CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / NÃveis subterapÃuticos de drogas antimicobacterianas tÃm sido observados no curso do tratamento de pacientes com tuberculose e nos co-infectados TB/HIV e podem facilitar o surgimento de cepas de M. tuberculosis resistentes Ãs drogas. A mal-absorÃÃo intestinal inclue-se entre as provÃveis causas e tem sido descrita em tuberculosos desnutridos, alcoÃlatras, diabÃticos, aidÃticos ou com patologias gastrointestinais associadas. Estudos da permeabilidade intestinal permitem a avaliaÃÃo da funÃÃo intestinal em vÃrias doenÃas, mas tÃm sido escassos na tuberculose. O teste da lactulose / manitol tem sido utilizado como critÃrio de lesÃo com dÃficit absortivo da mucosa intestinal e pode ser de utilidade no prognÃstico da absorÃÃo intestinal de drogas em pacientes com tuberculose. Foram estudados 41 pacientes (30H e 11M). A coleta dos dados foi realizada no Hospital de MaracanaÃ, Fortaleza-CE, em 2001. Procedeu-se descriÃÃo clÃnica, social e laboratorial do grupo de pacientes e estudo piloto de observaÃÃo utilizando o teste da lactulose / manitol em 40 pacientes com tuberculose pulmonar ativa, comparando com grupo controle de 28 voluntÃrios sadios objetivando estudar a permeabilidade intestinal. Testes de sensibilidade Ãs drogas antituberculose, pelo mÃtodo das proporÃÃes indireto, foram realizados em 20 pacientes com cultura de escarro positivas. O grau de nutriÃÃo avaliado atravÃs do Ãndice de Massa CorpÃrea (IMC) e o nÃvel sÃrico das drogas foram correlacionados com os valores da permeabilidade intestinal. CinqÃenta e nove por cento (24 pacientes) foram considerados desnutridos pelo IMC<18,5 kg/m2, sendo vinte e dois por cento (9 pacientes) considerados severamente desnutridos (IMC<16 kg/m2). Em 18 pacientes, apÃs 2 h da tomada de 600mg de rifampicina (R) e 400 mg de isoniazida (H) os nÃveis sÃricos de R (CRM 2h) e H (CINH 2h) foram analisados por HPLC. A taxa de excreÃÃo urinÃria de manitol (mÃdia  desvio padrÃo) foi significativamente menor p<0,001 (9,52  5,70) nos pacientes que dos controles (20,14  10,84). A taxa de excreÃÃo de lactulose foi significativamente maior p<0,05 nos pacientes (0,59  1,79) que nos controles (0,52  0,47) e a razÃo L/M foi aumentada de forma consistente, embora nÃo significativa p>0,05 (0,05  0,10 pacientes contra 0,02  0,02 controles). Considerando a faixa terapÃutica da R (8-24 mcg/mL ) e da H (3-6 mcg/mL) observamos que as CRM2h e CINH2h em 16/18 (88,8%) pacientes nÃo atingiram nÃveis sÃricos adequados para as duas drogas. 8/18 (44,4%) pacientes nÃo alcanÃaram nÃveis sÃricos para ambas as drogas simultaneamente. Na anÃlise das drogas isoladas verificamos que em 12/18 (66,7%) pacientes a CRM2h o nÃvel sÃrico mÃnimo nÃo foi alcanÃado (mÃdia R =6,47 mcg/mL) e 13/18 (72,2%) a CINH2h tambÃm foi reduzida (mÃdia H =2,17 mcg/mL). Quanto ao perfil de resistÃncia do M. tuberculosis em cultura de escarro, observamos 4/20 (20%) multirresistentes (3 à R+H e 1 à todas as drogas) e 2/20 (10%) monorresistentes à H sendo 14/20 (70%) amostras consideradas sensÃveis Ãs drogas testadas. Os resultados observados sugerem uma intensa reduÃÃo na Ãrea de absorÃÃo e lesÃo da mucosa intestinal nos indivÃduos estudados. Os dados sÃo consistentes com a reduÃÃo na biodisponibilidade de rifampicina e isoniazida e com o estado nutricional destes pacientes. Os dados preliminares recomendam estudos adicionais na avaliaÃÃo completa da biodisponibilidade das drogas antimicobacterianas em pacientes com tuberculose / Subtherapeutic antimycobacterial drugs levels have been observed during treatment of patients with tuberculosis and in HIV coinfected. It may facilitate the development of M. tuberculosis resistant strains. Malabsorption may be one of the underlyne cause. It has been documented in tuberculosis patients associated to malnutrition, alchoolics, diabetes, AIDS and gastrointestinal symptoms. Intestinal permeability studies have been conducted in order to evaluate the intestinal function in some diseases but are scant in tuberculosis. Lactulose / manitol ratio in urine a widely used measure of malabsorption and intestinal permeability may be useful to assesss the drug absorption area in tuberculosis. In order to study the intestinal permeability in tuberculosis, we conducted in a pilot study 40 patients and 28 healthy volunteers, using the urinary excretion of ingested lactulose and manitol as respective markers of barrier disruption and overall villous surface area. The Maracanaà Hospital in Fortaleza-CE, was choosen and the data were collected in 2001. Eigthteen patients receiving 600 mg rifampicin (R) and 400 mg isoniazid (H) were evaluated through venous blood analysis obtained at 2 hours after directly observed ingestion. The serum samples were analysed by HPLC at the Infectious Disease Pharmacokinetics Laboratory / National Jewish Center / Denver, USA. Nutritional status by body mass index (BMI) and serum drug levels were correlated with intestinal permeability data. M. tuberculosis isolates from 20 clinical specimens were tested to drug susceptibility by standard proportion method (APM ) using Lowestein-Jensen medium. Forty-one patients (30 M, 11 F) were studied. Fifty nine per cent (24) patients were malnourish (BMI<18,5 kg/m2); 22% (9) were severely malnourish (BMI<16 kg/m2). The urinary excretion of mannitol (mean  standard deviation) showed a significant decrease p < 0,001 in patients (9,52  5,70) compared to controls (20,14  10,84). The excretion of lactulose was significant increased p < 0,05 in patients (0,59  1,79), than controls (0,52  0,47) and the L/M ratio shown consistent increased (0,05  0,10) in patients compared to controls (0,029  0,0,02) p > 0,05. Considering the reported target range for R (8-24 mcg/mL ) and H (3-6 mcg/mL) we observed that 2-h serum levels were below the lower limit for R and H in 88,8% (16/18) patients. Forty four per cent ( 8/18) of patients had reduced levels for the two drugs. Analysing single drugs we documented that 66,7% (12/18) patients had levels below the target limit for R (mean R =6,47 mcg/mL) and 72,2% (13/18) for H (mean H =2,17mcg/mL). Concerning to M. tuberculosis susceptibility profile in sputum culture, we observed 20% (4/20) multidrug resistants strains (3 for R + H and 1 for all drugs). Ten per cent (2/20) were resistant only for H and 70% (14/20) strains were sensitive. These results suggests an important decrease in the funcional absorptive surface of the intestine and damage of the intestine in patients studied. The data are consistent with reduced antituberculosis drugs bioavailability and compromissed nutritional status of these patients. The preliminary results indicate the necessity of new approaches to accurate portrait of drugs bioavailability in tuberculosis patients

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2016-08-12T10:36:05Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Aline Crispim Canedo Girardi - 2016.pdf: 6052802 bytes, checksum: 19568ea8fd9027193ffed70b254b8bdc (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-08-12T14:17:29Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Aline Crispim Canedo Girardi - 2016.pdf: 6052802 bytes, checksum: 19568ea8fd9027193ffed70b254b8bdc (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-12T14:17:29Z (GMT). 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For the development of the research three types of aggregates were used (natural sand, mixed recycled ceramic and cement and cementitious recycled) in two particle sizes, passers-by screens 3 mm and 1.18 mm, which were widely characterized. With the data obtained in the characterization of aggregates, different traces were formulated for mortars, keeping fixed the content of total fine plasticizers. The mortars were evaluated on their consistency, bulk density, dimensional instability (shrinkage), water absorption, compressive and flexural strength. The renderings were applied on ceramic blocks, which were selected for initial water absorption rate ranges, avoiding the variability of results due to changes in the suction of the substrate. Two types of preparation of the base were performed, lime solution and roughcast, the latter was used only for the rendering that showed the best performance among those produced with recycled aggregates. As the main results, it was found that using a sieve with an opening of 1.18 mm is effective for reducing the content of fine aggregate, however, mortars and renderings produced with these aggregates showed unsatisfactory performance, falling short of results in materials with through 3 mm sieve. Mortars and rendering produced with recycled aggregate cement did not show compatible performance with the others, at the expense of the initial assumptions, which provided that this aggregate would exceed the aggregate mixed. It was also noticed that the recycled aggregates mixed ceramic and cementitious material, passers the sieve 3 mm, despite the high content of fine and high water absorption, resemble very to the natural aggregate with the same granulometry, when comparing the characteristics of mortars they have produced, mainly for resistance to compression. When assessing the rendering produced by these two aggregates, both are equivalent in the question of adhesive strength and showed no cracking. In general, it can be concluded that it is feasible the production of efficient rendering with complete replacement of natural sand for mixed recycled aggregates since the RCD origin and characteristics are known, Provided that limited the packing factor of grain , which directly influence the properties of mortars and renderings. / Apesar de a utilização de RCD na produção de agregado miúdo ser estudada no Brasil há mais de duas décadas, ainda não há correlações definidas entre as características dos agregados reciclados e o desempenho dos revestimentos, de forma a identificar as propriedades que deverão ser controladas no momento da escolha dos agregados que será incorporado às argamassas, independente do tipo de resíduo original. Nesse sentido, o presente trabalho visa determinar a viabilidade técnica da substituição total de agregado natural por agregado reciclado no preparo de argamassas de revestimento, buscando correlacionar as diversas propriedades e características dos agregados e das argamassas com o desempenho dos revestimentos, no que tange à resistência de aderência à tração e absorção/permeabilidade de água. Para o desenvolvimento da pesquisa utilizou-se três tipos de agregados (areia natural, reciclado misto de material cerâmico e cimentício e reciclado cimentício), em duas granulometrias, passantes pelas peneiras 3 mm e 1,18 mm, os quais foram amplamente caracterizados. As argamassas produzidas foram avaliadas quanto à consistência, densidade de massa, retração, absorção de água por imersão, resistência à compressão e resistência à tração. Os revestimentos foram aplicados sobre blocos cerâmicos, preparados com solução de cal ou chapisco, sendo este último apenas para o revestimento que apresentou o melhor desempenho dentre os produzidos com agregados reciclados. Como principais resultados, verificou-se que a utilização de peneira com abertura de 1,18 mm é eficiente para a redução do teor de finos dos agregados, entretanto, as argamassas e os revestimentos produzidos não apresentaram desempenho satisfatório, ficando aquém dos resultados obtidos com materiais passantes na peneira 3 mm. As argamassas e revestimentos contendo agregado reciclado cimentício não apresentaram desempenho compatível com as demais, em detrimento das suposições iniciais, que previam que esse agregado seria superior ao agregado misto. Também se percebeu que os agregados reciclados mistos de material cerâmico e cimentício, passantes na peneira 3 mm, apesar do alto teor de finos e da elevada absorção de água, assemelham-se muito ao agregado natural de mesma granulometria, quando comparadas as características das argamassas por estes produzidas, principalmente quanto à resistência à compressão. Quando se avaliam os revestimentos produzidos por esses dois agregados, ambos são equivalentes em questão de resistência de aderência à tração e não apresentaram nenhuma fissuração. Em linhas gerais, pode-se concluir que é viável a produção de revestimentos eficientes com substituição total da areia natural por agregados reciclados, desde que limitado o fator de empacotamento dos grãos, que influência diretamente nas propriedades das argamassas e revestimentos.

O objetivo deste estudo foi o de avaliar os efeitos da irradiação laser de Er,Cr:YSGG em superfícies dentinárias no tratamento da hipersensibilidade dentinária cervical, em busca de um protocolo para ser aplicado clinicamente. Para o teste de permeabilidade, foram preparados 144 pré-molares, as coroas seccionadas e as raízes impermeabilizadas. Duas áreas de irradiação antagônicas foram delimitadas e livres da impermeabilização (controle e experimental). A seguir, os dentes foram subdivididos em dois sub-grupos, diferindo o condicionamento da superfície irradiada (EDTA 24% e ácido fosfórico 35%) e em grupos diferindo o protocolo:G1)Er:YAG, 60mJ/2Hz; G2)0,25W; G3)0,5W; G4)0,75W; G5)1W, G6)1,25W; G7)1,50W; G8)1,75W G9)2W. Após as irradiações, os espécimes foram imersos em azul de metileno 2% por 4 horas, e incluídos em resina epóxica para a realização dos cortes longitudinais. Estes tiveram suas imagens trabalhadas em computador para mensuração do nível de infiltração. Os dados foram submetidos à análise estatística. O Sub-grupo 1, condicionado com EDTA, apresentou diferenças entre os grupos sendo que as amostras irradiadas com Er:YAG demonstraram menor infiltração, diferindo estatisticamente dos grupos 3, 6 e 9. Os resultados do sub-grupo 2 mostraram que as médias das amostras irradiadas com Er:YAG tenderam a zero entretanto, não houve diferença entre os grupos. Na Fase B, fragmentos de dentina foram obtidos da região cervical de dentes humanos, preparados para análise em microscopia eletrônica de varredura. Morfologicamente, observou-se oclusão parcial dos túbulos dentinários após irradiação com Er:YAG e Er,Cr:YSGG nas condições de 0,25W e 0,50W. A partir de 0.75W, foi observado abertura dos túbulos e à medida que as energias aumentaram, foram observadas carbonização e fendas. De posse dos resultados dos trabalhos in vitro, foram selecionados os parâmetros para a aplicação e o acompanhamento clínico de 1 mês: G1)controle (placebo); G2)Er:YAG; G3)Er,Cr:YSGG 0,25W e G4)Er,Cr:YSGG 0,75W. Após a triagem, foram selecionados voluntários de acordo com critérios de exclusão e inclusão. O nível de sensibilidade de cada voluntário foi avaliado através da escala visual analógica de dor (VAS) com auxílio do ar da seringa tríplice 1 semana antes (Pré-1), 5 minutos anterior ao tratamento (Pré-2), após 5 minutos (Pós-1), 1 semana (Pós-2) e 1 mês após o tratamento (Pós-3). Os dados foram coletados e submetidos à análise estatística separadamente para os dois estímulos realizados: spray de ar e sonda exploradora. Tanto para o estímulo ar quanto para o estímulo sonda, não foram observadas diferenças estatisticamente significantes nas escalas Pré-1 e Pré-2, concluindo que os pacientes estavam padronizados e não houve efeito da profilaxia nos níveis de dor. Ao estímulo do spray de ar, nota-se uma redução nos níveis de dor na escala Pós-1, porém há uma estabilidade dos valores das escalas seguintes. O grupo 2 (Er:YAG) apresentou o menor nível de dor quando comparado aos outros grupos. Ao estímulo mecânico foi observado que o grupo 4 (Er,Cr:YSGG 0,50W) demonstrou o decréscimo de dor mais acentuado imediatamente após o tratamento, porém ao final do estudo, apresentou os maiores níveis de dor. Os grupos 1, 2 e 3 apresentam redução de dor, porém estatisticamente diferentes do grupo 4. Com base nos resultados apresentados e dentro dos limites e parâmetros estudados, pode-se concluir que nenhuma condição foi capaz de eliminar completamente a microinfiltração e diminuir a permeabilidade dentinária; porém o laser de Er:YAG e o laser de Er,Cr:YSGG 0,25W apresentaram resultados satisfatórios nos três estudos realizados. / The aim of the present study was to determine the correct parameters of the Er,Cr:YSGG laser in the treatment of cervical dentin hypersensitivity. This work was presented in 3 different stages. In the first one, it was evaluated the decrease in dentin permeability of dentinal tubules after Er,Cr:YSGG laser irradiation in radicular surfaces. Ninety premolars were prepared with its crows sectioned, and the roots completely impermeabilized. Two antagonist areas of irradiation were determined as control and experimental. Each surface was conditioned with EDTA 24% (sub-group1) and phosphoric acid 35% (sub-group2) and the selected parameters were: 1)Er:YAG, 60mJ, 2Hz, 4 irradiations of 20sec each, defocused mode; and groups 2 to 9 received irradiation with Er,Cr:YSGG laser, 20Hz, Z6 tip, 600µm diameter, defocus mode, 0% of air and water: 2)Er,Cr:YSGG 0,25W; 3) 0,5W; 4) 0,75W; 5) 1,0W; 6) 1,25W, 7) 1,50W, 8) 2W; 9) 2 W. After irradiation, samples were immersed in a solution of methylene blue for 4 hours, washed for 5 min and included in epoxy resin to allow longitudinal cuts. The images were digitalized and computed worked. Data was statistically analyzed. Although the samples irradiated with Er:YAG showed less microleakage, the sub-group 1 showed differences between the groups, statistically different from groups 3, 6 e 9. The results of the sub-group 2 showed that the mean values of the Er:YAG samples had a tendency to be negative, however, no differences were detected between the groups. In the second stage, cuts from the cervical area were obtained and prepared for scanning electron microscopy to evaluate the superficial morphology. It was observed the partial closure of dentinal tubules after the irradiation with Er:YAG and Er,Cr:YSGG laser in the 0.25 and 0.50W protocols. From the 0.75W until 2W, it was observed the dentinal tubules opened as the energy densities raised. With the results of the in vitro studies, the parameters were selected: G1)control; G2)Er:YAG; G3)Er,Cr:YSGG 0,25W e G4)Er,Cr:YSGG 0,75W. Thirty subjects, who met the entry criteria, were admitted into the study. The assessment method used to quantify sensitivity was the cold air syringe, recorded by the visual analogue scale (VAS), prior to treatment as baseline (Pre-1), immediately before (Pre-2) and immediately after (Post-1) the topical treatment, after 1 week (Post-2) and after 1 month (Post-3). Teeth were assigned to the 4 groups. After the follow-up, data was collected and submitted to statistical analysis for both kinds of stimulus: evaporative (air) and mechanical (probe). For both air and probe it was not observed differences among the Pre-1 and Pre-2 moments, for what it can be concluded that patients were standardized. Analyzing the evaporative stimulus, it can be observed the reduction in the pain level immediately after the treatment; however there was stability in the next values. Group 2 (Er:YAG) showed the least level of pain. Throughout the mechanical stimulus, it was observed that group 4 (Er,Cr:YSGG 0,50W) showed the most pronounced decrease of pain immediately after treatment, however, at the end of the study, the levels of pain increased. Groups 1, 2 e 3 showed reduction of pain, statistically different from the group 4. Based on the results and within the limits of this study, it can be concluded that none of the parameters and lasers studied were capable of eliminate the microleakage and decrease the dentin permeability, however, the Er:YAG and Er,Cr:YSGG 0,25W lasers showed satisfactory results in the three studies performed.

Este projeto, \"Influência do fator de cobertura nas propriedades de permeabilidade de tecidos planos\", descreve um breve histórico sobre a Tecelagem e seu crescimento na indústria Têxtil mundial, sendo muito importante o seu desenvolvimento para a indústria. Será apresentado também o conceito sobre Fator de cobertura de tecidos planos. Com o objetivo de avaliar a correlação entre o fator de cobertura e a permeabilidade dos tecidos planos, foram desenvolvidas 18 amostras de tecido com fio 60/2 Ne 100% agodão no urdume e na trama, em ligamento tela, sarja e cetim com densidades de trama 16tramas/cm, 24tramas/cm e 32tramas/cm, e com densidade de urdume 16fios/cm e 32fios/cm . Foi calculado o fator de cobertura para todas as amostras e foram realisados ensaios de gramatura, permeabilidade ao ar, permeabilidade ao vapor de água e permeabilidade a água, com a observação do indice OMMC (Capacidade de gestão global de umidade) do aparelho MMT (Moisture Management Tester). Este estudo se mostra como um caminho na Utilização do fator de cobertura, como item a ser considerado no desenvolvimento de novos artigos. Os resultados mostram para cada ligamento e fator de cobertura o comportamento com relação à permeabilidade dos Tecidos / This project, \"Influence of the coverage factor on the properties of permeability of woven\", describes a brief history on Weaving and its growth in the world textile industry, being very important its development for the industry. The concept of woven coverage factor, will also be presented. In order to evaluate the co-relation between the coverage factor and the permeability of woven, 18 wovens samples were developed with 60/2 Ne 100% cotton thread in the warp and the weft, inwoven twill and satin weave with warp weights 16 yarn/cm, 24 yarn/cm and 32 yarn/cm and with warp density 16 yarn/cm and 32yarn/cm. The coverage factor was calculated for all samples and weight, air permeability, water vapor permeability and water permeability tests were performed with the observation of the OMMC (Global Moisture ManagementCapacity) index of the MMT (Moisture Management Tester).This study shows as a path in the use of the coverage factor, as an item to be considered in the development of new articles. The results show for each ligament and cover factor the behavior regarding the permeability of the wovens

A oxidação do resíduo de cisteína 56 (ANT-cys56) do transportador de nucleotídeos de adenina (ANT) é descrita como evento crítico da Transição de Permeabilidade Mitocondrial (TPM), fenômeno caracterizado pela sensibilidade ao fármaco imunossupressor ciclosporina A (CsA), responsável pela ligação e inibição do componente promotor da abertura do Poro de Transição de Permeabilidade (PTP), a enzima peptidil-prolil-cis trans isomerase (cyp D). Aspectos bioquímico-estruturais do ANT, das cardiolipinas (CDL) que envolvem o transportador e da cyp D na TPM foram avaliados por meio de ensaios turbidimétricos de inchamento mitocondrial e estado conformacional do ANT em mitocôndrias isoladas de fígado de rato, associados a abordagens de química computacional para análises de campos de interação molecular (MIF) e dinâmica molecular (MD), visando a predição de eventos envolvidos na abertura do PTP. As análises computacionais revelaram aumento da mobilidade relativa do ANT-cys56, como resultado da interação preferencial do Ca2+ com a molécula de CDL ligada à hélice 4 do transportador, enquanto que a inversão da configuração do resíduo de prolina do ANT (ANT-pro61) potencializou o efeito induzido por Ca2+. A presença de ADP no interior do ANT preveniu o aumento da mobilidade relativa do ANT-cys56 promovida pelo Ca2+, enquanto que a inversão da configuração do ANT-pro61, de trans para cis, potencializou o efeito promovido pelo Ca2+ na mobilidade relativa do ANT-cys56, de forma insensível ao nucleotídeo. Os ensaios com mitocôndrias isoladas demonstraram que o Ca2+ induz a conformação c do ANT e promove abertura do PTP, de forma sensível à CsA e ADP. A presença de cyp D estabilizou a conformação c do ANT induzida por Ca2+, sendo que Atractilosídeo (ATR) tornou o efeito parcialmente insensível aos inibidores da TPM. Os resultados sugerem que a abertura do PTP induzida por Ca2+ envolve a mudança conformacional do ANT para o estado c, cuja estabilização é obtida pela cyp D na função de inversão do ANT-pro61, com base na avaliação da mobilidade relativa do ANT-cys56 parcialmente sensível ao ADP. / Oxidation of the Adenine Nucleotide Translocase (ANT) cysteine residue 56 (ANT-cys56) is potentially involved in Ca2+-induced Mitochondrial Permeability Transition (MPT), a process which is prevented by cyclosporine A (CsA), due to its inhibition of Permeability Transition Pore (PTP) opener component, the peptidyl-prolyl cis-trans isomerase cyclophylin D (cyp D). The main aspects of ANT, cardiolipins (CDL) and cyp D on Ca2+-induced PTP opening were addressed by employing light scattering techniques in isolated rat liver mitochondria to assess both ANT conformational change and mitochondrial swelling in association with computational chemistry analysis of Molecular Interaction Fields (MIF) and Molecular Dynamics (MD) for PTP events predictions. Computational analysis revealed that Ca2+ interacts preferentially with the ANT surrounding CDL bound to the H4 helix of the carrier and weakens the CDL/ANT interactions accounting for the ADP-sensitive increase of ANT-cys56 relative mobility while ANT-pro61 cis to trans configuration inversion intensified the Ca2+ effect in a ADP-insensitive way. The ANT conformation and mitochondrial swelling analyses demonstrated that Ca2+ induces conformation c of ANT and opens PTP in a CsA- and ADP-sensitive way. Cyp D stabilizes Ca2+-induced ANT conformation c, whereas ATR renders a PTP opening less sensitive to the inhibition by CsA or ADP. The results suggest that Ca2+-induced PTP opening involves ANT conformation c change supported by a cyp D-induced trans to cys ANT-pro61 configuration inversion based on the relative mobility of ANT-cys56, in a ADP-sensitive manner.

Resumo não disponível.

Submitted by Neusa Fagundes (neusa.fagundes@unioeste.br) on 2018-09-12T14:40:58Z No. of bitstreams: 2 Gabrielle_Custódio2018.pdf: 1773314 bytes, checksum: 2eea15a0ee541c0d86fb3e257f910aeb (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-12T14:40:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Gabrielle_Custódio2018.pdf: 1773314 bytes, checksum: 2eea15a0ee541c0d86fb3e257f910aeb (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2018-07-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Fundação Araucária de Apoio ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Estado do Paraná (FA) / The oral administration of insulin stands out as the most convenient, simple and compatible way for patients, since it provides comfort and it can control the glucose homeostasis. This study produced and evaluated a polymer-lipid nanotransporter for the oral delivery of insulin by double emulsion and solvent emulsification/evaporation using ethyl palmitate and hyaluronic acid (HA) of 13 and 55 kDa. The nanoparticles showed an average diameter of 300 nm, negative surface charge, encapsulation efficiency of 35% and they were thermally stable when analyzed by differential scanning calorimetry. The in vitro release with simulated gastrointestinal fluids demonstrated the protection ability to encapsulated insulin. The nanoparticles have shown to be safe at potential therapeutic concentrations, since they did not cause cytotoxicity to intestinal epithelial cells. Finally, the permeability of nanoencapsulated insulin through Caco-2 monolayers and Caco-2/HT29-MTX model correlated with the slow release rates and did not show differences between them. These results indicated that the molar weight of HA did not show differences in both the characterization and the therapeutic response of the prepared nanoparticles, which could be considered as a good carrier for the oral administration of insulin. / A administração oral da insulina destaca-se como o modo mais conveniente, simples e compatível com o paciente, pois proporciona conforto e é capaz de controlar a homeostase glicídica. Neste estudo foi produzido e avaliado um nanotransportador lipídico polimérico para a entrega oral da insulina por meio de dupla emulsão e emulsificação/evaporação do solvente utilizando etilpalmitato e ácido hialurônico (HA) de 13 e 55 kDa. As nanopartículas apresentaram diâmetro médio em torno de 300nm, carga superficial negativa, eficiência de encapsulação de 35% e apresentaram-se estáveis termicamente quando analisadas pela calorimetria diferencial de varredura. A liberação in vitro com fluidos gastrointestinais simulados demonstrou a capacidade de proteção à insulina encapsulada. As nanopartículas mostraram-se seguras em potenciais concentrações terapêuticas, uma vez que não originaram citotoxicidade para as células epiteliais intestinais. Por último, a permeabilidade da insulina nanoencapsulada através de monocamadas Caco-2 e modelo Caco-2:HT29-MTX correlacionaram-se com as taxas de liberação lenta e não apresentam diferenças entre si. Esses resultados indicaram que o peso molar do HA não apresentou diferenças tanto na caracterização quanto na resposta terapêutica das nanopartículas preparadas, podendo estas serem consideradas como um bom transportador para administração oral de insulina.

A via oral é considerada preferencial para a administração de fármacos, sobretudo no tratamento de doenças crônicas. Entretanto, princípios ativos administrados por essa via podem apresentar biodisponibilidade variável e/ou limitada. Diversos tipos de sistemas de liberação vêm sendo desenvolvidos com o objetivo de melhorar esse parâmetro, dentre os quais se destacam as nanopartículas de poli (alquil-cianoacrilato) (PACA). Pelo exposto, no presente trabalho foram desenvolvidas nanopartículas de poli(n-butilcianoacrilato) (PBCA) contendo aciclovir (ACV), revestidas por N,N,N-trimetilquitosana (TMQ), um promissor promotor de absorção. A TMQ foi sintetizada com elevado rendimento e grau de quaternização de aproximadamente 73%. As nanopartículas de PBCA foram obtidas com rendimento adequado e apresentaram características físico-químicas semelhantes às descritas na literatura. Após o revestimento, foi observado um aumento no diâmetro médio, bem com uma inversão nos valores de potencial zeta. Essas observações podem indicar a ocorrência do revestimento. A partir das análises de DSC, pôde-se comprovar a eficiência do revestimento das nanopartículas pelo derivado sintetizado, já que o comportamento das nanopartículas de PBCA-TMQ foi diferente daquele obtido para a mistura física entre os constituintes da formulação. Nessa mesma perspectiva, análises de FTIR foram conduzidas e a ocorrência do revestimento foi corroborada. Além disso, as análises morfológicas por Microscopia de Força Atômica (AFM) revelaram que as nanopartículas revestidas apresentam baixa tendência à agregação, o que pode ser um indicativo de estabilidade para a formulação desenvolvida. Em relação aos ensaios de citotoxicidade, foi evidenciado que as nanopartículas de PBCA não apresentaram toxicidade significativa frente às células Caco-2, ao passo que a formulação revestida mostrou um efeito tóxico dose-dependente influenciado pelo grau de quaternização. Além disso, as nanopartículas desenvolvidas foram capazes de diminuir, reversivelmente, a Resistência Elétrica Transepitelial (RET) da monocamada de células. A fim de quantificar o fármaco associado às nanopartículas, foi desenvolvido e validado método analítico por espectrofotometria derivada com detecção no UV. Tal método mostrou-se capaz de eliminar a interferência dos excipientes, permitindo a quantificação do ACV na formulação de nanopartículas com precisão e exatidão adequadas. Assim, a porcentagem de fármaco associado às nanoestruturas pode ser calculada, obtendo-se um valor satisfatório. De maneira semelhante, foi desenvolvido e validado método por CLAE para a quantificação do fármaco nos ensaios de permeação. A metodologia proposta mostrou-se adequada considerando-se as recomendações da RE 899/03. Por meio dos ensaios de permeabilidade em células Caco-2, foi constatado que a formulação desenvolvida aumentou em 3 vezes o valor de Permeabilidade aparente (Papp) do fármaco em estudo. Além disso, as nanopartículas revestidas foram capazes de propiciar a liberação controlada do ACV nos ensaios de liberação in vitro utilizando meios com diferentes valores de pH (1,2; 6,8 e 7,4). / The oral route is considered for the administration of drugs, especially in the treatment of chronic diseases. However, drugs administered by this route may have variable and/or limited bioavailability. Various types of delivery systems have been developed with the goal of improving this parameter, among which stand out the nanoparticles of poly (alkylcyanoacrylate) (PACA).Such nanomaterials have been coated to improve stability in the gastrointestinal tract, promote greater solubility or enhance permeation. Therefore, in this work were developed nanoparticles of poly (n-butilcianoacrilato) (PBCA) containing acyclovir (ACV), coated with N,N,N-trimethylchitosan (TMC), a promising absorption promoter. The TMC was synthesized with high-yield and approximately 73% of quaternization. The PBCA nanoparticles presented physico-chemical characteristics similar to those described in the literature. After the coating, it was observed an increase in the average diameter, and a inversion on the values of zeta potential. These observations may indicate the occurrence of coating. DSC analysis could proved the efficiency of the coating of nanoparticles, since the behavior of nanoparticles of PBCA-TMC was different from those obtained for the physical mixture between the constituents of the formulation. In this same perspective, FTIR analyses were conducted and the occurrence of coating was corroborated. In addition, morphological analyses by Atomic Force Microscopy (AFM) showed that nanoparticles coated presented low tendency to aggregate, which can be an indication of stability for the formulation developed. In relation to cytotoxicity assays, it was evidenced that the PBCA nanoparticles showed no significant toxicity against the Caco-2 cells, whereas the coated formulation showed a dose-dependent toxic effect influenced by the degree of quaternization. In addition, the nanoparticles developed were able to decrease, reversibly, Transepitelial Electric Resistance (TEER) of the monolayer. In order to quantify the drug associated with nanoparticles, was developed and validated analytical method by derivative spectrophotometry with UV detection. This method was able to eliminate the interference of excipients, allowing the quantification of ACV in the formulation of nanoparticles with appropriate precision and accuracy. Thus, the percentage of drug associated with nanostructures can be calculated, obtaining a satisfactory value. Similarly, has been developed and validated HPLC method for the quantification of drug permeation tests. The proposed methodology was appropriate considering the recommendations of the RE 899/03. Through the permeability assays in Caco-2 cells, it has been found that the formulation developed increased by 3 times the value os Apparent Permeability (Papp) of ACV. In addition, the nanoparticles were able to provide controlled release of ACV in vitro using media with different pH values (1.2; 6.8 and 7.4).

Métodos in vitro utilizando epitélio intestinal animal são importantes ferramentas para avaliar a permeabilidade de fármacos, propriedade que é um importante parâmetro de biodiosponibilidade. Considerando que o maior objetivo na indústria farmacêutica é desenvolver novos fármacos com boa biodisponibilidade oral, o projeto teve como objetivo padronizar o modelo de permeação com membrana de intestino de rã (Rana catesbeiana) em células de Franz, comparando seus resultados com ensaios de células Caco-2. Os fármacos modelo utilizados foram os antivirais zidovudina e aciclovir. A quantidade de fármaco permeado foi determinada por método de eletroforese capilar para o método com intestino de rã touro e por HPLC-UV para os ensaios com células Caco-2. O parâmetro de permeação foi o coeficiente de permeabilidade aparente (Papp) dos fármacos para ambos modelos experimentais. Para estabelecimento do protocolo experimental dos estudos de permeabilidade intestinal de rã, foi proposto um projeto fracionado 24-1 com 4 ensaios adicionais usando o software Minitab, e as variáveis foram: secção intestinal, pH da solução de Ringer e temperatura. A análise do planejamento experimental feita pela estimativa dos parâmetros da regressão obtidos através dos resultados do modelo fatorial possibilitou a determinação dos coeficientes da equação matemática que definiu a influência das variáveis sobre o coeficiente de permeabilidade aparente dos fármacos. Os efeitos das variáveis pH e temperatura interpretados conjuntamente apresentaram interferência leve, porém as variáveis fármaco e secção intestinal interpretados juntos tiveram interferência importante, mostrando maior permeação dos fármacos através da secção inicial do intestino da rã. Os resultados de Papp foram: para o metoprolol, pelo método das células Caco-2 foi de 28 x 10-6 cm/s, valor que está de acordo com demais dados de células Caco-2 na literatura e o valor obtido com células de Franz que mais se adequada a estes resultados e demais disponíveis provenientes de outras técnicas na literatura, foi de 28,1 x 10-6 cm/s, em uma das condições do planejamento estatístico utilizando segmento final da membrana epitelial da rã. No caso do aciclovir, o resultado de Papp de 0,48 x 10-6 cm/s também obtido em uma das condições envolvendo segmento intestinal final da rã foi exatamente igual a o valor 0,48 x 10 - 6 cm/s, encontrado com células Caco-2 no presente estudo e estão de acordo com outros valores disponíveis na literatura por Trapani e colaboradores, 2004 e também com células Caco-2. Para zidovudina o valor de Papp obtido em uma das condições utilizando segmento intestinal inicial da rã, de 13 x 10-6 cm/s, foi a que mais se assemelhou ao obtido pela técnica de células Caco-2, 13,6 x 10-6 cm/s, e também está de acordo com demais dados da literatura. / There are lots of different in vitro technics in the literature using animal intestinal epithelium to estimate permeability of drugs, property that is an important parameter of bioavailabity. Considering that the main objective of Pharmaceutical Companies is the development of new drugs with good oral bioavailabity, the aim of this work was to standardize the permeability of antivirals using in vitro/ex vivo method of intestinal epithelium of Rana catesbeiana in Franz cells and compare these results to those obtained from studies using Caco-2 cells. Zidovudine and Acyclovir were selected as model drugs. The amount of drug permeated will be determined by the method of capillary electrophoresis for assays using Rana Catesbeiana and HPLC-UV for studies with Caco-2 cells. The permeation parameter determined was the apparent permeability coefficient (Papp) of drugs for both experimental models. To establish the experimental protocol to studies of intestinal permeability of frog, it was proposed a fractional 24-1 design with 4 additional tests using Minitab software and the variables were: intestinal section, pH of Ringer solution and temperature. The analysis of the experimental design made by the estimate of the regression parameters obtained from the factorial model results allowed the determination of the coefficients of the mathematical equation that defines the influence of the variables on the apparent permeability coefficient of acyclovir and zidovudine. The effects of pH and temperature interpreted jointly presented a slight interference, but the variables drug and intes tinal section interpreted together had major interference, showing greater permeation of drugs through the initial section of the intestine of the frog . The results of Papp were: for metoprolol, with the method of Caco-2 cells was 28 x 10-6 cm/s, a value which is consistent with other data of Caco-2 cells provided in the literature and the condition obtained with Franz cells that are most suitable for these and other results obtained from other techniques available in the literature, was 28.1 x 10-6 cm/s, provided with the final intestinal segment using frog epithelial membrane. In the case of acyclovir, the result of Papp of 0.48 x 10-6 cm/s obtained in one condition with final frog intestinal segment was exactly equal to the value of 0.48 x 10-6 cm/s, found with Caco-2 cells in the present study and are in agreement with other values available in the literature for Trapani and colegues, 2004 and also with Caco-2 cells. The Papp value for zidovudine obtained with the initial gut segment of frog, 13 x 10-6 cm /s was which more resembled that obtained by the technique of Caco-2 cells, 13.6 x 10-6 cm/s and is also consistent with other literature data.

A permeabilidade através do epitélio intestinal tem se tornado um importante aspecto a ser determinado nas avaliações biofarmacotécnicas envolvendo fármacos e medicamentos. A técnica mais empregada para essa determinação in vitro é aquela que utiliza a cultura de células Caco-2. Entretanto, ainda são discutíveis as condições para a realização desses experimentos, uma vez que a padronização das mesmas é fator fundamental para a confiabilidade dos resultados. Nesta tese, foram avaliadas as condições para realização dos estudos de permeabilidade através de membranas de células Caco-2 para a rifampicina, principal fármaco utilizado no tratamento da tuberculose. Para tanto, foram investigados fatores tais como a citotoxicidade da rifampicina em diferentes concentrações, a influência da concentração do fármaco sobre a permeabilidade, do pH de realização dos experimentos e da presença de proteínas do muco intestinal, além da influência de proteínas plasmáticas. Foi também investigado o potencial indutor da rifampicina sobre a expressão da glicoproteína-P (Pgp) e seu impacto na permeabilidade da própria rifampicina. Os estudos foram desenvolvidos utilizando membranas de células Caco-2 provenientes da American Type Culture Collection (ATCC) cultivadas em placas Transwel®, a quantificação da fração permeada foi por cromatografia líquida de alta eficiência com métodos validados. A análise da indução da expressão da Pgp foi realizada por PCR-RT. Demonstrou-se que as concentrações da rifampicina (10,0; 25,0 e 50,0 &#181;g/mL) não ocasionaram danos às células Caco-2 no estudo de citotoxicidade pela técnica que emprega o sal do brometo de 3-(4,5-dimetil-2-tiazoli)-2,5-difenil-2H-tetrazólio (MTT). As concentrações de rifampicina (5,0; 10,0 e 25,0 &#181;g/mL) não resultaram em valores estatisticamente diferentes de permeabilidade aparente (Papp) em células Caco-2 nas condições do estudo. A rifampicina apresentou valor de Papp significativamente maior em pH 6,8 dentre os valores de pH avaliados (5,8 ; 6,8; 7,4). A presença de muco simulado e de soro fetal bovino não resultou em valores de permeabilidade significativamente distintos do resultado obtido sem a sua adição ao experimento. A expressão da Pgp em células Caco-2 é induzida pela adição da rifampicina (10&#181;g/mL), ocasionando diminuição da sua permeabilidade por mecanismo de efluxo. Pelos resultados de permeabilidade obtidos em todas as condições avaliadas, a rifampicina pode ser considerada um fármaco de alta permeabilidade de acordo com o Sistema de Classificação Biofarmacêutica. / The permeability through the intestinal epithelium has become an important aspect to be determined in evaluations involving drugs and pharmaceutical products. The most common technique for this determination in vitro is one that uses the culture of Caco-2 cells. Nevertheless, the conditions for carrying out such experiments are still questionable, since the standardization of them is essential to the reliability of the results. In this thesis, we evaluate the conditions for the studies of permeability of rifampicin through membranes of Caco-2 cells, the main drug used in the treatment of tuberculosis. To this end, we examined factors such as cytotoxicity of rifampicin at different concentrations, the influence of drug concentration on the permeability, as well as the pH of the experiments, the presence of proteins of intestinal mucus, and the influence of plasma proteins. It was also investigated the potential of rifampicin on the expression of P-glycoprotein (Pgp) and its impact on the permeability of rifampicin itself. The studies were developed using membranes of Caco-2 cells from American Type Culture Collection (ATCC) grown on plates Transwel®, and the quantification of the fraction of drug permeated was obtained by high performance liquid chromatography with validated methods. The analysis of induction of expression of Pgp was performed by RT-PCR. It was demonstrated that the concentrations of rifampicin (10,0; 25,0 and 50,0 &#181;g/mL) did not cause damage to Caco-2 cells in the study of the cytotoxicity technique that uses a bromide salt of 3 - (4,5-dimethyl-2 - thiazol) -2,5-diphenyl-2H-tetrazolium (MTT). The concentrations of rifampicin (5,0; 10,0 and 25,0 &#181g/mL) did not result in statistically different values of apparent permeability (Papp) in Caco-2 cells under the conditions of the study. Rifampicin showed a value of Papp significantly higher at pH 6.8 in comparison with other measured pH values (5,8 and 7,4). The presence of mucus simulated and fetal calf serum did not result in permeability values significantly different from the result obtained without its addition to the experiment. The expression of P-gp in Caco-2 cells is induced by the addition of rifampicin (10 &#181;g/ml), decreasing its permeability by efflux mechanism. Taking into account the results of permeability obtained in all conditions, the rifampicin can be considered a high permeability drug according to the biopharmaceutical classification system.