Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-17T13:44:52Z No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 230742 bytes, checksum: fe43e3f6b855433861d07e033d54c7d6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-17T13:44:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 230742 bytes, checksum: fe43e3f6b855433861d07e033d54c7d6 (MD5) Previous issue date: 2001-07-31 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Este estudo foi realizado para avaliar níveis de proteína bruta (PB) em ração para suínos em fase inicial de crescimento, mantidos em ambiente de baixa temperatura (15°C). Foram utilizados 60 leitões mestiços (Landrace x Large White), machos castrados, com peso inicial médio de 15,1 ± 0,50 kg e idade média de 56 ± 3,6 dias, distribuídos em delineamento experimental de blocos ao acaso, com cinco tratamentos (17,0; 18,0; 19,0; 20,0 e 21%), seis repetições e dois animais por unidade experimental. As rações e a água foram fornecidas à vontade. Os níveis de PB da ração influenciaram o ganho de peso diário, que aumentou de forma quadrática até 19,6%. A conversão alimentar também variou de forma quadrática com o nível de PB, melhorando até o nível de 20%. Os consumos de ração e de energia digestível diários não foram influenciados pelos tratamentos. Embora o consumo de lisina diário tenha aumentado de forma linear, o modelo LRP foi o que melhor se ajustou aos dados, estimando em 20% o nível de PB, a partir do qual o consumo de lisina permaneceu no platô. Os tratamentos influenciaram a taxa de deposição de proteína que aumentou de forma linear, enquanto a de gordura não variou. Concluiu-se que o nível de 20% de PB da ração, associado a um consumo de 233 e 10,7 g de proteína e de lisina, respectivamente, promove os melhores resultados de desempenho para suínos machos castrados de 15 a 30 kg, mantidos em ambiente de baixa temperatura. / Committee members: Juarez Lopes Donzele and Aloízio Soares Ferreira. This study was conduced to evaluate the levels of crude protein (CP) in diets for barrows in initial growing phase kept in environment at low temperature (15oC). Sixty crossbred barrows with initial mean weight of 15.1 + 0.50 kg and 56 + days old, were distributed in an experimental design of randomized blocks with five treatments, six replications and two animals per experimental unit. The diet and water was offered ad libitum. The crude protein diet levels influenced daily feed gain, that increased in a quadractic way up to 19.6%. The feed:gain ratio also changed in a quadractic way with the CP level increasing up to 20%. The feed and digestible energy daily intake were not influenced by the treatments. Although the lysine intake has increased in a linear way the LRP model was the one that better adjusted to the data, estimanting in the 20% the level of PB from that the lysine intake reached a plateau. The treatments influenced the protein deposition rate that increased linearly while the fat deposition rate did not change. It was concluded that the crude protein level of 20,0% in the diet, associated with a daily intake of 233 and 10,7g of protein and lysine respectively, promoted the best results of performance for barrows from 15 to 30 kg, kept in environment at low temperature.

SILVA NETO, João Xavier da. Purificação, caracterização bioquímica e atividade contra Candida spp. de uma nova proteína ligante à quitina de sementes de Moringa oleifera LAM. 2015. 107 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by Anderson Silva Pereira (anderson.pereiraaa@gmail.com) on 2017-01-03T21:25:00Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_jxsilvaneto.pdf: 2404793 bytes, checksum: 93a0fd622fcab8a18f01b51110307929 (MD5) / Approved for entry into archive by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2017-01-10T19:09:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_jxsilvaneto.pdf: 2404793 bytes, checksum: 93a0fd622fcab8a18f01b51110307929 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-10T19:09:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_jxsilvaneto.pdf: 2404793 bytes, checksum: 93a0fd622fcab8a18f01b51110307929 (MD5) Previous issue date: 2015 / Candida species encompass a group of yeast that normally lives on the skin and mucous surfaces of human beings, in which the infectious disease candidiasis can occur, with severe consequences particularly for immunocompromised patients. The available antifungal drugs used for the candidiasis treatment are usually toxic and can lead to the development of resistant strains. A promising alternative to the conventional treatments is the use of plant proteins. Moringa oleifera is a plant with valuable nutritional and medicinal properties, including antimicrobial activity. This work aimed to purify a chitin-binding protein from M. oleifera seeds and to evaluate its antifungal properties against Candida species. Mo-CBP2 (Mo: Moringa oleifera; CBP: Chitin Binding Protein) was purified from the albumin fraction of M. oleifera seeds through chitin affinity chromatography followed by cation exchange chromatography. Mo-CBP2 represented about 0.14% of the total seed protein and appeared as a single band on native PAGE. By mass spectrometry, Mo-CBP2 presented 13,160 Da. However, in contrast, after native gel filtration chromatography (pH 7.5) two protein peaks with molecular masses of 33.0 and 66.0 kDa emerged from Mo-CBP2. By SDS-PAGE, Mo-CBP2 migrated as a single band with an apparent molecular mass of 25.0 kDa. Nevertheless, Tricine-SDS-PAGE of Mo-CBP2 under non-reduced conditions revealed two protein bands in the range of 13.0 and 17.0 kDa. After DTT and β-mercaptoethanol treatments, Mo-CBP2 appeared as been composed of masses of 7.0 and 4.0 kDa. Altogether, these results suggest that Mo-CBP2 exists in different oligomeric forms. Moreover, Mo-CBP2 is a basic glycoprotein (pI 10.9) with 4.1% sugar, with did not display hemagglutinating or hemolytical activity upon rabbit erythrocytes. A comparative analysis of the sequence of triptic peptides from Mo-CBP2 in solution, after LC-ESI-MS/MS, revealed similarity with other M. oleifera proteins, as the 2S albumin Mo-CBP3. Mo-CBP2 possesses in vitro antifungal activity against Candida albicans, C. parapsilosis, C. krusei and C. tropicalis, with MIC ranging from 9.45 to 37.9 µM. In addition, Mo-CBP2 (18.9 µM) increased the cell membrane permeabilization and oxigen reactive species production in C. albicans and promoted degradation of circular plasmid DNA (pUC18) from Escherichia coli. The results presented in this work point out the potential of Mo-CBP2 as a new antifungal protein active against Candida spp / Candida ssp. compreendem um grupo de leveduras que normalmente vivem na pele e mucosas do homem, podendo ocasionar candidíase, com consequências graves particularmente para indivíduos imunocomprometidos. Os principais antifúngicos utilizados no tratamento da candidíase são tóxicos e podem levar ao aparecimento de cepas resistentes. Uma alternativa promissora aos tratamentos convencionais é o uso de proteínas vegetais. Moringa oleifera é uma planta de grande valor nutricional e medicinal, com atividade antimicrobiana. Este trabalho objetivou purificar uma proteína ligante à quitina de sementes de M. oleifera e avaliar sua atividade antifúngica contra espécies de Candida. Mo-CBP2 (Mo: Moringa oleifera; CBP: “Chitin Binding Protein”) foi purificada a partir da fração albumina de sementes de M. oleifera por cromatografia de afinidade em matriz de quitina, seguida de cromatografia de troca catiônica. Mo-CBP2 representou em torno de 0,14% da proteína total da semente e se apresentou como uma única banda na eletroforese em condição nativa. Por espectrometria de massas, Mo-CBP2 é uma proteína de 13.160 Da. Em contraste, Mo-CBP2 emergiu em dois picos, com massas moleculares correspondentes a 33,0 e 66,0 kDa, após cromatografia de filtração em gel (pH 7,5). Mo-CBP2 apresentou-se como uma única banda proteica com massa molecular aparente de 25,0 kDa quando analisada por PAGE-SDS. Todavia, em Tricina-SDS-PAGE, Mo-CBP2, em condições não redutoras, resultou em duas bandas proteicas, uma na faixa de 13,0 kDa e outra superior a 17,0 kDa e, após tratamento com DTT e β-mercaptoetanol, mostrou bandas com massas moleculares aparentes de 7,0 e 4,0 kDa. Os dados em conjunto sugerem que Mo-CBP2 existe em diferentes formas oligoméricas. Mo-CBP2 é uma glicoproteína básica (pI 10,9) com 4,1% de carboidratos, não apresentando atividade hemaglutinante ou hemolítica frente a eritrócitos de coelho. A análise comparativa das sequências dos peptídeos trípticos obtidos a partir da Mo-CBP2 em solução, após LC-ESI-MS/MS, revelou similaridade com outras proteínas de M. oleifera, como a albuminas 2S denominada de Mo-CBP3. Mo-CBP2 foi capaz de inibir, in vitro, o crescimento de C. albicans, C. parapsilosis, C. krusei e C. tropicalis, com CIM variando de 9,45 a 37,9 µM. Em adição, Mo-CBP2 (18,9 µM) aumentou a permeabilidade da membrana celular e induziu a produção de espécies reativas de oxigênio em C. albicans, além de ter degradado o DNA do plasmídeo circular (pUC18) de Escherichia coli. Os resultados obtidos apontam para o potencial de uso da Mo-CBP2 como uma nova proteína antifúngica ativa contra Candida spp.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-10-05T11:21:18Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2080347 bytes, checksum: d327c3cb16cc05583b3dd78207efa749 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-05T11:21:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2080347 bytes, checksum: d327c3cb16cc05583b3dd78207efa749 (MD5) Previous issue date: 2002-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As anormalidades lipídicas são de grande importância, devido a sua ligação com a doença vascular aterosclerótica e com a doença cardíaca coronariana. Assim, objetivou-se comparar os efeitos da ingestão do flavonóide crisina, xantona, caseína e proteína de soja sobre a diminuição do colesterol e suas frações, triglicerídeos e glicose, sorológicos, deposição lipídica no tecido hepático e redução do peso corporal total. Coelhos da raça albino foram divididos durante 30 dias nos seguintes grupos: colesterol + ácido cólico + ração (hipercolesterolêmicos) e ração pura (controle), em todos os três experimentos, sendo que no primeiro experimento houveram mais 2 grupos, um para colestiramina e outro para crisina, no segundo experimento, um para caseína, um para proteimax e outro para colestiramina e, no terceiro experimento, um para xantona, além daqueles mencionados anteriormente. Os níveis de colesterol plasmático, triglicerídeos, LDL-c e HDL-c foram medidos, no 16° e 31° dias de experimento, utilizando kits enzimáticos e os resultados foram expressos em mg/dL. Foram analisadas amostras de tecido hepático, sendo os cortes fixados em historesina e paraplast. Observou-se a indução significativa de hipercolesterolemia nos animais que receberam ração + colesterol + acido cólico. Foi verificada redução nas taxas de colesterol, LDL-c, HDL-c, triacilgliceróis e glicose, menor deposição de gotículas de gordura nos hepatócitos bem como uma redução no peso corporal nos animais que receberam crisina. Conclui-se que a ingestão do flavonóide crisina exerceu proteção contra o aumento do colesterol plasmático e a deposição de triacilgliceróis nos hepatócitos evitando a esteatose e, conseqüente, degeneração hepática. Ainda, exerceu um efeito preventivo no ganho de peso corporal total. No segundo experimento, verificou-se maior aumento de colesterol, LDL-c e triglicerídeos no grupo que recebeu caseína, bem como maior deposição de gotículas de gordura nos hepatócitos, em comparação com o grupo que recebeu proteimax. Em contrapartida, houve aumento proporcional aos níveis de colesterol total nos níveis de HDL para o grupo que recebeu proteimax. Observou-se ainda redução no peso corporal total desencadeado pela proteína de soja. Verificou-se que a ingestão de maior quantidade de proteína vegetal na dieta em substituição a proteína animal, pode ser um fator de prevenção ao ganho de peso corporal, aumento do colesterol plasmático e a deposição de triacilgliceróis nos hepatócitos, levando à esteatose e a conseqüente degeneração hepática. No terceiro experimento, verificou-se um acréscimo nas taxas de colesterol, LDL- c, HDL-c e glicose no grupo que recebeu xantona, e decréscimo nas taxas de triacilgliceróis para este grupo. Não se verificou acúmulo de gotículas de gordura nos hepatócitos para este grupo, mas observou-se a ocorrência de múltiplas lesões focais nestas células. A xantona provocou redução no peso corporal total. Conclui-se que a ingestão de xantonas exerce proteção contra a elevação do peso corpóreo e da concentração de triacilgliceróis sanguíneos / The lipid anormalities are of great importance due to their link between the atherosclerotic vascular disease and between the coronary disease. For this reason, the aim of this research was to compare the effects of the ingestion of flavonoid chrysin, xanthone, casein and soy protein over the reduction of the serum cholesterol and its fractions, triglicerides and glucose, lipid deposition in the hepatic tissue, and reduction of the total body weight. During thirty days, rabbits of the albinic breed were divided into the following groups: cholesterol + colic acid + ration (hypercholesterolemics) and pure rations (control), in all the three experiments. However, in the first experiment there were two more groups, one for cholestyramine and other one for chrysin, in the second experiment, one group for casein, one for proteimax and other one for cholestyramine, and in the third experiment, one group for xanthone, besides those mentioned before. The levels of serum cholesterol, triglicerídeos, LDL-c and HDL-c were measured on the sixteenth day and on the thirty-first day of the experiment using enzymatic kits and the results were expressed in mg/dl. Hepatic tissue samples were analyzed, being the cuts fixed on historesin and paraplast. A significant induction of hypercholesterolemie in the animals which received rations + cholesterol + colic acid was observed. A reduction in the rates of cholesterol, LDL-c, HDL-c, triglycerides and glucose, smaller deposition of drops of fat in the live cells as well as a reduction of the body weight of the animals which received chrysin were checked. One can conclude that the ingestion of the flavonoid chrysin exerted protection against the increase of serum cholesterol and the deposition of triglycerides in the liver cells, avoiding the steatosis and the consequent hepatic degeneration. It also exerted a preventive effect on the total body weight gain. In the second experiment, it was observed a larger increase of cholesterol, LDL-c and triglycerides in the group which received casein as well as a larger deposition of drops of fat in the liver cells, in comparison with the group which received proteimax. On the other hand, there was a proportional increase to the levels of total cholesterol in the levels of HDL for the group which received proteimax. A reduction of the total body weight broken out by the soy protein was also observed. It was verified that the ingestion of a larger quantity of vegetable protein on the diet in place of animal protein can be a factor of prevention in the body weight gain, increase of plasmatic cholesterol and the deposition of triglycerides in the liver cells which could lead to steatosis and consequent hepatic degeneration. In the third experiment, it was verified an increase of the rates of cholesterol, LDL-c, HDL-c and glucose in the group which received xanthone, and reduction of the rates of triglycerides for this group. The accumulation of drops of fat in the liver cells was not observed in this group, but it was verified the occurrence of multiple focal injuries in these cells. The xanthone caused the reduction of the total body weight. One can conclude that the ingestion of xanthone exerts protection against the increase of the body weight and of the concentration of blood triglycerides. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-10-07T10:29:48Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 544655 bytes, checksum: ec594c65648b12d0578f2d1c43498d2a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-07T10:29:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 544655 bytes, checksum: ec594c65648b12d0578f2d1c43498d2a (MD5) Previous issue date: 2005-03-28 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / O presente trabalho está inserido no Programa de Melhoramento da Qualidade e do Sabor da Soja do Bioagro/UFV e tem como objetivo principal a obtenção e caracterização bioquímico-nutricional de uma linhagem de soja com sementes livres de KTI (inibidor de tripsina Kunitz) e lectina. Foram construídos primers específicos para identificar os alelos recessivos dos genes que codificam KTI e lectina. Após a obtenção de uma linhagem contendo elevado teor de proteína e ausência de KTI e lectina, a eficiência de recuperação das características do genitor recorrente com elevado teor protéico foi avaliada. Para isso, utilizou-se a técnica de RAPD para o cálculo da distância genética entre os genótipos doadores do elevado teor de proteína (Monarca HyPro), ausência de KTI (BRM925297), ausência de lectina (Columbia) e a linhagem obtida. A similaridade genética média entre a linhagem final e a isolinha Monarca HyPro foi de 98%. Este resultado revelou um bom índice de recuperação do genoma do recorrente. Os valores de atividade de inibição de tripsina nos genótipos com presença e ausência de KTI foram, respectivamente, 390,33 e 134,40 mg de tripsina inibida/g de proteína, diferindo estatisticamente entre si. A composição química centesimal da isolinha com ausência de KTI e lectina mostrou-se de acordo com a literatura. A avaliação da qualidade protéica das sementes de soja livres de KTI e lectina foi conduzida por meio de ensaios biológicos com ratos Wistar, durante 14 dias. Os índices avaliados foram digestibilidade verdadeira, PER (coeficiente de eficiência protéica), NPR (razão protéica líquida) e NPU (utilização protéica líquida). Os ratos alimentados com a soja livre de KTI e lectina mostraram uma melhor digestibilidade em relação à variedade comercial, com valores próximos aos da caseína, considerada uma proteína padrão. A integridade das microvilosidades do epitélio intestinal de ratos alimentados com dietas à base de soja convencional ou soja livre de KTI e lectina foi avaliada. Os animais alimentados com soja convencional apresentaram um maior nível de alterações na morfologia das microvilosidades intestinais, quando comparados àqueles alimentados com a soja livre de KTI e lectina. Concluiu-se que a retirada genética do KTI e da lectina melhorou significativamente a digestibilidade das proteínas da soja, eliminando a necessidade de se empregar elevadas temperaturas no processamento da soja. / This study is inserted into the “Programa de Melhoramento da Qualidade e do Sabor da Soja”, Bioagro/UFV. It is mainly targeted to the obtainment and nutritional-biochemical characterization of a soybean line, which the seeds are free from KTI (Kunitz trypsin inhibitor) and lectin. Specific primers were obtained in order to identify the recessive alleles of the genes codifying the KTI and lectin. After the obtainment of a line with high protein content and absence of KTI and lectin, an evaluation was performed for the efficiency in recovering the characteristics of the recurrent genitor with high protein content. So, the RAPD technique was used to calculate the genetic distance among the genotypes giving the high protein content (Monarca HyPro), absence of KTI (BRM925297), absence of lectin (Columbia), and the obtained line. The average genetic similarity between the final line and the isoline Monarca HyPro reached 98%. This result revealed a good recovery index of the recurrent’s genome. The values of the trypsin inhibition activity in genotypes with presence and absence of KTI were 390.33 and 134.40 mg of inhibited trypsin/g protein respectively, therefore statistically differing from each others. The centesimal chemical composition of the isoline with absence of both KTI and lectin showed to be according to the available literature. The evaluation of the protein quality in the soy seeds KTI- and lectin-free was accomplished by biological 14-day assays with Wistar rats. The following indices were evaluated: true digestibility, PER (protein efficiency rate), NPR (net protein rate) and NPU (net protein utilization). The rats fed soybean without both KTI and lectin showed a better digestibility for the commercial variety, as the obtained values were near the casein’s that is considered as a standard protein. The integrity of the brushborder microvillous in the intestinal epithelium of the rats fed diets based on either the conventional soybean or KTI- and lectin-free soybean were evaluated. The animals fed conventional soybean showed a higher level of changes in the morphology of their intestinal microvillous, compared with those fed the soybean without both KTI and lectin. According to the results, it is concluded that the genetic removal of both KTI and lectin significantly improved the digestibility of the soybean proteins, therefore eliminating the need for high temperatures in the soybean processing. / Tese importada do Alexandria

SOUZA, Walysson Alves Tocantins de. Análise imunohistoquímica da expressão das proteínas p53 e ki-67 em adenomas colorretais. 2010. 64 f. Dissertação (Mestrado em Cirurgia ) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2010. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-03-14T13:18:50Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_watsouza.pdf: 582470 bytes, checksum: 8bb0faf57768cfd56f511ae38899fe9d (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-03-14T13:20:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_watsouza.pdf: 582470 bytes, checksum: 8bb0faf57768cfd56f511ae38899fe9d (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-14T13:20:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_watsouza.pdf: 582470 bytes, checksum: 8bb0faf57768cfd56f511ae38899fe9d (MD5) Previous issue date: 2010 / Ki-67 (p=0,02) expression between adenomas with high and low grade dysplasia, greater in the first group. There was greater expression of Ki-67 protein in the rectal adenomas than colic adenomas (p=0,02). There was no relation between the expression of the two proteins in the sample. / O objetivo deste estudo, é avaliar a expressão das proteínas p53 e Ki-67 em adenomas colorretais, suas relações com características clinico-patológicas e avaliar a relação entre as duas proteínas. A amostra consistiu de 50 pólipos adenomatosos encontrados em pacientes submetidos a exames colonoscópicos. Após a realização de polipectomia, os pólipos eram conservados em solução tamponada de formalina a 10% e submetidos à rotina de preparo de cortes e lâminas e coloração pela hematoxilina-eosina para confirmação da natureza adenomatosa. Realizou-se imunohistoquímica específica para as proteínas p53 e Ki-67 pelo método imunoenzimático da streptoavidina-biotina-peroxidase para cada adenoma. A proteína p53 foi positiva em 18% dos adenomas e a proteína Ki-67, expresso como índice (i.Ki-67), obteve média de 0,49. Houve diferença estatisticamente significante na expressão de p53 (p=0,0003) e Ki-67(p=0,02) entre os adenomas com alto e baixo grau de displasia, sendo maior no primeiro grupo. Encontrou-se, ainda maior expressão da proteína Ki-67 nos adenomas retais em relação aos de localização cólica (p= 0,02). Não houve relação entre a expressão das duas proteínas, na amostra

NEPOMUCENO, D. R. Clonagem e expressão de uma lectina de Artocarpus incisa L. (Frutalina) em Escherichia coli. 2008. 81 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2008. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-11-27T19:23:51Z No. of bitstreams: 1 2008_dis_drnepomuceno.pdf: 815376 bytes, checksum: 17de51e5080e91f90b2ad84ac669dbba (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-02-27T19:42:31Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_dis_drnepomuceno.pdf: 815376 bytes, checksum: 17de51e5080e91f90b2ad84ac669dbba (MD5) / Made available in DSpace on 2015-02-27T19:42:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_dis_drnepomuceno.pdf: 815376 bytes, checksum: 17de51e5080e91f90b2ad84ac669dbba (MD5) Previous issue date: 2008 / The lectins constitute biotechnological tools of fundamental importance in hystochemical and cytochemical studies for the detection of tissue glycoconjugates. Among their applications are the identification of membrane receptors and the detection of neoplastic characteristic structures. Frutalin, an -D-galactose-binding lectin from Artocarpus incise seeds, has already been used in the hystochemical detection of thyreoid and breast neoplasia. In this work was made a study of the cloning and expression of the frutalin gene in Escherichia coli Origami (DE3) cells and was determined the three-dimensional structure of this protein through homology modeling. The frutalin gene cloning was accomplished from the product on RT-PCR with seeds in distinct stages of development of the Artocarpus incisa fruits. Twelve clones were obtained, from which five were sequenced. The frutalin gene was expressed in E. coli using the pET15b expression vector. A recombinant lectin (rFrutalin) was expressed by growing the bacteria in the presence of isopropyl -D-thiogalactopyranoside 1mM. All the recombinant lectin was found in an insoluble aggregated form as inclusion bodies. The recombinant lectin had a higher molecular mass (19,2 kDa) than the native lectin (15 kDa) as estimated by SDS-PAGE and Western blot analyses, showing that the recombinant single chain Frutalin is not processed in E. coli cells. The models generated for the clones obtained indicate that the mutations do not change the molecules active sites. Mutations in the clones obtained suggest the occurrence of isoforms of this protein. / As lectinas constituem ferramentas biotecnológicas de fundamental importância em estudos histoquímicos e citoquímicos para a detecção de glicoconjugados nos tecidos. Entre estas aplicações, destacam-se a identificação de receptores de membrana e a detecção de estruturas características de neoplasias. A Frutalina, uma lectina -D-galactose-ligante encontrada em sementes de Artocarpus incisa, já foi utilizada na detecção histoquímica de lesões malignas de mama e tireóide. No presente trabalho foi realizada a clonagem e expressão do gene da frutalina em células de Escherichia coli Origami (DE3) e foi determinada a estrutura tridimensional dessa proteína através da modelagem por homologia. A clonagem do gene da frutalina foi realizada a partir do produto amplificado da RT-PCR de sementes em diferentes estágios de maturação dos frutos de A. incisa. Foram obtidos 12 clones, dos quais 5 foram seqüenciados. A lectina recombinante foi expressa como cadeia única, formada pela cadeia beta com 20 resíduos, ligada a um peptídeo de ligação com quatro resíduos, e a cadeia alfa com 133 resíduos. A expressão da lectina foi indicada pelo aparecimento de uma banda protéica com massa molecular aparente de 19,2 kDa, superior a da lectina nativa (15 kDa), após a indução com IPTG 1mM. A lectina recombinante foi mantida exclusivamente em corpos de inclusão e foi reconhecida imunologicamente por anticorpos policlonais anti-Frutalina. Os modelos gerados para os clones obtidos indicam que as mutações ocorridas não alteram os sítios de ligação a carboidratos das moléculas. As mutações nos clones obtidos sugerem a ocorrência de isoformas dessa proteína.

ALMEIDA FILHO, L. C. P. Efeito de inibidores de tripsina obtidos de sementes de Leucaena leucocephala (Lam) R. de Witt sobre o desenvolvimento de Aedes aegypti. 2013. 93 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by Daniel Eduardo Alencar da Silva (dealencar.silva@gmail.com) on 2015-01-07T19:53:22Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_lcpafilho.pdf: 1557437 bytes, checksum: 52850a797f2df3dd2adc5ccac27318ca (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2016-01-29T20:17:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_lcpafilho.pdf: 1557437 bytes, checksum: 52850a797f2df3dd2adc5ccac27318ca (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-29T20:17:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_lcpafilho.pdf: 1557437 bytes, checksum: 52850a797f2df3dd2adc5ccac27318ca (MD5) Previous issue date: 2013 / Dengue fever is currently the most important arboviral disease in the world, being widely distributed among the continents and having increased incidence areas due to climate change. One of the reasons that makes it so important is the absence of an effective vaccine against the four virus serotypes. So, to control this disease is necessary to fight the disease vector, the mosquito Aedes aegypti. Nowadays, health programs use synthetic insecticides to control the mosquito populations. However, the emergence of resistant populations to these insecticides is an obstacle to combating this mosquito. Thus, it is necessary to search for new insecticides or molecules capable of enhancing the toxic effect of current insecticides. The present study aimed to obtain trypsin inhibitors from Leucaena leucocephala seeds and evaluate the insecticidal potential of these molecules against Ae. aegypti larvae survival and development. For this, the proteins of L. leucocephala seeds were extracted, fractionated and subjected to anhydrotrypsin affinity chromatography to obtain a trypsin-enriched fraction (called sLlTi), which was biochemically characterized and used at a concentration of 0.3 mg/mL in assays of larvae development. Biochemical characterization of sLlTi concluded that the inhibitors are heat resistant (the activity was retained after heating for 30 min at 100 ° C), showed considerable resistance to the reducing agent DTT and reduction of their inhibitory activity against trypsin was demonstrated only when incubated with 100 mM DTT for 120 min. The inhibitor is also resistant to pH changes in a range from 2 to 10. The reverse zymograms revealed the presence of protein bands with apparent mass near 20 kDa. Biological testing in vitro showed that the sLlTi showed trypsin inhibitory activity greater than 90% and that sLlTi is also capable to inhibit Ae. aegypti digestive enzymes by 70%. After two-dimensional electrophoresis isoforms with pI ranging from 4 to 7, approximately, were observed. These inhibitors were able to inhibit proteases of Ae. aegypti in vivo by 56%, and was capable to delay the larval development after incubation for 10 days. Thus, sLlTi contains proteins with promising insecticidal action against dengue vector. / A dengue é considerada, hoje, a arbovirose mais importante do mundo, tendo distribuição e ressurgência em todos os continentes e aumento das áreas de incidência devido às mudanças climáticas. Um dos motivos que a torna tão importante é ausência de uma vacina eficaz para os quatro sorotipos do vírus. Assim, para o controle dessa doença é necessário que haja o combate ao vetor, o mosquito Aedes aegypti. Os atuais programas de combate ao mosquito dispõem de inseticidas sintéticos, contudo o surgimento de populações resistentes a esses inseticidas representa um entrave ao combate deste mosquito. Desta forma, torna-se necessária a busca por novas moléculas inseticidas ou capazes de potencializar o efeito tóxico dos inseticidas atuais. Assim, o presente trabalho teve por objetivo a obtenção de inibidores de tripsina de sementes de Leucaena leucocephala e avaliação do potencial inseticida dessas moléculas sobre as larvas do mosquito Ae. aegypti. Para isso, as proteínas presentes nas sementes de L. leucocephala foram extraídas, fracionadas e submetidas à cromatografia de afinidade a anidrotripsina acoplada a sepharose 4B, para a obtenção de uma fração rica em inibidores de tripsina denominada sLlTi, a qual foi caracterizada bioquimicamente e utilizada em concentração de 0,3 mg/mL nos ensaios de desenvolvimento das larvas do mosquito. A caracterização bioquímica do sLlTi permitiu concluir que os inibidores são termorresistentes (a atividade foi mantida após aquecimento por 30 min. a 100 °C), apresentam considerável resistência ao agente redutor (DTT), tendo decaimento da sua atividade inibitória frente a tripsina apenas quando incubado com 100 mM de DTT por 120 min, o mesmo, também, é resistente às variações de pH na faixa de 2 a 10. Os zimogramas reversos revelaram a presença de bandas proteicas com massa molecular aparente de 20 kDa. Testes biológicos in vitro mostraram que o sLlTi apresenta atividade inibitória superior a 90% frente a tripsina e 70% frente ao homogenato intestinal de larvas de Ae. aegypti. Após a realização de eletroforese bidimensional, foi possível a visualização de isoformas com pI entre 4 e 7, aproximadamente. Esses inibidores são capazes de inibir as proteases de larvas de Ae. aegypti in vivo em 56%, causando retardo no desenvolvimento e cerca de 70% de mortalidade. Assim, o sLlTi possui potencial ação inseticida contra o mosquito vetor da dengue.

A síndrome de Li-Fraumeni (SLF) é uma síndrome rara de predisposição a câncer associada a mutações germinativas no gene supressor tumoral TP53. As vias de sinalização da proteína p53 estão envolvidas na regulação da apoptose, das paradas do ciclo celular, da senescência e do reparo de danos no DNA. As mutações em p53 mais comumente encontradas em tumores estão distribuídas ao longo do domínio de ligação ao DNA, incluindo a mutação G245S associada à SLF. No entanto, a mutação mais frequentemente associada à SLF nas regiões Sul e Sudeste do Brasil é a mutação R337H, que afeta o domínio de oligomerização de p53. Assim, o objetivo deste estudo foi analisar os efeitos em células de p53 mutantes associadas à síndrome de SLF na viabilidade em condições basais e na sobrevivência celular sob estresse genotóxico. Células p53 null da linhagem NCI-H1299 foram transfectadas com vetores para a expressão de p53 wt e das mutantes G245S e R337H, e ensaios celulares foram realizados. A mutante R337H inibiu a formação de colônias e diminuiu a viabilidade celular de forma similar ao observado para células com expressão p53 wt, enquanto G245S demonstrou menor influência sobre a viabilidade e sobre a proliferação das células. Após submetidas a estresse genotóxico induzido por meio de exposições à radiação UVC, células com expressão de R337H mostraram-se mais sensíveis à morte celular mesmo quando expostas à baixa dose de UVC. Já as células com a expressão de G245S apresentaram aumento nas taxas de apoptose tardia somente quando submetidas a altas doses de radiação de UVC, assim como nas células com expressão de p53 wt. Dessa forma, foram observadas atividades funcionais similares entre R337H e p53 wt quanto à influência sobre a viabilidade e sobre a proliferação celular, enquanto células com expressão de G245S apresentaram fenótipo celular mais próximo ao p53-null. Todavia, G245S demonstrou atividade próxima a de p53 wt ao conferir proteção às células contra morte induzida pela radiação UVC, e a mutante R337H gerou maior sensibilidade para morte celular em condições de estresse genotóxico. / Li-Fraumeni syndrome (LFS) is a hereditary cancer predisposition disorder associated with germline mutations in the TP53 tumor suppressor gene. The p53 signaling pathways are involved in the regulation of apoptosis, cell cycle arrest, senescence and DNA repair. The p53 mutations found in tumors are commonly distributed along the DNA binding domain, including the G245S mutation associated with LFS. However, the most frequent p53 mutation associated with LFS in Southeast and Southern Brazil is the R337H mutation, which affects the oligomerization domain of p53. Thus, the aim of this study is to analyze the effects of mutant p53 associated with LFS on cell viability at basal conditions and on cell survival in genotoxic stress. Null-p53 NCI-H1299 cell line were transfected with vectors for the expression of wild-type, G245S and R337H p53, and cell assays were performed. The R337H mutant inhibited the colony formation and decreased the cell viability similar to that observed in cells with wt p53 expression, while G245S demonstrated less influence on cell viability. After undergoing genotoxic stress induced by UVC radiation exposures, cells with R337H expression were more sensitive to cell death when exposed to low UVC dose. Cells with G245S expression showed an increase in late apoptosis rates only when subjected to high doses of UVC radiation, as well as cells with wt p53 expression. Thus, similar and functional activities were observed between R337H and wt p53 concerning influence on cell viability and proliferation, with the expression of G245S presented cellular phenotype closer to p53-null. However, G245S demonstrated to confer protection for cell death as seen for wt p53, whereas R337H generated increased of sensitivity to cell death under conditions of genotoxic stress.

Submitted by Edileide Reis (leyde-landy@hotmail.com) on 2015-04-14T16:26:47Z No. of bitstreams: 1 MÁRIO CÉSAR CARVALHO TENÓRIO.pdf: 889514 bytes, checksum: 5f38a437f7d0f025c21d3fec72d22539 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-14T16:26:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MÁRIO CÉSAR CARVALHO TENÓRIO.pdf: 889514 bytes, checksum: 5f38a437f7d0f025c21d3fec72d22539 (MD5) Previous issue date: 2014-03-27 / Estudos recentes têm demonstrado prováveis benefícios das atividades de alta intensidade, predominantemente anaeróbias na capacidade de oxidação de gorduras. Entretanto, o efeito do exercício predominantemente anaeróbio na redução da obesidade e do estado inflamatório ainda é pouco conhecido. Objetivo: Avaliar os efeitos do treinamento aeróbio versus anaeróbio sobre os níveis da proteína C reativa (PCR) de mulheres com obesidade central, bem como a associação de níveis de PCR com a composição corporal. Métodos: Vinte mulheres obesas, com baixo condicionamento cardiorrespiratório, idade 47±11 anos, IMC 31±5 Kg/m2, 95.7±9.8cm de circunferência da cintura, 38.8 ± 4.5% de gordura corporal foram randomizadas em dois grupos: Treinamento Contínuo (TCO - intensidade a -20% do limiar ventilatório - LV), ou Treinamento Intervalado (TIN - 2 min de estímulo a 120% do LV e 2 min de recuperação em 80% do LV), durante 10 semanas, duas vezes por semana, sessões de 20 a 40 minutos. Antes e depois do período de treinamento foi coletada amostra de sangue. Resultados: As medianas (intervalo interquartil) da PCR respectivamente pré e pós treinamento foram TCO: 2,2 mg/L (0,6-4,1) vs 2,1 mg/L (0,8-5,5) p=0,75, TIN: 3.9 mg/L (0.7- 8.6) vs. 3.2 mg/L (1.2-5.7) p = 0.90. Da mesma forma, não houve diferença significante na comparação dos deltas (Δ) da PCR entre os grupos, p=0,70. Na análise intragrupo, ambos os grupos apresentaram diminuição da circunferência de cintura (TIN=91±9cm pré, 88±10cm pós, Δ= -2±3cm, p=0,03; TCO=102±9cm pré, 99±8cm pós, Δ= -3±3 cm, p=0,04), porém, apenas o grupo TIN obteve redução significante de peso (71.8±13kg pré, 70.6±13kg pós, Δ= -1±1 kg, p=0,01) e de IMC (28±6 pré, 28±1 pós Kg/m2, Δ= 0.4±0.4 Kg/m2, p=0,01) vs TCO (Peso pré 84.6±11kg, peso pós 84.3±10kg, Δ=-0.2±0.9, p=0,53; IMC pré 34,3±6, pós 34,2±6, Δ=-0.1±0.3, p=0,52). Entretanto, as diminuições nos marcadores de obesidade apresentados não foram suficientes para influenciar significantemente a correlação entre os deltas dessas variáveis e os de PCR no grupo TIN (Δ IMC e ΔPCR, rho= -0,25, p=0,47; ΔCC e ΔPCR, rho= -0,09, p=0,78), e no grupo TCO (ΔIMC e ΔPCR, rho=0,44, p=0,26; ΔCC e ΔPCR, rho= 0,15, p=0,73). Conclusão: Os dados sugerem que programas de exercício de baixo volume, independentemente de suas intensidades, não alteram os níveis da PCR em mulheres com obesidade central.

Programa de Pós-Graduação em Saúde e Nutrição. Escola de Nutrição, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2015-05-20T21:01:57Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoPotencialAntioxidanteLicopeno.pdf: 1200572 bytes, checksum: e394f89e5e877613399c2cb53ae6440a (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-05-22T14:57:45Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) DISSERTAÇÃO_AvaliaçãoPotencialAntioxidanteLicopeno.pdf: 1200572 bytes, checksum: e394f89e5e877613399c2cb53ae6440a (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-22T14:57:45Z (GMT). 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A ativação aberrante da PKC está relacionada a doenças como o câncer e o diabetes. A PKC pode ser ativada por EROs e a produção de EROs pode requerer a ativação da PKC porque essas cinases tem um papel na ativação da NADPH oxidase. Dessa forma, a ativação da PKC e da NADPH oxidase podem elevar os níveis de EROs, causando danos celulares. Estas reações potencialmente deletérias podem ser controladas por um sistema de antioxidantes enzimáticos (superóxido dismutase - SOD e catalase - CAT) e não enzimáticos (flavonóides e carotenóides). O licopeno é um carotenóide de coloração vermelha que está presente em vários vegetais e frutas. Trata-se de um dos antioxidantes mais potentes e tem demonstrado desempenhar um importante papel na prevenção de vários tipos de câncer, incluindo o hepatocarcinoma. Sendo assim, este estudo objetivou investigar o potencial antioxidante do licopeno e avaliar o efeito deste carotenóide na via da PKC, em células SK-Hep-1, uma linhagem de hepatocarcinoma altamente invasiva. O potencial antioxidante do licopeno foi examinado através da quantificação celular de EROs e das atividades das enzimas SOD e CAT. O efeito do licopeno na via da PKC foi examinado pela quantificação celular de EROs após estimulação com PMA e ionomicina. O papel da NADPH oxidase foi avaliado através da sua inibição com DPI, um inibidor desta enzima. Nossos resultados mostram que o DPI inibiu a produção de EROs, demonstrando a importância da enzima NADPH oxidase na geração de EROs na linhagem celular estudada. O licopeno diminuiu a produção basal de EROs e aumentou a atividade da SOD. Além disso, o licopeno inibiu a produção de EROs induzida por ionomicina e PMA. Estes resultados analisados em conjunto sugerem que um dos mecanismos antioxidantes do licopeno seja através da modulação da proteína cinase C. Entretanto, mais estudos são necessários para confirmar esta hipótese. _____________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Carcinogenesis is a multistep process which can be induced and/ or modulated by chemical and physical agents, including those that induce reactive oxygen species (ROS).These species are generated by a wide variety of processes like mitochondrial respiration and NADPH oxidase. The excessive generation of ROS might oxidize cellular biomolecules and facilitate carcinogenesis-related processes. In lower doses, these molecules can act as important mediators of cell growth, adhesion, differentiation and apoptosis. ROS can, for example, modulate the PKC pathway. PKC is a family of serine/threonine kinases that regulates a variety of cell functions. Aberrant PKC activation is related to diseases such as cancer and diabetes. PKC can be activated by ROS and ROS production can require PKC activation because these kinases have a role in NADPH oxidase activation. On this way, the PKC and NADPH oxidase activation might elevate intracellular levels of ROS causing damage. These potentially deleterious reactions can be controlled by a system of enzymatic (SOD and CAT) and nonenzymatic antioxidants (flavonoids and carotenoids). Lycopene is a red colored carotenoid present in many vegetables and fruits. It‟s one of the most potent antioxidants and has been shown to play an important role in preventing from various types of cancer, including hepatoma. This study aimed to investigate the antioxidant potential of lycopene and evaluate the effect of this carotenoid on PKC pathway, in SK-Hep-1 cells, a highly invasive hepatoma cell line. The antioxidant potential of lycopene was examined by quantification of cellular ROS and of SOD and CAT activities. The effect of lycopene on PKC pathway was examined by quantification of cellular ROS after stimulation with phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) and ionomycin. The role of NADPH oxidase was examined by its inhibition with DPI, an NADPH oxidase inhibitor. Our results show that DPI inhibited ROS production, demonstrating the importance of NADPH oxidase in ROS generation in SK-Hep-1cell. Lycopene decreased basal ROS production and increased SOD activity. Furthermore, lycopene inhibit ROS by ionomycin and PMA-induced. Taken together, these results suggest lycopene antioxidant mechanisms are through modulation of protein kinase C. However, more studies are needed to confirm this hypothesis.