The mammalian central nervous system maintains a delicate balance between neuronal excitation and inhibition. Conventional synaptic inhibition is mediated through the transient activity of postsynaptic γ-aminobutyric acid (GABA) at type A GABA (GABAA) receptors. A subset of GABAA receptors is also located outside of inhibitory synapses. These extrasynaptic receptors generate a tonic inhibitory conductance in response to low concentrations of extracellular GABA. Tonic inhibition broadly suppresses neuronal activity and regulates many vital processes such as sleep, consciousness and memory formation. This thesis examines the physiological effects of tonic inhibition at the cellular level and in the behaving animal. This thesis also explores whether gabapentin, a commonly used sedative, anxiolytic, and analgesic drug, enhances tonic GABAergic inhibition. I hypothesize that: (1) tonic GABAA receptor activity reduces the intrinsic excitability of neurons; (2) the activity of tonically active GABAA receptors in spinal pain pathways attenuates nociception; and (3) tonic inhibition can be upregulated by gabapentin. The results show that a tonic inhibitory current generated by α5 subunit-containing GABAA (α5GABAA) receptors reduces the excitability of hippocampal pyramidal neurons excitability by increasing the rheobase, but does not change the gain of action potential firing. A similar shunting inhibition is present in spinal cord lamina II neurons that is generated by δ subunit-containing GABAA receptors. The activity of these receptors in spinal nociceptive pathways reduces acute thermal nociception and may constrain central sensitization in a behavioural model of persistent pain. Finally, gabapentin increases a tonic inhibitory current in cultured hippocampal neurons independent from changes in the expression of α5GABAA receptors or in the concentration of GABAA receptor ligands. The results of this thesis demonstrate that tonically active GABAA receptors play an important role in the regulation of neuronal activity and nociception, and that tonic inhibition represents a novel target of therapeutic drugs.

Transient receptor potential vanilloid 3 receptor channel (TRPV3) is a thermosensitive ion channel expressed in skin keratinocytes. There, in a molecular complex with the epidermal growth factor receptor (EGFR) contributes to proliferation and terminal differentiation of keratinocytes, temperature detection, pain and pruritus. TRPV3 is activated by a number of exogenous compounds, such as carvacrol from oregano, thymol from thyme and eugenol from clove. Its unique feature is sensitization, TRPV3 channel activity successively increases upon repeated stimulation. The molecular basis of this process is not yet understood. One of the considered possibility is a direct phosphorylation of TRPV3 protein through signaling pathways involving EGFR and mitogen-activated protein kinase MAPK1 / MAPK3 (also called ERK2 / ERK1). In this thesis we investigated whether sensitization of TRPV3 which is expressed in a human cell line immortalized keratinocytes could be influenced by mutations on the predicted consensual phosphorylation sites for MAPK1 / MAPK3. We used electrophysiological patch-clamp technique and tested eight mutants, in which was threonine or serine replaced with aspartic acid mimicking phosphorylation. We identified six residues where the mutations influenced at least one of the functional...

Modulation of nociceptive synaptic transmission in the spinal cord dorsal horn is a significant mechanism in the development and maintenance of different pathological pain states. Accumulating evidence indicates that the TRPV1 (transient receptor potential vanilloid 1) receptor and chemokine CCL2 (C-C motif ligand 2) may play a critical role in this process. The aim of this diploma thesis was to investigate the CCL2 induced modulation of nociceptive synaptic transmission in the dorsal horn of spinal cord and the role of the TRPV1 receptors. To investigate this aim patch-clamp recordings of spontaneous and miniature excitatory postsynaptic currents (sEPSC, mEPSC) from superficial dorsal horn neurons in acute rat lumbar spinal cord slices were used. After acute application of CCL2 on the slice preparation from naïve animals, a frequency increase of both sEPSC and mEPSC was present. This CCL2 induced increase in both sEPSC and mEPSC frequency was prevented by the TRPV1 receptor antagonist SB366791 application. No changes were observed in the amplitudes of sEPSC or mEPSC after application of the CCL2, SB366791, or co-application of CCL2 and SB366791. This suggests that the observed changes were mediated predominantly by presynaptic mechanisms. The preliminary results indicate that after chronic constriction...

Antiinflamatórios podem diminuir a movimentação dentária (MD) em pacientes ortodônticos, fato este que leva à existência de poucas alternativas terapêuticas para o tratamento da dor. Acetaminofeno tem sido a medicação de escolha, mas não é tolerado por alguns pacientes. Este trabalho pesquisou a influência do celecoxib e do acetaminofeno na separação ortodôntica dos incisivos centrais superiores de ratos, assim como na ativação de estruturas relacionadas à nocicepção no núcleo espinhal do trigêmio, por meio da expressão de c-fos nos subnúcleos caudalis, interpolaris e oralis. Num primeiro momento, o peso do animal e a força ortodôntica foram variados, quando foi possível encontrar o relacionamento ideal entre estas duas variáveis, o qual permitiu movimentação dentária sem expansão da sutura palatina mediana. A aplicação de 35 g de força em animais de 400 g de peso distalizou os incisivos sem expandir a sutura palatina mediana, como pôde ser verificado em radiografias da maxila dos animais. Sendo assim, trinta ratos Wistar, machos, pesando cerca de 400 g, foram pré-tratados através de sonda gástrica (1 ml) com acetaminofeno (80mg/ml), celecoxib (20mg/ml) ou veículo (carboximetilcelulose 0,4%). Após 30 minutos, foram submetidos à movimentação dentária (35 g de força) ou deixados como controles. Ração moída foi fornecida e a cada 12 horas eles receberam, na mesma dosagem anterior, um dos medicamentos ou veículo. Depois de 48 horas, foram novamente anestesiados, fotografados e perfundidos com paraformaldeído 4%. Na seqüência, a maxilla foi radiografada e os cérebros removidos e processados para a imunohistoquímica para c-fos. A movimentação dentária induziu a distalização dos incisivos (p< 0.05), mas a distância inter-incisal não foi modificada pelos medicamentos. Adicionalmente, a movimentação dentária e o tratamento com as drogas não causaram qualquer alteração no número de neurônios Fos positivos nos subnúcleos interpolaris e oralis. No subnúcleo caudalis, entretanto, as duas drogas reduziram o número de neurônios Fos positivos devidos ao estímulo ortodôntico (p<0,05). Concluímos que os dois medicamentos reduzem a ativação neuronal de região nociceptiva e não afetam a movimentação dentária, sendo que o celecoxib seria uma possível alternativa ao acetaminofeno para o alívio de dor em pacientes ortodônticos, nos casos em que este for contra indicado. / Anti-inflammatory drugs may slow dental movement in orthodontic patients, which leads to low therapeutic alternatives for pain control. Acetaminophen has been the first choice medication for the majority of patients, but it is not well tolerate for some. This work evaluated the influence of celecoxib and acetaminophen in the orthodontic separation of superior central incisor of rats, such as in the activation of nociceptive related structures in the spinal trigeminal nucleus, using c-fos expression in caudalis, interpolaris, and oralis sub nuclei. In a first moment, animal weigh and orthodontic force were varied, when it was possible to find the ideal relationship between these two variables, resulting in dental movement without median palate suture expansion. The application of 35 g of orthodontic force in animals weighing 400 g has been establish as the ideal experimental model, and this way, 30 male Wistar rats were pre-treated, by oral gavage (1 ml), with acetaminophen (80 mg/ml), celecoxib (20 mg/ml), or vehicle (carboxymethylcellulose 0,4%), and 30 minutes later, they were submitted or not to orthodontic stimulus. Animals received ground food, and one of the drugs or vehicle, every 12 hours. After 48 hours from the dental manipulation, they were anesthetized, photographed, and perfused with 4% paraformaldehyde. In the sequence, maxila was radiographed and brains were removed and processed for FOS immunocytochemistry. Dental movement induced incisor distalization (p<0,05), but interincisal gap was not modified by the drugs. Furthermore, no changes were found in FOS positive neurons in oralis and interpolaris subnuclei, following tooth movement, independently of whether medications were given or not. In caudalis subnucleus, however, both analgesics reduced the number of tooth movement induced FOS positive neurons. We conclude that neither celecoxib nor acetaminophen seems to affect tooth movement, but both may reduce pain caused by orthodontic appliance. Celecoxib, thus, may be a therapeutic alternative to acetaminophen when the latter was counter indicated.

O presente estudo visou avaliar a influência da diabetes experimental no perfil nociceptivo orofacial de ratos. Foram utilizados 40 ratos Wistar, no qual 20 receberam injeção de estreptozotocina (STZ) para a indução da diabetes experimental (grupo diabetes), e 20 receberam solução de citrato de sódio (CS - grupo controle). Esses animais foram subdivididos em dois subgrupos de 10 ratos que apenas se diferenciaram com relação à substância que foi injetada no músculo masseter: solução salina isotônica (SI) [n=10: Cont-SI; n=10: Diab-SI] ou hipertônica (SH) [n=10: Cont-SH; n=10: Diab-SH]. Num primeiro momento foi feita a administração intraperitoneal de STZ ou CS e quatorze dias após, com os animais levemente anestesiados, foi realizada a injeção de 100 &#x3BC;L de solução SH-5% ou SI-0,9% na região média do músculo masseter esquerdo, numa profundidade de 5 mm e então foi quantificado, por dois minutos, o comportamento nociceptivo caracterizado pelo ato do rato sacudir/agitar a pata posterior ipsilateral o que é aceito como índice de nocicepção muscular. Uma hora após a avaliação comportamental nociceptiva, os ratos foram eutanasiados por sobredose de anestésico e o músculo masseter esquerdo foi retirado com auxílio de um bisturi circular; parte deste músculo foi utilizada para a análise da expressão de RNA para as citocinas pró inflamatórias [fator de necrose tumoral (TNF&#x3B1;), IL1&#x3B2;, IL6, ciclooxigenase 2 (COX-2)] e anti inflamatórias [IL- 2, IL- 10)] por meio da técnica de Reação em Cadeia da Polimerase quantitativa (qPCR); a parte restante foi corada pela técnica de hematoxilina-eosina e depois realizada a análise histopatológica descritiva em microscópio de luz. Foi observado um aumento significativo do comportamento nociceptivo nos ratos não diabéticos ou normoglicêmicos submetidos à injeção de SH (Cont-SH) em relação aos demais grupos que foram similares entre si. Na análise de citocinas, verificamos que o músculo masseter de ratos não diabéticos submetidos à injeção de SH (Cont-SH) apresentaram um aumento significativo da expressão relativa de TNF&#x3B1; em relação aos demais grupos que foram similares entre si; para a IL-1&#x3B2; também foi verificada um aumento da expressão relativa do grupo (Cont-SH) em relação aos grupos Cont-SI e Diab-SI, mas não em relação ao grupo Diab-SH e a IL-6 foi significativamente mais expressa no músculo masseter de ratos não diabéticos submetidos à injeção de SH em relação ao grupo Cont-SI, mas não foi diferente nos demais grupos. As demais citocinas avaliadas (COX-2, IL-2 e IL-10) não mostraram diferenças significativas entre os grupos. Na análise histopatológica não foram identificadas alterações significativas no tecido muscular, apenas um discreto infiltrado inflamatório no grupo Cont-SH. Diante dos resultados obtidos, podemos concluir que os ratos diabéticos apresentaram um reduzido comportamento nociceptivo, o que indica uma hiponocicepção química. / This study aimed to evaluate the influence of experimental diabetes in rats nociceptive orofacial profile. 40 Wistar rats were used, in which 20 received streptozotocin injection (STZ) to induce experimental diabetes (group), and 20 received sodium citrate solution (CS - control group). These animals were divided into two groups of 10 rats differed only with respect to the substance that has been injected into the masseter: isotonic saline (IS) [n = 10: Cont-IS; n = 10: Diab-IS] or hypertonic (HS) [n = 10: Cont-HS; n = 10: Diab-HS]. Initially was taken intraperitoneal administration of STZ or CS and fourteen days with lightly anesthetized animal, injection of 100 &#x3BC;L of 5% HS solution or 0.9% IS in the middle region of the left masseter muscle was performed at a depth of 5 mm and then was quantified for two minutes, the nociceptive behavior characterized by the rats act shake/agitating the ipsilateral hind paw which is accepted as muscle nociception index. One hour after the nociceptive behavioral evaluation, the rats were euthanized by overdose of anesthetic and the left masseter muscle was removed with the aid of a circular scalpel; part of this muscle was used for analysis of RNA expression for pro - inflammatory cytokines [tumor necrosis factor (TNF), IL1&#x3B2;, IL6, cyclooxygenase 2 (COX-2)], and anti - inflammatory [IL-2, IL - 10] by reaction technique of quantitative polymerase chain (qPCR); the remaining half was stained with hematoxylin-eosin and then conducted a descriptive histopathological analysis by light microscopy. It was observed a significant increase of nociceptive behavior in non-diabetic and normoglycemic rats with injection of HS (Cont-HS) compared to other groups that were similar to each other. In cytokine analysis, we find that the masseter muscle of non-diabetic rats with injection of (Cont-HS) showed a significant increase in TNF relative expression compared to the other groups that were similar to each other; for IL-1&#x3B2; was also found an increase of the group relative expression (Cont-HS) with respect to Cont-IS and Diab-IS groups, but not in relation to Diab-HS group and IL-6 was significantly expressed the masseter muscle of rats without diabetes underwent injection compared to Cont-IS group, but was not different in the other groups. On the evaluated cytokines (COX-2, IL-2 and IL-10) showed no significant differences between groups. Histologically significant changes were not found in muscle tissue, just a mild inflammatory infiltrate in the Cont-SH group. Based on these results, we conclude that the diabetic rats had a reduced nociceptive behavior, which indicates a chemical hyponociception.

A dor é um fenômeno multidimensional, que geralmente desencadeia reações emocionais desconfortáveis quando identificada. Sua relação com injúria tecidual pode ser interpretado como um mecanismo adaptativo de defesa à integridade do organismo, tendo em vista sua preservação evolutiva. Porém, o substrato neurobiológico do organismo parece determinar a complexificação do repertório comportamental em diferentes espécies. Nesse sentido, o córtex cingulado anterior (CCA) tem sido amplamente descrito em mamíferos modulando diferentes aspectos da dor. O presente trabalho utilizou os testes algesimétricos de vocalização e da formalina em cobaias, para se avaliar o decurso temporal do efeito da microinjeção de agonistas e antagonistas GABAérgico (muscimol e bicuculina); colinérgico (carbacol e atropina) e opioidérgico (morfina e naloxona). A microinjeção de bicuculina (1 nmol / 0,2 µl) exacerbou as respostas nociceptivas em ambos os testes, porém diferentes doses de muscimol (0,5, 1 e 2 nmol / 0,2 µl), não modificaram as respostas. O efeito da bicuculina foi bloqueado em ambos os testes pela microinjeção prévia de muscimol (1 nmol/ 0,2 µl) no CCA. A microinjeção de carbacol (2,7 nmol /0,2 µl) neste substrato promoveu antinocicepção, evidenciada por meio da atenuação da amplitude das vocalizações, mas não pelo teste da formalina. Esse efeito foi bloqueado pela administração prévia de atropina (0,7 nmol /0,2 µl) e de naloxona (2,7 nmol /0,2 µl). A microinjeção de morfina (4,4 nmol /0,2 µl) promoveu antinocicepção em ambos os testes. Concluímos que a inibição do tônus GABAérgico no CCA exacerba os comportamentos nociceptivos e que a antinocicepção promovida por carbacol pode ter sido mediada pelo sistema de opióides endógenos, tendo em 9 vista o bloqueio do seu efeito com naloxona. Além disso, a estimulação opióide promove uma contundente antinocicepção. / Pain is a multidimensional phenomenon which usually triggers uncomfortable emotional reactions when identified. Its relation injury can be interpreted as an adaptive mechanism to defend the integrity of the body given its evolutionary conservation. However the neurobiological substrate of the body seems to determine the complexification of behavioral repertoire in different species. Thus, the anterior cingulated cortex (ACC) has been widely described in mammals by modulating different cognitive aspects of pain. This study used algesimetric tests of vocalization and formalin in guinea pigs to evaluate the time course of the effect of microinjection of GABA agonists and antagonists (bicuculline and muscimol) and cholinergic (carbachol and atropine) beyond the opioid antagonist naloxone. The microinjection of bicuculline (1 nmol / 0,2 µl) exacerbated the nociceptive behavior in both tests but different doses of muscimol (0,5; 1 e 2 nmol / 0,2 µl) did not change the responses. The effect of bicuculline was blocked in both tests by prior microinjection of muscimol (1 nmol / 0,2 µl) in the ACC. The microinjection of carbachol (2,7 nmol / 0,2 µl) on this substrate promoted antinociception as evidenced by attenuation of the amplitude of the vocalizations, but not by the formalin test. This effect was blocked by prior administration of atropine (0,7 / 0,2 µl) and naloxone (0,7 nmol / 0, 2 µl). The microinjection of morphine (4,4 nmol / 0,2 µl) promoted antinociception in both tests. We conclude that inhibition of GABAergic tone in the ACC exacerbates nociceptive behaviors and that the antinociception promoted by carbachol may 11 have been mediated by endogenous opioid system in order blocking its effect with naloxone. In addition opioid stimulation promotes a striking antinociception.

Lychnophora (Vernonieae: Asteraceae) é um gênero micro-endêmico dos \"campus rupestris\" do bioma Cerrado. Os extratos foliares de Lychnophora ericoides (\"Arnica-da-serra\") são usados na terapêutica popular principalmente como analgésico. Seus óleos essenciais são quimicamente ricos em sesquiterpenos. Tais compostos, principalmente os de esqueletos bisabolano e cadinano são produtos biossintéticos do precursor cátion nerolidila. Óleos essenciais de folhas de L. ericoides são bioativos frente a invertebrados do Táxon Acari. Um de seus componentes majoritários, o orto-acetoxi bisabolol, é antinociceptivo em ensaios in vitro. Terpenos são valorizados pela indústria de química fina, haja vista sucessos como Taxol® e Acheflan®. Nossos objetivos em Fitoquímica e Ciências Farmacêuticas se alinham a esse interesse. As terpeno-sintases (TerpS) envolvidas na biossínteses dos compostos são ainda alvo de pesquisas com em Bioquímica. Sua identificação é frequentemente conclusiva em diversos aspectos. Como exemplo, citamos a compreensão dos mecanismos da variabilidade metabólica temporal em espécies nativas e selvagens e os avanços na bioengenharia de Produtos Naturais (PN). Frente a este cenário de fronteira este manuscrito traz um resumo da investigação que objetivou determinar se há diversas isoformas de TerpS operando na produção temporalmente variável de sesquiterpenos bioativos em tecidos foliares de Lychnophora ericoides ou se não as há. Acessamos diferentes amostras selvagens de L. ericoides in situ. Nossos esforços em responder a questão supracitada foram divididos em tarefas, a seguir: (1) Determinação da fração rica em sesquiterpenos inspirada na \"Química Analítica Verde\"; (2) MALDI imaging das proteínas das folhas; (3) Estratégia \"omics\" combinada na identificação e clonagem das TerpS. Visitamos campos de ocorrência (CampO) georreferenciados bem como desconhecidos. O desenvolvimento de método de quantificação por Headspace-SPME permitiu uma comparação rápida e livre de solventes de amostras vegetais mínimas (10 mg). A separação e identificação foi conduzida por Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS). As amostras de Diamantina, CampO mais Boreal de todos, apresentam a maior quantidade de derivados bisabolano. A hidrodestilação do material vegetal excedente ao HS-SPME forneceu óleos essenciais para o isolamento de moléculas. Dados espectrais diversos fundamentam a descrição de um derivado cadinano, o 11-dehidro cadinol, entre outros. O MALDI imaging determinou como exequível a geração de imagens moleculares em folhas de L. ericoides. Foram geradas imagens subepidermais dos íons com m/z que se assemelham a cadinano e bisabolano synthases (CadS and BS). A limitação do emprego da técnica é a determinação previa da massa nominal da proteína nativa. Polyacrylamide Gel Electrophoresis (1D-PAGE) gerou mapas de proteínas separadas por tamanho (A, B, C, e D) (30KDa> m/z <80KDa). A digestão com tripsina das bandas geraram peptídeos para análise em MS. Íons resultantes alimentaram o algorítimo MASCOT. Uma isoforma de germacrano-sintase foi identificada. Prospecção de genes codificadores com o cDNA (Ubiquitina +) determinou uma BS, de comprimento 1600pb, amplificada com primers de design para genes de Helianthus spp. A BS de L. ericoides foi clonada. Concluindo, destacamos dois pontos. (1) O controle enzimático na produção dos sesquiterpenos poderá enfim ser averiguada a nível do transcriptoma. (2) A busca pela produção biotecnológica de PN sofreu um pequeno incremento. Esperamos ter contribuído humildemente na produção sustentável de PN e por conseguinte na preservação da biodiversidade. / Lychnophora (Vernonieae: Asteraceae) is micro endemic to \"campus rupestris\" from Brazilian \"Cerrado\". Leaves extracts of Lychnophora ericoides (\"Arnica-da-serra\") are used as folk medicine and mainly as wound healer. Its essential oils were chemically profiled as sesquiterpene-rich. Such sesquiterpenes, both bisabolene-like and cadinane-like carbon skeletons, are derivatives of the nerolidyl cation. L. ericoides leaves essential oils are bioactive against invertebrate Acari. An anti-hypernociceptive ability of its component orto-acetoxy bisabolol was also displayed in vitro. Terpenes are valuable in fine chemistry industry, e.g. Taxol® and Acheflan®. Our phytochemical and pharmaceutical goals are aligned to such an interest. Terpene synthases (TerpS) behind their biosynthesis are target of researches in plant sciences and biochemistry. Identification of TerpS often led to conclusions with diverse impacts. Fundamental concepts on time-dependent shifts of terpene productions in wild type species and advances towards plant metabolites bioengineering are examples. Facing such a frontier field we share here an abstract for the investigation aimed to determine whether there were many isoforms of sesquiterpene synthases operating at leaves tissues in Lychnophora ericoides shift-able production of bioactive sesquiterpenes or whether there were not. We have accessed different in situ samples of L. ericoides. Efforts to answer the above question were sectioned as follows: (1) \"Green-Analytical-Chemistry\" oriented profiling of sesquiterpene-rich fraction; (2) MALDI imaging of proteins in leaves; (3) Combined \"omics\" approaches towards identifying TerpS and gene cloning. We visited both known and novel L. ericoides sites of occurrence (SoO). The development of a quantitative Headspace-Solid Phase Micro Extraction (HS-SPME) method enabled a rapid and solvent-free comparison of minimized samples (10mg). Separation and identification were carried out using Gas Chromatography-Mass Spectrometry (GC-MS). Samples harvested in Diamantina, Northern Most SoO, accumulate the highest amount of bisabolene-like derivatives. Hydrodistillation of leftovers material from HS-SPME yield essential oils used to purify unknown compounds. Based on a diverse spectra collection we report a novel cadinane-like derivative, one 11dehydro Cadinol. MALDI imaging has been determined as suitable for imaging proteins in L. ericoides. In a prospective fashion we generate sub-epidermal images of ions within the m/z frame comprising reported isoforms of both cadinane and bisabolane synthases (CadS and BS). The limitation to its use is the awareness of molecular weight of targeted native proteins. Polyacrylamide Gel Electrophoresis (1D-PAGE) protein mapping determined broad bands of protein distribution in different mass ranges (A, B, C, and D) (30KDa> m/z <80KDa). Bands tryptic digestion, followed by sample clean up, generated peptide pools feasible for MS. The output ions data feed MASCOT algorithm. A germacrane synthase could have been identified. When prospecting encoding genes, viable cDNA (Ubiquitin +) was used. A BS, lengthened 1600bp, was amplified with BS primers designed for Helianthus spp. genes. BS presented in L. ericoides was successfully cloned. In conclusion we headline two topics. (1) Hypothetical enzymatic control of the sesquiterpenes production can now be further investigated at transcriptome level. (2) The seek of a platform that guarantee natural products production in a controlled system has been moved forward. Future production of valued compounds can slightly rely in our humble contribution to support biodiversity conservation.

BASE TEÓRICA: O alívio da dor é um direito do ser humano. Entretanto, atualmente a dor ainda é subidentificada e subtratada nas unidades de terapia Intensiva (UTI). O consenso para manejo de dor em pacientes adultos de UTI recomenda a avaliação rotineira de dor em todos os pacientes internados. O padrão-ouro para avaliação de dor, é o autorrelato de dor. Entretanto diversos pacientes internados em UTI não conseguem reportar verbalmente a dor, por variados motivos entre eles podemos destacar o uso de ventilação mecânica ou distúrbios de consciência. Nestes casos é recomendada a avaliação de dor através de instrumentos comportamentais. Segundo consenso são recomendados o uso das escalas Behavioral Pain Scale (BPS) ou o Critical-Care Pain Observation Tool (CPOT), instrumentos estes que até o presente ainda não encontravam-se validados para uso no Brasil. Em suma CPOT e BPS são instrumentos compostos por 4 categorias de comportamentos de dor: expressão facial, movimentos corporais, simetria com a ventilação mecânica (paciente entubado) ou vocalização (paciente extubado) e tensão muscular. Nos estudos prévios, durante o processo de desenvolvimento e validação de ambas as escalas, a validade discriminante foi testada somente por meio de procedimentos dolorosos, procedimentos estes que podem ter efeitos fisiológicos secundários como tosse e assincronia com o ventilador. Dependendo do contexto estes comportamentos podem facilmente ser confundidos com comportamentos de dor. Assim mostra-se a importância em verificar a validade discriminante de ambas as escalas com uso de estímulo específico de vias nociceptivas de dor, como a algometria de pressão. OBJETIVOS: Traduzir, adaptar e validar as escalas CPOT e BPS para uso no Brasil. Secundariamente verificar as variáveis que predizem a pontuação das escalas CPOT e BPS após estímulo nociceptivo padronizado (por meio da algometria de pressão). MÉTODO: Estudo de coorte prospectivo, realizado em um hospital universitário da região Sul do Brasil. O processo de tradução consistiu da tradução da versão original do inglês para o português, síntese da tradução e novamente tradução (back translation) para o inglês, e após a avaliação das versões por um comitê de juízes. Duas enfermeiras treinadas para avaliação dos pacientes por meios das escalas CPOT e BPS versão para uso no Brasil, realizaram as seguintes avaliações: a) durante repouso, b) após estímulo nociceptivo padrão com uso da algometria de pressão (ENPAP) com pressão máxima de 14 kgf/cm2, c) durante mudança de decúbito, d) 15 minutos após mudança de decúbito. RESULTADOS: Foram triados 1019 pacientes, 844 excluídos por não preencherem os critérios de inclusão, 175 incluídos para avaliação e 7 excluídos durante o protocolo por necessidade de uso endovenosos de sedativo ou analgésico. O total de 168 pacientes clínico-cirúrgicos adultos e não comunicativos verbalmente internados em UTI foram incluídos no estudo. Confiabilidade interobservador de ambas escalas, durante todas as avaliações foi suportado por Kappa >0,7 entre as 2 enfermeiras, cegadas uma para a avaliação da outra. Validade discriminante suportada por pontuação maior das escalas CPOT e BPS durante ENPAP e mudança de decúbito quando comparadas ao repouso (p<0,001). Análise adicional foi realizada para verificar variáveis á predizer o escore das escalas CPOT e BPS, e foi verificado que a pontuação da Escala de Coma de Glasgow (Glasgow) é um preditor de ambas escalas, mostrando que quanto maior a pontuação do Glasgow maior a pontuação nas escalas CPOT e BPS. CONCLUSÃO: As versões para uso no Brasil das escalas CPOT e BPS mostraram boa confiabilidade e validade para uso em pacientes não comunicativos verbalmente internados nas UTIs do Brasil. Algometria de pressão, um método de estimulação específico das vias nociceptivas de dor parece ser um estímulo padronizado que melhora a avaliação da acurácia das escalas CPOT e BPS. Da mesma forma, mostra-se de importância a realização de estudos adicionais para verificar os benefícios do uso concomitante da escala de Glasgow com o CPOT e BPS, principalmente com vistas a diferenciação de pontos de corte das escalas CPOT e BPS considerando as diferenças no nível de consciência. / BACKGROUND: Pain relief is a Human right. However, currently unrelieved pain is very common in Intensive Care Unit (ICU) patients. The clinical practice guidelines for the management of pain in adult ICU patients recommends that pain be routinely monitored in all patients. The gold standard to evaluate pain is the self-reporting of pain. However, in the ICU a lot of patients cannot report their pain, because of mechanical ventilation and disturbances in consciousness. In these cases, pain assessment is recommend with the use of behavioral pain tolls. The guideline recommends the use of the Behavioral Pain Scale (BPS) or the Critical-Care Pain Observation Tool (CPOT), but there is a lack of translating and validating studies to use CPOT and BPS in Brazilian settings. In brief, CPOT and BPS are composed of 4 categories of distinct pain behaviors: facial expressions, body movements, synchrony with the ventilator (intubated patients) or vocalization (extubated patients) and muscle tension. The discriminant validity of both tools was tested with painful procedures, these procedures can induce other secondary physiological effects, such as coughing and asynchrony with the ventilator. Depending on the context these behaviors can easily be confused with pain behaviors. Thus, it is important to verify the discriminant validity of both scales with the use of specific stimuli of nociceptive pain pathways, such as pressure algometry. OBJECTIVE: Translate, culturally adapt, and validate a Brazilian Portuguese version of the CPOT and BPS. Secondarily to verify the variables that predict the scoring of the CPOT and BPS scales after standardized nociceptive stimuli (through pressure algometry). METHODS: A prospective cohort study, in a University hospital in the South of Brazil. The translation process consisted of an initial translation into Brazilian Portuguese, translation synthesis, back-translation into English, then an evaluation by a committee of experts. Two trained nurses used the CPOT and the BPS Brazilian Portuguese versions for the following assessments: a) rest at baseline, b) after standardized nociceptive stimulation by pressure algometry (SNSPA) with a maximum pressure of 14 kgf/cm2, c) during change of position and d) 15 minutes after change of position . RESULTS: A total of 1019 ICU patients were screened, 844 excluded, 175 patients included for assessment, seven excluded during protocol because of the requirement IV infusion of analgesic or sedative agents, and 168 medical-surgical adult non-verbal communicative intensive care unit patients were included in data analysis. Inter-rater reliability of CPOT and BPS scores during all assessments was supported by high weighted Kappa > 0.7 for all assessments between the two nurses blinded of each other’s scores. Discriminant validation was supported with higher CPOT and BPS scores during SNSPA or change of position in comparison to rest (p<0.001). An additional analysis was carried out to predict CPOT and BPS scores, and it was seen that the Glasgow Coma Scale (GCS) was a significant predictor of both tools, as a result than higher GCS, higher were the CPOT and BPS scores. CONCLUSION: The use of the CPOT and BPS Brazilian versions showed good reliability and validity in non-verbal critically ill patients in Brazil. Pressure algometry, a specific nociceptive way of stimulation appears to be a standardized approach to improve the measurement of the accuracy of the CPOT and the BPS. Similarly, it is important to carry out studies to verify the benefits of concomitant use of the GCS with the CPOT and BPS scale, especially with a view to differentiating cut-off points of the CPOT and BPS scales for different levels of consciousness.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A planta Calotropis procera, pertencente à famÃlia Apocinaceae, tem como uma de suas principais caracterÃsticas a produÃÃo constitutiva de lÃtex. Este fluido à amplamente utilizado na medicina popular, principalmente da Ãndia, por apresentar diversas propriedades curativas. Na literatura, o produto da extraÃÃo do lÃtex Ãntegro com solvente aquoso e/ou orgÃnico desta planta à citado por apresentar atividade antinociceptiva e antiinflamatÃria. Por outro lado, a mesma preparaÃÃo do lÃtex tambÃm à relatada por induzir processos inflamatÃrios. O presente trabalho teve como objetivo fracionar o lÃtex da planta Calotropis procera para separar as atividades prÃ- e antiinflamatÃria; caracterizar estes mecanismos e avanÃar na identificaÃÃo das molÃculas envolvidas na atividade antiinflamatÃria e antinociceptiva. O lÃtex coletado em Ãgua destilada (1:1; v/v) foi submetido Ãs etapas de centrifugaÃÃo e diÃlise e trÃs fraÃÃes foram obtidas (FD, PL e B) e inicialmente avaliadas quanto à presenÃa de atividade prÃ- e antiinflamatÃria, utilizando o modelo de peritonite em ratos. A fraÃÃo FD, rica em compostos de massa molecular inferior a 8.000 Da, nÃo se mostrou antiinflamatÃria quando administrada por via endovenosa nos animais. Por outro lado, uma forte atividade prÃ-inflamatÃria foi observada quando esta foi injetada na cavidade peritoneal de ratos. A resposta inflamatÃria induzida por FD foi dependente de tempo e dose e parece estar relacionada com a presenÃa de peptÃdeos detectados na fraÃÃo, jà que esta atividade foi diminuÃda quando a fraÃÃo foi tratada com pronase durante 24 horas antes de sua administraÃÃo nos ratos. A inflamaÃÃo induzida por FD foi inibida por Dexametasona, Talidomida e Meclizina sugerindo um processo inflamatÃrio induzido por vias de liberaÃÃo de histamina e TNF-&#945;. A fraÃÃo PL, rica em proteÃnas, e a fraÃÃo borracha (B) nÃo foram prÃ-inflamatÃrias e apresentaram forte atividade antiinflamatÃria por via endovenosa. A atividade promovida por B parece estar relacionada à presenÃa de proteÃnas pertencentes à fraÃÃo PL, como observado em ensaio de detecÃÃo imunolÃgica. PL inibiu o processo inflamatÃrio induzido por FD. A atividade antiinflamatÃria promovida pela fraÃÃo PL parece ser um evento promovido pela aÃÃo de proteÃnas, visto que a atividade antiinflamatÃria da fraÃÃo foi perdida apÃs aquecimento ou tratamento com pronase, e permaneceu ativa apÃs precipitaÃÃo com acetona. TrÃs novas sub-fraÃÃes (PI, PII e PIII) foram obtidas apÃs aplicaÃÃo da fraÃÃo PL em coluna de troca iÃnica (CM-Sepharose Fast Flow) em pH 5,0. As sub-fraÃÃes, distintas entre si, como observado atravÃs de eletroforese em gel de poliacrilamida, foram igualmente capazes de reverter a inflamaÃÃo induzida por carragenina no modelo de peritonite em ratos, bem como reduzir as contorÃÃes abdominais induzidas por Ãcido acÃtico, evidenciando o envolvimento de mÃltiplas proteÃnas na resposta antiinflamatÃria e antinociceptiva produzida pela fraÃÃo PL. Ensaio de microscopia intravital revelou que PI, PII e PIII inibem o rolamento e a adesÃo leucocitÃria no mesentÃrio de camundongos. Somente PI induziu intensa produÃÃo de Ãxido nÃtrico em ratos alÃm de ter sido a Ãnica sub-fraÃÃo capaz de reverter a resposta prÃ-inflamatÃria promovida pela fraÃÃo FD, evidenciando diferentes mecanismos antiinflamatÃrios promovidos por diferentes proteÃnas do lÃtex. A atividade antiinflamatÃria nÃo foi observada quando a fraÃÃo PL foi administrada por via oral nos animais. Este à o primeiro trabalho que confirma a presenÃa de duas atividades antagonistas no lÃtex de C. procera e que estas sÃo promovidas por molÃculas distintas passÃveis de serem separadas com base em seu tamanho molecular. O conjunto de resultados aqui apresentados mostra que a atividade antiinflamatÃria e antinociceptiva do lÃtex foram promovidas por molÃculas protÃicas / Latex is a general term used to describe fluid exudates from plants after mechanical injury. Latex from Calotropis procera is well known for its medicinal properties mainly in Indian traditional medicine. Moreover, it has been experimentally shown that it exhibits interesting biological activities such as anti-inflammation. However its latex has been reported to induce proinflammatory responses. In the present work, (1) the latex was fractionated to segregate pro- and anti-inflammatory activities; (2) assays were carried out to characterize the mechanism of action of active fractions and (3) attempts were done to identify molecules involved in anti-inflammatory and antinociceptive activities. First, the latex was collected in distilled water (1:1; v/v) and submitted to centrifugation and dialysis steps to obtain three different fractions (FD, PL and B). These fractions were evaluated to pro- and anti-inflammatory activities using peritonitis model in rats. FD, constituted by compounds with molecular mass lower than 8,000 Da, did not exhibited anti-inflammatory activity, however induced intense neutrophil migration into peritoneal cavity of rats. The inflammation induced by FD was time and dose dependent. Moreover, it was seen that previous injection of Dexamethasone, Thalidomide and Meclizine in animals inhibited FD inflammatory responses suggesting that inflammation triggered by this fraction occurs through histamine and TNF-&#945; release. Peptides, present in FD as shown in electrophoresis, should be involved in inflammation responses displayed by FD since such activity was diminished after 24 hour pronase treatment. Fractions PL, and B did not induce inflammatory response when injected into peritoneal cavity of animals, however intravenous injection displayed strong anti-inflammatory activity against inflammation induced by carrageenan. The anti-inflammatory activity promoted by B seems to be related to PL proteins present in B. PL fraction inhibited neutrophil migration trigged by FD. PL anti-inflammatory activity ought to be related to proteins since such activity was completely abolished after heat or pronase treatment and it still remained after acetone precipitation. Three protein sub-fractions (PI, PII and PIII) were recovered after PL chromatography on ion-exchange column (CM-Sepharose Fast flow) at pH 5.0. In spite of the fact that PI, PII e PIII were seen to be different by electrophoresis they were equally able to inhibit neutrophil migration induced by carrageenan in rats as well as abdominal writhes stimulated by acetic acid in mice. Intravital microscopy assay revealed that, PI, PII and PIII inhibit both leucocyte rolling and adhesion in mice mesenteric tissues. In addition, PI was able to induce nitric oxid production and inflammation induced by FD. These results show that multiples proteins in PL display anti-inflammatory activity and they act at different pathway of inflammation. Several experiments were performed aiming to detect the anti-inflammatory activity of PL when it was administered by oral route however, we did not obtain success. This is the first report which confirms the presence of pro- and anti-inflammatory activities and it shows that such activities are displayed by compounds suitable to be fractionated on the basis of their molecular size. In addition, these results show that anti-inflammatory and antinociceptive activities are displayed by proteins present in the latex

Antiinflamatórios podem diminuir a movimentação dentária (MD) em pacientes ortodônticos, fato este que leva à existência de poucas alternativas terapêuticas para o tratamento da dor. Acetaminofeno tem sido a medicação de escolha, mas não é tolerado por alguns pacientes. Este trabalho pesquisou a influência do celecoxib e do acetaminofeno na separação ortodôntica dos incisivos centrais superiores de ratos, assim como na ativação de estruturas relacionadas à nocicepção no núcleo espinhal do trigêmio, por meio da expressão de c-fos nos subnúcleos caudalis, interpolaris e oralis. Num primeiro momento, o peso do animal e a força ortodôntica foram variados, quando foi possível encontrar o relacionamento ideal entre estas duas variáveis, o qual permitiu movimentação dentária sem expansão da sutura palatina mediana. A aplicação de 35 g de força em animais de 400 g de peso distalizou os incisivos sem expandir a sutura palatina mediana, como pôde ser verificado em radiografias da maxila dos animais. Sendo assim, trinta ratos Wistar, machos, pesando cerca de 400 g, foram pré-tratados através de sonda gástrica (1 ml) com acetaminofeno (80mg/ml), celecoxib (20mg/ml) ou veículo (carboximetilcelulose 0,4%). Após 30 minutos, foram submetidos à movimentação dentária (35 g de força) ou deixados como controles. Ração moída foi fornecida e a cada 12 horas eles receberam, na mesma dosagem anterior, um dos medicamentos ou veículo. Depois de 48 horas, foram novamente anestesiados, fotografados e perfundidos com paraformaldeído 4%. Na seqüência, a maxilla foi radiografada e os cérebros removidos e processados para a imunohistoquímica para c-fos. A movimentação dentária induziu a distalização dos incisivos (p< 0.05), mas a distância inter-incisal não foi modificada pelos medicamentos. Adicionalmente, a movimentação dentária e o tratamento com as drogas não causaram qualquer alteração no número de neurônios Fos positivos nos subnúcleos interpolaris e oralis. No subnúcleo caudalis, entretanto, as duas drogas reduziram o número de neurônios Fos positivos devidos ao estímulo ortodôntico (p<0,05). Concluímos que os dois medicamentos reduzem a ativação neuronal de região nociceptiva e não afetam a movimentação dentária, sendo que o celecoxib seria uma possível alternativa ao acetaminofeno para o alívio de dor em pacientes ortodônticos, nos casos em que este for contra indicado. / Anti-inflammatory drugs may slow dental movement in orthodontic patients, which leads to low therapeutic alternatives for pain control. Acetaminophen has been the first choice medication for the majority of patients, but it is not well tolerate for some. This work evaluated the influence of celecoxib and acetaminophen in the orthodontic separation of superior central incisor of rats, such as in the activation of nociceptive related structures in the spinal trigeminal nucleus, using c-fos expression in caudalis, interpolaris, and oralis sub nuclei. In a first moment, animal weigh and orthodontic force were varied, when it was possible to find the ideal relationship between these two variables, resulting in dental movement without median palate suture expansion. The application of 35 g of orthodontic force in animals weighing 400 g has been establish as the ideal experimental model, and this way, 30 male Wistar rats were pre-treated, by oral gavage (1 ml), with acetaminophen (80 mg/ml), celecoxib (20 mg/ml), or vehicle (carboxymethylcellulose 0,4%), and 30 minutes later, they were submitted or not to orthodontic stimulus. Animals received ground food, and one of the drugs or vehicle, every 12 hours. After 48 hours from the dental manipulation, they were anesthetized, photographed, and perfused with 4% paraformaldehyde. In the sequence, maxila was radiographed and brains were removed and processed for FOS immunocytochemistry. Dental movement induced incisor distalization (p<0,05), but interincisal gap was not modified by the drugs. Furthermore, no changes were found in FOS positive neurons in oralis and interpolaris subnuclei, following tooth movement, independently of whether medications were given or not. In caudalis subnucleus, however, both analgesics reduced the number of tooth movement induced FOS positive neurons. We conclude that neither celecoxib nor acetaminophen seems to affect tooth movement, but both may reduce pain caused by orthodontic appliance. Celecoxib, thus, may be a therapeutic alternative to acetaminophen when the latter was counter indicated.