Le noyau est un organite caractéristique des cellules eucaryotes et les propriétés mécaniques de ce dernier jouent un rôle essentiel dans le comportement de la cellule, notamment sa motilité, sa polarité et sa survie. Le noyau est entouré par une enveloppe comprenant une membrane interne et une membrane externe, ainsi que de nombreuses protéines. Mes objectifs de thèse étaient de comprendre des mécanismes moléculaires déficients dans deux types de maladies génétiques causées par des mutations dans les lamines: la dystrophie musculaire d’Emery-Dreifuss et les syndromes de type progéroïde.Dans un premier temps, nous avons montré que l’émerine s’auto-associe in vitro et en cellules (Herrada et al. ACS Chem. Biol. 2015). J’ai ensuite étudié la structure des oligomères d’émerine, déterminé le fragment protéique minimal nécessaire à la formation de ces oligomères et décrit l’impact de mutations de l’émerine, causant une dystrophie musculaire d’Emery-Dreifuss, sur son auto-assemblage (Samson et al. Biomol NMR Assign. 2016 ; Samson et al. FEBS J. 2016). Puis, j’ai montré que seule cette forme auto-assemblée de l’émerine est capable d’interagir avec la lamine A et que la phosphorylation de l’émerine par la kinase Src, observée suite à un stress mécanique, régule cette interaction entre l’enveloppe nucléaire et le nucléosquelette.Pour finir, j’ai montré que la forme monomérique de l’émerine est capable de former un complexe ternaire avec BAF et la lamine A. Après avoir mesuré les affinités protéine-protéine au sein de ce complexe, identifié les fragments minimaux des différentes protéines permettant de former ce complexe et mis au point un protocole robuste de purification de ce complexe, j’ai pu obtenir des cristaux de ce complexe dans plusieurs conditions. Par la suite, nous avons pu résoudre la structure de ce complexe par remplacement moléculaire avec une résolution de 2 Å. Enfin, j'ai montré que les mutations dans les lamines de type A provoquant des syndromes de type progéroïde pouvaient altérer l'interaction avec BAF in vitro, et nos collaborateurs, l'équipe du Dr B. Buendia (Paris Diderot), ont montré que ces mêmes mutations induisaient une diminution significative de la proximité entre la lamine A et BAF dans les cellules HeLa. Un article, où je suis premier auteur, vient d’être soumis au journal NSMB. / The nucleus is an organelle characteristic of eukaryotic cells and its mechanical properties play an essential role in the behavior of the cell, in particular its motility, polarity and survival. It is surrounded by an envelope comprising an inner membrane and an outer membrane, as well as a large number of proteins. These proteins are either anchored at the nuclear membrane, as emerin, or form a filament meshwork lining the inner nuclear membrane, as lamins. My thesis objectives were to understand molecular mechanisms deficient in two types of genetic diseases caused by mutations in inner nuclear envelope proteins: Emery-Dreifuss muscular dystrophy, associated to mutations in emerin and A-type lamins, and progeroid syndromes caused by mutations in A-type lamins.First, we showed that the emerin protein self-assembles in vitro and in cells (Herrada, Samson et al., ACS Chem. Biol., 2015). I then studied the structure of emerin oligomers, determined the minimal protein fragment necessary for the formation of these oligomers, identify residues forming the structural core of these oligomers by solid-state NMR in collaboration with the group of Prof A. Lange (FMP Berlin), and described the impact of emerin mutations causing Emery-Dreifuss muscular dystrophy on emerin self-assembly (Samson et al., Biomol. NMR Assign. 2016, Samson et al., FEBS J. 2017). Then, I observed, mainly using solution-state NMR, that only the self-assembled form of emerin is able to interact with A-type lamin tail, and that mutants causing Emery-Dreifuss muscular dystrophy and unable to self-assemble are also defective in A-type lamin binding. I also obtained preliminary data showing that phosphorylation of emerin by the Src kinase, observed after a mechanical stress in purified nuclei, regulates the interaction between self-assembled emerin and A-type lamins.Finally, I showed that the monomeric form of emerin is able to form a ternary complex with A-type lamin tail through the chromatin-associated protein Barrier-to-Autointegration Factor (BAF). After having measured the protein-protein affinities within this complex, identified the minimal protein fragments involved in the complex and developed a robust protocol for purification of this complex, I was able to obtain crystals under several conditions. Subsequently, I solved the 3D structure of this complex by molecular replacement at a resolution of 2 Å. Finally, I showed that mutations in A-type lamins causing autosomal recessive progeroid syndromes impair interaction with BAF in vitro, and our collaborators at Univ. Paris Diderot, the team of Dr B. Buendia, showed that these same mutations induce a significant decrease in the proximity between lamin A and BAF in HeLa cells. An article with me as a first author is in preparation that reports all these new data.

<p align="justify">Une contribution à l'étude de la dynamique des polymères non enchevêtrés à l'état fondu est apportée, en se focalisant sur les aspects de dynamique locale d'un polymère particulier déjà fort étudié expérimentalement et par simulation, à savoir le polyéthylène.</p> <p align="justify">Néanmoins, plusieurs nouveaux résultats spécifiques à cette macromolécule linéaire ou ayant une portée sur les fondus de polymères en général sont obtenus grâce à une approche présentant plusieurs aspects originaux.</p> <p align="justify">Notre étude par simulation de la phase liquide du polyéthylène est menée sur une large gamme de températures. La nouveauté principale à ce sujet est l'attention particulière portée à la qualité d'équilibration des échantillons à chaque température. A cette fin, des techniques sophistiquées d'échantillonnage Monte Carlo, mises au point récemment, ont été utilisées pour générer des configurations initiales, la phase de polyéthylène à l'état fondu ainsi obtenue pouvant être stable ou métastable. Un programme original de Dynamique Moléculaire a par ailleurs été écrit, en incorporant diverses procédures d'optimisation adaptées au cas du polyéthylène représenté par un modèle atomistique.</p> <p align="justify">Des observables de diffusion quasi-élastique de neutrons et de résonance magnétique nucléaire sont analysées sur base d'une combinaison linéaire continue d'exponentielles, dont les poids sont donnés par une distribution des temps de relaxation. Cette méthode permet de mieux mettre en évidence les différents processus de relaxation sondés, en évitant les biais induits par un choix particulier de forme analytique servant à une procédure d'ajustement.</p> <p align="justify">Ayant participé à une expérience de spectroscopie par temps de vol de neutrons, un schéma commun d'analyse est adopté pour les données expérimentales et de simulation concernant le polyéthylène à 450 K. D'autre part, une étude très fouillée de l'évolution de la fonction de diffusion intermédiaire incohérente vers les températures plus basses, suivie par simulation, a permis de distinguer différents processus dynamiques et de déterminer parfois leur origine moléculaire.</p> <p align="justify">Ces résultats sont combinés à une analyse de la fonction d'auto corrélation d'orientation d'un vecteur C-H en termes d'une description microscopique des processus dynamiques, proposée lors d'une étude récente de fondus de polyéthylène par résonance magnétique nucléaire du 13C. Deux approches complémentaires sont exploitées afin de révéler les caractéristiques essentielles des deux types de relaxation impliqués.</p>

Les excitations dans les systemes superfluides sont decrites a l'aide du<br />formalisme QRPA, qui repose sur la theorie de la fonctionnelle de la<br />densite. Les effets du continuum dans les noyaux proches de la drip-line<br />sont etudies. Experimentalement, l'etude de la magicite a l'aide de la<br />diffusion de protons est rendue possible grace a une methode utilisant le<br />dectecteur MUST. Les densites de transition calculees, permettent de<br />reproduire les distributions angulaires sur une chaine isotopique.<br />Finalement, l'etude des etats collectifs est applique au processus r, a la<br />croute des etoiles a neutrons, aux pieges d'atomes fermioniques et aux<br />rayons cosmiques de ultra-haute energie.

Cette thèse porte sur deux aspects de l'Imagerie par Résonance Magnétique (IRM) à bas champ (0.2 T) : la recherche de nouveaux contrastes liés à l'interaction entre la Résonance Magnétique Nucléaire (RMN) et l'acoustique (élastographie, interaction spin-phonon) et l'augmentation du rapport signal-sur-bruit par Polarisation Dynamique Nucléaire (PDN). L'Elastographie par Résonance Magnétique (ERM) permet de retrouver certaines propriétés viscoélastiques des tissus par visualisation de la propagation d'ondes acoustiques transverses à basse fréquence. Une revue sur l'ERM est présentée, ainsi qu'une étude sur la mesure locale du coefficient d'absorption acoustique. La partie suivante est consacrée à l'interaction IRM-ultrasons. Le transducteur ultrasonore a d'abord été calibré en puissance et en champ acoustique en comparant deux méthodes : la méthode de la force de radiation (méthode de la balance) et l'interférométrie laser. Nous avons ensuite tenté de modifier le T1 des tissus par interaction spin-phonon due à l'application d'ultrasons à la fréquence de résonance à 0.2 T, soit environ 8.25 MHz. Aucune modification du contraste T1 n'a été obtenue, mais le phénomène de courant acoustique a pu être observé dans les liquides. La visualisation par IRM de ce courant pourrait permettre de calibrer les transducteurs ainsi que de retrouver certaines propriétés mécaniques des fluides visqueux. Le but de la dernière partie était la mise en place d'expériences de PDN à 0.2 T dans le but d'augmenter le signal RMN. Cette méthode de double résonance est basée sur le transfert de polarisation des électrons non-appariés de radicaux libres vers les protons de l'eau environnants. Ce transfert s'effectue par relaxation croisée lors de la saturation d'une transition électronique par Résonance Paramagnétique Electronique (RPE). Deux cavités de RPE opérant à 5.43 GHz ont été testées sur des radicaux libres d'oxo-TEMPO (nitroxyde). Un gain en signal RMN d'un facteur 30 a pu être obtenu lors de ces expériences préliminaires.

LA MALADIE CORONARIENNE REPRESENTE L'UNE DES PREMIERES CAUSES DE MORTALITE DANS LE MONDE. LA MEDECINE NUCLEAIRE CONSTITUE LA PRINCIPALE MODALITE D'IMAGERIE POUR LE DIAGNOSTIC ET LA PRISE EN CHARGE DE CETTE PATHOLOGIE. PERFUSION : ACTUELLEMENT, LES RADIOTRACEURS UTILISES EN PRATIQUE CLINIQUE SONT DES TRACEURS DE LA PERFUSION MYOCARDIQUE. LE THALLIUM-201, TRACEUR DE REFERENCE, PRESENTE UNE DOSIMETRIE ELEVEE. 99mTcN-NOET A ETE PROPOSE POUR SON REMPLACEMENT. CONTRAIREMENT AUX RESULTATS PRECEDEMMENT OBTENUS IN VITRO SUR DES CARDIOMYOCYTES, LE VERAPAMIL, UN INHIBITEUR CALCIQUE, N'INHIBE PAS LA FIXATION MYOCARDIQUE DE 99mTcN-NOET IN VIVO CHEZ LE CHIEN. CE RESULTAT EST EN ACCORD AVEC L'HYPOTHESE D'UNE FIXATION ENDOTHELIALE DE CE TRACEUR. D'AUTRE PART, LES ETUDES INDIQUENT QU'EN TANT QUE TRACEUR PUR DU DEBIT, 99MTCN-NOET PEUT ETRE UTILISE POUR APPRECIER LA VIABILITE TISSULAIRE MYOCARDIQUE SUR UN MODELE D'INFARCTUS CHRONIQUE DU MYOCARDE CHEZ LE RAT. ATHEROME : LA RUPTURE D'UNE PLAQUE D'ATHEROME VULNERABLE EST L'EVENEMENT RESPONSABLE DE LA MAJORITE DES ACCIDENTS CORONARIENS. LA SECONDE PARTIE DE CETTE THESE PORTE SUR L'EVALUATION DE NOUVEAUX RADIOTRACEURS POTENTIELS DE CES PLAQUES SUR UN MODELE EXPERIMENTAL DE LAPIN GENETIQUEMENT HYPERCHOLESTEROLEMIQUE. LES 4 TRACEURS EVALUES (B2702(R), B2702-I, B2702-TC ET TC-RAFT-B2702) SONT DERIVES D'UN PEPTIDE ISSU D'UNE MOLECULE DE CMH-I DECRIT POUR LIER VCAM-1, UNE MOLECULE D'ADHESION EXPRIMEE AU NIVEAU DES PLAQUES VULNERABLES. LES ETUDES AUTORADIOGRAPHIQUES INDIQUENT QUE LES 4 TRACEURS S'ACCUMULENT DANS LES PLAQUES D'ATHEROME EXPRIMANT VCAM-1 ET QUE C'EST I-B2702 QUI PRESENTE LE MEILLEUR RAPPORT DE FIXATION PLAQUE/REGION SAINE.

Dans les collisions les plus centrales d'ions lourds aux énergies accessibles au SPS du CERN les conditions de densité et d'énergie pourraient conduire à une transition vers un nouvel état de la matière, le plasma de quarks et de gluons. L'effet d'écran sur le J/Psi, où l'augmentation de la production de particules étranges comme le phi pourraient en être des traces caractéristiques. Cette thèse traite principalement de la production de mésons phi mesurés grace à la mesure des paires de muons par la collaboration NA50 au cours de l'année 2000. Plusieurs améliorations dont un nouveau déclenchement pour le dénombrement des collisions permettait un meilleur accès aux collisions les plus périphérique et aux collisions centrales.<br> La multiplicité du J/Psi observée dans ces résultats ne confirme pas une brutale décroissance pour les collisions très centrales. Inversement, il n'y a pas non plus d'évidence pour une saturation de la suppression, comme prédit par plusieurs modèles théoriques ne postulant pas l'existence d'une phase plasma.<br> Les sections efficaces de production et les multiplicités des dimuons issus des mésons phi et omega sont similaires aux précédents travaux. Néanmoins l'évolution depuis 2002 de la valeur du PPDB du BR_(phi->mu mu) induit un rapprochement entre les multiplicités de phi observées ici et celles obtenues par NA49, ce qui résoud en partie le «phi puzzle ». Toutefois les pentes apparentes restent différentes.<br> Cette étude débouche aussi sur des perspectives pour la détermination du taux d'étrangeté dans le milieu grâce à l'utilisation directe du rapport phi/omega qui correspond au carré du facteur de saturation de l'étrangeté chi_s utilisé dans de nombreux modèles thermiques.

Les réarrangements chromosomiques affectant la région d'hétérochromatine constitutive du chromosome 1 humain (bande cytogénétique 1q12) sont remarquablement fréquents dans les lymphomes, les myélomes, les leucémies aiguës et dans certaines tumeurs solides. Ceci suggère fortement l'existence de mécanismes oncogéniques dépendant de l'hétérochromatine constitutive dans ces maladies. Mes travaux de thèse montrent que ces réarrangements induisent des altérations profondes de l'organisation et de la fonction de la chromatine dans des cellules de lymphome B. Les conséquences majeures sont la formation de foyers hétérochromatiques aberrants résultant d'appariements intra-chromosomiques ‘longue distance' entre le domaine d'hétérochromatine 1q12 réarrangé et le domaine centromérique. Ces foyers sont associés à un enrichissement de l'euchromatine adjacente en marques épigénétiques répressives, et à la répression de l'expression de gènes, parmi lesquels GMCL1 et MXD1 qui codent pour des protéines impliquées dans le contrôle de la signalisation P53 et MYC, respectivement. D'autre part, l'étude pilote de profiling transcriptionnel par puces Affymetrix dans des cas de lymphome avec ou sans anomalie de l'hétérochromatine 1q12 confirme et identifie de nouvelles cibles de dérégulation liées à l'hétérochromatine dans les lymphomes B non-Hodgkiniens. La compréhension du rôle de ces foyers hétérochromatiques aberrants présenterait un intérêt majeur pour les tumeurs hématologiques ou solides, puisque ces anomalies sont observées de manière fréquente et non-aléatoire dans un large spectre de tumeurs humaines, et sont associées à la progression tumorale et à un mauvais pronostic.

En vue de permettre l'incinération des déchets nucléaires à vie longue, les réacteurs sous-critiques pilotés par accélérateur, plus communément dénommés ADS (Accelerator Driven System), sont l'une des solutions envisagées. Afin de permettre le monitorage de la puissance et donc le pilotage de tels systèmes, de multiples méthodes d'extraction de la réactivité ont été développées pendant les soixante dernières années. La méthode « kprompt », dernière en date, a démontré de multiples avantages et avait donné d'excellents résultats lors de l'expérience MUSE-4 dans le début des années 2000. Cette méthode, reposant sur la détermination de la distribution du temps de vie de fission intergénération, ne nécessite pas l'accès à la configuration critique pour la calibration (comme dans la méthode MSM) mais également l'investigation des taux de comptage sur de longs temps (comme dans la méthode des Aires). Sa robustesse, vis-à-vis de plusieurs facteurs physico-chimico-géométriques, a été éprouvée et confirmée pour le cas de l'expérience GUINEVERE. Par comparaison des résultats obtenus avec les méthodes usuelles de détermination de la réactivité, nous avons réussi à appliquer la méthode « kprompt » de façon satisfaisante aux différentes expériences dynamiques que sont les PNS et les Beam Trips. Finalement, suite à cette transposition de la méthode « kprompt » avec succès à l'expérience GUINEVERE, l'étape suivante consistera en son application au démonstrateur de puissance que sera le projet MYRRHA. / In order to allow the incineration of the long-lived nuclear wastes, the sub-critical reactors, more commonly named ADS (Accelerator Driven System), is one of the proposed solutions. To allow the monitoring of the power and therefore the control of such systems, several methods, developed during the last sixty years, give the reactivity. The last in date method, called « kprompt » method, has demonstrated many advantages and gave excellent results during the MUSE-4 experiment in the early 2000s. This method, based on the determination of the intergeneration fission lifetime distribution, does not require the access to the critical configuration for calibration (as for the MSM method) and the investigation of the counting rate on long times (as for the Area method). Its robustness, regarding several physical-chemical-geometrical factors, was tested and confirmed in the case of the GUINEVERE experience. By comparing the results obtained with the usual methods of reactivity determination, we applied adequately the « kprompt » method to the different dynamical experiments, the so-called PNS and Beam Trips. Finally, following the successfully transposition of the « kprompt » method to the GUINEVERE experience, the next step, in its application, will be to the power demonstrator MYRRHA.

La capacité du virus de la grippe aviaire à traverser la barrière des espèces et à devenir fortement pathogène chez les mammifères est un problème majeur de santé publique. Chez les oiseaux, la réplication a lieu dans l'intestin, à 4C, tandis que chez les humains elle a lieu dans l'appareil respiratoire, plus froid, à 33C. Il a été montré que l'adaptation à la température du virus de la grippe a lieu par de nombreuses mutations de la polymérase virale, notamment dans le domaine 627-NLS situé en C-terminal de la protéine PB2. Ce domaine est impliqué dans l'adaptation à l'hôte et interagit avec la protéine de l'hôte, importine alpha, étant donc indispensable pour l'entrée de la polymérase virale dans le noyau de la cellule [Tarendeau et al., 2008]. Les structures cristallographiques du 627-NLS et du complexe importine alpha/NLS existent. Cependant, lors de la superposition de ces structures via leur domaine NLS commun, un important choc stérique entre le domaine 627 et l'importine alpha devient évident. Ceci indique qu'une autre conformation du 627-NLS est requise pour l'interaction avec l'importine alpha [Boivin and Hart, 2011]. Dans cette étude, nous avons examiné les bases moléculaires de l'adaptation inter-espèces du virus à travers l'étude de la structure et de la dynamique du 627-NLS aviaire et humain. Nous avons identifié deux conformations du 627-NLS en échange lent (10-100 s-1), correspondant apparemment à une conformation ouverte et une conformation fermée des deux domaines. Nous proposons que la conformation ouverte du 627-NLS est la seule conformation compatible avec l'interaction avec l'importine alpha, et que l'équilibre entre conformation ouverte et fermée pourrait jouer le rôle de thermostat moléculaire, contrôlant l'efficacité de la réplication virale chez différents hôtes. La cinétique et la dynamique de ce comportement conformationnel important ainsi que de l'interaction entre le 627-NLS et l'importine alpha ont été caractérisées par résonance magnétique nucléaire (déplacements chimique, augmentation paramagnétique de la relaxation, relaxation de spin, transfert de saturation par l'échange chimique), combinée à la diffusion des rayons X et des neutrons aux petits angles ainsi qu'au transfert d'énergie par résonance de type Förster. Aussi, nous avons déterminé les affinités d'une série de mutants évolutifs du 627-NLS pour l'importine alpha et du 627-NLS aviaire ou humain pour différents isoformes de l'importine alpha, montrant que les affinités observées sont cohérentes avec les préférences d'interactions vues in vivo. / The ability of avian influenza viruses to cross the species barrier and become dangerously pathogenic to mammalian hosts represents a major threat for human health. In birds the viral replication is carried out in the intestine at 40°C, while in humans it occurs in the cooler respiratory tract at 33°C. It has been shown that temperature adaption of the influenza virus occurs through numerous mutations in the viral polymerase, in particular in the C-terminal domain 627-NLS of the PB2 protein. This domain has already been shown to participate in host adaptation and is involved in importin alpha binding and therefore is required for entry of the viral polymerase into the nucleus [Tarendeau et al., 2008]. Crystallographic structures are available for 627-NLS and the complex importin alpha/NLS, however, a steric clash between importin alpha and the 627 domain becomes apparent when superimposing the NLS domain of the two structures, indicating that another conformation of 627-NLS is required for binding to importin alpha [Boivin and Hart, 2011]. Here we investigate the molecular basis of inter-species adaptation by studying the structure and dynamics of human and avian 627-NLS. We have identified two conformations of 627-NLS in slow exchange (10-100 s-1), corresponding to an apparently open and closed conformation of the two domains. We show that the equilibrium between closed and open conformations is strongly temperature dependent. We propose that the open conformation of 627-NLS is the only conformation compatible with binding to importin alpha and that the equilibrium between closed and open conformations may play a role as a molecular thermostat, controlling the efficiency of viral replication in the different species. The kinetics and domain dynamics of this important conformational behaviour and of the interaction between 627-NLS and importin alpha have been characterized using nuclear magnetic resonance chemical shifts, paramagnetic relaxation enhancement, spin relaxation and chemical exchange saturation transfer, in combination with X-ray and neutron small angle scattering and Förster resonance energy transfer. Also, we have determined the affinities of various evolutionnary mutants of 627-NLS to importin alpha and of avian and human 627-NLS to different isoforms of importin alpha, showing that the observed affinities are coherent with the preferred interactions seen in vivo.

Cette thèse étudie le rôle des coûts de construction et de réglementation de la sécurité sur la compétitivité de l'énergie nucléaire. L'analyse des coûts de construction est basée sur l'utilisation de données réelles provenant des parcs nucléaires français et américains. En particulier, nous étudions différents canaux à partir de laquelle des réductions de coûts pourraient survenir. Nous montrons que la normalisation est un critère crucial pour la compétitivité économique de l'énergie nucléaire, d'abord parce que les effets d'apprentissage positifs sont conditionnels à la technologie, ce qui signifie que les réductions de coûts ne peuvent venir que si le même type de réacteur est construit à plusieurs reprises, mais aussi parce qu'elle permet de réduire le coût indirectement par l'intermédiaire de courts délais de construction. Dans l'analyse du rôle de réglementation de la sécurité, nous évaluons d'abord l'effet du dernier accident nucléaire majeur (c.-à Fukushima Dai-ichi) de la probabilité de survenance d'un tel événement, puis les effets de l'incertitude concernant la façon dont les soins de la sécurité à réduire la probabilité d'un accident nucléaire dans l'établissement de normes de sécurité en vertu de l'aléa moral et responsabilité limitée. Nous constatons que la norme sera la moins stricte lorsque le régulateur adopte une approche pire des cas, et plus stricte lorsque le régulateur adopte l'approche de la robustesse de regret et il est optimiste quant à l'efficacité des soins de la sécurité pour réduire le risque d'accident. Toutefois, cette norme pourrait induire le non-respect par les opérateurs les moins efficaces. / This thesis studies the role of construction costs and safety regulation on nuclear power competitiveness. The analysis of the construction costs is based on the use of the actual data coming from the american and french nuclear fleet. In particular, we study different channels from which cost reductions might arise. We show that standardization is a key criterion for the economic competitiveness of nuclear power, first because the positive learning effects are conditional to the technology, this means that cost reductions will arise only if the same type of reactor is built several times, but also because it allows to reduce the cost indirectly through shorter construction lead-times. In the analysis of the role of safety regulation, we first asses the effect of the latest major nuclear accident (i.e Fukushima Dai-ichi) in the probability of occurrence of such an event and then the effects of the uncertainty regarding how safety care reduce the probability of a nuclear accident in setting safety standards under moral hazard and limited liability. We find that the standard will be stricter when the regulator is optimistic in the safety care effectiveness to reduce the risk of an accident, but simultaneously this policy might induce no compliance of the most inefficient operators.