A definição clara de doença periodontal é fundamental para se estabelecer critérios de risco ao desenvolvimento de outras condições sistêmicas e definir fenótipos biológicos que representem os eventos microbiológicos, moleculares e imunológicos subjacentes à manifestação clínica da doença. O objetivo deste estudo foi avaliar a prevalência dos diferentes fenótipos biológicos dentre os pacientes atendidos na Faculdade de Odontologia de Bauru-USP, correlacionando os achados clínicos às condições sistêmicas dos pacientes e aos achados microscópicos. Foram incluídos na amostra dados do prontuário clínico de 313 pacientes de ambos os sexos, com idade entre 12 e 76 anos. Após a coleta dos dados relativos à identificação, história médica e odontológica e parâmetros periodontais (profundidade de sondagem P.S.; recessão - REC ou hiperplasia HP; nível de inserção clínica NIC; índice de sangramento à sondagem SS e índice de placa IPl), a amostra foi dividida em cinco grupos: IBG-S (Interface Biofilme Gengiva - Saúde)- SS <10% e P.S. 3mm (n=24); IBG-G (Gengivite)- SS&#x2265;10% e P.S.&#x2264;3mm (n=39); IBG-LP/SL (Lesão Profunda- Sangramento Leve)- SS< 10% e 1 sítio ou mais P.S.&#x2265;4 mm (n=47); IBG-LP/SM (Lesão Profunda -Sangramento Moderado)- 10%-49% de SS e 1 sítio ou mais com P.S.&#x2265;4 mm (n=131); IBG-LP/SS (Lesão Profunda -Sangramento severo)- SS&#x2265;50% dos sítios e 1 sítio ou mais com P.S.&#x2265;4 mm (n=72). Foram obtidas biópsias de tecido mole de 25 pacientes dos diferentes grupos para análise em microscopia ótica convencional por dois examinadores experientes, desconhecedores da identificação dos pacientes. Os resultados demonstraram maior prevalência de IBG-LP/SM (41,85%) e menor prevalência de IBG-S (7,65%). A idade média foi de 42,93 ± 14,48 anos, sem diferenças entre os grupos (p=0.42; Kruskal-Wallis), com prevalência de mulheres (63,8%). A avaliação pelo teste Chi-quadrado demonstrou que IBG-LP/SL, IBG- LP/SM e IBG-LP/SS apresentaram maior número de fumantes do que IBG-S e IBG-G (p=0.015), sem diferenças entre os grupos em relação à presença de diabetes e doenças cardiovasculares (p>0.05). O risco de pacientes com SS>10% apresentarem doenças cardiovasculares foi significativamente elevado (p= 0.04, teste exato de Fischer). A P.S. média e NIC foram maiores no grupo IBG-PL/SS (2.95±1.55; 1.94±2.24, respectivamente) e menores no grupo IBG-G (1.71±0.65 e 0.51±0.99, respectivamente), com diferenças significantes entre os grupos (p<0.001; Kruskal-Wallis). O SS e IPl foram maiores nos grupos IBG-LP/SS e IBG-G, seguido pelos grupos IBG-LP/SM, IBG-LP/SL e IBG-S (p<0.001; Kruskal-Wallis). A análise microscópica demonstrou que o diagnóstico clínico foi compatível com o diagnóstico microscópico em 10 das 25 amostras investigadas (40%), observando-se correlação entre os achados clínicos e microscópicos em 100% das amostras do grupo IBG-G (n=4), 83,3% do grupo IBG-LP/SS (n=6), 50% do grupo IBG-S (n=2), 16,67% do grupo IBG-LP/SM (n=6) e 0% do grupo IBG-LP/SL (n=7). Esses achados sugerem que a manifestação clínica da doença periodontal é heterogênea, não compatível com a resposta inflamatória observada no tecido conjuntivo gengival. / A clear definition of periodontal disease is essential to establish criteria of risk of developing other systemic conditions, as well as to determine biological phenotypes that represent the microbiological, molecular and immunological features underlying clinical manifestation of the disease. The aim of this study was to evaluate the prevalence of different biological phenotypes among patients attended at School of Dentistry at Bauru-USP, correlating the clinical findings with systemic conditions and microscopic findings. It was included in the sample data collected from dental file records of 313 patients, both genders, age ranged 12-76 years. After collection of data related to the identification, medical and dental history and periodontal parameters (probing depth PD; recession REC or marginal hyperplasia HP; clinical attachment level CAL; bleeding on probing BOP; plaque índex IPl), sample was divided into Five groups: BGI-H (Health)- BOP <10% and PD&#x2264; 3mm (n=24); BGI-G (Gingivitis)- BOP&#x2265;10% and PD&#x2264;3mm (n=39); BGI-DL/LB (Deep lesion/low bleeding)- SS<10% and 1 or more sites PD&#x2265;4 mm (n=47); BGI-DP/MB (Deep lesion/moderate bleeding)- 10%-49% BOP and 1 or more sites PD&#x2265;4 mm (n=131); BGI-DL/SB (Deep lesion/severe bleeding)- BOP 50% and 1 ore more sites PD&#x2265;4 mm (n=72). Soft tissue excisional biopsies were removed from 25 patients of all groups for analysis in optical microscopy by two expertise blinded examiners. The results showed more prevalence of BGI-DP/MB (41.85%) and lesser prevalence of BGI-H (7.65%). Mean age was 42.93±14.48 years, without significant differences among groups (p=0.42; Kruskal-Wallis), and prevalence of women (63.8%). Evaluation by Chi-squared test showed that BGI-DL/LB, BGI-DL/MB and BGI-DL/SB presented more smokers than BGI-H and BGI-G (p=0.015), without significant differences in diabetes and cardiovascular diseases (p>0.05). The risk of patients with BOP> 10% present CVD was significantly higher (p= 0.04, Fischers exact test). Mean PD and CAL were deeper in BGI-DL/SB (2.95±1.55; 1.94±2.24, respectively) and shallower in BGI-G (1.71±0.65; 0.51±0.99, respectively), with significant differences among groups (p<0.001; Kruskal-Wallis). BOP and IPl were higher at BGI-DL/SB and BGI-G, followed by BGI-DL/MB, BGI-DL/LB and BGI-H (p<0.001; Kruskal-Wallis). Clinical diagnosis was compatible with microscopic diagnosis in 10 out of 25 samples (40%), noticing correlation between clinical and microscopic finding in 100% of BGI-G samples (n=4), 83.3% of BGI-DL/SB samples (n=6), 50% of BGI-H samples (n=2), 16,67% of BGI-DL/MB (n=6) and 0% of BGI-DL/LB (n=7). These findings suggest that clinical manifestation of periodontal diseases is heterogeneous, not corresponding to the inflammatory response observed at gingival connective tissue.

O ligamento periodontal e o tecido gengival são formados por tecido conjuntivo frouxo, sendo constituídos por diversas células, dentre as quais os fibroblastos são as mais numerosas. Ao serem submetidas a agressões diversas, estas células respondem com a liberação de substâncias, tais como citocinas e quimiocinas, que participam de maneira ativa no processo inflamatório, e com a produção de componentes da matriz extracelular fundamentais para o reparo, como por exemplo, o colágeno. Assim sendo, este trabalho teve como objetivo: Avaliar e comparar a expressão e a produção de prócolágeno tipo I, IL6, MIP1 e SDF1 por fibroblastos humanos, cultivados de ligamento periodontal e de tecido gengival, estimulados por lipopolissacarídeo (LPS) de Porphyromonas gingivalis. Foram coletados ligamentos periodontais de terceiros molares não irrompidos e biópsias de gengiva de um mesmo indivíduo (n=3). Estes tecidos foram picotados e mantidos em meio de cultura adequado para fibroblastos, que foram utilizados na quarta passagem. Após adesão dos fibroblastos a placas de 24 poços, o meio de cultura contendo 0,1 10 g/mL de LPS de P. gingivalis foi adicionado às placas em duplicata. O sobrenadante e as células foram coletados após 1, 6 e 24 horas e analisados por ELISA e PCR em tempo real, respectivamente. A análise estatística foi realizada por meio do programa GraphPad Prism, aplicandose o teste ANOVA a 1 critério com nível de significância de 5%. A expressão de prócolágeno tipo I mostrouse - ligeiramente diferente entre fibroblastos de ligamento periodontal e de gengiva. A produção de IL6, MIP1 e SDF1 foi significativamente maior em fibroblastos gengivais. A citocina IL6 foi produzida de maneira tempodependente com LPS de P gingivalis, principalmente por fibroblastos gengivais. Para MIP1, os fibroblastos gengivais mostraram maior produção com a menor concentração de estímulo (0,1g/ml). Para SDF1, foi detectada produção constitutiva que foi inibida com o aumento da concentração de LPS ao longo do tempo nestas mesmas células. Já para fibroblastos de ligamento periodontal, não foi observado um padrão homogêneo e linear, apesar de a produção basal de SDF1 também existir, porém em níveis bem mais discretos, como aquele observado para a produção de MIP1. A capacidade dos fibroblastos modificarem o padrão de produção dessas citocinas frente ao estímulo com LPS de P. gingivalis reforça a importância dessas células no contexto da resposta imune do indivíduo frente à doença periodontal. / The fibroblast is considered an important cell in periodontitis because it is the predominant cell type in the periodontal connective tissue. When challenged by different agents, fibroblasts respond through the release of substances, such as cytokines and chemokines that participate in an active way in the inflammatory process as well as the production of basic components of the extracellular matrix for repair, like collagen. The aim of this study was to: to evaluate and to compare the expression and production of type I procollagen, IL6, MIP1 and SDF1 by cultured human periodontal ligament and gingival fibroblasts challenged with lipopolyssacharide from Porphyromonas gingivalis. Human periodontal ligament and gingival fibroblasts were cultured from biopsies of the same donor and were used on the fourth passage. After confluence in 24well plates, the culture medium alone (control) or with 0,1 10 ug/mL of LPS from P. gingivalis were added and after 1, 6 and 24 hours, the supernatant and the cells were collected and analysed by ELISA and Real time PCR, respectively. Data were analysed by GraphPad Prism Program (1 way ANOVA test) and a significance level of 5% was adopted. Procollagen type I expression by Real Time PCR differ between periodontal ligament and gingival fibroblasts. In vitro experiments revealed that IL6, MIP 1 and SDF1 production were significantly greater in gingival fibroblasts when compared to periodontal ligament. In addition, IL6 was upregulated in a timedependent manner, mainly by the gingival fibroblasts. On one hand, MIP1 was stimulated with a low concentration (0,1ugml) of LPS by gingival fibroblasts. On the other hand, SDF1 was constitutively secreted by the same cells but its production was inhibited when challenged by a higher concentration of LPS from P gingivalis. In general, periodontal ligament fibroblasts did not show a pattern of production of these cytokines under the challenge with LPS, despite of the basal production of SDF1 in lower levels than gingival cells and the low production of MIP1 over time. The differential ability of the gingival and periodontal ligament fibroblasts to secrete these cytokines emphasizes their crucial role in the inflammatory microenvironment and in the host immune response to periodontal disease.

Submitted by Edineia Teixeira (edineia.teixeira@unioeste.br) on 2017-11-27T18:31:17Z No. of bitstreams: 2 MARCELA LEITE2017.pdf: 2527004 bytes, checksum: 37310bebca45bcc15d56cfda1b505434 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-27T18:31:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 MARCELA LEITE2017.pdf: 2527004 bytes, checksum: 37310bebca45bcc15d56cfda1b505434 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-01-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Objective: To evaluate whether periodontal disease, through systemic inflammation, can potentiates the deleterious effects of immobilization of the skeletal striated muscle, contributing to the development of muscle atrophy due to disuse. Methods: Forty Wistar rats were divided into four groups: 1) Control Group (CG), 2) Periodontal Disease (GPD) 3) Immobilized (IG) and 4) Immobilized with Periodontal Disease (IPDG). Periodontal disease was induced for 30 days, with ligature method, and the immobilization of the right pelvic limb was performed with cast bandage for 15 days. Prior to euthanasia, the nociceptive threshold and muscular grasping force were evaluated. Afterwards, the soleus muscle was dissected and processed for sarcomere counting and morphological and morphometric analysis. For analysis of the data, the one-way ANOVA followed by the Tukey post test, with p < 0.05. Results: The IG and IPDG groups presented lower muscle weight, lower muscular grip strength and less number of sarcomeres compared to CG. The PDG showed reduction of muscle strength and nociceptive threshold after 15 days of periodontal disease and increase of connective tissue compared to CG. The IPDG presented lower muscle length and nociceptive threshold compared to the other groups. The IG presented a reduction in the cross-sectional area and a smaller diameter, an increase in the number of nuclei and a nucleus/fiber ratio, a decrease in the number of capillaries and a capillary/fiber ratio, with an increase in connective tissue. In the IPDG group, there were significant results for increased nucleus/fiber ratio, decreased capillaries and increased connective tissue when compared to the IG group. The IPDG group presented greater muscle tissue degeneration and increased inflammatory cells when compared to the other groups. Conclusion: Periodontal disease potentiated the deleterious effects of immobilization of the skeletal striated muscle, through intense destruction of muscle tissue, with significant increase of connective tissue, nucleus/fiber ratio and inflammatory infiltrate, significant reduction of vascularization and reduction of muscle length, with consequent reduction of muscle strength and nociceptive threshold. / Objetivo: Avaliar se a doença periodontal, por meio da inflamação sistêmica, potencializa os efeitos deletérios da imobilização do músculo estriado esquelético, colaborando para o desenvolvimento da atrofia muscular por desuso. Metodologia: Foram utilizados 40 ratos Wistar, divididos em quatro grupos: 1) Grupo Controle (GC); 2) Doença Periodontal (GDP); 3) Imobilizado (GI); 4) Doença Periodontal Imobilizado (GDPI). A doença periodontal foi induzida pelo método de ligadura, durante 30 dias e a imobilização do membro pélvico direito foi realizada com atadura gessada, por 15 dias. Antes da eutanásia, foram avaliados o limiar nociceptivo e força muscular de preensão. Após, o músculo sóleo foi dissecado e processado para contagem de sarcômeros e análise morfológica e morfométrica. Para análise dos dados, foi utilizado o teste ANOVA de uma via seguida do post test Tukey, com p<0,05. Resultados: Os grupos GI e GDPI apresentaram menor peso muscular, força muscular de preensão e número de sarcômeros comparados ao GC. O GDP apresentou redução da força muscular e do limiar nociceptivo após 15 dias de doença periodontal e aumento de tecido conjuntivo comparado ao GC. O GDPI apresentou menor comprimento muscular e limiar nociceptivo comparados aos demais grupos. O GI apresentou redução da área de secção transversa e menor diâmetro, aumento no número de núcleos e razão núcleo/fibra, diminuição no número de capilares e razão capilar/fibra, com aumento de tecido conjuntivo. No grupo GDPI, houve resultados significativos para aumento da razão núcleo/fibra, diminuição de capilares e aumento de tecido conjuntivo quando comparado ao grupo GI. O grupo GDPI apresentou maior degeneração do tecido muscular e aumento de células inflamatórias quando comparado aos outros grupos. Conclusão: A doença periodontal potencializou os efeitos deletérios da imobilização do músculo estriado esquelético, por meio da intensa destruição do tecido muscular, com significativo aumento do tecido conjuntivo, da razão núcleo/fibra e infiltrado inflamatório, significativa diminuição da vascularização e redução do comprimento muscular, com consequente redução da força muscular e limiar nociceptivo.

Submitted by Edineia Teixeira (edineia.teixeira@unioeste.br) on 2017-12-18T17:51:48Z No. of bitstreams: 2 TATIANE_MATTIA2017.pdf: 1152114 bytes, checksum: 712fc2801c953f31d127b53677f3a645 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-18T17:51:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TATIANE_MATTIA2017.pdf: 1152114 bytes, checksum: 712fc2801c953f31d127b53677f3a645 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-02-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Periodontal disease is one of the most important diseases around the world. Its progress occurs due to a combination of factors which affect the sustainable tissues of teeth, and which leads to the development of periodontal pockets and to the reabsorption of the alveolar bone. This can also result in tooth loss. By considering obesity as one of the systemic diseases which pre-establishes a series of complications and as a risk factor to other chronic pathologies, several studies have suggested that this condition is also an important risk factor for the development of periodontal diseases. It is known that the periodontal disease is immune-inflammatory when there is an imbalance between the immune host responses and the causative agents, and that it may be intensified when associated to systemic factors and conditions. This study aims at evaluating the effect of obesity induced by monosodium glutamate (MSG) over the periodontal tissues of rats having induced periodontitis. In this study, 33 rats were divided, initially, into two groups which were submitted to intradermal injections in the cervical region using 1,25g/kg/day of saline solution (group CON), and 1,25g/kg/day of MSG solution (group B), in their first 5 days of life. At 70 days, the periodontal disease was induced with the placement of ligatures in first inferior premolars of both sides of animals. This served as a gingival irritation for 30 days, and provided the cumulus of bacterial plaque, and consequently, the development of periodontal disease. After this procedure, the animals were sub-divided into 4 groups: control group without ligatures (CON); control group with ligatures (CONLIG); obese without ligature (OB), and obese with ligature (OBLIG). At 100 days, the rats were weighed and measured related to the naso-anal length in order to determine the Lee index. Through the vaginal cytology, the female rats which were in proestrus in their estrous cycles were euthanized. After that, the perigonadal and retro perigonadal fats were collected and weighted. It was also collected blood from the right brain stem. The conditions of the estradiol and progesterone were determined by using specific kits. The left and right hemi mandibles were withdrawn and submitted to a radiographic and histological analysis, respectively. A sample of the gingival tissue was collected in order to dosage the cytokines. The data were analyzed and evaluated through the ANOVA and Tukey. Obesity was confirmed by Lee index and by retroperitoneal and perigonadal fat (p<0.05). At the radiographic analysis, it was verified the efficacy of the induction of periodontal diseases, showing the insertion loss in the groups submitted to the experimental periodontitis, with an alveolar bone loss smaller in the group OBLIG when compared to the group CONLIG (p<0.05). This was also proved by the histological analysis. By analyzing the gingival tissue, no differences between CONLIG and OBLIG groups were found. In the hormonal analysis, the concentrations of LH and FSH were reduced to the OB and OBLIG groups. According to the results, it is possible to suggest that the obesity model may have some protector effect over the alveolar bone loss in the cases of induction of periodontitis. Such condition also may interfere negatively in the plasmatic concentrations of some female sexual hormones / Doença periodontal trata-se de uma das doenças orais mais importantes no mundo. Sua progressão ocorre devido a uma combinação de fatores que atingem os tecidos de sustentação dos dentes, levando à formação de bolsas periodontais e indução de reabsorção do osso alveolar, podendo resultar em perdas dentárias. Considerando a obesidade como uma doença sistêmica, que predispõe o indivíduo a uma série de complicações e sendo citada como um fator de risco para várias patologias crônicas, diversos estudos têm sugerido que essa condição vem se revelando como um importante fator de risco também para o desenvolvimento da doença periodontal. Sabendo-se que a doença periodontal é imunoinflamatória, podendo ser expressa quando ocorrer um desequilíbrio entre a resposta imune do hospedeiro com o agente causador e que ela pode ser exacerbada quando associada a fatores ou condições sistêmicas, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da obesidade induzida por glutamato monossódico (MSG) sobre os tecidos periodontais de ratas com periodontite induzida. Para a realização deste estudo, 33 ratas foram divididas inicialmente em dois grupos que foram submetidas a injeções intradérmicas na região cervical de 1,25g/kg/dia de solução salina (grupo CON) e 4g/kg/dia de solução de MSG (grupo OB), nos primeiros 5 dias de vida. Aos 70 dias, foi induzida a doença periodontal com a colocação de ligadura nos 1os molares inferiores de ambos os lados dos animais, que atuou como irritante gengival por 30 dias, favorecendo o acúmulo de placa bacteriana e consequente desenvolvimento da doença periodontal. Após esse procedimento, os animais foram subdivididos em 4 grupos: grupo controle sem ligadura (CON); grupo controle com ligadura (CONLIG); obeso sem ligadura (OB), obeso com ligadura (OBLIG). Aos 100 dias de vida, as ratas foram pesadas e mensurado o comprimento nasoanal para determinação do índice de Lee. Através da citologia vaginal as ratas que se encontravam em proestro do ciclo estral foram sacrificadas. Após a eutanásia, as gorduras perigonadal e retroperitonial foram coletadas e pesadas, também foi coletado sangue do tronco cerebral direito e as concentrações de estradiol e progesterona foram determinadas utilizando-se kits específicos. As hemimandíbulas direita e esquerda foram coletadas e submetidas à análise radiográfica e histológica, respectivamente, bem como a remoção de uma amostra do tecido gengival para a dosagem de citocinas. Os dados obtidos foram analisados e avaliados através dos testes Anova e Tukey. A obesidade foi confirmada pelo índice de Lee e pelas gorduras retroperitonial e perigonadal (p< 0,05). Na análise radiográfica, verificou-se a efetividade da indução da doença periodontal, mostrando a perda de inserção nos grupos submetidos a periodontite experimental, com perda óssea alveolar menor no grupo OBLIG quando comparado ao grupo CONLIG (p<0,05), fato esse também comprovado pela análise histológica. Ao analisar o tecido gengival, não foram encontradas diferenças entre os grupos CONLIG e OBLIG. Na análise hormonal, as concentrações de LH e FSH estavam reduzidas nos grupos OB e OBLIG. De acordo com os resultados encontrados, é possível sugerir que o modelo de obesidade pode exercer efeito protetor sobre a perda óssea alveolar nos casos de periodontites induzidas. Tal condição também pode interferir negativamente nas concentrações plasmáticas de alguns hormônios sexuais femininos.

O objetivo deste estudo foi avaliar os parâmetros clínicos periodontais: profundidade clínica de sondagem, nível clínico de inserção e sangramento a sondagem e os níveis de IL-17, M-CSF, GM-CSF, MCP-1, ICAM-1 IL-8, IL-10, IL-1?, TNF-?, IL-4 no fluido gengival de pacientes portadores de periodontite agressiva, comparando esses valores aos dados obtidos de sujeitos periodontalmente saudáveis, além de comparar os dados clínicos e imunológicos iniciais aos obtidos após um ano de tratamento nos pacientes com periodontite agressiva. Foram selecionados 37 pacientes portadores de periodontite agressiva e oito pacientes periodontalmente saudáveis, utilizados como grupo controle. Após a realização do exame clínico periodontal em todos os dentes, foi escolhido um sítio profundo de cada paciente com paeriodontite e um sítio raso dos pacientes saudáveis para coleta do fluido gengival. Todos os pacientes receberam tratamento periodontal que consistiu de orientação de higiene bucal, raspagens, remoção de fatores de retenção do biofilme bacteriano, polimento e uso de antibióticos. As amostras obtidas foram processadas e analisadas com um painel de 10 citocinas através de um ensaio multiplex. As análises estatísticas mostraram que não houve diferença estatisticamente significante entre os doentes e os saudáveis em relação a GM-CSF, IL-4, IL-8 e MCP-1. Quando foi feita a comparação longitudinal dos pacientes com periodontite agressiva, houve aumento após o tratamento para GM-CSF, ICAM-1, IL-4, IL-10, IL-17, MCP-1 e TNF-?. Com isso, pode-se concluir que mesmo após o tratamento periodontal com consultas trimestrais de manutenção e melhora dos parâmetros clínicos nos pacientes com PA que tinham um baseline mais inflamado, foi observado que alguns biomarcadores continuaram elevados, o que pode significar que esses pacientes continuam a apresentar atividade de doença ou que alguns desses biomarcadores não têm significância clínica para esses pacientes. / The aim of this study was to evaluate the periodontal clinical parameters: clinical probing depth, clinical attachment level and bleeding on probing and the IL-17, M-CSF, GM-CSF, MCP-1, ICAM-1, IL-8, IL-10, IL-1?, TNF-? and IL-4 levels in gingival crevicular fluid of aggressive periodontitis subjects, comparing these values with some data obtained from periodontal healthy patients, and also comparing clinic and immunologic initial data with the obtained after one year of treatment of aggressive periodontitis. The sample had 37 patients with aggressive periodontitis and 8 subjects clinically healthy, as control group. After the full periodontal examination, each patient with periodontitis had a deep site chosen, and a shallow site of the healthy ones, for collecting gingival fluid. All patients received periodontal treatment with oral hygiene, scaling, removal of retention factors, polishing and antibiotics. The obtained samples were processed and analyzed with a panel of 10 cytokines through a multiplex test. The statistical analyzes showed that there was no significant statistical difference between subjects with PA and healthy subjects with regard to GM-CSF, IL-4, IL-8 and MCP-1 levels.When longitudinal comparison of the subjects was made, it was noted some increase for GM-CSF, ICAM-1, IL-4, IL-10, IL-17, MCP-1 and TNF-?. Then, it can be concluded that, even after the periodontal treatment with trimestral maintenance and improvement on the clinical parameters, some biomarkers are still elevated, what can mean one of those possibilities: or the patients are still presenting some activity of the disease, or that some of these biomarkers don\'t have any clinical significance for this patients.

Pacientes diabéticos apresentam maior severidade e prevalência de doenças periodontais. Em ratos diabéticos, a doença periodontal induzida com ligaduras e inoculação de bactérias é mais severa. Contudo, na ausência de estímulos agressivos como ligaduras, a influência do diabetes sobre o periodonto de rato é pouco conhecida. O objetivo deste estudo foi avaliar a presença e a progressão da doença periodontal por longos períodos apenas com a indução do diabetes. O diabetes foi induzido em ratos Wistar (n=25) pela administração endovenosa de 42mg/kg de aloxana e, juntamente com os animais controle (n=25), foram analisados nos períodos de 1, 3, 6, 9 e 12 meses. Os animais foram sacrificados tendo suas hemimandíbulas removidas, radiografadas e submetidas aos procedimentos histotécnicos. A mensuração da altura da crista óssea e dos valores de pixel foi realizada pelo programa ImageJ em radiografias previamente escaneadas. A altura da crista óssea nos animais diabéticos foi significativamente menor em relação ao grupo controle nos tempos de 3, 6, 9 e 12 meses (p<0,05 ANOVA). Contudo, não foram observadas diferenças na média dos valores de pixel entre os grupos controle e diabético em tempos correspondentes (p<0,05 ANOVA). A análise histológica apresentou redução na densidade em volume da fibras colágenas, fibroblastos e vasos sangüíneos. Observou-se aumento dos osteoclastos e células inflamatórias (p<0,05 ANOVA). Além disso, cáries rampantes foram detectadas no grupo diabético. Os resultados sugerem que o diabetes sem reposição hormonal, mesmo na ausência de fatores locais, promove alterações teciduais características do desenvolvimento da doença periodontal em ratos. Assim, o diabetes pode ser considerado como agente responsável pela indução, progressão e manutenção da doença periodontal em ratos. / Periodontal disease in diabetic patients present higher severity and prevalence, and increased severity of ligature-induced periodontal disease is verifyed in diabetic rats. However, in the absence of aggressive stimuli such as ligatures, the influence of diabetes over periodontal tissues of rat is unknown. The aim of this study was evaluate the stablishment and progression of periodontal diseases in rats only with the induction of diabetes. Diabetes was induced in Wistar rats (n=25) by endovenous administration of 42mg/kg of alloxan, and together with control animals (n=25), were analyzed at 1, 3, 6, 9 and 12 months after diabetes induction. The animals were sacrificed and the jaws removed, radiographed and submitted to the histopathological procedures. The measurement of alveolar bone crest height and pixel values was carried through the ImageJ program in scanned radiographs. It was observed a reduction in the height of the bone crest in the diabetic animals at the times of 3, 6, 9 and 12 months (p<0,O5 ANOVA). However, no differences in the average of pixel values between control and diabetic groups were observed (p<0,O5 ANOVA). The histopathological analyses of the diabetics animals showed reduction in collagen fibers, fibroblasts and blood vessels. In addition, it was observed an increase in in the number of osteoclasts and inflammatory cells (p<0,O5 ANOVA). Moreover, severe caries were detected in the diabetic group.The results suggest that diabetes without hormonal reposition, and in the absence of aggressive factors as ligatures, result in tissular alterations typical of periodontal diseases. In this way, diabetes can be considered the agent responsible for the induction, maintenance and progression of the periodontal disease.

A hipertensão e a obesidade têm sido descritas como graves problemas de saúde pública, tendo uma prevalência de obesidade no Brasil de 20%. Além de causar problemas sistêmicos, a hipertensão e a obesidade podem afetar as condições bucais. Diante disso, o objetivo deste estudo foi identificar doença periodontal em indivíduos obesos hipertensos e não hipertensos, no pré e pós-cirurgia bariátrica (CB), com seguimento de 12 meses. A amostra foi composta por 70 indivíduos distribuídos em dois grupos: grupo obeso com hipertensão (G01=35) e grupo obeso sem hipertensão (G02=35), ambos os grupos foram avaliados no pré e pós cirurgia bariátrica. A avaliação antropométrica dos indivíduos foi realizada através do IMC e circunferência da cintura. O sangramento a sondagem foi realizado por meio do índice de sangramento gengival, da profundidade de sondagem e do nível de inserção clínica e recessão gengival. Foi analisado o fluxo salivar não estimulado e estimulado para mensurar o volume (mL/min). Foram adotados os testes de Kruskal- Wallis, Mann-Whitney, Qui-quadrado e Exato de Fisher (p<0,05). O gênero feminino foi o mais prevalente na amostra avaliada, em ambos os grupos avaliados (G01=85,3%; G02=80%). O modelo ajustado utilizando regressão logística mostrou que apenas a idade (p<0,0001) e a recessão gengival (p=0,0320) foram determinantes na diferença entre os hipertensos e não hipertensos. O período de 12 meses (p=0,913), sexo (p=0,608), IMC (p=0,412), RCQ (p=0,577), profundidade média de bolsa (p=0,114), recessão máxima (p=0,236), escore de recessão (p=0,319), nível de inserção periodontal (p=0,486), escore de nível de inserção periodontal (p=0,074), cálculo (p=0,745), sangramento (p=0,172), fluxo salivar não estimulado (p=0,980), fluxo salivar estimulado (p=0,964) e escolaridade (p=0,448), não foram significativos. Concluiu-se que indivíduos obesos mórbidos com hipertensão arterial apresentam pior condição periodontal e que a CB não interferiu negativamente na saúde periodontal, dentro de cada grupo. / Hypertension and obesity have been described as serious public health problems as they have increased in alarming proportions both globally and nationally, with a prevalence of obesity in Brazil of 20%. In addition to causing systemic problems, hypertension and obesity can affect oral conditions. Therefore, the objective of this study was to identify periodontal disease in hypertensive and non-hypertensive obese individuals, before and after bariatric surgery (CB), with a follow-up of 12 months. The sample consisted of 70 individuals divided into two groups: obese group with hypertension (G01 = 35) and obese group without hypertension (G02 = 35), both groups were evaluated before and after bariatric surgery. The anthropometric evaluation of the individuals was performed through BMI and waist circumference. Bleeding was performed by means of gingival bleeding index, depth of probing and level of clinical insertion and gingival recession. The non-stimulated and stimulated salivary flow was analyzed to measure the volume (mL / min). The Kruskal-Wallis, Mann-Whitney, Chi-square and Fisher Exact tests were used (p <0.05). The female gender was the most prevalent in the sample evaluated, in both groups (G01 = 85.3%, G02 = 80%). The adjusted model using logistic regression showed that only age (p <0.0001) and gingival recession (p = 0.0320) were determinants of the difference between hypertensive and non-hypertensive individuals. (P = 0.368), mean BMI (p = 0,412), BMI (p = 0,412), WHR (p = 0.577), mean bursal depth (p = 0,114), maximum recession (P = 0.745), bleeding (p = 0,172), non-stimulated salivary flow (p = 0,319), periodontal insertion level (p = 0,419), periodontal insertion level P = 0.980), stimulated salivary flow (p = 0.964) and schooling (p = 0.448), were not significant. It was concluded that morbidly obese individuals with arterial hypertension present worse periodontal conditions and that CB did not negatively affect periodontal health within each group.

O objetivo geral deste estudo foi monitorar a atividade da doença periodontal e sugerir potenciais biomarcadores salivares relacionados a esta atividade em pacientes com periodontite crônica associada ou não Diabetes mellitus tipo 2, a partir da avaliação do perfil da expressão gênica de sítios periodontais progressivos e de proteínas inflamatórias salivares. Foram incluídos 56 pacientes, sendo 21 com periodontite crônica (DP), 20 com periodontite crônica associada ao Diabetes mellitus tipo 2 (DP+DM) e 15 periodontal e sistemicamente saudáveis (controle). Foi realizado exame radiográfico antes e dois meses após a terapia periodontal básica, e posteriormente foi feita a subtração radiográfica a partir dos pares das radiografias. As medidas das áreas com perda de densidade foram registradas. Coleta de saliva não estimulada, verificação da hemoglobina glicada (HbA1c) e exame clínico periodontal profundidade de sondagem (PS), nível clínico de inserção relativo (NCIR), sangramento à sondagem (SS) e índice de placa (IP) também foram realizados antes e dois meses após a terapia periodontal básica. Os sítios periodontais com perda de inserção progressiva 1 mm na reavaliação foram considerados ativos de acordo com uma adaptação do método de tolerância. Biópsias de tecido gengival de sítios ativos e inativos com parâmetros clínicos semelhantes foram analisadas com real time PCR Array para análise do perfil de expressão gênica da resposta imune-inflamatória. As amostras de saliva foram submetidas ao imunoensaio Multiplex Cytokine Profiling para análise de expressão de proteínas. No grupo DP, 9% dos sítios foram classificados como ativos e no grupo DP+DM, 12% (p > 0,05). A média de perda de inserção clínica foi maior no grupo DP+DM (1,34 mm) em relação ao grupo DP (1,21 mm) (p < 0,05). Houve correlação entre a perda de inserção clínica e a área da perda de densidade radiográfica tanto nos sítios ativos do grupo DP (R = 0,79; p = 0,001), quanto do grupo DP+DM (R = 0,86; p < 0,001). Ambos os grupos DP e DP+DM apresentaram um perfil down-regulated em relação aos pacientes saudáveis (grupo controle). Quando comparado o grupo DP+DM ao grupo DP, pacientes diabéticos apresentaram um perfil up-regulated. Sítios ativos do grupo DP mostraram nove genes (ABCF1, CD40LG, IL10, IL5, CCR2, CCR4, CCR7, CCL18 e CXCL1) diferencialmente expressos (p < 0,05) com um perfil up-regulated. Sítios ativos do grupo DP+DM mostraram seis genes (LTA, CXCR1, CCL19, CCL8, CCL17 e CXCL12) diferencialmente expressos (p < 0,05) com um perfil up-regulated. Após a terapia periodontal básica, houve uma significante redução de algumas proteínas salivares (IL1b, IL1ra, IL10, IL17, TGFb, IL8, eotaxin e MCP-3) nos grupos DP e DP+DM, mas sem diferença estatisticamente significante (p > 0,05). Concluindo, este estudo foi capaz de monitorar a atividade da doença periodontal em pacientes com e sem diabetes após a terapia periodontal básica; foi possível identificar genes diferencialmente expressos em sítios ativos de ambos os grupos, que podem ser úteis na indicação de potenciais biomarcadores para diagnóstico da doença periodontal na fase ativa; as proteínas salivares analisadas mostram uma tendência em diferenciar o padrão de saúde e de doença, podendo ser futuramente utilizadas como potenciais biomarcadores de periodontite associada ou não ao diabetes. / The overall aim of this study was to monitor the periodontal disease activity and suggest potential salivary biomarkers related to this activity in chronic periodontitis patients with or without type 2 Diabetes mellitus (DM), based on the evaluation of gene expression profile of progressive periodontal sites and salivary inflammatory proteins. Fifty-six patients were enrolled, 21 with chronic periodontitis (PD group), 20 with chronic periodontitis and DM (PD+DM group) and 15 periodontal- and systemically healthy (control). Radiographs were taken before and two months after non-surgical periodontal therapy, and radiographic subtraction was performed from pairs of these radiographs. Measurements of the areas with density loss were recorded. Unstimulated saliva collection, glycated hemoglobin (HbA1c) measurement and periodontal examination probing pocket depth (PPD), relative clinical attachment level (rCAL), bleeding on probing (BOP) and plaque index (PI) were also conducted before and two months after non-surgical periodontal therapy. The periodontal sites with progressive attachment loss 1 mm at the recall visit were considered active sites according to the adapted method of tolerance. Gingival biopsies of active and non-active sites with similar clinical parameters were harvested for gene expression analysis of the immune-inflammatory response with Real Time PCR Array. Saliva samples were analyzed by Multiplex Cytokine Profiling Immunoassay for analysis of protein expression profile. In PD group, 9% of the sites were classified as active and in PD+DM group, 12% (p > 0.05). The clinical attachment loss mean was higher in the PD+DM group (1.34±0.23 mm) compared to the PD group (1.21±0.16 mm) (p < 0.05). There was a correlation between clinical attachment loss and darkened radiographic areas in active sites of the PD group (R = 0.79, p = 0.001) and PD+DM group (R = 0.86, p < 0.001). Both PD and PD+DM groups showed a down-regulated profile compared to healthy subjects (control group). When compared PD group to PD+DM, patients with diabetes had an upregulated profile. Active sites of the PD group showed nine genes (ABCF1, CD40LG, IL10, IL5, CCR2, CCR4, CCR7, CCL18 and CXCL1) differentially expressed (p < 0.05) with an up-regulated profile. Active sites of the PD+DM group showed six genes (LTA, CXCR1, CCL19, CCL8, CCL17 and CXCL12) differentially expressed (p < 0.05) with an up-regulated profile. After non-surgical periodontal therapy, there was a significant reduction of clinical parameters and HbA1c levels (p < 0.05), accompanied by a reduction of some salivary proteins (IL1b, IL1ra, IL10, IL17, TGFb, IL8, eotaxin and MCP-3) in groups PD and PD+DM, but without statistically significant difference (p > 0.05). In conclusion, this study was able to monitor the periodontal disease activity in periodontal patients with or without diabetes after the non-surgical periodontal therapy; it was possible to identify genes differentially expressed in active sites from both groups, which may be considered useful in indicating potential biomarkers for the diagnosis of active periodontal disease; salivary proteins show a trend in distinguishing the standard of health and disease and may be used in the future as potential biomarkers of periodontitis with or without diabetes.

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da terapia fotodinâmica (TFD) como adjuvante à terapia periodontal (TP), no preparo básico e na fase de terapia periodontal de suporte (TPS), de pacientes diabéticos tipo 2. O estudo foi divido em duas fases (fase 1 tratamento e fase 2 terapia de suporte). Foram selecionados 45 pacientes diabéticos tipo 2, dos quais 30 receberam a TP associada à TDF (Grupo G1) e 15 realizaram TP. Foi prescrita antibioticoterapia (doxiciclina 100mg/dia) por 14 dias a todos os pacientes de ambos os grupos. Foram avaliados no exame inicial e 3 meses após a terapia os seguintes parâmetros: Índice de Placa (IP), Profundidade de Sondagem (PS), Nível de Inserção Clínica (NIC),Sangramento à Sondagem (SS), Supuração (SUP), Hemoglobina Glicosilada (HbA1c), Glicemia em Jejum (GJ). Foi coletado um pool de amostras de fluido gengival e biofilme subgengival para análise da interleucina I beta (IL1-&beta;) e exame microbiológico. Os resultados da fase 1 serviram como dados iniciais para fase 2. Nesta fase 2, o Grupo G1 foi subdividido em dois grupos de 15 indivíduos: G1R onde foi realizada raspagem e alisamento; e G1-F onde foi realizada somente aplicação de PDT. O grupo G2 (n=15) recebeu raspagem e alisamento radicular. As mesmas avaliações da fase 1 foram feitas após 3, 6 e 9 meses da realização da TPS. Para avaliações entre dois grupos o teste de Mann-Whitney foi aplicado, enquanto para intra-grupos foi empregado o Wilcoxon signed rank test. Para a avaliação intra-grupo entre os tempos 3, 6, 9 e 12 meses foi utilizado o teste de Friedman. Foi admitido o nível de significância de 5%. Na fase 1 não houve diferenças significativas entre os grupos para os parâmetros avaliados (P>0,05). A análise intra-grupos demonstrou uma redução significativa da HbA1C (8,5 ± 0,9 / 7,5 ± 0,7) (P<0,01) e GJ (163,53 ± 68,04 / 154 ± 62,45) (P<0,01) para o grupo G1. Houve uma redução significativa das bactérias do complexo vermelho (P. gingivalis, T. forsythia e T. denticola) (P<0,05). Na fase 2 não houve diferenças entre grupos para os parâmetros avaliados. Houve redução significativa do número bolsas entre 4, 5 e &ge; 6 mm e aumento de sítios &le; 3 mm entre o tempo de 3 meses e as demais reavaliações (P<0,05). Houve redução da IL1-&beta; entre 3 e 6 meses para o grupos G1- R (P<0,05). Concluiu-se que a aplicação da TFD como adjuvante à terapia periodontal, em uma única aplicação, não foi capaz de promover efeitos adicionais sobre os parâmetros clínicos, laboratoriais e microbiológicos avaliados, bem como sobre os níveis de IL1-&beta; presentes no fluido gengival. A aplicação da TFD na fase de TPS promoveu resultados semelhantes em relação aos grupos G1-R e G2 para todos os parâmetros avaliados. / The aim of this study was to evaluate the effectiveness of photodynamic therapy (PDT) as an adjunctive treatment to non-surgical periodontal therapy (PT) and periodontal supportive therapy (PST) in chronic periodontitis patients with type 2 diabetics. The study was conducted into two phases. Phase 1: Forty-five diabetics type 2 patients were selected and randomly treated with scaling and root planing (SRP) followed by a single episode of PDT (G1 group/n=30) or SRP alone (G2 group/n=15). Plaque Score (PS), Probing Depth (PD), Clinical Attachment Level (CAL), Bleeding Score (BS), Suppuration (S), Glycated Hemoglobin (HbA1c), and Fasting Glucose (FG) levels were measured at baseline and 3 months after therapy. Samples of subgingival biofilm and crevicular fluid were collected for microbiological and IL1-&beta; analysis respectively. Phase 2: Group G1 was subdivided in two subgroups: G1-R treated with SRP alone (n=15), and G1-F treated with PDT alone (n=15). G2 group was treated with SRP alone (n=15). The results of phase 1 were based on baseline to phase 2 analysis. The same parameters of phase 1 were measured at 3, 6, 9, and 12 months. Mann-Whitney test was applied to assess the differences between groups and Wilcoxon signed rank test for intra-groups differences. Friedman test was applied to assess the differences among 3, 6, 9, and 12 months. A significance level of 5% was established. In phase 1, no significant statistical differences were observed to any parameter evaluated between groups (P<0.05). Intra-groups analysis showed a significant reduction of HbA1C (8.5 ± 0.9 / 7.5 ± 0.1) (P<0.01), and FG (163.53 ± 68.04 / 154 ± 62.45) (P<0.01) for G1 group. There was also a significant reduction of bacterial red complex (P. gingivalis, T. forsythia and T. denticola) (P<0,05). In phase 2, there were no differences between groups for the parameters assessed. There was a significant reduction in the number of sites of 4 and 5 mm and &ge; 6 mm and increase of the number of sites with &le; 3 mm between 3 months and other times of revaluations (P<0,05). There was a reduction of IL1-&beta; between 3 and 6 months for the G1-R group (P<0,05). It can be concluded that the adjunctive application of a single episode of PDT to scaling and root planing did not show additional improvement in non-surgical periodontal therapy. The PDT in periodontal maintenance showed similar results in relation to the groups G1 and G2- R for all parameters assessed. Therefore, PDT can be used as a substitute of SRP during PST when mechanical instrumentation for plaque and calculus removal is not mandatory.

Orientador: Ana Paula de Souza Pardo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-24T15:42:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Planello_AlineCristiane_D.pdf: 1888206 bytes, checksum: 00e43f6f072e313fafc04b5a4406af8b (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: A inflamação crônica é conhecida por induzir alterações epigenéticas, em particular, alterações na metilação do DNA. A ilha CpG do gene SOCS1 tem sido observada hipermetilada em diferentes tipos de câncer e em doenças associadas à inflamação. No entanto, pouco se sabe sobre essas alterações epigenéticas associadas à periodontite crônica. A fim de abordar essa questão, nós investigamos a metilação do DNA no exon 2 da Ilha CpG do SOCS1 e sua relevância funcional para a periodontite crônica em 90 amostras de tecidos gengivais usando a técnica de comparação de melting sensível a metilação (MS-HRM). Nós observamos que a região analisa se encontra hipermetilada quando comparada com amostras de indivíduos saudáveis. Alterações na expressão no SOCS1 não foram encontradas. Posteriormente foram realizadas investigações da sequencia do SOCS1 que revelaram marcadores de enhancer na região. Analise de sítios hipersensíveis a Dnase I (Dnase I hipersensitivity site ¿ DHS), que são associados com região regulatória, mostraram um DHS dentro do exon2 do SOCS1, que cobre a mesma região estudada na técnica MS-HRM. Esse DHS correlacionou-se com vários promotores na vizinhança do SOCS1, sendo considerados os genes alvos. Fragmentos desmetilados e metilados cobrindo a região encontrada com diferença de metilação no SOCS1 foram clonados em um plasmídeo repórter que possui um promotor e é livre de qualquer CpG.. Os fragmentos desmetilados aumentaram a atividade da luciferase, demonstrando a atividade de enhancer da região. Já os fragmentos metilados, além de não exercerem atividade de enhancer, foram capazes de reprimir a função do promotor. Corroborando essas informações, foi observada correlação negativa entre a metilação no SOCS1 nas amostras com inflamação e a expressão de genes. Os dados apresentados indicam que a função principal da metilação do DNA em um enhancer é controlar sua função regulatória e consequentemente os níveis de transcrição dos genes alvo, o que pode ser evidenciado pela hipermetilação do exon do SOCS1 na inflamação crônica / Abstract: Chronic inflammation is known to induce epigenetic alterations, in particular alterations in DNA methylation. SOCS1 CpG island (CGI) has been demonstrated hypermethylated in many types of cancer and inflammation-associated diseases. However, little is known about the epigenetic changes associated with chronic periodontitis. In order to address this question, we investigated DNA methylation of oxon 2 of SOCS1 CGI and its functional relevance to chronic periodontitis in 90 gingival tissue samples using methylation sensitive high resolution melting (MS-HRM). We found this region to be hypermethylated when compared with healthy controls. No changes in gene expression were observed. Further investigations of SOCS1 sequence showed enhancer marker at SOCS1 region. Correlation analysis of Dnase I hypersensitivity site (DHS), which is associated with regulatory region, showed a DHS inside exon2 SOCS1 correlated with several promoter in the neighboring region, considered target genes. Fragments harboring the SOCS1 region found to be differentially methylated, were cloned into a CpG free-Luc reporter vector just upstream the promoter. Unmethylated and methylated fragments were tested. The unmethyalted fragment enhanced the promoter activity of the promoter. Strikingly, not only the exon2 of SOCS1 CGI presented enhancer activity but also it had its activity disrupted by DNA methylation. Accordingly, negative correlation between SOCS1 methylation and expression of neighboring genes was observed in chronic inflammation. The data indicate that the primary function of enhancer DNA methylation is to control its regulatory function and the transcription levels of enhancer target genes, which can be evidenced by exon 2 SOCS1 CGI hypermethylation on chronic inflammation / Doutorado / Histologia e Embriologia / Doutora em Biologia Buco-Dental