Resumo: O Bidens mosaic virus (BiMV) é uma espécie tentativa de vírus do gênero Potyvirus e tem sido encontrado em culturas de importância econômica como ervilha e girassol. Recentemente foi proposto que o BiMV poderia ser uma estirpe do Potato virus Y (PVY). Em 2004 amostras de alface apresentando mosaico intenso, coletadas no município de São Manuel - SP, apresentavam-se infectadas pelo BiMV. Foi realizada a caracterização biológica, o sequenciamento parcial e a purificação deste isolado para obtenção de anti-soro policlonal. Verificou-se que este isolado possui gama de hospedeiros restrita à alface, Chenopodium quinoa, Chenopodium amaranticolor e ervilha (Pisum sativum) de forma assintomática. O vírus possui uma proteína capsidial em torno de 33 kDa e padronizou-se um teste de PTAELISA para o diagnóstico sorológico deste vírus. Também foi realizada a caracterização biológica e avanços no sequenciamento do genoma de um isolado de BiMV coletado a partir da planta de Bidens pilosa (picão preto). Este isolado foi capaz de infectar e causar sintomas em girassol (Helianthus annus), alface (Lactuca sativa), ervilha (Pisum sativum), C. quinoa, C. amaranticolor, Nicotiana benthamiana, N. clevelandii, N. occidentalis, Zinnia elegans e em Gomphrena globosa, nesta última de forma assintomática. Através do sequenciamento de um fragmento de 7.945 bp, correspondente à parte do gene da HC-Pro e dos genes da P3, 6K1, CI, 6K2, VPg, NIa, NIb, CP e à região 3'UTR, verificou-se que o BiMV é possivelmente uma espécie distinta do PVY, baseando-se nos atuais critérios para demarcação de espécies do International Committee on Taxonomy of Viruses (ICTV). Foram obtidos oligonucleotídeos específicos para diagnose do BiMV, que através de RT-PCR em uma só etapa, detectam eficientemente o vírus a partir de alface e de plantas daninhas associadas à cultura. Através desta técnica... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Bidens mosaic virus (BiMV) is a tentative species of the genus Potyvirus, and has been commonly found infecting pea and sunflower. Recently it was proposed that BiMV could be a member of the Potato virus Y (PVY) species. In 2004 lettuce plants showing intense mosaic symptoms were collected in São Manuel-SP and were infected with BiMV. The host range of this isolate was characterized, the genome partially sequenced and the virus was purified to obtain a polyclonal antiserum. The host range for this isolate was restricted to lettuce, Chenopodium quinoa, Chenopodium amaranticolor and pea (Pisum sativum) (assymptomatic). The virus has a coat protein with approximately 33 kDa and the antiserum could be used for serological diagnosis by PTA-ELISA tests. A BiMV isolate from Bidens pilosa was also studied in this work. This isolate infected sunflower (Helianthus annus), lettuce (Lactuca sativa), pea (Pisum sativum), C.quinoa, C. amaranticolor, N. benthamiana, N. clevelandii, N. occidentalis, Zinnia elegans and Gomphrena globosa (assymptomatic). A fragment of 7.945bp including part of the HC-Pro, the entire genes for P3, 6K1, CI, 6K2, VPg, NIa, Nib, CP and the 3'UTR region was sequenced. Based on the International Committee on Taxonomy of Viruses (ICTV) criteria of potyvirus species demarcation using the individual genes, BiMV could be considered a distinct species of PVY. Specific primers were obtained for BiMV diagnosis and efficiently used in a one step RT-PCR test for BiMV diagnoses. A total of 222 lettuce and 126 weeds samples were collected in the lettuce growing areas of Mogi das Cruzes, Campinas and Bauru and analysed by RT-PCR. Low incidence of BiMV was verified on lettuce. The presence of BiMV was also observed on B. pilosa and Galinsoga parviflora. This last plant species was identified as a new host of BiMV and Lettuce mottle virus (LeMoV) in this study. / Orientador: Renate Krause Sakate / Coorientador: Marcelo Agenor Pavan / Banca: Norberto da Silva / Banca: Marli Teixeira de Almeida Minhoni / Banca: Antonio Carlos Maringoni / Banca: Valdir Atsushi Yuki / Banca: Romulo Fujito Kobori / Doutor

O Papaya ringspot virus (PRSV) é uma espécie do gênero Potyvirus, sendo que a maioria dos isolados pertence a duas estirpes distintas: "papaya" (P) e "watermelon" (W). O Papaya ringspot virus - estirpe W (PRSV-W) tem sido considerado um dos vírus mais importantes no cultivo de cucurbitáceas pela predominância e pelos prejuízos significativos que causa no Brasil. O controle do mosaico da abobrinha-de-moita, causado pelo PRSV-W, tem sido obtido de forma satisfatória através da premunização com as três estirpes fracas, designadas PRSV-W–1, PRSV-W–2 e PRSV-W-3. O principal objetivo desse estudo foi comparar essas estirpes fracas com estirpes severas PRSV-W-C, PRSV-W-PR e PRSV-W-PE, com base na seqüência de nucleotídeos do gene que codifica a proteína da capa protéica e na mobilidade dessa proteína em SDS-PAGE. A seqüência de nucleotídeos da capa protéica das estirpes fracas PRSV-W-1 e PRSV-W-2 apresentou 100 % de homologia. Quando comparadas com a estirpe fraca PRSV-W-3, a homologia foi de 98 %. As estirpes fracas PRSV-W–1 e PRSV-W–2 apresentaram 95 % de homologia com as estirpes severas PRSV-W-C e PRSV-W-PE. Essas duas estirpes severas, por sua vez, apresentaram respectivamente, 93 e 95 % de homologia com a estirpe fraca PRSV-W-3. O alinhamento das seqüências de nucleotídeos entre as estirpes fracas e as severas evidenciou a inserção de 6 nucleotídeos na região conservada desse gene nas estirpes fracas. Essa inserção refletiu na adição de dois amino ácidos (Asn e Asp) na seqüência de amino ácidos deduzidos dessa proteína. A mobilidade da capa protéica em SDS-PAGE foi semelhante para todas as estirpes estudadas. / Papaya ringspot virus (PRSV), a species of the enus Potyvirus, is classified into two strains: "papaya" (P) and "watermelon" (W). Papaya ringspot virus - type W (PRSV-W) has been considered one of the most important viruses infecting cucurbits in Brazil due to its predominance and significative damage caused on the crops. The control of the disease caused by this virus has been efficiently achieved by means of cross protection with three mild strains, namely PRSV-W-1, PRSV-W-2, and PRSV-W-3. The main purpose of the present study was to compare these mild strains with the severe strains PRSV-W-C, PRSV-W-PR, and PRSV-W-PE, based on the nucleotide sequence of the coat protein gene and on the mobility of the capsid protein in SDS-PAGE. The nucleotide sequence of the coat protein gene of the mild strains PRSV-W-1 and PRSV-W-2 showed 100 % of homology. When compared with the coat protein gene of the mild strain PRSV-W-3, the homology was 98 %. The mild strains PRSV-W-1 and PRSV-W-2 showed 95 % of homology with the severe strains PRSV-W-C and PRSV-W-PE. These two severe strains, otherwise, showed respectively, 93 and 95 % of homology with the mild strain PRSV-W-3. The alignment of the nucleotide sequences of the mild and the severe strains indicated an insertion of 6 nucleotides in the conserved region of the coat protein gene of the mild strains. This insertion reflected on the addition of two amino acids (Asn e Asp) in the amino acid deduced sequence of this protein. The mobility of the coat protein in SDS-PAGE was similar for all the strains studied.

No presente trabalho são apresentados os resultados da seleção de estirpes fracas do vírus do mosaico amarelo da abobrinha (Zucchini yellow mosaic virus – ZYMV) e a sua eficiência para o controle do mosaico amarelo em abobrinha-de-moita (Cucurbita pepo cv. Caserta), através da premunização. Mostram também os resultados da eficiência da dupla premunização, com a estirpe fraca do ZYMV e uma estirpe fraca do Papaya ringspot virus – type Watermelon, denominada PRSV-W-1, no controle dos mosaico amarelo e comum e na produção das plantas de abobrinha-de-moita, em condições de campo. A procura de estirpes fracas do ZYMV foi realizada através das seguintes abordagens: a) a partir de lesões locais em plantas indicadoras mantidas em casa-de-vegetação; b) a partir de lesões locais em plantas indicadoras mantidas a 15 °C e c) a partir de lesões locais em plantas indicadoras inoculadas com suspensão parcialmente purificada do vírus, exposta à luz ultravioleta. Apenas uma estirpe fraca (“Mild”) do vírus, denominada ZYMV-M, foi obtida em abobrinha-de-moita diretamente inoculada com suspensão parcialmente purificada do vírus, exposta à luz ultravioleta, durante 30 minutos. Essa estirpe fraca mostrou-se altamente estável, com base na sintomatologia, após 12 transferências sucessivas em plantas de abobrinha-de-moita, durante 15 meses. Plantas de abobrinha-de-moita premunizadas com a estirpe ZYMV-M e superinoculadas (desafiadas) com estirpes severas originárias de Atibaia, SP (ZYMV-AT), de Iacri, SP (ZYMV-IA) e de Vargem Paulista, SP (ZYMV-VP), não exibiram sintomas severos da doença em testes em casa-de-vegetação. A mesma proteção foi observada em plantas duplamente premunizadas com as estirpes ZYMV-M e PRSV-W-1 e desafiadas com uma mistura de estirpes severas desses dois vírus, em condições de casa-de-vegetação. Teste de proteção em campo, com plantas de abobrinha-de-moita premunizadas apenas com a estirpe ZYMV-M, ou duplamente premunizadas com as estirpes ZYMV-M e PRSV-W-1, também mostraram a eficiência dessa tecnologia para o controle dos mosaicos amarelo e comum, com ganhos significativos na produção de frutos comerciais. As plantas premunizadas apenas com a estirpe ZYMV-M, e duplamente premunizadas, tiveram médias de produções de semelhante, com média de 1,85 kg e 1,70 kg de frutos comercias/planta, respectivamente. Os ganhos de produções dessas plantas, em relação às plantas inoculadas com as estirpes severas desses vírus foram de 101 % e 85 %, respectivamente. Diante desses resultados, tornam-se necessários estudos para avaliar a eficiência da dupla premunização para o controle dos mosaicos amarelo e comum, em outras espécies de cucurbitáceas suscetíveis ao ZYMV e PRSV-W. / Due to the present high incidence of Zucchini yellow mosaic virus (ZYMV) and the damage it causes to cucurbit crops, studies were carried out to select mild strains of the virus and evaluate their efficiency for the control of the disease by cross protection in zucchini squash (Cucurbita pepo L. cv. Caserta). Studies were also done to evaluate the efficiency of double cross protection for the control of ZYMV and Papaya ringspot virus – type W (PRSV-W) in zucchini squash under greenhouse and field conditions. Searching for mild strains was carried out as follows: a) from local lesions caused by ZYMV on indicator hosts maintained under green house conditions; b) from local lesions caused on indicator hosts maintained at 15 °C; and c) from local lesions caused on indicator hosts inoculated with suspension of purified ZYMV, exposed to ultra-violet light. Only one very mild strain of the virus, named ZYMV-M, was obtained in zucchini squash plant directly inoculated with suspension of purified ZYMV exposed to ultra-violet light for 30 minutes. This mild strain remained stable for a period of 15 months, after 12 successive transfers in zucchini squash plants. Experiments carried out under greenhouse showed that zucchini squash plants protected with ZYMV-M, at the cotyledonal stage, did not show severe symptoms of the disease after double challenge inoculation with severe strains of the virus, obtained from three regions of the State of São Paulo. Plants inoculated with the mild strain ZYMV-M and a mild strain of PRSV-W, named PRSV-W-1, were also protected against superinfection with severe strains of both viruses. Field test carried out with zucchini squash protected with ZYMV-M and doubly protected with ZYMV-M and PRSV-W-1, showed that this technology was effective for the control of the mosaic diseases caused by severe strains of these viruses. The yield of marketable fruits from plants protected with ZYMV-M, or doubly protected, were 1.85 kg and 1.70 kg of fruits/plant, respectively. These yields were, respectively, 101 % and 85 % higher than the yield of marketable fruits from plants inoculated with a mixture of severe strains of both viruses. Studies are necessary to evaluate the efficiency of double cross protection for the control of ZYMV and PRSV-W in other cucurbit species susceptible to these viruses.

[EN] Plant viruses are obligate intracellular parasites which were used to develop recombinant plant virus vectors to express heterologous proteins and to modify endogenous metabolic pathways of natural products in plants. The main limitation of many plant virus-based systems is the difficulty to co-express various heterologous proteins in the same cell with proper subcellular localization, which is a crucial question in metabolic engineering. This work provides a solution to overcome this problem by using a potyvirus-based vector system. Potyviruses (genus Potyvirus, family Potyviridae) are plus-strand single-stranded RNA viruses, which have a genome expression strategy that allows the equimolar production of most viral proteins. On the basis of an infectious clone of Tobacco etch virus (TEV), Bedoya et al. (2010) developed an expression system in which the RNA-dependent RNA polymerase (NIb) gene was replaced by an expression cassette, harboring several heterologous proteins. This viral vector was able to express three fluorescent proteins with nucleocytoplasmic localization in equimolar amounts in transgenic tobacco plants in which NIb was supplemented in trans. Despite of the apparent simplicity of potyvirus genome expression strategy, foreign cDNA insertion is a complicated task. Thus, our first goal was to analyze the effect of gene insertion on TEV genome stability. As a result of this work, a novel insertion position was discovered at the amino-terminal end of the potyvirus polyprotein, which opened the possibility to explore new questions of recombinant protein expression. Since metabolic pathways are highly compartmentalized, proper subcellular targeting of enzymes is an essential task. Thus, our second objective centralized on the subcellular targeting of expressed proteins from the TEV-based viral vector. cDNAs coding for the green fluorescent protein (GFP) fused to chloroplast, nucleus and mitochondria targeting signal sequences were inserted into the newly described amino-terminal insertion position or into an internal site, replacing the NIb cistron. Our results showed that for protein delivery to chloroplasts and mitochondria, foreign genes have to be inserted at the amino-terminal site of the viral vector, but for nuclear delivery, both insertion positions are suitable. The last objective of this work was to investigate whether the potyvirus-based vector was able to express an entire heterologous multistep biosynthetic pathway in plant cells. For this aim we purposed to produce lycopene, a plant pigment with health promoting properties. To do so, we inserted cDNAs coding for the enzymes of a three-step metabolic pathway of bacterial origin into the potyvirus-based vector. Infected tobacco plants developed orange symptoms indicating lycopene accumulation, which was confirmed by high-performance liquid chromatography analysis and microscopy observations. Our results also illustrated that the sole expression of Pantoea ananatis phytoene synthase, crtB, is enough to induce carotenoid accumulation, conferring yellow coloration to the infected tissue and serves as reporter system to visually track viral infection in several plant species. / [ES] Los virus de plantas son parásitos intracelulares obligados que han sido utilizados para desarrollar vectores virales y expresar proteínas heterólogas y modificar rutas metabólicas endógenas de productos naturales. La principal limitación de muchos sistemas basados en virus de plantas es la dificultad de coexpresar diversas proteínas heterólogas en la misma célula con la localización subcelular apropiada, lo cual es una cuestión crucial en ingeniería metabólica. Este trabajo presenta una solución para superar este problema mediante el uso de un vector viral basado en un potyvirus. Los potyvirus (género Potyvirus, familia Potyviridae) son virus de RNA de cadena positiva simple que tienen una estrategia de expresión génica que permite la producción de la mayoría de las proteínas virales en cantidades equimolares. Basado en un clon infeccioso del virus del grabado del tabaco (Tobacco etch virus, TEV) Bedoya et al. (2010) desarrollaron un sistema de expresión en el que el gen de la RNA polimerasa dependiente de RNA (NIb) fue sustituido por un casete de expresión, que albergaba varias proteínas heterólogas. Este vector viral fue capaz de expresar tres proteínas fluorescentes con localización nucleocitoplásmica en cantidades equimolares en plantas de tabaco transgénicas que complementaban el cistron NIb en trans. A pesar de la aparente simplicidad de la estrategia de expresión génica de los potyvirus, la inserción de un cDNA foráneo es una tarea complicada. Por lo tanto, nuestro primer objetivo fue analizar el efecto de la inserción en la estabilidad del genoma de TEV. Como resultado de este trabajo, descubrimos una nueva posición de inserción en el extremo amino-terminal de la poliproteína viral que nos permitió explorar otras cuestiones sobre la expresión de proteínas recombinantes. Dado que las vías metabólicas son muy compartimentalizadas, la adecuada localización subcelular de enzimas es una tarea esencial en ingeniería metabólica. Por eso, nuestro segundo objetivo se centró en la distribución de las proteínas heterológas expresadas con el vector viral a diferentes orgánulos subcelulares. cDNAs que codificaban la proteína fluorescente verde (green fluorescent protein, GFP) fusionada a péptidos señal se insertaron en la nueva posición amino-terminal y en un sitio interno, sustituyendo el cistrón NIb, para enviarla al cloroplasto, núcleo y a la mitocondria. Nuestros resultados mostraron que para la distribución de proteínas al cloroplasto y mitocondria, los genes foráneos deben ser insertados en el sitio amino-terminal del vector viral, pero para la distribución nuclear, ambas posiciones son adecuadas. El último objetivo de este trabajo fue estudiar si el vector viral basado en potyvirus es capaz de expresar una ruta biosíntética de múltiples pasos en células vegetales. Para ello nos propusimos producir licopeno, un pigmento vegetal con propiedades beneficiosas para la salud humana. Para ello, insertamos un cDNA que codificaba las enzimas de una ruta metabólica de tres pasos de origen bacteriano en el vector viral. Las plantas de tabaco infectadas con el vector viral desarrollaron síntomas de color naranja indicando la acumulación de licopeno, que fue confirmado por análisis de cromatografía líquida de alta eficacia y observaciones de microscopía. Nuestros resultados también ilustraron que la sola expresión de la fitoeno sintasa de Pantonea ananatis, crtB, es suficiente para inducir la acumulación de carotenoides que confieren una coloración amarilla al tejido infectado y sirve como sistema reportero visual en varias especies de plantas. / [CAT] Els virus de plantes són paràsits intracel·lulars obligats que han estat utilitzats per a desenvolupar vectors virals i expressar proteïnes heteròlogues y modificar rutes metabòliques endògenes de productes naturals silenciant certs gens o expressant factors de transcripció i enzims metabòlics. La principal limitació de molts sistemes basats en virus de plantes és la dificultat de coexpressar diverses proteïnes heteròlogues en la mateixa cèl·lula amb la localització subcel·lular apropiada, cosa que és una qüestió crucial en enginyeria metabòlica. Aquest treball presenta una solució per a superar aquest problema mitjançant l'ús d'un vector viral basat en un potyvirus. Els potyvirus (gènere Potyvirus, família Potyviridae) són virus d'RNA de cadena positiva simple que tenen una estratègia d'expressió gènica que permet la producció de la majoria de les proteïnes virals en quantitats equimolars. Basat en un clon infecciós del virus del gravat del tabac (Tobacco etch virus, TEV) Bedoya et al. (2010) van desenvolupar un sistema d'expressió en el qual el gen de l'RNA polimerasa depenent d'RNA (NIb) va ser substituït per un casset d'expressió, que albergava diverses proteïnes heteròlogues. Aquest vector viral va ser capaç d'expressar tres proteïnes fluorescents amb localització nucleocitoplàsmica en quantitats equimolars en plantes de tabac transgèniques que complementaven el cistró NIb en trans. Malgrat l'aparent simplicitat de l'estratègia d'expressió gènica dels potyvirus, la inserció d'un cDNA forà és una tasca complicada. Per tant, el nostre primer objectiu va ser analitzar l'efecte de la inserció en l'estabilitat del genoma de TEV. Com a resultat d'aquest treball, hem descobert una nova posició d'inserció en l'extrem amino terminal de la poliproteïna viral que ens va permetre explorar altres qüestions sobre l'expressió de proteïnes recombinants. Atès que les vies metabòliques són molt compartimentalitzades, l'adequada localització subcel·lular d'enzims és una tasca essencial en enginyeria metabòlica. Per açò, el nostre segon objectiu es va centrar en la distribució de les proteïnes heteròlogues expressades amb el vector viral a diferents orgànuls subcelul·lars. cDNAs que codificaven la proteïna fluorescent verda (green fluorescent protein, GFP) fusionada a pèptids senyal es van inserir en la nova posició amino terminal i en un lloc intern, substituint el cistró NIb, per a enviar-la al cloroplast, nucli i al mitocondri. Els nostres resultats van mostrar que per a la distribució de proteïnes al cloroplast i mitocondri, els gens forans han de ser inserits en el lloc amino terminal del vector viral, però per a la distribució nuclear, ambdues posicions són adequades. El lloc amino terminal va resultar ser més adequat per a produir quantitats més grans de proteïnes recombinants, però el lloc d'inserció intern va demostrar ser més estable. Sobre la base d'aquests resultats, hem sigut capaços de distribuir dues proteïnes fluorescents diferents als cloroplasts i nuclis des d'un únic vector viral. L'últim objectiu d'aquest treball va ser estudiar si el vector viral basat en potyvirus és capaç d'expressar una ruta biosintètica de múltiples passos en cèl·lules vegetals. Per açò ens vam proposar produir licopè, un pigment vegetal amb propietats beneficioses per a la salut humana. Per això inserírem un cDNA que codificaba els tres enzims de una ruta metabòlica de tres passos d'origen bacterià en el vector viral. Les plantes de tabac infectades amb el vector viral van desenvolupar símptomes de color taronja indicant l'acumulació de licopè, que va ser confirmat per anàlisi de cromatografia líquida d'alta eficàcia i observacions de microscòpia. Els nostres resultats també van il·lustrar que la sola expressió de fitoè sintasa de Pantonea ananatis, crtB, és suficient per a induir l'acumulació de carotenoides que confereixen una colora / Majer, E. (2016). Metabolic engineering of plants using a disarmed potyvirus vector [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/68477 / TESIS

Soybean mosaic virus (SMV) and peanut mottle virus (PMV) are potyviruses that can cause serious yield reductions in soybean [Glycine max (L.) Merr.]. Virus resistant soybean cultivars have been released with alleles at the Rsv1 and Rpv1 locus that confer resistance to SMV and PMV, respectively. A high-resolution map-based cloning approach was undertaken to isolate Rsv1 and Rpv1 from soybean, with hopes of providing insight into this host-pathogen relationship. A mapping population of 1,056 F2 individuals was constructed from the cross of the resistant cultivar PI 96983 (Rsv1 and Rpv1) by the susceptible cultivar Lee 68 (rsv1 and rpv1). Ninety-one of the 1,056 F2 individuals had a cross-over (recombination) in the chromosomal region between microsatellite, or simple sequence repeat (SSR) marker loci Hsp176 and Sat120, and these 91 recombinant lines (RLs) were selected for further genetic analysis. Genotypes of Rsv1 and Rpv1 for the 91 RLs were obtained by inoculating their F2:3 progeny with SMV-G1 and PMV-P1, respectively. The 91 RLs also were used for mapping one random amplified polymorphic DNA (RAPD), five SSR, and 21 restriction fragment length polymorphism (RFLP) markers. Included in these RFLP markers were seven resistance gene candidate (RGC) and five resistance gene candidate flanking (RGCF) markers. RGC probes encode a protein with homology to previously cloned plant disease resistance genes, and RGCF probes are sequences obtained from the flanking regions of candidate disease resistance genes. The resultant high-resolution map consisted of 41 marker loci detected by 27 molecular markers. Rsv1 and Rpv1 cosegregated with one or more RFLP bands detected by RGCF probes: GG27-1a, 3gG2SP, and/or T3G. Analyses of the disease reaction and molecular marker data from seven RLs suggested that the map position of Rsv1 should be at a locus different from that designated by the linkage analysis software, Mapmaker 3.0. Compared to the other 89 RLs, a high percentage (>34%) of F3 plants grown from four of these seven RLs gave a necrotic reaction when inoculated with SMV-G1. From this evidence, we believed that another locus independent of Rsv1 was involved in PI 96983's response to SMV-G1. The two loci conferring resistance to SMV-G1 were designated Rsv1a and Rsv1b. / Master of Science

No estado do Espírito Santo (ES), uma das principais áreas produtoras de mamão do país, a eliminação sistemática de plantas doentes tem sido aplicada desde a década de 1980 para o controle do mosaico do mamoeiro (Papaya ringspot virus - type P; PRSV-P). O uso permanente dessa prática nos últimos 25 anos levou a uma aparente seleção e predominância de isolados fracos do vírus. Os objetivos deste trabalho foram: investigar a prevalência desses isolados fracos, bem como a estabilidade e o efeito protetor contra isolados severos do vírus; estudar a infecção natural de abobrinha de moita (Cucurbita pepo cv. Caserta) e abóbora moranga (C. maxima cv. Exposição) com o PRSV-P quando plantadas ao lado de mamoeiros infectados e caracterizar um isolado do Alfalfa mosaic virus (AMV) em infecção natural em mamoeiro. A detecção de possíveis isolados fracos do vírus foi realizada por PTAELISA, microscopia eletrônica e RT-PCR. Todos os isolados também foram inoculados mecanicamente em mamoeiro cv. Golden para avaliação de sintomas. Sequências de nucleotídeos e de aminoácidos deduzidos do gene da proteína capsidial de alguns isolados fracos mostraram identidades superiores a 89% e 90%, respectivamente, com isolados do PRSV-P. De 119 amostras de mamoeiros analisadas, 86 estavam infectadas com o PRSV-P, mas somente 75 induziram sintomas fracos em mamoeiros. Quatro isolados fracos foram selecionados ao acaso para estudos de estabilidade, e de proteção em casa de vegetação. Apenas dois isolados fracos induziram sintomas estáveis em mamoeiros até a oitava transferência. A proteção total só foi obtida com plantas premunizadas com dois isolados fracos e desafiados com o isolado PRSV-PES. Plantas de mamoeiros cv. Golden premunizadas com vários isolados fracos do PRSV-P foram expostas em condições de campo na ESALQ/USP, Piracicaba, SP, em dois experimentos independentes. Poucas plantas permaneceram com sintomas fracos de mosaico até o final dos experimentos. Uma terceira exposição foi realizada em Linhares, ES, com mamoeiros cvs. Sunrise Solo e Golden premunizados com oito isolados fracos, coletados nos experimentos em campo na ESALQ/USP. Apenas uma planta premunizada com um isolado fraco permaneceu com sintomas leves da doença até a última avaliação. Tentativas de detectaçao de infecções naturais de cucurbitáceas com o PRSV-P foram realizados em dois plantios de abobrinha de moita e dois de abóbora moranga, na ESALQ/USP, Piracicaba, SP. A detecção do vírus foi feita por meio da inoculação de extratos foliares das cucurbitáceas em mamoeiros cv. Golden. Os mamoerios foram avaliados por meio de sintomas, PTA-ELISA e RT-PCR. Nenhuma planta de mamoeiro inoculada com extratos foliares das duas cucurbitáceas exibiu sintomas de mosaico, embora o gene ci, mas não o cp, tenha sido detectado em uma amostra de folhas de mamoeiro, indicando que ao menos uma planta de abobrinha de moita estava infectada. Finalmente, no decorrer dos ensaios de campo na ESALQ/USP, constatou-se uma planta de mamoeiro apresentando sintomas severos de mosaico amarelo, deformação foliar e necrose sistêmica, diferente daqueles induzidos pelo PRSV-P. Análises biológicas, sorológica e moleculares confirmaram tratar-se do AMV. Este é o primeiro relato de infecção natural de mamoeiro com esse vírus. / Papaya ringspot virus type P (PRSV-P) causes the major disease in Brazilian papaya orchards that result in significant yield losses. In Espírito Santo state systematic rouging of infected plants has been applied since early 1980s for the control of this disease. Its permanent use over the last 25 years has lead to an apparent selection and predominance of mild strains throughout papaya orchards. The objectives of this work were to investigate the prevalence of mild isolates, as well the stability and protective effect against severe isolates of the virus; The aim of this work was to study the natural infecction of zucchini squash (Cucurbita pepo cv. Caserta) and pumpkin (C. maxima cv. Exposição) grown near to papaya trees infected with PRSV-P and characterize an isolate of Alfalfa mosaic virus (AMV) in natural infection in papaya. The detection of possible mild isolates of the virus was performed by PTA-ELISA, electron microscopy and RT-PCR. All isolates were inoculated mechanically in papaya cv. Golden for symptoms evaluation. Nucleotides and deduced amino acids sequences of the coat protein gene of some mild isolates showed identities above 89% and 90%, respectively, with isolates of PRSV-P. Of 119 samples from papaya plants analyzed, 86 were infected with PRSV-P and 75 induced mild symptoms on papaya. Four mild isolates were randomly selected for stability and protection studies under greenhouse. Only two isolates induced mild symptoms on papaya and remained stables until the eighth transference. Full protection was obtained with preimmunized plants with two mild isolates and challenged with the isolate PRSV-P-ES. Plants of papaya cv. Golden preimmunized with several mild isolates of PRSV-P were exposed under field conditions at ESALQ/USP, Piracicaba,SP, in two independent experiments. Few plants remained with mild mosaic symptoms at the end of the experiments. A third field exposition was held in Linhares,ES, with papaya cvs. Golden and Sunrise Solo preimmunized with eight mild isolates, collected in field experiments at ESALQ/USP. Only one plant preimmunized with a mild isolate remained with mild symptoms of the disease until the last evaluation. Attempts of detection of natural infections of cucurbits with PRSV-P were carried out in two plantations of zucchini squash and pumpkin at ESALQ/USP, Piracicaba,SP. The detection of the virus was made by inoculation of leaf extracts of cucurbits in papaya cv. Golden. The papaya plants were assessed by symptoms, PTAELISA and RT-PCR. None of papaya plants exhibited symptoms of mosaic, while the ci gene, but not the cp, was detected in a sample of leaves of papaya, indicating that at least one clump of zucchini squash plant was infected. Finally, during the field test at ESALQ/USP, a papaya plant was found showing severe symptoms severe yellow leaf mosaic, leaf distortion and systemic necrosis, different from those induced by PRSV-P. Biological, serological and molecular tests confirmed the infection with AMV. This is the first report of natural infection of papaya with this virus.

No estado do Espírito Santo (ES), uma das principais áreas produtoras de mamão do país, a eliminação sistemática de plantas doentes tem sido aplicada desde a década de 1980 para o controle do mosaico do mamoeiro (Papaya ringspot virus - type P; PRSV-P). O uso permanente dessa prática nos últimos 25 anos levou a uma aparente seleção e predominância de isolados fracos do vírus. Os objetivos deste trabalho foram: investigar a prevalência desses isolados fracos, bem como a estabilidade e o efeito protetor contra isolados severos do vírus; estudar a infecção natural de abobrinha de moita (Cucurbita pepo cv. Caserta) e abóbora moranga (C. maxima cv. Exposição) com o PRSV-P quando plantadas ao lado de mamoeiros infectados e caracterizar um isolado do Alfalfa mosaic virus (AMV) em infecção natural em mamoeiro. A detecção de possíveis isolados fracos do vírus foi realizada por PTAELISA, microscopia eletrônica e RT-PCR. Todos os isolados também foram inoculados mecanicamente em mamoeiro cv. Golden para avaliação de sintomas. Sequências de nucleotídeos e de aminoácidos deduzidos do gene da proteína capsidial de alguns isolados fracos mostraram identidades superiores a 89% e 90%, respectivamente, com isolados do PRSV-P. De 119 amostras de mamoeiros analisadas, 86 estavam infectadas com o PRSV-P, mas somente 75 induziram sintomas fracos em mamoeiros. Quatro isolados fracos foram selecionados ao acaso para estudos de estabilidade, e de proteção em casa de vegetação. Apenas dois isolados fracos induziram sintomas estáveis em mamoeiros até a oitava transferência. A proteção total só foi obtida com plantas premunizadas com dois isolados fracos e desafiados com o isolado PRSV-PES. Plantas de mamoeiros cv. Golden premunizadas com vários isolados fracos do PRSV-P foram expostas em condições de campo na ESALQ/USP, Piracicaba, SP, em dois experimentos independentes. Poucas plantas permaneceram com sintomas fracos de mosaico até o final dos experimentos. Uma terceira exposição foi realizada em Linhares, ES, com mamoeiros cvs. Sunrise Solo e Golden premunizados com oito isolados fracos, coletados nos experimentos em campo na ESALQ/USP. Apenas uma planta premunizada com um isolado fraco permaneceu com sintomas leves da doença até a última avaliação. Tentativas de detectaçao de infecções naturais de cucurbitáceas com o PRSV-P foram realizados em dois plantios de abobrinha de moita e dois de abóbora moranga, na ESALQ/USP, Piracicaba, SP. A detecção do vírus foi feita por meio da inoculação de extratos foliares das cucurbitáceas em mamoeiros cv. Golden. Os mamoerios foram avaliados por meio de sintomas, PTA-ELISA e RT-PCR. Nenhuma planta de mamoeiro inoculada com extratos foliares das duas cucurbitáceas exibiu sintomas de mosaico, embora o gene ci, mas não o cp, tenha sido detectado em uma amostra de folhas de mamoeiro, indicando que ao menos uma planta de abobrinha de moita estava infectada. Finalmente, no decorrer dos ensaios de campo na ESALQ/USP, constatou-se uma planta de mamoeiro apresentando sintomas severos de mosaico amarelo, deformação foliar e necrose sistêmica, diferente daqueles induzidos pelo PRSV-P. Análises biológicas, sorológica e moleculares confirmaram tratar-se do AMV. Este é o primeiro relato de infecção natural de mamoeiro com esse vírus. / Papaya ringspot virus type P (PRSV-P) causes the major disease in Brazilian papaya orchards that result in significant yield losses. In Espírito Santo state systematic rouging of infected plants has been applied since early 1980s for the control of this disease. Its permanent use over the last 25 years has lead to an apparent selection and predominance of mild strains throughout papaya orchards. The objectives of this work were to investigate the prevalence of mild isolates, as well the stability and protective effect against severe isolates of the virus; The aim of this work was to study the natural infecction of zucchini squash (Cucurbita pepo cv. Caserta) and pumpkin (C. maxima cv. Exposição) grown near to papaya trees infected with PRSV-P and characterize an isolate of Alfalfa mosaic virus (AMV) in natural infection in papaya. The detection of possible mild isolates of the virus was performed by PTA-ELISA, electron microscopy and RT-PCR. All isolates were inoculated mechanically in papaya cv. Golden for symptoms evaluation. Nucleotides and deduced amino acids sequences of the coat protein gene of some mild isolates showed identities above 89% and 90%, respectively, with isolates of PRSV-P. Of 119 samples from papaya plants analyzed, 86 were infected with PRSV-P and 75 induced mild symptoms on papaya. Four mild isolates were randomly selected for stability and protection studies under greenhouse. Only two isolates induced mild symptoms on papaya and remained stables until the eighth transference. Full protection was obtained with preimmunized plants with two mild isolates and challenged with the isolate PRSV-P-ES. Plants of papaya cv. Golden preimmunized with several mild isolates of PRSV-P were exposed under field conditions at ESALQ/USP, Piracicaba,SP, in two independent experiments. Few plants remained with mild mosaic symptoms at the end of the experiments. A third field exposition was held in Linhares,ES, with papaya cvs. Golden and Sunrise Solo preimmunized with eight mild isolates, collected in field experiments at ESALQ/USP. Only one plant preimmunized with a mild isolate remained with mild symptoms of the disease until the last evaluation. Attempts of detection of natural infections of cucurbits with PRSV-P were carried out in two plantations of zucchini squash and pumpkin at ESALQ/USP, Piracicaba,SP. The detection of the virus was made by inoculation of leaf extracts of cucurbits in papaya cv. Golden. The papaya plants were assessed by symptoms, PTAELISA and RT-PCR. None of papaya plants exhibited symptoms of mosaic, while the ci gene, but not the cp, was detected in a sample of leaves of papaya, indicating that at least one clump of zucchini squash plant was infected. Finally, during the field test at ESALQ/USP, a papaya plant was found showing severe symptoms severe yellow leaf mosaic, leaf distortion and systemic necrosis, different from those induced by PRSV-P. Biological, serological and molecular tests confirmed the infection with AMV. This is the first report of natural infection of papaya with this virus.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo .pdf: 1092167 bytes, checksum: 8586b9a4bcc728e0319bbbdb012ca136 (MD5) Previous issue date: 2012-07-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Viruses are organisms with small genomes of simple organization, which coding about 3 to encode 10 viral proteins. The success of the infection depends on the manipulation of the cell by the virus, by means of complex interactions occurring between viral factors and host factors. The induced changes by virus infection include cell morphology changes, cell cycle changes and alterations in gene expression, among others. Understanding the processes that favor viral infection necessarily involves the study of virus-host interactions. In order to better understand the processes related to infection by tomato potyvirus Pepper yellow mosaic virus (PepYMV) a subtractive library was built 72 hours after infection. Several genes were identified as induced or repressed by viral infection. Among the induced genes, is the gene encoding the Translationally controlled tumor protein (TCTP). TCTP protein is highly conserved in all eukaryotes. Its functions are related to growth control and cell cycle, anti-apoptotic activity, and response to different biotic and abiotic stresses. The involvement of this protein in infection PepYMV has not been established, but studies in a strain of transgenic tomato plants silenced for TCTP showed that the silenced plants have a lower accumulation of PepYMV, indicating that TCTP promotes viral infection. In this study, we sought to advance the understanding of mechanisms involving TCTP in the process of infection by PepYMV. N. benthamiana plants silenced by VIGS TCTP were used to study the effect of silencing in viral infection, and the silenced plants accumulate fewer viruses in early stages of virus infection. Individual expression of viral proteins in N. benthamiana identified P3 and CP as capable of inducing TCTP expression at similar levels to those induced during PepYMV infection, and expression of NIb reduced expression of TCTP. The verification of direct interactions occurrence between viral proteins and TCTP by double-hybrid assay showed that TCTP not interact separately with any of the proteins of viral origin. Purification of proteins of health and infected N. benthamiana plants by affinity with TCTP identified several proteins that putativaly interacts with TCTP. As in two hybrid assay, interactions involving PepYMV proteins were not detected. These results sugests that TCTP actuation must involve the formation of protein complexes involving viral and plant proteins or contribute indirectly to PepYMV infection, without involving direct interactions between TCTP and viral proteins. / Os vírus são organismos com genomas pequenos, de organização simples, que codificam em média 3 a 10 proteínas. O sucesso da infecção depende da manipulação da célula pelo vírus, por meio de interações complexas que ocorrem entre fatores virais e fatores do hospedeiro. As modificações induzidas na célula incluem alterações morfológicas, alteração do ciclo celular e na expressão gênica, entre outras. A compreensão dos processos que favorecem a infecção viral passa necessariamente pelo estudo de interações vírus-hospedeiro. No intuito de compreender melhor os processos relacionados à infecção de tomateiros pelo potyvírus Pepper yellow mosaic virus (PepYMV) uma biblioteca subtrativa foi construída 72 horas após a infecção. Diversos genes cuja expressão foi alterada pela infecção foram identificados. Dentre os genes induzidos, se encontra o gene que codifica a Translationally controlled tumor protein (TCTP). A proteína TCTP é altamente conservada em todos os eucariotos. Suas funções estão relacionadas a controle do crescimento e ciclo celular, atividade anti-apoptótica, e resposta a diferentes tipos de estresses abióticos e bióticos. O envolvimento desta proteína na infecção pelo PepYMV ainda não foi estabelecido, porém estudos em uma linhagem de tomateiro transgênica silenciadas para a TCTP, mostraram que as plantas silenciadas apresentam um menor acúmulo de PepYMV, indicando que a TCTP favorece a infecção por este vírus. Neste trabalho, buscou-se avançar na compreensão dos mecanismos que envolvem a TCTP no processo de infecção pelo PepYMV. Plantas de Nicotiana benthamiana silenciadas para TCTP por VIGS (Virus Induced Gene Silence) foram utilizadas para estudar o efeito do silenciamento na infecção viral, sendo que as plantas silenciadas acumularam menos vírus no início da infecção. A expressão individual das proteínas de origem viral em N. benthamiana identificou a P3 e a CP como capazes de induzir a expressão de TCTP em níveis semelhantes aos observados durante a infecção pelo PepYMV, sendo que a expressão da proteína NIb reduziu a expressão de TCTP. A verificação da ocorrência de interações diretas entre a TCTP e as proteínas virais, por ensaio de duplo híbrido, mostrou que a TCTP não interage separadamente com as proteínas de origem viral. A purificação de proteínas de plantas de N. benthamiana, sadias e infectadas, por afinidade com a TCTP identificou diversas proteínas que possivelmente 7 interagem com a TCTP. Assim como no ensaio de duplo híbrido, a interação com proteínas virais não foi detectada. Estes resultados sugerem que o papel da TCTP deve envolver a formação de complexos proteicos entre proteínas virais e da planta, ou favorecer a infecção de forma indireta.

Les résistances génétiques permettent une lutte efficace contre les maladies des plantes cultivées mais sont limitées par les capacités d’évolution des bioagresseurs ciblés. Chez le piment, le fonds génétique peut améliorer la durabilité de la résistance au PVY conférée par le gène majeur pvr23. L’objectif de ma thèse était de caractériser les facteurs génétiques de l’hôte conditionnant la durabilité du gène majeur en répondant aux questions suivantes : (i) Quels sont leurs actions sur l’évolution des populations virales ? (ii) Correspondent-ils aux QTL (quantitative trait loci) de résistance partielle ? (iii) Sont-ils répandus au sein des ressources génétiques du piment ? Différentes expérimentations incluant des tests de résistances, d’évolution expérimentale et de compétition entre différents variants viraux, ont montré que les facteurs du fonds génétique augmentant la durabilité de pvr23 agissaient en : (i) diminuant la concentration virale dans la plante, (ii) en réduisant les probabilités de mutations du PVY vers le contournement du gène pvr23 et (iii) en ralentissant la sélection des variants viraux contournants. La détection de QTL et la cartographie des facteurs génétiques affectant la fréquence de contournement de pvr23 (QTL de durabilité) a mis en évidence quatre régions du génome du piment qui, par des effets additifs ou épistatiques, expliquent 70% de la variabilité phénotypique observée. La cartographie comparée montre que trois des quatre QTL de durabilité co-localisent avec des QTL affectant la résistance partielle, suggérant que les QTL de résistance partielle ont un effet pléiotropique sur la durabilité d’un gène majeur de résistance. L’étude d’une collection de 20 accessions de piment, porteuses de pvr23 ou pvr24(allèle très proche de pvr23) dans des fonds génétiques variés, a montré que les fonds génétiques favorables à la durabilité de ces allèles de résistance sont fréquents dans les ressources génétiques du piment. Ces résultats mettent en évidence que la durabilité d’un gène majeur de résistance peut-être fortement augmentée lorsqu’il est associé à des facteurs génétiques réduisant la multiplication du pathogène. De plus, la fréquence de contournement du gène majeur s’est révélée être un caractère très héritable (h²=0.87) et la détection de QTL affectant ce caractère est possible. La sélection directe pour de tels QTL est donc envisageable et ouvre de nouvelles perspectives pour préserver la durabilité des gènes majeurs de résistance utilisés en sélection variétale. / Genetic resistances provide an efficient control of crop diseases but are limited by pathogen adaptation.In pepper, the durability of the pvr23 allele, conferring resistance to Potato virus Y (PVY), was demonstrated todepend on the plant genetic background. The aim of my PhD thesis was to characterize the host genetic factorsaffecting the durability of the major resistance gene pvr23 and to answer to the following question s: (i) What istheir action on the evolution of the viral population? (ii) Is there identity between the QTLs (quantitative traitloci) controlling the partial resistance and the QTLs affecting the durability of pvr23? (iii) Are these genetic factorswidespread among the genetic resources of pepper? Various experiments including resistance testing,experimental evolution and competition between various PVY variants, enabled to show that the genetic factorsaffecting the durability of pvr23 acted in: (i) decreasing the viral accumulation, (ii) decreasing the probability ofacquisition of resistance breaking (RB) mutations by PVY and (iii) slowing down the selection of RB variants. QTLdetection and mapping of genetic factors affecting the frequency of pvr23 RB showed that four loci actingadditively and in epistatic interactions explained together 70% of the variance of pvr23 breakdown frequency.Comparative mapping between these QTLs and QTLs affecting partial resistance showed that three of the fourQTLs controlling the frequency of pvr23 RB are also involved in quantitative resistance, suggesting that QTLs forquantitative resistance have a pleiotropic effect on the durability of the major resistance gene. Analysis of acollection of 20 pepper accessions, carrying pvr23 or pvr24 (allele closely related to pvr23) in various geneticbackgrounds, showed that genetic backgrounds favorable to the durability of the pvr2-mediated resistance arewidespread in the genetic resources of pepper. These results highlight that the durability of a major resistancegene can be strongly increased when associated with genetic factors decreasing the pathogen multiplication.Moreover, the frequency of a major gene RB is a highly heritable trait and QTLs detection for this trait isachievable. The direct selection for such QTLs opens new prospects to preserve the durability of major resistancegenes used by breeders.

Este trabalho apresenta resultados da caracterização biológica, serológica e molecular de um potyvirus que causa mosqueado foliar em maracujazeiro e infecta, experimentalmente, plantas de abobrinha-de-moita (Cucurbita pepo cv. Caserta). Esse potyvirus foi inicialmente observado em extratos de folhas de maracujazeiro e em cortes ultra finos de tecidos infectados de abobrinha-de-moita, em microscopia eletrônica. Além de partículas alongadas, observaram-se inclusões lamelares do tipo catavento, características de espécies de vírus do gênero Potyvirus. Após purificação a partir de folhas de maracujazeiro com mosqueado, as partículas desse potyvirus foram dissociadas para a caracterização dos seus principais componentes. O RNA viral apresentou peso molecular de aproximadamente 10000 pb. O peso molecular da proteína da capa protéica foi de aproximadamente 32 kDa. Antissoro policlonal produzido em coelho reagiu com o antígeno homólogo, bem como com o Passion fruit woodiness virus (PWV), em teste de PTA-ELISA, mas não reagiu com dois potyvirus que infectam cucurbitáceas, Papaya ringspot virus - type W e Zucchini yellow mosaic virus. O antissoro contra o PWV reagiu com o potyvirus do mosqueado do maracujazeiro. Quando três isolados do potyvirus do mosqueado do maracujazeiro (M1, M2 e M3) foram inoculados em 37 espécies vegetais, juntamente com dois isolados do PWV (PWV-1 e PWV-2), constatou-se que todas as espécies infectadas pelos isolados do PWV também o foram com os isolados do potyvirus do mosqueado. Estes últimos, entretanto, também foram capazes de infectar sistemicamente plantas de abobrinha-de-moita cv. Caserta e de abóbora híbrida do tipo Tetsukabuto, o que não ocorreu com os isolados do PWV. Testes de transmissão do isolado M1 do potyvirus do mosqueado, por meio mecânico e com os afídeos Myzus persicae e Aphis gossypii, de plantas de maracujazeiro, abobrinha-de-moita, feijoeiro BT 2 e crotalária, para plantas das mesmas espécies foram positivos. No entanto, observou-se que a eficiência de transmissão foi influenciada pela planta fonte de inóculo. Quando a abobrinha-de-moita foi utilizada como fonte de inóculo, a transmissão só ocorreu para plantas-teste dessa espécie, independente do processo de inoculação. Testes de proteção entre os isolados do potyvirus do mosqueado e do PWV, em plantas de Crotalaria juncea, juntamente com a análise da seqüência de nucleotídeos do gene da capa protéica e da região terminal 3' não traduzida dos isolados M2 e M3, indicaram que o potyvirus do mosqueado é uma estirpe do PWV que ocorre em São Paulo. Análises moleculares comparativas com outras espécies de Potyvirus indicaram que tanto os isolados do potyvirus do mosqueado como os isolados do PWV têm alta identidade com o Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV). Esse resultado corrobora relato anterior feito no país e aponta para a necessidade de uma alteração na nomenclatura da espécie do vírus que está freqüentemente associada ao endurecimento dos frutos do maracujazeiro no Brasil. / This work presents results of the biological, serological and molecular characterization of a potyvirus that causes leaf mottling on passion fruit and infects some cucurbit plants experimentally. This potyvirus was initially observed in extracts of passion fruit leaves and in ultra thin sections of infected tissue of Cucurbita pepo L. cv. Caserta, examined in the electronic microscope. Besides flexuous filamentous particles, lamellar inclusions, characteristic of species of potyvirus, were observed in infected tissue. After purification from infected passion fruit leaves, virus particles were dissociated for the molecular characterization of their main components. The viral RNA showed a molecular weight of approximately 10000 bp. The molecular weight of the coat protein was nearly 32 kDa. Policlonal antibody, produced in rabbit, reacted with the homologous antigen, as well as with Passion fruit woodiness virus (PWV), in PTA-ELISA. No reaction was observed with Papaya ringspot virus - type W and Zucchini yellow mosaic virus, two potyviruses usually found infecting plants in the Cucurbitaceae family. The antibody against PWV reacted with the passion fruit mottling potyvirus. When three isolates of the passion fruit leaf mottling potyvirus (M1, M2 and M3) and two isolates of PWV were separately inoculated in 37 vegetable species, it was verified that all the species infected with the PWV isolates were also infected with the isolates of the passion fruit leaf mottling potyvirus. Isolates M1, M2 and M3, however, were also capable to infect systemically plants of zucchini squash cv. Caserta and hybrid squash Tetsukabuto, which were not infected with the PWV isolates. Transmission tests showed that the M1 isolate of passion fruit leaf mottling potyvirus was efficiently transmitted from infected plants of passion fruit, zucchini squash, Phaseolus vulgaris cv. BT 2 and Crotalaria juncea to plants of the same species by means of mechanical inoculation. Efficient transmission was also obtained when the aphids Myzus persicae and Aphis gossypii were used as vectors. However, the transmission efficiency was influenced by the plant source of inoculum. When zucchini squash was used as a source of inoculum, the transmission only occurred for plants of the same specie, independent of the method of inoculation. Cross protection tests with isolates of the passion fruit leaf mottling potyvirus and PWV, in plants of C. juncea, together with the analysis of the nucleotide sequences of the coat protein (CP) gene and the 3' non translated region (NTR) of the isolates M2 and M3, indicated that the leaf mottling potyvirus has high identity with the PWV present in São Paulo State. As compared with other species of the genus Potyvirus, isolates of both potyviruses showed high identity with the CP gene and 3' NTR of Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV). This result corroborates previous report regarding to the identity between Brazilian PWV isolates and CABMV and it points for the need of an alteration in the nomenclature of the virus species frequently associated to passion fruit woodiness in Brazil.