Introdução: O vitiligo é uma doença da pele frequente que afeta cerca de 1% da população em todo o mundo. Ocorre em pessoas de qualquer idade ou etnia, e mais da metade dos pacientes desenvolvem a doença antes dos 20 anos de idade. O vitiligo pode afetar negativamente a qualidade de vida (QoL) do paciente. Um questionário de qualidade de vida específico para vitiligo foi desenvolvido e validado na língua inglesa: the vitiligo-specific quality-of-life instrument (VitiQoL). Objetivo: O objetivo deste estudo é avaliar a QoL em pacientes adultos com o VitiQoL e o DLQI e pediátricos com o CDLQI em uma amostra de pacientes com vitiligo no sul do Brasil. Métodos: Na primeira etapa, o instrumento foi traduzido, adaptado culturalmente e validado para o português falado no Brasil (VitiQoL-PB). Após, foram incluídos pacientes selecionados no Ambulatório de Dermatologia do Hospital de Clínicas de Porto Alegre e numa clínica privada de Porto Alegre. Foi realizada amostragem de conveniência de casos consecutivos. A qualidade de vida de pacientes pediátricos foi avaliada com o questionário CDLQI. Em pacientes adultos foram aplicados o VitiQoL – PB e o DLQI. Resultados: Observou-se uma forte correlação entre os escores do total de VitiQoL e o DLQI (r = 0,81; p <0,001). O fator que mais contribuiu para a pontuação final do VitiQoL foi estigma. Em nossa amostra, as mulheres apresentaram escores mais elevados do que os homens (p <0,05). Problemas psiquiátricos foram associados com uma pior qualidade de vida. Na população pediátrica, a mediana do escore do CDLQI foi 3 (intervalo interquartil 1,3-7,3). Houve uma correlação estatisticamente significativa entre a idade da criança e o escore no CDLQI (rs = 0,41, p = 0,044). Não houve diferença entre meninos e meninas (p = 0,219). Conclusão: Este estudo confirma não só que o VitiQoL é fácil de administrar, como também, acrescenta informações importantes sobre o impacto do vitiligo na América do Sul. Instrumentos genéricos são úteis e permitem comparações com outras dermatoses, mas não são suficientemente específicos para detectar nuances na maneira como os pacientes lidam com o vitiligo. A autoestima dos pacientes é muito afetada e a estigmatização está bastante presente. Há grupos de pacientes que são mais vulneráveis ao impacto da doença, como as mulheres, os adolescentes e os pacientes com doenças psiquiátricas. / Background: Vitiligo is a common skin disease that has been reported to affect approximately 1 % of the population worldwide. It affects people of any age or ethnicity, more than half of who develop it before the age of 20 years. Vitiligo can negatively affect patient’s quality of life (QoL). A specific questionnaire for vitiligo has been developed and validated in the English language: the vitiligo-specific quality-of-life instrument (VitiQoL). Objective: The aim of this study was to access the QoL in adult patients through VitiQoL and DLQI and pediatric patients through CDLQI in a sample of patients with vitiligo in Southern Brazil. Methods: In the first phase of the study the instrument was translated, cultural adapted and validated into Brazilian Portuguese (VitiQoL-PB). Then patients were selected from a Dermatological Outpatient Clinic from Hospital de Clínicas de Porto Alegre and from a Private Practice in Porto Alegre. In this study, we used convenience sampling of consecutive cases. The QoL of pediatric patients was performed using the CDLQI questionnaire. In adult patients we applied the VitiQoL – PB and the DLQI. Results: A strong correlation between the scores of the total VitiQoL and DLQI was observed (r = 0.81; p <0.001). The factor that most contributed to the final score of VitiQoL was stigma. In our sample, women had higher scores than men (p<0,05). Psychiatric problems were associated with lower QoL. In the pediatric population, the median score of CDLQI was 3 (interquartile range 1.3 to 7.3). There was a statistically significant correlation between the child's age and the score on CDLQI (rs = 0.41, p = 0.044). There was no difference between boys and girls (p = 0.219). Conclusion: This study confirms that VitiQoL is easy to administer and adds important information about the impact of vitiligo on a South American population. Generic instruments are useful and allow comparisons with other dermatoses, but are not specific enough to detect nuances in how patients deal with the overall vitiligo burden. Self-esteem of patients is greatly affected and stigmatization is very present in the disease. There are groups of patients that are more vulnerable to the impact of the disease, like women, patients with psychiatric diseases and adolescents.

Introdução: O vitiligo é uma doença da pele frequente que afeta cerca de 1% da população em todo o mundo. Ocorre em pessoas de qualquer idade ou etnia, e mais da metade dos pacientes desenvolvem a doença antes dos 20 anos de idade. O vitiligo pode afetar negativamente a qualidade de vida (QoL) do paciente. Um questionário de qualidade de vida específico para vitiligo foi desenvolvido e validado na língua inglesa: the vitiligo-specific quality-of-life instrument (VitiQoL). Objetivo: O objetivo deste estudo é avaliar a QoL em pacientes adultos com o VitiQoL e o DLQI e pediátricos com o CDLQI em uma amostra de pacientes com vitiligo no sul do Brasil. Métodos: Na primeira etapa, o instrumento foi traduzido, adaptado culturalmente e validado para o português falado no Brasil (VitiQoL-PB). Após, foram incluídos pacientes selecionados no Ambulatório de Dermatologia do Hospital de Clínicas de Porto Alegre e numa clínica privada de Porto Alegre. Foi realizada amostragem de conveniência de casos consecutivos. A qualidade de vida de pacientes pediátricos foi avaliada com o questionário CDLQI. Em pacientes adultos foram aplicados o VitiQoL – PB e o DLQI. Resultados: Observou-se uma forte correlação entre os escores do total de VitiQoL e o DLQI (r = 0,81; p <0,001). O fator que mais contribuiu para a pontuação final do VitiQoL foi estigma. Em nossa amostra, as mulheres apresentaram escores mais elevados do que os homens (p <0,05). Problemas psiquiátricos foram associados com uma pior qualidade de vida. Na população pediátrica, a mediana do escore do CDLQI foi 3 (intervalo interquartil 1,3-7,3). Houve uma correlação estatisticamente significativa entre a idade da criança e o escore no CDLQI (rs = 0,41, p = 0,044). Não houve diferença entre meninos e meninas (p = 0,219). Conclusão: Este estudo confirma não só que o VitiQoL é fácil de administrar, como também, acrescenta informações importantes sobre o impacto do vitiligo na América do Sul. Instrumentos genéricos são úteis e permitem comparações com outras dermatoses, mas não são suficientemente específicos para detectar nuances na maneira como os pacientes lidam com o vitiligo. A autoestima dos pacientes é muito afetada e a estigmatização está bastante presente. Há grupos de pacientes que são mais vulneráveis ao impacto da doença, como as mulheres, os adolescentes e os pacientes com doenças psiquiátricas. / Background: Vitiligo is a common skin disease that has been reported to affect approximately 1 % of the population worldwide. It affects people of any age or ethnicity, more than half of who develop it before the age of 20 years. Vitiligo can negatively affect patient’s quality of life (QoL). A specific questionnaire for vitiligo has been developed and validated in the English language: the vitiligo-specific quality-of-life instrument (VitiQoL). Objective: The aim of this study was to access the QoL in adult patients through VitiQoL and DLQI and pediatric patients through CDLQI in a sample of patients with vitiligo in Southern Brazil. Methods: In the first phase of the study the instrument was translated, cultural adapted and validated into Brazilian Portuguese (VitiQoL-PB). Then patients were selected from a Dermatological Outpatient Clinic from Hospital de Clínicas de Porto Alegre and from a Private Practice in Porto Alegre. In this study, we used convenience sampling of consecutive cases. The QoL of pediatric patients was performed using the CDLQI questionnaire. In adult patients we applied the VitiQoL – PB and the DLQI. Results: A strong correlation between the scores of the total VitiQoL and DLQI was observed (r = 0.81; p <0.001). The factor that most contributed to the final score of VitiQoL was stigma. In our sample, women had higher scores than men (p<0,05). Psychiatric problems were associated with lower QoL. In the pediatric population, the median score of CDLQI was 3 (interquartile range 1.3 to 7.3). There was a statistically significant correlation between the child's age and the score on CDLQI (rs = 0.41, p = 0.044). There was no difference between boys and girls (p = 0.219). Conclusion: This study confirms that VitiQoL is easy to administer and adds important information about the impact of vitiligo on a South American population. Generic instruments are useful and allow comparisons with other dermatoses, but are not specific enough to detect nuances in how patients deal with the overall vitiligo burden. Self-esteem of patients is greatly affected and stigmatization is very present in the disease. There are groups of patients that are more vulnerable to the impact of the disease, like women, patients with psychiatric diseases and adolescents.

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-09-05Bitstream added on 2014-08-13T18:00:26Z : No. of bitstreams: 1 000759919.pdf: 991125 bytes, checksum: 4bc7da8348709b88a4fa064395ab4938 (MD5) / Melasma é hipermelanose crônica, localizada, simétrica adquirida, que acomete áreas fotoexpostas, preferencialmente a face, o que causa estresse emocional. Ocorre de forma mais frequente entre mulheres adultas. Sua patogênese não é totalmente compreendida apesar de alguns fatores de risco serem conhecidos, como história familiar, exposição solar, gravidez, hormônios sexuais, cosméticos e medicamentos fotossensibilizantes. Há evidente predisposição genética, já que mais de 40% dos pacientes referem familiares acometidos. O principal objetivo deste estudo foi avaliar os fatores de risco para o desenvolvimento de melasma facial em mulheres. Realizou-se estudo caso-controle envolvendo mulheres adultas, portadoras ou não de melasma facial, pareadas por idade. As variáveis foram agrupadas em níveis hierárquicos: dados constitucionais, variáveis de exposição, variáveis ligadas à estímulos hormonais e traços de ansiedade, avaliados pelo questionário IDATE-T; e analisados por regressão logística múltipla condicional. Pacientes com melasma apresentaram, preferencialmente, fototipos III a V, iniciaram sua doença entre a terceira e quarta décadas de vida, referiram frequente acometimento familiar e ascendência europeia e indígena. Do ponto de vista clínico, houve maior acometimento de topografias centrais da face e os principais fatores desencadeantes foram a gestação, insolação e contraceptivo oral combinado. Quando comparados aos controles, mulheres com melasma diferiram de seus controles quanto aos fototipos, ascendência indígena (OR=2,25), anos de moradia rural/praia (OR=1,07), tempo de trabalho exposto ao sol (OR=1,05), tempo de atividades de lazer exposto ao sol (OR=1,03), uso de antidepressivo/ansiolítico (OR=5,11), irregularidade menstrual (OR=3,99), histórico de gestação (OR=3,58), anos de uso de contraceptivo oral (OR=1,24) e escores de ansiedade (OR=1,07). História familiar de melasma foi referido ...

Orientador: Hélio Amante Miot / Banca: Juliano Vilaverde Schmitt / Banca: Ediléa Bagatin / Banca: Silivio Alencar Marques / Banca: Daniel Holthusen Nunes / Resumo: Melasma é hipermelanose crônica, localizada, simétrica adquirida, que acomete áreas fotoexpostas, preferencialmente a face, o que causa estresse emocional. Ocorre de forma mais frequente entre mulheres adultas. Sua patogênese não é totalmente compreendida apesar de alguns fatores de risco serem conhecidos, como história familiar, exposição solar, gravidez, hormônios sexuais, cosméticos e medicamentos fotossensibilizantes. Há evidente predisposição genética, já que mais de 40% dos pacientes referem familiares acometidos. O principal objetivo deste estudo foi avaliar os fatores de risco para o desenvolvimento de melasma facial em mulheres. Realizou-se estudo caso-controle envolvendo mulheres adultas, portadoras ou não de melasma facial, pareadas por idade. As variáveis foram agrupadas em níveis hierárquicos: dados constitucionais, variáveis de exposição, variáveis ligadas à estímulos hormonais e traços de ansiedade, avaliados pelo questionário IDATE-T; e analisados por regressão logística múltipla condicional. Pacientes com melasma apresentaram, preferencialmente, fototipos III a V, iniciaram sua doença entre a terceira e quarta décadas de vida, referiram frequente acometimento familiar e ascendência europeia e indígena. Do ponto de vista clínico, houve maior acometimento de topografias centrais da face e os principais fatores desencadeantes foram a gestação, insolação e contraceptivo oral combinado. Quando comparados aos controles, mulheres com melasma diferiram de seus controles quanto aos fototipos, ascendência indígena (OR=2,25), anos de moradia rural/praia (OR=1,07), tempo de trabalho exposto ao sol (OR=1,05), tempo de atividades de lazer exposto ao sol (OR=1,03), uso de antidepressivo/ansiolítico (OR=5,11), irregularidade menstrual (OR=3,99), histórico de gestação (OR=3,58), anos de uso de contraceptivo oral (OR=1,24) e escores de ansiedade (OR=1,07). História familiar de melasma foi referido ... / Abstract: Não disponível / Mestre

Introdução: O vitiligo é uma doença da pele frequente que afeta cerca de 1% da população em todo o mundo. Ocorre em pessoas de qualquer idade ou etnia, e mais da metade dos pacientes desenvolvem a doença antes dos 20 anos de idade. O vitiligo pode afetar negativamente a qualidade de vida (QoL) do paciente. Um questionário de qualidade de vida específico para vitiligo foi desenvolvido e validado na língua inglesa: the vitiligo-specific quality-of-life instrument (VitiQoL). Objetivo: O objetivo deste estudo é avaliar a QoL em pacientes adultos com o VitiQoL e o DLQI e pediátricos com o CDLQI em uma amostra de pacientes com vitiligo no sul do Brasil. Métodos: Na primeira etapa, o instrumento foi traduzido, adaptado culturalmente e validado para o português falado no Brasil (VitiQoL-PB). Após, foram incluídos pacientes selecionados no Ambulatório de Dermatologia do Hospital de Clínicas de Porto Alegre e numa clínica privada de Porto Alegre. Foi realizada amostragem de conveniência de casos consecutivos. A qualidade de vida de pacientes pediátricos foi avaliada com o questionário CDLQI. Em pacientes adultos foram aplicados o VitiQoL – PB e o DLQI. Resultados: Observou-se uma forte correlação entre os escores do total de VitiQoL e o DLQI (r = 0,81; p <0,001). O fator que mais contribuiu para a pontuação final do VitiQoL foi estigma. Em nossa amostra, as mulheres apresentaram escores mais elevados do que os homens (p <0,05). Problemas psiquiátricos foram associados com uma pior qualidade de vida. Na população pediátrica, a mediana do escore do CDLQI foi 3 (intervalo interquartil 1,3-7,3). Houve uma correlação estatisticamente significativa entre a idade da criança e o escore no CDLQI (rs = 0,41, p = 0,044). Não houve diferença entre meninos e meninas (p = 0,219). Conclusão: Este estudo confirma não só que o VitiQoL é fácil de administrar, como também, acrescenta informações importantes sobre o impacto do vitiligo na América do Sul. Instrumentos genéricos são úteis e permitem comparações com outras dermatoses, mas não são suficientemente específicos para detectar nuances na maneira como os pacientes lidam com o vitiligo. A autoestima dos pacientes é muito afetada e a estigmatização está bastante presente. Há grupos de pacientes que são mais vulneráveis ao impacto da doença, como as mulheres, os adolescentes e os pacientes com doenças psiquiátricas. / Background: Vitiligo is a common skin disease that has been reported to affect approximately 1 % of the population worldwide. It affects people of any age or ethnicity, more than half of who develop it before the age of 20 years. Vitiligo can negatively affect patient’s quality of life (QoL). A specific questionnaire for vitiligo has been developed and validated in the English language: the vitiligo-specific quality-of-life instrument (VitiQoL). Objective: The aim of this study was to access the QoL in adult patients through VitiQoL and DLQI and pediatric patients through CDLQI in a sample of patients with vitiligo in Southern Brazil. Methods: In the first phase of the study the instrument was translated, cultural adapted and validated into Brazilian Portuguese (VitiQoL-PB). Then patients were selected from a Dermatological Outpatient Clinic from Hospital de Clínicas de Porto Alegre and from a Private Practice in Porto Alegre. In this study, we used convenience sampling of consecutive cases. The QoL of pediatric patients was performed using the CDLQI questionnaire. In adult patients we applied the VitiQoL – PB and the DLQI. Results: A strong correlation between the scores of the total VitiQoL and DLQI was observed (r = 0.81; p <0.001). The factor that most contributed to the final score of VitiQoL was stigma. In our sample, women had higher scores than men (p<0,05). Psychiatric problems were associated with lower QoL. In the pediatric population, the median score of CDLQI was 3 (interquartile range 1.3 to 7.3). There was a statistically significant correlation between the child's age and the score on CDLQI (rs = 0.41, p = 0.044). There was no difference between boys and girls (p = 0.219). Conclusion: This study confirms that VitiQoL is easy to administer and adds important information about the impact of vitiligo on a South American population. Generic instruments are useful and allow comparisons with other dermatoses, but are not specific enough to detect nuances in how patients deal with the overall vitiligo burden. Self-esteem of patients is greatly affected and stigmatization is very present in the disease. There are groups of patients that are more vulnerable to the impact of the disease, like women, patients with psychiatric diseases and adolescents.

黑色素生成是為了保護皮膚細胞免受紫外光傷害的一個生化過程。在這過程中，黑色素在人類表皮底層的黑色素細胞的黑色素體內產生。該過程可以被基因，荷爾蒙或環境因素所影響。黑色素的製造量是依賴速度限制酶酪氨酸酶的活性，黑色素體的數量和大小，黑色素體通過黑色素細胞的偽足傳送致角質細胞的速度及黑色素體在角質細胞內的分佈。這些細胞過程會受皮膚顏色或紫外光曝光量的變化而影響。當黑色素的產生超過黑色素的降解，黑色素沉著毛病便出現。根據不同的皮膚類型，年齡組別及累積紫外光曝光程度而引發雀斑或黃褐斑的形成。很多治療方法市面上能夠提供，它們包括人工合成化粧品，激光，整容手術等。這些治療方法通常會產生副作用及蘊藏高風險。因此從天然物質裏尋找治療藥物便成了美容學的一個新的研究方向。在這研究裏，十種草本植物就從自古以來用作治療黑色素沉著毛病的傅統中藥中被挑選出來。那些草本植物被四種擁有不同極性的溶劑提取。小鼠黑色素細胞被用以篩選提取物的降黑色素能力。結果發現當歸的正己烷及二氯甲烷的提取物有正面效用。當歸的化學成份4-乙基間苯二酚、4-乙基苯酚及1-十四烷醇也能降低小鼠黑色素細胞的黑色素量。數種生化技術繼而被應用作研究有效化學物的藥理。他們包括西方墨點法、環磷酸腺苷測試、蛋白激酶A活性測試及酪氨酸酶活性測試。 / Melanogenesis is a biochemical process designated for protecting skin cells from ultraviolet (UV)-induced damage. During the process, melanin is produced in the melanosomes of the melanocytes located at the basal epidermis of human. The process could be affected by genetic, hormonal or environmental factors. Amount of melanin synthesized depending on the activity of the rate-limiting enzyme tyrosinase, number and size of melanosomes, the transfer rate of melanosomes to keratinocytes through the melanocyte dendritic projections and the distribution pattern of melanosomes within keratinocytes. These cellular processes are influenced by variations in skin color or UV exposure amount. When melanin synthesis exceeds melanin degradation, hyperpigmentation disorder arises. This lead to the formation of freckles or chloasma according to different skin types, age groups and degree of cumulative UV exposure. A number of treatments are commercially available, they include applying synthetic cosmetics, laser, plastic surgery, etc. These treatments usually produce side-effects and possess high risk. Therefore, searching for therapeutic agents from natural compounds has become a new research direction in cosmetology. In this study, ten herbs were chosen from traditional Chinese medicine (TCM) which had been applied for treating hyperpigmentation. The herbs were extracted by four solvents with different polarity. The extracts were screened for their hypopigmentary ability by using melan-a cells. It was found that the hexane and dichloromethane extracts of Angelica sinensis possessed positive effects. 4-ethylresorcinol, 4-ethylphenol and 1-tetradecanol, the chemical constituents of A. sinensis, also attenuated melanin amount in melan-a cells. Moreover, several biochemical techniques were utilized to study the pharmaceutical mechanisms of the potent compounds. They include Western blot, cyclic adenosine monophosphate (cAMP) assay, protein kinase A (PKA) activity assay and tyrosinase activity assay. / Detailed summary in vernacular field only. / Lam, Rosanna Yen Yen. / Thesis (Ph.D.)--Chinese University of Hong Kong, 2012. / Includes bibliographical references (leaves 127-146). / Electronic reproduction. Hong Kong : Chinese University of Hong Kong, [2012] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Abstract also in Chinese. / Abstract --- p.i / Chinese Abstract --- p.iii / Acknowledgements --- p.iv / List of Publications --- p.v / Table of Contents --- p.vi / List of Abbreviations --- p.xii / List of Figures --- p.xv / List of Tables --- p.xviii / Chapter Chapter 1 --- Introduction --- p.1 / Chapter 1.1 --- Demand of cosmetics --- p.1 / Chapter 1.2 --- Skin structures and functions --- p.1 / Chapter 1.2.1 --- Epidermis --- p.3 / Chapter 1.2.1.1 --- Stratum corneum --- p.4 / Chapter 1.2.1.2 --- Stratum granulosum --- p.4 / Chapter 1.2.1.3 --- Stratum spinosum --- p.4 / Chapter 1.2.1.4 --- Stratum basale --- p.4 / Chapter 1.2.2 --- Dermis --- p.5 / Chapter 1.2.3 --- Hypodermis --- p.5 / Chapter 1.3 --- Sun irradiation --- p.5 / Chapter 1.4 --- Variety of skin types --- p.6 / Chapter 1.5 --- Biochemical reactions within melanocyte --- p.7 / Chapter 1.6 --- Pigmentation disorder --- p.14 / Chapter 1.7 --- From the view of traditional Chinese medicine --- p.16 / Chapter 1.8 --- Treatments available for hyperpigmentation --- p.18 / Chapter 1.9 --- Aims of study and application of strategies --- p.19 / Chapter Chapter 2 --- Investigation of the inhibitory effect of herbal extracts and their constituent compounds on melanin synthesis --- p.20 / Chapter 2.1 --- Introduction --- p.20 / Chapter 2.2 --- Materials and methods --- p.21 / Chapter 2.2.1 --- Materials --- p.21 / Chapter 2.2.2 --- Herbal extraction --- p.23 / Chapter 2.2.3 --- Cell culture --- p.25 / Chapter 2.2.4 --- Growth curve and melanin production curve --- p.25 / Chapter 2.2.5 --- SRB assay --- p.26 / Chapter 2.2.6 --- Calibration curve for SRB assay --- p.27 / Chapter 2.2.7 --- Measurement of melanin production --- p.27 / Chapter 2.2.8 --- Calibration curve for melanin production assay --- p.28 / Chapter 2.2.9 --- Statistical analysis --- p.28 / Chapter 2.3 --- Results --- p.29 / Chapter 2.3.1 --- Growth curve and melanin production curve for assay development --- p.29 / Chapter 2.3.2 --- Calibration curves of SRB assay and melanin production assay --- p.32 / Chapter 2.3.3 --- Hypopigmentary effect of 40 herbal extracts --- p.35 / Chapter 2.3.4 --- Hypopigmentary effects of chemical components of A. sinensis --- p.41 / Chapter 2.4 --- Discussion --- p.49 / Chapter Chapter 3 --- Study of the effect of potential compounds on melanogenic protein expression by Western blot --- p.54 / Chapter 3.1 --- Introduction --- p.54 / Chapter 3.2 --- Materials and methods --- p.56 / Chapter 3.2.1 --- Materials --- p.56 / Chapter 3.2.2 --- Cell culture --- p.56 / Chapter 3.2.3 --- Preparation of cell lysates --- p.57 / Chapter 3.2.4 --- Protein assay --- p.57 / Chapter 3.2.5 --- SDS-PAGE and membrane transfer --- p.58 / Chapter 3.2.6 --- Washing of blotted antibodies and film exposure --- p.59 / Chapter 3.3 --- Results --- p.61 / Chapter 3.4 --- Discussion --- p.70 / Chapter Chapter 4 --- Study of the effect of potential compounds on melanogenic gene expression by RT-PCR --- p.76 / Chapter 4.1 --- Introduction --- p.76 / Chapter 4.2 --- Materials and methods --- p.76 / Chapter 4.2.1 --- Materials --- p.77 / Chapter 4.2.2 --- Cell culture --- p.77 / Chapter 4.2.3 --- RNA extraction --- p.78 / Chapter 4.2.4 --- cDNA synthesis --- p.78 / Chapter 4.2.5 --- PCR --- p.80 / Chapter 4.3 --- Results --- p.83 / Chapter 4.4 --- Discussion --- p.85 / Chapter Chapter 5 --- Study of the effect of potential compounds on cAMP level by EIA --- p.85 / Chapter 5.1 --- Introduction --- p.86 / Chapter 5.2 --- Materials and methods --- p.86 / Chapter 5.2.1 --- Materials --- p.86 / Chapter 5.2.2 --- Cell culture --- p.86 / Chapter 5.2.3 --- Preparation of cell lysates --- p.86 / Chapter 5.2.4 --- Protein assay --- p.87 / Chapter 5.2.5 --- The cAMP assay --- p.88 / Chapter 5.2.6 --- Preparation of cAMP calibration curve --- p.88 / Chapter 5.2.7 --- Calculation --- p.89 / Chapter 5.2.8 --- Statistical analysis --- p.89 / Chapter 5.3 --- Results --- p.90 / Chapter 5.4 --- Discussion --- p.94 / Chapter Chapter 6 --- Study of the effect of potential compounds on PKA activity by PKA activity assay --- p.96 / Chapter 6.1 --- Introduction --- p.96 / Chapter 6.2 --- Materials and methods --- p.96 / Chapter 6.2.1 --- Materials --- p.97 / Chapter 6.2.2 --- Cell culture --- p.97 / Chapter 6.2.3 --- Preparation of cell lysates --- p.98 / Chapter 6.2.4 --- Protein assay --- p.98 / Chapter 6.2.5 --- The PKA kinase activity assay --- p.100 / Chapter 6.2.6 --- Calculation --- p.100 / Chapter 6.2.7 --- Statistical analysis --- p.100 / Chapter 6.3 --- Results --- p.101 / Chapter 6.4 --- Discussion --- p.104 / Chapter Chapter 7 --- Study of the effect of potential compounds on tyrosinase activity by enzyme inhibition assay --- p.107 / Chapter 7.1 --- Introduction --- p.107 / Chapter 7.2 --- Materials and methods --- p.108 / Chapter 7.2.1 --- Materials --- p.108 / Chapter 7.2.2 --- Assay development for mushroom tyrosinase --- p.109 / Chapter 7.2.3 --- Mushroom tyrosinase inhibition assay --- p.109 / Chapter 7.2.4 --- Cell culture --- p.110 / Chapter 7.2.5 --- Preparation of cellular tyrosinase --- p.110 / Chapter 7.2.6 --- Protein assay --- p.111 / Chapter 7.2.7 --- Cellular tyrosinase inhibition assay --- p.111 / Chapter 7.2.8 --- Calculation --- p.112 / Chapter 7.2.9 --- Statistical analysis --- p.112 / Chapter 7.3 --- Results --- p.113 / Chapter 7.4 --- Discussion --- p.120 / Chapter Chapter 8 --- General discussion --- p.123 / References --- p.127

Made available in DSpace on 2015-05-14T16:53:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-06Bitstream added on 2015-05-14T16:58:40Z : No. of bitstreams: 1 000828889.pdf: 1474303 bytes, checksum: 5e90c0d81b102049672685d3cfea7b62 (MD5)

Orientador: Mariângela Esther Alencar Marques / Coorientador: Luciane Donida Bartoli Miot / Coorientador: Hélio Amante Miot / Banca: Ediléia Bagatin / Banca: Samira Yarak / Banca: Luciana Patricia Fernandes Abbade / Banca: Juliano Vilaverde Schmitt / Banca: Mariângela Esther Alencar Marques / Resumo: Não disponível / Abstract: Not available / Doutor

Orientador: Carlos Eduardo Steiner / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-17T00:08:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cunha_KarinaSoares_M.pdf: 3290868 bytes, checksum: 62ac845d38c989b1515d635bf2bfa79b (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O Mosaico pigmentar tipo Ito é uma alteração cutânea frequente, caracterizada por hipopigmentação da pele que, na maioria dos casos, segue o padrão linhas de Blaschko, geralmente associada a anomalias extracutâneas, sobretudo anomalias do Sistema Nervoso Central (SNC). Sugere-se que esse padrão decorre da presença e migração de duas linhagens celulares no período embrionário, com diferente expressão de genes associados à pigmentação, que darão origem à epiderme e ao SNC no feto. Diversos tipos de mosaicismo foram associados ao quadro e acredita-se que os casos em que não houve tal detecção se devam à limitação das células analisadas. Devido à função, origem embrionária e migração celular, possivelmente o mosaicismo seria melhor identificado em melanócitos e queratinócitos, principalmente na presença de alterações no SNC, as alterações poderiam ter envolvimento com o prognóstico neurológico. Neste estudo foi realizada análise citogenética de linfócitos e fibroblastos de 15 indivíduos com mosaico pigmentar do tipo Ito. Os objetivos incluíram padronizar a cultura de células de melanócitos e queratinócitos, visando analisar o cariótipo desses indivíduos nesses tipos celulares. O estudo citogenético nesses tipos celulares, porém, não pode ser realizado devido à dificuldade de se obter metáfases adequadas para análise. Assim, foi desenvolvido protocolo de cultura e análise citogenética em queratinócitos, o qual funcionou adequadamente em indivíduos testes, porém sem resultado semelhante nos sujeitos de pesquisa. A preparação cromossômica a partir de melanócitos, por outro lado, não se mostrou adequada. Na análise de linfócitos e fibroblastos, foram encontradas alterações cromossômicas diferentes em quatro indivíduos (26% da casuística), presentes em ambos os tipos celulares. Não foram observadas divergências nas amostras a partir de pele hipo e normopigmentadas. Essas alterações incluíram um caso de t(X;21) regular, para o qual foram realizados estudos complementares de forma a aprimorar a investigação laboratorial, sendo análise por array-CGH, FISH e estudo de inativação de X. Um caso se tratou de trissomia 18 em mosaico, nesse indivíduo não foi possível a coleta de biópsia, porém foi realizado FISH interfásico em células da mucosa oral. Houve também um caso de r(22) em mosaico, o único que apresentou diferença na proporção de células alteradas em fibroblastos e linfócitos, possivelmente por maior instabilidade in vitro de cromossomos em anel em culturas de longa duração. O último caso alterado se refere a um cromossomo marcador, também em mosaico. Os resultados obtidos foram comparados com dados da literatura prévia. Assim, apenas um caso apresentou alteração cromossômica não em mosaico, representada por uma translocação X/autossomo regular, para a qual as técnicas de estudo utilizadas não detectaram justificativa para o padrão de mosaicismo observado clinicamente / Abstract: Pigmentary mosaicism of Ito type is a skin abnormality often characterized by hypopigmentation of the skin following, in most cases, the Blaschko lines, usually associated with extracutaneous abnormalities, especially abnormalities of the central nervous system (CNS). It is suggested that this pattern arises from the presence and migration of two cell lineages in the embryonic period, with different expression of genes associated with pigmentation, which will give rise to the epidermis and the CNS in the fetus. Several types of mosaicism have been associated with this disorder. In cases in which no mosaicismo was detected, it is believed that this may be secondary to the limitation of the cells analyzed. Due to the function and embryonic cell migration, in individuals with pigmentary mosaicism, a cytogenetic mosaicism possibly would be better identified in melanocytes and keratinocytes, especially in the presence of changes in the CNS. Besides, these changes could prognose the neurological outcome. This study comprehended cytogenetic analysis of lymphocytes and fibroblasts from 15 individuals with pigmentary mosaicism of Ito type. The targets included standardize the cell culture of melanocytes and keratinocytes in order to analyze the karyotype of these individuals in these cell types. The cytogenetic study in these cell types, however, was not possible due to difficulties in obtaining adequate metaphases for analysis. Given this difficulty, another cell type (fibroblasts) was studied. In the end, chromosomal abnormalities in lymphocytes and fibroblasts were identified in four individuals. These included one case of a balanced traslocation X/21, one case of trisomy 18 mosaicism, one case of a ring 22 mosaic and one marker chromosome, also in mosaic. Considering the results of cytogenetic lymphocytes and fibroblasts, additional studies were undertaken to enhance the laboratory investigation of these cases, including array-CGH, FISH and study of X inactivation. The results were compared with previous literature data. In conclusion, we developed protocol for culture and cytogenetic analysis in keratinocytes, which worked well on test subjects, but without similar results in study subjects. The chromosome preparation from melanocytes, however, was not adequate. There were no differences in samples from different area of skin. Only one case showed different proportion of cells altered in fibroblasts and lymphocytes, possibly due to instability of ring chromosomes in long duration cultures. Finally, only one case showed no chromosomal abnormality in mosaic, represented by a regular translocation X/autosome, for which the techniques used to study detected no explanation for the pattern of mosaicism observed clinically / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Albinism is an inherited condition affecting at least 1 in 4000 people in Africa. It is thought to be more common among black Africans although it affects the entire human populations. In most African societies, albinism is regarded to be a disability and the social attitudes against albinos are characterised by lack of understanding, fear, and also of prejudice based on the appearance of albinism. There are various myths surrounding albinos such as that they are born as a punishment, that it is a curse to give birth to albinos and that albinos are immortal and that they are in fact spirits. This causes them to be seen as outcasts in society. Albinism is an inherited, congenital condition resulting in reduced synthesis of melanin pigment in the hair, skin and eyes. It leads to a host of lifelong physical health problems, in particular visual impairment and ultraviolet induced skin damage. In Africa such problems are exacerbated by exposure to harsh sunlight and reduced access to adequate health care, especially in rural areas. / Thesis (LLM (Human Rights and Democratisation in Africa)) -- University of Pretoria, 2011. / http://www.chr.up.ac.za/ / nf2012 / Centre for Human Rights / LLM