Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Durante las periodontitis, la respuesta inmune del hospedero involucra la producción de citoquinas, metaloproteinasas de la matriz, quimioquinas y receptores de quimioquinas que determinan la constitución de un ambiente inflamatorio local y la estimulación de la destrucción de tejidos periodontales, pudiendo derivar en la pérdida de los dientes. Las quimioquinas (CCLs) son citoquinas quimiotácticas que cumplen un rol fundamental en la regulación de la migración de células del sistema inmune. La interacción de las quimioquinas CCL19 y CCL21 con su receptor CCR7 en las células inmunes, incrementa la secreción de citoquinas proinflamatorias y activa la diferenciación de los linfocitos Th1 y Th17. Por lo tanto, el objetivo de este estudio es determinar los niveles de expresión de las quimioquinas CCL19 y CCL21 en biopsias gingivales de pacientes afectados de periodontitis crónica. Los resultados demuestran los elevados niveles de expresión de las quimioquinas CCL19 y CCL21 en biopsias de pacientes afectados con periodontitis en comparación a los sujetos sanos y sugieren un rol pro-inflamatorio en la regulación del sistema inmune y el desarrollo de la enfermedad.

Orientador: Sandra Helena Penha de Oliveira / Banca: Edson Antunes / Banca: Lucia Helena Faccioli / Resumo: A quimiocina C-X-X motif ligand 12 (CXCL12) e seu receptor de quimiocina 4 (CXCR4) desenvolvem um papel crítico na inflamação das vias aéreas. No entanto, os efeitos da ativação da via CXCL12/CXCR4 sobre fibroblastos pulmonares ainda são desconhecidos. Neste estudo, investigamos o efeito da via CXCL12/CXCR4 sobre a quimiocina (C-C motif) ligante 3 (CCL3) e (C-X-C motif) ligante 2 (CXCL2) e sobre os mediadores lipídicos leucotrienos B4 (LTB4) e C4 (LTC4) por fibroblastos pulmonares e a sinalização intracelular envolvida neste processo. CXCL12 foi capaz de induzir a produção de CCL3, CXCL2, LTB4 e LTC4; a produção de CCL3 não é dependente da produção de CXCL2, mas a produção de CXCL2 é dependente da produção de CCL3. A produção de LTB4 pode ser parcialmente regulada por CXCL2 e CCL3 e a produção de LTC4 é dependente da produção de CCL3 e CXCL2. Fibroblastos pulmonares constitutivamente expressam CXCR4 e a estimulação com CXCL12 induz sua expressão. Análises de Western blot mostraram que CXCL12 aumenta a expressão proteica de CXCR4 e induz a fosforilação da S339 do CXCR4. A expressão gênica constitutiva e induzida de CXCR4 foram inibidas pelo anticorpo anti-CXCL2. No entanto, o anticorpo anti-CCL3 e o inibidor farmacológico MK886 foram capazes de diminuir a expressão gênica induzida de CXCR4. Os fibroblastos pulmonares foram pré-tratados com MK886, dexametasona (Dexa) e/ou loratadina (Lor). MK886 e Lor promoveram a diminuição da produção de LTC4 e LTB4, mas não a de CCL3 e CXCL2. Dexa diminuiu níveis de CCL3, CXCL2, LTB4 e LTC4, e quando associado com Lor esta diminuição foi mais eficaz. Identificamos... / Abstract: C-X-X motif ligand 12 (CXCL12) and its specific receptor Chemokine receptor 4 (CXCR4) play a critical role in airway inflammation. However, the effects of CXCL12/CXCR4 axis on pulmonary fibroblast activation are unknown. In this study, we investigated the effect of CXCL12/CXCR4 axis on chemokine (C-C motif) ligand 3 (CCL3), chemokine (C-X-C motif) ligand 2 (CXCL2), leukotrienes B4 (LTB4) and C4 (LTC4) production by pulmonary fibroblasts and the intracellular signaling involved in the process. CXCL12 induced CCL3, CXCL2, LTB4 and LTC4 production, and CCL3 production is not dependent on CXCL2; but CXCL2 production is dependent on CCL3 production. LTB4 production can be partially down-regulated by CXCL2 and CCL3 production and LTC4 production is dependent on CCL3 and CXCL2 production. Pulmonary fibroblasts constitutively expressed CXCR4, and CXCL12 stimulation up-regulated its expression. Western blot analysis showed that CXCL12 increased protein expression of CXCR4 and induced phosphorylation at S339 of CXCR4. Constitutive CXCR4 expression was decreased by anti-CCL3 antibody or MK 886. Inducible CXCR4 was inhibited by anti-CXCL2 antibody. Indeed pulmonary fibroblasts were pretreated with MK886, dexamethasone (Dexa) and loratadine (Lor). MK886 and loratadine was able to reduced LTB4 and LTC4 production but not CCL3 and CXCL2. Dexa decreased CCL3, CXCL2, LTB4 and LTC4 production, and when associated with Lor this decrease was more effective. We found that PI-3K and JNK intracellular signaling play a role in CCL3 production; p38, MEK1/2, PI-3K and JNK are involved in CXCL2 production and p38 and MEK1/2 pathways are involved in LTB4 production by... / Mestre

Made available in DSpace on 2014-08-27T14:36:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-05Bitstream added on 2014-08-27T15:57:02Z : No. of bitstreams: 1 000749985.pdf: 1413898 bytes, checksum: 7421bc33cc6d75478dcb676de29021bd (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A quimiocina C-X-X motif ligand 12 (CXCL12) e seu receptor de quimiocina 4 (CXCR4) desenvolvem um papel crítico na inflamação das vias aéreas. No entanto, os efeitos da ativação da via CXCL12/CXCR4 sobre fibroblastos pulmonares ainda são desconhecidos. Neste estudo, investigamos o efeito da via CXCL12/CXCR4 sobre a quimiocina (C-C motif) ligante 3 (CCL3) e (C-X-C motif) ligante 2 (CXCL2) e sobre os mediadores lipídicos leucotrienos B4 (LTB4) e C4 (LTC4) por fibroblastos pulmonares e a sinalização intracelular envolvida neste processo. CXCL12 foi capaz de induzir a produção de CCL3, CXCL2, LTB4 e LTC4; a produção de CCL3 não é dependente da produção de CXCL2, mas a produção de CXCL2 é dependente da produção de CCL3. A produção de LTB4 pode ser parcialmente regulada por CXCL2 e CCL3 e a produção de LTC4 é dependente da produção de CCL3 e CXCL2. Fibroblastos pulmonares constitutivamente expressam CXCR4 e a estimulação com CXCL12 induz sua expressão. Análises de Western blot mostraram que CXCL12 aumenta a expressão proteica de CXCR4 e induz a fosforilação da S339 do CXCR4. A expressão gênica constitutiva e induzida de CXCR4 foram inibidas pelo anticorpo anti-CXCL2. No entanto, o anticorpo anti-CCL3 e o inibidor farmacológico MK886 foram capazes de diminuir a expressão gênica induzida de CXCR4. Os fibroblastos pulmonares foram pré-tratados com MK886, dexametasona (Dexa) e/ou loratadina (Lor). MK886 e Lor promoveram a diminuição da produção de LTC4 e LTB4, mas não a de CCL3 e CXCL2. Dexa diminuiu níveis de CCL3, CXCL2, LTB4 e LTC4, e quando associado com Lor esta diminuição foi mais eficaz. Identificamos... / C-X-X motif ligand 12 (CXCL12) and its specific receptor Chemokine receptor 4 (CXCR4) play a critical role in airway inflammation. However, the effects of CXCL12/CXCR4 axis on pulmonary fibroblast activation are unknown. In this study, we investigated the effect of CXCL12/CXCR4 axis on chemokine (C-C motif) ligand 3 (CCL3), chemokine (C-X-C motif) ligand 2 (CXCL2), leukotrienes B4 (LTB4) and C4 (LTC4) production by pulmonary fibroblasts and the intracellular signaling involved in the process. CXCL12 induced CCL3, CXCL2, LTB4 and LTC4 production, and CCL3 production is not dependent on CXCL2; but CXCL2 production is dependent on CCL3 production. LTB4 production can be partially down-regulated by CXCL2 and CCL3 production and LTC4 production is dependent on CCL3 and CXCL2 production. Pulmonary fibroblasts constitutively expressed CXCR4, and CXCL12 stimulation up-regulated its expression. Western blot analysis showed that CXCL12 increased protein expression of CXCR4 and induced phosphorylation at S339 of CXCR4. Constitutive CXCR4 expression was decreased by anti-CCL3 antibody or MK 886. Inducible CXCR4 was inhibited by anti-CXCL2 antibody. Indeed pulmonary fibroblasts were pretreated with MK886, dexamethasone (Dexa) and loratadine (Lor). MK886 and loratadine was able to reduced LTB4 and LTC4 production but not CCL3 and CXCL2. Dexa decreased CCL3, CXCL2, LTB4 and LTC4 production, and when associated with Lor this decrease was more effective. We found that PI-3K and JNK intracellular signaling play a role in CCL3 production; p38, MEK1/2, PI-3K and JNK are involved in CXCL2 production and p38 and MEK1/2 pathways are involved in LTB4 production by...

OLIVEIRA, Michelle Jacintha Cavalcante. Estudo da função túbulo-glomerular e inflamação renal em pacientes com leishmaniose visceral. 2014. 104 f. Tese (Doutorado em Ciências Médicas) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2014. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-01-21T12:15:42Z No. of bitstreams: 1 2010_dis_mjcoliveira.pdf: 1014007 bytes, checksum: ed5287e40e2bef46add81a80cdea76cd (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-01-23T11:45:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_dis_mjcoliveira.pdf: 1014007 bytes, checksum: ed5287e40e2bef46add81a80cdea76cd (MD5) / Made available in DSpace on 2013-01-23T11:45:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_dis_mjcoliveira.pdf: 1014007 bytes, checksum: ed5287e40e2bef46add81a80cdea76cd (MD5) Previous issue date: 2010 / Background. The aim of this study is to investigate abnormalities in glomerular and tubular function in VL patients. Methods. This is a prospective study with 16 VL patients before treatment with pentavalent antimonium, in hospital monitoring, in Fortaleza, Ceará, Brazil. Urinary concentration and acidification tests were performed after a 12h period of water and food deprivation using desmopressin and calcium chloride (CaCl2). Glomerular filtration rate (GFR) Fractional excretion of sodium (FENa), transtubular potassium gradient (TTKG) and solute free water reabsorption (TcH2O) were calculated. Microalbuminúria and proteinúria were measured. The VL group pre-treatment was compared to a group of 13 healthy volunteers (control group) and 5 VL patients were revalued after treatment. Aquaporin 2 (AQP2), renal outer medullary K+ channels (ROMK) and pendrin were quantified trough exosomes search in urine. Monocyte chemotactic protein-1 (MCP-1) and malondialdehyde (MDA) were quantified in urine. Results. Urinary concentration deficit was found in all VL patients before (100%) and 4 in 5 cases (80%) after treatment. Urinary osmolality was significantly lower in VL patients pre-treatment compared to control group (516±113 vs. 743±189 mOsm/L, p<0,001, after 12h period water deprivation and desmopressin). There was no difference after treatment revaluation. Urinary acidification deficit was found in 9 cases before (56,22%) and 2 (40%) after treatment, considering urinary pH > 5.5 after CaCl2 test. GRF was similar between the groups. Proteinuria was significantly higher in VL patients pré-treatment (250,6±375,5 vs. 83,7±49,2 mg/24h, p=0,022) and presented important regression after revaluation (268,1±259,4 vs. 113,3±50,1, p=0,043). FENa was higher in VL group when compared to control group. The search for AQP2 (128±88 vs.100±40%, p=0,41), ROMK (122±42 vs. 100±27%, p=0,34) and pendrin (105±7,5 vs. 100±13% p=0,48) were not significant. Urinary MCP-1 showed significant difference between VL patients before treatment and control group (374±359 vs. 42±29 pg/mg-Cr, p=0.002) well as urinary MDA (5.4±2.6 vs. 2.0±0.8 μmol/mL). Conclusion. VL patients present persistent urinary concentration and acidification deficit in 90 days period after treatment and present inflammation and incipient renal damage although other classical markers such as creatinine are not cha / Introdução. O objetivo desse estudo é investigar as alterações túbulo-glomerulares e avaliar marcadores urinários nos pacientes com LV. Métodos. Foi realizado estudo prospectivo com 16 pacientes com LV antes do tratamento com antimonial pentavalente, em acompanhamento na cidade de Fortaleza, Ceará, Brasil. Testes de concentração e acidificação urinárias foram realizados. Foram calculadas taxa de filtração glomerular (TFG), fração de excreção de sódio (FENa), transporte transtubular de potássio (TTKG) e transporte de água livre de solutos (TCH2O). Avaliou-se a proteinúria. O grupo LV pré-tratamento foi comparado com 13 voluntários sadios (grupo controle) e cinco pacientes foram reavaliados no pós-tratamento. Os transportadores aquaporina 2 (AQP2), canal de K+ apical (ROMK) e pendrina foram quantificados pela pesquisa de exossomas na urina. A proteína quimiotática de monócitos (MCP-1) e o malondialdeído (MDA) foram quantificados na urina. Resultados. Déficit de concentração urinária foi encontrado em todos os pacientes antes (100%) e em cinco dos quatro casos reavaliados (80%) depois do tratamento. A osmolaridade urinária média foi significativamente menor nos pacientes LV pré-tratamento quando comparado ao controle (516±113 vs. 743±189 mOsm/L, p<0,001) e não houve diferença entre os pacientes reavaliados no pós-tratamento. Déficit de acidificação foi detectado em nove casos (56,2%) antes e 2 (40%) após o tratamento, considerando o pH urinário > 5,5 após sobrecarga de CaCl2. A proteinúria mostrou-se significantemente maior no grupo LV pré-tratamento (250,6±375,5 vs. 83,7±49,2 mg/24h, p=0,022) regredindo após o tratamento (268,1±259,4 vs. 113,3±50,1mg/24h, p=0,043). FENa foi mais elevada no grupo LV pré-tratamento. A pesquisa dos exossomas urinários AQP2 não mostrou diferença significativa em relação ao grupo controle (128±88 vs.100±40, p=0,41), assim como a do canal ROMK (122±42 vs. 100±27, p=0,34) e da pendrina (105±7,5 vs. 100±13% p=0,48). A dosagem de MCP-1 e MDA urinários foram mais elevadas nos pacientes pré-tratamento quando comparado aos controles (374±359 vs. 42±29 pg/mg-Cr, p=0.002 e 5.4±2.6 vs. 2.0±0.8 μmol/mL, respectivamente). Conclusão. Pacientes com LV apresentam déficit de concentração e acidificação urinárias antes e 90 dias após o tratamento e evidências de inflamação renal incipiente.

GUERRA, Priscila Valera. Efeito protetor de CXCL10 em infecção experimental por Leishmania braziliensis. 2013. 68 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-07-09T11:23:12Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_pvguerra.pdf: 1062693 bytes, checksum: cbcefa56a6fe8c511929d08079c527fe (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-07-10T10:48:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_pvguerra.pdf: 1062693 bytes, checksum: cbcefa56a6fe8c511929d08079c527fe (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-10T10:48:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_pvguerra.pdf: 1062693 bytes, checksum: cbcefa56a6fe8c511929d08079c527fe (MD5) Previous issue date: 2013 / Leishmania braziliensis is the more common etiologic agent of the cutaneous leishmaniasis in Brazil. BALB/c mice are more susceptible to L. braziliensis infection, although develop small and not ulcerated lesions. The lesions in BALB/c mice infected by L. braziliensis are accompanied by expression of a broad chemokines spectrum, including CXCL10, which is able to attract and activate NK and Th1 cells with IFN-γ production. The aim of this study was to evaluate whether the chemokine CXCL10, administered in early stages of infection could influence the course of disease, leading to a faster and more effective time of healing. Groups of BALB/c mice (n=24) were infected by L. braziliensis and divided into two groups: one group (n=12) received CXCL10 (100 ng/5μL) and the other (n=12) received PBS (5μL), at 1, 3, 5 and 7 days postinfection. Some parameters were evaluated: thickness of the lesions every three days; parasite burden in both the footpad and the draining lymph node, NO concentration, cytokines production (IFN-γ, IL-12p40, TNF-α, IL-4, IL-10 and TGF-β), at 15 and 30 days after infection; and histopathological analysis of lesions. Animals receiving CXCL10 showed reduced disease duration, since the lesions started to regress earlier (12 days), whereas the control animals developed the disease for longer (15 days). CXCL10 induced statistically significant differences in parasite load in the draining lymph nodes compared with control in both times evaluated (15 days: p=0.0353; 30 days: p=0.0292). In the animals receiving CXCL10 was not observed change in the number of parasites in the site of inoculation, even with reduced thickness of the lesion, showing no correlation between lesion size and parasite load. There was no difference in NO concentration between groups with 15 days of infection, and this concentration remained the same in the group receiving CXCL10 at day 30, although it was lower than that observed in the control group. CXCL10 also induced higher levels of IFN-γ and IL-12, and reduced IL-4, IL-10, and TGF-β at 30 days postinfection, when compared to control animals. Histopathology analyses of lesions after 15 days postinfection showed a very mild inflammation in both groups, differing only for the presence of neutrophils, which were practically not observed in lesions of animals receiving CXCL10. Taken together, the data from this study showed CXCL10 chemokine presented a protective effect on L. braziliensis infection in BALB/c mice, with a reduction in the progression of the disease, associated with a higher concentration of IFN-γ and lesser of IL-4 and IL-10. / Leishmania braziliensis é o agente etiológico mais comum da leishmaniose cutânea no Brasil. Camundongos BALB/c são os mais susceptíveis à infecção por L. braziliensis, embora desenvolvam lesões pequenas e não ulceradas. As lesões em BALB/c infectados com L. braziliensis são acompanhadas pela expressão de um amplo espectro de quimiocinas, entre elas CXCL10, que é capaz de atrair a ativar células NK e Th1 com produção de IFN-γ. O objetivo deste trabalho foi avaliar se a quimiocina CXCL10, administrada nos estágios iniciais da infecção, poderia alterar o curso da doença, dimunindo o tempo de cura. Para isso, camundongos BALB/c (n=24) foram infectados com L. braziliensis e divididos em dois grupos: um grupo (n=12) recebeu CXCL10 (100 ng/5µL) e o outro (n=12) PBS (5µL), nos dias 1, 3, 5 e 7 dias de infecção. Alguns parâmetros foram avaliados: a espessura das lesões a cada três dias; a carga parasitária na pata e no linfonodo de drenagem, a concentração de NO, IFN-γ, IL-12p40, TNF-α, IL-4, IL-10 e TGF-β, 15 e 30 dias após a infecção; e análise histopatológica das lesões. Os animais que receberam CXCL10 apresentaram uma redução no tempo de duração da doença, uma vez que as lesões começaram a regredir mais precocemente (12 dias), enquanto que nos animais controle (PBS) a doença evoluiu por mais tempo (15 dias). CXCL10 induziu diferenças estatisticamente significativas na carga parasitária do linfonodo de drenagem nos dois pontos avaliados, quando comparado com o controle (15 dias: p=0,0353; 30 dias: p=0,0292). Nos animais que receberam CXCL10, não foi observada mudança no número de parasitos no sítio de inoculação, mesmo com redução da espessura da lesão, mostrando que não houve correlação entre o tamanho da lesão e a carga parasitária. Não houve diferença na concentração de NO entre os grupos, no 15º dia de infecção, e esta concentração manteve-se igual no grupo que recebeu CXCL10 no 30º dia, embora tenha sido menor do que a observada no grupo controle. CXCL10 também induziu concentrações mais elevadas de IFN-γ e IL-12 e mais reduzidas de IL-4, IL-10, TGF-β 30 dias pós-infecção, quando comparados aos animais controle. A análise histopatológica das patas mostrou uma inflamação muito leve em ambos os grupos, com diferença apenas quanto à ausência de neutrófilos nas lesões dos animais que receberam CXCL10. Em conjunto, os dados mostraram que CXCL10 apresentou um efeito protetor na infecção por L. braziliensis em camundongos BALB/c, com redução no tempo de evolução da doença, associada a maior concentração de IFN-γ e menor de IL-4 e IL-10.

CAVALCANTE, Galyléia Menezes. Estudo da imunoexpressão dos sistemas CXCR4-CXC112/SDF-1, CCR7-CCl21 e KI-67 no carcinoma de células escamosas oral e sua associação com indicadores clínicopatológicos, metástase linfonodal e sobrevida. 2013. 57 f. Dissertação (Mestrado em Odontologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-07-14T13:15:32Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_gmcavalcante.pdf: 1293725 bytes, checksum: fa485fabd530db7d0d4df8d64c549656 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-07-14T13:16:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_gmcavalcante.pdf: 1293725 bytes, checksum: fa485fabd530db7d0d4df8d64c549656 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-07-14T13:16:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_gmcavalcante.pdf: 1293725 bytes, checksum: fa485fabd530db7d0d4df8d64c549656 (MD5) Previous issue date: 2013 / Chemokines are responsible for the directed migration of leukocyte chemotactic cytokines, coordinating cell movement during inflammation and the transport of hematopoietic cells. In addition to leukocytes, chemokine receptors are also found in neoplastic cells and tumors associated with stromal cells. Among chemokines, and the CXCR4/CXCL12 CCR7/CCL21 systems have been shown the involvement of lymph node metastases or distant metastases in different cancers. Thus, aim of this study was to evaluate the expression of CXCR4, CXCL12, CCR7, CCL21 and Ki-67 in oral squamous cell carcinoma (SCC) and to correlate these markers with clinicopathological indicators, lymph node metastasis and survival. We conducted a survey of reports and paraffin blocks of excisional biopsies of patients with SCC treated at the Hospital Haroldo Juaçaba (2001-2009). Data on anatomic location of the lesion, sex, age, patient survival, degree of histological differentiation of the tumor, tumor stage and presence or absence of lymph node metastasis, lymphovascular and perineural invasion, nuclear grade and depth of invasion were collected. For immunohistochemical analysis, followed by the technique of streptavidin-biotin-peroxidase using the anti-CXCR4, anti-CXCL12, anti-CCR7, anti-CCL21 and Ki-67 antibody. Histological sections were photomicrographed in 10 fields chosen randomly and measured for the number of labeled tumor cells and determined the percentage of each labeling antibody. The marking of CXCR4 was detected in the cytoplasm and nucleus, CXCL12, CCR7 and CCL21 were only cytoplasmic, their expression was observed in 18 (60%) 8 (22.66%) 16 (53.3%) and 3 (12%) cases, respectively. We found a significant positive association between lymphovascular invasion and immunostaining of CXCR4 (p = 0.007) and CCR7 (P = 0.01) and among these cases metastasis was present in 62.5% and 37.5%, respectively. When in combination with Ki67, we found a significant positive correlation between CXCR4 (p = 0.0086), CXCL12 (p = 0.036) and CCR7 (p = 0:04). Among patients CXCR4 + over 111 months, only 38.4% were alive (p = 0.845), whereas both patients CCR7 + (p = 0.398) as well as CXCR4 +, and CCR7 + (p = 0.441) after 62 months, everyone had already died. We conclude that these chemokines are associated with lymphovascular invasion and cell proliferation, perhaps favoring the development of metastasis and poor prognosis. / As quimiocinas são citocinas quimiotáticas responsáveis pela migração direcionada de leucócitos, coordenando o movimento celular durante a inflamação e o transporte de células hematopoiéticas. Além dos leucócitos, os receptores de quimiocinas também são encontrados em células neoplásicas e em tumores associados com células estromais. Dentre as quimiocinas, os sistemas CXCR4/CXCL12 e CCR7/CCL21 têm sido demonstrado no envolvimento de metástases linfonodais ou à distância em diferentes tipos de câncer. Dessa forma, foi objetivo desse trabalho avaliar a expressão de CXCR4, CXCL12, CCR7, CCL21 e Ki-67 em carcinoma de células escamosas orais (CEC) e correlacionar estes marcadores com indicadores clínicopatológicos, metástase linfonodal e sobrevida. Realizou-se um levantamento de laudos e blocos parafinados de biopsias excisionais de pacientes portadores de CEC tratados no Hospital Haroldo Juaçaba (2001 a 2009). Foram coletados dados sobre localização anatômica da lesão, sexo, idade, sobrevida do paciente, grau de diferenciação histopatológica do tumor, estadiamento tumoral e presença ou ausência de metástase linfonodal, invasão linfovascular e perineural, grau nuclear e profundidade de invasão. Para reação de imunohistoquímica, seguiu-se a técnica da estreptavidina-biotina-peroxidase, utilizando os anticorpos anti-CXCR4, anti-CXCL12, anti-CCR7, anti-CCL21 e Ki-67. As secções histológicas foram fotomicrografadas em 10 campos escolhidos aleatoriamente e quantificadas quanto ao número de células tumorais marcadas e determinado o percentual de marcação de cada anticorpo. A marcação de CXCR4 foi detectada em citoplasma e núcleo, CXCL12, CCR7 e CCL21 tiveram marcação apenas citoplasmática, sendo observada suas expressões em 18 (60%), 8 (22,66%), 16 (53,3%) e 3 (12%) casos, respectivamente. Encontrou-se uma associação significativa positiva entre a invasão linfovascular e a imunomarcação do CXCR4 (p=0.007) e CCR7 (p=0.01) e dentre esses casos a metástase esteve presente em 62,5% e 37,5%, respectivamente. Quando em associação com o Ki67, encontrou-se uma correlação positiva significante entre o CXCR4 (p=0.0086), CXCL12 (p=0.036) e CCR7 (p=0.04). Dentre os pacientes CXCR4+, ao longo de 111 meses, apenas 38,4% estavam vivos (p=0.845), ao passo que tanto para pacientes CCR7+ (p = 0.398), quanto CXCR4+ e CCR7+ (p = 0.441), após 62 meses, todos haviam ido a óbito. Conclui-se que essas quimiocinas estão associadas com a invasão linfovascular e proliferação celular, talvez favorecendo o desenvolvimento de metástases e um pior prognóstico.

Las metástasis, diseminación y crecimiento de las células tumorales en órganos distantes, representan el aspecto más peligroso y devastador en el melanoma de úvea. A pesar de los avances en el diagnóstico, técnicas quirúrgicas y terapias adyuvantes, la aparición de metástasis sigue siendo la principal causa de muerte en los pacientes con melanoma de úvea. Hasta un 50% de los pacientes morirán a los 10 años del diagnóstico inicial debido a la aparición de metástasis, principalmente en el hígado. A lo largo de las últimas décadas se han identificado varios parámetros pronósticos metastásicos, clínicos e histopatológicos. Actualmente, las principales líneas de investigaciones se centran en el análisis de las alteraciones genéticas y moleculares que puedan estar asociadas al desarrollo de metástasis en melanoma de úvea y permitan establecer de forma precoz los genotipos-fenotipos más agresivos así como desarrollar nuevas alternativas terapéuticas.Las quimiocinas constituyen un grupo de moléculas de bajo peso molecular con propiedades quimioatrayentes implicadas en un gran número de procesos fisiológicos y patológicos. Se ha visto que en un gran número de neoplasias existe un entramado de quimiocinas y sus receptores cuya producción, expresión y señalización se encuentra alterada. La quimiocina CXCL12, también llamada stromal-derived factor-1(SDF-1), y su receptor transmembrana CXCR4 son un ejemplo de ello. La interacción entre ambas proteínas desencadena diversas funciones biológicas dentro del proceso cancerígeno, tanto a nivel del tumor primario como en la cascada metastásica. Su presencia ha demostrado ser imprescindible para la proliferación y supervivencia celular, la angiogénesis, la adhesión e invasión tumoral y la migración selectiva hacia el hígado de las células metastásicas en un gran número de neoplasias, relacionándose su expresión con una mayor malignidad tumoral y una menor supervivencia de los pacientes.En la presente estudio, se examinará por primera vez la expresión de CXCR4 y CXCL12 en especimenes de melanomas malignos de úvea sugiriendo la posibilidad de que, al igual que en otras neoplasias, las células melanocíticas malignas estén utilizando la unión quimiocina-receptor para promover el crecimiento tumoral local así como estimular la formación de focos metastáticos a distancia. Para ello, también se intentará establecer una correlación del grado de expresión de CXCR4 y CXCL12 con la aparición de metástasis y la supervivencia de los pacientes. Y por último se analizará la relación existente entre la expresión de CXCR4 y CXCL12 y otras variables clínicopatológicas de mal pronóstico conocidas como son la edad, sexo, tipo celular, presencia de círculos vasculares cerrados e infiltración linfocitaria tumoral.

FIGUEIREDO, Webertty Mayk Eufrásio de. Efeito da quimiocina CXCL10 na infecção por Leishmania infantum chagasi em camundongos BALB/c. 2012. 65 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-05-10T14:16:18Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_wmefigueiredo.pdf: 442833 bytes, checksum: 07c3a09e8e63fe5a99d0e9bcbcbb337f (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-05-16T13:41:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_wmefigueiredo.pdf: 442833 bytes, checksum: 07c3a09e8e63fe5a99d0e9bcbcbb337f (MD5) / Made available in DSpace on 2013-05-16T13:41:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_wmefigueiredo.pdf: 442833 bytes, checksum: 07c3a09e8e63fe5a99d0e9bcbcbb337f (MD5) Previous issue date: 2012 / Visceral leishmaniasis caused by Leishmania infantum chagasi is characterized by the loss of the ability of host to generate an effective immune response. In this study it was investigated the role of CXCL10 chemokine in controlling L. infantum chagasi infection in vivo. Groups of BALB/c mice were treated or not with recombinant CXCL10 chemokine (5 μg/kg) with 1, 3 and 7 days of infection and after 1, 7 and 23 days of treatment, some parameters were evaluated: parasite load, levels of IFN-g, IL-4, TGF-β and IL-10, and the histopathological alterations in the liver. After 23 days of treatment, CXCL10 induced in the spleen a significant reduction on the number of parasites as compared to control group. In the liver, parasite load decreased in treated group between the 7th and 23th day post treatment. However, the antileishmanial effect of CXCL10, in this work, does not seem to be mediated by NO, since there was no difference in the NO production among the groups. IFN-γ was induced most significantly in treated group than in controls, and reached its maximum production (100 pg/mL) on day 23 after treatment, correlating with the reduction in parasite burden in target organs. IL-4 was produced in low doses, in both groups, although treated animals had shown higher levels than control group. Regarding to anti-inflammatory cytokines, after the 23th day of treatment, IL-10 levels in treated animals were smaller than in control group. Production of TGF-β after 7 days of treatment was 2 times lower in treated group when compared to control, and after the 23th day of treatment, this cytokine remained with lower levels than those observed in control. In the histopathological analysis of the liver after the 1st day of treatment, were found in both groups more immature granulomas (GI) than non-granulomatous infiltrate (NG), and some few mature granulomas (GM) were only observed in treated group. After 7 days of treatment, the amount of NG infiltrates was lower, and GI were still the most frequent in both groups, besides a slight increase of GM was observed in treated group. In summary, at the light of the found results, it is possible to suggest an important leishmanicidal role to CXCL10 in BALB/c mice infected by L. infantum chagasi, which seems to be mediated by a significant IFN-g production, and suppression of immunoregulatory cytokines, IL-10 and TGF-β, opening the hypothesis that this would be associated to a decrease in the frequency of regulatory T cells induced by CXCL10 in these animals. / A leishmaniose visceral causada por Leishmania infantum chagasi é caracterizada pela perda da habilidade do hospedeiro gerar uma resposta imunológica eficaz. Neste estudo, foi investigado o papel da quimiocina CXCL10 no controle da infecção por L. infantum chagasi in vivo. Grupos de camundongos BALB/c foram tratados ou não com CXCL10 (5 μg/kg) com 1, 3 e 7 dias de infecção e após 1, 7 e 23 dias do tratamento, alguns parâmetros foram avaliados: a carga parasitária, os níveis de IFN-, IL-4, TGF-β e IL-10, e as alterações histopatológicas no fígado. Após 23 dias de tratamento, CXCL10 induziu, no baço, uma redução expressiva no número de parasitos, quando comparado ao grupo controle. No fígado, a carga parasitária mostrou uma queda no grupo tratado, entre o 7º e 23º dia após o tratamento. Entretanto, o efeito leishmanicida de CXCL10, neste trabalho, não parece ser mediado por NO, uma vez que não houve diferença na produção de NO entre os grupos. IFN-γ foi induzida de maneira mais significativa no grupo tratado do que nos controles, e atingiu sua produção máxima (100 pg/mL) no 23º dia após o tratamento, correlacionando-se com a queda da carga parasitária nos órgãos-alvo. IL-4 foi produzida em baixas concentrações, em ambos os grupos, embora os animais tratados com CXCL10 tenham mostrado níveis mais elevados do que os controles. Em relação às citocinas antiinflamatórias, após 23 dias do tratamento, os níveis de IL-10 nos animais tratados foram menores do que os do controle. A produção de TGF-β após 7 dias do tratamento foi 2 vezes menor no grupo tratado quando comparado ao controle, e após 23 dias do tratamento, essa citocina continuou com níveis mais baixos do que aqueles observados no controle. Na análise histopatológica do fígado após o 1º dia do tratamento, foram encontrados, em ambos os grupos, mais granulomas imaturos (GI), do que infiltrados não granulomatosos (NG) e alguns poucos granulomas maduros (GM) apenas no grupo tratado. Após 7 dias do tratamento, a quantidade de infiltrados NG estava menor e os GI ainda foram os mais encontrados, em ambos os grupos, além disso, foi observado um pequeno aumento de GM no grupo tratado. Em resumo, diante dos resultados encontrados, é possível sugerir um importante papel leishmanicida de CXCL10 em camundongos BALB/c infectados por L. infantum chagasi, que parece ser mediado por uma expressiva produção de IFN-g e supressão das citocinas imunorreguladoras, IL-10 e TGF-β, abrindo a hipótese se isto não estaria associado a uma diminuição na frequência de células T regulatórias, induzida por CXCL10, nesses animais.

DUTRA, Brunheld Maia. Efeito imunomodulador de CXCL10 em camundongos BALB/C infectados com cepa de Leishmania braziliensis refratária ao tratamento com antimônio. 2015. 78 f. Dissertação (Mestrado em Patologia) – Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-12-01T11:34:02Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_bmdutra.pdf: 917921 bytes, checksum: 088bf681abe483ebcbf34475f6929795 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-12-01T11:36:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_bmdutra.pdf: 917921 bytes, checksum: 088bf681abe483ebcbf34475f6929795 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-12-01T11:36:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_bmdutra.pdf: 917921 bytes, checksum: 088bf681abe483ebcbf34475f6929795 (MD5) / Leishmania braziliensis from antimony-resistant patient is able to induce high levels of IL-4 and Arginase in mice, contributing to the increased virulence of the strain and the severity of the disease. CXCL10 is a chemokine that recruits and activates Th1 cells, NK, macrophages, dendritic cells and lymphocytes B. The objective of this study was to evaluate in vivo the effect of CXCL10 in the infection by strain of L. braziliensis refractory to treatment with antimony. BALB/c mice (n=64) were infected intradermally in the right ear 107 promastigotes (20 µl), and after appearance of lesions (5ª week), the animals were divided into four groups (16/group): 1. Control untreated; 2.Glucantime (100mg/kg/day, I.M.); 3.CXCL10 (100 ng/10μL, I.M.); 4.Glucantime+CXCL10 (100ng/10µL+100mg/kg/day, I.M.). The animals were treated for 7 days, followed by weekly measurements of lesions, and were euthanized in the first and fourth week post-treatment (w.p.t) for the evaluation of some parameters: parasite burden (lesions, and draining lymph node-LN), production of the cytokines IFN-γ, IL-4, IL-10 and TGF-β (LN) and histological changes (lesions). The results showed CXCL10 and Glucantime induced, early as the first s.p.t., non-ulcerated lesions that regressed significantly (0.35 ± 0.07, 0.047 ± 0.27, p <0.05) compared to controls (0.63 ± 0.12) and Glucantime (0.56 ± 0.12). This was associated with a significant decrease in parasite load observed in CXCL10 and CXCL10 + Glucantime groups, in the lymph node (1.17x103 ± 0.85x103, 2.05x103 ± 1.50x103, respectively) compared to control (3.2x104 ± 1.97x104) and Glucantime (1.18x105 ± 1.12x105). Regarding to cytokines, CXCL10 treated animals showed high levels of IFN-γ, IL-10 and TGF-β, and low IL-4 production. In contrast, was observed in the control and Glucantime groups increased production of IL-4. These data also corroborate the histopathological findings showing that animals treated with CXCL10, with or without Glucantime, showed a non-exacerbated inflammation, with absence of necrosis, lower parasitism, granulomas and cellular infiltrate with more activated macrophages, many lymphocytes and few plasma cells, compared to control and Glucantime. In conclusion, CXCL10 and the association CXCL10+Glucantime induced minor injuries, lesions non-ulcerated, with decreased earlier parasite load, leading to the resolution of the disease through an immune response with high IFN-γ and low IL-4 production, and with the control of inflammation mediated by IL-10 and TGF-β. / Leishmania braziliensis proveniente de paciente resistente ao antimônio é capaz de induzir altos níveis de IL-4 e de Arginase em camundongos, contribuindo para a maior virulência da cepa e gravidade da doença. CXCL10 é uma quimiocina que recruta e ativa células Th1, NK, macrófagos, células dendríticas e linfócitos B. O objetivo deste trabalho foi avaliar in vivo o efeito de CXCL10 na infecção por cepa de L. braziliensis refratária ao tratamento com antimônio. Camundongos BALB/c (n=64) foram infectados por via intradérmica na orelha direita, 107 promastigotas (20µL) e após o aparecimento das lesões (5a sem), os animais foram divididos em quatro grupos (16 animais/grupo): 1. Controle não tratado; 2. Glucantime (100mg/kg/dia, I.M); 3. CXCL10 (100ng/10µL, I.M.); 4. Glucantime+CXCL10 (100ng/10µL + 100mg/kg/dia, I.M.). Os animais foram tratados por 7 dias, acompanhados com medidas semanais das lesões e eutanasiados na 1ª e 3ª semanas pós-tratamento (s.p.t.) para a avaliação de alguns parâmetros: carga parasitária (lesões e linfonodo de drenagem-LN), produção das citocinas IFN-γ, IL-4, IL-10 e TGF-β (linfonodo) e alterações histológicas (lesões). Os resultados mostraram que CXCL10 e CXCL10+Glucantime induziram, já a partir da 1a s.p.t, lesões não ulceradas e que regrediram significativamente (0,35±0,07; 0,047±0,27; p<0,05), quando comparado ao Controle (0,63±0,12) e ao Glucantime (0,56±0,12). Isso foi relacionado com a importante diminuição da carga parasitária observada nos grupos CXCL10 e CXCL10+Glucantime, no LN (1,17x103 ± 0,85 x 103; 2,05x103 ± 1,50x103, respectivamente) quando comparado ao Controle (3,2x104 ± 1,97x104) e ao Glucantime (1,18x105 ± 1,12x105). Em relação às citocinas, o tratamento com CXCL10 mostrou altas concentrações de IFN-γ, IL-10 e TGF-β, e baixa produção de IL-4. Em contrapartida, nos grupos Controle e Glucantime, foi observada maior produção de IL-4. Esses dados corroboram também com os achados histopatológicos que mostraram que os animais tratados com CXCL10, associado ou não ao Glucantime, apresentaram uma inflamação não exacerbada, com ausência de necrose, menor parasitismo, presença de granulomas e infiltrado celular com mais macrófagos ativados, muitos linfócitos e poucos plasmócitos, em relação ao Controle e ao Glucantime. Em suma, CXCL10 e a associação CXCL10+Glucantime induziram lesões menores, não ulceradas, com diminuição da carga parasitária mais precocemente, conduzindo à resolução da doença através de uma resposta imunológica com alta produção de IFN-γ e baixa produção de IL-4, e controle da inflamação modulado por IL-10 e TGF-

Resumo: O acúmulo de toxinas urêmicas gerado pela diminuição da taxa de filtração glomerular no paciente com doença renal crônica (DRC) vem acompanhado por alterações metabólicas e vasculares no organismo que predispõem esses pacientes ao desenvolvimento de doença cardiovascular (DCV). O Stromal cell-derived factor 1 (SDF-1/CXCL12), é uma quimiocina de ação pleiotrópica, com expressão alterada em tecidos inflamados e lesionados, capaz de mobilizar células da medula óssea para o local da lesão, mediando o reparo e regeneração tecidual. No presente trabalho, através de uma combinação de estudos in vivo e in vitro, investigamos o efeito da uremia na expressão de CXCL12 e proliferação celular. Para isso, amostras provenientes de um estudo anterior com dados publicados por Stinghen et al. 2010 foram utilizadas. No presente estudo foram analisados marcadores de inflamação sistêmica como proteína C reativa (PCR) e interleucina-6 (IL-6), em níveis plasmáticos. Além da inflamação, foi feita a avaliação da disfunção endotelial pelos níveis plasmáticos de Interleucina-8 (IL-8) e verificada a sinalização de regeneração vascular pelos níveis plasmáticos e em sobrenadante celular de CXCL12. O modelo experimental foi realizado com células endoteliais humanas extraídas de veia de cordão umbilical (HUVECs). Tratamentos específicos utilizando meio de cultivo acrescido de plasma urêmico de pacientes em hemodiálise (pool de plasmas urêmicos) ou com plasma normal (pool de plasma de indivíduos saudáveis) foram feitos com cinética de 0 h, 6 h e 12 h. As concentrações plasmáticas médias de PCR, IL-6, IL-8 e CXCL12 foram respectivamente 4,9 ±4,8 mg/mL, 6,76±8,1 pg/mL, 128,2±206,2 pg/mL e 2625,87±1288,58 pg/mL. Foi observado uma correlação positiva entre PCR e a IL-6 (?=0,57, P<0,005) e CXCL12 com IL-8 (?=0,4462, P<0,05). A análise da expressão de CXCL12 em sobrenadante de cultura revelou que após 6 horas de tratamento as células em ambiente saudável expressam mais CXCL12 do que as tratadas com plasma urêmico (54,5 x 15,7%). As análises do ciclo celular revelaram que células endoteliais submetidas a tratamento com plasma saudável, apresentam um padrão de crescimento celular regular (cresce, duplica e com o passar do tempo, morre). Diferentemente das células submetidas ao tratamento com plasma urêmico que apresentam uma alta porcentagem de morte celular. Nossos dados demonstram que os níveis plasmáticos das quimiocinas CXCL12 e IL-8 estão correlacionados em pacientes em HD. Tal correlação ocorre em paralelo ao aumento dos marcadores de inflamação sistêmica. A literatura descreve que tanto IL-8 quanto CXCL12 atuam em conjunto na manutenção e reparo de lesões teciduais, e que a produção de CXCL12 pode estar relacionada a biodisponibilidade do óxido nítrico (NO) e ligação a seus receptores (CXCR4 e CXCR7) na superfície celular. Assim, sugerimos que os níveis de CXCL12 e IL-8 encontrados nestes pacientes podem refletir um sistema de reparo ativado, e que a toxicidade urêmica esteja inibindo a produção de CXCL12, seja pela diminuição de NO ou pela saturação da ligação a seus receptores CXCR4 e CXCR7, entretanto estudos adicionais são necessários para comprovação de tais hipóteses.