellular guanine-based purines (GBPs), namely the nucleotides GTP, GDP, GMP and the nucleoside guanosine have been shown to exert trophic effects on neural cells, as well as to modulate of the glutamatergic system. The results demonstrate that various systems of glutamate transport are affected by action of QA, and guanine nucleotides exert modulatory effect. In in vitro studies, QA stimulates glutamate release in synaptosomes and inhibits the glutamato uptake by astrocytes. We observed that QA inhibits glutamate vesicular uptake, however guanine nucleotides prevent this inhibition, indicating a possible modulation of this transporter. In in vivo studies, using a experimental model of QA-induced seizures, we observed that synaptosomal glutamate release is stimulated, and this effect was completely abolished by guanosina. QA stimulates the glutamate uptake and inhibits the GABA uptake, and guanine nucleotides exert modulatory effect, because both effects are abolished when animals not displaying seizures. Additionally, this alterations in vesicular glutamate uptake appears are related with QA, because in other models of seizure (picrotoxin, kainate, caffeine, PTZ or maximal transcorneal electroshock) we do not observed any alterations. Our results suggest that guanine nucleotides exert an important role as neuromodulators and neuroprotectors.

Diversos trabalhos têm relacionado a fisiopatogenia da acidemia glutárica tipo I (GA I) com a excitotoxicidade glutamatérgica. Ainda que sob intenso debate, a maioria desses trabalhos se baseia na semelhança estrutural existente entre o glutamato e os principais ácidos orgânicos acumulados na GA I, os ácidos glutárico (GA) e 3-hidroxiglutárico (3-OHGA). Tendo em vista a janela de vulnerabilidade cerebral dos pacientes afetados pela GA I durante os primeiros anos de vida e o distinto padrão de expressão e propriedades de receptores e transportadores glutamatérgicos ao longo do desenvolvimento, o presente trabalho teve por objetivo investigar os efeitos dos ácidos GA e 3-OHGA sobre a ligação de glutamato a seus receptores e transportadores de membrana plasmática e sobre a captação de glutamato por fatias e preparações sinaptossomais de córtex cerebral e estriado de ratos de 7 a 60 dias de vida. Nossos resultados demonstraram que o 3-OHGA inibiu a ligação de glutamato a seus receptores e transportadores de membrana em córtex cerebral de ratos de 30 dias de vida. Observamos ainda que esse ácido parece interagir com receptores do tipo NMDA, agindo como um fraco agonista desses receptores por aumentar a ligação de MK-801 em receptores de membrana e o influxo de Ca2+ em fatias de córtex cerebral de ratos. Através do estudo ontogenético da ligação de glutamato a seus receptores e transportadores de membrana plasmática de ratos na presença de GA e 3-OHGA, verificamos que o GA inibe a ligação de glutamato a seus receptores de membrana em córtex cerebral e estriado de ratos de 7 e 15 dias de vida. A utilização de antagonistas glutamatérgicos juntamente com a inibição da ligação de cainato a seus receptores na presença de GA indicaram que os efeitos desse ácido sobre a ligação de glutamato a seus receptores parecem envolver receptores do tipo não- NMDA, possivelmente do tipo cainato. O ácido 3-OHGA inibiu a ligação de glutamato somente a transportadores de membrana de estriado de ratos de 7 dias de vida. Os estudos de captação de glutamato mostraram que o GA inibe o transporte desse neurotransmissor apenas em fatias de córtex cerebral de ratos de 7 dias de vida. Esse efeito não foi devido à morte celular e foi prevenido por pré-administração de N-acetilcisteína sugerindo o envolvimento de dano oxidativo na presença do GA. Além disso, o efeito do GA parece envolver os transportadores glutamatérgicos do tipo GLAST, expressos nos estágios iniciais de desenvolvimento cerebral. Em contraste, o ácido 3-OHGA não afetou a captação de glutamato por fatias de córtex cerebral e estriado de ratos. Observamos também que os ácidos GA e 3-OHGA não afetaram a captação de glutamato por preparações sinaptossomais de cérebro de ratos. Os efeitos detectados no presente estudo pelos ácidos GA e 3-OHGA em períodos específicos do desenvolvimento e também nas distintas estruturas cerebrais estudadas podem estar relacionados com a expressão diferenciada de receptores e transportadores glutamatérgicos no cérebro de ratos. Apesar de não explicarem a janela de vulnerabilidade estriatal, tais resultados podem auxiliar na elucidação dos mecanismos fisiopatogênicos envolvidos no dano neurológico ocorrido durante os primeiros anos de vida dos pacientes com GA I. / The role of excitotoxicity in the cerebral damage of glutaric acidemia type I (GA I) is under intense debate. Several studies relate the excitotoxic actions of the major metabolites accumulating in GA I, glutaric (GA) and 3-hydroxyglutaric acids (3-OHGA), based on the chemical structural similarity between these organic acids and glutamate. Considering that GA I patients present a window of cerebral vulnerability during the first years of life and the variable ontogenetic pattern of glutamate receptors and transporters expression and properties, the objective of the present work was to investigate the effects of GA and 3-OHGA on glutamate binding to receptors and transporters from synaptic plasma membranes and on glutamate uptake by slices and synaptosomal preparations from cerebral cortex and striatum during rat brain development. Our results demonstrated that 3-OHGA inhibited glutamate binding to receptors and transporters from plasma membranes of cerebral cortex of 30-day-old rats. Moreover, its effect on glutamate receptors seems to be directed towards NMDA receptors and suggests that 3-OHGA acts as a weak agonist of these receptors by increasing the MK-801 binding to membrane receptors and Ca2+ influx into cerebral cortex slices of rats. The ontogenetic study of glutamate binding to receptors and transporters in the presence of GA and 3- OHGA revealed that GA decreased the glutamate binding to receptors from plasma membranes of cerebral cortex and striatum of 7- and 15-day-old rats. In addition, by using glutamate antagonists and kainate binding assay, we verified that this effect involved non-NMDA receptors, probably kainate receptors. On the other hand, 3-OHGA inhibited glutamate binding to transporters from plasma membranes of striatum of 7-day-old rats. The glutamate uptake studies showed that GA decreased glutamate transport only in cerebral cortex slices of 7-day-old rats. Furthermore, this effect was not due to cellular death and was prevented by N-acetylcysteine preadministration suggesting the involvement of oxidative damage. Moreover, immunoblot analysis and glutamate uptake assays in the presence of GA and dihydrokainate (DHK) revealed that GA effect seems to involve GLAST transporters, which are expressed in early stages of rat brain development. In contrast, 3-OHGA did not affect glutamate uptake by brain slices. We also observed that both GA and 3-OHGA did not affect glutamate uptake by synaptosomal preparations from rat brain. Concluding, the effects provoked by GA and 3-OHGA at specific ages of development and also in distinct cerebral structures may possibly be explained by the differential ontogenetic and regional specific expression of the glutamate receptors and transporters in rat brain. Although these results can not explain the window of striatal vulnerability, they may contribute to elucidate the mechanisms of the neurological damage occurred during the first years of life in GA I patients.

O estudo de metodologias que possibilitem o acesso de moléculas terapêuticas ao cérebro evitando a barreira hematoencefálica (blood-brain barrier, BBB), é extremamente importante para o tratamento das doenças que afetam o sistema nervoso central. Os estudos se concentram na busca por vias seguras e pouco invasivas. Recentemente a via nasal tem mostrado resultados positivos na administração de fármacos ao sistema nervoso central de maneira segura, sugerindo a utilização desta via para a terapia gênica. Neste trabalho, foi estudada a administração intranasal de um vetor não viral, que codifica o gene da proteína verde fluorescente otimizada (enhanced green fluorescent proten, EGFP), diluído em água ou em solução de sulfato de zinco em camundongos adultos da linhagem BALB/c. Os resultados de RT-PCR mostraram que o vetor atingiu o cérebro em ambos tratamentos, e sua expressão foi mantida até 8 semanas após o tratamento. A expressão da EGPF em diferentes regiões cerebrais foi analisada 1, 2, 4 e 8 semanas após o tratamento, através de imunohistoquímica. Nossos resultados mostraram que um número muito pequeno de células foi transfectado em ambos tratamentos e que a freqüência destas células nas regiões cerebrais estudadas varia muito mesmo entre animais do mesmo grupo. O tratamento com sulfato de zinco não aumentou a eficiência do vetor. Os maiores números de células transfectadas encontradas foram no bulbo olfatório e hipocampos uma semana após o tratamento. Nossos resultados mostram pela primeira vez a expressão prolongada de um gene administrados pela via nasal no cérebro. / The investigation of methods that allow the access of therapeutic molecules to the brain, overcoming the blood-brain barrier (BBB), is of great importance for the treatment of diseases reaching the central nervous system. Studies concentrate mainly on the search for safer and less aggressive routes. Recent studies have suggested that pharmaceutical agents can reach the brain by the nasal route, that may thus be also appropriate for gene therapy. Here, we investigated brain targeting by intranasal administration of a plasmid vector (pREGFP) with the reporter gene EGFP, diluted in water or in a zinc sulfate/water solution, to adult BALB/c mice. Brain regions were examined by RT-PCR or immunohistochemistry 1, 2, 4 or 8 weeks after the treatment. RT-PCR results showed that the plasmid DNA reached the brain similarly with the two types of treatment. Expression of egfp was observed in all groups, and maintained even 8 weeks after treatment. Brain sections submitted to immunohistochemistry (IHC) were analyzed for the detection of EGFP-positive cells, that could be observed in brain samples from mice treated by intranasal administration of pREGFP. The frequency of EGFP-positive cells was very low, and presented great variation even among mice from the same experimental group. The supplementation of the transfection medium with zinc sulfate did not induce higher numbers of EGFP-positive cells. A higher frequency of these cells was observed in the olfactory bulb one week after treatment, and in the hippocampus as compared to other brain regions. Our results show for the first time the long-term expression of a gene carried by a nonviral vector to the central nervous system.

A terapia celular utilizando células tronco mesenquimais (MSC) derivadas da medula óssea surge como uma alternativa para o tratamento das doenças neurodegenerativas. Apesar dos resultados positivos com o uso dessas células nos ensaios pré-clínicos e clínicos após a isquemia cerebral, seus efeitos colaterais e seu mecanismo de ação permanecem desconhecidos. Os benefícios alcançados após a terapia celular para o tratamento da isquemia não são atribuídos à diferenciação dessas células em novos neurônios, mas sim aos fatores que elas podem secretar. Na tentativa de compreender como os fatores secretados pelas MSC podem influenciar o tecido hipocampal que sofreu ou não privação de oxigênio e glicose (POG) e como os fatores liberados pelo tecido lesionado podem atuar sobre as MSC, nós utilizamos culturas organotípicas de hipocampo expostas ao meio condicionado pelas MSC e MSC expostas ao meio condicionado pelas culturas organotípicas de hipocampo expostas à POG. Os resultados obtidos nesse trabalho mostram que o meio condicionado pelas MSC é tóxico para as culturas organotípicas de hipocampo, induzindo morte celular especificamente nas regiões do Corno de Ammon (CA) e agravando a lesão causada pela POG. Essa toxicidade parece ser específica das MSC, uma vez que o meio condicionado por outros tipos celulares não tem o mesmo efeito. As MSC isoladas tanto de rato como de camundongo e tanto de medula óssea como de pulmão induzem a morte celular de uma maneira semelhante, sugerindo que o efeito não é espécie ou órgão específico. Ainda, nós observamos que os fatores secretados pelas MSC ativam a microglia e os astrócitos, induzindo a produção de espécies reativas de oxigênio (ROS), o aumento da iNOS e um aumento de IL-6 e TNFα nas culturas organotípicas. O efeito tóxico do meio condicionado pelas MSC pode ser atenuado por antioxidantes, anti-inflamatórios, antagonistas NMDA e AMPA, bloqueadores de canal de cálcio dependentes de voltagem e por agonista GABA. Quando as MSC foram analisadas após a sua exposição ao meio condicionado pelo tecido hipocampal lesionado, nós não observamos morte celular ou mudanças morfológicas aparentes nessas células após 24 h de exposição ao meio. Surpreendentemente, as MSC aumentaram a proliferação quando expostas ao meio condicionado pelo hipocampo lesionado, não apresentando nenhum marcador neural após 72 h em contato com esse meio condicionado. Em conjunto, nossos resultados mostram um possível efeito adverso de fatores secretados pelas MSC, introduzindo uma nota de cautela na utilização dessas células. / Cell therapy using bone marrow-derived mesenchymal stem cells (MSC) seems to be a new alternative for the treatment of neurodegenerative diseases. In spite of several good and promising results with the use of these cells in preclinical and clinical studies after stroke, their side effects and their mechanism of action are still unknown. The benefits reached after cell therapy to treat stroke are not attributed to the differentiation of the cells in new neurons, but to the factors that these cells can secrete. In an attempt to understand how MSC secreted factors can influence the hippocampal tissue that suffer or not from oxygen and glucose deprivation (OGD) and how the factors secreted from the injured hippocampus can influence MSC behavior, we used organotypic hippocampal slice cultures exposed to MSC conditioned medium and MSC exposed to organotypic hippocampal cultures conditioned medium. The results obtained in this work show that MSC conditioned medium is toxic to organotypic hippocampal slice cultures, inducing cell death specifically in the CA (Cornus Ammonis) region of hippocampus and aggravating the lesion induced by OGD. This toxicity seems to be specific to MSC, once the medium conditioned by other cell types do not induce cell death. Also, MSC isolated from rat or mice and from bone marrow and lungs induce cell death in a similar manner, suggesting that the effect is not organ- or specie- specific. In addition, we have observed that MSC secreted factors activate microglia and astrocytes, inducing reative oxygem species (ROS) generation and iNOS, TNFα and IL-6 increase in organotypic cultures. The MSC conditioned medium-induced toxic effect can be attenuated by antioxidants, antiinflammatory drugs, NMDA and AMPA antagonists, Ca2+ voltage-dependent channel blockers and GABA agonist. When MSC behavior was investigated after these cells were exposed to the conditioned medium from the lesioned hippocampus, we observed that these medium is not able to induce cell death or any apparent change in MSC morphology after a 24 h exposure period. Surprinsingly, MSC increase proliferation in response to the conditioned medium from the injured hippocampal tissue, do not presenting any neural marker after 72 h of contact with this medium. Taken together, our results show a possible side effect of MSC secreted factors, introducing a note of caution in the use of these cells.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química / Made available in DSpace on 2012-10-26T08:25:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 299502.pdf: 1672685 bytes, checksum: 97407627c08f301cbcfee9d784ee5ade (MD5) / Atividades neuronais são responsáveis por grandes movimentações iônicas em tecidos neuronais. O processamento e a passagem da informação sináptica entre duas células neurais iniciam-se com a chegada de um potencial de ação nos terminais pré-sinápticos. Este fenômeno causa a despolarização do potencial de membrana da célula neural gerando grandes movimentações iônicas através da membrana neural. Modelos matemáticos encontrados na literatura que reproduzem este fenômeno usualmente baseiam-se em circuitos elétricos análogos e, por não considerarem os efeitos da eletrodifusão, podem ser questionados. O presente trabalho tem como objetivo propor um modelo de eletrodifusão no qual a dinâmica temporal do potencial de membrana e as concentrações iônicas nos espaços intra e extracelular são consideradas durante a despolarização do terminal pré-sináptico. Neste modelo estão incluídos a participação dos trocadores, bombas e canais voltagem-dependentes das quatro espécies iônicas mais relevantes: Potássio (K+), Sódio (Na+), Cloro (Cl-) e Cálcio (Ca2+). Os resultados são consistentes com a literatura e reproduzem a dinâmica iônica durante a chegada de um sinal pré-sináptico. Este modelo pode ser de grande utilidade para futuros trabalhos que pretendem simular a liberação de neurotransmissores e a passagem da informação sináptica em células do sistema nervoso central (SNC). / The neuronal activities are responsible for high ionic movements in neuronal tissues. Processing and presentation of information between two synaptic neural cells begin with the arrival of an action potential in presynaptic terminals. This phenomenon causes the depolarization of the membrane potential of neural cell generating large ionic movements across the neuronal membrane. Mathematical models in the literature to reproduce this phenomenon are based on analog electrical circuits, and by not considering the effect of electrodiffusion, they may be questioned. This paper aims at proposing a model of electrodiffusion for which the temporal dynamics of membrane potential and ionic concentrations in the spaces within and outside the cell are considered during the depolarization of the presynaptic terminal. This model includes the participation of exchangers, pumps and voltage-gated channels of the four ionic most relevant species: Potassium (K+), Sodium (Na+), chlorine (Cl-) and calcium (Ca2+). The results are consistent and accurately reproduce the ion dynamics during the arrival of a presynaptic signal. This model may be useful for future studies that aim at simulating the release of neurotransmitters and synaptic passage of information in cells of the central nervous system (CNS).

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Farmacologia / Made available in DSpace on 2012-10-22T09:42:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 225329.pdf: 433389 bytes, checksum: 8db634e8aca0702a7b135286d0ad803c (MD5) / O presente trabalho teve por objetivo estudar os efeitos centrais dos extratos aquoso (EA) e hidroalcoólico (EH), da fração butanólica (FB) e do verbascosídeo (VE) de Lippia alba. Camundongos adultos foram tratados por via oral (v.o., 1 h) com o EA, EH ou FB, ou por via intracerebroventricular (i.c.v., 5 min) com VE e avaliados no sono etéreo (SE), sono barbitúrico (SB), temperatura retal (TR), convulsões induzidas por pentilenotetrazol (CPTZ), labirinto em cruz elevado (LCE), teste do rota-rod (RR), teste do arame (AR) e teste de suspensão pela cauda (TST) para avaliar possíveis atividades sedativa, ansiolítica, anticonvulsivante ou antidepressiva. Os resultados mostraram que no modelo da TR todas as preparações testadas produziram hipotermia significativa em pelo menos uma das doses testadas (EA - 2 g/kg, EH - 0,3 e 1g/kg, FB - 0,1 e 0,3 g/kg; VE - 0,12, 1,2 e 12? g/sítio). Nos demais modelos comportamentais apenas o tratamento com a FB (0,3 g/kg) ou VE (0,12, 1,2 e 12? g/sítio) foram capazes de potencializar o SB ou SE, respectivamente; reduzir a letalidade (FB - 0,3 g/kg; VE - 12 g/sítio) durante as convulsões induzidas por PTZ. No LCE, apenas o VE reduziu o número de entradas nos braços fechados (0,12 e 12? g/sítio), as imersões de cabeça e comportamentos de levantar (1,2 g/sítio). No entanto, não foi observado efeito algum nos testes do RR, AR ou TST para todas as preparações testadas. O tratamento com VE (12? g/sítio) e DZP (1 mg/kg i.p.) foi capaz de produzir prejuízo no AR, indicando um provável efeito sinérgico entre os compostos. Os resultados obtidos sugerem um efeito depressor central para a FB e o VE de L. alba, sendo que o VE parece contribuir para o efeito da FB. Outros estudos devem ser conduzidos no intuito, tanto de isolar e testar mais substâncias desta espécie, como de elucidar os mecanismos envolvidos nos seus efeitos centrais.

PEREIRA, Anamaria Falcão. Papel do oxalato na neuropatia sensitiva periférica induzida por oxaliplatina em camungondos: comparação entre a oxaliplatina e seu análogo livre de oxalato. 2015. 132 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-12-01T11:55:07Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_afpereira.pdf: 7609663 bytes, checksum: f3e33f5179642dd8d68a256fc098954f (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-12-01T12:20:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_afpereira.pdf: 7609663 bytes, checksum: f3e33f5179642dd8d68a256fc098954f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-01T12:20:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_afpereira.pdf: 7609663 bytes, checksum: f3e33f5179642dd8d68a256fc098954f (MD5) Previous issue date: 2015 / Oxaliplatin (OXL) is a third generation platinum compound with potent cytotoxic activity against several types of cancers, having a side effect is difficult to treat, a severe peripheral neuropathy. Studies suggest that oxalate, OXL metabolite, is involved in the development of peripheral sensory neuropathy (PSN); so that was published the synthesis of an OXL analogue (LLC-1402), oxalate free, which has antitumor properties (LIU et al., 2013). The objective of this research is to study the role of oxalate in OXL induced neuropathy in mice, comparing OXL with LLC-1402. The PSN was induced by two injections (iv.) OXL (2 mg/ kg) per week, in male Swiss mice, for 4 ½ weeks, totaling 9 injections. LLC-1402 (7, 14 and 28 mg / kg) was administered (iv.) following the same scheme. Nociceptive tests were performed (electronic von Frey and tail immersion test) weekly. After, it was chosen dose of 14 mg / kg of the LLC-1402 to perform another experiment, in which was added oxalate injection (1.7 mg/kg). In the 28th day, it was made blood collection for total leukocyte count and biochemical measurement. In the 28th and 56th days, spinal cord and DRG were removed for immunofluorescence for ATF-3, c-FOS, iNOS and NeuN. The results showed that both OXL and LLC-1402 were able to decrease the paw withdrawal threshold and tail withdrawal time significantly (p<0.05) compared to the control group. The injection of LLC-1402 together with oxalate and only oxalate was also able to reduce the paw withdrawal threshold and the tail withdrawal time. Moreover, all groups treated with OXL, LLC-1402 and oxalate showed a significant reduction in the total leukocyte count. The biochemical measurement (glutamic oxaloacetic transaminase, glutamic pyruvic transaminase, urea, creatinine) showed no statistical difference between the groups. The results also showed increased c-Fos immunoexpression in GRD in groups treated with OXL, LLC-1402 and LLC-1402 together with oxalate in the 28 and 56 days, and only oxalate the 28th day. This increase was observed in the dorsal horn of the spinal cord at 28th day in all the treated groups. It was not observed this increase in the dorsal horn of the spinal cord in the 56th day. It was observed an increase in immunoexpression of ATF3 in DRG and spinal cord of dorsal horn in all treated groups in the 28th and 56th days. iNOS immunofluorescence showed no significant difference between groups in the DRG nor spinal cord, already in the 28th day, there was an increase in immunoexpression of iNOS in GRD. Thus, the results showed that the oxalate may be partially involved in PSN induced OXL. / Oxaliplatina (OXL) é um composto de platina de terceira geração com potente atividade citotóxica contra vários tipos de câncer, possuindo um efeito colateral de difícil tratamento, uma severa neuropatia periférica. Estudos sugerem que o oxalato, metabólito da OXL, está envolvido no desenvolvimento dessa neuropatia sensitiva periférica (NSP); de modo que foi publicada a síntese de um análogo (LLC-1402) da OXL, livre de oxalato, tendo propriedades antitumorais (LIU et al., 2013). O objetivo do trabalho é estudar o papel do oxalato na neuropatia induzida por OXL em camundongos, comparando a OXL com LLC-1402. A NSP foi induzida por 2 injeções (iv.) por semana de OXL (2 mg/kg), em camundongos machos Swiss, durante 4 ½ semanas, totalizando 9 injeções. LLC-1402 (7, 14 e 28 mg/kg) foi administrado (iv.) seguindo o mesmo esquema. Foram realizados testes nociceptivos (Von Frey eletrônico e TIC), semanalmente. Depois, foi escolhida a dose de 14 mg/kg do LLC-1402 para fazer um outro experimento, no qual foi acrescentada a injeção ip. de oxalato (1,7 mg/kg). No 28º dia, foi feita coleta de sangue para contagem total de leucócitos e dosagens bioquímicas. Nos 28° e 56º dias, foi feita a coleta de medula espinhal e GRD para imunofluorescência para ATF-3, c-FOS, iNOS e NeuN. Os resultados mostraram que a OXL e o LLC-1402 foram capazes de diminuir o limiar de retirada da pata e o tempo de retirada da cauda significativamente (p<0,05), comparado ao grupo controle. A injeção de LLC-1402 junto com oxalato e somente oxalato também foi capaz de reduzir o limiar de retirada da pata e o tempo de retirada da cauda. Os grupos tratados com OXL, LLC-1402 e oxalato mostraram uma redução significativa da contagem total de leucócitos. Para as dosagens bioquímicas (TGO, TGP, ureia, creatinina), não houve diferença estatística entre os grupos. Houve um aumento da imunoexpressão de c-Fos no GRD nos grupos tratados com OXL, LLC-1402 e LLC-1402 junto com oxalato nos 28° e 56° dias, e somente oxalato no 28° dia. Foi observado esse aumento no corno dorsal da medula espinhal no 28° dia em todos os grupos tratados. Foi observado um aumento da imunoexpressão de ATF-3, no GRD e corno dorsal da medula espinhal, em todos os grupos tratados, nos 28° e 56° dias. Não houve diferença significativa entre os grupos no GRD nem medula espinhal na imunoexpressão de iNOS no 56° dia; já, no 28° dia, houve um aumento da imunoexpressão de iNOS no GRD. Os resultados mostraram que o oxalato pode estar envolvido parcialmente na NSP induzida por OXL.

PONTES, Renata Bessa. Envolvimento da endotelina-1, de receptores (TRPV1 E NMDA) e da substância p na neuropatia sensitiva periférica induzida pelo agente antineoplásico oxaliplatina. 2015. 138 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-12-01T12:05:39Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_rbpontes.pdf: 1953785 bytes, checksum: 7c89921708b538e38f85458d5b33f44e (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-12-01T12:21:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_rbpontes.pdf: 1953785 bytes, checksum: 7c89921708b538e38f85458d5b33f44e (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-01T12:21:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_rbpontes.pdf: 1953785 bytes, checksum: 7c89921708b538e38f85458d5b33f44e (MD5) Previous issue date: 2015 / Introduction: The cumulative neurotoxicity is a toxicity that can result from oxaliplatin-based therapy (OXL), which is the 3rd generation platinum agent with broad spectrum of antitumor activity, including colorectal, ovarian and lung cancer. Neurotoxicity associated with OXL generates a dose-limiting toxicity, chronic, peripheral sensory neuropathy (NSP). Objective: To investigate the involvement of endothelin-1, TRPV1 receptors and NMDA and substance P involved in the pathogenesis of peripheral sensory neuropathy induced by oxaliplatin antineoplastic agent. Methods: Male Swiss mice (20g) were pre-treated with antagonists of endothelin-1 receptors (Bosentan 100mg / kg orally; BQ-123 and BQ-788 30μl, intraplantar) and TRPV1 receptor antagonists (capsazepine, 5mg / kg , IP), antagonist of NK-1 receptor for substance P (apreptanto, 1 mg / kg, IP), and a NMDA receptor antagonist (MK-801, 0.5mg / kg, IP) 30 minutes before administration of OXL (1mg / kg, IV) for 4.5 weeks. Parallel nociceptive tests performed to assess the development of peripheral sensory neuropathy. The hyperalgesia assessed by the tail immersion test (ICT) in cold water (10° C) or warm (43° C) and test Von Frey (HPM). Then it was performed spinal segment, and the dorsal root ganglion immunofluorescence and RT-PCR the Ethics Committee approved the study for Animal Research UFC (Protocol 75/12). Results: The results observed when using the antagonists, as a pretreatment to the use of OXL there was attenuation of the induced hyperalgesia (NSP) OXL. Upon administration of selective antagonists of endothelin in the right paw was significant reduction in paw hyperalgesia in the right (treated) compared to the left paw (control). By analyzing the gene expression of cFos, NK-1 and endothelin B receptor, it was observed that there was significant reduction of expression of the markers in pre-treated bosentan group versus OXL group that showed increased expression for these markers. Conclusion: It was concluded in this study that there is evidence of the role of endothelin-1 receptors (TRPV1 and NMDA) and substance SP in the pathogenesis of NSP induced antineoplastic agent OXL. / Introdução: A neurotoxicidade cumulativa é uma toxicidade que pode advir da terapia à base de oxaliplatina (OXL), que é a 3ª geração de agentes platinos com amplo espectro de atividade antitumoral, incluindo câncer colorretal, ovariano e pulmonar. A neurotoxicidade associada à OXL gera uma toxicidade dose-limitante, crônica, a neuropatia sensitiva periférica (NSP). Objetivo: Investigar o envolvimento da endotelina-1, de receptores TRPV1 e NMDA e da substância P envolvidos na patogênese da neuropatia sensitiva periférica induzida pelo agente antineoplásico oxaliplatina. Materiais e métodos: O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa Animal da UFC (protocolo nº 75/12). Camundongos Swiss machos (20g) foram pré-tratados com antagonistas de receptores de endotelina-1 (Bosentana 100mg/kg, VO; BQ-123 e BQ-788 30µl, intraplantar) e antagonistas do receptor TRPV1 (capsazepina, 5mg/kg, IP), antagonista do receptor NK-1 da Substancia P (apreptanto, 1mg/kg, IP) e antagonista de receptores NMDA (MK-801, 0,5mg/kg, IP) 30 minutos antes da administração de OXL (1mg/kg, IV) por 4 semanas e meia. Paralelamente foram realizados testes nociceptivos para avaliar o desenvolvimento da neuropatia sensitiva periférica. A hipernocicepção foi avaliada pelo teste de imersão da cauda (TIC) em água fria (10ºC) ou aquecida (43ºC) e pelo teste Von Frey (HPM). Em seguida, foi realizado imunofluorescência do segmento medular e gânglio da raiz dorsal e RT-PCR. Resultados: Como resultados observou-se que com o pré-tratamento ao uso de OXL que houve atenuação da hiperalgesia da NSP induzida por OXL. Ao realizar a administração de antagonistas seletivos de endotelina-1 intraplantar na pata direita observou-se redução significativa na hiperalgesia na pata direita (tratada) em comparação à pata esquerda (controle). Ao analisar a expressão gênica para cFos, NK-1 e o receptor de endotelina B, observou-se que houve redução significativa da expressão dos marcadores no grupo pré-tratado com Bosentana ao comparar com o grupo OXL, que demonstrou a expressão aumentada para esses marcadores. Conclusão: Conclui-se no presente estudo que há evidências do papel da endotelina-1, de receptores (TRPV1 e NMDA) e da substância P na patogênese da NSP induzida pelo agente antineoplásico OXL

BEZERRA, P. C. Efeito do treinamento muscular inspiratório na exposição ácida e na variabilidade da frequência cardíaca em indivíduos com esofagite de refluxo. 2015. 81 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-08-23T11:56:21Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_pcbezerra.pdf: 1286604 bytes, checksum: c04ee26489d55c0929503662313adcc7 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2016-08-23T11:56:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_pcbezerra.pdf: 1286604 bytes, checksum: c04ee26489d55c0929503662313adcc7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-23T11:56:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_pcbezerra.pdf: 1286604 bytes, checksum: c04ee26489d55c0929503662313adcc7 (MD5) Previous issue date: 2015-04-30 / BACKGROUND: Gastroesophageal reflux disease (GERD) is caused by the presence of gastric contents in the esophagus lumen, its etiology and pathogenesis is multifactorial, but depend on the integrity of the antireflux barrier at the junction gastric esophagus, composed of the lower esophageal sphincter and crural diaphragm. Like all skeletal muscles, the diaphragm can improve performance in response to training. Changes in cardiovascular autonomic function frequently associated with alterations of motility and sensitivity of the digestive system. The heart rate variability has been used as a resource for the measurement of the activity of the autonomic nervous system. OBJECTIVE: To evaluate the effect of inspiratory muscle training in acid exposure and heart rate variability in patients with reflux esophagitis. METHODS: This is a study a randomized, experimental and interventionist in humans. Held at the University Hospital Walter Cantídio (HUWC) with holders of erosive esophagitis, which were randomly divided into two groups: the no-load training group (NLT) and group training load (LT). The volunteers did inspiratory muscle training (IMT) three times per week, for 8 weeks. We evaluated symptoms of reflux, MIP, acid exposure of the esophagus by pH monitoring and the components of heart rate variability (HRV) in the time domain (SDNN, rMSSD, pNN50) and in the frequency domain (VLF, LF, HF) by electrocardiogram . Data were statistically analyzed by SigmaPlot, version 11.0 and the program GraphPad PRISM ® 6.0 RESULTS: 32 volunteers; the NLT group of 15 volunteers, seven men (46.7%) and 8 women (53.3%) aged 22-57 years, mean of 40.46 ± 10.30 years; the LT group of 17 volunteers and 4 men (23.5%) and 13 women (76.5%) aged 25-57, average of 43.41 ± 9.59 years. In CBT decreased the frequency and intensity of heartburn (p = <0.001) reduction of regurgitation frequency (p = 0.005) increase in MIP (p = <0.001) decrease the number of progressing to reflux proximal channel (p = 0.011), but did not change the acid exposure of the distal esophagus; variability in heart rate, VLF component increased (p = 0.028) and HF component is inversely correlated with the number of reflux had progression to proximal channel (r = -0.484; p = 0.047). In TSC group showed decrease in the frequency of heartburn (p = 0.039) and reduced the number of lying reflux (p = 0.013). CONCLUSION: IMT, with pressure linear load decreased the frequency and intensity of symptoms of GERD, increased MIP, reduced the number of proximal reflux, which correlated with improved autonomic function. / INTRODUÇÃO: A doença do refluxo gastroesofágico (DRGE) é ocasionada pela presença do conteúdo gástrico na luz esofágica, Sua etiologia e patogenia são multifatoriais, porém dependem da integridade da barreira antirrefluxo na junção esôfago gástrica, composta pelo esfíncter esofágico inferior e o diafragma crural. A exemplo de todos os músculos esqueléticos, o diafragma pode melhorar sua performance em resposta a um treinamento. Alterações da função autonômica cardiovascular frequentemente se associam com alterações de motilidade e de sensibilidade do sistema digestivo. A variabilidade da frequência cardíaca tem sido empregada como recurso para a mensuração da atividade do sistema nervoso autônomo. OBJETIVO: Avaliar o efeito do treinamento muscular inspiratório na exposição ácida e na variabilidade da frequência cardíaca em indivíduos com esofagite de refluxo. MÉTODOS: Trata-se de um estudo do tipo randomizado, experimental e intervencionista em humanos. Realizado no Hospital Universitário Walter Cantídio (HUWC), com portadores de esofagite erosiva, os quais foram randomizados e distribuídos em dois grupos: o grupo treinamento sem carga (TSC) e grupo treinamento com carga (TCC). Os voluntários fizeram treinamento muscular inspiratório (TMI), 3 vezes por semana, durante 8 semanas. Foram avaliados sintomas do refluxo, PImáx, exposição ácida do esôfago pela pHmetria e os componentes da variabilidade da frequência cardíaca (VFC) no domínio do tempo (SDNN, rMSSD, pNN50) e no domínio da frequência (VLF, LF, HF) pelo eletrocardiograma. Os dados obtidos foram analisados estatisticamente pelo programa SigmaPlot, versão 11.0 e pelo programa GraphPad Prism® 6.0 RESULTADOS: 32 voluntários; o grupo TSC formado por 15 voluntários, 7 homens (46,7%) e 8 mulheres (53,3%) com idade variando de 22 – 57 anos, média de 40,46±10,30 anos; o grupo TCC composto por 17 voluntários sendo 4 homens (23,5%) e 13 mulheres (76,5%) com idade variando de 25 – 57, média de 43,41± 9,59 anos. No grupo TCC houve redução da frequência e intensidade da pirose (p=<0,001), redução da frequência de regurgitação (p=0,005), aumento da PImáx (p=<0,001), diminuição do número de refluxos com progressão para o canal proximal (p=0,011), mas não modificou a exposição ácida do esôfago distal; na variabilidade da frequência cardíaca, o componente VLF aumentou (p=0,028) e o componente HF se correlacionou inversamente com o número de refluxo que tiveram progressão para o canal proximal (r=-0,484; p=0,047). No grupo TSC houve diminuição da frequência da pirose (p=0,039) e redução do número de refluxo deitado (p=0,013). CONCLUSÃO: O TMI, com carga linear pressórica diminuiu a frequência e intensidade dos sintomas da DRGE, aumentou a Pimáx, reduziu o número de refluxo proximal, o que se correlacionou com melhoria da função autonômica.

SANTOS, A. A. Q. A. Papel do receptor P2x7 no efeito da toxina a do Clostridium difficile em modelo de alça ileal em camundongos. 2017. 100 f. Tese (Doutorado em Ciências Médicas) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-01-30T16:00:58Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_aaqasantos.pdf: 2658637 bytes, checksum: 8c134a5e88286c7d898fc1d1a091d893 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-01-30T16:01:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_tese_aaqasantos.pdf: 2658637 bytes, checksum: 8c134a5e88286c7d898fc1d1a091d893 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-30T16:01:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_tese_aaqasantos.pdf: 2658637 bytes, checksum: 8c134a5e88286c7d898fc1d1a091d893 (MD5) Previous issue date: 2017-01-16 / Clostridium difficile (C. difficile) is the major cause of colitis associated with the use of antibiotics, with significant morbidity and mortality. The enteric nervous system (ENS) is located in the gastrointestinal tract (GIT) and has an important function of regulating the digestive system. The P2X7 receptor participates in the regulation of cellular permeability, cytokine release and apoptosis, processes that are involved in the pathogenesis of C. difficile induced disease.The aim of this study was to analyze the role of the P2X7 receptor in enteritis induced by C. difficile toxin A (TcdA). The mouse ileal loop was injected with saline (Sodium Chloride 0.9% - Control) or TcdA (50 μg / loop) in mice previously treated with the inhibitors: BBG (50 mg/kg) or A438079 (10 μM) i.p.injection 1 h prior to TcdA (TcdA + BBG; TcdA + A438079) or saline injection. The animals were euthanized after 4h latter and the ileal loop collected for the following analyzes: immunofluorescence for ChAT, NOS, P2X7 and calretinin in membrane preparations, immunohistochemistry for GFAP, HuC / D, S-100β, TUNEL and PCR for P2X7. The results demonstrated that TcdA significantly reduced myenteric plexus neurons in 66.42% when compared to the control, while in the membrane preparations a significant reduction of the immunoreactive neurons to ChAT was observed in 23.21% and Calretinin 28.17%. However, there was a 21.23% increase in labeling for the P2X7 receptor over the control. In the ileal tissue there was an increase of 411.95% and 22.40% respectively in the P2X7 positive area and in the gene expression. In relation to the glial markers, an increase of 125.71% and 144.30% was observed for GFAP and S-100β, respectively. In animals treated with inhibitors P2X7; BBG and A438079, as observed an improvement in histological parameters . In addition , a significant reduction in the number of apoptotic cells decrease in GFAP and S-100β-labeled cells, and cytokines ( TNF-α, IL-1β, IL -6 and IL-8) levels, compared to the control. This was associated with a significant increase in the HuC/D positive area . From these results, it is concluded that TcdA promotes changes in the enteric nervous system, increasing neuronal death and activating glial cells, and that the P2X7 receptor plays an important role in the changes induced by C. difficile TcdA. / O Clostridium difficile (C. difficile) é a maior causa de colite associada ao uso de antibióticos, com significante morbidade e mortalidade. O sistema nervoso entérico (SNE) está localizado no trato gastrointestinal (TGI) e possui importante função de regulação do sistema digestório. O receptor P2X7 presente nas células gliais entéricas (CGE) e no SNE participa na regulação da permeabilidade celular, liberação de citocinas e apoptose, processos que estam envolvidos na patogênese do C. difficile. O objetivo deste estudo foi analisar o papel do receptor P2X7 na enterite induzida pela toxina A (TcdA) do C. difficile. A alça ileal dos camundongos foi injetada com salina (Cloreto de Sódio 0,9%- Controle) ou TcdA (50 μg/alça) em camundongos previamente tratados com os inibidores: BBG (50 mg/kg) ou A438079 (10 μM) via intraperitoneal 1h antes da injeção da TcdA ou salina. Os animais foram eutanaziados após 4h da injeção e a alça ileal coletada para as seguintes analises: imunofluorescência para ChAT, NOS, P2X7 e calretinina nos preparados de membrana, imunohistoquímica para GFAP, HuC/D, S-100β, TUNEL e PCR para P2X7. Os resultados demonstraram que a TcdA reduziu significativamente em 66,42% os neurônios do plexo mioentérico quando comparado ao controle, enquanto nos preparados de membrana observou-se uma redução significativa dos neurônios imunorreativos a ChAT em 23,21% e Calretinina 28,17%, contudo, houve um aumento de 21,23% da marcação para o receptor P2X7 em relação ao controle. No tecido ileal verificou-se um aumento de 411,95% e 22,40% respectivamente na área positiva para P2X7 e na expressão gênica. Em relação aos marcadores gliais, observou-se um aumento de 125,71% e 144,30% para GFAP e S-100β, respectivamente. Nos animais tratados com os inibidores de P2X7: BBG e o A438079 observou-se uma melhora dos parâmetros histológicos, uma redução significativa do número de células apoptóticas, das células marcadas para GFAP e S-100β, das citocinas: TNF-α, IL-1β, IL-6 e IL-8 com relação ao controle e um aumento significativo na área positiva para HuC/D em relação a TcdA. A partir desses resultados, concluiu-se que a TcdA promoveu alterações no sistema nervoso entérico, aumentando a morte neuronal e ativando as células da glia, e que o receptor P2X7 tem participação importante nas alterações induzidas pela TcdA do C. difficile.