Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2011. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2012-03-02T13:27:28Z No. of bitstreams: 1 2011_EduardoAgostinhoFreitasFernandes.pdf: 1719882 bytes, checksum: 67ea301e56e0065f4fc6be7eed933a47 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2012-03-05T14:19:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_EduardoAgostinhoFreitasFernandes.pdf: 1719882 bytes, checksum: 67ea301e56e0065f4fc6be7eed933a47 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-05T14:19:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_EduardoAgostinhoFreitasFernandes.pdf: 1719882 bytes, checksum: 67ea301e56e0065f4fc6be7eed933a47 (MD5) / Os estudos de bioequivalência, necessários para registro de medicamentos genéricos e similares no Brasil, tratam-se de ensaios comparativos, realizados com seres humanos, onde são avaliados os parâmetros pico da concentração máxima (Cmax) e área sob a curva (ASC). Com esses estudos, pretende-se concluir que um candidato a medicamento genérico ou similar é bioequivalente ou bioinequivalente em relação ao seu respectivo medicamento de referência. Dois fatores relacionados ao fármaco presente no medicamento que podem influenciar na conclusão do estudo são a classificação biofarmacêutica do fármaco e a sua variabilidade, enquanto dois fatores relacionados à formulação que também podem influenciar na conclusão são o perfil de dissolução e os excipientes. A bioisenção consiste na correlação da dissolução in vitro do medicamento com a biodisponibilidade in vivo e baseia-se na solubilidade e permeabilidade gastrointestinal do fármaco como fatores fundamentais para controlar a velocidade e a quantidade de fármaco absorvido. Medicamentos cujos fármacos foram classificados como classe I e III do sistema de classificação biofarmacêutica foram associados com a conclusão bioequivalência, enquanto que aqueles classificados como classe II foram associados com a conclusão bioinequivalência. Para os classe IV não foi possível fazer esta associação. Verificou-se também que o coeficiente de variação do fármaco também influencia na conclusão. Com relação aos fatores relacionados à formulação, verificou-se que não houve associação entre o perfil de dissolução e a conclusão do estudo de bioequivalência. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The bioequivalence studies, required for registration of generic and similar medicines in Brazil, are comparative trials conducted with humans, where the parameters evaluated are peak concentration (Cmax) and area under the curve (AUC). With these studies, we intend to conclude that a candidate for a generic or similar drug is bioequivalent or bioinequivalente in relation to their respective reference medicine. Two factors related to the active principal ingredient of pharmaceuticals that may influence the conclusion of the study are the biopharmaceutic drug classification and its variability, while two factors related to the formulation that can also influence the conclusion is the dissolution profile and the excipients. The biowaiver is the correlation of in vitro dissolution of the medicine with bioavailability in vivo and is based on the solubility and gastrointestinal permeability of the drug as key factors to control the speed and amount of drug absorbed. Pharmaceticals whose active principal ingredient were classified as class I and III of the biopharmaceutic classification system were associated with the outcome bioequivalence, while those classified as class II were associated with the outcome bioinequivalence. For class IV was not possible to make this association. It was also found that the coefficient of variation of the drug also influences the conclusion. Therefore, regarding the factors related to the formulation, it was found that there was no association between the dissolution profile and the outcome of the bioequivalence study.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. CIPHARMA, Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by giuliana silveira (giulianagphoto@gmail.com) on 2016-01-22T15:08:44Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoBiofarmacêuticaVisando.pdf: 1981988 bytes, checksum: 2805fc2bedd3dc1769c12986959fa076 (MD5) / Approved for entry into archive by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2016-01-25T14:58:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoBiofarmacêuticaVisando.pdf: 1981988 bytes, checksum: 2805fc2bedd3dc1769c12986959fa076 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-26T15:29:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoBiofarmacêuticaVisando.pdf: 1981988 bytes, checksum: 2805fc2bedd3dc1769c12986959fa076 (MD5) Previous issue date: 2015 / O estudo das características biofarmacêuticas propicia maior compreensão do comportamento in vivo de fármacos. Dados de solubilidade relacionados a informações sobre permeabilidade intestinal e dissolução de substâncias ativas, possibilitam inferir sobre sua absorção. Além disso, permitem prever as possibilidades de potencialização de efeitos terapêuticos de associação de fármacos que já foram testados isoladamente, como é o caso do itraconazol (ITR) conjuntamente ao benznidazol (BZN). O BZN é empregado desde 1972 no tratamento da doença de Chagas. Ainda hoje, no Brasil e em diversos países da América Latina, a doença de Chagas é um problema de saúde pública grave. A quimioterapia dessa doença é restrita e a fase crônica permanece incurável. Assim, novas estratégias para seu tratamento têm sido propostas. Estudos pré-clínicos mostraram a melhoria na terapêutica da doença em decorrência da administração conjunta de BZN e ITR. O conhecimento das propriedades físico-químicas dos fármacos juntamente com estudos que permitam avaliar suas características biofarmacêuticas e as alterações decorrentes da associação é valioso para a discussão sobre a viabilidade da terapêutica associada. Esta é uma etapa crucial para se estabelecer a estratégia de desenvolvimento da formulação que conterá esses fármacos. Neste sentido, foi desenvolvido e validado um método por espectrometria derivada de primeira ordem para quantificação simultânea do BZN (340 nm) e ITR (268 nm) em meios biorrelevantes (pH 1,2; 4,5 e 6,8) pelo método do ponto de anulação (zero-crossing). Este procedimento foi então aplicado à determinação da solubilidade em equilíbrio destes fármacos por meio do método da agitação orbital em frascos (Shake-flask) a 37 ºC, por 72 h a 100 rpm e na avaliação da dissolução intrínseca, também a 37 ºC e nos meios biorrelevantes. O BZN apresentou baixa solubilidade nos três meios avaliados. Não foi possível a determinação do ITR nos meios com pH 4,5 e 6,8; tendo apresentado baixa solubilidade no pH 1,2. Os resultados obtidos seguindo os dois métodos possibilitaram mesma inferência, sendo os dois fármacos considerados como de baixa solubilidade. Este resultado associado aos dados de permeabilidade in silico obtidos permitiram a alocação do BZN e do ITR no Sistema de Classificação Biofarmacêutica (SCB) como pertencentes às classes IV e II, respectivamente. Fármacos dessas classes, devido à baixa solubilidade, podem levar a consequências atípicas in vivo como biodisponibilidade incompleta, variabilidade inter e intrapaciente nos parâmetros farmacocinéticos e liberação incompleta dos fármacos. Além do fato de que os alimentos podem exercer efeitos significantes. No entanto, foi comprovado que apesar da baixa solubilidade dos fármacos, esta não é alterada quando estes estão associados e são colocados em contato com os meios avaliados por 72 h. Sendo assim, essa propriedade não seria um empecilho para a associação dos fármacos contanto que seja desenvolvida uma formulação adequada. ___________________________________________________________________ / ABSTRACT : The study of the biopharmaceutical characteristics provides a greater understanding of the in vivo behavior of drugs. Solubility data with information about intestinal permeability and dissolution of active substances, make it possible to inference about their absorption. Furthermore, allow to predict the possibility of potentiation therapeutics effects of drugs associations that have already been tested alone, such as itraconazole (ITR) and benznidazole (BZN). BZN is used since 1972 in the treatment of Chagas disease. Even today, in Brazil and throughout Latin America, Chagas disease is a serious public health problem. Chemotherapy of this disease is restricted, and the chronic phase remains incurable. Thus, new strategies for its treatment have been pursued. Preclinical studies showed improvement in the treatment of disease as a result of the administration of BZN together with ITR. Knowledge of the physicochemical properties of drugs along with studies that allows to assess their biopharmaceutical characteristics and changes resulting from the association is valuable to the discussion on the feasibility of combination treatment. This is a crucial step to establish the formulation development strategy. In this way, a method using first derivative spectrometry was developed and validated for the simultaneous quantification of BZN (340 nm) and ITR (268 nm) in biorrelevants medias (pH 1.2, 4.5 and 6.8) by the method of cancellation point (zero-crossing). This was applied to determine the equilibrium solubility of these drugs by the method Shake-flask at 37 °C for 72 h at 100 rpm and in the avaliation of intrinsic dissolution also at 37 °C in biorrelevants medias. BZN showed low solubility in all the medias evaluated. It was not possible to determine ITR in the medias with pH values of 4.5 and 6.8; this showed low solubility in the pH 1.2. The intrinsic dissolution results obtained in the assay were similar to solubility results, so, the two drugs were considered of low solubility. This result associated with permeability in silico data obtained allowed the allocation of BZN and ITR in the Biopharmaceutics Classification System (BCS) as belonging to classes IV and II, respectively. Drugs of these classes can lead to atypical effects in vivo such as incomplete bioavailability, inter and intra-patient variability in pharmacokinetic parameters and incomplete release of the drugs due to the low solubility. Besides the fact that food can exert significant effects. However, it was shown that despite the low solubility of drugs, this is not changed when they are associated and are placed in contact with the media assessed by 72 h. Therefore, this property would not be an obstacle for the association of these drugs as long as a suitable formulation could be developed.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília,Faculdade de Medicina Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2012. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2014-11-06T17:27:37Z No. of bitstreams: 1 2014_FlaviaFurtadoMulinari_Parcial.pdf: 2398295 bytes, checksum: bbfc6bb5d0bbd87e49bd247ade99ee4e (MD5) / Approved for entry into archive by Tania Milca Carvalho Malheiros(tania@bce.unb.br) on 2014-11-06T17:30:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_FlaviaFurtadoMulinari_Parcial.pdf: 2398295 bytes, checksum: bbfc6bb5d0bbd87e49bd247ade99ee4e (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-06T17:30:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_FlaviaFurtadoMulinari_Parcial.pdf: 2398295 bytes, checksum: bbfc6bb5d0bbd87e49bd247ade99ee4e (MD5) / O Fator Estimulador de Colônias de Granulócitos (G-CSF) é um fator de crescimento hematopoiético cuja função é estimular a proliferação, diferenciação e ativação de células precursoras de neutrófilos da medula óssea. É caracterizado como uma proteína de massa molecular de 18,8 KDa, constituída de 175 resíduos de aminoácidos. A proteína é estabilizada por duas pontes dissulfeto intramoleculares nas posições Cys(36)- Cys(42) e Cys(64)-Cys(74) e apresenta um resíduo de Cisteína (Cys) livre na posição 17. O hrG-CSF (Filgrastima) foi aprovado em 1991 pelo FDA para tratamento de neutropenia induzida por quimioterapia. Atualmente tem sido utilizado para tratamento de neutropenia oriunda de outras doenças como AIDS e Leucemia, com o objetivo de diminuir infecções oportunistas. O primeiro biofármaco recombinante do G-CSF foi produzido em Escherichia coli em 1986 pela empresa AMGEN, e teve sua patente expirada em 2006, tornando-se alvo de produção de biossimilares pelas indústrias farmacêuticas. Visto que o Brasil é um importador deste biofármaco, o que leva a gastos elevados para o Sistema Único de Saúde, o objetivo do trabalho foi desenvolver uma tecnologia de produção, com custos reduzidos, em âmbito nacional. Para tanto, a região codificadora da proteína foi sintetizado utilizando-se códons preferenciais para E. coli e clonado em vetor de expressão pET28a+ por empresa especializada. Foram realizados testes de expressão utilizando-se a cepa BL21(DE3), onde a proteína foi expressa em corpos de inclusão e a melhor condição estabelecida foi utilizando-se o meio LB contendo Canamicina 30 μg.mL-1, a 37 °C com agitação de 200 rpm por 4 horas. Na tentativa de solubilizar os corpos de inclusão e purificar a proteína, alguns protocolos foram testados, e neste trabalho foi desenvolvido um método inovador para lavagem e solubilização com solvente específico. A proteína foi purificada utilizando-se também um processo inovador, em apenas uma etapa. A identidade da proteína foi confirmada por western-blot e espectrometria de massa, e sua atividade foi confirmada por ensaio biológico in vivo, com diferentes concentrações do hrG-CSF purificado utilizado o medicamento comercial como referência. Neste trabalho foi estabelecido um processo simples e de baixo custo para produção e purificação de G-CSF humano recombinante ativo em células de E. coli, de extrema importância para o desenvolvimento da metodologia adequada visando o escalonamento para e produção do biossimilar em escala industrial. ___________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The human recombinant Granulocyte Colony-Stimulating Factor (hrG-CSF) is a hematopoietic growth factor whose function is to stimulate the proliferation, differentiation and activation of neutrophil precursor cells from bone marrow. It is characterized as a 18.8 kDa molecular mass protein composed of 175 amino acid residues. The protein is stabilized by two intramolecular disulfide bonds at Cys (36) - Cys (42) and Cys (64)-Cys (74) positions, with free Cysteine residue (Cys) at position 17. The hrG-CSF (Filgrastim) was approved by the FDA in 1991 for neutropenia treatment induced by chemotherapy. Actually it has been used to treat neutropenia arising from other diseases such as AIDS and leukemia, with the aim of reducing opportunistic infections. The first recombinant G-CSF biopharmaceutical of was produced in Escherichia coli in 1986 by the AMGEN company, which patent was expired in 2006, starting the production of filgrastim biosimilars by pharmaceutical companies. Since Brazil is an importer of biopharmaceuticals, which leads to high spending for the National Health System, the study aimed to develop a production technology with reduced costs, nationally. Therefore, the protein coding region was synthesized using E. coli preferential codons and cloned into the expression vector pET28a by a specialized company. Expression tests were performed using BL21 (DE3) strain. The protein was produced as inclusion bodies. The best expression condition was established using LB medium containing 30 μg.mL-1 of Kanamycin at 37 °C, 200 rpm for 4 hours. Aiming to solubilize the inclusion bodies and purifying the protein, some protocols were tested, and a novel method for washing and solubilization of includion bodies with specific solvent was developed. The protein was purified also with an innovative process, on just one step. The protein identity was confirmed by Western blot and mass spectrometry, and its activity was confirmed by in vivo bioassay with different concentrations of purified recombinant HRG-CSF using commercial drug as reference. In this study, we established a simple and low cost process for production and purification of recombinant active G-CSF in E. coli cells, extremely important for the development of an appropriate methodology for production on industrial scale biosimilar drug.

Orientador : Maurício Aguiar Serra / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Sociais Aplicadas, Programa de Pós-Graduação em Desenvolvimento Econômico. Defesa: Curitiba, 31/03/2009 / Inclui bibliografia / Área de concentração : Políticas públicas

A absorção oral de um fármaco é fundamentalmente dependente da solubilidade aquosa e da permeabilidade gastrintestinal. Estes são fatores determinantes da biodisponibilidade e, consequentemente, da eficácia clínica de um medicamento. O Sistema de Classificação Biofarmacêutica (SCB), fundamentado nas propriedades de solubilidade e permeabilidade, consolidou-se nos últimos anos como ferramenta de auxílio na predição da biodisponibilidade de fármacos e tem sido empregado no desenvolvimento de formas farmacêuticas, contendo novos fármacos ou não, bem como no registro de medicamentos genéricos. O emprego do SCB para a isenção dos estudos de biodisponibilidade relativa/bioequivalência para algumas classes de fármacos vem sendo adotado e discutido, uma vez que os ensaios de biodisponibilidade apresentam limitações técnicas, econômicas e éticas. Assim, nos últimos anos, Agências Regulatórias têm utilizado o SCB para permitir que testes de dissolução in vitro sejam usados para estabelecer bioequivalência no caso de fármacos altamente solúveis e altamente permeáveis. O presente trabalho tem como objetivos revisar e reunir a literatura relacionada ao SCB com vistas a discutir a possibilidade de isenção dos estudos de biodisponibilidade relativa / bioequivalência para os medicamentos. Com esta proposta, foram pesquisadas as bases de dados Pubmed, Medline, Legislações Brasileiras indexadas no Visalegis e Legislação Internacional. Buscou-se a literatura pertinente publicada no período entre 1980 e o primeiro semestre de 2009. Desde a introdução do SCB existe uma relutância na aplicação das bioisenções para o registro de genéricos uma vez que as indústrias farmacêuticas não querem arriscar uma rejeição à sua solicitação nos países onde esse sistema ainda não é aceito, principalmente devido à falta de harmonização da legislação global. No Brasil, o SCB não é aceito para isenção de estudos de biodisponibilidade relativa/bioequivalência, pois os dados de permeabilidade são escassos na literatura científica para a grande maioria dos fármacos e ainda não existem protocolos validados para os estudos de permeabilidade. Além disto, o país ainda não possui um sistema de registro e controle de qualidade de princípios ativos e excipientes, ou seja, até o momento, não há regulamentação técnica para registro de matérias-primas de produtos farmacêuticos e cosméticos, ao contrário do que existe nos Estados Unidos. Para uma melhor aplicabilidade do SCB nas bioisenções as seguintes questões devem ser destacadas: continuidade do suporte científico para assegurar bioisenções para fármacos da Classe III; suporte científico para as metodologias de determinação de permeabilidade, com o objetivo de determinar a classificação biofarmacêutica dos fármacos; discutir a aplicação da Classificação Biofarmacêutica na fase de pesquisa e desenvolvimento de novas moléculas. / The oral absorption of a drug is fundamentally dependent on the aqueous solubility and gastrointestinal permeability. Those are determinant factors of the bioavailability of a drug and of the clinical efficacy of a pharmaceutical product. The Biopharmaceutics Classification System (BCS) is based on the properties of solubility and permeability and has been developed as a tool to predict bioavailability of drugs. BCS has also been used in the development of new dosage forms, including new molecules or not, as well as in the registration of generic drugs. The use of BCS as a \"waiver\" of in vivo bioavailability and bioequivalence studies for some drug classes has been discussed, since bioavailability studies represent technical, economical and ethical limitations. Therefore, in the last years the Regulatory Agencies have used BCS to allow that in vitro dissolution tests be used to establish bioequivalence in the case of highly soluble and highly permeable drugs. The present study has the objective to review the literature related to BCS, focusing in the discussion of biowaivers. The research was conducted using the following databases: Pubmed, Medline, Brazilian legislation indexed in the ANVISA website (VISALEGIS) and international legislation. The research period was between 1980 and the first semester of 2009. Since the introduction of BCS there is reluctance in the application of a biowaiver because the pharmaceutical companies do not want to risk a rejection of their biowaiver request in the countries where this system has not been established yet and also due to the lack of global legislation harmonization. In Brazil the BCS is not accepted for waiving bioequivalence studies, since permeability data are not very common in the scientific literature, for the great majority of drugs. Besides, the country does not have a regulatory framework for the registration of active pharmaceutical ingredients and raw materials, as it happens in the United States. In order to give a better applicability of BCS in biowaiver requests, the following questions must be pointed out: continuity of scientific support to assure biowaivers for Class III drugs; scientific support for permeability methodologies determination; discuss the applicability of BCS in early development phase studies for new molecular entities.

A absorção oral de um fármaco é fundamentalmente dependente da solubilidade aquosa e da permeabilidade gastrintestinal. Estes são fatores determinantes da biodisponibilidade e, consequentemente, da eficácia clínica de um medicamento. O Sistema de Classificação Biofarmacêutica (SCB), fundamentado nas propriedades de solubilidade e permeabilidade, consolidou-se nos últimos anos como ferramenta de auxílio na predição da biodisponibilidade de fármacos e tem sido empregado no desenvolvimento de formas farmacêuticas, contendo novos fármacos ou não, bem como no registro de medicamentos genéricos. O emprego do SCB para a isenção dos estudos de biodisponibilidade relativa/bioequivalência para algumas classes de fármacos vem sendo adotado e discutido, uma vez que os ensaios de biodisponibilidade apresentam limitações técnicas, econômicas e éticas. Assim, nos últimos anos, Agências Regulatórias têm utilizado o SCB para permitir que testes de dissolução in vitro sejam usados para estabelecer bioequivalência no caso de fármacos altamente solúveis e altamente permeáveis. O presente trabalho tem como objetivos revisar e reunir a literatura relacionada ao SCB com vistas a discutir a possibilidade de isenção dos estudos de biodisponibilidade relativa / bioequivalência para os medicamentos. Com esta proposta, foram pesquisadas as bases de dados Pubmed, Medline, Legislações Brasileiras indexadas no Visalegis e Legislação Internacional. Buscou-se a literatura pertinente publicada no período entre 1980 e o primeiro semestre de 2009. Desde a introdução do SCB existe uma relutância na aplicação das bioisenções para o registro de genéricos uma vez que as indústrias farmacêuticas não querem arriscar uma rejeição à sua solicitação nos países onde esse sistema ainda não é aceito, principalmente devido à falta de harmonização da legislação global. No Brasil, o SCB não é aceito para isenção de estudos de biodisponibilidade relativa/bioequivalência, pois os dados de permeabilidade são escassos na literatura científica para a grande maioria dos fármacos e ainda não existem protocolos validados para os estudos de permeabilidade. Além disto, o país ainda não possui um sistema de registro e controle de qualidade de princípios ativos e excipientes, ou seja, até o momento, não há regulamentação técnica para registro de matérias-primas de produtos farmacêuticos e cosméticos, ao contrário do que existe nos Estados Unidos. Para uma melhor aplicabilidade do SCB nas bioisenções as seguintes questões devem ser destacadas: continuidade do suporte científico para assegurar bioisenções para fármacos da Classe III; suporte científico para as metodologias de determinação de permeabilidade, com o objetivo de determinar a classificação biofarmacêutica dos fármacos; discutir a aplicação da Classificação Biofarmacêutica na fase de pesquisa e desenvolvimento de novas moléculas. / The oral absorption of a drug is fundamentally dependent on the aqueous solubility and gastrointestinal permeability. Those are determinant factors of the bioavailability of a drug and of the clinical efficacy of a pharmaceutical product. The Biopharmaceutics Classification System (BCS) is based on the properties of solubility and permeability and has been developed as a tool to predict bioavailability of drugs. BCS has also been used in the development of new dosage forms, including new molecules or not, as well as in the registration of generic drugs. The use of BCS as a \"waiver\" of in vivo bioavailability and bioequivalence studies for some drug classes has been discussed, since bioavailability studies represent technical, economical and ethical limitations. Therefore, in the last years the Regulatory Agencies have used BCS to allow that in vitro dissolution tests be used to establish bioequivalence in the case of highly soluble and highly permeable drugs. The present study has the objective to review the literature related to BCS, focusing in the discussion of biowaivers. The research was conducted using the following databases: Pubmed, Medline, Brazilian legislation indexed in the ANVISA website (VISALEGIS) and international legislation. The research period was between 1980 and the first semester of 2009. Since the introduction of BCS there is reluctance in the application of a biowaiver because the pharmaceutical companies do not want to risk a rejection of their biowaiver request in the countries where this system has not been established yet and also due to the lack of global legislation harmonization. In Brazil the BCS is not accepted for waiving bioequivalence studies, since permeability data are not very common in the scientific literature, for the great majority of drugs. Besides, the country does not have a regulatory framework for the registration of active pharmaceutical ingredients and raw materials, as it happens in the United States. In order to give a better applicability of BCS in biowaiver requests, the following questions must be pointed out: continuity of scientific support to assure biowaivers for Class III drugs; scientific support for permeability methodologies determination; discuss the applicability of BCS in early development phase studies for new molecular entities.

A biodisponibilidade de um fármaco é o fator determinante da eficácia clínica e depende principalmente das seguintes etapas: liberação da substância ativa a partir da forma farmacêutica e absorção. Assim, o controle da extensão e da velocidade de absorção de um fármaco administrado por via oral depende basicamente de dois aspectos: solubilidade nos líquidos fisiológicos e permeabilidade através das membranas biológicas. Fundamentado nestas características, o Sistema de Classificação Biofarmacêutica (SCB) foi proposto como ferramenta que permite a classificação dos fármacos e tem como finalidade auxiliar nas bioisenções e na predição da biodisponibilidade in vivo. Neste sentido, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a solubilidade da estavudina e a permeabilidade intestinal de fármacos antirretrovirais por meio do modelo de perfusão in situ. Os meios empregados nos estudos de solubilidade e dissolução intrínseca foram: água purificada, tampão pH 1,2, tampão pH 4,5, tampão pH 6,8 e tampão pH 7,5. Para a determinação da solubilidade pelo método do equilíbrio (técnica shake-flask), quantidades conhecidas do fármaco foram adicionadas em cada meio até atingir a saturação e esta mistura foi submetida à agitação de 150 rpm por 72 horas a 37°C. Para os ensaios de dissolução intrínseca, quantidade conhecida de estavudina foi compactada na matriz do aparato de Wood e submetida à dissolução em cada meio, sob agitação de 50 rpm a 37°C. A determinação da permeabilidade dos antirretrovirais foi realizada empregando o modelo de perfusão in situ em ratos machos Wistar. Uma porção do jejuno foi isolada e a solução de perfusão (pH 6,5) contendo o fármaco foi perfundida a um fluxo de 0,2 mL.min-1 a 37°C por 120 minutos. Os resultados obtidos referentes à solubilidade da estavudina pelo método do equilíbrio foram (em mg.mL-1): 146,49 (água), 149,22 (pH 4,5), 139,43 (pH 6,8) e 130,15 (pH 7,5). A determinação da razão dose:solubilidade (D:S) em cada meio permitiu a obtenção dos seguintes resultados (em mL): 0,27 (água), 0,27 (pH 4,5), 0,29 (pH 6,8) e 0,31 (pH 7,5). Tais dados indicaram que este fármaco apresenta alta solubilidade nos meios utilizados no estudo, exceto em meio pH 1,2, onde a estavudina apresentou instabilidade demonstrada pela presença de coloração e odor alterados, inviabilizando a determinação da solubilidade nestas condições. Os ensaios de dissolução intrínseca da estavudina permitiram a determinação das taxas de dissolução intrínseca (TDI), as quais foram (em mg/min/cm²): 2,3570 (água), 2,7389 (pH 1,2), 2,7590 (pH 4,5) e 2,5947 (pH 6,8), demonstrando que este fármaco apresenta alta velocidade de dissolução nos meios utilizados. Com relação ao estudo de permeabilidade por meio do modelo de perfusão in situ, nas condições experimentais empregadas, os resultados obtidos foram (em cm.s-1): 3,96 x 10-5 (estavudina), 3,08 x 10-5 (lamivudina) e 4,17 x 10-5 (zidovudina) sugerindo que os fármacos estavudina e zidovudina apresentam alta permeabilidade. Para a lamivudina não é descartada a possibilidade de ser considerada como fármaco de alta permeabilidade, mesmo apresentando resultado ligeiramente abaixo em relação aos outros dois antirretrovirais utilizados no estudo. / Drug\'s bioavaliability is a determinant factor of clinical efficacy and it depends on the following steps: release of active ingredient from the dosage form and absorption. Thus, control of extend and rate of absorption of a drug orally administered depends on two aspects: the drug solubility in physiological fluids and permeability across biological membranes. Based on these characteristics, the Biopharmaceutical Classification System (BCS) was proposed as a tool that allows the drug\'s classification and it assists in biowaiver and in vivo bioavailability prediction. The aim of this study was to evaluate stavudine solubility and intestinal permeability of antiretroviral drugs through the in situ perfusion model. The means employed in the solubility studies and intrinsic dissolution were: purified water, buffer pH 1.2, buffer pH 4.5, buffer pH 6.8 and buffer pH 7.5. For solubility study by equilibrium method (shake-flask technique), known amounts of the drug were added in each media to reach saturation and the mixture was subjected to agitation of 150 rpm for 72 hours at 37°C. For intrinsic dissolution test, known amount of stavudine has been compressed in the matrix of Wood\'s apparatus and subjected to dissolution in each media with agitation of 50 rpm at 37°C. Permeability evaluation of antiretroviral drugs was performed using the in situ perfusion model in male Wistar rats. A portion of jejunum was isolated and perfusion solution (pH 6.5) with the drug was perfused at 0.2 mL/min at 37°C for 120 minutes. Results of stavudine solubility by equilibrium method were (in mg/mL): 146.49 (water), 149.22 (pH 4.5), 139.43 (pH 6.8) and 130.15 (pH 7.5). Dose:solubility (D:S) ratio determinations allowed to obtain the following results (in mL): 0.27 (water), 0.27 (pH 4.5), 0.29 (pH 6.8) and 0.31 (pH 7.5). These results indicate that stavudine has high solubility in the means employed in this study, except in buffer pH 1.2, where stavudine showed instability demonstrated by presence of stain and odor changed, which prevented the determination of solubility in these conditions. The intrinsic dissolution study allowed the determination of intrinsic dissolution rates (IDR), which were (in mg/min/cm²): 2.3570 (water), 2.7389 (pH 1.2), 2.7590 (pH 4.5) and 2.5947 (pH 6.8), demonstrating that this drug has a high dissolution rate in each media used. In permeability study through the in situ perfusion model, under experimental conditions adopted, the results obtained were (in cm/s): 3.96 x 10-5 (stavudine), 3.08 x 10-5 (lamivudine) and 4.17 x 10-5 (zidovudine), suggesting that stavudine and zidovudine have high permeability. It\'s possible that lamivudine might be considered high permeability drug, although its effective permeability result was slightly lower compared to effective permeability of stavudine and zidovudine.

A biodisponibilidade de um fármaco é o fator determinante da eficácia clínica e depende principalmente das seguintes etapas: liberação da substância ativa a partir da forma farmacêutica e absorção. Assim, o controle da extensão e da velocidade de absorção de um fármaco administrado por via oral depende basicamente de dois aspectos: solubilidade nos líquidos fisiológicos e permeabilidade através das membranas biológicas. Fundamentado nestas características, o Sistema de Classificação Biofarmacêutica (SCB) foi proposto como ferramenta que permite a classificação dos fármacos e tem como finalidade auxiliar nas bioisenções e na predição da biodisponibilidade in vivo. Neste sentido, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a solubilidade da estavudina e a permeabilidade intestinal de fármacos antirretrovirais por meio do modelo de perfusão in situ. Os meios empregados nos estudos de solubilidade e dissolução intrínseca foram: água purificada, tampão pH 1,2, tampão pH 4,5, tampão pH 6,8 e tampão pH 7,5. Para a determinação da solubilidade pelo método do equilíbrio (técnica shake-flask), quantidades conhecidas do fármaco foram adicionadas em cada meio até atingir a saturação e esta mistura foi submetida à agitação de 150 rpm por 72 horas a 37°C. Para os ensaios de dissolução intrínseca, quantidade conhecida de estavudina foi compactada na matriz do aparato de Wood e submetida à dissolução em cada meio, sob agitação de 50 rpm a 37°C. A determinação da permeabilidade dos antirretrovirais foi realizada empregando o modelo de perfusão in situ em ratos machos Wistar. Uma porção do jejuno foi isolada e a solução de perfusão (pH 6,5) contendo o fármaco foi perfundida a um fluxo de 0,2 mL.min-1 a 37°C por 120 minutos. Os resultados obtidos referentes à solubilidade da estavudina pelo método do equilíbrio foram (em mg.mL-1): 146,49 (água), 149,22 (pH 4,5), 139,43 (pH 6,8) e 130,15 (pH 7,5). A determinação da razão dose:solubilidade (D:S) em cada meio permitiu a obtenção dos seguintes resultados (em mL): 0,27 (água), 0,27 (pH 4,5), 0,29 (pH 6,8) e 0,31 (pH 7,5). Tais dados indicaram que este fármaco apresenta alta solubilidade nos meios utilizados no estudo, exceto em meio pH 1,2, onde a estavudina apresentou instabilidade demonstrada pela presença de coloração e odor alterados, inviabilizando a determinação da solubilidade nestas condições. Os ensaios de dissolução intrínseca da estavudina permitiram a determinação das taxas de dissolução intrínseca (TDI), as quais foram (em mg/min/cm²): 2,3570 (água), 2,7389 (pH 1,2), 2,7590 (pH 4,5) e 2,5947 (pH 6,8), demonstrando que este fármaco apresenta alta velocidade de dissolução nos meios utilizados. Com relação ao estudo de permeabilidade por meio do modelo de perfusão in situ, nas condições experimentais empregadas, os resultados obtidos foram (em cm.s-1): 3,96 x 10-5 (estavudina), 3,08 x 10-5 (lamivudina) e 4,17 x 10-5 (zidovudina) sugerindo que os fármacos estavudina e zidovudina apresentam alta permeabilidade. Para a lamivudina não é descartada a possibilidade de ser considerada como fármaco de alta permeabilidade, mesmo apresentando resultado ligeiramente abaixo em relação aos outros dois antirretrovirais utilizados no estudo. / Drug\'s bioavaliability is a determinant factor of clinical efficacy and it depends on the following steps: release of active ingredient from the dosage form and absorption. Thus, control of extend and rate of absorption of a drug orally administered depends on two aspects: the drug solubility in physiological fluids and permeability across biological membranes. Based on these characteristics, the Biopharmaceutical Classification System (BCS) was proposed as a tool that allows the drug\'s classification and it assists in biowaiver and in vivo bioavailability prediction. The aim of this study was to evaluate stavudine solubility and intestinal permeability of antiretroviral drugs through the in situ perfusion model. The means employed in the solubility studies and intrinsic dissolution were: purified water, buffer pH 1.2, buffer pH 4.5, buffer pH 6.8 and buffer pH 7.5. For solubility study by equilibrium method (shake-flask technique), known amounts of the drug were added in each media to reach saturation and the mixture was subjected to agitation of 150 rpm for 72 hours at 37°C. For intrinsic dissolution test, known amount of stavudine has been compressed in the matrix of Wood\'s apparatus and subjected to dissolution in each media with agitation of 50 rpm at 37°C. Permeability evaluation of antiretroviral drugs was performed using the in situ perfusion model in male Wistar rats. A portion of jejunum was isolated and perfusion solution (pH 6.5) with the drug was perfused at 0.2 mL/min at 37°C for 120 minutes. Results of stavudine solubility by equilibrium method were (in mg/mL): 146.49 (water), 149.22 (pH 4.5), 139.43 (pH 6.8) and 130.15 (pH 7.5). Dose:solubility (D:S) ratio determinations allowed to obtain the following results (in mL): 0.27 (water), 0.27 (pH 4.5), 0.29 (pH 6.8) and 0.31 (pH 7.5). These results indicate that stavudine has high solubility in the means employed in this study, except in buffer pH 1.2, where stavudine showed instability demonstrated by presence of stain and odor changed, which prevented the determination of solubility in these conditions. The intrinsic dissolution study allowed the determination of intrinsic dissolution rates (IDR), which were (in mg/min/cm²): 2.3570 (water), 2.7389 (pH 1.2), 2.7590 (pH 4.5) and 2.5947 (pH 6.8), demonstrating that this drug has a high dissolution rate in each media used. In permeability study through the in situ perfusion model, under experimental conditions adopted, the results obtained were (in cm/s): 3.96 x 10-5 (stavudine), 3.08 x 10-5 (lamivudine) and 4.17 x 10-5 (zidovudine), suggesting that stavudine and zidovudine have high permeability. It\'s possible that lamivudine might be considered high permeability drug, although its effective permeability result was slightly lower compared to effective permeability of stavudine and zidovudine.

A permeabilidade através do epitélio intestinal tem se tornado um importante aspecto a ser determinado nas avaliações biofarmacotécnicas envolvendo fármacos e medicamentos. A técnica mais empregada para essa determinação in vitro é aquela que utiliza a cultura de células Caco-2. Entretanto, ainda são discutíveis as condições para a realização desses experimentos, uma vez que a padronização das mesmas é fator fundamental para a confiabilidade dos resultados. Nesta tese, foram avaliadas as condições para realização dos estudos de permeabilidade através de membranas de células Caco-2 para a rifampicina, principal fármaco utilizado no tratamento da tuberculose. Para tanto, foram investigados fatores tais como a citotoxicidade da rifampicina em diferentes concentrações, a influência da concentração do fármaco sobre a permeabilidade, do pH de realização dos experimentos e da presença de proteínas do muco intestinal, além da influência de proteínas plasmáticas. Foi também investigado o potencial indutor da rifampicina sobre a expressão da glicoproteína-P (Pgp) e seu impacto na permeabilidade da própria rifampicina. Os estudos foram desenvolvidos utilizando membranas de células Caco-2 provenientes da American Type Culture Collection (ATCC) cultivadas em placas Transwel®, a quantificação da fração permeada foi por cromatografia líquida de alta eficiência com métodos validados. A análise da indução da expressão da Pgp foi realizada por PCR-RT. Demonstrou-se que as concentrações da rifampicina (10,0; 25,0 e 50,0 µg/mL) não ocasionaram danos às células Caco-2 no estudo de citotoxicidade pela técnica que emprega o sal do brometo de 3-(4,5-dimetil-2-tiazoli)-2,5-difenil-2H-tetrazólio (MTT). As concentrações de rifampicina (5,0; 10,0 e 25,0 µg/mL) não resultaram em valores estatisticamente diferentes de permeabilidade aparente (Papp) em células Caco-2 nas condições do estudo. A rifampicina apresentou valor de Papp significativamente maior em pH 6,8 dentre os valores de pH avaliados (5,8 ; 6,8; 7,4). A presença de muco simulado e de soro fetal bovino não resultou em valores de permeabilidade significativamente distintos do resultado obtido sem a sua adição ao experimento. A expressão da Pgp em células Caco-2 é induzida pela adição da rifampicina (10µg/mL), ocasionando diminuição da sua permeabilidade por mecanismo de efluxo. Pelos resultados de permeabilidade obtidos em todas as condições avaliadas, a rifampicina pode ser considerada um fármaco de alta permeabilidade de acordo com o Sistema de Classificação Biofarmacêutica. / The permeability through the intestinal epithelium has become an important aspect to be determined in evaluations involving drugs and pharmaceutical products. The most common technique for this determination in vitro is one that uses the culture of Caco-2 cells. Nevertheless, the conditions for carrying out such experiments are still questionable, since the standardization of them is essential to the reliability of the results. In this thesis, we evaluate the conditions for the studies of permeability of rifampicin through membranes of Caco-2 cells, the main drug used in the treatment of tuberculosis. To this end, we examined factors such as cytotoxicity of rifampicin at different concentrations, the influence of drug concentration on the permeability, as well as the pH of the experiments, the presence of proteins of intestinal mucus, and the influence of plasma proteins. It was also investigated the potential of rifampicin on the expression of P-glycoprotein (Pgp) and its impact on the permeability of rifampicin itself. The studies were developed using membranes of Caco-2 cells from American Type Culture Collection (ATCC) grown on plates Transwel®, and the quantification of the fraction of drug permeated was obtained by high performance liquid chromatography with validated methods. The analysis of induction of expression of Pgp was performed by RT-PCR. It was demonstrated that the concentrations of rifampicin (10,0; 25,0 and 50,0 µg/mL) did not cause damage to Caco-2 cells in the study of the cytotoxicity technique that uses a bromide salt of 3 - (4,5-dimethyl-2 - thiazol) -2,5-diphenyl-2H-tetrazolium (MTT). The concentrations of rifampicin (5,0; 10,0 and 25,0 &#181g/mL) did not result in statistically different values of apparent permeability (Papp) in Caco-2 cells under the conditions of the study. Rifampicin showed a value of Papp significantly higher at pH 6.8 in comparison with other measured pH values (5,8 and 7,4). The presence of mucus simulated and fetal calf serum did not result in permeability values significantly different from the result obtained without its addition to the experiment. The expression of P-gp in Caco-2 cells is induced by the addition of rifampicin (10 µg/ml), decreasing its permeability by efflux mechanism. Taking into account the results of permeability obtained in all conditions, the rifampicin can be considered a high permeability drug according to the biopharmaceutical classification system.

O estudo de dissolução in vitro é uma ferramenta importante utilizada para o controle de qualidade lote-a-Iote dos medicamentos, como guia no desenvolvimento de novas formulações e para assegurar a qualidade e performance do produto após certas alterações. O itraconazol é um fármaco com baixa solubilidade em meio aquoso (classe 11), dessa forma, alguns problemas de solubilidade podem ser detectados no ensaio de dissolução. A proposta deste trabalho foi a realização de uma avaliação biofarmacêutica in vitro de cápsulas contendo péletes de itraconazol comercializadas no mercado brasileiro por laboratórios farmacêuticos e farmácias magistrais. O medicamento de referência, registrado com o nome de Sporanox® (Janssen-Cilag), uma formulação genérica, duas formulações similares e quatro formulações magistrais, foram submetidas a ensaios de doseamento, perfil de dissolução, eficiência de dissolução, cinética de dissolução, fator de diferença (f1) e fator de semelhança (f2). Os resultados demonstraram diferenças de liberação entre as formulações sugerindo que as mesmas não são equivalentes ao medicamento de referência. / Dissolution testing is an important tool used as a quality control procedure in pharmaceutical production, as guide in the development of new formulations and to assure the quality and performance of the product after certain modifications. Itraconazol is a poorly water-solubility drug (class 11) and the dissolution studies are very important to detect solubility problems. The purpose of this work was the in vitro biopharmaceutical evaluation of capsules containing Itraconazole pellets manufactured by Brazilian pharmaceutical laboratories and compounding pharmacies. The reference product, registered as Sporanox® (Janssen-Cilag), a generic product, a similar formulation and four compounding formulations were submitted to assay, dissolution profile, dissolution efficiency, dissolution kinetics, difference factor (f1) and similarity factor (f2). The results demonstrated different releases among the formulations suggesting that they are not equivalent to the reference product.