Orientador: Ricardo de Oliveira Orsi / Banca: José Antonio Dalanezi / Banca: Rita de Cássia Viveiros da Silveira / Banca: Diego Alonso Peres / Banca: Denise de Araújo Alves / Resumo: As abelhas Apis mellifera podem estar sujeitas a uma série de ameaças como parasitas e patógenos que acometem seu sistema imunológico. Tal fato torna necessária a busca por produtos naturais que possam contribuir com a melhora do sistema imune destes insetos, como a própolis. Diante do exposto, o objetivo foi analisar a influência do fornecimento da própolis em expressões de genes relacionados à imunidade de abelhas Apis mellifera L. submetidas ao desafio bacteriano. Ao longo de 30 dias, quatro colmeias receberam semanalmente os tratamentos com diferentes porcentagens de extrato alcoólico de própolis 30% (0%, 5%, 10%, 15%). O experimento foi casualizado em esquema fatorial 4 x 2 x 2x 3 (tratamentos x com ou sem bactéria x tempos x períodos), totalizando 48 amostras. Foram observadas as expressões dos genes abaecin, hymenoptaecin, apidaecin e defensin1. Como controle interno foi utilizado o gene actina. Os resultados foram comparados por ANOVA seguidos do teste de Tukey (P<0,05). Foram observadas alterações na expressão gênica das abelhas estudadas para todos os períodos e tratamentos, antes e após desafio bacteriano, para todos os genes propostos, sendo ainda verificada induções da expressão relativa nos três períodos. Conclui-se que nas condições do presente trabalho, a própolis pode induzir a expressão relativa dos genes abaecin, hymenoptaecin, apidaecin e defensin1, quando submetidas a desafio bacteriano. Entretanto, não se pôde caracterizar um tratamento com própolis que apresente uma maior expressão relativa para todos os genes simultaneamente. / Abstract: The Apis mellifera bees may be subject to a number of threats as parasites and pathogens that affect your immune system. This fact makes it necessary to look for natural products that can contribute to improving the immune system of these insects such as propolis. Given the above, the objective was to analyze the influence of the supply of propolis in gene expressions related to immunity of Apis mellifera L. bees subjected to bacterial challenge Over 30 days, four hives receive weekly treatments with different percentages of alcoholic extract of propolis 30% (0%, 5%, 10%, 15%). The experiment was randomized in a factorial 4 x 2 x 2x 3 (treatments x with or without bacteria x times x periods), totaling 48 samples. It was observed the expressions of abaecin, hymenoptaecin, apidaecin and defensing1 genes. As internal control was used actin gene. The results were compared by ANOVA followed by Tukey test (P <0.05). Alterations were observed in gene expression of bees studied for all periods and treatments before and after bacterial challenge for all proposed genes, were yet verified inductions of relative expression in the three periods. It is concluded that under the conditions of this study, propolis can induce the relative expression of genes abaecin, hymenoptaecin, apidaecin and defensin1, when subjected to bacterial challenge. However, it is not able to characterize a treatment with propolis presenting greater relative expression for all genes simultaneously. / Doutor

Orientador: Ricardo de Oliveira Orsi / Banca: Margarida Maria Barros / Banca: Lidia Maria Ruv C Barreto / Resumo: O cultivo intensivo de peixes em tanque-rede pode induzir ao estresse fisiológico, promovendo queda de desempenho do animal e da imunocompetencia. A utilização de imunoestimulantes, como a própolis, pode melhorar a imunidade inata dos animais e fornecer resistência a patogenos durante períodos de estresse elevado. Os objetivos deste trabalho foram avaliar o efeito da própolis em juvenis de pacu, criados em tanques-rede e arraçoados com baixas e altas frequências alimentares, por meio do desempenho produtivo e das enzimas intestinais. Foram utilizados juvenis de pacu (Piaractus mesopotamicus), distribuídos em 18 tanques-rede com estocagem de 90 alevinos/m3 com peso médio inicial de 27,57±7,21 g. Foram utilizados três níveis de própolis incorporada na ração comercial, nos seguintes tratamentos: 0,0; 1,0 e 10,0 g de própolis/kg de ração, fornecidas em duas frequências alimentares: quatro e 24 vezes ao dia em um delineamento fatorial (3x2) e com taxa de alimentação de 7,0%. Os resultados foram analisados por ANOVA, seguida do teste de Tukey para comparação de médias. A suplementação de própolis na dieta melhorou o ganho de peso dos animais, na frequência alimentar de 24 vezes ao dia. Entretanto, quando a frequência alimentar foi menor os níveis de própolis não melhoraram o ganho de peso / Abstract: Intensive fish farming in net cages can lead to physiological stress, thus impairing animal performance and resistance to diseases. The use of immunostimulants, such as propolis, can bring benefits mainly in the initial phases of the culture. This work aimed at evaluating the effect of propolis in juveniles of Pacu, reared in net cages and fed high and low feeding frequencies, by analyzing their performance and digestive enzmes. Pacus were distributed in 18 cages with 90 fish/m3 and 27.57±7.21 g. Three levels of propolis were added in fish diet (0.0; 1.0 and 10.0g/kg) supplied in two feeding frequencies (four and 24/day) in a factorial arrangement (3x2) and a feeding rate corresponding to 7% of fish weight. Results were analyzed by ANOVA and Tukey test comparison of averages.Fish diet with propolis with a feeding frequency of 24 times a day resulted in improved weight gain / Mestre

Orientador: Ricardo de Oliveira Orsi / Banca: Simone Fernandes / Banca: Lidia Maria Ruv Carelli Barreto / Resumo: Os objetivos do presente trabalho foram avaliar a influência da sazonalidade e o método de produção da própolis (controle, tela plástica, coletor inteligente de própolis - CIP, abertura lateral da melgueira - ALM e calço) no teor dos minerais magnésio (Mg), zinco (Zn), ferro (Fe), sódio (Na), cálcio (Ca), cobre (Cu) e potássio (K) presentes na própolis produzida por abelhas Apis mellifera africanizadas. O experimento foi realizado na área de Apicultura da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, localizado na Fazenda Edgárdia, UNESP, campus de Botucatu. As análises dos minerais foram realizadas por espectrofotometria de absorção atômica e os resultados avaliados por meio da Análise de Variância (ANOVA), seguido pelo teste de Tukey-Kramer para comparação das médias (P<0,05). Houve diferenças significativas para os minerais Mg, Zn, Fe, Na, Ca, Cu entre os métodos de produção e sazonalidade. Pode-se concluir que o método de colheita influenciou no teor de quatro minerais (Ca, Mg, Zn e Fe) e a sazonalidade influenciou no teor de cinco minerais ( Ca, Mg, Na, Cu e Fe) presentes na própolis produzida por abelhas Apis mellifera L. africanizadas / Abstract: The aim of this study were to evaluate the influence of sazonality and methods of propolis production(control, plastic screen, intelligent propolis collector - CIP, opening side supper - ALM, and conventional scraping) in the mineral content of magnesium (Mg), Zinc (Zn), iron (Fe), sodium (Na), calcium (Ca), copper (Cu) and potassium (K) presents in the propolis produced by africanizated Apis mellifera L. The experiment was conducted in apiary of the Beekeeping area of Veterinary Medicine and Animal Science School, Edgárdia Farm, UNESP, Botucatu campus. Analyses of minerals were carried out by atomic absorption spectrophotometry and the results evaluated by analysis of variance (ANOVA) followed by Tukey-Kramer test for comparison of means (P<0,05). There were significantly differences for Mg, Zn, Fe, Na, Ca, Cu minerals between the methods of production and sazonality. From the results was possible to conclude that the method of production influence in four minerals ( Ca, Mg, Zn e Fe) contents and the sazonality influence in five minerals ( Ca, Mg, Na, Cu e Fe) contents presents in the propolis produced by africanizated Apis Melliferra L. / Mestre

Orientador: José Maurício Sforcin / Banca: Sandra Cordellini / Banca: Glenda Nicioli da Silva / Resumo: O estresse pode exercer atividades imunossupressoras, acarretando o desenvolvimento de doenças como câncer, inflamações crônicas, neurodegeneração, autoimunidade, além de maior susceptibilidade a infecções por microrganismos. Os recém-descobertos receptores Toll-like (TLRs) têm sido extensamente investigados recentemente por reconhecer microrganismos patogênicos, ativando, consequentemente, a resposta imune. Devido ao pouco conhecimento quanto ao papel da própolis no sistema imune desafiado pela ação do estresse, o objetivo deste trabalho foi verificar o possível efeito deste apiterápico sobre a produção de citocinas pró-inflamatórias (IL-1β e IL-6) e de padrão Th1 (IFN-γ e IL-2) e Th2 (IL-4 e IL-10), e sobre a expressão do receptor TLR-4 por células esplênicas de camundongos submetidos a estresse. Camundongos BALB/c foram divididos em 3 grupos: G1 (controle), G2 (estresse) e G3 (própolis + estresse). G2 foi submetido a estresse por imobilização por 3 dias consecutivos, e G3 foi tratado com própolis e submetido a estresse. Após o sacrifício, o sangue foi coletado para a dosagem de corticosterona, como indicador de estresse. O baço de cada animal foi extraído e culturas celulares foram estimuladas com LPS por 24h ou com Con A por 48 h para determinação da produção de citocinas. Parte do baço foi utilizada para a realização de PCR quantitativo em tempo real a fim de verificar a expressão gênica de TLR-4 pelas células esplênicas. Os grupos submetidos a estresse, tratados ou não com própolis, apresentaram aumento na concentração de corticosterona. Houve inibição na produção de IL-1β e IL-6 nestes mesmos grupos, em comparação ao controle. Não houve alterações na produção de IL-2 em nenhum dos grupos, enquanto que a de IFN-γ esteve inibida nos grupos submetidos a estresse, tratados ou não com própolis. Já a produção de IL-4... (resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Stress can exert immunossupressive activities, which lead to the development of diseases such as cancer, chronic inflammation, neurodegenerative dysfunctions, autoimmunity and a higher susceptibility to infectious microorganisms. Recently, Tolllike receptors (TLRs) have been widely investigated for recognizing pathogenic microorganisms and, as a consequence, activating the immune response. Since little is known about propolis effects on the immune system challenged by stress, the aim of this work was to verify the possible effect of this bee product on pro-inflammatory (IL- 1β and IL-6), Th1 (IFN-γ and IL-2) and Th2 (IL-4 and IL-10) cytokines and on TLR-4 expression by spleen cells from stressed mice. BALB/c mice were divided into 3 groups: G1 (control), G2 (stress) and G3 (propolis + stress). G2 was submitted to restraint stress for 3 consecutive days and G3 was treated with propolis and immediately submitted to stress. After sacrifice, blood was collected for corticosterone determination as a stress indicator. Spleens of all groups were removed and cell cultures were stimulated with LPS for 24h or with Con A for 48 h to further cytokines determination. A portion of the spleens was used for quantitative PCR real time assay in order to verify TLR-4 gene expression. An increased corticosterone concentration was seen in stressed groups, treated or not with propolis. IL-1β and IL-6 production was inhibited in these same groups, comparing to control. No alterations were found in IL-2 production in the experimental groups, while IFN-γ was inhibited on stressed group even when treated with propolis. IL-4 production was inhibited on stressed mice, but propolis treatment was able to antagonize this inhibition. There were no alterations in IL-10 production between the experimental groups. TLR-4 expression was inhibited in stressed mice, but propolis treatment exerted... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Jerked beef, típico produto brasileiro, industrializado, adicionado de cloreto de sódio e sais de cura e submetido a um processo de maturação e secagem. Devido aos possíveis efeitos colaterais constatados por testes de laboratório na saúde do consumidor, a substituição de antioxidantes sintéticos por substâncias naturais com potencial antioxidante vem sendo implantada pela indústria cárnea. Este trabalho teve por objetivo avaliar a oxidação lipídica do Jerked beef ao longo do período de armazenamento pela substituição do nitrito de sódio por extratos naturais de própolis e erva-mate. Para a produção do Jerked beef foi utilizada como matéria-prima o corte de ponta de peito em 6 diferentes formulações, formulação 1(controle – in natura), formulação 2 (nitrito de sódio - NO), formulação 3 (Erva-mate - EM), formulação 4 (Extrato de própolis - PRO), formulação 5 (nitrito de sódio + Erva-Mate – EM+NO) e formulação 6 (extrato de própolis + nitrito de sódio – PRO+NO). A matéria-prima foi submetida a salga úmida, salga seca (tombos), secagem em BOD a 25ºC, embalagem e armazenamento em estufa BOD 25ºC. Amostras de cada uma das formulações foram retiradas a cada 7 dias para a análise da oxidação lipídica através do método de TBARS. Em todas as formulações, foram realizadas análises de composição proximal no tempo zero e sessenta dias de armazenagem. A atividade de água foi monitorada no tempo zero, trinta e sessenta dias de armazenagem. A análise de cor (L*, a*, b*) foi monitorada no tempo zero e sessenta dias de armazenagem A contagem de Salmonella spp, Coliformes totais, Coliformes termotolerantes e Estafilococos coagulase positiva foram realizados no tempo zero e sessenta dias. A atividade dos antioxidantes naturais avaliados mostra uma diminuição da oxidação lipídica de até 2,5 vezes quando comparados com o produto in natura e apresentou valores com diferenças não significativas entre os tratamentos NO e EM, confirmando o potencial em minimizar a oxidação lipídica do Jerked beef ao longo dos 60 dias de armazenamento. Os resultados também mostraram que a erva-mate apresenta maior capacidade antioxidante quando comparado à própolis exceto na formulação PRO+NO. Quando associado erva-mate com nitrito de sódio, os valores de TBARS tornam-se próximos dos valores obtidos somente para as amostras de controle com a adição de nitrito de sódio. A composição proximal das formulações manteve-se dentro dos padrões exigidos na IN n022/2000 para Jerked beef. As amostras que diferiram significativamente entre si a 5%, estão diretamente associadas ao tipo de formulação estabelecida. A contagem dos microrganismos esteve dentro dos padrões da RDC n012/2001 exigidos para produtos cárneos maturados. A intensidade do vermelho (a*) diminuiu com o tempo de armazenamento e aumentou a intensidade do amarelo (b*) indicando um escurecimento do produto, apesar de L* também ter sofrido aumento. Estes resultados sugerem que a erva-mate é uma boa alternativa para indústria de produtos cárneos na redução da adição de sais de cura quando associada a outro antioxidante. / Jerked beef, an industrial meat product obtained from beef with the addition of sodium chloride and curing salts and subjected to a maturing and drying process is a typical Brazilian product which has been gradually discovered by the consumer. The replacement of synthetic antioxidants by natural substances with antioxidant potential due to possible side effects discovered by lab tests, consumer health, is being implemented by the meat industry. This study aimed to evaluate the lipid oxidation of jerked beef throughout the storage period by replacing the sodium nitrite by natural extracts of propolis and Yerba Mate. For jerked beef processing brisket was used as raw material processed in 6 different formulations: formulation 1 (control - in nature), formulation 2 (sodium nitrite - NO), formulation 3 (Yerba Mate - EM), formulation 4 (propolis extract - PRO), formulation 5 (sodium nitrite + Yerba Mate - MS + NO), formulation 6 (propolis extract + sodium nitrite - PRO + NO). The raw material was subjected to wet salting, dry salting (tombos), drying at 25°C, packaging and storage in BOD 25°C. Samples of each formulation were taken every 7 days for analysis of lipid oxidation by the TBARS method. In all formulations, were carried out analysis of chemical composition at time zero and sixty days of storage. The water activity analysis and color (L *, a *, b *) was monitored at time zero, thirty and sixty days of storage. The Salmonella spp count, Coliform bacteria, Termotolerant coliforms and coagulase positive staphylococci were taken at time zero and sixty days. The activity of natural antioxidants evaluated shows the decline of lipid oxidation up to 2.5 times compared with the product in natura and presented values with no significant differences between treatments NO and EM, confirming the potential in minimize lipid oxidation of Jerked beef throughout the 60 days of storage. The results also showed that yerba mate has a higher antioxidant capacity compared to the propolis except the PRO + NO formulation. When associated with yerba mate with sodium nitrate, TBARS values become close to values obtained only for the control samples with the addition of sodium nitrite. The proximal composition of the formulations remained within the standards required in the IN nº22/2000 for jerked beef. Samples that differ significantly at 5% are directly related to the established type of formulation. The count of microorganisms was within the standards of the DRC nº12/2001 required for matured meat products. The intensity of the red (a*) decreased with storage time and increase the intensity of yellow (b*) indicates a darkening of the product despite L* also have been increased. These results suggest that yerba mate is a good alternative to meat industry in reducing healing addition salts when associated with another antioxidant.

Jerked beef, típico produto brasileiro, industrializado, adicionado de cloreto de sódio e sais de cura e submetido a um processo de maturação e secagem. Devido aos possíveis efeitos colaterais constatados por testes de laboratório na saúde do consumidor, a substituição de antioxidantes sintéticos por substâncias naturais com potencial antioxidante vem sendo implantada pela indústria cárnea. Este trabalho teve por objetivo avaliar a oxidação lipídica do Jerked beef ao longo do período de armazenamento pela substituição do nitrito de sódio por extratos naturais de própolis e erva-mate. Para a produção do Jerked beef foi utilizada como matéria-prima o corte de ponta de peito em 6 diferentes formulações, formulação 1(controle – in natura), formulação 2 (nitrito de sódio - NO), formulação 3 (Erva-mate - EM), formulação 4 (Extrato de própolis - PRO), formulação 5 (nitrito de sódio + Erva-Mate – EM+NO) e formulação 6 (extrato de própolis + nitrito de sódio – PRO+NO). A matéria-prima foi submetida a salga úmida, salga seca (tombos), secagem em BOD a 25ºC, embalagem e armazenamento em estufa BOD 25ºC. Amostras de cada uma das formulações foram retiradas a cada 7 dias para a análise da oxidação lipídica através do método de TBARS. Em todas as formulações, foram realizadas análises de composição proximal no tempo zero e sessenta dias de armazenagem. A atividade de água foi monitorada no tempo zero, trinta e sessenta dias de armazenagem. A análise de cor (L*, a*, b*) foi monitorada no tempo zero e sessenta dias de armazenagem A contagem de Salmonella spp, Coliformes totais, Coliformes termotolerantes e Estafilococos coagulase positiva foram realizados no tempo zero e sessenta dias. A atividade dos antioxidantes naturais avaliados mostra uma diminuição da oxidação lipídica de até 2,5 vezes quando comparados com o produto in natura e apresentou valores com diferenças não significativas entre os tratamentos NO e EM, confirmando o potencial em minimizar a oxidação lipídica do Jerked beef ao longo dos 60 dias de armazenamento. Os resultados também mostraram que a erva-mate apresenta maior capacidade antioxidante quando comparado à própolis exceto na formulação PRO+NO. Quando associado erva-mate com nitrito de sódio, os valores de TBARS tornam-se próximos dos valores obtidos somente para as amostras de controle com a adição de nitrito de sódio. A composição proximal das formulações manteve-se dentro dos padrões exigidos na IN n022/2000 para Jerked beef. As amostras que diferiram significativamente entre si a 5%, estão diretamente associadas ao tipo de formulação estabelecida. A contagem dos microrganismos esteve dentro dos padrões da RDC n012/2001 exigidos para produtos cárneos maturados. A intensidade do vermelho (a*) diminuiu com o tempo de armazenamento e aumentou a intensidade do amarelo (b*) indicando um escurecimento do produto, apesar de L* também ter sofrido aumento. Estes resultados sugerem que a erva-mate é uma boa alternativa para indústria de produtos cárneos na redução da adição de sais de cura quando associada a outro antioxidante. / Jerked beef, an industrial meat product obtained from beef with the addition of sodium chloride and curing salts and subjected to a maturing and drying process is a typical Brazilian product which has been gradually discovered by the consumer. The replacement of synthetic antioxidants by natural substances with antioxidant potential due to possible side effects discovered by lab tests, consumer health, is being implemented by the meat industry. This study aimed to evaluate the lipid oxidation of jerked beef throughout the storage period by replacing the sodium nitrite by natural extracts of propolis and Yerba Mate. For jerked beef processing brisket was used as raw material processed in 6 different formulations: formulation 1 (control - in nature), formulation 2 (sodium nitrite - NO), formulation 3 (Yerba Mate - EM), formulation 4 (propolis extract - PRO), formulation 5 (sodium nitrite + Yerba Mate - MS + NO), formulation 6 (propolis extract + sodium nitrite - PRO + NO). The raw material was subjected to wet salting, dry salting (tombos), drying at 25°C, packaging and storage in BOD 25°C. Samples of each formulation were taken every 7 days for analysis of lipid oxidation by the TBARS method. In all formulations, were carried out analysis of chemical composition at time zero and sixty days of storage. The water activity analysis and color (L *, a *, b *) was monitored at time zero, thirty and sixty days of storage. The Salmonella spp count, Coliform bacteria, Termotolerant coliforms and coagulase positive staphylococci were taken at time zero and sixty days. The activity of natural antioxidants evaluated shows the decline of lipid oxidation up to 2.5 times compared with the product in natura and presented values with no significant differences between treatments NO and EM, confirming the potential in minimize lipid oxidation of Jerked beef throughout the 60 days of storage. The results also showed that yerba mate has a higher antioxidant capacity compared to the propolis except the PRO + NO formulation. When associated with yerba mate with sodium nitrate, TBARS values become close to values obtained only for the control samples with the addition of sodium nitrite. The proximal composition of the formulations remained within the standards required in the IN nº22/2000 for jerked beef. Samples that differ significantly at 5% are directly related to the established type of formulation. The count of microorganisms was within the standards of the DRC nº12/2001 required for matured meat products. The intensity of the red (a*) decreased with storage time and increase the intensity of yellow (b*) indicates a darkening of the product despite L* also have been increased. These results suggest that yerba mate is a good alternative to meat industry in reducing healing addition salts when associated with another antioxidant.

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A própolis vermelha brasileira tem atraído interesses científicos e econômicos devido às suas variadas atividades biológicas. Este produto natural possui composição química variada de acordo com a região na qual é encontrado, sendo necessária uma completa caracterização química para cada tipo de própolis, a fim de se elucidar os compostos presentes e responsáveis pela atividade biológica observada. Neste trabalho, buscou-se caracterizar quimicamente os extratos da própolis vermelha brasileira, avaliar sua atividade antitumoral, bem como alguns mecanismos de morte celular, além de investigar o padrão proteico de células tumorais de laringe (Hep-2) e não tumorais de rim (Hek-293) tratadas e não tratadas com extratos da própolis vermelha através da análise proteômica comparativa. A caracterização química mostrou que a própolis apresenta moléculas complexas, principalmente isoflavonoides, que possuem importantes atividades biológicas, dentre elas a atividade antitumoral. A atividade citotóxica de duas frações e do extrato hidroalcoólico da própolis foi avaliada na linhagem tumoral Hep-2, a qual se revelou mais citotóxica nos tratamentos com as frações investigadas. Os ensaios de citometria mostraram que as células que receberam tratamento apresentaram menor potencial de membrana mitocondrial, maior quantidade de células em apoptose tardia (TUNEL e Anexina-V/PI), menor geração de espécies reativas do oxigênio e o aumento de fragmentação do DNA. Além disto, as colorações revelaram a presença de corpos apoptóticos e condensação de cromatina. A análise proteômica permitiu a comparação dos mapas proteicos da linhagem Hep-2, na ausência ou presença de extratos da própolis vermelha, com a linhagem não tumoral Hek-293. Estas proteínas foram classificadas de acordo com os processos biológicos as quais estão envolvidas. Além disto, doze proteínas identificadas na linhagem Hep-2 apresentaram expressão reduzida comparada ao grupo controle, dentre as quais muitas estão presentes em grande quantidade em outros tumores e são consideradas biomarcadores tumorais. Os resultados, de forma geral, mostram que a própolis interfere em um conjunto de eventos intracelulares e, assim, passa a ser uma candidata promissora para inibir o crescimento celular e contribuir para os diferentes passos relacionados com o processo de carcinogênese. Embora os mecanismos moleculares pelos quais a própolis vermelha interaja com o metabolismo das células permaneçam ainda desconhecidos, estudos adicionais servirão para melhor elucidar a atividade antitumoral da própolis vermelha brasileira e de suas frações. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES. / The Brazilian red propolis has attracted scientific and economic interests due to its varied biological activities. This natural product has diversify chemical composition according to the region in which it is found, then it is necessary a complete chemical characterization for each type of propolis, in order to elucidate the present compounds and responsible for the biological activity observed. In this work, we attempted to chemically characterize the extracts of Brazilian propolis, evaluate their antitumor activity as well as some cell death mechanisms, and to investigate the protein profile of larynx tumor cells treated and not treated with propolis extracts through comparative proteomic analysis. The chemical characterization showed that propolis has complex molecules, particularly isoflavones, which present significant biological activities, such as antitumor activity. The cytotoxic activity of two fractions and of the hydroalcoholic extract of propolis was assessed in Hep-2 tumor cell line, which proved to be more cytotoxic treatments in the investigated fractions. Flow cytometric assays showed that treated cells had lower mitochondrial membrane potential, increased amount of cells in late apoptosis (TUNEL and Annexin-V / PI), less generation of reactive oxygen species and increase in DNA fragmentation. Furthermore, the staining revealed the presence of apoptotic bodies and chromatin condensation. The proteomic analysis has allowed comparison of the maps of the protein Hep-2 cell line, in the absence or presence of propolis extracts, with non-tumor cell line Hek-293. These proteins were classified according to the biological processes which they are related. Besides, twelve identified proteins in Hep-2 showed reduced expression from the control group. Between them, many are presented in large quantities in other tumors and are considered tumor biomarkers. The results in general show that propolis interferes with a series of intracellular events and hence becomes a promising candidate to inhibit cell growth and contribute to the different steps relating to the process of carcinogenesis. Although the molecular mechanisms by which propolis interact with the metabolism of the cells remain unknown, further study will serve to better elucidate the antitumor activity of Brazilian propolis and its fractions.

A própolis vermelha é uma resina natural produzida por abelhas do gênero Apis a partir de exsudados vegetais e tem atraído a atenção dos pesquisadores de todo o mundo devido à sua potente atividade em diversos modelos biológicos. Essa resina natural é rica em polifenóis e compostos voláteis, sendo que mais 300 compostos químicos já foram identificados em amostras de diferentes regiões. Técnicas de identificação química de alta precisão são imprescindíveis para a correta elucidação dos compostos químicos presentes nas amostras e para o entendimento dos efeitos biológicos. Neste estudo, buscou-se utilizar técnicas de fracionamento como uma metodologia capaz de ser explorada em estudos envolvendo amostras de própolis vermelha, buscando-se a identificação e caracterização de frações ativas, bem como o uso de modelos celulares de câncer de cólon para o screening de moléculas bioativas. As frações ativas foram identificadas por meio HPLC-MS e ESI-MS/MS, evidenciando uma composição química complexa baseada em compostos fenólicos e flavonoides. Entre os resultados obtidos, destacam-se as frações 05 e 06, as quais foram capazes de produzir inibição significativa sobre as linhagens tumorais HT-29 e HCT-116, respectivamente, com menores efeitos sobre as células não-tumorais. As frações obtidas no estudo apresentaram menor diversidade química do que a encontrada no extrato total da própolis, favorecendo a sua bioatividade in vitro, e, como resultado, esta técnica pode favorecer a descoberta e o desenvolvimento de novos fármacos utilizando a própolis como fonte de potencial de moléculas contra o câncer. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES. / Red propolis is a natural resin produced by bees of the genus Apis from plant exudates and has attracted the attention of researchers worldwide due to its potent activity in several biological models. This natural resin is rich in polyphenols and volatile compounds and more than 300 chemical compounds have been identified in samples from different regions. High precision chemical identification techniques are essential for the correct elucidation of the chemical compounds present in the samples and for the understanding of the biological effects. In this study, we sought to use fractionation techniques as a methodology able to be explored in studies involving samples of red propolis, seeking the identification and characterization of active fractions, as well as the use of cellular models of colon cancer for screening of bioactive molecules. The active fractions were identified by techniques of HPLC-MS and ESI-MS/MS, evidencing a complex chemical composition based on phenolic compounds an flavonoids. Among the obtained results, we highlight the fractions 05 and 06, which are able to produce significant inhibition on the HT-29 and HCT-116 tumor lines.The fractions obtained in this study showed lower chemical diversity than that found in the total extract of propolis, favoring its bioactivity, and as a result, this technique may favor the discovery and development of new drugs using propolis as a potential source of molecules against cancer.

Orientador: Ricardo de Oliveira Orsi / Banca: Luis Carlos Marchini / Banca: Nabor Veiga / Resumo: Os objetivos do presente trabalho foram avaliar o efeito da própolis sobre o peso e parâmetros comportamentais de saguis Callithrix sp mantidos em cativeiro e submetidos ao estresse. Foram utilizados 26 animais da espécie Callithrix jacchus (sagüi-de-tufo-branco) e Callithrix penicillata (sagüi-de-tufo-preto), com idade entre 8 e 18 meses, de ambos os sexos, os quais foram divididos em três tratamentos: T1- dieta de rotina; T2- dieta de rotina acrescida de 2% de própolis bruta e T3- dieta de rotina acrescida de 5% de própolis bruta da alimentação em relação ao consumo diário estimado por indivíduo. Os animais foram alimentados durante sete dias com ou sem o acréscimo de própolis (momento 1). Após este período, os animais continuaram recebendo o mesmo esquema alimentar e foram submetidos ao estresse intruso x residente, durante sete dias (momento 2), totalizando 14 dias. Em ambos os momentos foram avaliados os parâmetros comportamentais (brincadeiras social e lúdica, vocalização, catação e deslocamento) e a manutenção do peso dos animais. De acordo com os resultados obtidos pode-se concluir que a adição da própolis na dieta de sagüis mantidos em cativeiro promoveu maior ganho de peso nos animais, embora não tenha apresentado efeito na redução do estresse, avaliado através de parâmetros comportamentais. Sugere-se, no entanto, a necessidade de novas pesquisas no sentido de estudar outras concentrações de própolis e maiores tempos de observação dos animais. / Abstract : The aim of the present work was to evaluate the effects of propolis on the weight and behavioral parameters of Callithrix sp marmosets kept in captivity and subjected to stress. Twenty-six Callithrix jacchus (white-tuffed-ear marmoset) and Callithrix penicillata (black-tuffed ear marmoset), aged between 8 and 18 months, males and females, were divided into three treatment groups: T1- routine diet; T2- routine diet added of 2% crude propolis and T3- routine diet added of 5% crude propolis from daily diet, in relation to estimated daily consumption per individual. Animals were fed during seven days with or without the addition of propolis (moment 1). After this period, they continued receiving the same diet scheme and were subjected to intrusive x resident stress for seven days (moment 2), in 14 days of experiment. In both moments, behavioral parameters (social and playful activities, vocalization, catching and moving) and weight were evaluated. According to the obtained results, the addition of propolis to the diet of marmosets kept in captivity leads to greater weight gain in the animals although it had no effect on stress reduction, which was evaluated through behavioral parameters. Thus, there is the need for additional studies using other propolis concentrations and longer observation times. / Mestre