Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-11-20T15:41:58Z No. of bitstreams: 1 2017_DouglasCardosoBrandão.pdf: 4146484 bytes, checksum: 6a31b9a3476632a59df2a04d1f4fb814 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-11-23T17:40:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_DouglasCardosoBrandão.pdf: 4146484 bytes, checksum: 6a31b9a3476632a59df2a04d1f4fb814 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-23T17:40:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_DouglasCardosoBrandão.pdf: 4146484 bytes, checksum: 6a31b9a3476632a59df2a04d1f4fb814 (MD5) Previous issue date: 2017-11-23 / A marcação celular específica vem sendo continuamente aprimorada visando sua aplicação como ferramenta para a pesquisa científica e o diagnóstico. O estudo de compartimentos celulares baseado em fluorescência tem auxiliado grandemente na investigação de processos químicos e biológicos essenciais a manutenção da vida das células. Moléculas como o benzotiadiazol, possibilitam a síntese de diversos derivados fluorescentes a partir do seu forte núcleo aceptor de elétrons. A simples confirmação da atividade fluorescente intracelular já habilita estas moléculas como potenciais compostos repórteres que poderão ser acoplados a outras moléculas que apresentem avidez e estabeleçam ligações estáveis específicas com biomoléculas. Atualmente, existem diversos marcadores comerciais para marcação celular, porém estes agentes apresentam diversas desvantagens que tornam o seu uso limitado. Nosso grupo vem buscando desenvolver novas moléculas fluorescentes para aplicação em bioimageamento, visando suprir as limitações dos agentes fluorescentes comerciais de referência. Além disso, seu desenvolvimento se enquadra nos preceitos da química verde. Deste modo, trabalhamos com o núcleo 2,1,3 benzotiadiazol (BTD) que possui diversas características ideias para sondas fluorescentes. Esta pesquisa apresenta três moléculas derivadas deste núcleo BTD (BJD#UnB1, BJD#UnB2 e BJD#UnB3) e visa relacionar a estrutura química, solubilidade e o alvo celular em que são seletivas nos experimentos in vitro e in vivo. Os resultados demonstraram que os compostos BJD#UnB1 e BJD#UnB2 apresentam afinidade pela membrana plasmática, possivelmente se associando aos glicerofosfolipídeos de membrana. Sendo que o composto BJD#UnB1 apresenta o seu pico de fluorescência dentro da faixa do azul e o composto BJD#UnB2 apresenta seu pico de fluorescência dentro da faixa do verde, no espectro de luz visivel. A solubilidade destes dois compostos foi variada, onde o composto BJD#UnB2 apresentou melhor solubilidade. Apesar da marcação no citoplasma apresentada por ambos os compostos, o mesmo se repetiu com o marcador comercial de membrana plasmática CellMask®. O composto BJD#UnB3 apresentou especificidade por corpúsculos lipídicos, emitindo intenso sinal de fluorescência na faixa do verde no espectro de luz visível, esta molécula apresentou ainda solubilidade similar a do composto BJD#UnB1. Quando comparado ao Bodipy®, o composto aqui testado (BJD#UnB3) apresentou maior intensidade de fluorescência que o marcador comercial de referência. Além disso, este composto foi excelente para marcações em outros modelos como C. elegans, Zebrafish e microalgas. Além destas propriedades, todos os marcadores aqui testados apresentaram ausência de citotoxicidade, fotoestabilidade durante o uso e estabilidade em solução e no meio intracelular. / A specific cellular marking, which is continuously improved aiming its application as a tool for scientific research and diagnosis. Molecules, such as benzothiadiazole, enable the production of several fluorescent molecules derivatives, keeping its strongly electron acceptor nucleus. The simple determination of intracellular fluorescent activity has already enabled these molecules to work as potential reporters that can be coupled to other molecules that show avidity and establish specific stable bonds with other biomolecules. Currently, there are several markers used for fluorescent labeling, however, many of them show several disadivantages restricting their usage. Our group has been searching for new fluorescent molecules for bioimaging research, aiming to overcome the limitations of the commercial fluorescent agents. In addition, its development is based on processes that minimize environmental waste. Thus, we work with the 2,1,3-benzothiadiazole (BTD) nucleus that has several interesting features for fluorescent probes. This research presents three molecules derived from BTD nucleus (BJD#UnB1, BJD#UnB2 and BJD#UnB3) and aims to corelate their chemical structure, solubility and cellular target through in vitro and in vivo experiments. The results demonstrated that BJD#UnB1 and BJD#UnB2 compounds show affitinty to plasma membrane, possibly associating with membrane glycerophospholipids. Being that BJD#UnB1 compound shows higher fluorescence intensity in the blue channel and the BJD#UnB2 compound presents higher fluorescence intensity in the green channel. The solubility of these probes varied, and the compound BJD#UnB2 showed better solubility. Despite the inespecific and weaker cytoplasmic labeling compared to cell membrane staining exhibited by both compounds, this pattern was also observed for the commercial CellMask® plasma membrane marker. Compound BJD#UnB3 exhibited specificity for lipid vesicles, emitting intense fluorescence signal in the green channel and exhibiting similar solubility to compound BJD#UnB1. Compared to Bodipy®, the compound tested in this work (BJD # UnB3) showed higher fluorescence intensity than the commercial probe. Besides, this compound was excellent for stainging other models such as C. elegans, Zebrafish and microalgae. In addition, all markers showed photostability and no cytotoxicit during their use and they were stable in solution or in intracellular medium.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2016. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-06-10T13:37:23Z No. of bitstreams: 1 2016_RafaelCorrea.pdf: 2154891 bytes, checksum: 03393fdaa3d815a5abac7e5331e0d318 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2016-07-30T11:41:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_RafaelCorrea.pdf: 2154891 bytes, checksum: 03393fdaa3d815a5abac7e5331e0d318 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-30T11:41:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_RafaelCorrea.pdf: 2154891 bytes, checksum: 03393fdaa3d815a5abac7e5331e0d318 (MD5) / A Lisofosfatidilcolina (LPC) é um lisofosfolipídio que constitui a membrana plasmática e possui um papel importante na sinalização celular, pois está diretamente associada à albumina e a lipopoliproteínas. A LPC tem um amplo espectro de atividades pró-inflamatórias e exerce um papel fundamental durante a aterosclerose, pois ela é o principal componente fosfolipídio de lipoproteínas de baixa densidade oxidada (oxLDL). Ela também é capaz de induzir a formação de células gordurosas, as quais são componentes celulares fundamentais para o estabelecimento da aterosclerose e recrutamento leucocitário para o sítio desta patologia, induzindo a progressão da doença. No entanto, o papel de LPC na ativação do inflamassoma e na modulação da biogênese de corpúsculos lipídicos (CLs) neste processo ainda é mal compreendido. Este estudo tem por objetivo investigar se LPC é capaz de ativar o inflamassoma NLRP3 e induzir a secreção de IL-1β relacionando com os mecanismos de formação de células gordurosas por meio da análise da biogênese de CLs. Nossos resultados mostraram que a LPC induz um efeito citotóxico em altas concentrações em monócitos e células endoteliais, além de induzir a produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) e a ativação de caspase-1. A LPC induz a ativação do inflamassoma NLRP3 através da indução da secreção de IL-1β dependente de efluxo de potássio, dano lisossomal, reconhecimento via TLR-2, ativação de PPAR e estabilização das jangadas lipídicas em monócitos humanos e dependentes das caspases-1/11 e do inflamassoma NLRP3 em macrófagos peritoneais de camundongos. Além disso, a LPC induz a translocação do HMGB-1 do núcleo para o citoplasma tanto em células endoteliais quanto em monócitos. Outro resultado importante foi à indução da formação de células gordurosas, via LPC, em monócitos e células endoteliais in vitro, através do aumento da biogênese de CLs de maneira independente do inflamassoma NLRP3 e das caspases-1/11 in vivo. Além disso, as células endoteliais estimuladas com LPC ativam monócitos a se transformarem em células gordurosas, através da indução da biogênese de CL, por mecanismo ainda desconhecido. Portanto, o presente trabalho caracterizou diferentes mecanismos celulares e moleculares envolvidos na formação de células gordurosas, correlacionando-os com as vias de ativação dos inflamassomas e do metabolismo lipídico celular, e que corroboraram para a criação de um microambiente propício ao estabelecimento e manutenção da formação de placas ateroscleróticas. ______________________________________________________________________ ABSTRACT / Lysophosphatidylcholine (LPC) is a major lipid component of plasmatic membrane and has an important role in cell signaling because it is directly associated with albumin and lipoproteins. The LPC has a broad spectrum of pro-inflammatory activity and plays a key role in atherosclerosis, since it is a major phospholipid component of oxidized low density lipoprotein (oxLDL). Furthermore, LPC is also able to induce the formation of foam macrophages, which are the key cell component for the establishment of atherosclerosis and leukocyte recruitment on the site of the pathology. However, the role of LPC in modulating inflammasome activation and lipid droplet biogenesis in this process is poorly understood. This study is aimed to investigate if LPC is capable of inducing inflammasome activation and IL-1β secretion, verify the foam cell formation by analyzing lipid droplet biogenesis and characterize the signaling pathway involved in this process. Our results showed that LPC induces a cytotoxic effect in high concentrations in monocytes and endothelial cells, generation of reactive oxygen species (ROS) and activation of caspase-1. LPC induces activation of the inflammasome NLRP3 by induction of IL-1β secretion dependent of potassium efflux, and lysosomal damage via TLR-2 recognition, PPAR gamma activation and stabilization of lipid rafts in vitro, and caspase-1/11 and NLRP3 inflammasome in vivo assays. Furthermore, LPC induced translocation of HMGB1 from the nucleus towards the cytoplasm in endothelial cells and monocytes. Another important result was the induction of the formation of foam cells by LPC both in monocytes and endothelial cell in vitro assays, by increasing the biogenesis of lipid droplets in a manner independent of the NLRP3 inflammasome and caspase-1/11 in vivo. Additionally, endothelial cells stimulated with LPC activated monocytes to transform into foam cells through induction of lipid droplets biogenesis by unknown mechanism. Therefore, the present study characterized different cellular and molecular mechanisms involved in the formation of foam cells, correlating them with the activation pathways of inflammasomes and cellular lipid metabolism, and corroborated to create a favorable microenvironment for the establishment and maintenance of formation atherosclerotic plaques.

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:26:08Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5421_1.pdf: 453041 bytes, checksum: 3fdf21fbfc2d1ccf84a25f5295e63dcd (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2003 / INTRODUÇÃO: Entre suas diversas ações biológicas, o cálcio extracelular exerce um papel fundamental na manutenção da polaridade da membrana plasmática. Procurou-se avaliar o efeito da despolarização da membrana induzidas por baixa concentração extracelular de cálcio ou ouabaína na apoptose e expressão da Caspase-3 em neutrófilos (PMN). MÉTODOS: PMN foram isolados de sangue de voluntários por gradiente de densidade e cultivados por 18h em meios com concentração normal (1.8mM) ou baixa de cálcio (<10nM), ou com ouabaína (1mM), um inibidor da sódio/potássio ATPase. A apoptose foi quantificada por citometria de fluxo pela captação nuclear do iodeto de propídio. A expressão da proteína Caspase-3 foi avaliada por eletroforese de proteínas. RESULTADOS: Não foram observados efeitos na apoptose basal dos PMN com o uso isolado de estímulos despolarizantes. Entretanto, os efeitos inibitórios do lipopolissacarídeo (LPS - 1ug/ml) foram anulados quando os PMN foram cultivados em meio com baixa [Ca++], e restaurados pela adição de cátions divalentes (cálcio, estrôncio ou manganês); ouabaína, de forma similar, bloqueou o efeito do LPS. Tanto a depleção de cálcio extracelular quanto a utilização de ouabaína reduziram a expressão da forma precursora da Caspase-3. CONCLUSÃO: A cultura de PMN em meio com baixa [Ca++] ou ouabaína, dois estímulos distintos que induzem a despolarização de membrana, bloqueiam a inibição da apoptose mediada por LPS em PMN e alteram a expressão de caspases. Estas observações podem estabelecer um novo mecanismo de regulação da sobrevida dos PMN

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-04-01T14:05:54Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 916458 bytes, checksum: 3ba31258a09fab456ccb755153420074 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-01T14:05:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 916458 bytes, checksum: 3ba31258a09fab456ccb755153420074 (MD5) Previous issue date: 2015-12-07 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Esta tese compreende quatro capítulos. Todos os estudos aqui relatados foram executados na Colorado State University (CSU), em Fort Collins-CO/USA. Foram utilizados sêmen de seis garanhões com idade entre 15 e 21 anos, das raças Puro-Sangue Inglês, Quarto de Milha e Árabe; estabulados no Laboratório de Reprodução Equina da CSU. Capítulo 1: dividido em três experimentos. Experimento 1: objetivou-se avaliar efeito do tratamento com 2 mg de ciclodextrina carregada com colesterol e estigmastanol (CCC , CCE); 1, 2 e 3 mg de ciclodextrina carregada com óleo de salmão (S1, S2 e S3) e com óleo de semente de linho (L1, L2 e L3) nas motilidades total (MT) e progressiva (MP) dos espermatozóides após descongelamento. Não foram observadas diferenças entre os tratamentos (p>0,05). Experimento 2: objetivou-se avaliar MT e MP do sêmen tratado com diferentes fontes de lipídeos sonicados em meio Whitten’s Modificado (MW), após congelamento convencional e congelamento precedido por choque pelo frio; e avaliar efeito do tratamento com 2 mg de CCC e CCE sobre motilidades após choque pelo frio. Os tratamentos usando lipídeos foram: 3 e 6 mg de óleo de salmão (S3 e S6), de óleo de semente de linho (L3 e L6), de gema de ovo de galinha (G3 e G6), de óleo fígado de bacalhau (B3 e B6) e de óleo de açafrão (A3 e A6). Nenhum dos tratamentos utilizando lipídeos melhorou motilidade após congelamento convencional (p>0,05). Para o sêmen submetido a 0 oC por 30 minutos, os tratamentos G6, CCC e CCE melhoraram MT e MP (p<0,05). Experimento 3: utilizou-se cromatografia gasosa para avaliar eficiência dos tratamentos em alterar o perfil de ácidos graxos da membrana espermática. Os tratamentos foram: 6 μg de óleo de semente de linho diluído em etanol (L1); 2 mg de ciclodextrina carregada com óleo de semente de linho (L2) e 6 mg de óleo de semente de linho sonicado em MW (L3). Nenhum dos tratamentos foi capaz de alterar o perfil de ácidos graxos da membrana espermática (p>0,05). Capítulo 2: objetivou-se mensurar quantidade de colesterol e estabelecer a relação colesterol:fosfolipídeos na membrana plasmática de células espermáticas tratadas com diferentes quantidades de CCC (0, 2, 4, 6 e 8 mg). Foram utilizados kit comercial (Cholesterol Liquicolor, Stanbio Laboratory, Boerne, TX, USA) para mensuração do colesterol e ensaio de ferrotiocianato de amônio para mensuração dos fosfolipídeos totais. A quantidade de colesterol encontrada nas células tratadas com 0, 2, 4, 6 e 8 mg de CCC foram respectivamente 0,22; 0,58; 0,77; 0,91 e 1,07 μg/10 6 de espermatozóides, e a relação colesterol:fosfolipídeos para os mesmos tratamentos foram 0,39; 0,72; 1,0; 1,16 e 1,36. A quantidade de colesterol na membrana foi maior a partir do uso de 2 mg de CCC (p<0,05), e a relação colesterol:fosfolipídeos a partir do tratamento com 4 mg de CCC (p<0,05). Capítulo 3: neste estudo o objetivo foi avaliar o comportamento do sêmen sem tratamento (CT) ou tratado com 20% de plasma seminal (PS) e 40 μM de PC-12 (PC) em eventos ligados à capacitação espermática durante incubação por 30 minutos (avaliações foram feitas no tempo 0 – T0, 5 – T5, 15 – T15 e 30 minutos – T30). Para isso cada um dos tratamentos foi submetido a quatro diferentes corantes: 1- CoroNa Green, que quantifica sódio intracelular (CG); 2- Fluo-3, que quantifica cálcio intracelular (Fluo); 3- FITC-PNA, que quantifica reação acrossômica (FP) e 4- Merocianina, que caracteriza fluidez/desorganização da membrana plasmática (Mero). Yo-Pro-1 ou iodeto de propídeo foram utilizados para avaliar integridade de membrana plasmática. As amostras foram lidas em citometria de fluxo. O tratamento com PC-12 aumentou o percentual de células com acrossoma reagido, detectada na avaliação aos 30 minutos. Este percentual, de 33%, foi maior que o dos demais tratamentos no mesmo tempo (CT: 13% e PS: 4%) e superior aos percentuais para o próprio PC-12 nos tempos 0 (7%), 5 (9%) e 15 minutos (16%). Com relação à fluidez da membrana plasmática não houve diferença no percentual de células com merocianina elevada entre os diferentes tratamentos, nem entre um mesmo tratamento ao longo do tempo (p>0,05). O estudo revelou efluxo de sódio das células espermáticas equinas viáveis após 15 minutos de incubação, sendo que nos tempos 15 e 30 minutos o percentual de celulas positivas para CG foram menores para tratamento com plasma seminal (8,8 e 4,8%) e maiores para tratamento com PC-12 (36 e 15,4%), em relação ao controle (23,6 e 11,8%, p<0,05). Após 15 minutos de incubação o sêmen dos três tratamentos apresentou percentual de células positivas para Fluo superior ao tempo 0, porém o plasma seminal retardou a entrada deste íon nas células, visto que, no T15 percentual de células Fluo+ foi menor que nos outros tratamentos (CT: 87%; PS: 59% e PC: 95%, p<0,05), voltando a se igualar no tempo 30 minutos (CT: 98%%; PS: 85% e PC: 97%, p>0,05). O meio MW utilizado foi capaz de induzir efluxo de sódio e influxo de cálcio, alterações que caracterizam capacitação espermática. Capítulo 4: os objetivos aqui foram avaliar eficiência de diluidores a base de gema de ovo (Lactose-EDTA) ou gema de ovo associada a leite em pó (FR5 modificado – FR5M) e eficiência do glicerol (GLI) ou da combinação deste com metilformamida (MF) em manter MT e MP dos espermatozóides após congelamento usando diferentes protocolos (0: congelamento sem resfriamento; 20: resfriamento em palhetas por 20 minutos a 5 oC antes do congelamento; 120T: resfriamento do sêmen em tubos por 120 minutos a 5 oC; 120P: resfriamento do sêmen em palhetas por 120 minutos a 5 oC). O FR5M preservou melhor a MP de células espermáticas em todos os protocolos de congelamento utilizados, mostrando benefício da combinação da gema de ovo com leite em pó no diluente de congelamento (15%, 21%, 26% e 25% para 0, 20, 120T e 120P, respectivamente, vs. 9%, 14%, 19% e 17%, para lactose-EDTA, p<0,05). A utilização de Lactose-EDTA 5%GLI apresentou resultados superiores para MT e MP se comparado ao mesmo diluidor com 3%MF + 2%GLI, o que mostra que o glicerol é um crioprotetor que pode ser utilizado em diferentes protocolos de congelamento (MT para Lactose-EDTA 5%GLI = 33%, 45%, 56% e 53% para 0, 20, 120T e 120P vs. 20%, 30% 35% e 36% para Lactose-EDTA 3%MF+ 2%GLI, p<0,05; MP para Lactose-EDTA 5%GLI = 19% e 17% para 120T e 120P vs. 11% e 10% para Lactose-EDTA 3%MF+ 2%GLI, p<0,05). O resfriamento do sêmen antes do congelamento pode ser realizado tanto em tubos quanto em palhetas de 0,5 mL, sem prejuízos às motilidades total e progressiva do sêmen após congelamento. / This thesis is compounded by four chapters. All work reported here were performed at Colorado State University (CSU), located in Fort Collins, CO / USA. Six stallions between 15 and 21 years old (Thoroughbred, Quarter Horse and Arabian breeds) and stabled at Equine Reproduction Laboratory at CSU were used in all experiments. Chapter 1: comprised by three experiments. Experiment 1: aimed to evaluate the effects on total motility (TM) and progressive motility (PM) after semen thawing from treatments with 2 mg of cyclodextrin-loaded-cholesterol and 2 mg of cyclodextrin-loaded-stigmastanol (CLC, CLS); 1, 2 and 3 mg of cyclodextrin-loaded-salmon oil (S1, S2 and S3); and 1, 2 and 3 mg of cyclodextrin- loaded-flax seed oil (F1, F2, and F3). No differences among treatments were detected (p>0.05). Experiment 2: aimed to evaluate TM and PM of semen treated with different sonicated lipids into Modified Whitten’s Medium (MW), after conventional freezing and freezing preceded by cold shock, and assess the effect of treatment with 2 mg of CLC and CLS on motility after cold shock. Treatments using lipids were: 3 and 6 mg of salmon oil (S3 and S6); 3 and 6 mg of flax seed oil (F3, F6); 3 and 6 mg of egg yolk (E3 and E6); 3 and 6 mg of cod liver oil (C3 and C6), 3 and 6 mg of safflower oil (SF3 and SF6). None of the lipid treatments improved motility after conventional freezing (p>0.05). For semen subjected to 0 °C for 30 minutes, TM and PM increased in semen treated with E6, CLC and CLS (p<0.05). Experiment 3: gas chromatography was used to evaluate effectiveness of treatments in altering the sperm membrane fatty acid profile. The treatments were: 6 μg of flax seed oil diluted with ethanol (F1); 2 mg of cyclodextrin-loaded- flax seed oil (F2) and 6 mg of flax seed oil sonicated in MW (F3). None of the treatments was able to change fatty acid profile in the sperm membrane (p>0.05). Chapter 2: aimed to measure the amount of cholesterol and to establish the cholesterol:phospholipids ratio in plasma membrane of fresh equine sperm cells treated with different amounts of CLC (0, 2, 4, 6 and 8 mg). A commercial kit was used to measure cholesterol (Cholesterol Liquicolor, Stanbio Laboratory, Boerne, TX, USA) and an ammonium ferrothiocyanate assay for total phospholipids measurement. Amount of cholesterol found for cells treated with 0, 2, 4, 6 and 8 mg CLC were, respectively, 0.22; 0.58; 0.77; 0.91 and 1.07 micrograms/10 6 sperm, and cholesterol:phospholipids ratios to the same treatments were 0.39; 0.72; 1.0; 1.16 and 1.36, respectively. Increase in cholesterol amount was observed when 2 mg of CLC was used (p<0.05), and cholesterol:phospholipids ratio was higher with 4 mg of CLC (p<0.05). Chapter 3: in this study the objective was to evaluate the response of fresh equine semen without treatment (CT) or treated with 20% of seminal plasma (SP) and 40 μM PC-12 (PC) in events related to sperm capacitation during incubation for 30 minutes (evaluations made at time 0 - T0, 5 - T5, 15 – T15 and 30 minutes - T30). Each treatment was subjected to four different dyes: 1- CoroNa Green, which measures intracellular sodium (CG); 2- Fluo-3, which measures intracellular calcium (Fluo); 3- FITC-PNA, which measures acrosome reaction (FP) and 4- Merocyanine, which characterizes plasma membrane fluidity/destabilization (Mero). Yo-Pro-1 or propidium iodide were used to assess cell membrane integrity. Samples were read in flow cytometry. An increased percentage of cells with reacted acrosome was observed in semen treated with PC-12 at T30. This proportion (33%) was higher than the other treatments at the same time (CT: 13% and SP: 4%) and higher than the proportion for PC-12 at T0 (7%), T5 (9%) and T15 (16%). There was no difference in the percentage of cells with high merocyanine between different treatments or between the same treatment over time (p>0.05). The study showed sodium efflux after 15 minutes incubation, and at times 15 and 30 minutes the percentage of positive cells for GC were lower in SP treatment (8.8 and 4.8%) and higher for PC-12 (36 and 15.4%) compared to the CT (23.6 and 11.8%, p <0.05). At T15 the semen of all treatments showed higher proportion of Fluo positive cells than T0, but seminal plasma delayed entry of the ion into the cells, since at T15 Fluo proportion of positive cells was lower than the other treatments (CT: 87%; SP: 59% and PC: 95%, p<0.05) and became similar at T30 (CT = 98%, SP= 85% and PC=97%, p> 0.05). The semen extender used was able to inducing sodium efflux and calcium influx, changes characterizing sperm capacitation. Chapter 4: the objectives were to evaluate efficiency of an egg yolk–based medium (lactose-EDTA) or egg yolk associated with powdered milk (modified FR5 - MFR5), and efficiency of glycerol (GLY) or a combination between GLY and dimethylformamide (MF) to maintain TM and PM sperm after freezing using different protocols (0: no cooling; 20: cooling straws for 20 minutes at 5 °C before freezing; 120T: cooling in tubes for 120 minutes at 5 °C; and 120P: cooling in straws for 120 minutes at 5 °C). MFR5 preserved PM in all freezing protocols, showing the benefit of the combination of egg yolk with powdered milk for freezing diluent (15%, 21%, 26% and 25% for 0, 20, 120T and 120P, respectively, vs. 9%, 14%, 19% and 17% for lactose-EDTA, p<0.05). The use of lactose-EDTA 5%GLY showed superior results for TM and PM if compared to the same medium with 3%MF + 2%GLY, indicating that glycerol is a cryoprotectant that can be used in several different freezing protocols (TM for Lactose-EDTA 5%GLY = 33%, 45%, 56% and 53% for 0, 20, 120T and 120P vs. 20% 30% 35% and 36% for LactoseEDTA 3%MF + 2%GLY, p <0.05; MP for Lactose-EDTA 5%GLY = 19% and 17% at 120T and 120P vs. 11% and 10% for Lactose-EDTA 3%MF + 2%GLY, p<0.05). The cooling before freezing can be performed either in tubes as in 0.5 mL straws for 120 minutes, without damage to total and progressive motility of thawed semen.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-11-24. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:13Z : No. of bitstreams: 1 Publico-12862.pdf: 1578570 bytes, checksum: 00bd4765e50bc569a9343e907ae91a61 (MD5) / A leptina, um hormônio protéico secretado pelo tecido adiposo, é responsável pela sinalização do estado nutricional do indivíduo para o sistema nervoso central e, em parte, pela regulação do metabolismo energético, além de estar envolvida em vários processos fisiológicos. A ausência ou resistência a leptina pelo organismo causa obesidade mórbida, diabetes e hipogonadismo. A estrutura terciária da molécula da leptina revela a presença de quatro hélices, cujo padrão é típico das citocinas. A partir da sequência peptídica Ac-[Ser96]-hLEP89-98-NH2 descrita por Martins e colaboradores (2006), foram desenhados uma nova série de dez fragmentos peptídicos derivados da leptina com substituições puntuais de L- para D-aminoácido. Os peptídeos foram sintetizados pelo método da fase sólida manual pela estratégia t-Boc. Os mesmos foram purificados por cromatografia liquida de alta eficiência e caracterizados por cromatografia liquida acoplada a um espectrômetro de massas. Os estudos conformacionais dos peptídeos foram realizados por Dicroísmo Circular em diferentes meios com o objetivo de correlacionar a estrutura com a atividade biológica dos fragmentos. Os efeitos de injeções intracerebroventriculares das soluções dos peptídeos nas variações de consumo alimentar e do peso corporal foram avaliados em ratos Wistar machos. Além disso, o efeito causado pelos fragmentos nas taxas glicêmicas também foram avaliadas, assim como as estabilidades dos compostos contra a ação das proteases presentes no plasma. Dentre os compostos estudados, os melhores resultados foram obtidos com o fragmento Ac-[Ser96, D-Phe92]-hLEP89-98-NH2 que demonstrou ser mais estável em plasma e apresentou atividade biológica (variações de peso e consumo alimentar e efeito hipoglicemiante) eqüipotente àquelas verificadas nos fragmentos [D-Leu4]-OB3 e Ac-[Ser96]-hLEP89-98-NH2, que até então eram os peptídeos mais ativos descritos na literatura. Os estudos conformacionais por Dicroísmo Circular, no entanto não nos permitiu estabelecer correlação direta entre a estrutura e a atividade biológica dos fragmentos. Embora haja a necessidade de refinamentos, esse tipo de abordagem pode oferecer uma interessante base para o desenvolvimento de compostos correlacionados com a leptina com potencial de aplicação em estudos de obesidade humana ou na medicina veterinária. / Leptin, a protein hormone secreted by the adipose tissue, is responsible for signaling the nutritional status of the body to the central nervous system and partly by the regulation of energetic metabolism, as well as being involved in various physiological processes. The absence or resistance of leptin to the organism causes obesity, diabetes and hypogonadism. The tertiary structure of the leptin molecule reveals the presence of four helices, whose pattern is typical of cytokines. Starting from the peptide sequence Ac-[Ser96]-hLEP89-98-NH2 described by Martins and coworkers (2006), we designed a new series of ten peptide fragments derived from the leptin with punctual substitutions of L-to D-amino acid. The peptides were synthesized by the manual solid phase method by employing the t-Boc strategy. They were purified by high performance liquid chromatography and characterized by liquid chromatography coupled to mass spectrometry. In order to correlate structure with biological activity of the fragments conformational studies of the peptides were performed by Circular Dichroism in different solvent media. The effects of intracerebroventricular injections of solutions of the peptides in the variations of food intake and body weight were evaluated in male Wistar rats. Furthermore, the effect caused by the fragments in the blood glucose levels were also assessed, as well as the stabilities of the compounds against the action of proteases present in plasma. Among the compounds studied, the best results were obtained with the fragment Ac-[Ser96, D-Phe92]-hLEP89-98-NH2, which proved to be more stable in plasma and showed biological activity (changes in weight and food intake and hypoglycemic effect) equipotent those observed with the fragments [D-Leu4]-OB3 and Ac-[Ser96]-hLEP89-98-NH2, the most active peptides described in the literature so far. Conformational studies by Circular Dichroism, however did not allow us to establish direct correlation between structure and biological activity of the fragments. Although there is a need for refinements, this approach may offer an interesting basis for the development of compounds correlated with leptin with potential application in studies of human obesity or in veterinary medicine. / TEDE

Submitted by Cássia Muniz (casmuniz@gmail.com) on 2018-09-27T14:04:12Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO - CASSIA MUNIZ-27-09-2018-homologação.pdf: 2384230 bytes, checksum: 11fb335941c1a8010de17a3fad250071 (MD5) / Approved for entry into archive by NUBIA OLIVEIRA (nubia.marilia@ufba.br) on 2018-10-03T19:04:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO - CASSIA MUNIZ-27-09-2018-homologação.pdf: 2384230 bytes, checksum: 11fb335941c1a8010de17a3fad250071 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-03T19:04:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO - CASSIA MUNIZ-27-09-2018-homologação.pdf: 2384230 bytes, checksum: 11fb335941c1a8010de17a3fad250071 (MD5) / O aprendizado dos conceitos científicos está atrelado a aprender a falar ciência utilizando seu próprio repertório para dar o sentido ao mundo. Para tanto, os estudantes necessitam saber os significados dos termos e combiná-los de acordo com as normas semântica aceitas pela ciência escolar. Considerando a perspectiva sociocultural de aprendizagem, foi criada a ferramenta de avaliação da apropriação da linguagem da ciência escolar (FAALSCE) (SEPULVEDA et al.,2011), no contexto do grupo Colaboração em Pesquisa e Prática em Educação Científica, a fim de avaliar as respostas discursivas dos alunos para questões que tratavam sobre o conceito de adaptação numa visão darwiniana. Estes autores pretendem analisar os textos dos estudantes em Biologia funcional e, também, para tornar os dados produzidos pela ferramenta passíveis de serem analisados quantitativamente, então esta pesquisa surge no sentido de preencher estas lacunas. Foram analisados 78 textos produzidos sobre o tema sinalização e transporte de substâncias, em particular o transporte da glicose por estudantes do ensino médio de uma escola estadual do estado da Bahia, do município de Salvador em resposta a um questionamento presente no teste aplicado ao final da sequência didática de membrana plasmática com foco em modelos. O padrão temático foi construído com base nos livros didático, a literatura acadêmica e o discurso do professor. As relações semânticas entre os conceitos foram hierarquizadas em três níveis: básico (relações semânticas relacionadas a estrutura); intermediário (relações semânticas que estabeleciam o vínculo entre estrutura a função) e avançado (condensações semânticas que estabelecem a ligação entre diferentes processos). Os textos dos alunos foram analisados de acordo com 4 critérios: (1) relações semânticas; (2) ressignificação; (3) uso dos termos; (4) domínio da linguagem social da ciência escolar. A FAALSCE pode ser utilizada na análise de textos referentes a Biologia Funcional, uma vez que foi possível, utilizando os critérios, classificar os estudantes de acordo com seus escores. Os percentuais de congruência entre o padrão semântico apresentado no texto do estudante e o padrão da linguagem da ciência escolar foi no máximo de 16% para a relação proteína receptora agente do processo reconhecimento de substâncias. Com relação a ressignificação, 83% utilizaram suas próprias palavras para fala ciência. Os dados não permitem uma análise precisa sobre o domínio da linguagem, uma vez que a pergunta era especifica e os termos teóricos foram oferecidos na questão. Observou-se que 47% utilizaram as palavras como forma imprecisa com relação aos seus conceitos e que 38% de forma indicativa nomeando os objetos e processos, apenas 15% dos alunos conseguiram a apropriação conceitual dos termos. A FAALSCE permite, também, mapear as concepções alternativas acerca do conteúdo investigado. Nossos resultados apontam que apesar da necessidade de alguns ajustes metodológicos no sentido de solicitar que os alunos escrevam dois textos (sem e com palavraschave) e a questão precisar ser mais geral, a FAALSCE pode ser usada tanto para pesquisa quanto na prática educacional de Biologia, se a perspectiva de aprendizagem adotada for sociocultural. / The learning of scientific concepts is linked to learning to talk science using its own repertoire to give meaning to the world. Therefore, students need to know the meanings of terms and combine them according to the semantic rules accepted by the school science. Considering the sociocultural perspective of learning, was created the evaluation tool of appropriation of school science language (FAALSCE) (SEPULVEDA et al., 2011) in the context of the Collaboration Group Research and Practice in Science Education, in order to assess the discursive student responses to questions dealing on the concept of adaptation in a Darwinian view. The authors intend to analyze the texts of students in functional biology and also to make the data produced by the subject tool to be analyzed quantitatively, then this research arises in order to fill these gaps. They analyzed 78 texts produced on the subject signaling and transport of substances, in particular the transport of glucose by high school students from a public school of Bahia, in the city of Salvador in response to this question in the test applied to the end of didactic sequence of plasma membrane with a focus on models. The thematic pattern was built on the textbook, academic literature and the teacher's speech. The semantic relations between the concepts were prioritized into three levels: basic (semantic relationships related to structure); intermediate (semantic relations that established the link between structure function) and advanced (semantic condensations that establish the connection between different processes). The texts of the students were analyzed according to four criteria: (1) semantic relationships; (2) reframing; (3) use of terms; (4) the field of social language school science. The FAALSCE can be used in the analysis of texts related to Functional Biology, since it is possible, using criteria, classifying students according to their scores. The percentages of congruence between the semantic pattern presented in the student text and the pattern of school science language was a maximum of 16% for the ratio receptor protein agent process recognition substances. Regarding reframing, 83% used their own words to talk science. The data do not allow a precise analysis on the mastery of language, since the question was specific and theoretical terms have been offered in the issue. It was observed that 47% used the words as inaccurate with respect to its concepts and that 38% indicatively naming objects and processes, only 15% of students achieved the conceptual appropriation of the terms. The FAALSCE also allows mapping the misconceptions about the content investigated. Our results show that despite the need for some methodological adjustments in order to ask students to write two texts (with and without keywords) and the issue needs to be more general, FAALSCE can be used both for research and in educational practice Biology, the prospect of learning adopted for sociocultural

Submitted by Felipe Lapenda (felipe.lapenda@ufpe.br) on 2015-03-16T13:44:17Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DIssertação Isabeli corrigida pretext.pdf: 929080 bytes, checksum: 12855f890850670d671974b1c5f7a8f5 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-16T13:44:17Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DIssertação Isabeli corrigida pretext.pdf: 929080 bytes, checksum: 12855f890850670d671974b1c5f7a8f5 (MD5) Previous issue date: 2013 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico ; Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia de Pernambuco / A serotonina atua na regulação de eventos biológicos envolvidos no desenvolvimento precoce do sistema nervoso. Neste período crítico o aumento dos níveis encefálicos deste neurotransmissor pode alterar componentes do sistema serotoninérgico, como o transportador de serotonina. Os inibidores seletivos da recaptação de serotonina bloqueiam o transportador e aumentam a quantidade de serotonina extracelular. O aumento farmacologicamente induzido neste período é capaz de gerar alterações funcionais e estruturais permanentes ao sistema nervoso. Este estudo teve como objetivo avaliar a expressão gênica do SERT e o conteúdo de 5-HT no hipotálamo de ratos manipulados com fluoxetina durante a lactação. Ratos Wistar foram divididos em dois grupos, de acordo com a manipulação farmacológica realizada do 1º ao 21º dia de vida, Salina (n=9) e Fluoxetina (n=10), compostos por filhotes que receberam, respectivamente, solução de salina (NaCl 0.9%, 10μl/g, s.c.) e fluoxetina (10mg/kg, 10μl/g, s.c.). Foram analisados: a expressão gênica do SERT realizada no hipotálamo aos 21 e 40 dias e o peso corporal foi mensurado nos dias 1, 7, 14, 21 e 40. O presente trabalho demonstrou que a manipulação neonatal com fluoxetina promoveu menor ganho de peso corporal a partir do 14º dia até o final do experimento e aumento na expressão gênica do SERT aos 40 dias. Estes resultados indicam que a manipulação neonatal crônica do sistema serotoninérgico desencadeia alterações no principal componente de controle da neurotransmissão serotoninérgica, o SERT e consequentemente no neurotransmissor serotonina.

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:00:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3962_1.pdf: 546764 bytes, checksum: ee06009adf82956a3114ca9f4d3f6f36 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Introdução: Estudos epidemiológicos têm relatado um aumento progressivo na prevalência do Diabetes Mellitus (DM) com o avançar da idade. Objetivo: Descrever o perfil glicêmico e fatores associados em idosos do Programa de Saúde da Família de Camaragibe-PE. Métodos: Estudo de corte transversal e de série de casos de diabetes mellitus auto-referida (DMAR), realizado em novembro/dezembro-2003. O perfil glicêmico foi delineado pelas concentrações da glicose plasmática e pelo percentual de glicação da hemoglobina (A1c). Como fatores associados, foram avaliados: características socioeconômicas e demográficas, estado nutricional e estilo de vida. Resultados: A prevalência de hiperglicemia (&#8805;126 mg/dL) foi de 9,5% (IC95% 6,0 14,5), com níveis de glicose plasmática mais elevados nos indivíduos com excesso de peso. Entre os idosos com DMAR, cerca de 1/3 apresentou níveis glicêmicos elevados e 2/3 controle glicêmico inadequado (A1c &#8805;8,0%). As concentrações de A1c mostraram correlação positiva (r= 0,72) com as concentrações de glicose plasmática. Os níveis glicêmicos foram maiores nos homens e nos idosos com <65 anos. A glicose plasmática e A1c não mostraram correlação (p>0,05) com as variáveis relacionadas ao estilo de vida. Conclusão: A menor prevalência de hiperglicemia na população idosa de Camaragibe, em comparação aos dados de outros municípios brasileiros poderia refletir a boa cobertura na atenção à saúde local. No entanto, entre os idosos com diagnóstico de DMAR o controle glicêmico inadequado impõe a adoção de estratégias terapêuticas de maior efetividade

Diante das evidências da existência de um sistema endocanabinóide em humanos, possivelmente disfuncional em transtornos de ansiedade e do crescente interesse terapêutico no uso do canabidiol (CBD), justifica-se um estudo da comparação entre as concentrações plasmáticas do CBD, administrados por via oral na forma de pó e dissolvido em óleo, para que se defina a forma de administração ideal do CBD e sua eficácia terapêutica na dose de 150mg, baseados em estudos cinéticos e dinâmicos (PK/PD). Neste contexto, o estudo investigou 39 voluntários sadios, alocados aleatoriamente em 3 grupos, que receberam 150 mg de CBD, em cápsulas na forma de pó (Grupo 1), dissolvido em óleo de milho (Grupo 2 ) e amido de milho (Grupo placebo). A concentração plasmática do CBD, por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas, foi determinada nos tempos: 0, 0,5, 1,0, 1,5, 2,0, 2,5, 3,0, 4,0 h, após a administração do fármaco. Os instrumentos de avaliação de medidas psicológicas foram: escala analógica de humor (VAMS) e a escala de identificação de ansiedade traço estado (IDATE) e nas medidas fisiológicas foram monitoradas a pressão arterial (PA) e a frequência cardíaca (FC). O teste ansiogênico aplicado foi o Teste de Simulação de Falar em Público (TSFP). No reconhecimento de expressões faciais (REF) foi realizada a tarefa Touch, em indicar a emoção apresentada na expressão do indivíduo. Nos resultados das medidas subjetivas (VAMS e IDATE), não se constatou o efeito ansiolítico; houve elevação da PA sistólica e diastólica e da FC; a intensidade da resposta no REF foi de 93% no Grupo 1 (pó) e de 81% no Grupo 2 (óleo). O pico plasmático médio foi de 20,70±1,68 ng/mL em 2,5h (CBD pó) e CBD em óleo de 82,59±9,52 ng/mL em 2h. Desta forma, este estudo PK/PD demonstrou que a forma farmacêutica ideal para a administração do CBD foi a em óleo e no estudo de dose /resposta, 150mg não possui eficácia terapêutico em relação a ansiedade. / In the face of the existence of an endocannabinoid system in humans, possibly dysfunctional in anxiety disorders and the growing interest in the therapeutic use of cannabidiol (CBD), justified a study comparing plasma concentrations of CBD, administered orally in powder form and dissolved in oil, in ordre to define the optimal mode of administration of the CBD and their therapeutic efficacy at a dose of 150mg, based on dynamic and kinetic studies (PK/PD). In this contexto, the study researched 39 healthy volunteers, allocated randomly in 3 groups, receiving 150 mg of CBD, capsules in powder form (Group 1), dissolved in corn oil (Group 2) and corn starch (placebo group). The plasmatic concentration of CBD was determined by gas chromatography coupled to mass spectrometry at the times: 0, 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 4.0 h, after administration of the drug. Assessment instruments of psychological measures were: analogical scale mood (VAMS) and scale identification of trait anxiety state (IDATE) and physiological measures were monitored in arterial pressure (PA) and heart rate (HR). The anxiogenic test applied was Simulated Public Speaking (TSFP). In recognition of facial expressions (REF) was performed the task touch, that consists in indicate the emotion shown the facial expression of the individual. The results of subjective measures (VAMS and IDATE) was not found the anxiolytic effect; there was increase of systolic and diastolic pressure and heart frequency; the response intensity in the REF was 93% in group 1 (powder) and 81% in Group 2 (oil). The peak mean plasma was 20.70 ± 1.68 ng / mL (CBD powder) in 2.5 h and 82.59 ± 9.52 ng / mL (CBD in oil) in 2h. Thus, this study PK / PD demonstrated that the ideal pharmaceutical form for administration of the CBD has been in oil and study of dose / response, 150mg has no therapeutic efficacy in relation to anxiety.

A avaliação da disfunção renal pelos marcadores usuais não tem determinado impacto na redução da incidência da insuficiência renal aguda (IRA) nos pacientes de terapia intensiva. Este estudo avaliou 100 pacientes admitidos em uma unidade de terapia intensiva (UTI) quanto às características demográficas; a relação entre creatinina plasmática e proteína carreadora do retinol (RBPu) e as variáveis clínico-laboratoriais; e a sensibilidade e a especificidade da RBPu. A amostra caracterizou-se como geriátrica (63,4±15,6 anos), do sexo masculino (68%), 47% dos pacientes tiveram tratamento clínico e 53% cirúrgico. A coleta de dados foi realizada no período de 13,9±8,3 horas após a admissão na UTI. A análise dos resultados mostrou associação entre a creatinina plasmática e as variáveis: gênero (p-0,026), idade (p-0,038), uso de droga vasoativa (p-0,003), proteínúria (p-0,025), APACHE II (p-0,000), uréia (p-0,000), potássio (p-0,003) e clearance de creatinina estimado (p-0,000). A RBPu mostrou associação com um número maior de variáveis: peso (IMC), uso de ventilação invasiva (p-0,000), uso de antiinflamatório não-hormonal (p-0,018), uso de droga vasoativa (p-0,021), temperatura > 37,5ºC (p-0,005), proteinúria (p-0,000), bilirrubinúria (p-0,004), fluxo urinário (p-0,019), pressão arterial diastólica mínima (p-0,032), pressão arterial sistólica mínima (p-0,029), APACHE II (p-0,000), creatinina (p-0,001), uréia (p-0,001), clearance de creatinina estimado (p-0,000) e uma tendência a associação com os antecedentes clínicos (doença renal, vasculopatia e neoplasia). A creatinina plasmática e a RBPu apresentaram associação com a fração de excreção de sódio (FENa) quando os dados foram submetidos à análise univariada. O estudo referente à sensibilidade e especificidade da RBPu utilizando a curva ROC (Relative Operating Characteristics) mostrou que pacientes com RBPu maior que 1,47 mg/l têm aproximadamente quatro chances de apresentarem creatinina acima de 1,2 mg/dl (intervalo de confiança - 95%, erro padrão - 0,072). A acurácia global da RBPu, como teste diagnóstico, foi fraca. A RBPu, apesar das fracas sensibilidade e especificidade encontradas no estudo, pode ser considerada na clínica, o marcador de melhor desempenho diagnóstico em pacientes com risco para a ocorrência de IRA quando comparada aos marcadores utilizados rotineiramente. / The early assessment of renal dysfunction using common markers has not determined an impact on lower incidence of acute renal failure (ARF) in intensive care patients, which remains alarming high. This study followed-up 100 patients admitted to an intensive care unit (ICU) and assessed demographic variables as well as plasma creatinine and urinary retinol-binding protein (uRBP) ratio with clinical and laboratory variables within the first hours of admission to the ICU. The sample was characterized as geriatric (63.4±15.6 years), male (68%), 47% clinical and 53% surgical patients. Data were gathered 13.9±8.3 hours after admission to ICU. Statistical analysis showed association between plasma creatinine and the following variables: gender (p-0.026), age (p-0.038), use of vasoactive drugs (p-0.003), proteinuria (p-0.025), APACHE II (p-0.000), urea (p-0.000), potassium (p-0.003) and estimated creatinine clearance (p-0.000). uRBP correlated with more variables: weight (BMI), use of invasive ventilation (p-0.000), use of nonsteroidal anti-inflammatory drugs (p-0.018), use of vasoactive drugs (p-0.021), temperature > 37.5ºC (p-0.005), proteinuria (p-0.000), bilirubinuria (p-0.004), urinary flow (p-0.019), minimal diastolic pressure (p-0.032), minimal systolic pressure (p-0.029), APACHE II (p-0.000), creatinine (p-0.001), urea (p-0.001), estimated creatinine clearance (p-0.000). uRBP also tended to associate with clinical past medical history (renal disease, vasculopathy and neoplasm). FENa correlated with plasma creatinine and uRBP in univariate analysis. The ROC (Receiver Operating Characteristic) curve demonstrated that patients with uRBP > 1.47 mg/l are four times more likely to have creatinine > 1.2 mg/dl (95% confidence interval, standard error, 0.072). The global accuracy of uRBP as a diagnostic test was poor. Although uRBP sensibility and specificity were not very high in the study, in clinical practice it might be considered the better marker regarding diagnostic performance in patients at risk of developing ARF, as compared with other markers routinely used. Moreover, uRBP has other features of a good diagnostic test - it is a practical and non-invasive method, and its cost may drop as the test becomes more frequently requested.