Orientadores: Pedro Luiz Rosalen, Francisco Carlos Groppo, Toshihisa Kawai / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-08T05:44:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Franco_GilsonCesarNobre_D.pdf: 2005090 bytes, checksum: e5ea5ec57b82c8e2fa17e200ad139928 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Doxiciclina (Dox) é um antimicrobiano pertencente à família das tetraciclinas com um amplo espectro de ação contra bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. Além de suas propriedades antimicrobianas, Dox é atualmente empregada na periodontia como um modulador da resposta do hospedeiro (MRH), ao inibir a atividade da enzima metaloproteinase de matriz (MMP), a qual está relacionada ao processo de destruição tecidual. Neste contexto, este trabalho teve os seguintes objetivos: 1-determinar os parâmetros farmacocinéticos e integrar os índices PK/PD da Dox para o plasma, fluido gengival (FG) e saliva; 2-analisar os efeitos in vitro e in vivo da Dox sobre a osteoclastogênese com a finalidade de elucidar possíveis propriedades biológicas adicionais deste fármaco como MRH. Para a análise farmacocinética, 12 voluntários receberam dose oral única de 100 mg de Dox. Sangue, FG e saliva foram coletados em tempos pré-determinados e a concentração da Dox nestes fluidos foi determinada por bioensaio. A análise dos principais índices PK/PD da Dox foi realizada considerando o CIM para P. gingivalis. Para o segundo objetivo, o efeito da Dox sobre os processos de diferenciação e ativação osteoclástica foi verificado, respectivamente, pela contagem de células TRAP+ multinucleadas geradas a partir de células precursoras estimuladas com sRANKL na presença ou ausência de Dox e pela análise das lacunas de reabsorção formadas por estas células, quando cultivadas sobre discos de dentina. In vivo, o efeito da Dox sobre a osteoclastogênese foi determinado através da indução deste processo em calvária de camundongo. Solução de sRANKL/LPS foi injetada na região da calvária e os animais receberam, por gavagem, Dox ou placebo diariamente. Após 10 dias, a calvária foi removida para análise histoquímica. Em acréscimo, a atividade da Dox sobre a expressão de genes responsáveis pelos processos de diferenciação e ativação osteoclástica foi analisada por RT-PCR. Durante os experimentos in vitro e in vivo, a produção e atividade da MMP foram verificadas através de Western-blot e Zimograma respectivamente. Os resultados demonstraram que as maiores concentrações de Dox foram observadas no plasma, seguido pelo FG e saliva. A análise dos índices PK/PD da Dox indicou que a dose de 100 mg foi insuficiente para se obter os valores ideais antimicrobianos preconizados na /CIM. Os experimentos in vitro e in vivo sobre o efeito da Dox como MRH demonstraram que este fármaco inibiu os processos de diferenciação e ativação dos osteoclastos. Dox também modulou a expressão de proteínas diretamente relacionadas a osteoclastogênese, incluindo TRAP, Catepsina K e c-Myc. Finalmente, embora a síntese da MMP não tenha sido afetada, a atividade da MMP foi reduzida na presença de Dox. Portanto, os resultados do presente estudo sugerem que uma dose inicial maior do que 100 mg é necessária para alcançar o valor preconizado para ASC/CIM e Cmax/CIM, com a finalidade de se obter os melhores resultados clínicos antimicrobianos. A análise da Dox como MRH indicou que este fármaco pode atuar neste processo não somente pela sua capacidade de inativar a MMP, e sim, por apresentar a propriedade de inibir a diferenciação e ativação osteoclástica, incluindo a modulação de sua expressão gênica. literatura para os parâmetros ASC/CIM e Cmax / Abstract: Doxycycline (Dox), a member of the tetracycline family, is an antimicrobial agent with a broad-spectrum of activity against Gram-positive and Gram-negative bacteria. In addition to its antimicrobial properties, Dox is used in the treatment of periodontal diseases as a host response modulator by inhibiting the activity of an important enzyme, matrix metalloproteinase (MMP), which is related to the process of tissue destruction. In this context, this study had the following aims: 1-to determine the pharmacokinetic parameters of Dox and to integrate the PK/PD indices for plasma, gingival crevicular fluid (GCF) and saliva; 2-to analyze the effects in vitro and in vivo of Dox on the osteoclastogenesis and on the osteoclast activation in order to elucidate additional biological properties of Dox on the host response modulation (HRM). Twelve volunteers received single oral administration of Dox (100 mg). Blood, GCF and saliva were collected and the concentrations were measured by bioassay technique. The PK/PD analyses were carried out using the MIC for P. gingivalis. For the second objective, the effect of Dox on the osteoclast differentiation and activation processes was determined, respectively, by the counting of TRAP+ multinuclear cells derived from osteoclast precursory cells sRANKL-stimulated in the presence or absence of Dox and by the analysis of the resorption areas formed by these cells when cultured on dentin discs. In vivo, Dox¿s effect on the osteoclastogenesis was verified using the model of osteoclastogenesis induction in mouse calvaria. sRANKL/LPS was injected in the supra-calvaria area and the animals received Dox or placebo daily by gavage. After the experimental period of 10 days, the calvariae were removed for histochemistry analyses. In addition, the effect of Dox on the expression of genes related to the osteoclast differentiation and activation processes was carried out using RT-PCR technique. MMP production and activity were ensured during in vitro and in vivo experiments by Western-blot and Zymography, respectively. The results demonstrated that Dox achieved the highest concentration in the plasma, following by GCF and saliva. PK/PD analyses showed that the dose of 100 mg was insufficient to get the antimicrobial levels indicated in the literature for AUC/MIC and Cmax/MIC indices. In vitro and in vivo studies of Dox¿s effects on the HRM demonstrated that this drug could inhibit the osteoclast differentiation and activation process. Dox also showed an important property of down-regulation in the expression of proteins directly related to osteoclastogenesis, including TRAP, Cathepsin K and c-Myc. Finally, although Dox did not affect the expression of MMP protein, MMP activity was remarkably decreased by Dox. Therefore, the present study suggests that higher doses than 100 mg would be necessary to obtain effective antimicrobial levels and the effect of DOX on the HRM can be due to not only by MMP inhibition but also by the direct effect on RANKL-mediated osteoclast differentiation and activation, including its gene regulation / Doutorado / Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica / Doutor em Odontologia

Orientador: Antonio Wilson Sallum / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-08T09:57:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bezerra_BeatrizdeBrito_M.pdf: 4030297 bytes, checksum: ff82a7914f5c90084725c76037c4f132 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar histometricamente a influência de uma dieta hiperlipídica sobre a evolução da doença periodontal experimental em ratos. Trinta e dois ratos machos adultos, da linhagem Wistar, fizeram parte do estudo e os mesmos foram aleatoriamente divididos em dois grupos: C (ração para animais de laboratório) e H (ração hiperlipídica). Uma ligadura de fio de algodão foi colocada ao redor do primeiro molar inferior esquerdo e o dente contra-lateral serviu como controle. Os animais foram sacrificados nos intervalos de 7, 14, 21 e 28 dias após a colocação da ligadura com o objetivo de avaliarmos a progressão da doença periodontal. As mandíbulas foram removidas para obtenção dos cortes histológicos dos primeiros molares. Análise histométrica foi realizada, com o auxílio do programa de avaliação de imagens ImagePro®, para quantificar a perda óssea na região da bifurcação através da contagem de pontos. No momento do sacrifício observamos um maior acúmulo de restos alimentares nos dentes com ligadura, independente da dieta, e também um maior acúmulo de tecido adiposo na região abdominal dos animais do grupo H, devido ao tipo de dieta ingerida por estes animais, que continha maior concentração de lipídeos. Os dados foram analisados com os testes ANOVA e de Tukey ao nível de significância de 5%. A análise intergrupos não revelou diferença estatisticamente significante na quantidade de perda óssea entre os diferentes intervalos de tempo (p>0,05) tanto nos dentes com ligadura quanto nos sem ligadura. A análise intragrupo, no entanto, mostrou maior perda óssea nos dentes que receberam a ligadura, comparados aos dentes sem ligadura (p<0,0001). Desta maneira podemos concluir que o consumo de uma dieta hiperlipídica não tem influência sobre a perda óssea resultante da periodontite induzida em ratos / Abstract: The aim of this study was to evaluate, histometrically, the influence of a hyperlipidic diet on the evolution of experimental periodontal disease. Thirty-two male Wistar rats were randomly assigned to two groups: C (commercial chow diet) and H (hyperlipidic diet). Cotton ligatures were placed around the left first mandibular molar and the contralateral tooth was used as a control. The animals were sacrificed on days 7, 14, 21 and 28 days after ligature placement for evaluation of periodontal disease progression. The specimens were routinely processed for serial decalcified sections and histometric analysis was performed to evaluate bone loss in the furcation area with the help of an image analysis software, ImagePro®. In the moment of the sacrifice it was noticed a greater accumulation food debris on the teeth with ligature of both groups, it was also noticed a greater accumulation of adipose tissue in group H, due to the kind of diet that the animals were fed, which has an elevated concentration of lipids. The data was analyzed using the ANOVA and Tukey¿s test at a significance level of 5%. Intergroup analysis did not show significant differences in relation to loss of bone volume for both the ligated and unligated teeth between time intervals (p>0.05). Intragroup analysis, however, showed a greater amount of bone volume loss in the ligated teeth than in the unligated ones (p<0.0001). I could be concluded that the consumption of a hyperlipidic diet does not influence bone loss in ligature-induced periodontal disease in rats / Mestrado / Periodontia / Mestre em Clínica Odontológica

O uso de ciclosporina A (CsA) tem sido associado com aumento na reabsorção óssea como efeito adverso. Porém, há controvérsia sobre quais mecanismos são responsáveis por esta associação. Objetivo: Este estudo investigou o efeito da exposição prévia a CsA sobre a expressão de RANK e perda óssea na periodontite experimental em ratos. Método: Quarenta ratos Wistar, com aproximadamente três semanas de idade, foram divididos em quatro grupos com dez animais cada: Grupo Controle (GC); Grupo CsA (GCsA), Grupo Ligadura (GL) e Grupo Ligadura e CsA (GCsAL). GCsA e GCsAL receberam doses diárias de CsA (10mg / kg) durante sessenta dias desde o início do experimento. Em GL e GCsAL, a ligadura foi colocada em torno do segundo molar superior direito, trinta dias após o início do experimento. Após sessenta dias os animais foram eutanasiados por perfusão cardíaca e as maxilas foram removidas e processadas para análise imunohistoquímica e histomorfométrica da remodelação óssea através da expressão da marcação do RANK (escore) e perda óssea mensurada da junção cemento-esmalte à crista óssea (&#956;m). Os dados foram analisados por Kruskal-Wallis ao nível de 5% de significância. Resultados: Os resultados da marcação de RANK não apresentaram diferença estatística significativa entre os grupos (p=0,122). Em relação à perda óssea, não foi observada influência significativa quanto à aplicação da CsA. GL (735,88 121,82) apresentou perda óssea significativamente superior (p=0,01) a GC (569,13 89,76) e, GCsAL (759,38 198,23) superior (0,001) a GCsA (410,90 105,95). Conclusão: Os resultados sugerem que a exposição prévia a CsA não influenciou a expressão de RANK ou a perda óssea na periodontite experimental em ratos. / The use of cyclosporin A (CsA) has been associated with increased bone resorption as adverse effect. However the mechanisms responsible for this association remains controversy. Aim: The study investigated the effect of prior exposure to CsA on expression of RANK and bone loss in experimental periodontitis in rats. Methods: Forty Wistar rats were divided into four groups with ten animals each: Control Group (CG) CsA group (GCsA), Group Ligation (GL) and Group ligated and CsA (GCsAL). GCsA and GCsAL received daily doses of CsA (10mg / kg) for sixty days from in the beginning of the experiment. In GL and GCsAL, ligature was placed around the upper right second molar, thirty days after in the beginning of the experiment. After sixty days the animals were euthanized by cardiac perfusion and the jaws were removed and processed for immunohistochemistry and histomorphometric analysis of bone remodeling through the expression of RANK marking (score) and bone loss measured from the cemento-enamel junction to bone crest (mm). Data were analyzed by Kruskal-Wallis test at 5% significance level. Results: The results of the marking of RANK showed no statistically significant difference between groups (p = 0.122). In relation to bone loss, there was no significant influence on the application of CsA. GL (735.88 121.82) had significantly higher bone loss (p = 0.01) GC (569.13 89.76) and GCsAL (759.38 198.23) higher (0.001) GCsA (410.90 105.95). Conclusions: The results suggest that prior exposure to CsA did not influence the expression of RANK in bone loss or periodontitis in rats.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / A periodontite à uma doenÃa caracterizada por infiltraÃÃo de leucÃcitos, perda de tecido conjuntivo e reabsorÃÃo Ãssea. Estatinas sÃo fÃrmacos amplamente usados para o tratamento da hiperlipidemia, com destaque à Atorvastatina (ATV), dada seus efeitos pleiotrÃpicos importantes, como atividade antiinflamatÃria e capacidade anabÃlica Ãssea, com potencial para modificaÃÃo do curso de doenÃas inflamatÃrias crÃnicas. O objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito antiinflamatÃrio da ATV, utilizando modelo de periodontite induzido por ligadura em ratos Wistar machos, distribuÃdos em grupos experimentais: controle (Salina a 0,9%), e 5 subgrupos (ATV 0,3; 1; 3; 9 ou 27 mg/kg), administrados por via oral, diariamente, 30 min antes da colocaÃÃo do fio de nÃilon 3.0 em torno dos segundos molares superiores esquerdos dos animais, durante 11 d, quando, entÃo, foram sacrificados, e os seguintes parÃmetros, analisados: 1) Perda Ãssea Alveolar (POA), avaliada atravÃs de estudos morfomÃtrico, histolÃgico e radiogrÃfico; 2) AvaliaÃÃo SistÃmica atravÃs de: a) Leucogramas realizados antes e apÃs a ligadura (6 h; 2, 7 e 11 d); b) VariaÃÃo de massa corpÃrea; c) AnÃlises hepÃticas e renais, por dosagens sÃricas bioquÃmicas e estudo histolÃgico; e d) AvaliaÃÃo sÃrica de Fosfatase Alcalina Ãssea (FAO). Os animais submetidos a 11 d de periodontite apresentaram intensa reabsorÃÃo Ãssea. Baixa dose de ATV (0,3 mg/kg) nÃo foi capaz de prevenir a POA (p>0,05), contudo, todas as demais (ATV 1, 3, 9 ou 27 mg/kg) foram, de forma significante, capazes de reduzir a POA em 35%, 39%, 53%, 56%, respectivamente. Tal inibiÃÃo foi corroborada pela anÃlise histopatolÃgica, onde se observou que a ATV (27 mg/kg) causou maior preservaÃÃo do tecido periodontal [Mediana: 1,5 (0-2)], quando comparada à Salina [Mediana: 3 (2-3)]. Adicionalmente, animais submetidos a 11 d de periodontite apresentaram reduÃÃo significante de densidade radiogrÃfica periodontal (58%). ATV (1, 3 ou 9 mg/kg) preservou tal densidade em 5%, 9% e 20%, respectivamente. O leucograma dos animais com periodontite apresentou pico de leucocitose na 6 h, mediado por neutrÃfilos, e nova leucocitose a partir do 7 d, à custa de mononucleares. ATV (27 mg/kg) foi capaz de reduzir a leucocitose, reduzindo o nÃmero de neutrÃfilos ou mononucleares, respectivamente (p<0,05), bem como foi capaz de reduzir a perda inicial de massa corpÃrea vista na periodontite. As anÃlises bioquÃmicas sÃricas e histolÃgicas de fÃgado e rins dos animais com 11 d de periodontite tratada (ATV 27 mg/kg) ou nÃo (Salina) nÃo apresentaram alteraÃÃes (p>0,05). Observou-se aumento nas variaÃÃes de dosagens sÃricas de FAO dos animais com 11 d de periodontite (Salina: 63,4Â10,8 U/l), enquanto que ATV (27 mg/kg) previniu tal aumento (13,6Â3,5 U/l) (p<0,05). Dessa forma, os resultados demonstram que o modelo de periodontite em ratos reproduziu os principais aspectos da doenÃa em humanos, e ATV reduziu a destruiÃÃo periodontal, sem causar alteraÃÃes significantes hepÃticas ou renais, alÃm de manter os nÃveis de FAO, o que sugere que a ATV pode ser uma abordagem farmacolÃgica importante como adjuvante à terapia periodontal a ser ensaiada clinicamente, devido a sua eficÃcia e seguranÃa. / Periodontitis is a disease characterized by leukocyte influx, loss of connective tissue and bone resorption. Statins are drugs widely used to hyperlidemia treatment, in which stand out Atorvastatin (ATV) due to its important pleiotropic effects, such as antiinflammatory activity and anabolic bone capacity, with great potential to modify chronic inflammatory disease course. In this way the aim of this work was to evaluate the aniinflammatory effect of ATV, through ligature-induced periodontitis model in rats. Wistar male, located in experimental groups: control (0.9% Saline), and 5 subgroups (ATV 0.3, 1, 3, 9 or 27 mg/kg), given orally daily, 30 min before nylon thread 3.0 aroud cervix of second left upper molars during 11 d, when then, rats were sacrified, and the following parameters were analyzed: 1) alveolar bone loss (ABL), evaluated through morphometric, histologic and radiographic studies; 2) Sistemic evaluation through a) leucograms performed before and after ligature (6h and 2, 7, and 11 d); b) corporal mass variation; c) of liver and kidney analysis, by serum biochemical dosage and histological study; and d) serum evaluation of Bone-Specific Alkaline Phosphatase (BALP). Animals submitted to 11 d periodontitis presented intense bone resoption. Low dose of ATV (0.3 mg/kg) was not able to prevent ABL (p>0.05), meanwhile the other dose ATV (1, 3, 9 or 27 mg/kg) were , in a significant way able to reduce ABL by 35%, 39%, 53%, 56%, respectively. Such inhibition was corroborated by histological analysis where was observed that ATV (27 mg/kg) caused greater periodontal tissue preservation [Mean 1.5 (0-2)], when compared to Saline [Mean 3 (2-3)] . In addition, animals submitted to periodontitis presented a significant reduction on periodontal radiographic density (58%). ATV (1, 3 ou 9 mg/kg) preserved such density in 5%, 9% e 20%, respectively. The leucogram of animals submitted to periodontitis presented leukocytosis peak on the 6th h mediated by neutrophils and new leukocytosis after 7th d due mononuclear cells. ATV (27 mg/kg) was able to reduce leukocytosis, decreasing neutrophils or mononuclear cells respectivelly (p<0.05), as well as, it was able to reduce initial corporal mass loss seen in periodontitis. Serum biochemical and histological analysis of liver and kidneys of animals with 11 d periodontitis treated with (ATV 27 mg/kg) or not (Saline), did not show alterations (p>0.05). It was observed a raise on serum BALP dosage variation of animals with 11 d periodontitis (Saline: 63.4Â10.8 U/l), while ATV (27 mg/kg) prevented that increase (13.6Â3.5 U/l) (p<0.05).In this way, the results demonstrated that this periodontitis model in rats reproduced the main aspects of periodontal disease in humans, and ATV reduced periodontal destruction, without cause significant alterations on liver and kidneys, besides of keeping BALP activitys, what suggests that ATV may be an important pharmacological approach as an adjuvant to periodontal therapy, to be evaluated clinically, due to its efficacy and safety.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / A periodontite, a principal causa de perda de dentes em adultos, à uma doenÃa inflamatÃria onde ocorre perda do osso alveolar e destruiÃÃo das fibras do ligamento periodontal. Tanto as bactÃrias periodontopatogÃnicas como os fatores provenientes do hospedeiro sÃo necessÃrios para o desenvolvimento e progressÃo desta patologia. Os bisfosfonatos constituem uma nova classe de drogas, os quais inibem a reabsorÃÃo do osso causando alteraÃÃes morfolÃgicas ou apoptose nos osteoclastos. O objetivo do presente estudo foi investigar os mecanismos envolvidos no efeito de um bisfosfonato Alendronato DissÃdico (AD) na doenÃa periodontal experimental (DPE), comparando seus efeitos com a doxiciclina, tratamento jà estabelecido. A DPE foi induzida passando-se fio de nÃilon 3.0 em torno do segundo molar superior esquerdo de ratos Wistar fÃmeas, permanecendo durante 11d. AD (0,25mg/kg, s.c.) foi administrado 30 minutos antes e diariamente (tratamento preventivo) ou AD (0,25mg/kg, s.c.), DX (5 ou 10 mg/kg) ou salina (0,2ml) foram injetados a partir do 5 dia da induÃÃo da DPE (tratamento curativo). Os parÃmetros avaliados foram: Ãndice de perda Ãssea (IPO), anÃlise histopatolÃgica e microbiolÃgica, imunohistoquÃmica, migraÃÃo de neutrÃfilos, mieloperoxidase (MPO), leucogramas realizados antes e apÃs a cirurgia (6h e 1, 7 e 11 dias) e variaÃÃo da massa corpÃrea. No IPO, AD reduziu consideravelmente a reabsorÃÃo Ãssea tanto de forma preventiva como curativa sendo comparÃvel à doxiciclina. Na anÃlise histopatolÃgica, o periodonto dos animais tratados com AD mostrou preservaÃÃo do osso alveolar, cemento e das fibras colÃgenas, alÃm de reduÃÃo do infiltrado neutrofÃlico gengival de 6h. Esta inibiÃÃo da migraÃÃo neutrofÃlica foi confirmada atravÃs da MPO e em modelo de peritonite abdominal e o leucograma mostrou uma reduÃÃo da neutrofilia. A imunohistoquÃmica mostrou que o AD diminuiu a marcaÃÃo para TNF em 6h e 11d. No microbiolÃgico, AD inibiu qualitativamente o crescimento de bactÃrias caracterÃsticas da DP, tais como pigmentados e Fusobacterium nucleatum. AD promoveu um aumento na massa corpÃrea em relaÃÃo ao grupo salina. Esses resultados mostram que o AD possui importante atividade na DPE, sugerindo a relevÃncia de testes clÃnicos dos bisfosfonatos no tratamento da doenÃa periodontal / Periodontitis, the major cause of teeth loss in adults, is an inflammatory disease in which occurs alveolar bone resorption and collagen fibers destruction. Bacteria and host factors are necessary to the development of this pathology. Bisphosphonates are a new class of drugs that inhibit bone resorbtion by causing morphological alterations or death of osteoclasts. The objetive of this study is to investigate the effect of the bisphosphonate Dissodic Alendronate (DA) in periodontitis, comparing it with the doxicicline (DX), treatment currently used. Periodontitis was induced by a nylon thread ligature surgically placed around the cervix of the second left maxillary molars of female Wistar rats. Animals were treated with DA (0.25 mg/kg, s.c.) 30 minutes before periodontits induction and daily until sacrifice on 11th day (preventive group). Additionally, saline, DA or DX (5 or 10 mg/kg) were injected s.c. from 5th day and daily up to the 11th day of periodontal disease (curative treatment). The parameters analysed were alveolar bone loss (ABL), histopathologic and microbiological analysis, immunohistochemistry, myeloperoxidase (MPO), neutrophil migration, leukogram measured before and after challenge (6h and 1, 7 and 11 days) and body mass variation. AD, as curative or preventive treatment, reduced this alveolar bone loss similar DX. Histopatologically, the periodontium of animals treated with DA showed preservation of alveolar bone, cementum and collagen fibers of periodontal ligament, and reduced neutrophilic and mononuclear cell infiltrate. This effect on neutrophilic infiltrate was confirmed by MPO and in model of peritonitis induced by carrageenan. In imunohistochemistry, there was marked reduction of immunostaining for TNF in the group treated with DA compared to the saline group. In microbiologic analysis, DA inhibited the growth of bacteria involved in periodontitis. DA increased body mass compared to saline group. These results support clinical testing of bisphosphonates in the treatment of periodontal disease

FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / A periodontite à definida como uma doenÃa inflamatÃria dos tecidos de suporte dos dentes, causada por microorganismos, caracterizada por infiltraÃÃo de leucÃcitos, destruiÃÃo progressiva dos ligamentos periodontais e osso alveolar. O esclarecimento do papel de prostaglandinas na reabsorÃÃo Ãssea periodontal tem contribuÃdo para a utilizaÃÃo mais racional de fÃrmacos inibidores das ciclooxigenases disponÃveis no mercado. Nesse sentido, torna-se necessÃrio o estudo da seguranÃa, nÃo obstante sua eficÃcia, destes agentes antiinflamatÃrios nÃo esteroidais, como celecoxib ou diclofenaco potÃssico. No presente estudo, utilizou-se um modelo de periodontite induzida por corpo estranho em ratos descrito na literatura, com o objetivo de avaliar a capacidade do celecoxib e do diclofenaco potÃssico. Observou-se que a inserÃÃo cirÃrgica do fio de nÃilon no modelo estudado induziu a perda Ãssea alveolar de forma significante aos 11 dias. Celecoxib nas doses diÃrias de 3, 9 e 27 mg/kg foi capaz de inibir a perda Ãssea alveolar de forma significante e dose-dependente (64%, 53% e 75,4%, respectivamente). O resultado com diclofenaco nas doses de 1 e 5 mg/kg tambÃm reduziu de forma significante, a perda Ãssea alveolar (41% e 54,5%, respectivamente). A anÃlise macroscÃpica dos estÃmagos mostrou que celecoxib e diclofenaco nÃo promoveram lesÃes gÃstricas de forma significante quando comparados aos animais nÃo tratados. O uso de celecoxib nÃo causou alteraÃÃes, de forma significante, no hemograma dos animais submetidos à periodontite. Com diclofenaco, verificou-se uma leucocitose em decorrÃncia do aumento do nÃmero de neutrÃfilos, com maior pico no perÃodo compreendido entre o 7 e 11 dia apÃs o procedimento cirÃrgico. A nÃo alteraÃÃo do nÃmero de plaquetas do sangue dos animais submetidos à periodontite, inclusive nos animais que receberam celecoxib ou diclofenaco pode sugerir que as doses utilizadas foram relativamente seguras sob o ponto de vista cardiovascular ou ainda, possivelmente, tais alteraÃÃes nÃo foram vistas por nÃo se tratar de um estudo prolongado. Tanto o celecoxib como o diclofenaco nÃo foram capazes de reverter, de forma significante, a perda de massa corpÃrea. As maiores doses de diclofenaco (10 e 25 mg/kg) causaram reduÃÃo significante da taxa de sobrevida dos animais a partir do primeiro dia pÃs-operatÃrio e atingindo 50% dos animais no terceiro dia. Os resultados mostraram que a induÃÃo da periodontite em ratos no grupo controle e no grupo tratado com celecoxib, nÃo alterou as funÃÃes renais ou hepÃticas avaliadas (urÃia e creatinina ou AST). Contudo, o uso de diclofenaco, tanto na dose de 1 mg/kg como tambÃm na dose de 5 mg/kg determinou alteraÃÃes em ambas as funÃÃes consideradas, induzindo um aumento significativo nos nÃveis sÃricos de creatinina e AST. O diclofenaco e o celecoxib apresentaram efeitos protetores semelhantes na perda Ãssea. O celecoxib, utilizado na periodontite induzida durante 11 dias, foi menos tÃxico que o diclofenaco, uma vez que este causou maior mortalidade de forma dose-dependente, e alteraÃÃes ao nÃvel de leucograma e das funÃÃes renal e hepÃtica / Periodontitis is an inflammatory disease of the tissue that supports the teeth. It is caused by microorganisms and is characterized by leukocyte infiltration, progressive destruction of the periodontal ligaments, and alveolar bone. The clear role of prostaglandins on periodontal bone resorption has contributed to the rational use of the cyclooxygenase inhibitors drugs available. In this sense, it becomes necessary to bare safety and efficacy studies of the non-steroidal anti-inflammatory agents, such as celecoxib and potassium diclofenac. For the present study, a foreign object induced periodontitis model in rats was used, such as described on specific literature, to evaluate the activity of celecoxib and potassium and diclofenac. A surgical insertion of a nylon tread induced significant alveolar bone loss after 11 days. Celecoxib, given daily at 3, 9 and 27 mg/kg, significantly reduced this loss in a dose-dependent manner (64%, 53% and 75.4%, respectively). Diclofenac produced a similar effect at 1 and 5 mg/kg, reducing the loss by 41% and 54.5%, respectively. Macroscopic analyses of stomachs indicated that neither celecoxib nor diclofenac promoted gastric lesions when compared with non-treated animals. Celecoxib-treated rats did not show significant hemogram parameters alterations when subjected to periodontitis. For diclofenac-treated animals, it was verified a leukocytosis due to the augmentation of neutrophil count, which peaked between the 7th and the 11th day post-surgery. Platelet number of periodontitis-subjected animals, including those that received celecoxib or diclofenac treatment, was not altered, which may suggest that the doses used are relatively safe from the cardiovascular point of view, or that this alterations was not seen due to the short period of the study. Celecoxib and diclofenac were not able to significantly reverse the loss of body mass. The higher doses of diclofenac (10 and 25 mg/kg/day) significantly reduced the survival rate since the first day after surgery, reaching 50% at day 3. The induction of periodontitis in control and celecoxib-treated rats did not alter renal or hepatic function according to the biochemical parameters evaluated (urea and creatinine or AST). However, diclofenac, at 1 and 5 mg/kg/day, determined alterations in both kidney and liver functions, with a significant increase of seric levels of creatinine and AST. Diclofenac and celecoxib presented similar effects on bone loss prevention. Celecoxib, used for 11 days to induce periodontitis, was less toxic than diclofenac, which caused a dose-dependent mortality and leukogram alterations along with disruption of renal and hepatic functions

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / A Periodontite à uma doenÃa que envolve a presenÃa de bactÃrias e se caracteriza principalmente por eventos inflamatÃrios que levam à perda dos tecidos periodontais como cemento radicular ligamento periodontal e osso alveolar O Ranelato de estrÃncio (RS) à um fÃrmaco recÃm desenvolvido para tratamento da osteoporose que diferente de outros agentes anti-osteoporÃticos possui duplo efeito no metabolismo Ãsseo: diminui a reabsorÃÃo e estimula a formaÃÃo Ãssea O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito antirreabsortivo do RS na periodontite experimental considerando aspectos locais e sistÃmicos e a resposta inflamatÃria atravÃs de modelos experimentais clÃssicos de inflamaÃÃo em animais A periodontite foi induzida pela colocaÃÃo de um fio de sutura (nÃilon 3) ao redor dos 2o molares superiores esquerdos de ratos (Â200 g) utilizando a prÃpria hemiarcada contralateral para controle Os animais foram divididos em 4 grupos (n=6/cada) que receberam por via oral RS (70, 210 e 630 mg/kg) ou soluÃÃo Salina (SAL) durante 11 dias Foram acrescidos 2 grupos (RS e SAL) para anÃlise histolÃgica A perda Ãssea alveolar (POA) foi avaliada atravÃs de anÃlises macroscÃpica (mm2) histolÃgica e imunohistoquÃmica e por dosagens sÃricas de Fosfatase Alcalina Ãssea (FAO) Para verificar possÃveis repercussÃes sistÃmicas avaliou-se Leucograma, VariaÃÃo de massa corpÃrea (g) e os nÃveis sÃricos de Transaminases (AST e ALT) UrÃia e Creatinina Para investigaÃÃo da resposta inflamatÃria utilizaram-se os modelos de peritonite e de edema de pata ambos induzidos por Carragenina (Cg 700 Âg) por via intraperitoneal e intraplantar, respectivamente. Os animais foram divididos em grupos (Â200 g; n=6/cada) que receberam, previamente à injeÃÃo de Cg, RS 630 mg/kg-vo, Dexametasona 1 mg/kg-sc (DEX) e soluÃÃo Salina-vo (SAL) No modelo de peritonite 1 grupo de animais nÃo manipulados (Normal) foi acrescido ApÃs a 4 h da peritonite os ratos foram sacrificados para coleta do lÃquido peritoneal e avaliaÃÃo da migraÃÃo neutrofÃlica No modelo de edema de pata o volume de lÃquido deslocado pelas patas dos ratos, considerado o edema foi mensurado por hidropletismÃmetro antes e 1, 2, 3 e 4 h apÃs injeÃÃo de Cg Observou-se que o RS (70, 210 e 630 mg/kg) reduziu (p<0,05) a POA em 16,9%, 39,4% e 37,5% respectivamente à anÃlise imunohistoquÃmica e histolÃgica, RS diminuiu a expressÃo de TNF-a porÃm nÃo reduziu expressÃo de IL-1b e promoveu importante (p<0,05) reduÃÃo do infiltrado leucocitÃrio e osteoclastos, assim como preservaÃÃo do osso alveolar, ligamento periodontal e cemento [RS630= 1,5 (1-3); SAL= 2,5 (2-3)] Tais anÃlises foram corroboradas pelo aumento (p<0,05) dos nÃveis sÃricos de FAO (RS70= 94Â4,6; RS210= 90,9Â6; RS630= 107,5Â14,2; SAL= 57,9Â6,9 U/l) Inicialmente os animais apresentaram perda de peso, seguido de tendÃncia a normalidade mas tal como no leucograma ou nas demais dosagens sÃricas bioquÃmicas nÃo foram observadas alteraÃÃes significante (p>0,05) entre os grupos Quanto a resposta inflamatÃria RS 630 mg/kg foi capaz de reduzir a migraÃÃo neutrofÃlica induzida por Cg [RS=5,7Â0,6; Sal=8,3Â0,6 (x103/mm3); p<0,05] alÃm de reduzir edema de pata na 3 e 4 h apÃs administraÃÃo da Cg Em conclusÃo, o RS foi capaz de reduzir a POA confirmando seu potencial antirreabsortivo alÃm de exibir atividade anti-inflamatÃria podendo portanto vir a ser uma ferramenta importante no tratamento adjuvante da periodontite / Periodontitis is a disease which involves the presence of bacteria and it is characterized by inflammatory events that lead to loss of periodontal tissues such as root cementum periodontal ligament and alveolar bone Strontium Ranelate (RS) is a recent developed drug used for osteoporosis treatment that different from other anti-osteoporotic drugs it possess a dual effect on bone metabolism: it decreases bone resorption by the time it stimulates bone formation The aim of this study was to evaluate the RS anti-resorptive effect in experimental periodontitis considering local and systemic aspects and the inflammatory response through classical inflammation experimental models in animals Periodontitis was induced by placing a suture (nylon 3.0) around the left 2nd upper left molars of rats ( 200g) using their contralateral hemimaxillae for control. The animals were divided into 4 groups (n = 6/each) which received RS (70, 210 and 630 mg/kg) or saline 0.9% (SAL) orally during 11 days Two more groups were added (RS and SAL) for histological analysis Alveolar bone loss (ABL) was evaluated by macroscopic mm2) histologic and immunohistochemistry analysis and by serum bone alkaline phosphatase (BALP) levels In order to evaluate possible systemic repercussions body weight variation (g) leukocyte count and serum levels of: transaminases (AST and ALT) urea and creatinine were assessed In order to investigate inflammatory response peritonitis model and paw edema we used both of them induced by carrageenan (Cg 700 g) a potent anti-inflammatory agent by intraperitoneal and in rat hind paw, respectively Animals were divided in groups ( 200 g; n = 6/each) which received 0.9% saline-vo (SAL); Dexamethasone 1 m/kg-sc (DEX) and RS 630 mg/kg-vo before Cg injection. On peritonitis model a group of non-handled (Normal) animals was added After the 4th hour of peritonitis animals were sacrificed in order to collect peritoneal fluid and to evaluate neutrophil migration On paw edema model the dislocated liquid volume by rats paw (edema) was measured by a hydropletismometer before (0h) and 1 2 3 and 4 h after Cg injection It was observed that RS (70, 210 and 630 mg/kg) prevented ABL (p<0.05) by 16.9% 39.4% and 37.5% respectively On immunohistochemical and histologic analysis RS reduced TNF-a but not reduced IL-1b expression and additionally promoted important (p<0.05) decrease on leukocyte infiltrate and osteoclast number as well as alveolar bone periodontal ligament and root cementum preservation [RS 630 = 1.5 (1-3); SAL=2.5 (2-3)] These analyses were corroborated by the increase (p<0.05) of BALP serum levels (RS70= 94Â4.6; RS210= 90.9Â6; RS630= 107.5Â14.2; SAL= 57.9Â6.9 U/l) Initially animals presented loss of weight followed by a normal tendency but as well as in leukogram or in the other serum biochemical dosage it was not observed any significant alteration (p>0.05) between groups About inflammatory response RS 630 mg/kg was able to reduce neutrophil migration induced by Cg [RS=5.7Â0.6; Sal=8.3Â0.6 (x103/mm3); p<0.05] besides paw edema decreased on the 3rd and 4th hour after Cg administration In summary RS was able to prevent ABL confirming its anti-resorptive potential and also exhibit anti-inflammatory activity which can be an important tool as adjuvant to periodontitis treatment

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / A periodontite à uma doenÃa inflamatÃria crÃnica caracterizada pela destruiÃÃo em vÃrios nÃveis do osso alveolar, fibras colÃgenas e do cemento, à considerada importante causa de perda dentÃria em adultos. O infliximabe (RemicadeÂ) à um medicamento composto de anticorpo quimÃrico monoclonal do fator de necrose tumoral-alfa (TNF-&#945;), sendo utilizada atualmente no tratamento da artrite reumatÃide, doenÃa de Crohn, artrite psoriÃsica, espondilite anquilosante e colite ulcerativa. O objetivo do presente estudo foi investigar o efeito osteoprotetor do infliximabe na doenÃa periodontal experimental (DPE). A DPE foi induzida passando-se um fio de nÃilon 3.0 em torno do segundo molar superior esquerdo de ratos Wistar machos. Os animais foram tratados com infliximabe (1, 5 e 10mg/kg), ou soluÃÃo salina por via endovenosa 30 minutos antes da induÃÃo da periodontite e acompanhados atà o dia do sacrifÃcio no dÃcimo primeiro dia. Alguns animais foram sacrificados no terceiro dia para anÃlise de mieloperoxidase (MPO) gengival e Ãndice de MPO neutrofÃlica no sangue perifÃrico. Foram analisados os seguintes parÃmetros: marcadores de reabsorÃÃo Ãssea, incluindo Ãndice de perda Ãssea (IPO) por morfometria e autofluorescÃncia do colÃgeno no tecido periodontal a partir de microscopia confocal e imunohistoquÃmica para metaloproteinase-1/-8 (MMP-1/-8) no tecido maxilar; marcadores inflamatÃrios, MPO e citocinas prÃ-inflamatÃrias (IL-1&#946; e TNF-&#945;) do tecido gengival detectados por western blot e ELISA, leucometria (e hemograma completo) e Ãndice de MPO leucocitÃrio no sangue perifÃrico; sinalizaÃÃo imunoinflamatÃria, a partir de imunohistoquÃmica para RANK, RANK-L e osteoprotegerina (OPG) no tecido Ãsseo maxilar. A periodontite experimental causou leucocitose, aumento significativo de IPO, aumento dos nÃveis de citocinas inflamatÃrias e aumento do infiltrado inflamatÃrio no tecido gengival e alteraÃÃo da disposiÃÃo do colÃgeno no aparelho periodontal. Ainda nos grupos desafiados, identificamos a presenÃa de vÃrias figuras do resto epitelial de Malassez (REM) na proximidade do cemento e osso alveolar. O infliximabe na dose de 5mg/kg foi capaz de reduzir a quantidade de granulÃcitos no sangue perifÃrico, melhorar o IPO e a integridade do colÃgeno no complexo do tecido periodontal e reduzir o infiltrado inflamatÃrio em relaÃÃo ao grupo desafiado recebendo salina. O fÃrmaco proporcionou ainda uma reduÃÃo dos nÃveis de IL-1&#946;, TNF-&#945; e MPO gengivais (apenas no terceiro dia para MPO) em comparaÃÃo ao grupo salina. AlÃm disso, o tratamento com infliximabe diminuiu a imunomarcaÃÃo para MMP-1/-8, RANK e RANK-L quando comparado ao grupo salina. Interessantemente, uma forte imunomarcaÃÃo para RANK-L foi identificada no REM no processo de periodontite experimental, achado esse que foi reduzido pelo tratamento com inflimixabe. Estes resultados confirmam a participaÃÃo da via OPG-RANK-RANK-L na osteÃlise inflamatÃria e o envolvimento do REM na fisiopatologia da periodontite experimental e ainda sugerem que uma resposta inflamatÃria local e sistÃmica precede a ativaÃÃo dessa via e o processo de reabsorÃÃo Ãssea. ConcluÃmos que o infliximabe na dose de 5,0 mg/Kg possui efeito antinflamatÃrio e osteoprotetor na doenÃa periodontal experimental em ratos Wistar. / Periodontitis is a chronic inflammatory disease characterized by different levels of collagen, cementum, and alveolar bone destruction. Peridontitis is considered an important cause of tooth loss in adults. Infliximab (RemicadeÂ) is a quimeric monoclonal antibody against the tumoral necrosis factor-alpha (TNF-&#945;) and is currently prescribed in the treatment of the rheumatoid arthritis, Crohnâs disease, psoriasis arthritis, ankylosing spondylitis, and ulcerative colitis. The aim of the current study was to investigate the bone protective effect of infliximab on the experimental periodontal disease (EPD). EPD was induced by passing a 3.0 nylon thread around the upper left second molar in Wistar male rats. Animals were either treated with infliximab (1, 5 e 10mg/kg) or saline solution by endovenous route 30 minutes before the periodontitis induction and were followed until they were sacrificed in the tenth first day. A subset of rats was euthanized in the third day for gingival myeloperoxidase (MPO) and for the neutrophilic MPO index from peripheral blood analyses. We analyzed the following parameters: bone reabsorption markers, including the bone loss index (BLI) by morphometry and periodontal collagen autofluorescence using confocal microscopy, and immunohistochemistry for metalloproteinase-1/-8 (MMP-1/-8) in the maxillary tissue; inflammatory markers, gingival MPO and pro-inflammatory cytokines (IL-1&#946; e TNF-&#945;) detected by western blot and ELISA, leukometry (and complete blood count) and the MPO leukocyte index in the peripheral blood; immune-inflammatory signaling, including immunohistochemistry for RANK, RANK-L and osteoprotegerin (OPG) in the maxillary bone tissue. Experimental periodontitis caused leukocytosis, significant increases in BLI and in pro-inflammatory cytokines with inflammatory cell infiltrate in the gingival tissue and periodontal collagen disarrangement. In the challenged group we also identify various figures of the epithelial cell rests of Malassez (ERM) in the proximity of the cementum and alveolar bone. Infliximab in the dose of 5mg/kg was able to reduce granulocyte numbers in the peripheral blood, improve the BLI and the periodontal tissue collagen integrity and to reduce the inflammatory infiltrate in comparison with the challenged group receiving saline. The compound could lead to reductions in the gingival levels of IL-1&#946;, TNF-&#945;, and MPO (the latter only in the third day) as opposed to the saline control. Furthermore, infliximab treatment reduced the MMP-1/-8, RANK, and RANK-L immunolabeling. Interestingly, a strong RANK-L immunolabeling was found in the ERM during the experimental periodontitis, finding that was diminished by infliximab treatment. Altogether our findings confirm the involvement of the OPG-RANK-RANK-L signaling during the inflammatory osteolytis and the ERM involvement in the experimental periodontitis pathophysiology. In addition, these findings suggest that a local and systemic inflammatory response precedes the activation of that signaling pathway and the bone reabsorption. We conclude that infliximab in the dose of 5.0 mg/Kg had anti-inflammatory and bone protective effect in our experimental periodontal disease in Wistar rats.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / A deficiÃncia de estrÃgeno tem mostrado aumentar a remodelaÃÃo Ãssea, podendo afetar algumas doenÃas Ãsseas como a periodontite. A biossÃntese desse hormÃnio à catalisada pela enzima aromatase e sua inibiÃÃo à importante para terapia do cÃncer de mama. Os pacientes que usam inibidores da aromatase como o Anastrozol (ANA) mostram maior nÃmero de fraturas e menor densidade Ãssea. Considerando, entÃo, o papel do estrÃgeno na resposta inflamatÃria e no metabolismo Ãsseo, alÃm dos efeitos adversos do ANA e da periodontite ser caracterizada por um processo inflamatÃrio que resulta em perda Ãssea alveolar, o objetivo desse estudo foi de investigar se o ANA afeta a periodontite em ratas ovariectomizadas. Para isto, o ANA (0,02, 0,1 e 0,5 mg/kg-v.o.) foi avaliado em um modelo de periodontite induzida por ligadura em ratos durante 11 dias. A periodontite foi analisada atravÃs de macroscopia, de histologia e da atividade de mieloperoxidase (MPO). As dosagens sÃricas de estrÃgeno, o leucograma, a variaÃÃo de massa corpÃrea e as funÃÃes hepÃtica, renal e esplÃnica tambÃm foram consideradas. A ovariectomia reduziu os nÃveis sÃricos de estrÃgeno apÃs 14 dias, mas nÃo exacerbou a periodontite ou aumentou a atividade de mieloperoxidase (MPO) quando comparada aos animais falso ovariectomizados (F-OVX). Embora o ANA nÃo tenha aumentado a perda Ãssea alveolar (POA), a administraÃÃo deste fÃrmaco por 11 dias aumentou a atividade de MPO. A ovariectomia combinada ou nÃo ao ANA nÃo promoveu nenhuma mudanÃa nas funÃÃes hepÃtica, renal ou esplÃnica, mas causou uma leucocitose promovida por cÃlulas mononucleares no 11 dia. Os animais ovariectomizados que receberam salina (SAL) tambÃm mostraram maior ganho de massa corpÃrea e a curva de peso do ANA foi similar à curva do SAL. Em conclusÃo, embora a reduÃÃo de estrÃgeno por 25 dias e a administraÃÃo de ANA por 11 dias nÃo tenha aumentado a POA, o ANA aumentou a atividade de MPO. / Estrogen deficiency was shown to increase bone remodeling, may affect some bone diseases as periodontitis. Biosynthesis of this hormone is catalyzed by aromatase enzyme and her inhibition is important for breast cancer therapy. The patients who use aromatase inhibitors as Anastrozole (ANA) show greater number of fractures and lower bone density. Since estrogen role in the inflammatory response and the bone metabolism, besides those adverse effects of ANA and periodontitis is characterized by an inflammatory process that results in alveolar bone loss, the aim of this study was to investigate whether ANA affects the periodontitis in ovariectomized rats. For this, ANA (0.02, 0.1 and 0.5 mg/kg-v.o.) was evaluated in ligature-induced periodontits for 11 days in ovariectomized rats. Periodontitis was analyzed through macroscopy, histology and by myeloperoxidase (MPO) activity. Serum dosage of estrogen, leukogram, corporal mass variation and liver, renal and spleen functions were also analyzed. The ovariectomy reduced the serum levels of estrogen after 14 days, but did not worsen the periodontitis nor increased MPO activty when compared to sham ovariectomized (S-OVX) animals. Although, ANA did not increase alveolar bone loss (ABL), administration of this drug for 11 days increased the MPO activity. The ovariectomy combined or not with ANA no promoved any changes in liver, renal or spleen functions, but caused leukocytosis promoved by mononuclear cells at 11th day. Ovaricetomized animals that received saline (SAL) also showed more gain of corporal mass and ANA weight curve were similar to SAL curve. In conclusion, although the estrogen reduction for 25 days and the administration of anastrozole for 11 days did not increase the ABL, the ANA increased the MPO activity.

Enxertos gengivais livres são importantes para garantir condições necessárias para o estabelecimento da homeostasia do periodonto de proteção. O processo de inflamação não ocorre por igual em todos os tecidos conjuntivos do organismo e os fibroblastos têm a capacidade de reagir a estímulos agressivos por meio de liberação de diversas citocinas, que desempenham importante função na formação do infiltrado inflamatório. Até o presente trabalho, não há relatos na literatura acerca da comparação do comportamento dos fibroblastos que compõem a mucosa palatina não marginal e dos fibroblastos provenientes de enxerto gengival livre (EGL) marginal em resistir aos estímulos agressores que ocorrem na doença periodontal. Dessa forma, a proposta do presente trabalho foi investigar se os fibroblastos da mucosa palatina não marginal mudariam seu perfil de secreção de citocinas quando enxertados na margem gengival. Foram coletadas biópsias da mucosa palatina no momento da cirurgia de EGL (período inicial) e após 4 meses (período final) no momento da cirurgia para recobrimento radicular. Os fibroblastos foram cultivados e estimulados com LPS de Porphyromonas gingivalis (Pg) e de Escherichia coli (Ec) por 24h e 48h para avaliação comparativa da expressão de citocinas e mediadores do reparo tecidual, como: IL-6, IL-8/CXCL8, MIP-1&#x3B1;/CCL3, TGF-&#x3B2;, VEGF e CXCL16. As citocinas foram quantificadas no sobrenadante das células por meio de ensaio imunoenzimático (ELISA). Para a citocina IL-6, os fibroblastos da mucosa palatina não marginal mantiveram o mesmo perfil de secreção quando enxertados na área gengival marginal; para MIP-1&#x3B1; a secreção se mostrou aumentada de forma estatisticamente significativa pelos fibroblastos obtidos do enxerto gengival marginal após 48h de estímulo por Pg em comparação com os fibroblastos da área palatina não marginal; a secreção de IL-8 pelos fibroblastos da mucosa palatina não marginal foi maior em resposta ao desafio por LPS de Pg e os fibroblastos obtidos do enxerto gengival marginal exibiram secreção até mesmo sem o estímulo de LPS; apenas os fibroblastos do enxerto gengival marginal apresentaram secreção de TGF-&#x3B2;, mesmo na ausência de estímulo por LPS; a secreção de VEGF e CXCL16 não foi detectada pelos fibroblastos analisados. Conclui-se que os fibroblastos provenientes de uma mucosa palatina não marginal parecem se adaptar às condições locais quando enxertados na área gengival marginal, oferecendo evidência de sua participação efetiva na produção de mediadores inflamatórios importantes para o processo de homeostasia do periodonto marginal. / Free gingival grafts are important to ensure conditions for the establishment of homeostasis of the periodontal soft tissues. The process of inflammation does not occur the same way in all connective tissues and fibroblasts have the ability to respond to aggressive stimuli through the release of various cytokines, which play an important role in the inflammatory infiltrate formation. In literature, there are no studies comparing the behavior of fibroblasts from palatal mucosa (not marginal) and fibroblasts from marginal free gingival graft (FGG) regarding their resistance towards periodontal disease aggressive stimuli. Thus, the purpose of this study was to investigate whether fibroblasts from the palatal mucosa behave differently when grafted to the gingival margin considering their mechanism of cytokine secretion. Biopsies from the palatal mucosa were collected at the time of FGG surgery (initial period) and after 4 months (final period) when surgery for root coverage was performed. The fibroblasts were cultured and stimulated with LPS of Porphyromonas gingivalis (Pg) and Escherichia coli (Ec) for 24 and 48 hours in order to make a comparative evaluation of cytokines and mediators of tissue repair expression, such as IL-6, IL-8/CXCL8, MIP-1&#x3B1;/CCL3, TGF-&#x3B2;, VEGF and CXCL16. Cytokines were measured in the cell supernatant by enzyme immunoassay (ELISA). For cytokine IL- 6, fibroblasts from palatal mucosa maintained the same secretion pattern when grafted to the gingival margin; for MIP-1&#x3B1; the secretion was significantly increased by fibroblasts from the marginal gingival graft after 48 hours of stimulation with Pg when compared to palatal mucosa fibroblasts; IL-8 secretion by palatal mucosa fibroblasts did not increase in response to Pg LPS challenge and fibroblasts from marginal gingival graft showed secretion even without the stimulus of LPS; only fibroblasts from marginal gingival graft showed secretion of TGF-&#x3B2;, even in the absence of LPS stimulation; VEGF and CXCL16 secretion by fibroblasts was not detected. It was concluded that fibroblasts from palatal mucosa seem to adapt to local conditions when grafted to the gingival margin area, providing evidence of its effective participation in the homeostasis of marginal periodontium through the production of important inflammatory mediators.