Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-03-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo principal desse estudo foi avaliar os mecanismos de resistência aos agentes β-lactâmicos em isolados clínicos de P. aeruginosa procedentes de dois hospitais, localizados no Brasil e nos Estados Unidos da América (EUA). Foram avaliadas 145 amostras bacterianas de P. aeruginosa recuperadas de hemoculturas, sendo 84 isolados obtidos no período de janeiro de 2000 a maio de 2002 do Hospital São Paulo - HSP (Brasil) e 61 isolados obtidos no período de janeiro de 1996 a dezembro de 2003 do Medical College of Virginia - MCV (EUA). Todas as amostras bacterianas foram submetidas ao teste de sensibilidade aos antimicrobianos, avaliado pela técnica de diluição em ágar. A atividade enzimática das carbapenemases foi avaliada pelo método de hidrólise com inibição pelo EDTA. A pesquisa de genes que codificam ESBL e carbapenemases foi realizada pela técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR), seguido por sequencimento. A transcrição dos genes mexB, mexD, mexF e mexY, que codificam os sistemas de efluxo ABM, CDJ, EFN, XY, respectivamente, da β-lactamase cromossomal ampC e da porina oprD foi avaliada pela técnica de PCR quantitativo em tempo real (qRTPCR), sendo os resultados da transcrição comparados com a cepa referência PA01. Nossos resultados demonstraram que os isolados procedentes do HSP apresentaram taxas de sensibilidade inferiores aos antimicrobianos testados comparado àquelas apresentadas pelos isolados do MCV, exceto para a ciprofloxacina. Sete isolados clínicos de P. aeruginosa do HSP apresentaram atividade carbapenemase, sendo amplificado os genes blaIMP-1 (n=1), blaIMP-16 (n=1) e blaSPM-1 (n=5). Adicionalmente, foi identificada a produção de GES-5 por uma amostra do HSP. Nenhum isolado proveniente do MCV apresentou atividade carbapenemase pela técnica espectrofotométrica ou qualquer amplificação dos genes codificadores de ESBL ou carbapenemases pesquisados. O aumento da transcrição dos genes que codificam os sistemas de efluxo avaliados foi mais frequente entre os isolados clínicos de P. aeruginosa procedentes do HSP (71,4%), em comparação com os isolados do MCV (52,4%). Os sistemas XY (41,6%) e ABM (24,6%) foram os mais frequentes entre os isolados do HSP e do MCV, respectivamente. Adicionalmente, foi avaliada a transcrição dos diferentes genes que codificam esses sistemas simultaneamente com a expressão de outros mecanismos de resistência. Entre os isolados do HSP, a associação desses diferentes determinantes de resistência foi maior que entre os isolados do MCV. A redução da transcrição de oprD foi semelhante entre os dois grupos amostrais, sendo observada em 91,6% e 91,8% dos isolados do HSP e do MCV, respectivamente. O aumento da transcrição de ampC foi observado em 30,9% e 5,0% dos isolados do HSP e MCV. O aumento da transcrição dos genes que codificam os sistemas de efluxo e/ou a redução da transcrição de oprD parecem aumentar as CIMs dos β-lactâmicos, embora a associação destes mecanismos com a produção de β-lactamases seja mais significante para o aumento da CIM. Isso pode sugerir que tais mecanismos podem favorecer a sobrevivência da P. aeruginosa sob pressão seletiva, aumentando, assim, a chance de adquirir outros determinantes de resistência aos agentes β-lactâmicos no ambiente hospitalar, e contribuindo para o surgimento de cepas altamente resistentes a esta classe de antimicrobianos. / The aim of this study was evaluate the mechanisms of β-lactams resistance in P. aeruginosa clinical isolates from two hospitals, located in Brazil and United States of America (USA). We have selected 145 P. aeruginosa isolated in blood cultures. Of those, 84 and 61 isolates were recovered from patients hospitalized in Hospital São Paulo – HSP (Brazil), and in Medical College of Virginia – MCV (USA), respectively. All strains were submitted to antimicrobial susceptibility testing by agar dilution. Investigation of carbapenemase activity of crude extracts was performed by UV spectrophotometric assays. Detection of ESBL- and MBL-encoding genes was conducted by PCR, followed by amplicon sequencing. The hyperexpression of efflux systems (ABM, CDJ, EFN and XY), AmpC chromosomal β-lactamase, as well as reduced OprD expression was evaluated by quantitative real time PCR (qRT-PCR), compared to that of PA01 reference strain. Isolates from HSP showed decreased susceptibility rates for most antimicrobials tested compared to those of MCV isolates, except for ciprofloxacin. Carbapenemhydrolysis was detected in seven P. aeruginosa from HSP, in which we have identified the MBL- encoding genes blaIMP-1 (n=1), blaIMP-16 (n=1) and blaSPM-1 (n=5). In addition, the production of GES-5 was observed in a single isolate from this hospital. In contrast, neither MBL- nor ESBL-encoding genes were observed in isolates from MCV. Efflux hyperexpression was more frequently observed in P. aeruginosa clinical isolates from HSP (71.4%) than from MCV (52.4%). The efflux systems XY (41.6%) and ABM (24.6%) were more frequently hyperexpressed in isolates from HSP and MCV, respectively. The simultaneous expression of different resistance determinants in one isolate was also evaluated. This association was more frequent among HSP isolates. Reduced OprD expression was similar among isolates from HSP and MCV, 91.6% and 91.8%, respectively. The hyperexpression of AmpC was 30.9% among HSP isolates and 5.0% among MCV isolates. The efflux hyperexpression and/or porin loss might increase β-lactam MICs, although not as effectively as do β-lactamases associated with other resistant determinants. This finding suggests that such mechanisms may favor P. aeruginosa survival under selective pressure, increasing its possibility to acquire other β-lactam resistance determinants in the hospital environment, contributing to the emergence of strains highly resistant to this class of antimicrobials. / FAPESP: 06/55937-3 / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-10-26T17:48:32Z No. of bitstreams: 1 clarissa_c_menezes_ioc_bcm_0054_2011.pdf: 2530597 bytes, checksum: 62f04a75c90de18a85463693ba14fb9b (MD5) / Made available in DSpace on 2012-10-26T17:48:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 clarissa_c_menezes_ioc_bcm_0054_2011.pdf: 2530597 bytes, checksum: 62f04a75c90de18a85463693ba14fb9b (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / A bactéria Pseudomonas aeruginosa (PA) é um dos principais agentes etiológicos de pneumonias nosocomiais, cujo tratamento é dificultado por sua resistência a antibióticos e pela secreção de fatores de virulência. Novas alternativas para o tratamento destas infecções incluem manipular o sistema de comunicação bacteriano conhecido como quorum sensing (QS), reduzindo a expressão destes fatores de virulência e prevenindo seus efeitos deletérios em células e sistemas eucariotos. Os efeitos do componente de QS de PA 3-oxo dodecanoil homoserina lactona (3-oxo C12 HSL) nos pulmões não são conhecidos; portanto, a primeira etapa de nosso trabalho consistiu na caracterização dos efeitos desta molécula no ambiente pulmonar. Para isso, camundongos swiss desafiados com 3-oxo C12 HSL por via intratraqueal tiveram amostras de sangue, lavado bronco-alveolar (BAL) e tecido pulmonar e coletadas seis horas após o procedimento. Nossos resultados demonstram que inflamação pulmonar causada por 3-oxo C12 HSL se caracteriza pela migração de células mononucleares e neutrófilos para o espaço alveolar, níveis elevados de atividade mieloperoxidase no tecido pulmonar e formação de edema. A resposta inflamatória causada por 3-oxo C12 HSL não alterou os níveis de TNF-α, MIF, IL- 10 e IL-12 no tempo analisado. Foram observados aumentos nos níveis de IL-6, CCL2/MCP-1, CXCL1/KC e LTB4 no BAL de animais desafiados, sendo o aumento deste eicosanóide acompanhado por uma indução de corpúsculos lipídicos. Evidências in vitro relatam o envolvimento do receptor nuclear PPARγ nos efeitos pró-inflamatórios atribuídos a 3-oxo C12 HSL; portanto, decidimos estudar os efeitos do tratamento com o agonista de PPARγ rosiglitazona no modelo de inflamação pulmonar causado por este componente de QS. Nós observamos que o tratamento com rosiglitazona (0,5 mg/kg) uma hora após o estímulo diminuiu a formação de corpúsculos lipídicos e de edema pulmonar, causando também uma redução na migração de células mononucleares e neutrófilos e uma menor atividade mieloperoxidase no pulmão dos animais tratados. A redução da migração de células mononucleares parece estar associada à uma redução dos níveis de CCL2/MCP-1, enquanto o decréscimo nos neutrófilos parece envolver a modulação de CXCL1/KC. A instilação com 3-oxo C12 HSL diminuiu a expressão da enzima paraoxonase (PON) no tecido pulmonar, fenômeno que não foi revertido pelo tratamento com rosiglitazona nesta dose. Estudos demonstram que o PPARγ está envolvido na expressão de PON e que a superexpressão desta enzima é capaz de proteger animais da mortalidade por PA em função de sua atividade lactonase; por este motivo, decidimos testar uma dose maior de rosiglitazona (5 mg/kg) para alcançar mais um benefício nesta proposta terapêutica. O tratamento com rosiglitazona nesta dose foi capaz de reverter a redução da expressão de paraoxonase causada por 3-oxo C12 HSL, diminuindo a formação de edema, a migração de neutrófilos e os níveis de atividade mieloperoxidase no pulmão de animais desafiados. O número de células mononucleares recuperado no BAL de animais estimulados e tratados com a droga não foi reduzido, bem como os níveis de CCL2/MCP-1. De fato, a droga por si só causou um aumento de CCL2/MCP-1 que parece ter contribuído para a indução de corpúsculos lipídicos observada. Devido ao envolvimento de macrófagos e da quimiocina CCL2/MCP-1 no processo de eliminação bacteriana, estudos em modelos de pneumonia por PA precisam ser conduzidos para melhor avaliar esta dose de rosiglitazona e validar esta droga como uma estratégia terapêutica no combate à esta bactéria. / Pseudomonas aeruginosa (PA) is a major pathogen involved in nosocomial pneumonia. These infections are difficult to manage due bacterial antibiotic resistance and secretion of virulence factors; therefore, current approaches to treat PA infections now focus on manipulating the bacteria communication system known as quorum sensing in order to reduce the production of those virulence factors and mitigate their deleterious effects to the host. Since there are no reports about the effects of the PA main quorum sensing component 3-oxo dodecanoyl homoserine lactone (3-oxo C12 HSL) in the lung the first step of our work consisted in investigating the host pulmonary response to this molecule in a mouse model. In order to do so, swiss mice submitted to intratracheal instillation with 3- oxo C12 HSL had blood, BAL and lung tissue samples collected six hours after the procedure. Our results show that the inflammatory response elicited by 3-oxo C12 HSL is characterized by the migration of both mononuclear cells and neutrophils to the alveolar space, together with high levels of myeloperoxidase activity in lung tissue and development of pulmonary edema. We found that the levels of TNF-α, MIF, IL-10 and IL-12 were not altered, while there was a significant increase in IL-6 CCL2/MCP-1 and CXCL1/KC in BAL. The increase in LTB4 levels in the BAL of defied animal was accompanied by an induction of lipid bodies. In vitro evidences report the involvement of the nuclear receptor PPARγ in the inflammatory events ascribed to 3-oxo C12 HSL; therefore, we decided to study the effects of PPARγ agonist rosiglitazone in the pulmonary inflammation caused by this quorum sensing component. We observed that rosiglitazone administration (0,5 mg/kg) one hour after stimulation was able to reduce the formation of lipid bodies and pulmonary edema, besides decreasing the migration of mononuclear cells, neutrophils and myeloperoxidase activity in the lung of defied animals. This reduction in the migration of mononuclear cells seems to be due to a decrease in the levels of CCL2/MCP-1, while the impairment in neutrophil migration seems to involve the modulation of CXCL1/KC. 3-oxo C12 HSL instillation also decreased paraoxonase (PON) expression in lung tissue, which was not reverted by rosiglitazone treatment at this dose. Since it was reported that PPARγ is able to regulate PON expression and that the overexpression of this enzyme seems to protect animals from PA mortality due its lactonase activity we searched to modulate this enzyme with a higher dose of rosiglitazone (5 mg/kg) in order to achieve this extra benefit in our proposal. We observed that this dose was able to revert the decrease in PON expression caused by 3-oxo C12 HSL, reducing the pulmonary edema, neutrophil migration and myeloperoxidase activity in defied animals. There was no reduction in the number of mononuclear cells recovered from the BAL of stimulated animals, which was also observed for CCL2/MCP-1 levels. In fact, the drug itself at his dose caused an increase in CCL2/MCP-1 that possibly accounted for the induction of lipid bodies. Because macrophages and CCL2/MCP-1 have a crucial role in the clearance of bacteria, this dose of rosiglitazone has to be tested in a PA pneumonia model so the effects observed in our investigation can be validate rosiglitazone as an therapeutic approach to the treatment of these infections.

Made available in DSpace on 2014-09-24T12:58:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Mestrado-Karine Rangel.pdf: 1004449 bytes, checksum: c343ca975f102dd4b196cf03888ac1f2 (MD5) Previous issue date: 2004 / Pseudomonas aeruginosa é um dos principais patógenos nosocomiais. Atualmente, a emergência de clones multirresistentes causando surtos hospitalares têm sido descritas em diversos países, inclusive no Brasil e consiste num grave problema. A resistência adquirida aos β-lactâmicos, que estão entre as drogas de primeira linha indicadas para o tratamento de infecções causadas por P. aeruginosa, pode ser resultante da produção de β-lactamases. Neste estudo, foram analisadas 214 P. aeruginosa isoladas de pacientes internados em hospitais de São Luís do Maranhão no período de junho de 2001 a junho de 2002. A susceptibilidade aos antimicrobianos foi avaliada pelo método de disco-difusão conforme as recomendações do NCCLS. A presença das seguintes séries de genes codificadores de β-lactamases: CARB, IMP, OXA, PSE, SHV, SPM, TEM e VIM foi determinada através da técnica da PCR em isolados que apresentaram-se positivos em testes de detecção fenotípicos ou que apresentaram perfil de resistência característico para as séries de β-lactamases citadas. Vários isolados apresentaram diferentes séries de β-lactamases, e apenas as séries de metalo-β-lactamases IMP e VIM não foram detectadas nos isolados estudados. A caracterização genotípica dos isolados produtores de β-lactamases foi realizada através de eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE), após tratamento do DNA cromossômico com a enzima de restrição Spe I. Foram observados diversos genótipos entre os isolados que apresentaram a mesma série de β-lactamases, mostrando a disseminação destas enzimas nesta espécie nos hospitais de São Luís do Maranhão. Apenas os isolados produtores da enzima SPM-1 apresentaram o genótipo 3 que foi detectado nos últimos 5 meses do estudo, sugerindo o início da introdução desta metalo-β-lactamase no Maranhão. Estudos relacionados à caracterização molecular e resistência a antimicrobianos de isolados hospitalares podem fornecer informações fundamentais para auxiliar as ações dos programas de controle de infecções hospitalares. Nossos resultados mostram a importância da detecção de isolados de P. aeruginosa produtores de β-lactamases, que na maioria dos casos teriam opções terapêuticas limitadas, para prevenir o espalhamento destes e os conseqüentes surtos hospitalares. / Pseudomonas aeruginosa is one of the most common and important nosocomial pathogen. β-lactams antibiotics represent the most commonly prescribed antibacterial agents for treating infections caused by P. aeruginosa. Strains with adquired resistance to β-lactams may be result from the production of β-lactamases. In this study, we analysed 214 isolates of P. aeruginosa obtained from clinical specimens taken from patients hospitalized in Sao Luis do Maranhão from June 2001 to June 2002. Susceptibility tests were determined by the disk diffusion method in accordance with NCCLS guidelines. The presence of genes encoding CARB, IMP, OXA, PSE, SIIV. SPM, TEM and VIM β-lactamases were investigated by PCR in DNA of the isolates that showed particularly resistant phenotypes or in β-lactamase producers detected by phenotypic tests. Several isolates produced different β-lactamases types. None of the isolates gave positive PCR results for sequences encoding IMP or VIM enzyme types. Genetic characterization of isolates β-lactamase producers was performed by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) using the restriction endonuclease Spel. By PFGE twenty-six genotypes were found in P. aeruginosa isolates β-lactamases producers. P. aeruginosa isolates exhibiting one of β-lactamase types (CARB, OXA, PSE, SHV or TEM) revealed several genotypes indicating the nosocomial spread of these β-lactamases. The SPM β-lactamase type was detected only in isolates belonging to genotype 3. The presence of P. aeruginosa carrying the blaspm gene in the last five months studied suggested the introduction of this metalo-β-lactamase. Genetic characterization of nosocomial isolates and antimicrobial resistance studies is important to support and enhance the efforts of the infection control programs. Our results showed that the detection of P. aeruginosa aeruginosa β-lactamase producers that have limited therapeutic options is necessary for protection against spreading nosocomial these isolates.

A presença de Pseudomonas aeruginosa resistentes a antimicrobianos no esgoto hospitalar contribui para sua disseminação em corpos d´água e possibilita o estabelecimento de reservatórios ambientais de resistência bacteriana. Os objetivos deste estudo foram comparar isolados de P. aeruginosa de amostras de esgoto hospitalar e água superficial quanto ao perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos, a presença e diversidade de genes de metalo β-lactamases (MBLs) e a similaridade genética entre os isolados. Para isso, as amostras de esgoto hospitalar foram coletadas de cinco hospitais, localizados em Passo Fundo e Porto Alegre, RS, Brasil. As amostras de água superficial foram coletadas dos corpos d´água que recebem os esgotos de dois hospitais estudados. Os isolados foram identificados por provas bioquímicas clássicas e pela amplificação de um fragmento do rDNA 16S. O perfil de susceptibilidade foi avaliado pela técnica de disco-difusão. Os genes blaSPM-1, blaVIM e blaIMP foram pesquisados por PCR. A relação clonal entre os isolados foi avaliada pela ERIC-PCR e PFGE. A diversidade nos genes de MBLs encontrados foi avaliada pela DGGE. Foram analisados 614 isolados de P. aeruginosa, dos quais somente 5,0% apresentaram o gene blaSPM-1. Todos os isolados com este gene apresentaram fenótipo de multirresistência. A análise de similaridade genética pela ERIC-PCR e PFGE não mostrou relação clonal entre isolados de água superficial e esgoto hospitalar ou entre isolados provenientes de amostras de diferentes esgotos hospitalares. A presença de isolados resistentes e com o gene blaSPM-1, em amostras de esgoto hospitalar, atenta para o risco de disseminação ambiental de resistência bacteriana. / The presence of Pseudomonas aeruginosa resistant to antimicrobials in hospital sewage contributes to its dissemination into water bodies and may lead to the establishment of environmental reservoirs of bacterial resistance. The objectives of this study were to compare P. aeruginosa strains isolated from hospital sewage and superficial water samples, about the susceptibility profile to antimicrobials, the presence and diversity of the metallo β-lactamases (MBLs) genes and the genetic similarity among the strains. For this purpose, hospital sewage samples were collected from five hospitals located in Passo Fundo and Porto Alegre, RS, Brazil. The superficial water samples were collected from the water bodies where the sewage from two of the analyzed hospitals were discharged. The isolates were identified by classical biochemical tests and amplification of 16S rDNA fragment. The susceptibility was determined by the disk-diffusion method. The blaSPM-1, blaVIM e blaIMP genes were screened by PCR. The clonal relationship among the strains was evaluated by ERIC-PCR and PFGE. The diversity on MBL genes found was analyzed by DGGE. A total of 614 P. aeruginosa strains were analyzed, of which only 5,0 % showed the blaSPM-1 gene. All isolates with this gene showed the multirresistance phenotype. The genetic similarity analysis by ERIC-PCR and PFGE didn´t show clonal relationship between the strains from superficial water and hospital sewage or between the strains from samples of different hospital sewages. The presence of resistant isolates and isolates with the blaSPM-1 gene in hospital sewage samples call attention to the risk of environmental dissemination of bacterial resistance.

Resumo não disponível.

Objetivos: Padronizar uma técnica molecular, Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para detectar os genes blaSPM-1 , blaVIM-2 e blaIMP-1 que conferem a Pseudomonas aeruginosa resistência a carbapenêmicos (imipenem e meropenem) através da produção das metalo-β-lactamases (MBL) SPM-1, VIM-2 e IMP-1. Comparar os resultados obtidos com a técnica de PCR com os obtidos através de uma técnica fenotípica para detecção desse mecanismo enzimático de resistência. Descrever a prevalência dos genes de MBL. Metodologia: Utilizando 48 amostras clínicas de P. aeruginosa resistentes a ceftazidima e/ou imipenem sendo 37 caracterizadas como produtoras de MBL através de uma técnica fenotípica (aproximação de disco) e 11 como não produtoras pela mesma técnica. Esses isolados foram testados com três primers específicos para os seguintes genes: blaSPM-1 , blaVIM-2 e blaIMP-1 Resultados e Discussão: Dos 37 isolados produtores de metalo-β-lactamase, 29 tiveram resultado positivo na PCR sendo 27 positivos para o gene blaSPM-1 e 2 positivos para o gene blaIMP-1 . Em nenhum isolado foi detectado o gene blaVIM-2 .Oito isolados caracterizados como produtores de MBL não tiveram nenhum produto amplificado com os três pares de primers. Os 11 isolados caracterizados como não produtores de MBL não tiveram produto amplificado. Assim, a sensibilidade da técnica molecular foi de 78,40% e a especificidade 100,0% considerando a técnica fenotípica de aproximação de disco como padrão ouro Conclusões: Foi possível a padronização da técnica de PCR para a detecção dos genes blaSPM-1 , blaVIM-2 e blaIMP-1 bem como foi possível a comparação entre a técnica de PCR e a técnica fenotípica, sendo que a metodologia molecular apresentou 100% de especificidade e 78,40% de sensibilidade. O gene de MBL mais prevalente foi blaSPM-1 encontrado em 27/29 amostras de P. aeruginosa resistentes ao imipenem. O gene blaIMP-1 foi detectado em apenas 2/29 amostras de P. aeruginosa resistentes ao imipenem. O gene blaVIM-2 e não foi detectado nas amostras de P.aeruginosa analisadas neste estudo.

Orientador: Carlos Magno C. B. Fortaleza / Banca: Maria Clara Padoveze / Banca: Maria de Lourdes R. S. da Cunha / Resumo: A emergência e disseminação de microrganismos multirresistentes em serviços de saúde é um evento preocupante em todo o mundo. Dois agentes são especialmente relevantes: (1) Staphylococcus aureus, principalmente quando resistente à Meticilina (Methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA); e (2) Pseudomonas aeruginosa, freqüentemente resistente a múltiplos antimicrobianos. Foram realizados três estudos observacionais retrospectivos para identificar fatores de risco para aquisição desses agentes em pacientes de um hospital de ensino (285 leitos). O Estudo 1 utilizou delineamento "caso-caso-controle" para analisar fatores de risco para colonização nasofaríngea por MRSA em uma unidade de terapia intensiva (UTI) clínico-cirúrgica. O Estudo 2 aplicou metodologia semelhante para analisar fatores associados à aquisição de MRSA por pacientes queimados. Por outro lado, o Estudo 3 (uma coorte retrospectiva) procurou identificar fatores de risco para colonização orofaríngea por isolados de P. aeruginosa. Nos Estudo 1 e 3 casos e controles foram selecionados entre os pacientes internados na UTI clínico-cirúrgica entre Março de 2005 e Maio de 2006. Casos foram pacientes que adquiriram colonização por MRSA (Estudo 1) e P. aeruginosa (Estudo 3) durante a estadia na UTI. Controles foram selecionados entre pacientes não colonizados. Estratégia semelhante foi utilizada no Estudo 2, para seleção de casos e controles entre pacientes da Unidade de queimados. Em todos os estudos, foram analisados dados demográficos, comorbidades, realização de procedimentos, inserção de dispositivos e uso de antimicrobianos. Os resultados foram ajustados para gravidade dos pacientes (pontuações de APACHE II e Charlson) e para o tempo de exposição ao ambiente hospitalar. Análises univariadas e multivariadas (regressão logística) foram utilizadas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The emegence and spread of multidrug-resistant microorganism in healthcare settings is a worldwide concern. Two bacteria are specially relevant: (1) Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) and (2) Pseudomonas aeruginosa (usually resistant to multiple antimicrobials). We conducted three observational studies to identify risk factors for MRSA and P. aeruginosa acquisition in a teaching hospital with 285 beds. Study #1 employed a "casecase- control" design to analyze risk factors for nasopharyngeal colonization with MRSA in a medical-surgical Intensive Care Unit (ICU). Study #2 used a similar design to identify risk factors for MRSA acquisition in burn patients. Study #3 (a retrospective cohort) aimed to identify risk factors for oropharyngeal colonization with P. aeruginosa. Studies #1 and 3 selected subjects among patients admitted to the medical-surgical ICU from March 2005 through May 2006. Cases were defined as individuals who acquired colonization with MRSA and P. aeruginosa, respectively, in the ICU. Controls were selected among noncolonized individuals. A similar strategy was used to select cases and controls for Study #2 among patients from the burn unit. In all studies, several data were analyzed: demographic information, comorbidities, procedures, inserted devices and antimicrobial use. Data were adjusted for severity-of-illness (APACHE II and Charlson scores) and for time of exposure to hospital environment. In Study #1, 27 out of 122 patients included acquired MRSA colonization. Significant risk factors were: use of Ciprofloxacin (Odds Ratio[OR]=5.05, 95% Confidence Interval[CI]=1.38-21.90, p=0.015) and time of ICU stay (OR= 1.12, 95%CI=1.06-1.19, p<0.001). On the other hand, the use of Levofloxacin had a protective effect (OR=0.08, 95%CI=0.01-0.55, p=0.01). In Study #2, 75 out of 143 burn patients acquired MRSA... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Neste trabalho foram preparados materiais híbridos do tipo silicatos organicamente modificados (Ormosils) contendo fosfotungstato, [PW12O40]-3 e dopados com nanopartículas sintetizadas core@shell SiO2@TiO2. Os objetivos a serem atingidos com estes materiais são obter filmes com alta sensibilidade à radiação UV e capazes de fotossintetizar nanopartículas de Ag no seu interior e superfície visando revestimentos antibacterianos. O pigmento fotocrômico nos filmes é o fosfotungstato e o core@shell irá atuar como agente potencializador da resposta fotocrômica dele. Dessa maneira variou-se a quantidade de volume da suspensão das partículas core@shell tentando maximizar a resposta fotocrômica com a menor quantidade possível de partículas adicionadas. Observa-se uma resposta não linear da sensibilidade ao UV observada pelo aumento no fotocromismo com a quantidade de suspensão de partículas adicionada. Ormosils com nanopartículas de Ag fotossintetizadas foram preparados com intuito de verificar a inibição desses na formação de biofilmes de bactérias patogênicas, ou seja, Staphylococcus aureus e Pseudomona aeruginosa. Os materiais foram caracterizados por espectroscopias vibracionais, espectroscopia de fotoelétrons de raios X (XPS), Difração de Raios X (DRX), Fluorescência de Raios X, Microscopia de Força Atômica(AFM) e Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV). Nos testes de inibição da formação de biofilme notou-se uma maior inibição frente às bactérias S. aureus usando filmes de ormosils core@shell. Entretanto, para a inibição de P. aeruginosa a presença de core@shell não de maneira significativa. Na presença de NP de Ag ambas as bactérias foram inibidas totalmente. Os testes microbiológicos foram caracterizados através de contagem de placa, microscopia de Epifluorescencia, teste de reaproveitamento, teste do halo de crescimento, Microscopia Eletrônica de Varredura e espectroscopia de fotoelétrons de raios X (XPS). / In this project, hybrid materials based on organo modiefied silicates (Ormosils) containing phosphotunsgtic acid (HPW) and doped with SiO2@TiO2 core@shell nanoparticles were prepared. The objectives of the project was to obtain films of these hybrid ormosil-HPW-SiO2@TiO2 materials with high sensitivity to UV radiation and, which after coating with silver nanoparticles, could be used for antibacterial applications. The HPW in these films serves as the photochromic component while the role of SiO2@TiO2 particles was to enhance the innate phototromic reponse of the HPW. The prepared hybrid materials and hybrid films were characterized by vibrational spectroscopy, X-ray photoelectron spectroscopy, X-ray diffraction analysis, X-ray fluoresence, atomic force microscopy and scanning electron microscopy. The effect of addition of SiO2@TiO2 particles on the photochromic reponse was systematically studied in order to obtain films with maximum photochromic response. The UV sensitity or the photochromic response showed a non-linear increase as function of the amount of SiO2@TiO2 particles added. The hybrid ormosil-HPW-SiO2@TiO2 films modified with silver nanoparticles were studied for their antibacterial activity against Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa as model bacteria. The ormosil-HPW-SiO2@TiO2 films showed a good degree of inhibition against S. aureus, while the presence of SiO2@TiO2 in the ormosil-HPW films had no significant effect on the inhibition ability of the hybrid films against P. aeruginosa. The ormosil-HPW-SiO2@TiO2 films modified with Ag totally inhibited the growth of both the model bacteria studied. These photochromic and antibacterial hybrid films can find useful applications in UV-sensing devices and antibacterial coatings.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-03-05Bitstream added on 2014-06-13T19:55:50Z : No. of bitstreams: 1 polotto_m_me_sjrp.pdf: 775251 bytes, checksum: 14af3ff30a1888d1fbc13ef59a721f5b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Pseudomonas aeruginosa é um bacilo Gram-negativo, aeróbio, não formador de esporos encontrado no solo, água, plantas e animais, incluindo os seres humanos, onde provoca infecções oportunistas. Infecções causadas por P. aeruginosa são de difícil tratamento devido a sua virulência e resistência a vários antimicrobianos. Os carbapenêmicos são geralmente ativos contra P. aeruginosa multirresistentes, mas as altas taxas de resistência a estas drogas estão se tornando comuns e podem indicar a produção de metalo-betalactamases (MβLs). O propósito deste estudo foi detectar e identificar, em cepas de P. aeruginosa resistentes a carbapenêmicos genes que codificam a produção de MβLs (blaSPM, blaIMP e blaVIM) e ESBLs (blaCTX-M e blaGES), e avaliar a similaridade genética entre as cepas. Foram avaliadas sessenta cepas de P. aeruginosa resistentes aos carbapenêmicos isoladas de pacientes do Hospital de Base de São José do Rio Preto, no período de junho de 2009 a dezembro de 2009. Os testes de sensibilidade foram realizados de acordo com a padronização do “Clinical and Laboratory Standards Institute” (CLSI) (2009) utilizando o método de disco-difusão. O teste fenotípico para a produção de MβLs foi realizado através do método de aproximação de discos, com os substratos ceftazidima e imipenem e com o inibidor de MβLs 2-MPA. A detecção dos genes de MβLs blaIMP, blaVIM e blaSPM e de ESBLs blaCTX-M e blaGES foi realizada por PCR, e a identificação através de seqüenciamento. A avaliação da similaridade genética entre as cepas foi realizada nas amostras produtoras de MβL e ESBLs do tipo CTX-M através de PFGE. No teste de suscetibilidade por disco-difusão 98,3% (59/60) das cepas apresentaram resistência ao imipenem e 75% (45/60) ao meropenem. Polimixina B foi o único agente a inibir o crescimento de 100% das amostras... / Pseudomonas aeruginosa is a versatile microorganism, with low nutritional demands and easy proliferation in culture medium. It’s a Gram-negative bacillus, aerobic, nonsporulated and it can be isolated from soil, water, plants and animals, including humans. P. aeruginosa infections are hard to treat because of its virulence and resistance to various antimicrobials. Carbapenens are usually active against multiresistant P. aeruginosa, but high levels of resistance to these antibiotics are becoming common and it can indicate metallo-beta-lactamases presence (MβLs). The purpose of this study was to detect and identify, in P. aeruginosa strains, MβL and ESBL encoding genes (blaSPM, blaIMP, blaVIM, blaCTX-M and blaGES) and to determine genetic similarity between the carrier strains. The study was done analyzing sixty P. aeruginosa strains resistant to carbapenens isolated at Hospital de Base de São José do Rio Preto, in the period of june/2009 to December/2009. The isolates were submitted to disc-diffusion susceptibility test, as standardized by the “Clinical and Laboratory Standards Institute” (CLSI) (2009). The phenotypic test for MβL production was performed by means of the double disk synergy method, having ceftazidime and imipenem used as substratum and 2-MPA as an inhibitor. The polymerase chain reaction (PCR) was used to detect the MβLs genes (blaIMP, blaVIM, blaSPM) and the ESBL genes (blaCTX-M and blaGES) and sequencing was carried out for their identification. The genetic similarity between the strains was evaluated in samples which were positive for MβLs and ESBLs genes using the PFGE technique. In disc-diffusion susceptibility test, 98,3% (59/60) of the strains were imipenem resistant and 75% (45/60) were meropenem resistant. All isolates were inhibited by Polymixin B. Tracheal aspirate were the most frequent isolated clinic specimen, with 40% (24/60) of total.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-10Bitstream added on 2014-06-13T19:10:41Z : No. of bitstreams: 1 melo_ec_me_botfm.pdf: 1085719 bytes, checksum: fb9a60b6f761f7fdad4d8e8048a3820d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A emergência e disseminação de microrganismos multirresistentes em serviços de saúde é um evento preocupante em todo o mundo. Dois agentes são especialmente relevantes: (1) Staphylococcus aureus, principalmente quando resistente à Meticilina (Methicillin-resistant Staphylococcus aureus, MRSA); e (2) Pseudomonas aeruginosa, freqüentemente resistente a múltiplos antimicrobianos. Foram realizados três estudos observacionais retrospectivos para identificar fatores de risco para aquisição desses agentes em pacientes de um hospital de ensino (285 leitos). O Estudo 1 utilizou delineamento “caso-caso-controle” para analisar fatores de risco para colonização nasofaríngea por MRSA em uma unidade de terapia intensiva (UTI) clínico-cirúrgica. O Estudo 2 aplicou metodologia semelhante para analisar fatores associados à aquisição de MRSA por pacientes queimados. Por outro lado, o Estudo 3 (uma coorte retrospectiva) procurou identificar fatores de risco para colonização orofaríngea por isolados de P. aeruginosa. Nos Estudo 1 e 3 casos e controles foram selecionados entre os pacientes internados na UTI clínico-cirúrgica entre Março de 2005 e Maio de 2006. Casos foram pacientes que adquiriram colonização por MRSA (Estudo 1) e P. aeruginosa (Estudo 3) durante a estadia na UTI. Controles foram selecionados entre pacientes não colonizados. Estratégia semelhante foi utilizada no Estudo 2, para seleção de casos e controles entre pacientes da Unidade de queimados. Em todos os estudos, foram analisados dados demográficos, comorbidades, realização de procedimentos, inserção de dispositivos e uso de antimicrobianos. Os resultados foram ajustados para gravidade dos pacientes (pontuações de APACHE II e Charlson) e para o tempo de exposição ao ambiente hospitalar. Análises univariadas e multivariadas (regressão logística) foram utilizadas... / The emegence and spread of multidrug-resistant microorganism in healthcare settings is a worldwide concern. Two bacteria are specially relevant: (1) Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) and (2) Pseudomonas aeruginosa (usually resistant to multiple antimicrobials). We conducted three observational studies to identify risk factors for MRSA and P. aeruginosa acquisition in a teaching hospital with 285 beds. Study #1 employed a “casecase- control” design to analyze risk factors for nasopharyngeal colonization with MRSA in a medical-surgical Intensive Care Unit (ICU). Study #2 used a similar design to identify risk factors for MRSA acquisition in burn patients. Study #3 (a retrospective cohort) aimed to identify risk factors for oropharyngeal colonization with P. aeruginosa. Studies #1 and 3 selected subjects among patients admitted to the medical-surgical ICU from March 2005 through May 2006. Cases were defined as individuals who acquired colonization with MRSA and P. aeruginosa, respectively, in the ICU. Controls were selected among noncolonized individuals. A similar strategy was used to select cases and controls for Study #2 among patients from the burn unit. In all studies, several data were analyzed: demographic information, comorbidities, procedures, inserted devices and antimicrobial use. Data were adjusted for severity-of-illness (APACHE II and Charlson scores) and for time of exposure to hospital environment. In Study #1, 27 out of 122 patients included acquired MRSA colonization. Significant risk factors were: use of Ciprofloxacin (Odds Ratio[OR]=5.05, 95% Confidence Interval[CI]=1.38-21.90, p=0.015) and time of ICU stay (OR= 1.12, 95%CI=1.06-1.19, p<0.001). On the other hand, the use of Levofloxacin had a protective effect (OR=0.08, 95%CI=0.01-0.55, p=0.01). In Study #2, 75 out of 143 burn patients acquired MRSA... (Complete abstract click electronic access below)