Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2006. / Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-10-27T18:10:25Z No. of bitstreams: 1 2006_AlineWelzel.pdf: 2868723 bytes, checksum: 61f500bb6388c0e8e5c9d9601b198293 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2009-11-03T17:51:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_AlineWelzel.pdf: 2868723 bytes, checksum: 61f500bb6388c0e8e5c9d9601b198293 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-11-03T17:51:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_AlineWelzel.pdf: 2868723 bytes, checksum: 61f500bb6388c0e8e5c9d9601b198293 (MD5) Previous issue date: 2006-03-23 / Os baculovírus são vírus de DNA, específicos de artrópodes, possuindo uma ampla utilização, principalmente, como bioinseticida em lepidópteros e como vetores de expressão de genes heterólogos. A habilidade do vírus Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) de infectar um grande número de hospedeiros tem facilitado estudos moleculares desse vírus com o objetivo de melhorar sua propriedade bioinseticida. Este trabalho teve por objetivo a construção de AcMNPV recombinantes com a introdução de um gene de uma protease (catepsina-L) e de uma quitinase no genoma viral, para a observação dos efeitos da infecção viral em larvas de Spodoptera frugiperda, comparativamente aos vírus AcMNPV selvagem e outro AcMNPV recombinante, contendo o gene de uma serino-protease (queratinase) de Aspergillus fumigatus. Outro objetivo do trabalho foi a construção de Anticarsia gemmatalis multiple nucleopolyhedrovirus (AgMNPV) recombinantes com a introdução dos genes das proteases catepsina-L e queratinase no genoma viral. Foram utilizados os vetores de transferência pSynXIVVI+X3 e p2100, respectivamente, para cada vírus. O DNA plasmidial dos vetores de transferência recombinantes foi co-transfectado com o DNA do vírus vSyngalVI- e do vAgGalA2, em células de Trichoplusia ni (BTI-Tn5B1-4) e Anticarsia gemmatalis (UFL-AG-286), respectivamente. Os isolamentos dos vírus recombinantes foram feitos com a técnica de diluição seriada em placa de 96 poços e a detecção dos vírus recombinantes se deu pela observação de poliedros nas células infectadas por meio da microscopia de luz. O vírus AcMNPV recombinante contendo o gene da catepsina-L (vSynCAT) assim como o AcMNPV recombinante contendo o gene da queratinase (vSynQUERAT) foram mais virulentos contra larvas de 3° e 4° instar de S. frugiperda quando comparados aos vírus selvagem e o vírus AcMNPV xx recombinante contendo o gene da quitinase (vSynQUIT). Além disso, os vírus vSynCAT e vSynQUERAT induziram a melanização da cutícula dos insetos nos estágios mais tardios da infecção. Os AgMNPV recombinantes ainda não foram isolados e, desta forma, não foi possível analisar o efeito desses genes no genoma do baculovírus mais utilizado como bioinseticida no mundo. __________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Baculoviruses are DNA viruses specific to artropods. They have been widely used as bioinseticides against lepidopterous insect pests and as heterologous gene expression vectors. The ability of the Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) to infect a great variety of hosts, have facilitated molecular biology studies aiming the improvement of this virus as a biopesticide. The aim of this work is the construction of recombinant AcMNPV viruses with the introduction of a protease gene (cathepsin-L) from Sarcophaga peregrina and a chitinase gene from Metarhizium anisopliae, into the viral genome and observation of the effects of these recombinant viruses during the infection of Spodoptera frugiperda larvae, comparatively with the wild-type AcMNPV and another AcMNPV recombinant, containing a serino-protease (keratinase) gene from Aspergillus fumigatus . Another aim of this work was the construction of Anticarsia gemmatalis multiple nucleopolyhedrovirus (AgMNPV) recombinant viruses containing the cathepsin-L and keratinase genes into the viral genome. The pSynXIVVI+X3 e p2100 transfer vectors were used, respectively for each virus. Recombinant transfer vectors DNAs were co- transfected with DNA from polyhedrin minus vSyngalVI- and vAgGalA2 viruses, in Trichoplusia ni (BTI-Tn5B1-4) and Anticarsia gemmatalis (UFL-AG-286) cells, respectively. Isolation of the recombinant viruses was carried out using the serial dilution method in 96 well-plates and was achieved by the observation of polyhedra inside infected cells under a light microscope. The AcMNPV recombinant containing the cathepsin-L gene (vSynCAT), as well as the AcMNPV recombinant containing the keratinase gene (vSynQUERAT), were more virulent towards 3° and 4° instar S. frugiperda larvae, when compared to the wild-type AcMNPV and a AcMNPV xxii recombinant containing the kitinase gene (vSynQUIT). Furthermore, the vSynCAT and vSynQUERAT viruses induced melanization of insect cuticule late in infection. The AgMNPV recombinants have not been isolated yet, and therefore, it was not possible to analyse the effect of the introduction of these genes on the virulence of the world most used baculovirus biopesticide.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2006. / Submitted by wesley oliveira leite (leite.wesley@yahoo.com.br) on 2009-10-28T23:19:26Z No. of bitstreams: 1 Tese__Alexei de Campos Dianese.pdf: 869164 bytes, checksum: 409f65abbb3596cd4536da4701e52712 (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-10-06T14:10:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese__Alexei de Campos Dianese.pdf: 869164 bytes, checksum: 409f65abbb3596cd4536da4701e52712 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-10-06T14:10:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese__Alexei de Campos Dianese.pdf: 869164 bytes, checksum: 409f65abbb3596cd4536da4701e52712 (MD5) Previous issue date: 2006 / O mamoeiro (Carica papaya L.), possivelmente originário da América Central, é uma das plantas tropicais de maior importância na produção nacional e mundial de fruteiras. Este projeto visou estudar diferentes aspectos de duas doenças importantes que afetam a produção de mamão no Brasil: a podridão do pé e dos frutos (Phytophthora palmivora) e a varíola (Asperisporium caricae). Uma coleção de isolados de P. palmivora foi montada para se verificar a variabilidade em termos de virulência do patógeno em experimentos com mudas e frutos de mamoeiro. A maioria dos isolados do patógeno provenientes do mamoeiro foi altamente virulenta. O isolado proveniente de Morremia odorata foi avirulento. Além disso, diferentes genótipos de mamão foram avaliados no campo e em experimentos em casa de vegetação para resistência a P. palmivora. O cultivar “Tailândia Roxão” demonstrou ser moderadamente resistente. Conjuntamente, fertilizantes a base de fosfitos foram testados para o controle da doença, com dois produtos (fosfito 40 % P2O5 + 20 % K2O, 150 ml/100 l; e fosfito 20 % P2O5 + 20 % K2O, 200 ml/100 l) retardando o desenvolvimento da doença. Do mesmo modo dez isolados de Trichoderma sp. foram avaliados quanto ao seu potencial como agentes de controle biológico de P. palmivora em experimentos com mudas em casa de vegetação. Os isolados cen162 e cen235 foram os mais efetivos. Diferentes doses de nitrogênio e calcário dolomítico incorporadas ao solo em experimentos com vasos também foram avaliadas em relação a sua influência no desenvolvimento da podridão do pé em mudas de mamoeiro. O tratamento com 1,02 g de nitrogênio/kg de solo e 10,10 g de calcário/kg de solo apresentou a menor incidência da doença ao final de três plantios sucessivos. Diferentes genótipos de mamão também foram avaliados no campo para resistência a Asperisporium caricae. Os cultivares “Tailândia Roxão” e “Sekati” demonstraram ser moderadamente resistentes ao patógeno. Alem disso, onze fertilizantes a base de fosfitos foram avaliados, em experiemntos no campo e em casa de vegetação, quanto ao seu potencial como alternativa ao uso de fungicidas tradicionais para o controle da varíola. Todos os produtos retardaram significativamente o progresso da doença. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The papaya (Carica papaya L.) is one of the most important fruit trees worldwide. In this project two of its most common fungal diseases in Brazil were studied: root and fruit rot (Phytophthora palmivora) and black spot (Asperisporium caricae). A group of P. palmivora isolates was tested, in experiments with papaya seedlings and fruit, for there variability in terms of virulence. Most of the papaya isolalates were highly virulent. The Morremia odorata isolate was avirulent. Moreover, ten papaya genotypes were evaluated in field and greenhouse trials for resistance to P. palmivora. The cultivar “Tailândia Roxão” was moderately resistant to the disease in all trials. Also a group of phosphites was tested for P. palmivora control. Two products (phosphite 40 % P2O5 + 20 % K2O, 150 ml/100 l; and phosphite 20 % P2O5 + 20 % K2O, 200 ml/100 l) effectively slowed disease development. Similarly, ten Trichoderma sp. Isolates were evaluated in greenhouse trials as possible biocontrol agents against P. palmivora. The isolates cen162 e cen235 were the most effective. Diferentes dosages of nitrogen and dolomitic limestone were mixed to soil infested with P. palmivora and there influence on disease development was evaluated in seedling trials. The treatment with 1,02 g of nitrogen/kg of soil and 10,10 g of dolomitic limestone /kg of soil had the least disease incidence. Nine papaya genotypes were evaluated in a field trial for resistance to A. caricae. The cultivars “Tailândia Roxão” and “Sekati” were moderately resistant to the disease. Also a group of eleven phosphites was tested for A. caricae control in field and greenhouse trials. All products effectively slowed disease development.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2009. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2010-03-22T16:35:44Z No. of bitstreams: 1 2009_EricaSoaresMartins.pdf: 5953401 bytes, checksum: a4306cdea8c67f736b4ad735799a7225 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-05-12T14:22:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_EricaSoaresMartins.pdf: 5953401 bytes, checksum: a4306cdea8c67f736b4ad735799a7225 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-12T14:22:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_EricaSoaresMartins.pdf: 5953401 bytes, checksum: a4306cdea8c67f736b4ad735799a7225 (MD5) Previous issue date: 2009-07-16 / Toxinas Cry de Bacillus thuringiensis (Bt) são proteínas inseticidas utilizadas para controle de insetos. Elas agem por ingestão e são ativadas por proteases e interagem com receptores específicos localizados na superfície da célula hospedeira, resultando na lise de células do intestino médio. Este trabalho está dividido em quatro capítulos. No primeiro, foi feita uma revisão sobre Bacillus, ecologia e modo de ação, e insetos-praga do algodão. O segundo capítulo descreve a seleção e o estudo do conteúdo de genes cry de estirpes de B. thuringiensis com atividade para Anthonomus grandis. O terceiro capítulo descreve a clonagem, sequenciamento e expressão da toxina Cry1Ba da estirpe S601 de B thuringiensis, que é tóxica para A. grandis. A ligação da toxina Cry1Ba6 a proteínas localizadas na borda escovada de células do intestino médio de A. grandis foi analisada e descobriu-se que a proteína Cry1Ba6 se liga a duas proteínas (62 e 65 kDa) com atividade de fosfatase alcalina (ALP). Este trabalho é o primeiro relato da localização de receptores de toxina Cry em células do intestino médio de A. grandis. Finalmente, o capítulo quatro mostra como outras toxinas (Cry1Ia e Cry10A) expressas em Bt, com atividade já descrita para A. grandis interagem com BBMVs de A. grandis e S. frugiperda. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cry toxins from Bacillus thuringiensis (Bt) are isecticidal proteins used for insect control. They actin by ingetion and are activated by host proteases and interact with specific receptors located on the host cell surface, resulting in midgut epithelial cells lysis. This work is divided in four chapters. In the first, a review was done o Bacillus, ecology and action mode, and cotton insect-pests. The second chapter describes the selection and study of the content of cry genes of B. thuringiensis strains with activity against nthonomus. grandis. The third chapter describes cloning, sequencing and expression of a cry1Ba toxin gene from the B. thuringiensis S601 strain which is toxic to A. grandis. The binding of Cry1Ba6 toxin to proteins located on the midgut brush border membrane of A. grandis was analyzed and it was found that Cry1Ba6 binds to two proteins (62 and 65 kDa) that showed alkaline phosphatase (ALP) activity. This work is the first report that shows the localization of Cry toxin receptors on the midgut cells of A. grandis. Finally, the chapter four shows how other toxins (Cry1Ia and Cry10A) expressed in Bt, which previously had activity described to A. grandis, interact with A. grandis and S. frugiperda BBMVs.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2008. / Submitted by Allan Wanick Motta (allan_wanick@hotmail.com) on 2010-05-24T18:18:08Z No. of bitstreams: 1 2008_DeboraZoccoli_Dissertação.pdf: 5621441 bytes, checksum: 28b592def445dc2aab0a90159d4d9c22 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-05-25T17:28:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_DeboraZoccoli_Dissertação.pdf: 5621441 bytes, checksum: 28b592def445dc2aab0a90159d4d9c22 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-25T17:28:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_DeboraZoccoli_Dissertação.pdf: 5621441 bytes, checksum: 28b592def445dc2aab0a90159d4d9c22 (MD5) Previous issue date: 2008-05 / A cultura do crisântemo é desenvolvida no Brasil desde a consolidação da floricultura, há cerca de 50 anos, sendo uma das principais espécies exploradas para flor de corte no país. Diversos problemas fitossanitários afetam a espécie Dendranthema grandiflora Tzvelev., sendo a principal ameaça ao cultivo, a ferrugem branca do crisântemo, doença causada pelo fungo denominado Puccinia horiana P. Henn., patógeno com potencial para destruir completamente as cultivares suscetíveis. Existem fontes de resistência à ferrugem branca do crisântemo. Aquisição de informações epidemiológicas e classificação das fontes de resistência para a ferrugem branca, segundo as condições ambientais e de cultivo no Brasil, contribuem significativamente para o aumento da qualidade do produto final e redução dos custos no controle da doença. Para avaliação da ferrugem branca do crisântemo, e classificação das variedades, de acordo com os níveis de severidade, foi desenvolvida uma escala diagramática, considerando os percentuais de zero, 1, 5, 10, 20, 35, 50, 70 e 100% de área foliar afetada pela doença. Alternativas de controle foram testadas empregando óleos essenciais, composto bioativo líquido e extrato de planta. Para detectar os mecanismos de resistência relacionados a algumas variedades com diferentes níveis de severidade, foram utilizadas técnicas de anatomia e histoquímica foliar. As análises dos resultados das avaliações da ferrugem branca demonstraram que houve diferença estatística significativa pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade, entre as variedades cultivadas na mesma época e entre as épocas de plantio, em relação à P. horiana. A análise dos plantios de forma independente permitiu definir a melhor época para o cultivo de cada variedade, pelo nível de severidade apresentado através da Área Abaixo da Curva de Progresso da Doença (AACPD). Foi possível estabelecer um calendário para plantio comercial com as variedades classificadas em níveis de resistência mantendo a diversidade necessária para produção. A escala diagramática prática permitiu uma avaliação adequada da doença. Os fatores ambientais influenciaram acentuadamente a expressão fenotípica da resistência das variedades de crisântemo, principalmente temperatura, umidade relativa do ar e molhamento foliar. Existem fontes de resistência para ferrugem branca entre as variedades comerciais da espécie D. grandiflora. Dentre os tratamentos testados para o controle da ferrugem branca do crisântemo, foi possível constatar que o composto bioativo líquido e o produto organomineral Planta Clean, constituíram uma alternativa recomendável para o controle da ferrugem branca. O composto bioativo líquido em algumas épocas do ano, como no final de abril (outono), proporcionou o melhor controle em 100% das variedades, entre os tratamentos testados. O fator que afeta o controle pelo composto bioativo líquido em qualquer época do ano, está relacionado xvi possivelmente ao estabelecimento e crescimento da microbiota benéfica e competitiva do bioativo no filoplano do hospedeiro, responsável pela redução da população do patógeno. É possível que em crisântemo o efeito do composto bioativo, seja na indução à resistência, devido ao aumento do crescimento e vigor das plantas que receberam o tratamento. Por conter quitina em sua composição, o composto bioativo também age diretamente no patógeno, por meio das enzimas que degradam a parede das células fúngicas. Estatisticamente o produto Planta Clean não diferiu do manejo químico, sendo este, igual ao composto bioativo, alternativas sustentáveis para o controle da ferrugem branca. Esses produtos causam menor impacto ao meio ambiente, quando comparado aos produtos químicos comumente utilizados, como Dithane, Folicur, Cabrio Top e Auto 100. O extrato aquoso de crisântemo e o óleo de eucalipto não foram eficientes no controle da doença. O óleo de eucalipto (Eucalyptus globulus Labill. e Corymbia citriodora Hill & Johnson), não ofereceu controle satisfatório in vivo para ferrugem branca. Apesar de demonstrar em testes in vitro um controle efetivo sobre diversos patógenos, o óleo de C. citriodora causou fitotoxidez na cultura do crisântemo danificando irreversivelmente as folhas. Por meio de técnicas de anatomia e histoquímica vegetal detectou - se mecanismos de resistência relacionados às variedades de crisântemo, que apresentaram diferentes níveis de resistência. Nas variedades estudadas verificou - se que os recursos para defesa podem ser diferentes, e geralmente mais de um fator está envolvido na resistência. Mecanismos estruturais, espessura da cutícula, altura de estômatos e substâncias químicas como alcalóides e compostos fenólicos estão envolvidos na defesa vegetal desta espécie a P. horiana. As classes de compostos fenólicos presentes nos tecidos das variedades de crisântemo resistentes e suscetíveis, são diferentes. A reação de hipersensibilidade está ligada à defesa da variedade resistente. O presente trabalho permitiu gerar informações para o manejo adequado e sustentável do patossistema, Dendranthema grandiflora x Puccinia horiana. A utilização da escala diagramática prática permite realizar o monitoramento da doença, detectando o melhor período para intervenção química, com isto reduzindo o número de aplicações e o custo de produção. As técnicas de histoquímica podem servir de suporte para seleção de variedades resistentes à ferrugem branca. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The chrysanthemum culture has been developed in Brazil since the consolidation of flower culture for over 50 years, being one of the main explored species for cut flower in the country. Several phytosanitary problems affect the specie Dendranthema grandiflora Tzvelev, the fungus which causes the white rust being the main threaten to the cultivation, Puccinia horiana P. Henn., pathogen with great potential to completely destroy the susceptible cultivars. There are resistance sources to white rust chrysanthemum. The obtention of epidemiology data and classification of resistance sources depending upon the environmental conditions and cultivation in Brazil, significantly contribute for the increase of final product quality as well as cost reduction for the disease control. For the chrysanthemum white rust valuation and variety classification according to severity levels, was developed a diagrammatic scale by considering the percentuals 0, 1, 5, 10, 20, 35, 50, 70, and 100% of foliar area affected by the disease. Control alternatives were tested employing essential oils, bioactive liquid and plant extract. In order to detect the resistance mechanisms related to some variety with different severity levels, anatomy techniques and foliar histochemistry were used. The analysis of the results of valuations of white rust showed significant statistical differences by Tukey test at 5% of probability between the cultivated varieties at the same season and the plantation seasons relative to P. horiana. The analysis of the plantation of independent form has allowed define the best season toward cultivation of each variety, through the severity shown through the Area Under the Disease Progress Curve (AUDPC). It has been possible establish a calendar for plantation keeping the necessary diversity for the production. The practical diagrammatic scale has allowed a disease adequate valuation. The environmental factors have influenced sharply the phenotypic expression of the chrysanthemum variety resistance mostly temperature, air relative humidity and foliar moist. There exist resistance sources to white rust among the commercial varieties of D. grandiflora specie. Among the tested treatments for the chrysanthemum white rust control it was possible to notice that the bioactive liquid compound and the “Plant Clean” organomineral product, have constituted a viable alternative for the control of the white rust. The bioactive liquid compound in some season of the year as in the end of April (autumn) has allowed the best control in 100% of the varieties among the tested treatments. The factor which has proportioned the control by the bioactive liquid compound in any season of year was possibly related to the establishment and growing of benefic and competitive microbial in the host filoplan exponible for the reduction of pathogen population. It is possible that, in chrysanthemum, the effect of bioactive compound relies in the resistance induction due to the increase of growth and vigor of plants that received the treatment. Because of the existence of quitin in the composition of bioactive compound, it acts also directly in the pathogen through enzymes which degrades the fungi cell walls. Statistically, the “Plant Clean” did not differed from the chemical handling therefore being the bioactive compound a sustainable alternative to the white rust control. These products cause less impact to the environment as compared to the chemical products commonly employed such as Dithane, Folicur, Cabrio Top e Auto 100. The chrysanthemum liquid extract and the eucalypt oil were not efficient xviii to the control of disease. The eucalypt oil (Eucalyptus globulus Labill. e Corymbia citriodora Hill & Johnson), did not offer satisfactory control in vivo to the white rust. Despite of demonstrate an effective control in vitro tests over diverse pathogens, the C. citriodora oil caused fitotocicis in the crisantemo culture irreversively damages to the leaves. By anatomy and vegetal histochemistry techniques it has been detected resistance mechanisms related to the chrysanthemum varieties showed different resistance levels. In the studied varieties one observed that the defense resources can be different and generally more that one factor is involved in they resistance. Structurals mechanisms such as cuticule thichness stomata height, and chemical substances sucha as phenolics and alcaloids are involved in the vegetal defense of this specie the Puccinia horiana. The phenolics compounds classes which are present in the resistant and susceptible varieties of chrysanthemum tissues are different. The hypersensibility reaction is connected to the resistance variety defense. In close, the present work allowed to generate data for the adequate and sustainable handling of pathosystem Dendranthema grandiflora x Puccinia horiana. By making use of a practical diagrammatic scale it permit to monitoring of disease detecting the best period for the chemical intervention, thereby reducing the number of applications and production cost. Moreover, the histochemical techniques can serve of support toward the selection of resistant varieties to the white rust.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2006. / Submitted by Mariana Fonseca Xavier Nunes (nanarteira@hotmail.com) on 2010-09-26T00:28:32Z No. of bitstreams: 1 2006-Paulo Roberto Queiroz da Silva.pdf: 2518028 bytes, checksum: 4220ca85a8a6f8d0730156578a395938 (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-09-30T13:47:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006-Paulo Roberto Queiroz da Silva.pdf: 2518028 bytes, checksum: 4220ca85a8a6f8d0730156578a395938 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-09-30T13:47:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006-Paulo Roberto Queiroz da Silva.pdf: 2518028 bytes, checksum: 4220ca85a8a6f8d0730156578a395938 (MD5) Previous issue date: 2006-04 / A mosca-branca (Bemisia tabaci) tem assumido um papel de destaque na agricultura mundial por ser uma praga de importância econômica em função das infestações causadas pelo biótipo B de B. tabaci e que já se encontra distribuído em todos os continentes. O conhecimento da diferenciação genética de B. tabaci permitirá o desenvolvimento de estratégias para o controle da mosca-branca no Brasil. O presente estudo teve como objetivo caracterizar e analisar a variabilidade genética da mosca-branca B. tabaci, por meio de marcadores moleculares baseados em DNA. Os dados de caracterização molecular por RAPD, revelaram a extrema complexidade da espécie sugerindo uma possível separação das populações em função da planta hospedeira. Posteriormente, os dados de variância molecular revelaram que, a maior fonte de variabilidade era originária de diferenças entre as populações, do que em relação a variações dentro das populações do biótipo B desse inseto. Observou-se, ainda, que o biótipo BR, nativo do Brasil, apresentou baixa similaridade genética em relação ao biótipo B, que foi introduzido no país. Sendo assim, fragmentos de RAPD de ocorrência persistente nas populações estudadas dos biótipos B e BR, foram clonados e seqüenciados, seguindo-se o desenvolvimento de dois conjuntos de primers, para a detecção do biótipo B e um para a detecção do biótipo BR. Esses marcadores denominados SCAR (Seqüências Caracterizadas de Regiões Amplificadas) mostraram-se sensíveis para a detecção dos biótipos em questão, sendo capazes de discriminá-los em testes utilizando amostras de DNA provenientes de diferentes insetos. Os resultados obtidos permitem propor um modelo para a dispersão do biótipo B em campo. Possivelmente, as fêmeas de B. tabaci biótipo B adotam um sistema multifatorial (detecção de predadores, interferência por machos de outros biótipos, disponibilidade de recursos e competição entre populações de um mesmo biótipo) para a seleção das culturas hospedeiras. Independente do fenômeno ocorrido em relação à cultura hospedeira selecionada pelo biótipo B de B. tabaci, os marcadores SCAR foram capazes de detectar os dois biótipos de ocorrência no Brasil. O desenvolvimento de marcadores específicos para cada biótipo de B. tabaci é uma etapa decisiva para o estabelecimento de estratégias baseadas em DNA para a detecção e a prevenção da entrada de novos biótipos no Brasil, minimizando os riscos provocados pela entrada de insetos exóticos no agro-ecossistema brasileiro. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The whitefly Bemisia tabaci has assumed an increasing importance because it is one of the most harmful pests of plant production. An increasing number of plant diseases were related to the B biotype of B. tabaci. This biotype is the most widespread pest of economically important plant crops. The understanding of the genetic differentiation of B. tabaci allows the development of methods to control this pest in many countries, including Brazil. The objective of this study was the characterization and analysis of the genetic variability of the B. tabaci using DNA based molecular markers. The molecular characterization by RAPD revealed the extreme complexity of this species suggesting possible population segregation by host culture. The molecular variance analysis (AMOVA) revealed that the highest genetic variability were more due to variations among the populations analyzed than genetic variation in the populations of the B biotype of B. tabaci. The native B. tabaci biotype (called BR) showed low genetic similarity to the introduced B. tabaci B biotype. Random amplified polymorphic DNA (RAPD) fragments occurring persistently in all B and BR populations studied were cloned, sequenced, and used to design two sets of SCAR (Sequence Characterized Amplified Region) primers to detect the B biotype and one to detect the BR biotype. These SCAR markers were very sensitive to discriminate the two biotypes analyzed in this study. The specific biotype detection occurred in several conditions, including tests using DNA extracted from different insect sources. These molecular results could be used in a proposition of a model trying to explain the dispersion of B. tabaci in the field. Possibly, the B. tabaci B biotype females could adopt a multifactorial system to select its host crops. This system could be formed by factors like detection of predators of its offspring, interference by males from different biotypes, availability of plant resources, and competition among populations of the same biotype. Independently of which factors were interfering or influencing on B. tabaci to take a decision about host plant, the SCAR markers developed in this study were able to detect the most common B. tabaci biotypes occurring in Brazil. The development of specific molecular markers to each B. tabaci biotypes is a very important step to the establishment of DNA based strategies to detect and prevent the incoming of new biotypes of whiteflies in Brazil, reducing the risks produced by the introduction of exotic insects in the Brazilian agricultural.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2005. / Submitted by samara castro (sammy_roberta7@hotmail.com) on 2010-10-02T00:00:26Z No. of bitstreams: 1 2005-Artur Ferreira Lima neto.pdf: 1183027 bytes, checksum: 8ea325891bb555a3107e53a78c98e986 (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-10-06T13:37:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2005-Artur Ferreira Lima neto.pdf: 1183027 bytes, checksum: 8ea325891bb555a3107e53a78c98e986 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-10-06T13:37:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2005-Artur Ferreira Lima neto.pdf: 1183027 bytes, checksum: 8ea325891bb555a3107e53a78c98e986 (MD5) Previous issue date: 2005-12-12 / Cultivares e clones de batata (Solanum tuberosum L.) foram avaliados de 2002 a 2004 na Embrapa Hortaliças, Brasília-DF, para resistência à murcha bacteriana em campo naturalmente infestado com a raça 1, biovar 1 de Ralstonia solanacearum. Os testes de avaliação foram conduzidos com as cultivares atualmente mais plantadas no Brasil e com conjuntos de clones relatados como resistentes no Brasil e em outras partes do mundo. Em todos os experimentos, a doença foi avaliada pela incidência de plantas murchas em intervalos que permitiram a construção de curvas de progresso da doença para cada genótipo. A partir dessas, foram calculadas as áreas abaixo das curvas de progresso da doença (AACPD), valores usados para a realização das análises estatísticas por meio do programa SAS, que permitiram a comparação da resistência dos genótipos. Os genótipos mais resistentes nos ensaios foram os clones ‘MB 03’ e ‘MB 9846-01’, selecionados na Embrapa Hortaliças, e ‘Cruza 148’, padrão internacional de resistência originário do México. Nesses clones a incidência da doença ficou abaixo de 10%, 100 dias após o plantio. Dentre as cultivares, destacou-se ‘Achat’, com cerca de 30% de plantas murchas, valor significativamente superior ao dos clones acima mencionados, porém inferior ao das cultivares Monalisa, Atlantic, Bintje e Ágata, amplamente cultivadas no Brasil, e que apresentaram acima de 80% das plantas murchas. Observou-se que menores valores de AACPD correspondiam a um atraso no início do aparecimento dos sintomas da doença. Somente os clones ‘MB 03’ e ‘Cruza 148’ e a cultivar Achat apresentaram produção satisfatória devido à alta infestação do solo com o patógeno. Em outro experimento, 28 genótipos tidos como resistentes à murcha bacteriana e mantidos na Lista de Patógenos Testados (Pathogen Tested List) do Centro Internacional de la Papa (CIP), foram introduzidos in vitro, multiplicados em vasos em casa de vegetação e então avaliados em campo infestado com a biovar 1 de R. solanacearum. Os genótipos ‘Mabondo’ e ‘BW 8’ se destacaram nas condições avaliadas e poderão, juntamente com os clones MB-03, Cruza 148 e MB 9846-01, ser incluídos em programas de melhoramento com a finalidade de transferir genes de resistência para cultivares de batata. Os clones MB 03, 384515-1, MB 9721-01 e Cruza 148, anteriormente selecionados como resistentes na Embrapa Hortaliças, foram cruzados com as cultivares Monalisa, Baraka e Asterix para gerar genótipos que combinassem resistência e boas características agronômicas. Dos 200 clones selecionados para tipo de tubérculos em campo comercial em Cristalina - GO, somente dois apresentaram bom desempenho quando cultivados em campo infestado na Embrapa Hortaliças, indicando que essa metodologia não é adequada para seleção de genótipos resistentes. Este resultado levou à recomendação da seleção para resistência como fase anterior à seleção para tipo de tubérculo de modo que não se eliminem genótipos com níveis satisfatórios de resistência. Adicionalmente foi avaliada a resistência à murcha bacteriana em 128 acessos da coleção mundial de Solanum chacoense, procedentes do Inter-Regional Potato Introduction, Sturgeon Bay, Madison, EUA. De 1.792 clones avaliados, seis foram selecionados como apresentando resistência à biovar 1 de R. solanacearum. Posteriormente, esses clones foram testados para outros isolados das biovares 1 e 2, procedentes de diferentes regiões do Brasil. Reação diferencial entre isolados e clones foram verificadas, mostrando que a resistência em S. chacoense é específica para diferentes estirpes do patógeno. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Selected potato (Solanum tuberosum L.) clones and cultivars were screened from 2002 to 2004 in Brasilia, DF, for resistance to bacterial wilt in a field naturally infested with race 1, biovar 1 or Ralstonia solanacearum. The objective of the experiment was to screen the most important cultivars grown in Brazil in comparison with clones previously selected as resistant at Embrapa Vegetables Experiment Station or elsewhere. In the field experiments, disease incidence was assessed in intervals which allowed the construction of disease progress curves for each genopype. The genotypes were statistically compared using the means of the values of the areas under the disease progress curves (AUDPC) calculated using a SAS program. The most resistant genotypes were clones MB-03 and MB 9846-01, previously selected at Embrapa Vegetables, and Clone 148, an international resistant reference from Mexico. All of them showed less than 10% wilt incidence 100 days after planting. Confirming previous results, ‘Achat’ was the most resistant cultivar, with 30% of disease incidence, a value statistically higher than those of the resistant clones. However, bacterial wilt incidence of ‘Achat’ at the end of the plant cycle was significantly lower than those of cultivars Monalisa, Atlantic, Bintje and Agata, with values always above 80%. It was observed that genotypes with lower values of the AUDPC presented symptoms later in the season as compared to susceptible genotypes. Because inoculum density was high in the experimental condition, yields were obtained only for ‘Achat’ and for the resistant clones. In another experiment, 28 genotypes indicated as resistant to bacterial wilt in CIP’s Pathogen Tested List were introduced as in vitro plantlets, multiplied in pots in a screenhouse and then evaluated for resistance upon planting in the same naturally infested field in Brasilia (race 1, biovar 1). Bacterial wilt incidence varied substantially among the genotypes, confirming the idea that screening for bacterial wilt resistance should be done locally. In this trial, only ‘Mabondo’ and ‘BW 8’ were comparable in terms of resistance to the clones selected at Embrapa Vegetables and can be also considered as important sources of resistance in breeding programs. In another experiment, clones MB 03, 384515-1, MB 9721- 01 and Cruza 148, previously selected as resistant at Embrapa Vegetables, were crossed with cultivars Monalisa, Baraka and Asterix in order to combine resistance with acceptable tuber characteristics. From 200 clones selected for tuber characteristics in a disease-free commercial field at Cristalina, GO, only two survived when planted in the infested field in Brasilia. This result indicated that screening to bacterial wilt should be done previously to for commercial characteristics in order to prevent loss of highly resistant clones that do not have good tuber appearance. Additionally, 128 accessions of the world collection of Solanum chacoense, originated from the the Inter-Regional Potato Introduction, Sturgeon Bay, Madison, WI, USA, were evaluated for bacterial wilt resistance (race 1, biovar 1) under screenhouse at Embrapa Vegetables. From 1,792 clones screened, only six were selected. These were later challenged with isolates of biovars 1 and 2 from distinct regions of Brazil. An interaction between isolates and clones indicated that resistance in S. chacoense is specific to different strains of R. solanacearum.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2010. / Submitted by Luiza Moreira Camargo (luizaamc@gmail.com) on 2011-07-04T18:12:40Z No. of bitstreams: 1 2010_RobertadaCruzPereira ok.pdf: 1709311 bytes, checksum: c1bb464ecec358ca605fe0db691a07bb (MD5) / Approved for entry into archive by Elna Araújo(elna@bce.unb.br) on 2011-07-08T19:41:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_RobertadaCruzPereira ok.pdf: 1709311 bytes, checksum: c1bb464ecec358ca605fe0db691a07bb (MD5) / Made available in DSpace on 2011-07-08T19:41:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_RobertadaCruzPereira ok.pdf: 1709311 bytes, checksum: c1bb464ecec358ca605fe0db691a07bb (MD5) / A mancha bacteriana do tomateiro é causada por, pelo menos, quatro espécies de Xanthomonas (Xanthomonas euvesicatoria, X. vesicatoria, X. perforans e X. gardneri), sendo uma das doenças mais importantes tanto para o tomate de mesa, quanto para o de indústria no Brasil. Oitenta e um isolados oriundos de campos comerciais de tomate para mesa, coletados em 23 localidades nas Regiões Sul, Sudeste, Centro-Oeste e Nordeste do Brasil, entre os anos de 2005 a 2009, foram identificados para determinar a ocorrência dessas espécies. Esses isolados foram caracterizados por rep-PCR (BOX e REP), PCR com iniciadores específicos e testes de patogenicidade em genótipos suscetíveis de tomateiro e pimentão. Alta frequência de X. perforans (49,4%) e X. gardneri (40,7%) foi observada. Somente dois isolados corresponderam a X. euvesicatoria e seis a X. vesicatoria. Apenas na Região Sudeste do país foi detectada a presença das quatro espécies. Todos os isolados causaram sintomas em tomate, e somente isolados de X. euvesicatoria e 30 isolados de X. gardneri causaram sintomas em pimentão. Para determinação das raças, avaliou-se a presença/ausência dos genes avrRxv (presentes na raça T1) e avrXv3 e reação no genótipo de tomateiro CNPH 1500, portador do gene Xv3. Todos os isolados de X. perforans induziram reação de hipersensibilidade neste genótipo, indicando que pertencem à raça T3, o que foi, na maioria dos casos, confirmado por avrXv3-PCR. Isolados de X. vesicatoria e X. gardneri foram classificados como raça T2, pois nenhum produto foi detectado por PCR (genes avrRxv e avrXv3). Dentre os 81 isolados, portanto, foram identificadas as raças T1, T2 e T3, não sendo encontradas as raças T4 e T5. Avaliou-se também a sensibilidade in vitro de todos os isolados ao cobre e estreptomicina. Utilizou-se sulfato de cobre nas concentrações 50, 100 e 200 μg/mL e sulfato de estreptomicina nas concentrações 25, 50 e 100 μg/mL, considerando-se resistentes os isolados que apresentaram crescimento confluente em três repetições. Nenhum isolado foi resistente ao cobre na concentração de 200 μg/mL. Entretanto, 97,53% dos isolados foram resistentes a 100 μg/mL e 98,77% foram resistentes à concentração de 50 μg/mL. A frequência de isolados resistentes à estreptomicina foi 8,64% (100 μg/mL), 76,54% (50 μg/mL) e 83,95% (25 μg/mL). Isolados representantes das quatro espécies apresentaram resistência a ambos, cobre e estreptomicina. Este é o primeiro levantamento e caracterização de espécies de Xanthomonas em tomate de mesa no Brasil. ___________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Tomato bacterial spot is caused by at least four Xanthomonas species (Xanthomonas euvesicatoria, X. vesicatoria, X. perforans and X. gardneri), and is one of the most important diseases of both processing and fresh market tomato crops in Brazil. Eighty one isolates, collected from 23 commercial tomato fields, located in southern, southeastern, central-west and northeastern regions of the country, from 2005 to 2009, were identified to determine the occurrence of these species. These isolates were characterized through rep-PCR-based fingerprint analysis (BOX and REP-PCR), PCR with species-specific primers and pathogenicity tests on tomato and pepper susceptible varieties. Highest frequencies were observed for X. perforans (49.4%) and X. gardneri (40.7%). Only two isolates were X. euvesicatoria and six were X. vesicatoria. The occurrence of all four species was detected only in the southeast region of Brazil. All isolates were pathogenic on tomato. On pepper, only those of X. euvesicatoria and 30 isolates of X. gardneri caused bacterial spot symptoms. Isolates were also classified in races by avrRxv (present in race T1) and avrXv3-PCR amplification and by hypersensitive reaction on tomato genotype carrying the Xv3 gene. All X. perforans isolates induced hypersensitive response on this genotype, indicating that they belong to race T3, and in most cases confirmed by avrXv3-PCR. Xanthomonas vesicatoria and X. gardneri isolates were classified as race T2 since no PCR products were detected for avrRxv or avrXv3. Among the 81 isolates, races T1, T2 and T3 were identified, while races T4 and T5 of X. perforans were not detected. Sensitivity of all isolates to copper and streptomycin was evaluated by in vitro assays, with 50, 100 and 200 μg/mL of copper sulfate and 25, 50 and 100 μg/mL of streptomycin sulfate, with three replicates. Resistance was detected when bacterial growth was observed in all three replicates. None of the isolates was resistant to copper at 200 μg/mL. However, 97.53% were resistant to copper at 100 μg/mL and 98.77% were resistant to copper at 50 μg/mL. The frequencies of isolates resistant to streptomycin were 8.64% (100 μg/mL), 76.54% (50 μg/mL) and 83.95% (25 μg/mL). Isolates representing all four Xanthomonas species showed resistance, both to copper and streptomycin. This is the first survey and characterization of xanthomonads on fresh market tomatoes in Brazil.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2011. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-03-30T11:51:48Z No. of bitstreams: 1 2011_WanderleiDiasGuerra.pdf: 3420305 bytes, checksum: 6adf8a84777a31a412a0c0d09fa7e1b4 (MD5) / Approved for entry into archive by Leila Fernandes (leilabiblio@yahoo.com.br) on 2012-04-02T11:37:54Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_WanderleiDiasGuerra.pdf: 3420305 bytes, checksum: 6adf8a84777a31a412a0c0d09fa7e1b4 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-04-02T11:37:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_WanderleiDiasGuerra.pdf: 3420305 bytes, checksum: 6adf8a84777a31a412a0c0d09fa7e1b4 (MD5) / O objetivo deste trabalho foi contribuir com o conhecimento da composição de Orthoptera, Acridoidea, na Chapada dos Parecis, estado de Mato Grosso. Esta região foi uma das que mais sofreram nas décadas de 1980 e 1990 com uma importante praga de gafanhotos, a espécie Rhammatocerus schistocercoides (Rehn, 1906), o que levou o Ministério da Agricultura a gastar mais de US$5 milhões para seu controle. Hoje, apesar de esta espécie estar controlada, outras espécies tem despontado como pragas potenciais na região e no estado, possivelmente em função da expansão dos cultivos agrícolas. Este estudo foi conduzido em áreas nativas de cerrado e também nas áreas antropizadas pelas lavouras, de 2008 a 2010. Foram coletados 3.031 gafanhotos de 64 espécies distribuídas entre as seguintes famílias e subfamílias: Acrididae (49): Gomphocerinae (21), Ommatolampinae (10), Melanoplinae (6), Acridinae (4), Leptysminae (3), Copiocerinae (3), Proctolabinae (1) e Cyrtacanthacridinae (1); Romaleidae (13): Romaleinae (13) e Ommexechidae (2): Ommexechinae (2). Para auxiliar na identificação, além da consulta a especialistas foi feita a tradução e adaptação da chave de Famílias e Subfamílias de Acridoidea Neotropicais. As diferenças foram significativas entre o número de espécies encontradas nos cerrados (61) e nas lavouras (16). No entanto a maior abundância foi registrada nas lavouras, com 60, 3% dos indivíduos coletados, contra 39,7% nos cerrados. A espécie mais abundante, Baeacris punctulatus (Thunberg, 1824), encontra-se amplamente na Chapada dos Parecis e está intimamente relacionada aos cultivos agrícolas. O conhecimento da composição de Acridoidea da Chapada dos Parecis, com predomínio de vegetação de cerrado, revelou uma grande semelhança com a composição de espécies coletadas em outras regiões do estado, sobretudo na Chapada dos Guimarães, também com predomínio de cerrados. Isto permite inferir que esta deve ser a realidade no restante do estado onde esta fitofisionomia seja predominante. É possível que estes sejam os primeiros registro de ocorrência em Mato Grosso para Rhammatocerus pseudocyanipes, Sinipta sp., Eutryxalis filata minor, Parorphula gramínea, Cylindrotettix dorsalis, Zygoclistron trachystictu, Chromacris nuptialis, Staleochlora viridicata viridicata, Xyleus gracilis e que entre outros cinco espécimes (Hyalopterygini sp., Scyllinini sp., Abracrini sp., Dichroplini sp. e Gomphocerinae sp.) pode estar alguma espécie ainda sem registro na literatura. Em função da predominância da espécie B. punctulatus, sobre a qual há registros na literatura como praga, foi feito um estudo mais detalhado contemplando a história de vida e a dinâmica populacional da mesma ao longo do ano. Os resultados sugerem que no estado de Mato Grosso há entre 3,9 a 5,1 gerações por ano. Foram também obtidas informações sobre as características morfológicas dos diferentes ínstares, fornecendo um método rápido e fácil de identificar cada estágio em condições de campo. Os diferentes ínstares podem ser separados pelo número de segmentos da antena, tamanho do corpo e forma e tamanho das tecas alares. Variações anuais e regionais de temperatura e umidade podem influenciar a história de vida e a dinâmica populacional de B. punctulatus. O conhecimento da dinâmica populacional e dos fatores ecológicos que regulam os efetivos populacionais, pode ser importante ferramenta para a tomada de decisão, caso ações de controle fitossanitário sejam requeridas. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The aim of this study was to contribute to the knowledge of the Orthoptera’s diversity (Acridoidea) in the Parecis Plateau region, Mato Grosso state. In the 1980’s and 1990’s this region was affected with a locust outbreak, the species Rhammatocerus schistocercoides (Rehn, 1906), which led Brazilian Agriculture Department to consume more than US$5 million for its control. Even though this specie is currently under control, other species have emerged as potential pests in the region and in the Mato Grosso state in general, possibly due to the expansion of crop cultivated areas. This study was conducted by survey of native areas (savanna) and also in the disturbed areas by cultivation, from 2008 to 2010. Were collected 3031 grasshoppers of 64 different species distributed among the following families and subfamilies: Acrididae (49): Gomphocerinae (21), Ommatolampinae (10), Melanoplinae (6), Acridinae (4), Leptysminae (3), Copiocerinae (3), Proctolabinae (1) and Cyrtacanthacridinae (1); Romaleidae (13): Romaleinae (13) and Ommexechidae (2): Ommexechinae (2). The differences were significant between the number of species found in the savannas (61) and in the crop areas (16). However the highest abundance was found in the crops with 60.7% of the total sample and 39.7% in the native areas. The most abundant specie, Baeacris punctulatus (Thunberg, 1824), is widely distributed throughout the Parecis Plateau and is closely related to agricultural crops. Knowledge of the Acridoidea diversity in the Parecis Plateau region, under savanna vegetation predominance, showed a strong resemblance to the composition of species collected in other regions, especially in the Guimarães Plateau, also under savanna vegetation. This allows to infer that it might be also happening in the rest of the state where this vegetation type is predominant. It’s possible that these are the first record of occurrence in Mato Grosso to Rhammatocerus pseudocyanipes, Sinipta sp., Eutryxalis filata minor, Parorphula gramínea, Cylindrotettix dorsalis, Zygoclistron trachystictu, Chromacris nuptialis, Staleochlora viridicata viridicata, Xyleus gracilis and from five other species (Hyalopterygini sp. Scyllinini sp. Abracrini sp. Dichroplini sp. and Gomphocerinae sp.) may be some species not yet recorded in the literature. Due the predominance of B. punctulatus, which there are records as a pest, including in Mato Grosso, was make a detailed study covering the life history and population dynamics of this specie throughout the year. Overall, this study suggests that in the State of Mato Grosso there are 3.9 to 5.1 generations per year. Were obtained information on the morphological characteristics of different instars, providing a quick and easy method to identify each stage in the field conditions. The various instars could be differentiated by the number of antennal segments, body size, and shape and size of wing pads. Annual and regional variation in temperature and moisture may influence the life history and population dynamics of B. punctulatus. This identification, coupled with the knowledge of population dynamics and ecological factors that define the effective population, may be an important tool for decision making if the phytosanitary actions are required.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2014-04-14T12:02:40Z No. of bitstreams: 1 2013_VivianedeOliveiraCruz.pdf: 1993739 bytes, checksum: 7fd2718de94ed1e237cb855dc9f606d6 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-04-25T13:01:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_VivianedeOliveiraCruz.pdf: 1993739 bytes, checksum: 7fd2718de94ed1e237cb855dc9f606d6 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-04-25T13:01:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_VivianedeOliveiraCruz.pdf: 1993739 bytes, checksum: 7fd2718de94ed1e237cb855dc9f606d6 (MD5) / Musa acuminata (AA), espécie selvagem, cujo cruzamento com Musa balbisiana (BB) deu origem as bananas comestíveis atuais, é uma potencial doadora de genes de resistência a estresses bióticos, como a Sigatoka amarela causada pelo fungo Mycosphaerella musicola. O objetivo deste estudo foi identificar locos microssatélites (SSR) identificados em genes envolvidos com resposta de defesa a doenças em bananeira, caracterizar os SSRs quanto ao polimorfismo e analisar os genes quanto a expressão diferencial durante a interação com o patógeno M. musicola. Foram construídas quatro bibliotecas de cDNA a partir do RNA total de 36 amostras de folha de M. acuminata Calcutta 4 e M. acuminata subgrupo Cavendish Grande Naine inoculadas e não inoculadas com M. musicola. As bibliotecas foram submetidas a sequenciamento 454 e aproximadamente 36.000 unigenes para cada genótipo foram identificados e anotados por BLASTX e KOG. A partir desses dados foi realizada uma busca de SSRs gênicos e foram desenhados pares de primers flanqueando os SSR utilizando o software Primer3 plus. Um total de 4.068 locos SSR foram identificados em Calcutta 4 e 4.095 em Cavendish Grande Naine. Destes, foram selecionados 95 locos SSR derivados de genes- candidatos envolvidos em resposta de defesa que foram caracterizados em 22 genótipos de M. acuminata contrastantes para a resistência as Sigatokas Negra e Amarela. Um total de 14 locos SSRs gênicos apresentaram polimorfismo (3 a 8 alelos/ loco) e PIC médio de 0,63 e foram utilizados para a análise fenética dos 22 genótipos de M. acuminata pelo método UPGMA. Os 14 locos SSR não foram suficientes para agrupar todos os genótipos quanto a resistência, no entanto houveram agrupamentos de genótipos resistentes com alta similaridade. A partir do subconjunto de 95 genes, foram desenhados 26 pares de primers específicos para a análise de expressão gênica diferencial por RT-qPCR. Os dados de expressão foram analisados no Miner e Rest para calcular a eficiência dos primers e expressão gênica diferencial. Vinte e dois pares de primers apresentaram especificidade e foram analisados por RT-qPCR em quatro pools de cDNA sintetizados com as amostras do bioensaio. Dos 22 genes analisados, sete foram selecionados para análise de cinetica de expressão diferencial em Calcutta 4 que é um genótipo resistente. Seis genes apresentaram regulação negativa. Os marcadores SSR gênicos identificados serão importantes ferramentas para uso em programas de melhoramento genético de bananeira e seleção assistida por marcadores. A análise da expressão de genes- candidatos envolvidos com defesa no patossistema Musa-Mycosphaerella é de grande importância para estudos futuros de transformação genética de bananeira visando a resistência a doenças em cultivares. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Musa acuminata (AA), a wild species, which, through crossing with Musa balbisiana (BB) is responsible for today´s edible bananas, is also a potential donor of resistance genes for biotic stresses such as Yellow Sigatoka caused by Mycosphaerella musicola. The objective of this study was to identify microsatellite loci (SSR) from unigenes related to defense and response to biotic stress, to characterize the SSRs for polymorphism and analyze the genes for differential expression during interaction with the pathogen M. musicola. Four cDNA libraries were constructed from total RNA from leaf samples of 36 M. acuminata Calcutta 4 and M. acuminata Cavendish Grande Naine plants, both non-inoculated and inoculated with M. musicola. The cDNA libraries were subjected to 454 sequencing and approximately 36.000 unigenes for each genotype were identified and annotated by BLASTX and KOG. From these data, a search of genic SSRs was performed and primer pairs were designed flanking the SSRs using the software Primer3 plus. A total of 4.068 SSR loci were identified in Calcutta 4 and 4.095 in Cavendish Grande Naine. Of these, 95 SSR loci were selected from candidate genes involved in defense responses and characterized in 22 M. acuminata genotypes contrasting in resistance to Black and Yellow Sigatokas. A total of 14 loci SSRs presented polymorphism (3-8 alleles / locus) and an average PIC value of 0.63. Employed in UPGMA phenetic analysis of the 22 M. acuminata genotypes, the 14 SSR loci were not sufficient to group all genotypes based upon disease resistance, although clusters with high similarity of resistant genotypes were observed. From the subset of 95 genes, 26 specific primer pairs were designed for analysis of differential gene expression by RT-qPCR. The expression data were analyzed with Rest and Miner to calculate primer efficiency and differential gene expression.Twenty-two primer pairs showed specificity and were analyzed by RT-qPCR in four pools of cDNA synthesized with the samples of the bioassay. Of the 22 genes analyzed, seven were selected for analysis of kinetics of differential expression in Calcutta 4 which is a resistant genotype. Six genes showed down regulation. The SSR gene markers identified will be important tools for use in banana breeding programs and marker assisted selection. Analysis of expression of resistance gene candidates in the pathosystem M. acuminata- M. musicola is of great importance for future studies on using genetic transformation for disease resistance development in cultivars.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Fitopatologia, 2010. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2011-04-26T15:32:22Z No. of bitstreams: 1 2010_AdrianaMagaliFreitasARezende.pdf: 928655 bytes, checksum: 0debcd6b5dcfb890f32d2dadf1072dca (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2011-04-29T00:16:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_AdrianaMagaliFreitasARezende.pdf: 928655 bytes, checksum: 0debcd6b5dcfb890f32d2dadf1072dca (MD5) / Made available in DSpace on 2011-04-29T00:16:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_AdrianaMagaliFreitasARezende.pdf: 928655 bytes, checksum: 0debcd6b5dcfb890f32d2dadf1072dca (MD5) / O tomateiro comum (Solanum lycopersicum L.) é uma olerícola de grande importância econômica e social, se destacando no Brasil, pelas extensas áreas agrícolas cultivadas. O Brasil é o sexto maior produtor de tomate no mundo. No entanto, a murcha bacteriana, causada pela bactéria Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi está entre as doenças de maior importância e de difícil controle, não existindo ainda medidas adequadas que possam ser recomendadas. Com objetivo de determinar um controle biológico eficaz, comparado às outras bactérias antagonistas e com comportamentos semelhantes contra muitos fitopatógenos, foi escolhido o estudo com bactérias extremófilas facultativas para verificar seu efeito na promoção do crescimento das plantas de tomate e ao mesmo tempo estudar a supressão da murcha bacteriana. Foram coletadas diferentes amostras de solos, no município de Brazlândia, em Brasília, DF, Brasil. Obteve-se um total de trinta e oito isolados os quais foram submetidos aos testes de temperaturas (45, 55, 65 e 75 ºC), pH (3, 4, 5, 9, 10 e 11) e salinidade (5, 10 e 15 % de NaCl). Onze isolados foram selecionados para caracterização bioquímica e identificação baseada nas sequências 16S DNAr. Verificou-se que em todas as amostras de solos determinaram-se quatro grupos de bactérias, sendo que em cada um observou a presença de isolados crescendo nas condições mais extremas. Dos onze isolados selecionados, todas as bactérias foram Gram negativa, podendo separá-los em três grupos distintos, com base nas reações positivas para as características bioquímicas: o primeiro grupo formado, com base no teste oxidação/fermentação da glicose, obteve-se sete isolados pertencendo à família Enterobacteriaceae; o segundo grupo com base no crescimento em meio King-B, obteve-se dois isolados de Pseudomonas sp.; e o terceiro grupo não relacionados taxonomicamente, com dois isolados, Giesbergeria sp. e Chryseobacterium sp. Estes onze isolados selecionados e identificados foram avaliados, em casa de vegetação, no estudo da promoção do crescimento das plantas de tomate. Foram montados três experimentos: (1) com aplicação individual, (2) com combinação de dois e (3) com combinação de três e com todos isolados simultaneamente, com dois sistemas orgânicos, composto (CO) e bokashi (BK). A aplicação individual dos isolados mostrou ser mais eficiente na promoção do crescimento das plantas, o isolado UnB 1327, no sistema CO apresentou maiores incrementos para altura, peso matéria fresca e seca de 233,9%, 55,9% e 24,2%, respectivamente maiores que a testemunha (100%). No estudo da supressão de R. solanacearum, no experimento 1, os isolados UnB 1321 no sistema BK e UnB 1326 e UnB 1322 no sistema CO, mostraram ser eficientes na supressão da bacteriose, destacando-se com 100% de controle. O experimento 2, mostrou ser mais eficiente na supressão da murcha bacteriana, independendo do tipo de sistemas avaliados. No experimento 3, no sistema BK, a testemunha diferenciou significativamente de todos os tratamentos, inclusive da combinação UnB 1329 + UnB 1322 + UnB 1330 apresentando 87% e 27%, respectivamente, de plantas mortas. No sistema CO, houve alta percentagem da doença em todos os tratamentos, no entanto nenhum tratamento diferenciou da testemuha que apresentou 60% de plantas mortas. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The common tomato (Solanum lycopersicum L.) is a crop of great economic importance and social, standing out in Brazil due to largest agricultural areas cultivated. Brazil is the sixth largest tomato producer in the world. However, bacterial wilt caused by the bacterium Ralstonia solanacearum (Smith) Yabuuchi is one of the most important and difficult to control disease, with no further appropriate measures as may be recommended. This work aimed to establish an effective biological control, compared to other antagonists bacteria and with similar behavior for many plant pathogens, was chosen the study with facultative extremophiles bacteria for its effect on promoting growth of tomato plants and the suppression of bacterial wilt. To this end, several soil samples were collected in the municipality of Brazlândia, near Brasília, Federal District, Brazil. A total of 38 isolates were submitted to temperature tests (45, 55, 65 and 75 ºC), pH tests (3, 4, 5, 9, 10 and 11) and salinity tests (5, 10 and 15 % of NaCl). Eleven isolates were selected for biochemical characterization and identification based on the 16S DNAr sequences. It was confirmed that in all the soil samples four groups of bacteria were categorized, and in each one the presence of isolates growing in highly extreme conditions was observed. Of the 11 selected isolates, all the bacteria were Gram-negative, and these could be separated into three distinct groups, based on their positive reactions to biochemical characteristics. From the first group, based on the glucose oxidation/fermentation test, we obtained seven isolates belonging to the family Enterobacteriaceae; from the second group, based on growth in King-B medium, we obtained two isolates of Pseudomonas sp.; the third, taxonomically unrelated group, showed two isolates, Giesbergeria sp. and Chryseobacterium sp. These eleven isolates identified were selected and evaluated in a greenhouse in the study of growth promotion of tomato plants. Three experiments were carried out: (1) with individual application, (2) with a combination of two and (3) with a combination of three and all isolates simultaneously, with both systems, compound (OC) and bokashi (BK). Applying individual isolate was more efficient in promoting plant growth, the isolate UnB 1327, on conventional treatment showed more increase for height, fresh and dry weight of 233,9%, 55,9% and 24,2% respectively higher than the control 2 (100%). In the study of suppression of R. solanacearum, in experiment 1, isolates UnB 1321 in the BK system and UnB 1326 and UnB 1322 in the CO system were seen to be efficient in the suppression of bacteriosis, at 100% difference from the control. Experiment 2 was efficient in suppressing bacterial wilt, independently of the type of system being evaluated. In experiment 3, in the BK system, the control was significantly different from all the treatments, including from the UnB 1329 + UnB 1322 + UnB 1330 combination, presenting 87% and 27% dead plants, respectively. In the CO system, there was a high percentage of the disease in all treatments, but no treatment differed from the control, which presented 60% dead plants.