Inserido no paradigma da transdisciplinaridade, o presente trabalho foi desenvolvido em etapas, com os seguintes objetivos: a) Construir um dispositivo com base de metal não magnético para ímãs permanentes, visando à geração de um Campo Magnético Estático (CME) ou de um Campo Magnético Compensado (CMC); b) Expor culturas de células mesenquimais a um CME e a um CMC, ou a nenhum campo (controle); c) Analisar a influência destes campos na viabilidade e proliferação celular e nos casos em que houve alteração em pelo menos um destes parâmetros, utilizar a análise proteômica como ferramenta para a compreensão dos mecanismos envolvidos. O dispositivo foi construído utilizando aço inoxidável, capaz de gerar dois tipos de Campos Magnéticos: Compensado (CMC) com intensidade de aproximadamente 0 mT e Estático (CME) com intensidade média de 165 mT. Estes campos foram aplicados a culturas de células mesenquimais de medula óssea de camundongos AJ (MSC/AJ), nos períodos de 0, 24, 48, 72 e 96 h (CMC) e 24 h (CME). Os efeitos sobre a proliferação e a viabilidade foram avaliados por método de contagem manual de células com marcação por azul de tripan. A análise proteômica foi realizada para os experimentos com CMC, com o objetivo de descrever as proteínas envolvidas nas alterações encontradas. A exposição ao CMC tendeu a reduzir a proliferação das células de medula óssea MSC/AJ em relação ao controle em 96 h, porém sem diferença significativa, o que poderia estar relacionado a proteínas que inibem a transcrição, como a Forkhead box protein P2 Foxp2. Este mesmo campo aumentou a viabilidade celular em relação ao baseline para todos os tempos experimentais, o que poderia estar relacionado a proteínas relacionadas à ligação ao Ca+2. Esses mecanismos, entretanto, precisam ser estudados mais profundamente para que possam ser comprovados ou não. Já a exposição ao CME levou a uma tendência à diminuição da proliferação e viabilidade celular em relação ao grupo controle, embora sem diferenças significativas, provavelmente por conta do tamanho amostral e tempo de avaliação (24 h). / Inserted in the transdisciplinarity paradigm, the present work was developed by steps with the following aims: a) To build a device of non-magnetic metal to hold permanent magnets for the generation of a Static Magnetic Field (SMF) or a Compensated Magnetic Field (CMF); b) To expose mesenchimal cells to the SMF and to CMF or to none of the fields (control); c) To analyze the influence of these fields on cell viability and cell proliferation and in the case where it occurred alteration in at least one of these parameters, to use proteomics as a tool for the comprehension of the involved mechanisms. The device was built in stainless steel, able to generate two kinds of Magnetic Fields: Compesated (CMF) with an intensity of nearly zero mT and Static (SMF) with a mean intensity of 165 mT. These fields were applied to bone marrow mesenchimal cell cultures from AJ mice (MSC/AJ), for 0, 24, 48, 72 and 96 h (CMF) and 24 h (SMF) periods. The effects on the proliferation and viability were assessed by tripan blue dying and manual counting of the cells. Proteomics was done for the experiments with CMF, aiming to describe the involved proteins on found alterations. The exposition to CMF tends to reduce the bone marrow cell proliferation of MSC/AJ in relation to control in 96 h, but with no significant difference, which may be related to proteins that inhibit the transcription, like Forkhead box protein P2 Foxp2. This very field raised the cell viability in relation to the baseline for all the experimental times that could be related to proteins connected to Ca2+ binding. However, these mechanisms need more experiments, so they can be confirmed or not. The exposition to the SMF tends to decrease both cell proliferation and viability in relation to the control group, although with no significant difference, probably because of the sample number and the exposition time (24h).

A tolerância materno-fetal envolve, além do sistema imune, muitas peculiaridades quanto ao tipo de placenta e placentação. A placenta em bovinos é considerada não invasiva, e como conseqüência de uma implantação superficial, sem invasão endometrial, se estabelece uma barreira placentária complexa que se interpõe entre a circulação materna e fetal. Aliado a isso, a placenta um órgão que se encontra em constante diferenciação e proliferação celular além da alta atividade metabólica, fontes constantes de estresse e desafio para o sistema imune. Atuando nesse contexto, destacamos as proteínas de choque térmico (heat shock proteins HSP), proteínas que são expressadas em condições fisiológicas mas, em situações de estresse, sua expressão aumenta. Na placenta bovina já se constatou a expressão das HSP 60 e 70; contudo notou-se uma maior peculiaridade na expressão da HSP 60, que é maior no primeiro trimestre da gestação. Observando-se o perfil da presença e expressão dessa proteína na placenta bovina e, tendo em vista a característica desse órgão em apresentar populações leucocitárias funcionalmente distintas das do sangue periférico, levantou-se a hipótese da influência desta proteína sobre as células placentárias, particularmente sobre os leucócitos no processo de tolerância materno fetal. Desta forma, esse trabalho analisou a participação da HSP 60 em mecanismos imunes junto à alguns leucócitos placentários por meio de ensaio de proliferação pela técnica de CFSE, ensaio de fagocitose e ensaios bioquímicos como peroxidação lipídica; ciclo celular e potencial de membrana mitocondrial de células placentárias em cultivo. Nossos resultados mostraram que a HSP 60 não influencia a proliferação de linfócitos e outras células placentárias nas diversas condições testadas. Em contrapartida a HSP 60 aumenta a fagocitose e apoptose no terceiro terço gestacional, bem como a produção de radicais oxidados poliinsaturados e o potencial de membrana mitocondrial. Tendo em vista esses resultados, podemos observar que a HSP 60 nas células da placenta bovina possivelmente esteja modulando a cinética da ativação de mecanismos de sinalização de morte celular programada entre as células da placenta e o sistema imunológico. Esta hipótese assegura que, no concepto a termo, as variações hormonais e o sistema imune possam estar regulando o processo para o nascimento do feto. / The maternal-fetal tolerance involves, besides the immune system, many peculiarities regarding the type of placenta and placentation. The bovine placenta is considered not invasive and, as consequence of a superficial implantation without endometrial invasion, it establishes itself as complex barrier that interposes between the maternal and fetal circulation. In addition to that, placenta is an organ that undergoes continuous differentiation and cellular proliferation besides the high metabolic activity that represents a constant source of stress and challenge for the immune system. As an important component in this context, we highlight the heat shock proteins - HSP, that are usually expressed in physiological conditions but, in situations of stress, their expression increases. In the bovine placenta the expression of HSP 60 and 70 has already been verified; however HSP 60 showed a peculiar expression behavior, with higher staining in the first trimester of pregnancy. Considering the presence and expression profiles of HSP 60 in the bovine placenta allied to the particularity of presenting functional distinct leucocytes populations, a hypothesis was raised regarding the influence of this protein on the placental cells, particularly on the leucocytes in the process of fetal-maternal tolerance. Therefore, this work analyzed the role of HSP 60 in immune mechanisms related to some placental leucocytes by several approaches like proliferation assay by CFSE technique, phagocytosis assay and biochemical assays as lipoperoxidation; cell cycle phases and mitochondrial membrane potential of placental cells in culture. Our results showed that HSP 60 does not influence the proliferation of lymphocytes or any other placental cells in various conditions tested. On the other hand, HSP 60 increases phagocytosis and apoptosis in the third trimester, as well as the production of polyunsaturated oxide radicals and the mitochondrial membrane potential. In view of these results, we may infer that HSP 60 may be modulating the kinetics of activation mechanisms for signaling programmed cellular death between placental and immune cells. This hypothesis assures that, on the termed conceptus, the hormonal variation and the immune tolerance may be responsible for regulating the parturition process.

Mastocitoma é uma das principais neoplasias cutâneas em cães, caracterizada por uma multiplicação anormal de mastócitos, com comportamento biológico muito variável. Os principais fatores prognósticos incluem grau histopatológico, marcadores de proliferação, como índice mitótico, Ki67 e AgNOR, além de estadiamento clínico. Diversos estudos concentram-se na avaliação da relação da apoptose com a oncogênese e seu papel no prognóstico. Em condições fisiológicas, a apoptose ocorre na maturação e senescência celular, mantendo a homeostasia dos diferentes tecidos, removendo do organismo células que tenham sofrido alguma mutação. A genética da apoptose pode ser interrompida frente à ocorrência de mutações, levando à perda do controle na proliferação celular, o que resulta no desenvolvimento de uma neoplasia. O presente estudo avaliou a ocorrência de apoptose por meio de ensaio TUNEL em mastocitomas cutâneos caninos, com o objetivo de testar sua relação com as graduações histopatológicas e o valor prognóstico quanto à sobrevida pós-cirúrgica, assim como compará-lo à expressão imuno-histoquímica de caspase 3 e Ki67. Quarenta e quatro mastocitomas cutâneos caninos, provenientes de 36 cães, foram submetidos à avaliação histopatológica para graduação quanto à diferenciação tumoral, à análise imuno-histoquímica para avaliação das expressões de Ki67 e caspase 3. A marcação positiva para TUNEL não mostrou relação com grau histopatológico, nem foi um bom indicador para sobrevida ou mortalidade em função da doença. Apesar disso, houve correlação positiva entre os índices apoptóticos. / Mast cell tumor is a very common neoplasm in dogs and characterized by an abnormal proliferation of mast cells, with variable biological behavior. The main prognostic factors include histological grade, proliferation markers, such as mitotic index, Ki67 and AgNOR, and clinical staging. Several studies focus in the relation of apoptosis and oncogenesis and its role in prognostication. In physiological conditions, apoptosis occurs due to aging and cell senescence, maintaining the homeostasis of different tissues by removing mutated cells. The genetics of apoptosis can be interrupted by mutations, leading to loss of control in cellular proliferation, and resulting in cancer development. This study evaluated the occurrence of apoptosis by TUNEL assay in canine cutaneous mast cell tumors, compared it with histopathological grading and the immunohistochemical expressions of caspase-3 and Ki67, as well as tested its prognostic value for post-surgical survival. Forty-four canine cutaneous mast cell tumors, from 36 dogs were submitted to histopathologic and immunohistochemical analyses. Positive staining for TUNEL showed no relation with histological grade, and was not considered a good indicator for survival or mortality. Nevertheless, a positive correlation between the apoptotic indexes was found.

Orientador: Sabryna Gouveia Calazans / Banca: Thiago Demarchi Munhoz / Banca: Mirela Tinucci Costa / Resumo: O linfoma difuso de grandes células B (LDGCB) é o tipo de linfoma mais comum em cães e humanos, caracterizado por seu comportamento agressivo e por promover tempos de sobrevida variáveis, mesmo quando se utiliza a mesma abordagem terapêutica. Atualmente, poucos fatores prognósticos tem sido associados especificamente com LDGCB canino. A imunoexpressão de C-MYC e Bcl2 é reconhecida em humanos como fator prognóstico, devido a relação desses oncogenes com proliferação celular e evasão da apoptose nessa doença. O objetivo desse estudo foi avaliar a imunomarcação dos anticorpos C-MYC, Bcl2, e marcadores de proliferação celular Ki67 e índice mitótico (IM) em cães com LDGCB tratados com protocolo CHOP 19 semanas e correlacioná-la com o tempo de sobrevida e estadiamento clínico visando defini-los como possíveis fatores prognósticos. Trinta amostras de linfonodos de cães diagnosticados com LDGCB foram avaliadas. Para determinar a marcação de C-MYC, Bcl2 e Ki67 foi realizada a técnica de imuno-histoquímica utilizando-se os anticorpos C-MYC, Bcl2 (Santa Cruz Biotechnology) e MIB-1 (Dako), respetivamente. O IM foi calculado como descrito para outras neoplasias. A interpretação dos resultados da imuno-histoquímica para C-MYC e Bcl2, foi calculada no porcentagem de área do número de células marcadas, enquanto a contagem de Ki67 foi realizada com auxílio de uma gratícula, contando-se células positivas por área de 1 cm². Foram estabelecidos pontos de corte, calculando-se a média para todos o... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Diffuse large B cell lymphoma (DLBCL) is the most common type of lymphoma in dogs and humans, being characterized by its aggressive behavior with variable survival times, even when same therapeutic approach is used. Currently, few prognostic factors are described in the literature regarding canine DLBCL. Immunoexpression of C-MYC and Bcl2 is recognized in humans as a prognostic factor in DLBCL, product of the relationship between these oncogenes with cellular proliferation and apoptosis escape. The objective of this study is to evaluate the immunolabeling of C-MYC, Bcl2, and markers of cellular proliferation Ki67 and mitotic index (MI) in dogs with DLBCL treated with 19 weeks CHOP protocol and correlate them to survival times and clinical stage in order to identify new prognostic factors. Thirty lymphnode samples of dogs diagnosed with DLBCL were evaluated. For immunoexpression of C-MYC, Bcl2 and Ki67, we perform immunohistochemistry using the antibodies C-MYC, Bcl2 (Santa Cruz Biotechnology) and MIB-1 (Dako), respectively. MI was calculated as previously discussed in other tumors. The interpretation of the immunohistochemistry results for C-MYC and Bcl2 was based on the expression level of the area of positive cells, whereas a grid reticle was used for counting Ki67 positive cells in a total area of 1 cm². Cutoff values for all markers were established calculating the mean value and then the C-MYC Bcl2, Ki67 and MI values were classified and defined as "low" and "high". Cas... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Gisele Fabrino Machado / Banca: Felipe Augusto Ruiz Sueiro / Banca: Antonio Carlos Alessi / Resumo: A causa dos tumores da glândula perianal é desconhecida, entretanto eles podem ser modulados por influência de hormônios gonadais, basicamente a testosterona, uma vez que há uma alta prevalência (até 95%) de regressão da forma benigna dessa neoplasia após a castração dos machos. A proteína Ki-67 foi descrita pela primeira vez em 1983 é uma proteína nãohistona, que não é expressa em células na fase G0, mas que pode ser detectada nas fases ativas do ciclo celular, G1, S, G2 e mitose Verificou-se que o Ki-67 está associado com a proliferação celular, estando a população de células tumorais positivas ao Ki-67 correlacionada com a evolução clínica da doença. Foram estudados 42 casos de neoplasias da glândula perineal, sendo 15 adenomas, 15 epiteliomas, 12 carcinomas. Foram utilizadas 13 amostras de tecido de glândula perianal normal, como controle. De cada animal foram obtidas informações como: sexo, idade, raça, presença de outras neoplasias, se castrado ou não, se em caso de fêmea havia o uso de anticoncepcional, tempo de evolução, recidiva e tempo de sobrevida. Dos 42 casos de neoplasias de glândulas perianais, 34 (80,95%) foram provenientes de cães machos e 8 (19,05%) de fêmeas. A média de idade dos machos com a neoplasia foi de 9,8 anos, e das fêmeas 7,4 anos, sendo que para os dois sexos a idade variou de 5 a 15 anos. Em relação às raças, 11 (26,19%) eram S.R.D. (sem raça definida), 9 (21,42%) Poodle, 4 (9,52%) Cocker Spaniel e Husky Siberiano. O histórico de diagnóstico de outras neoplasias, foi constatado em 23,80% dos animais deste estudo. Em relação à castração, 32 (94,11%) dos machos não eram castrados e apenas 8 (19,05%) fêmeas eram. O tempo de evolução da neoplasia apresentou média de 1,2 anos. Histórico de recidiva da neoplasia foram relatados em 14 animais, sendo maior... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The cause of perianal gland tumors is unknown, though they may be modulated by the influence of gonadal hormones, primarily testosterone, since there is a high prevalence (up to 95%) of regression of the benign tumor after males castration. Protein Ki-67 was first described in 1983, and it is a nonhistone protein, which is not expressed in G0 phase cells, but can be detected in the active phases of the cell cycle, G1, S, G2 and mitosis. It was found that Ki-67 is associated with cell proliferation, and the population of tumor cells positive for Ki-67 correlated with clinical outcome. In this present work we studied 42 cases of perineal gland neoplasms, being 15 adenomas, 15 epitheliomas and 12 carcinomas. We used 13 tissue samples of normal perianal gland as control. From each animal we obtained information such as gender, age, race, presence of other malignancies, neutering status, whether if there were female contraceptive use, duration, recurrence and survival time. Of the 42 cases of perianal gland neoplasms, 34 (80.95%) were from males and eight dogs (19.05%) females. The males average age with cancer was 9.8 years and 7.4 years for females and for both sexes aged between 5 and 15 years. In regard to race, 11 (26.19%) were no breed, 9 (21.42%) were Poodle, and 4 (9.52%) were Siberian Husky and Cocker Spaniels. The history of diagnosis of other cancers, was found in 23.80% of the animals in this study. In relation to castration, 32 (94.11%) of males were not castrated and only 8 (19.05%) were females. The progression of the tumor showed an average of 1.2 years. History of recurrence of cancer were reported in 14 animals, and was higher (66.66%) for carcinomas. Ki-67 staining revealed that the carcinomas showed higher proliferation rate (9.87%) compared to groups of epitheliomas... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Mario De Beni Arrigoni / Coorientador: Cynta Ludovico Martins / Coorientador: Danilo Domingues Millen / Banca: Marco Aurélio Factori / Banca: Ricardo Velludo Gomes de Soutello / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos dos períodos de 6, 9, 14 e 21 dias de adaptação de bovinos da raça Nelore confinados a dietas de alto teor de concentrado em relação ao desempenho, variação na ingestão de massa seca, energia líquida, perfil metabólico sanguíneo, comportamento ingestivo, saúde ruminal e características de carcaça. Os animais foram alimentados durante 88 dias, independentemente do período de adaptação adotado e o delineamento utilizado foi em blocos casualizados, com seis repetições cada, em que 96 bovinos da raça Nelore não castrados (391,1 ± 30,9 kg) foram alimentados em 24 baias (4 animais/baia), de acordo com os diferentes períodos de adaptação adotados: 6, 9, 14 e 21 dias. O programa de adaptação utilizado foi em escadas, com três dietas ao longo de períodos de adaptação com seguintes níveis de concentrado: 70, 75, 80,5 e 86% da massa seca na dieta. Contrastes ortogonais foram utilizados para avaliar a relação linear, quadrática e cúbica entre os dias de adaptação e a variável dependente, além da interação de tratamento e fase (P≤0,10). Os animais adaptados por 14 dias apresentaram resultados superiores em relação ao ganho de peso diário, peso vivo final e eficiência alimentar, bem como peso de carcaça quente (P=0,04) e área de olho de lombo final (P=0,01). A adaptação por 14 dias também proporcionou aos animais melhor desenvolvimento do epitélio ruminal, pois apresentaram maior área de superfície absortiva (P=0,02) e largura de papilas (P=0,06). Além disso, esses animais demonstraram que estavam adequadamente adaptados, pois a renovação celular do epitélio ruminal demonstrou-se estabilizada no índice de proliferação celular (P=0,003) e nos núcleos em morte celular (P=0,0004). Com base nesses resultados, recomenda-se adaptar bovinos da raça Nelore a dietas de alto concentrado com o protocolo em escadas... / Abstract: This study was designed to determine the effects of adaptation periods of 6, 9, 14 and 21 days on feedlot performance, dry matter intake fluctuations, energy gain, blood metabolic profile, feeding behavior, rumen health and carcass traits of Nellore cattle. Cattle were fed for 88-d regardless of adaptation period adopted and the experiment was designed as a completely randomized block, replicated 6 times, in which ninety-six 20-mo-old yearling Nellore bulls (391.1 ± 30.9 kg) were fed in 24 pens (4 animals/pen) according to the different adaptation periods adopted: 6, 9, 14, and 21 days. The adaptation program consisted of ad libitum feeding of 3 diets over adaptation periods with concentrate level increasing from 70, 75, 80.5 and 86% of diet dry matter. Orthogonal contrasts were used to evaluate linear, quadratic, and cubic relationship between adaptation periods and the dependent variable, moreover the interaction the treatment and phase (P≤0.10). Cattle adapted for 14 days had significantly greater for average daily gain, final body weight, G:F ratio, hot carcass weight (P=0,04) and rib-eye area (P=0,01). The adaptation for 14 days the animals also provided better development of the rumen epithelium for a greater absorptive surface area (P=0.02) and width papillae (P=0.06). Moreover, these cattle showed that were properly adapted because the cell epithelium renovation proved to be stable in cell proliferation index (P=0.003) and cell death (P=0.0004). Thus, based on the results of this study, yearling Nellore bulls should be adapted for the step protocol for 14 days, because these provided greater performance and development of the rumen epithelium. / Mestre

Inserido no paradigma da transdisciplinaridade, o presente trabalho foi desenvolvido em etapas, com os seguintes objetivos: a) Construir um dispositivo com base de metal não magnético para ímãs permanentes, visando à geração de um Campo Magnético Estático (CME) ou de um Campo Magnético Compensado (CMC); b) Expor culturas de células mesenquimais a um CME e a um CMC, ou a nenhum campo (controle); c) Analisar a influência destes campos na viabilidade e proliferação celular e nos casos em que houve alteração em pelo menos um destes parâmetros, utilizar a análise proteômica como ferramenta para a compreensão dos mecanismos envolvidos. O dispositivo foi construído utilizando aço inoxidável, capaz de gerar dois tipos de Campos Magnéticos: Compensado (CMC) com intensidade de aproximadamente 0 mT e Estático (CME) com intensidade média de 165 mT. Estes campos foram aplicados a culturas de células mesenquimais de medula óssea de camundongos AJ (MSC/AJ), nos períodos de 0, 24, 48, 72 e 96 h (CMC) e 24 h (CME). Os efeitos sobre a proliferação e a viabilidade foram avaliados por método de contagem manual de células com marcação por azul de tripan. A análise proteômica foi realizada para os experimentos com CMC, com o objetivo de descrever as proteínas envolvidas nas alterações encontradas. A exposição ao CMC tendeu a reduzir a proliferação das células de medula óssea MSC/AJ em relação ao controle em 96 h, porém sem diferença significativa, o que poderia estar relacionado a proteínas que inibem a transcrição, como a Forkhead box protein P2 Foxp2. Este mesmo campo aumentou a viabilidade celular em relação ao baseline para todos os tempos experimentais, o que poderia estar relacionado a proteínas relacionadas à ligação ao Ca+2. Esses mecanismos, entretanto, precisam ser estudados mais profundamente para que possam ser comprovados ou não. Já a exposição ao CME levou a uma tendência à diminuição da proliferação e viabilidade celular em relação ao grupo controle, embora sem diferenças significativas, provavelmente por conta do tamanho amostral e tempo de avaliação (24 h). / Inserted in the transdisciplinarity paradigm, the present work was developed by steps with the following aims: a) To build a device of non-magnetic metal to hold permanent magnets for the generation of a Static Magnetic Field (SMF) or a Compensated Magnetic Field (CMF); b) To expose mesenchimal cells to the SMF and to CMF or to none of the fields (control); c) To analyze the influence of these fields on cell viability and cell proliferation and in the case where it occurred alteration in at least one of these parameters, to use proteomics as a tool for the comprehension of the involved mechanisms. The device was built in stainless steel, able to generate two kinds of Magnetic Fields: Compesated (CMF) with an intensity of nearly zero mT and Static (SMF) with a mean intensity of 165 mT. These fields were applied to bone marrow mesenchimal cell cultures from AJ mice (MSC/AJ), for 0, 24, 48, 72 and 96 h (CMF) and 24 h (SMF) periods. The effects on the proliferation and viability were assessed by tripan blue dying and manual counting of the cells. Proteomics was done for the experiments with CMF, aiming to describe the involved proteins on found alterations. The exposition to CMF tends to reduce the bone marrow cell proliferation of MSC/AJ in relation to control in 96 h, but with no significant difference, which may be related to proteins that inhibit the transcription, like Forkhead box protein P2 Foxp2. This very field raised the cell viability in relation to the baseline for all the experimental times that could be related to proteins connected to Ca2+ binding. However, these mechanisms need more experiments, so they can be confirmed or not. The exposition to the SMF tends to decrease both cell proliferation and viability in relation to the control group, although with no significant difference, probably because of the sample number and the exposition time (24h).

Orientador: Cleslei Fernando Zanelli / Coorientadora: Tatiana Maria de Souza Moreira / Banca: Alexandra Ivo de Mendeiros / Banca: Geisiany Maria de Queiroz-Fernandes / Resumo: O fator de tradução de eucariotos eIF5A é descrito como a única proteína que apresenta o aminoácido hipusina, o qual é gerado por uma modificação pós-traducional essencial para a proliferação celular em todos os eucariotos estudados até o momento, sendo que a enzima desoxi-hipusina sintase (DHPS) é responsável pela primeira etapa da formação desse aminoácido em eIF5A. Portanto, a inibição de DHPS também impede a modificação de eIF5A, tornando esta proteína não funcional, o que pode ter aplicação no tratamento dos tipos de câncer em que o fator está envolvido. Embora N1-guanil-1,7-diamino-heptano (GC7) seja potente inibidor da enzima DHPS, foram observados outros efeitos na célula devido à atuação do composto em alvos não específicos. Desta forma, o presente trabalho tem como objetivo a busca por novos inibidores de DHPS, com baixa citotoxicidade e que reduzam a proliferação celular ou que inibam o crescimento de micro-organismos eucarióticos patogênicos, como algumas espécies de fungos. Primeiramente, foi avaliada a citotoxicidade de diferentes compostos com núcleo guanidínico frente a macrófagos murinos. Entre os compostos testados, aqueles que apresentaram menor citotoxicidade foram o composto GC7 e os compostos de núcleo guanidínico com um grupo fenil substituído em para por uma metila e outro por um flúor. A partir deste resultado, os compostos foram submetidos à avaliação de sua atividade antiproliferativa frente às mesmas células. GC7 promoveu inibição da proliferação c... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Eukaryotic translation factor eIF5A is described as the only protein that presents the amino acid hypusine that is generated by a post-translational modification, which is essential for cell proliferation in all the eukaryotes studied to date. The enzyme deoxyhypusine synthase (DHPS) is responsible for the first stage of formation of this amino acid in eIF5A. Therefore, the inhibition of DHPS also prevents the modification of the eIF5A, making this protein non-functional, which may have application in the treatment of cancer kinds in which this factor is involved. Although N1-guanyl-1,7-diaminoheptane (GC7) is a strong inhibitor of the DHPS enzyme, other effects on the cell were observed due to the acting of the compound on non-specific targets. Thus, the present work aims to search for new DHPS inhibitors, with low cytotoxicity and able to reduce cell proliferation or inhibit the growth of pathogenic eukaryotic microorganisms such as some fungal species. Firstly, the cytotoxicity of different compounds with guanidinic nucleus against murine macrophages was evaluated. Among the compounds tested, those that showed the lowest cytotoxicity were the GC7 compound and the guanidine core compounds with a phenyl group substituted in para for one methyl and another with fluorine. From these data, the antiproliferative activity of the compounds towards the same cells was evaluated. GC7 promoted inhibition of proliferation as already described in the literature, but the compounds tested... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A dieta pode regular a proliferação e diferenciação no epitélio gástrico de ratos durante o período pós-natal. Avaliamos o efeito tardio do desmame precoce na massa corpórea, proliferação (imunomarcação para Ki-67) e diferenciação celular (immunoblot de Mist 1 e pepsinogênio C) aos 15, 18, 30 e 60 dias. Ratos Wistar foram divididos nos grupos: desmame precoce (DP) aos 15 dias e desmamados aos 21 dias (A). Os resultados mostraram: massa corpórea aos 18 (p<0,01) e 21 (p<0,05) dias no grupo DP menor do que no A. Aos 60 dias, os valores se equiparam, porém há diferença entre machos e fêmeas. O índice de proliferação, a espessura da mucosa e profundidade da glândula foram superiores aos 18 dias no grupo DP (p<0,05), havendo resultado oposto aos 30 dias e nenhuma resposta aos 60 dias; houve variação no conteúdo de Mist 1 (p<0,05) e pepsinogênio C (p<0,01) nos animais DP aos 18 dias. Assim, O DP alterou o ganho de peso corporal e crescimento do estômago logo após o início da ingesta de ração, e tal reposta foi compensada na idade adulta. / Diet can regulate proliferation and differentiation in gastric epithelium of rats during the postnatal period. We evaluated the late effects of early weaning on body mass, cell proliferation (Ki-67 immunolabeling) and differentiation (Mist 1 and pepsinogen C by immunoblot) at 15, 18, 30 and 60 days. Wistar rats were divided into groups: early-weaned (EW) at 15 days, and suckling and weaned at 21 days (S). The results showed that: at 18 (p<0,01) and 21 (p<0,05) days, body mass was lower in EW than in S. At 60 days, values were similar between S and EW, however we registered a difference between males and females. The proliferation index, mucosal thickness and gland depth were higher in EW (vs. S) at 18 days (p<0,05), being reversed at 30 days, whereas no change detected at 60 days. We found a variation in Mist 1 (p<0,05) and pepsinogen C (p<0,01) at 18 days. Thus, EW altered body weight gain and stomach growth soon after its onset, and part of responses were compensated in adulthood.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-04Bitstream added on 2014-06-13T20:44:18Z : No. of bitstreams: 1 martins_pmm_dr_rcla.pdf: 973158 bytes, checksum: 8092208107da6d0372b2a5093d8b6213 (MD5) / A citricultura é uma das atividades mais importantes do setor agrícola brasileiro. Ainda assim, a incidência de doenças como o cancro cítrico afeta sobremaneira a produtividade dos pomares. Seu agente etiológico, a bactéria Xanthomonas citri subsp. citri (Xac) é capaz de infectar todas as espécies cultivadas, não havendo cura para plantas afetadas. Assim, dados a respeito de seus processos biológicos básicos poderiam auxiliar a vislumbrar soluções para esta enfermidade. Assim, visamos com este trabalho obter informações sobre a formação do septo em Xac, processo do qual participa a proteína ZapA e cujas perturbações têm alto potencial de interferência na multiplicação da bactéria e, portanto, em seu controle. Três estratégias foram utilizadas para esta determinação: 1) estudo de interactantes de ZapA através de ensaio de duplo-híbrido em leveduras; 2) análise do perfil de expressão global de um mutante produzindo cópias extras de ZapA, com a identificação de vias possivelmente por ela influenciadas; e 3) disrupção de ZapA e XAC3407, para averiguar sua interferência no estabelecimento de infecção in planta, sendo XAC3407 um possível novo componente septal a ser descrito em Xanthomonas spp. Embora aparentemente os resultados não apontem para um envolvimento direto entre ZapA e a expressão do fenótipo virulento de Xac, os processos celulares nos quais esta proteína parece atuar diretamente são bastante variados, incluindo aqueles relativos à percepção de estresse, regulação da montagem do flagelo, citoesqueleto e biossíntese de componentes do envelope celular. Todos estes elementos são discutidos caso a caso neste trabalho, na tentativa de que possam lançar luz no conhecimento acerca da biologia básica de Xac / Citriculture is one of the most important activities of Brazilian agricultural sector. Even though, the incidence of diseases such as citrus canker affects drastically the orchards productivity. Its etiologic agent, the bacterium Xanthomonas citri subsp. citri (Xac) is able to infect all citric cultivars, without any treatment to the diseased plants until now. That’s the reason why new data concerning the basic biological processes of Xac can be enormously useful to provide insight on its control. What we sought with this work was to assess new information on Xac’s septum formation, a process where the protein ZapA is involved and which impairment has a high potential for disturbing the bacterium growth and, consequently, be useful for control purposes. Three approaches were used for us to reach these goals: 1) the study of ZapA interactants by an yeast-two-hybrid assay; 2) analysis of the expression profile of a mutant strain with extra copies of ZapA, allowing the identification of biochemical pathways possibly influenced by this protein; and 3) depletion of ZapA as well as of XAC3407, to assess its interference during infection establishment in planta, being XAC3407 a possible new septal component to be described in Xanthomonas spp. Although our data seems not to support any involvement of ZapA in the virulent phenotype of Xac, the protein-protein interactions and pathways in which it is enrolled are as broad as stress perception, flagellum assembly regulation, cytoskeleton and cell envelope biosynthesis. All these elements are discussed in this work in the hope that it may shed light on the current knowledge of Xac’s basic biology