Made available in DSpace on 2016-08-10T10:55:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marielle de Oliveira Castro.pdf: 948812 bytes, checksum: 71c8c7096fa4cd9fbc718b2983fb0b7d (MD5) Previous issue date: 2007-03-23 / Hepatitis C is considered one of the largest problems of public health in the world, inclusively in Brazil, whereas a preventive vaccine none is available; the number of asymptomatic infections is elevated and for control of the disease, there exist only imported kits. Considering, principally, the increase of preoccupation with the detection of precocious hepatitis C and that the diagnostic methods of this infection are of the highest clinical importance, the presence study proposes the expression and the purification of one codified protein through a synthetic gene (MEHCV Multiepitope HCV). To achieve this objective, the new recombinant protein multiepitope was designed on the basis of epitopes linear, immunodominant and phylogenetically conserved from the virus of hepatitis C (HCV), including the immune dominating sequences of the genotypes that are more prevalent in Brazil (1a e 3a) and a His-tag in C-terminal to facilitate the purification of the recombinant protein express in bacteria. These epitopes (core, NS3, NS4A, NS4B e NS5) are considered among the most important for the diagnosis of the illness utilized for many HCV detection tests. The MEHCV gene (~720pb) possesses restrictive of sites (NdeI e XhoI) in yours extremities that permits the clonage in phase in the expression of vector bacterial pET-21a. To the synthesize of this gene was made the optimization to the codon usage of E. coli. The protein of interest (~29kDa) was detected by SDS-PAGE and Western blot. The purification of the protein express was realized by centrifugal in resin Ni-NTA by affinitive chromatography. Inasmuch as the purification was not total, a new purification was made of this protein by means of chromatography of affinity in column with resin Ni-NTA. However, did not having this purification owe a presence of cellular proteins. In such case, in the trial of obtain a total purification of this protein multiepitope, would be interesting the utilization of the one new protocol, with the extraction of the inclusion body, wherein all the dissolvable proteins cellular would be remove of the solution. / A hepatite C é considerada um dos maiores problemas de saúde pública no mundo inteiro, inclusive no Brasil, pois uma vacina preventiva não está disponível, o número de infectados com a forma assintomática é elevado e para o controle da doença, há somente kits importados. Considerando, principalmente, o aumento da preocupação com a detecção precoce da hepatite C e que os métodos de diagnóstico desta infecção são de grande relevância clínica, o presente trabalho propõe a expressão e purificação de uma proteína codificada por um gene sintético (MEHCV Multiepítopo HCV). Para atingir este objetivo, uma proteína multiepítopo recombinante foi desenhada a partir de epítopos lineares, imunodominantes e filogeneticamente conservados do vírus da hepatite C (HCV), com a inclusão de seqüências imunodominantes dos genótipos mais prevalentes no Brasil (1a e 3a) e uma His-tag no C-terminal para facilitar a purificação da proteína recombinante expressa em bactéria. Estes epítopos (core, NS3, NS4A, NS4B e NS5) são considerados entre os mais importantes para o diagnóstico da doença e utilizados em muitos testes para detecção do HCV. O gene MEHCV (~720pb) possui sítios de restrição (NdeI e XhoI) nas suas extremidades que permitem a clonagem em fase no vetor de expressão bacteriano pET-21a. Para a síntese deste gene, foi feita a otimização para o códon usage de E. coli. A proteína de interesse (~29kDa) foi detectada por SDS-PAGE e Western blot. A purificação da proteína expressa foi realizada por cromatografia de afinidade em resina Ni-NTA. Como a purificação não foi total, foi feita uma nova purificação desta proteína por cromatografia de afinidade em coluna com resina Ni-NTA. No entanto, não houve esta purificação devido à presença de proteínas celulares. Sendo assim, na tentativa de alcançar a purificação total desta proteína multiepítopo, seria interessante a utilização de um novo protocolo, com a extração dos corpos de inclusão, onde todas as proteínas celulares solúveis seriam retiradas da solução.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-09-02T18:25:03Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 898935 bytes, checksum: 76e4100a96f4410f999b0f8c2973b39e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-02T18:25:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 898935 bytes, checksum: 76e4100a96f4410f999b0f8c2973b39e (MD5) Previous issue date: 2015-03-06 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Os vírus que infectam plantas apresentam um genoma pequeno e codificam um número reduzido de proteínas. A limitação do número de proteínas virais é superada pela modulação da expressão de genes na célula hospedeira. O mapeamento das redes de interações entre fatores do patógeno e do hospedeiro tem fornecido respostas importantes para a compreensão dos processos que favorecem a infecção viral. O objetivo deste trabalho foi avaliar a contribuição de duas proteínas do tomateiro, a chaperona citosólica Hsp70 e sua co-chaperona DnaJ (classe 1) no estabelecimento da infecção pelo Pepper yellow mosaic virus (PepYMV). Essas duas proteínas foram identificadas com a expressão induzida em células infectadas pelo PepYMV. A sequencia codificadora da Hsp70 de tomateiro (SlHsp70) foi clonada e sequenciada. A análise in silico mostrou a presença de todos os domínios típicos de uma Hsp70. Alinhamento entre a sequencia da proteína SlHsp70, e as Hsps70 de Arabidopsis thaliana, Nicotiana benthamiana e Nicotiana tabacum mostrou uma alta conservação na sequência de aminoácidos das quatro proteínas alinhadas. A localização subcelular de SlHsp70 em células infectadas pelo PepYMV foi analisada por microscopia confocal. Células sadias e infectadas apresentaram uma localização nuclear e citoplasmática, entretanto em células infectadas foi possível observar a expressão da Hsp70 em estruturas ancoradas a membrana semelhantes a vesículas replicativas induzidas pela proteína viral 6K2. Para avaliar a ocorrência de interação entre SlHsp70 com proteínas virais, e SlDj1 com proteínas virais foi realizado um ensaio de duplo hibrido em leveduras. Não houve a detecção de nenhuma interação entre as proteínas do PepYMV e as proteínas SlHsp70 e SlDj1. Foi detectado a ocorrência de interação entre SlHsp70 e SlDj1. Com o objetivo de avaliar o efeito do silenciamento de SlDj1 na infecção viral, plantas de tomateiro foram transformadas com uma construção que induz o silenciamento de SlDj1 via Agrobacterium tumefaciens. As plantas transformadas silenciadas apresentaram um fenótipo de letalidade e esse fenômeno não permitiu a quantificação do acúmulo do PepYMV em tomateiros transformados. Os resultados deste trabalho sugerem que as proteínas SlHsp70 e SlDj1 favorecem a infecção viral de forma indireta, e que estudos mais detalhados irão formecer informações sobre o envolvimento dessas proteínas no processo de infecção pelo PepYMV. / Viruses are obligate intracellular parasites with a small genome and encode a limited number of proteins. Limitation in the number of viral proteins is overcome by modulating the expression of certain genes in the host cell. Mapping interaction networks between pathogen and host factors has provided important answers to the understanding of the processes that promote viral infection. This study objective is to evaluate the contribution of the tomato proteins chaperone Hsp70 and its co- chaperone DnaJ in infection process with Pepper yellow mosaic virus (PepYMV). These two proteins were investigated due to the modification of gene expression reports of transcripts in infected cells PepYMV. Initially the coding sequence corresponding to the tomato Hsp70 (SlHsp70) was analyzed in silico, the presence of all the domains of a typical Hsp70 was confirmed. Sequence alignment between the protein SlHsp70, and Hsps70 Arabidopsis thaliana, as well as Nicotiana benthamiana and Nicotiana tabacum revealed high conservation in the amino acid sequence alignment of the four proteins. The subcellular localization by confocal scanning microscopy was performed with SlHsp70 and demonstrated a common cytoplasmic and nuclear localization to healthy cells and cells infected by PepYMV. The infected cells showed similar expression of Hsp70 in membrane-anchored structures, similar to replicative vesicles induced by 6K2. Study of protein-protein interaction was performed by two-hybrid assay in yeasts. Due to SlHsp70 chaperone and co-chaperone SlDj1 act together, the interactions between the PepYMV proteins were tested with both the vegetable proteins. There was no detection of any interaction between PepYMV proteins and vegetable proteins, a single interaction was detected between SlHsp70 and SlDj1. Genetic transformation of tomato plants by Agrobacterium tumefaciens was carried out to induce silencing of the gene encoding the protein SlDj1. The silenced plants showed a lethality phenotype, and this phenomenon did not allow the quantification of the PepYMV accumulation in processed tomato. These results suggest that SlHsp70 and SlDj1 proteins promove the viral infection indirectly, and that investigations in the PepYMV replication process can reveal interesting facts about the involvement of these proteins in infection.

Proteínas FtsH são metaloproteases pertencentes à família AAA (ATPases Associadas a Diversas Atividades Celulares), e estão presentes em todos os reinos dos seres vivos. Estas proteases utilizam a energia liberada da hidrólise do ATP para desempenhar suas diversas atividades celulares. Em Escherichia coli, as proteases FtsH se organizam em um homohexamero na membrana plasmática, sendo que este complexo atua na degradação de proteínas mal dobradas. Em Arabidopsis, o hetero-complexo FtsH localizado na membrana dos tilacóides é formados por isômeros do tipo A (FtsH1/FtsH5) e do tipo B (FtsH2/FtsH8). Sua atividade proteolítica está relacionada ao controle de qualidade organelar, degradando proteínas mal dobradas e de vida curta. O complexo está envolvido também na degradação da proteína D1 do PSII, danificada por danos foto-oxidativo. Embora as FtsH cloroplastidiais sejam bem caracterizadas em termos genéticos e moleculares, o mecanismo de regulação do complexo ainda não foi esclarecido, o que torna interessante a busca por fatores proteicos adicionais. Em investigações anteriores nosso grupo de pesquisa encontrou um candidato potencial, denominado FIP (FtsH5 Interacting Protein), que pode modular a atividade ATPásica e/ou proteásica do complexo. Fip está presente na membrana dos tilacóides e mostrou interação com FtsH5 in vivo e in vitro. Neste trabalho foram realizados ensaios de duplo híbrido de leveduras, utilizando deleções da proteína FIP, bem como substituições de resíduos de cisteína por alanina. Os resultados revelaram que a interação entre FIP e FtsH5 é mantida somente quando duas regiões ricas em cisteína estão presentes na sequência de FIP. Essa região compreende 46 aminoácidos, com 4 resíduos de cisteína conservados, e ensaios com 7 diferentes substituições desses resíduos por alanina não mostraram interação com FtsH5, o que corrobora a hipótese de que os resíduos de cisteína são necessários para a interação. Experimentos de análise de expressão utilizando PCR em tempo real, sob condições de estresse salino e estresse a frio, revelaram que os genes que codificam FIP e FtsH5 têm sua expressão regulada de modo antagônico, o que sugere que FIP possa atuar como modulador negativo da atividade proteásica do complexo FtsH. / Metalloprotease FtsH proteins are members of the AAA family (ATPases Associated with Diverse Cellular Activities), and are present in all kingdoms of living organisms. These proteases use energy of ATP hydrolysis to perform its various cellular activities. In Escherichia coli, FtsH proteases are organized in a homo-hexamer in the cytoplasmic membrane, and this complex acts in the degradation of misfolded proteins. In Arabidopsis, the FtsH hetero-complex located in the thylakoid membrane is formed by type A (FtsH1/FtsH5) and type B (FtsH2/FtsH8) isomers. Its proteolytic activity is involved in organellar quality control by degrading misfolded and short-lived proteins. The complex is also involved in the degradation of the D1 protein of PSII, damaged by photo-oxidative damage. Although the chloroplast FtsH are well characterized genetically and molecularly, the regulatory mechanism of the complex remains unclear, which makes it interesting to search for additional protein factors. In earlier studies our research group has found a potential candidate called FIP (FtsH5 Interacting Protein), which can modulate the ATPase and/or protease activity of the complex. FIP is present in the membrane of the thylakoids and showed interaction with FtsH5 in vivo and in vitro. In this study yeast two-hybrid assays were performed using FIP protein deletions, and substitutions of cysteine to alanine residues. The results showed that the interaction between FIP and FtsH5 is maintained only when two cysteine rich regions are present in the sequence of FIP. This region contains 46 amino acids with four conserved cysteine residues and 7 different assays with alanine replacements of these residues showed no interaction with FtsH5, which corroborates the hypothesis that the cysteine residues are required for the interaction. Expression experiments analysis using realtime PCR, under conditions of salt stress and cold stress, revealed that the genes encoding FtsH5 and FIP have its expression regulated in an antagonistic way, suggesting that FIP can act as a negative modulator of the activity FtsH protease of the complex.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-07-30Bitstream added on 2014-06-13T20:41:05Z : No. of bitstreams: 1 apponi_lh_dr_araiq.pdf: 2630425 bytes, checksum: bd39235826e1f6c4a56f84fffab81fff (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A expressão gênica pode ser regulada em eucariotos em diversas etapas dometabolismo de mRNA, como transcrição, processamento, tradução e degradação. A estabilidade de mRNA é modulada por elementos presentes no transcrito e por proteínas ligantes de RNA associadas a esses elementos. Pub1 de S. cerevisiae é uma proteína citoplasmática capaz de estabilizar transcritos contendo elementos ricos em AU (ARE e ARE-like) ou elementos estabilizadores (STE). O presente trabalho identificou num rastreamento de duplo-híbrido a proteína Nab2 como ligante de Pub1. Nab2 é uma proteína nucleocitoplasmática essencial que regula o comprimento da cauda poli(A) e a exportação nuclear de mRNA. A interação entre Pub1 e Nab2 foi confirmada por co-purificação e ensaio de interação in vitro. Foi demonstrado também que essa interação é mediada pelo domínio de dedos de zinco presente na região C-terminal de Nab2. A análise da relação funcional entre essas duas proteínas revelou que Nab2, assim como Pub1, é capaz de modular a estabilidade de mRNA. A estabilidade do transcrito de RPS16B, mensageiro contendo sequência ARE-like e regulado por Pub1, é diminuída nos mutantes nab2- 1 e nab2-67. No entanto, a estabilidade do transcrito de GCN4, mensageiro contendo STE e também regulado por Pub1, não é afetada nos mesmos mutantes. Resultados semelhantes foram observados para outros transcritos contendo sequências ARE-like ou STE. Ainda, dados obtidos com um mutante da via NMD (?upf1) mostraram que esta via de decaimento não está envolvida com o mecanismo de estabilização de RPS16B mediada por Pub1 e Nab2. Uma análise mais profunda mostrou que a sequência ARE-like presente no mensageiro de RPS16B é necessária para a estabilização mediada por Nab2. A proteína Pub1 e seus domínios isolados foram produzidos e purificados, mas não foi possível a obtenção de cristais para... / Regulation of gene expression can occur at different levels of mRNA life cycle, including transcription, processing, translation and degradation. mRNA stability is modulated by elements in the mRNA transcript and their cognate RNA-binding proteins. Poly(U)-binding protein 1 (Pub1) is a cytoplasmic S. cerevisiae mRNA binding protein that stabilizes transcripts containing AU-Rich Elements (ARE and ARE-like) or Stabilizer Elements (STE). In a yeast two-hybrid screen, we identified Nuclear poly(A)-binding protein 2 (Nab2) as a Pub1-interacting protein. Nab2 is an essential nucleocytoplasmic shuttling mRNA binding protein that regulates poly(A) tail length and mRNA export. The interaction between Pub1 and Nab2 was confirmed by co-purification and in vitro binding assays. The interaction is mediated by the Nab2 zinc finger domain. Analysis of the functional link between these proteins reveals that Nab2, like Pub1, can modulate the stability of specific target mRNA transcripts. We find that the half-life of the RPS16B transcript, an ARE-likecontaining Pub1 target, is decreased in both nab2-1 and nab2-67 mutants. In contrast, GCN4, an STE-containing Pub1 target, is not affected. Similar results were obtained with other ARE- and STE-containing Pub1 target transcripts. Additionally, results obtained with a mutant of the NMD pathway (?upf1) showed that this pathway is not involved in the mechanism of RPS16B stabilization mediated by Pub1 and Nab2. Further analysis reveals that the ARE-like sequence is necessary for Nab2- mediated transcript stabilization. Full-length Pub1 and isolated domains were produced and purified, however, it was not possible to obtain protein crystals for tertiary structure determination. Taken together, these results suggest that Nab2 acts together with Pub1 to modulate mRNA stability and strengthen a model where nuclear events involved in mRNA biogenesis...(Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-07-27Bitstream added on 2014-06-13T20:01:23Z : No. of bitstreams: 1 frigieri_mc_dr_araiq.pdf: 1480583 bytes, checksum: 81dab6a7f6da1d10c98a3b59c3b167fd (MD5) / O Poli ácido glutâmico (PAG) é um poliaminoácido sintético formado por unidades repetitivas de glutamato, que apresentam grupos carboxilas ao longo de sua cadeia principal. A preparação de eletrodos de carbono vítreo modificados com filmes de PAG foi investigada utilizando-se três diferentes procedimentos: eletropolimerização do ácido glutâmico (MONO); deposição direta de poli ácido glutâmico (PAG) e poli ácido glutâmico:glutaraldeído (PAG:GLU) seguida de secagem a temperatura ambiente. Após secagem, o eletrodo modificado foi submetido a ciclos sucessivos entre -0,8 a +2,0 V sob velocidade de varredura de 100 mV s-1. O ácido ascórbico foi usado como composto modelo para os eletrodos modificados, os quais apresentaram um efeito eletrocatalítico na oxidação do mesmo. Os eletrodos modificados foram caracterizados por microscopia de força atômica (AFM) e espectroscopia de impedância eletroquímica (EIS). O recobrimento sobre a superfície pela adição de PAG apresentou a melhor performance exibindo filmes nanoestruturados e uniformes com baixa resistência à transferência de carga. Os eletrodos modificados por filmes PAG foram usados para estudar a oxidação do flavonóide rutina. Os resultados mostraram um par de picos redox em +0,46/+0,43 V, usado para a pré-concentração da rutina. Uma curva analítica foi obtida no intervalo de 0,9 a 9,0 μmol L-1 e o método proposto foi aplicado para análise do antioxidante em formulação farmacêutica. Os eletrodos modificados por filmes PAG foram também usados para determinação de ácido cafêico. Um par de pico redox reversível em +0,42/+0,45 V foi obtido para o ácido cafêico em tampão B-R pH 3,5. O método foi aplicado para a determinação de ácido cafêico em amostra de vinho tinto, detectando nível de concentração de 34,8μg mL-1 sem tratamento prévio da amostra. Os filmes de PAG:GLU foram... / The poly glutamic acid (PAG) is a syntetic poliamonacid composed by repetitive glutamate units that shows carboxylic groups in the long of the principal chain. Films of PAG on the glassy carbon electrode was investigated by three diferents procedures: glutamic acid eletropomelimerization (MONO), direct deposition of the poly glutamic acid (PAG) and poly glutamic acid:glutaraldehyde (PAG:GLU), followed by drying at room temperature. After solvent evaporation, the modified electrode was submitted by cycles sucessives from -0.8 to +2.0 V at scan rate of 100 mV s-1. The ascorbic acid was used as a model compound in the modified electrodes, which presented an electrocatitic effect in the oxidation of the ascorbic acid. The modified electrodes were characterized by atomic force microscopy (AFM) and electrochemistry impedance spectroscopy (EIS). Coantings by poly glutamic acid onto the surface presented best performance by addition of PAG films that exhibits films nanostructured and uniforms with lower resistance to charge transfer. The modified electrode by PAG films were investigated to oxidation of rutin flavonoid. The results showed a redox pair of peaks at +0.46/+0.43 V, and linear analytical curve at 0.9 to 9.0 x 10-6 mol L-1. The method proposed was successful applied for rutin determination in pharmaceutical formulation. The modified electrode by PAG films was also used to determine cafeic acid. A reversible redox peak pair at +0.42/+0.45 V was obtained for cafeic acid at B-R buffer pH 3,5. The method was applied for cafeic acid determination in the red wine, where the concentration of the 34,8 μg mL-1 was obtained, without any pre-treatment of the sample. The PAG:GLU films onto the glass carbon electrode were also efficient to pre-concetrate and to determine amoxycilin (AMX) and doxorubicin (DXR) in human urine sample. Linear calibration graphs were obtained from 2,0 a 25,0 x 10-6 mol L-1...(Complete abstract click electronic access below)

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-05-05T15:38:35Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 616379 bytes, checksum: fef3fef3aec0d51c258c1bcdee6dea7c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-05T15:38:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 616379 bytes, checksum: fef3fef3aec0d51c258c1bcdee6dea7c (MD5) Previous issue date: 2001-04-02 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Visando determinar as conseqüências da seleção para alto teor protéico em sementes de soja sobre a qualidade fisiológica das mesmas e sobre a produção de grãos e verificar a correlação, e suas causas, entre estes caracteres, utilizaram-se oito populações, quatro RC 1F4 e quatro F4, sendo, cada uma, originária do cruzamento de um material portador de alto teor protéico na semente e uma variedade comercial. Procederam-se análises de variâncias e estimaram-se as médias, correlações, herdabilidades, ganhos por seleção direta, efeitos diretos e indiretos dos componentes primários da produção, sobre a mesma e de seus componentes e do teor protéico da semente, sobre a produção de proteína por planta. Pôde-se concluir que houve tendência da seleção para alto teor protéico influenciar negativamente a qualidade fisiológica das sementes, todavia, não se constituiu em fator limitante à seleção de famílias com alto teor de proteína e boa qualidade de sementes; foi possível, para a maioria das populações, manter as médias de produção de grãos e qualidade fisiológica das sementes estatisticamente iguais (p>0,05) às de seus respectivos progenitores recorrentes e obter, simultaneamente, teor protéico mais elevado que o destes progenitores; a população CD206-CR apresentou famílias com os maiores teores de proteína nas sementes e, embora tenha apresentado herdabilidade alta para esse caráter e intermediária para produção de grãos, a correlação genotípica negativa entre esses caracteres, presente nessa população, impossibilitou a sua seleção simultânea; em outras populações, foi possível selecionar famílias que apresentassem, simultaneamente, ganhos de seleção positivos quanto ao teor protéico na semente, mantendo-se a média de produção de grãos pelo menos igual à dos respectivos progenitores recorrentes; o caráter produção de proteína por planta seguiu as mesmas tendências de produção de grãos por planta, quanto às correlações; a população CD201-RC apresentou correlações positivas de teor protéico com produção de proteína por planta e produção de grãos; os três caracteres componentes da produção apresentaram efeitos diretos positivos, tanto sobre a produção de grãos quanto sobre a produção de proteína por planta; o efeito direto do teor de proteína na semente sobre a produção de proteína por planta foi positivo, todavia, baixo; e a produção de grãos por planta foi o principal determinante da produção de proteína por planta. Os resultados encontrados neste trabalho serão utilizados para dar continuidade à parte do Programa de Melhoramento de Soja do Bioagro/ UFV que visa, prioritariamente, a obtenção de linhagens de soja com alto teor de proteína na semente. / Aiming to determinate the consequences of the selection for high protein in soybean seeds, on the physiological quality of the seeds and on grain yield, and to verify the correlation, and it’s causes, among this traits, four RC 1F4 and four F4 populations were used, originated, each one, from the crossing of a genotype bearing high protein in the seed and a commercial variety. The variance analyses and estimated the means, correlations, heritabilities, gains by direct selection, direct and indirect effects of grain yield primary components on grain yield and the effects of it’s components and of protein content on protein yield per plant were accomplished. By the analysis of the results it was possible to conclude that there was a tendency of the selection for high protein, negatively influence the physiological seed quality, though, it didn't seem to be a hamper to the breeding looking for high protein content; it was possible, for the most of the populations, to maintain the average of grain yield and physiological seed quality statistically equal (p>0,05) to the ones of their respective recurrent parents and to obtain, simultaneously, protein content higher than of these parents; the population CD206-CR presented families bearing the highest protein content in the seeds and despite the presence of high heritability for protein content and intermediate for grain yield, the negative genetic correlation between them did not allow their simultaneous selection; it was possible, in other populations, to select families witch presented positive selection gains, regarding protein content in the seeds, while keeping the grain yield averages equal to the ones of the respective recurrent parents; the character protein yield per plant followed the same tendencies of grain yield per plant; the population CD201-RC presented positive correlations of protein content with protein and grain yields; the three grain yield component characters presented positive direct effects for both grain and protein yields; the direct effect of the protein content on protein yield was positive, though, small; and the grain yield per plant was the main factor contributing for protein yield per plant. The results found in this study will be used to continue the part of the Bioagro/ UFV Soybean Breeding Program that aims, primarily, to obtain soybean lines bearing high protein content in the seeds.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-06-28T18:04:18Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 171052 bytes, checksum: e598fbb314d1ace6941dbe57a592f73f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-28T18:04:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 171052 bytes, checksum: e598fbb314d1ace6941dbe57a592f73f (MD5) Previous issue date: 2000-02-10 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Foram realizados dois ensaios de digestibilidade no Setor de Suinocultura, do Departamento de Zootecnia, da Universidade Federal de Viçosa, MG, com o objetivo de determinar os coeficientes de digestibilidade ileal aparente (CDapPB) e verdadeira (CDvPB) de proteína e os coeficientes de digestibilidade ileal aparente (CDapAA) e verdadeira (CDvAA) de aminoácidos do farelo de soja (FS), glúten de milho (GM), da farinha de carne e ossos (FCO) e farinha de sangue (FSA), utilizando as técnicas da cânula T simples e da anastomose íleo-retal (exceto para FSA), com suínos. Os CDapPB e CDvPB determinados para o FS, GM, FCO e FSA, utilizando-se a técnica da cânula T simples, foram de 72,00 e 88,40%; 73,52 e 89,50%; 53,71 e 70,50%; e 46,58 e 63,20%, respectivamente. Os CDvAA médios determinados para FS, GM, FCO e FSA, utilizando-se a técnica da cânula T simples, foram de 91,12; 90,41; 71,93; e 64,70%, respectivamente. Os CDvAA variaram de 84,70% (alanina) a 96,21% (arginina), para o FS; de 81,45% (triptofano) a 93,98% (histidina), para o GM; 56,64% (ácido aspártico) a 84,00% (arginina), para a FCO; e 63,21% (valina) a 76,80% (isoleucina), para a FSA. Os CDapPB e CDvPB determinados para FS, GM e FCO utilizando-se a técnica da anastomose íleo-retal, foram de 80,93 e 91,32%; 78,4 1 e 88,52%; e 50,65 e 61,26%, respectivamente. Os CDvAA médios determinados para FS, GM e FCO, utilizando-se a técnica da anastomose íleo-retal, foram de 91,70; 88,91 e 61,83%, respectivamente. Os CDvAA variaram de 82,27% (glicina) a 97,97% (tirosina), para o FS; 65,22% (glicina) a 97,27% (arginina), para o GM; e 24,89% (cisteína) a 73,59% (fenilalanina), para a FCO. Os CDapPB, CDvPB, CDapAA, CDvAA dos alimentos de origem vegetal (FS e GM) foram maiores que os coeficientes de digestibilidade dos alimentos de origem animal (FCO e FSA), indicando que o FS e o GM foram alimentos de maior qualidade nutricional. A composição química e os coeficientes de digestibilidade determinados neste trabalho podem ser utilizados como referência da composição protéica e aminoacídica e valores de digestibilidade do FS, GM, FCO e FSA para a formulação de dietas para suínos com base em aminoácidos digestíveis. / Two experiments of digestibility were carried out in the swine production sector, of the Department of Zootecnia, in the Universidade Federal de Viçosa, MG, with the objective of determining the coefficients of apparent (CDapPB) and true ileal protein digestibility (CDvPB) and the coefficients of apparent (CDapAA) and true ileal amino acids digestibility (CDvAA) of the soybean meal (FS), corn gluten meal (GM), meat and bone meal (FCO) and blood meal (FSA), using the techniques of the simple T-canula and of the ileo- rectal anastomosis (except for FSA), with pigs. CDapPB and CDvPB determined for FS, GM, FCO and FSA being used the technique of the simple T-canula were of 72,00 and 88,40%; 73,52 and 89,50%; 53,71 and 70,50% and, 46,58 and 63,20%, respectively. The means of CDvAA determined for FS, GM, FCO and FSA being used the technique of the simple T-canula were 91,12; 90,41; 71,93 and 64,70%, respectively. CDvAA ranging of 84,70% (alanine) to 96,21% (arginine), for FS; of 81,45% (tryptophan) to 93,98% (histidine), for GM; of 56,64% (acid aspartic) to 84,00% (arginine), for FCO and 63,21% (valine) to 76,80% (isoleucine), for FSA. CDapPB and CDvPB determined for FS, GM and FCO being used the technique of the ileo-rectal anastomosis were of 80,93 and 91,32%; 78,41 and 88,52% and, 50,65 and 61,26%, respectively. The means of CDvAA determined for FS, GM and FCO being used the technique of the ileo- rectal anastomosis were 91,70; 88,91 and 61,83%, respectively. CDvAA ranging of 82,27% (glycine) to 97,97% (tyrosine), for FS; 65,22% (glycine) to 97,27% (arginine), for GM and 24,89% (cystine) to 73,59% (phenylalanine), for FCO. CDapPB, CDvPB, CDapAA, CDvAA of the feedstufs of plant origin (FS and GM) were larger than the coefficients of digestibility of the feedstufs of animal origin (FCO and FSA), indicating that FS and GM were feedstufs of larger nutritional quality. The chemical composition and the coefficients of digestibility determined in this work can be used like reference of the protein and amino acids composition and values of digestibility of FS, GM, FCO and FSA for the formulation of diets for pigs based in digestibles amino acids. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-05T16:20:51Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 293120 bytes, checksum: e68070f884ce44d10e67962ef503322f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-05T16:20:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 293120 bytes, checksum: e68070f884ce44d10e67962ef503322f (MD5) Previous issue date: 2001-07-19 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Três experimentos foram realizados no Departamento de Zootecnia da Universidade Federal de Viçosa com o objetivo de estudar os efeitos de níveis de proteína e energia e a influência da temperatura ambiente sobre o desempenho reprodutivo de galos reprodutores de corte na fase de produção. Nos dois primeiros experimentos foram utilizados galos reprodutores da linhagem COBB, alojados em boxes. No terceiro experimento foram utilizados galos reprodutores da linhagem Avian Farm, alojados em gaiolas em Câmaras climáticas. O delineamento experimental utilizado foi inteiramente casualizado (DIC), sendo que os galos reprodutores foram selecionados pelo peso corporal. Durante os experimentos os galos foram alimentados com uma quantidade de ração controlada de 130 g de ração/ave/dia. As rações experimentais continham níveis crescentes dos nutrientes estudados, possibilitando diferentes consumos de proteína (12, 14,2, 16,4, 18,6 e 20,8 g/ave/dia) e de energia (290, 310, 330, 350 e 370 kcal/ave/dia). No terceiro experimento, foram utilizadas rações que continham níveis crescentes de energia (320, 350, 380 e 410 kcal/ave/dia) e os galos foram alojados em câmaras climáticas com diferentes temperaturas (15, 19, 23 e 27 o C). Pelos resultados obtidos no experimento 1, verificou-se efeito quadrático sobre o consumo de proteína na análise quantitativa (volume de sêmen e concentração de espermatozóides) e qualitativa (motilidade e vigor do sêmen) do sêmen de galos reprodutores de corte no período de 27 a 61 semanas de idade. Através dos resultados da análise do sêmen e da fertilidade dos galos reprodutores, verificou-se que o nível de consumo de proteína mais adequado para machos reprodutores no período de reprodução foi o de 17 g/ave/dia. Observou-se efeito quadrático para o percentual de gordura e proteína na carcaça de galos reprodutores abatidos com 45 e 61 semanas de idade. Verificou-se que tanto a deficiência como o excesso de níveis de proteína na ração de galos reprodutores, na fase de produção, contribuíram para aumentar a percentagem de gordura na carcaça de galos. Observou-se um efeito linear entre o consumo de energia e o peso corporal de galos reprodutores na fase de produção. O consumo de energia não influenciou o volume de sêmen. Para as outras características reprodutivas, avaliadas como concentração espermática, motilidade e vigor dos espermatozóides, verificou-se que o consumo de 360 kcal de energia metabolizável foi suficiente para atender o requerimento de galos reprodutores de corte. Entretanto, o consumo de 350 kcal foi o suficiente para maximizar a fertilidade dos galos. O consumo de energia teve um efeito linear na percentagem de gordura da carcaça de galos reprodutores de corte abatidos com 45 e 60 semanas de idade. As temperaturas usadas no experimento 3 não influenciaram o peso corporal, peso dos testículos, volume de sêmen, motilidade e vigor dos espermatozóides de galos reprodutores com 34 semanas de idade alojados em câmara climática por um período de 30 dias. Entretanto, observou-se um efeito quadrático entre temperatura e a concentração espermática. Observou-se um efeito linear entre o consumo de energia, o peso corporal e o peso dos testículos nas diferentes temperaturas ambiente. Entretanto, para os parâmetros concentração espermática, motilidade e vigor dos espermatozóides, foi observado um efeito quadrático tendo como ponto de máxima 370 kcal para concentração espermática e de 360 kcal de energia metabolizável por dia para motilidade e vigor. Com base nos dados conclui-se que o melhor desempenho reprodutivo obtido neste experimento foi com 17 g de PB/ave/dia e 360 Kcal/ave/dia de EM para galos reprodutores na fase de produção. / Three experiments were carried out at the Animal Sciences Department of the Universidade Federal de Viçosa aiming at the study of the effects from energy and protein levels, as well as the influence of the environmental temperature on the reproductive performance of broiler breeder roosters at the production phase. In the first two experiments, a number of broiler breeder roosters of the COBB line, housed in boxes, were used. In the third experiment, broiler breeder roosters of the Avian Farm line, housed in cages under climatic chamber conditions were used. The entirely randomized experimental design was used (DIC), and the breeder roosters were selected according to corporal weight. During the experiments, the roosters were fed an amount of controlled ration of 130 g ration /bird/day. The experimental rations contained increasing levels of the studied nutrients, so turning possible different consumptions of protein (12, 14.2, 16.4, 18.6 and 20.8 g/bird/day) and energy (290, 310, 330, 350 and 370 kcal/bird/day). In the third experiment, the rations containing the increasing levels of energy (320, 350, 380 and 410 kcal/bird/day) were used, and the roosters were xixhoused in climatic chambers under different temperatures (15, 19, 23 and 27 o C). According to the results obtained from experiment 1, a quadratic effect on protein consumption was verified in quantitative analysis (semen volume and spermatozoon concentration) and the qualitative analysis (motility and vigor of the semen) of the broiler breeder roosters' semen over the period from 27 to 61 weeks of age. By the analysis analyses of the breeder roosters' semen and fertility, the level of protein consumption more adapted to the breeder males during the reproduction period was shown to be 17 grams/bird/day. A quadratic effect was shown for the percentile of fat and protein in carcass of the breeder roosters slaughtered at 45 and 61 weeks of age. Both the deficiency and excess of protein levels in the ration of the roosters at the production phase were shown to contribute for increasing the percent fat in roosters' carcasses. A lineal effect was observed between energy consumption and the corporal weight of the roosters at the production phase. The energy consumption had no influence upon semen volume. For other evaluate reproductive characteristics, such as the spermatic concentration and the motility and vigor of the spermatozoon, it was verified that the consumption of 360 kcal metabolizable energy was enough to attend the requirement of the roosters. However, the consumption of 350 kcal were enough to maximizing the roosters’ fertility. The energy consumption showed a lineal effect on fat percent of the carcass in the roosters slaughtered at 45 and 60 weeks of age. The temperatures used in the experiment 3 had no influence upon the corporal weight, testis weight, semen volume, motility and vigor of the roosters’ spermatozoon at 34 weeks of age housed under climatic chamber conditions over a 30-day period. However, a quadratic effect between temperature and the energy consumption, corporal weight and the testis weight at different environmental temperatures. However, for the parameters spermatic concentration and the motility and vigor of the spermatozoon, a quadratic effect was observed having 370 kcal as a maximum level for spermatic concentration and 360 kcal/day metabolizable energy for motility and vigor. Base on the obtained data, it may be concluded that the best roosters’ reproductive performance was attained with 17 g CP/ bird/day and 360 kcal/bird/day ME for broiler breeder roosters at the production phase.

NISHI, Beatriz Caroline. Osmotina de Plumeria rubra: identificação, clonagem molecular, modelamento tridimensional e possível efeito mimético da adiponectina. 2016. 111 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica)- Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-07-10T17:46:05Z No. of bitstreams: 1 2016_dis_bcnishi.pdf: 6198229 bytes, checksum: 907d1b766e98e2a4ef1484116216b945 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-07-10T17:50:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_dis_bcnishi.pdf: 6198229 bytes, checksum: 907d1b766e98e2a4ef1484116216b945 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-10T17:50:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_dis_bcnishi.pdf: 6198229 bytes, checksum: 907d1b766e98e2a4ef1484116216b945 (MD5) Previous issue date: 2016 / Pathogenesis-related proteins (PRs) are expressed in response to pathogenic infections and abiotic stresses. PR-5 family includes proteins related to thaumatin and osmotin. In this study, the presence of an ~22 kDa osmotin-like protein in Plumeria rubra latex was confirmed by western blot assay using anti-CpOsm antibodies, as described by Freitas et al., 2015. The cDNA fragment encoding this osmotin (PrOsm) was cloned, and then the predicted protein was characterized and modeled in silico. The amplification of the cDNA fragment encoding the PrOsm was carried out by RTPCR. The PCR product was ligated into pGEM-T Easy vector and cloned in E. coli DH5α cells. Clones obtained were submitted to sequencing. The computational analysis of the deduced sequences of P. rubra osmotins (PrOsms) showed that the proteins have an apparent molecular weight about 22 kDa and contain 16 cysteine residues involved in 8 disulfide bonds, stabilizing the protein structure. The PrOsms structure exhibits a typical architecture of TLPs, composed by three domains. Mapping of the electrostatic potentials showed that PrOsms contain, on its surface, an acidic cleft, between domains I and II. The PrOsms were evaluated for their ability to interact with human adiponectin receptors (AdipoR1 and AdipoR2) in silico. Molecular docking suggests that PrOsms are able to interact with adiponectin receptors, similarly to AdipoQ, being potential therapeutic targets for the control of obesity-related diseases, including type 2 diabetes and metabolic syndrome. / Proteínas relacionadas à patogênese (PR proteínas) são expressas em resposta a infecções por patógenos e estresses abióticos. A família PR-5 inclui proteínas relacionadas à taumatina e a osmotina. Neste estudo, a presença de uma proteína do tipo osmotina de aproximadamente 22 kDa, no látex de Plumeria rubra, foi confirmada por meio de ensaios de western blot utilizando anticorpos anti-CpOsm (osmotina de C. procera), como descrito por Freitas e colaboradores (2015). O fragmento de cDNA codificando esta osmotina (PrOsm) foi clonado, a proteína predita foi caracterizada e sua estrutura foi modelada in silico. A amplificação do fragmento de cDNA codificante da PrOsm foi realizado por meio de RT-PCR. O fragmento amplificado, de aproximadamente 600 pb, foi ligado a um vetor de clonagem (pGEM-T Easy). Células de E. coli DH5α eletrocompetentes foram então transformadas com os plasmídeos recombinantes (pGEM-T Easy::PrOsm) e os insertos foram sequenciados. As sequências obtidas foram submetidas a análises in silico. As osmotinas de P. rubra (PrOsms) são proteínas de aproximadamente 22 kDa, apresentando 16 resíduos de cisteína, envolvidos na formação de 8 ligações dissulfeto. A estrutura das PrOsms exibe uma arquitetura típica de TLPs, composta por três domínios. O mapeamento dos potenciais eletrostáticos mostrou que as PrOsms apresentam, em sua superfície, uma fenda de natureza acídica, localizada entre os domínios I e II. A capacidade potencial das PrOsms de interagir com os receptores de adiponectina humana (AdipoR1 e AdipoR2) foi predita in silico. O docking molecular sugere que as PrOsms são capazes de interagir com os receptores de adiponectina, de forma similar a AdipoQ, sendo portanto potenciais alvos terapêuticos para o controle de doenças relacionadas à obesidade, incluindo diabetes tipo 2 e síndrome metabólica.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Introducción: La Periodontitis Apical Asintomática (PAA) se define como la inflamación y destrucción del periodonto apical de origen pulpar. Durante la patogénesis de la PAA son liberadas citoquinas, éstas a su vez podrían inducir la secreción de Proteína C Reactiva (PCR). PCR se ha asociado a eventos proinflamatorios y anti-inflamatorios que serían capaces de participar en la patogénesis de la PAA y en potenciales respuestas sistémicas. Sin embargo, a la fecha, no se ha determinado la presencia de PCR en lesiones apicales (LPA) de dientes con PAA. Objetivo: Comparar los niveles de PCR en LPA de dientes con PAA y en ligamento periodontal sano (LS). Materiales y Métodos: Se incluyeron muestras de LS a partir de premolares con indicación de extracción por ortodoncia (n=39) y de LPA en dientes con diagnóstico clínico de PAA (n=43). Las muestras se homogeneizaron para determinar la concentración de proteínas totales (CPT) mediante método de ácido bisciconínico (BCA) y los niveles de PCR mediante plataforma MAGPIX®. Para la determinación de normalidad de la distribución de los datos se utilizó el test Shapiro Wilk. El análisis estadístico se realizó mediante test de Mann-Whitney con el programa Stata V.11. Resultados: La CPT en homogeneizados de dientes con diagnóstico de PAA fue significativamente mayor que en muestras de LS. PCR se encontró presente en muestras de PAA y LS. Los niveles de PCR fueron significativamente mayores en homogeneizados de LPA de dientes con diagnóstico de PAA comparado con homogeneizados de LS. Conclusiones: Los niveles de PCR se encuentran significativamente elevados en homogeneizados de LPA en asociación con la respuesta inflamatoria local, mientras que niveles basales se asociarían con la homeostasis del III periodonto apical. Esta proteína podría participar en el desarrollo de la LPA y dadas sus propiedades, podría inducir una potencial respuesta inflamatoria sistémica.